CN110092796B - 一种提取分离冬凌草甲素的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种提取分离冬凌草甲素的方法，将含冬凌草甲素的植物原料，采用含有有机溶剂的混合溶剂对冬凌草甲素进行浸取，固液分离后得到提取液；向提取液中加入少量的水，于低温环境中进行沉析，分离，沉淀即冬凌草甲素粗提取物；重复进行此步骤多次，直到没有沉淀析出为止；将分离出来的提取液进行溶剂回收，得到新鲜溶剂和浸膏，浸膏也是冬凌草甲素粗提取物；将适量的提取液与新鲜溶剂混合制成上述的混合溶剂，用于套用。本方法可节约溶剂，增大提取液的浓度，利于后续冬凌草甲素的析出。此外，分步添加水改变提取液极性，并配以低温放置，可得到不同含量的冬凌草甲素粗产品，低温沉析还使冬凌草甲素避免高温，利于冬凌草甲素的稳定。

Description

一种提取分离冬凌草甲素的方法
技术领域
本发明属于生物化工技术领域，涉及一种从含冬凌草甲素植物中提取分离冬凌草甲素的方法，特别是涉及采用溶剂套用提取，添加水以改变溶剂极性，然后低温沉析的方法。
背景技术
冬凌草甲素是冬凌草中一种二萜类物质，其结构式如图1所示。
冬凌草和毛叶香茶菜，同属于唇形科香茶菜属植物，因为其独特的药用价值，在我国民间广泛使用。文献中报道它们有治疗若干癌症、咽喉肿痛，以及健胃，活血化瘀的功效。现代医学研究表明冬凌草和毛叶香茶菜之所以有药用价值主要是因为它们含有二萜类化合物冬凌草甲素。冬凌草甲素能够很好的抑制肿瘤细胞增殖，对乳腺癌、食道癌、胰腺癌等癌症的治疗效果较好。由于冬凌草甲素的这些抗肿瘤性质，近年来受到了国内外学者的广泛关注，而提取分离冬凌草甲素也成为研究的重要内容。
最常用的提取冬凌草甲素的溶剂是乙醇。冬凌草甲素在提取液中的稳定性比较差，主要是因为其活性中心α-亚甲基环戊烷比较活泼，受热时容易发生化学反应。传统的溶剂提取方法消耗溶剂量比较大，加热回收溶剂时冬凌草甲素损失比较大。若干新的分离手段，如超临界流体提取法也被实验用于提取冬凌草甲素，但是涉及到设备投资、操作成本等问题，并不能适用于工业化生产。
发明内容：
本发明的目的是提供一种低成本，高回收率的提取分离冬凌草甲素的方法，适合于大规模处理冬凌草和毛叶香茶菜，提取分离得到质量含量较高的冬凌草甲素粗提取物。
本发明的方法包括以下步骤：
(1)首次提取时，将含冬凌草甲素的植物原料，即冬凌草或者毛叶香茶菜，用有机溶剂，如乙醇浸取2－3小时，乙醇的含水量为0％～15％，固液分离后得到提取液。
(2)将得到的一部分提取液，加入1％～30％的水，然后放置于-25～0℃的低温环境中，一段时间后，将沉析出的沉淀与液体分离，沉淀即冬凌草甲素粗提取物。此步骤可以重复进行若干次即停止，也可以重复进行此步骤多次，直到没有沉淀析出为止。
(3)将步骤(2)中完成固液分离的提取液进行溶剂回收，分别得到新鲜溶剂和浸膏，浸膏也是冬凌草甲素粗提取物。
(4)将另外一部分提取液用于套用，即与新鲜溶剂合并混合制成混合溶剂。
当再次进行提取分离时，步骤(1)中的浸取采用混合溶剂，增大了冬凌草甲素在提取液中的浓度，可节约成本。
浸取时采用的是套用溶剂的方法制成混合溶剂。混合溶剂是指新鲜溶剂和使用过的溶剂，即以往浸取得到的提取液，按混合溶剂中提取液所占的重量比为20％－40％的比例制成混合溶剂。利用混合溶剂对冬凌草甲素进行提取。
在开始添加少量水的时候，可以将色素等主要杂质优先沉析出来，后面得到沉淀中冬凌草甲素含量比较高，而且色泽比较好。
本发明的技术方案的有益效果是：
采用溶剂套用的方式提取冬凌草甲素，节约了溶剂，同时增大了冬凌草甲素在提取液中的浓度，较高的浓度将有利于后续的析出步骤；
通过分步添加适量的水改变提取液极性，并配以低温放置，析出得到不同含量的冬凌草甲素粗产品，这些不同含量的冬凌草甲素粗产品可以被用于不同的终端产品；
低温沉析出的这部分冬凌草甲素粗产品避免了经历高温过程，有利于冬凌草甲素的稳定。
附图说明
图1为冬凌草甲素的结构式。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的技术方案做进一步详细的说明。
实施例1
称取5kg冬凌草或毛叶香茶菜破碎后，用40L 95％的乙醇浸取2小时，进行固液分离，得到提取液。对于冬凌草原料，提取液中冬凌草甲素含量为1.63mg/ml，提取率为92.2％。对于毛叶香茶菜原料，提取液中冬凌草甲素含量为0.8mg/ml，提取率为92％。
取上述以冬凌草为原料得到的提取液40L直接作为溶剂，用该溶剂浸提5kg破碎后的冬凌草2小时，固液分离，得到提取液。提取液中冬凌草甲素的含量为3.35mg/ml，提取率为84.1％。
取上述以毛叶香茶菜为原料得到的提取液40L直接作为溶剂，溶剂中冬凌草甲素含量为0.8mg/ml。用该溶剂浸提5kg破碎后的冬凌草2小时，固液分离，得到提取液。提取液中含冬凌草甲素1.62mg/ml，提取率为81.2％。
实施例2
称取5kg冬凌草破碎后，用40L 95％的乙醇浸取2小时，进行固液分离，得到提取液。对于冬凌草原料，提取液中冬凌草甲素含量为1.63mg/ml，提取率为92.2％。
取上述以冬凌草为原料得到的提取液40L，另取新鲜95％乙醇160L，合并制成混合溶剂，混合溶剂中的冬凌草甲素含量为0.326mg/ml。用混合溶剂40L浸取5kg破碎后的冬凌草2小时，固液分离，得到提取液。提取液中含冬凌草甲素1.97mg/ml，提取率为90.4％。
取上述含冬凌草甲素1.97mg/ml的提取液10L，加入500ml的水，置于-15℃沉析一定时间，然后离心，分离得到析出的沉淀。在液体中再次加水500ml,置于-15℃下沉析，然后离心，分离得到析出的沉淀。如此反复操作，直至最后没有沉淀析出。提取液和沉淀物的颜色，从一开始很深的墨绿色，到后来变成了很浅的淡黄色。取每次析出的沉淀测定冬凌草甲素的含量,所得结果见表1。
对最后剩余的溶液进行回收溶剂操作，分别得到新鲜溶剂和浸膏，浸膏中冬凌草甲素的质量含量为17.5％。
表1对萃取液逐次加水得到的析出沉淀数据
Figure BDF0000011122330000031
Figure BDF0000011122330000041
实施例3
称取5kg毛叶香茶菜破碎后，用40L 95％的乙醇浸取2小时，进行固液分离，得到提取液。对于毛叶香茶菜原料，提取液中冬凌草甲素含量为0.8mg/ml，提取率为92％。
取上述以毛叶香茶菜为原料得到的提取液40L，另取新鲜95％乙醇160L，合并制成混合溶剂，混合溶剂中的冬凌草甲素含量为0.16mg/ml。用混合溶剂40L浸提5kg破碎后的冬凌草2小时，固液分离，得到提取液。提取液中含冬凌草甲素0.96mg/ml，提取率为89.4％。
取上述含冬凌草甲素0.96mg/ml的提取液10L，加入500ml的水，置于0℃下沉析1小时，然后离心，得到析出的沉淀。在提取液中再次加入500ml水，置于0℃下沉析1小时后分离沉淀与提取液，同样方式反复操作，直至最后没有沉淀析出时。取每次析出的沉淀测定冬凌草甲素的含量。结果见表2。
表2实施例3对萃取液逐次加水得到的析出沉淀数据
Figure BDF0000011122330000042
对于毛叶香茶菜为原料的提取液，得到各沉淀中的冬凌草甲素含量在0.7％以上，最高有11.32％。最后剩余的提取液通过蒸发除去溶剂，得到的浸膏中冬凌草甲素的含量为10.1％。
实施例4
取实施例2中的含冬凌草甲素1.97mg/ml的提取液10L，加入500ml的水，置于-25℃沉析1小时，然后离心，分离得到了析出的沉淀。在提取液中再次加入500ml水，置于0℃沉析1小时后分离沉淀与提取液，同样方式反复操作，直至最后没有沉淀析出时。取每次析出的沉淀测定冬凌草甲素的含量。结果见表3。
表3实施例4对萃取液逐次加水得到的析出沉淀数据
Figure BDF0000011122330000051
最后剩余的提取液通过蒸发除去溶剂，得到的浸膏中冬凌草甲素的含量为17.3％。
实施例5
取实施例3中的含冬凌草甲素0.96mg/ml的提取液10L，加入500ml的水，置于-25℃沉析1小时，然后离心，分离得到了析出的沉淀。在提取液中再次加入500ml水，置于0℃沉析1小时后分离沉淀与提取液，同样方式反复操作，直至最后没有沉淀析出时。取每次析出的沉淀测定冬凌草甲素的含量。
表4实施例5对萃取液逐次加水得到的析出沉淀数据
Figure BDF0000011122330000052
最后剩余的提取液通过蒸发除去溶剂，得到的浸膏中冬凌草甲素的质量含量为12.1％。
实施例6
取实施例2中的含冬凌草甲素1.97mg/ml的提取液10L，加入3L的水，置于-25℃沉析1小时，然后离心，分离得到了析出的沉淀，再次加入3L水于提取液中，置于-25℃沉析1小时后，离心，分离得到沉淀。对析出的沉淀分别测定冬凌草甲素的含量。得到的两个沉淀中，冬凌草甲素含量分别为2.4％和8.5％。最后剩余的提取液通过蒸发除去溶剂，得到的浸膏中冬凌草甲素的含量为17.3％。
实施例7
取实施例3中的含冬凌草甲素0.96mg/ml的提取液10L，加入3L的水，置于-25℃沉析1小时，然后离心，分离得到了析出的沉淀，再次加入3L水于提取液中，置于-25℃沉析1小时后，离心，分离得到沉淀。对析出的沉淀分别测定冬凌草甲素的含量。得到的两个沉淀中，冬凌草甲素含量分别为2.2％和6.8％。最后剩余的提取液通过蒸发除去溶剂，得到的浸膏中冬凌草甲素的含量为10.6％。
以上仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例和实施方式，凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理前提下的若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (5)

1.一种提取分离冬凌草甲素的方法，其特征在于，包括以下步骤:
(1)在含冬凌草甲素的植物原料中加入含有有机溶剂的混合溶剂，对冬凌草甲素进行浸取，将固液进行分离后得到提取液；
(2)将步骤(1)所述提取液分为两部分，对其中一部分加入适量的水，然后放置于低温环境中，一段时间后，将沉析出的沉淀进行分离，所述沉淀即是冬凌草甲素粗提取物；此加水沉淀步骤可以重复进行若干次即停止，或者重复进行此步骤多次，直到没有沉淀析出为止；
(3)将步骤(2)中经固液分离后的提取液进行溶剂回收，回收后分别得到新鲜溶剂和浸膏，所述浸膏也是冬凌草甲素粗提取物；
(4)对另一部分步骤(1)所述的提取液，与新鲜溶剂合并混合制成步骤(1)所述的混合溶剂，用于套用。
2.根据权利要求1所述的提取分离冬凌草甲素的方法，其特征在于，所述的有机溶剂为乙醇，所述乙醇的含水量为0％～15％。
3.根据权利要求1所述的提取分离冬凌草甲素的方法，其特征在于，所述新鲜溶剂和步骤(1)得到的提取液按一定比例混合，使得混合溶剂中的冬凌草甲素含量在0～1.63mg/ml范围。
4.根据权利要求1所述的提取分离冬凌草甲素的方法，其特征在于，所述的低温环境是指-25℃～0℃。
5.根据权利要求1所述的提取分离冬凌草甲素的方法，其特征在于，所述的适量的水是指以拟加入水的提取液为基数，每次添加1％～30％重量比的水。
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Citations (2)

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CN1482115A (zh) * 2002-09-13 2004-03-17 中国科学院武汉植物研究所 一种冬凌草甲素的制备方法
CN104744489A (zh) * 2015-04-19 2015-07-01 北京化工大学 一种以冬凌草为原料制备高纯度冬凌草甲素的方法

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冬凌草总二萜及其注射剂的研制;刘培丽;《沈阳药科大学硕士学位论文》;20150515;第22-31页 *

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