CN110088137A - 针对mica和micb蛋白的抗体 - Google Patents

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Abstract

本公开内容涉及与可溶形式的MICA和/或MICB蛋白结合的抗体，包含该抗体的组合物，以及该抗体在诊断和治疗以MIC蛋白水平升高为特征的疾病中的用途。

Description

针对MICA和MICB蛋白的抗体
1.相关申请的交叉引用
根据35U.S.C.§119(e)，本申请要求2016年10月19日提交的美国临时申请号62/410,282的优先权，该临时申请的全部内容通过引用纳入本文。
2.序列表、表格或计算机程序的引用
序列表的正式副本通过EFS-Web与说明书同时提交，其为ASCII格式的文本文件，文件名为“NBI-003_ST25.txt”，创建日期为2017年10月19日，大小为72千字节。通过EFS-Web提交的序列表是说明书的一部分，并且其全部内容通过引用纳入本文。
3.背景
治疗癌症的免疫疗法试图诱导、刺激和/或去抑制免疫应答以攻击和破坏异常增殖的细胞。免疫疗法的策略包括使用免疫激活细胞因子、激活抗原呈递细胞(例如树突细胞)、过继细胞转移、靶向抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、免疫检查点抑制剂和它们的组合。
基于细胞因子的免疫疗法涉及使用激活免疫系统的各种武器以激发有效免疫应答的细胞因子。在这种形式的免疫疗法中，细胞因子直接施用于对象或离体使用以活化分离的免疫系统细胞，然后将其输注回对象(参见，例如Antony等,2010,Curr Med Chem 17(29):3297-302；Ochoa等.,2013,Curr Gene Ther.13(1):15-30)。
基于树突细胞的免疫疗法包括从待治疗的对象收获抗原呈递树突细胞，然后用抗原、肿瘤裂解物或表达肿瘤抗原的载体脉冲细胞，然后将经处理的树突细胞输注给对象以刺激抵御表达靶抗原的肿瘤细胞的免疫应答(参见，例如Morse等.,2003,MolBiotechnol.25(1):95-9；Palucka等.,2012,Nature Rev.Cancer 12:265-277)。
过继性细胞疗法类似于树突细胞疗法，其中T细胞从患者或供体获得，然后例如用免疫激活性细胞因子激活，暴露于癌抗原和/或用重组基因转染，然后输入患者。过继性T细胞疗法的变体是工程改造T细胞以表达嵌合抗原受体(CART)。在基于CART的治疗中，重组嵌合受体具有与靶细胞上的抗原结合的抗原结合域，以及可以调节工程改造T细胞的胞内域，例如针对该靶癌细胞的T细胞的活化和/或增殖(参见，例如Grupp等.,2011,Curr TopMicrobiol Immunol.344:149-72；Lipowska-Bhalla,2012,Cancer ImmunolImmunother.61(7):953-62)。
免疫疗法还可以利用效应免疫细胞，例如天然杀伤(NK)细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和嗜酸性粒细胞中的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)功能来靶向增殖性细胞。ADCC介导的疗法通常使用针对在靶细胞表面上表达的抗原的抗体，其中抗体Fc区结合ADCC免疫效应细胞上存在的Fc受体。ADCC通常受限于靶细胞表达的抗原和针对这些靶抗原的治疗性抗体的开发。
另一种形式的免疫疗法涉及抑制免疫细胞活化的抑制机制，有时称为“检查点”抑制剂，以恢复免疫系统活性。示例性检查点抑制剂包括针对程序性细胞死亡1蛋白，PD-1及其配体PD-L1之一的抗体。PD-L1与PD-1的结合可抑制T细胞活性，阻断PD-L1和PD-1相互作用的抗体可限制这种T细胞抑制，从而使活化的T细胞能够攻击癌细胞。另一类检查点抑制剂是针对CTLA-4的抗体，CTLA-4是一种配体，其通常结合其同源受体CD80/86并阻止CD80/86和CD28之间的激活相互作用。抗CTLA抗体破坏CTLA-4与CD80/86的这种抑制性相互作用，从而允许激活CD80/86和CD28之间的相互作用。
虽然各种免疫治疗方法已成功靶向癌细胞，但在许多患者中无效。例如，约20％至30％的受治疗患者对检查点抑制剂治疗剂，例如抗PD-1、抗PD-L1和抗-CTLA有反应，并且一些癌症对于用某些检查点抑制剂治疗未显示出临床上有意义的反应。基于ADCC的抗体疗法的反应率也有所不同，因为相当大比例的患者无反应。基于CART的治疗观察到更高的反应率，但是这些研究大多针对血液癌，并且一些CART治疗的患者经历了严重的不良反应，例如细胞因子释放综合征。此外，ADCC和CART免疫疗法都需要靶向在靶癌细胞上独特或优先表达的抗原，这种情况可能限制它们在某些类型癌症中的应用。
4.概述
在一方面，本公开内容提供了能够区分MHC I类链相关(MIC)蛋白的可溶性形式和细胞膜结合形式的抗体。在各种实施方式中，MIC蛋白是MHC I类链相关基因A蛋白(MICA)蛋白或MHC I类链相关基因B蛋白(MICB)蛋白。本公开内容的抗体特异性结合可溶性MIC(sMIC)，但不特异性结合细胞膜结合MIC的胞外域。在一些实施方式中，抗体结合的表位位于MIC蛋白的α-3结构域中，并且当含有α-3结构域的胞外域与跨膜域分离时，该表位暴露于抗体。
在一些实施方式中，所述抗体能够结合由人前列腺癌细胞系DU-145产生的sMICB，其平衡解离常数KD约为或低于参比单克隆抗体的KD，或者其平衡缔合常数KA约为或大于参比单克隆抗体的KA，其中所述参比单克隆抗体是5C9。在一些实施方式中，所述抗体能够减弱接种有人前列腺癌细胞系DU-145的异种移植物的Rag 2-/-小鼠中的人sMICB水平。在一些实施方式中，所述抗体能够减弱Rag 2-/-小鼠中人前列腺癌细胞系DU-145的异种移植物的生长。
在一些实施方式中，具有上述特征的抗体包含含有SEQ ID NO:25所示氨基酸序列的轻链可变区VL中的一个或多个CDR，和/或包含含有SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的重链可变区VH中的一个或多个CDR。
在一些实施方式中，具有上述特征的抗体在可变轻链中包含以下互补决定区(CDR)中的1、2或3个：CDR L1，包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)；CDR L2，包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:41)；和CDR L3，包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ IDNO:42)。在一些实施方式中，具有上述特征的抗体在可变重链中包含下列互补决定区(CDR)中的1、2或3个：CDR H1，包含氨基酸序列NYLIE(SEQ ID NO:43)；CDR H2，包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ ID NO:44)；和CDR H3，包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ IDNO:45)。
在一些实施方式中，具有上述特征的抗体包含下列互补决定区(CDR)中的1、2、3、4、5或全部6个：CDR L1，包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)；CDR L2，包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:41)；CDR L3，包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ ID NO:42)；CDR H1，包含氨基酸序列NYLIE(SEQ ID NO:43)；CDR H2，包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ ID NO:44)；和CDR H3，包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ IDNO:45)。
在一些实施方式中，具有上述特征的抗体具有轻链可变区VL和重链可变区VH，所述轻链可变区VL包含SEQ ID NO:24，更具体地SEQ ID NO:25所示氨基酸序列，所述重链可变区VH包含SEQ ID NO:28，更具体地SEQ ID NO:29所示氨基酸序列。
在另一方面，所述抗体可以应用于各种用途，例如用于诊断性和治疗性治疗。在一些实施方式中，所述抗体可用于诊断测定以确定生物学样品中sMIC(例如sMICA和/或sMICB)的存在，特别是从怀疑或诊断患有以高水平sMIC为特征的疾病或病症，例如某些癌症和病毒感染的对象获得的样品。在一些实施方式中，所述抗体可用于确定sMICA和/或sMICB的水平，以便评估患有癌症的对象的预后或评估对象中癌症治疗的有效性。
在一些实施方式中，所述抗体可用于降低对象中sMIC(例如sMICA和/或sMICB)水平的方法，所述方法向有此需要的对象施用有效量的本文所述抗体。在一些实施方式中，所述抗体可用于治疗患有以MIC蛋白水平升高为特征的疾病或病症的对象。在一些实施方式中，所述疾病或病症是MIC+肿瘤或癌症。在一些实施方式中，MIC+肿瘤或癌症的特征在于sMIC蛋白，例如sMICA和/或sMICB的水平升高。
在一些实施方式中，待治疗的MIC+肿瘤或癌症包括肺、乳腺、胃、结肠、胰腺、卵巢、肾、前列腺、肝或皮肤(例如，黑素瘤)等的肿瘤或癌症。在一些实施方式中，待治疗的MIC+肿瘤或癌症是血液恶性肿瘤，包括急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、急性单核细胞白血病(AMol)、淋巴瘤，如霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤；和多发性骨髓瘤。
在一些实施方式中，施用所述抗体以治疗患有以MIC蛋白表达升高为特征的病毒感染的对象。示例性的病毒感染包括呼吸道合胞病毒(RSV)、人鼻病毒(HRV)和人免疫缺陷病毒1(HIV-1)感染。
在一些实施方式中，治疗应用可以与用于治疗MIC水平升高相关的特定病症的其它治疗剂联用，包括与化疗剂、生物制剂和癌症疫苗的联用，如在以下详述中进一步描述的。
5.附图简述
图1A和图1B描绘了对应于完整人MICA多肽(等位基因*001:NCBI登录号NP_000238.1)的示例性氨基酸序列(SEQ ID NO:1)，以及对应于完整人MICB多肽(等位基因*001:UniProtKB登录号Q29980.1)的示例性氨基酸序列(SEQ ID NO:2)。
图1C和图1D分别描绘了MICA*001等位基因的MICA蛋白的胞外α-3结构域的氨基酸序列，氨基酸残基205-297(SEQ ID NO:3)；和MICB*001等位基因的MICB蛋白的胞外α-3结构域的氨基酸序列，氨基酸残基205-297(SEQ ID NO:4)。氨基酸残基编号基于未加工的MICA和MICB蛋白。基于加工的、成熟MICA*001和MICB*001的氨基酸编号对应于MICA的氨基酸残基182至274和MICB的氨基酸残基182至274。
图2描绘了对应于人MICA cDNA(等位基因*001:NCBI登录号NM_000247.2)的示例性核苷酸序列(SEQ ID NO:5)。编码区域加下划线。
图3描绘了对应于人MICB cDNA(等位基因*001:NCBI登录号X91625.1)的示例性核苷酸序列(SEQ ID NO:6)。编码区域加下划线。
图4描绘了推定的可溶性MICA多肽的示例性氨基酸序列(A-SEQ ID NO:7；B-SEQID NO:8；C-SEQ ID NO:9；D-SEQ ID NO:10；E-SEQ ID NO:11；F-SEQ ID NO:12；G-SEQ IDNO:13；H-SEQ ID NO:14)。
图5描绘了推定的可溶性MICB多肽的示例性氨基酸序列(A-SEQ ID NO:15；B-SEQID NO:16；C-SEQ ID NO:17；D-SEQ ID NO:18；E-SEQ ID NO:19；F-SEQ ID NO:20；G-SEQ IDNO:21)。
图6描绘了含有α-1、α-2和α-3结构域的sMICA/B的推定结构以及序列QQWGDVLP(SEQ ID NO:22)在α-3结构域中的位置。表位作图研究表明内部序列GDVL(SEQ ID NO:23)显著影响抗体5C9的结合。
图7A描绘了单克隆抗体5C9的可变轻链的氨基酸序列(粗体，下划线)，以及前导序列(斜体)和恒定区的一部分(阴影，斜体)；图7B描绘了5C9的可变轻链序列和相应的CDRL1、CDR L2和CDR L3；图7C和图7D分别描绘了编码图7A和7B的氨基酸序列的核酸序列；图7E描绘了单克隆抗体5C9的可变重链的氨基酸序列(粗体，下划线)，以及重链的前导序列(斜体)和恒定区的一部分(阴影，斜体)；图7F描绘了5C9的可变重链序列和相应的CDR H1、CDRH2和CDR H3；图7G和图7H分别描绘了编码图7E和图7E的氨基酸序列的核酸序列。
图8描绘了免疫球蛋白重链(SEQ ID NO:32-35)和轻链序列(SEQ ID NO:36-39)的示例性人框架区。相应CDR区的位置以粗体下划线显示。
图9提供了FACS分析结果，其显示单克隆抗体5C9不与表达MIC蛋白的细胞结合(上图)，与阳性对照单克隆抗体(mAb)相比，其结合细胞表面表达的MIC的胞外域(下图)。同种型对照抗体是不与MICA结合并且与抗体5C9在同一Ig类中的抗体。
图10提供了单克隆抗体5C9与前列腺癌细胞系DU-145产生的sMICB结合的基于ELISA的分析。
图11显示单独用5C9抗体、单独用小鼠IL-12或5C9抗体和IL-12的组合对异种移植于Rag2-/-(敲除)小鼠中的前列腺癌细胞系DU-145的生长的治疗效果。
图12显示了对于用图11所示的前列腺癌DU-145异种移植物进行体内研究，在第58天测量的肿瘤体积的比较数据。
图13显示了如图11所示异种移植前列腺癌DU-145并单用5C9抗体、单用IL-12和5C9抗体和IL-12的组合治疗的Rag2-/-小鼠中sMICB的测量水平。在细胞移植后的研究第10、36、43和53-58天测量sMICB水平。对于同种型对照，mAb 5C9加IL-12的联合治疗组在研究第36、43和53-58天的P值分别为0.03、0.001和0.002(Student T检验，双尾)。
图14显示如图11所示的用前列腺癌DU-145异种移植物接种并单用5C9抗体，单用IL-12和5C9抗体和IL-12组合治疗的Rag2-/-小鼠中脾的测量体积。在实施例5描述的体内研究结束时测定脾脏大小。
图15显示用前列腺癌DU-145异种移植物接种并单用5C9抗体，单用IL-12和5C9抗体与IL-12组合治疗的雄性Rag2-/-小鼠的血清中干扰素-β(IFN-γ)的水平。在第36天通过ELISA测量IFN-α水平。显示了平均IFN-g+/-SD。“*”是P<0.05，使用Student T检验计算。
图16显示用前列腺癌DU-145异种移植物接种并单用5C9抗体、单用IL-12和5C9抗体与IL-12组合治疗的雄性Rag2-/-小鼠血清中干扰素-γ诱导型蛋白10(IP-10)的水平。在第10、36、43和58天通过ELISA测量IP-10水平。与对照相比，“*”是P<0.05；“**”是P<0.01；“***”为P<0.001，使用Student T检验计算。
6.详述
本公开内容提供了识别可溶形式的MHC I类链相关基因A蛋白(MICA)和/或MHC I类链相关基因B蛋白(MICB)的抗体，此类抗体用于治疗以存在水平升高的MIC蛋白为特征的疾病的用途，以及用作检测可溶性MIC蛋白存在的诊断试剂。
除非上下文另有明确规定，在本文的描述中，单数形式的“一”，“一个”和“该”包括复数指示物。此外，除非另有说明，使用“或”意味着“和/或”。类似地，“包含”、“包含的”、“包含着”、“包括”、“包括的”和“包括着”是可互换的而不是限制性的。在各种实施方式的描述使用术语“包括”的情况下，本领域技术人员将理解，在一些特定情况下，也可以使用“基本上由......组成”或“由......组成”的语言来描述实施方式。
应理解，除非上下文另有明确指示，否则在提供数值的范围时，在所述范围的上限与下限之间以下限单位的十分之一为基准的每个中间值和任何其它所述的或在所述范围内的中间值也包含在诸实施方式中。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在较小范围内，并且也包括在说明书内，除了所述范围中任何特别排除的端点。在所述范围包括一个或两个端点的情况下，还包括排除那些已包括的端点之一或两个的范围作为实施方式的一部分。
6.1定义
除非另外定义，否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本领域普通技术人员通常理解的含义相同的含义。因此，以下术语旨在具有以下含义。
“抗体”以最广泛的含义使用，是指免疫球蛋白或其片段，并且包括包含抗体的抗原结合片段或区域的任何此类多肽。公认的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因，以及无数免疫球蛋白可变区基因。轻链通常分类为κ或λ。重链分类为γ、μ、α、δ或ε，进而分别定义免疫球蛋白类别为IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。免疫球蛋白类别还可以进一步分类为亚类，包括IgG亚类IgG1、IgG2、IgG3和IgG4；和IgA亚类IgA1和IgA2。该术语包括但不限于多克隆、单克隆、单特异性、多特异性(例如，双特异性抗体)、天然、人源化、人、嵌合、合成、重组、杂交、突变、移植的、抗体片段(例如，全长抗体的一部分，通常是其抗原结合区或可变区，例如Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段)，以及体外产生的抗体，只要它们表现出所需的生物学活性。该术语还包括单链抗体，例如单链Fv(sFv或scFv)抗体，其中可变重链和可变轻链可连接在一起(直接或通过肽接头)以形成连续多肽。
“分离的”是指自然状态的改变，即从其原始环境改变和/或移除。例如，当多核苷酸或多肽(例如抗体)与天然环境中天然相关的材料分离时，该多核苷酸或多肽是分离的多核苷酸或多肽。因此，“分离的抗体”是从其天然环境的组分中分离和/或回收的抗体。
“纯化的抗体”是指抗体制品，其中与制品中的其它污染物(例如，其它蛋白)相比，抗体的重量百分比为至少80％或更高、至少85％或更高、至少90％或更高、至少95％或更高，例如在还原或非还原条件下采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)或毛细管电泳-(CE)SDS测定。
当用于提及膜结合蛋白时，“胞外结构域”和“胞外域”可互换使用，是指某蛋白在细胞脂膜的胞外侧暴露的部分。在一些实施方式中，MICA的胞外域来自未加工的全长MICA蛋白的约24至约299的氨基酸残基，其中氨基酸编号基于MICA*001等位基因的参比MICA蛋白。在一些实施方式中，MICB的胞外域来自未加工的全长MICB蛋白的约24至约299的氨基酸残基，其中氨基酸编号基于MICB*001等位基因的参比MICB蛋白。应当理解，界定MICA和MICB的胞外域的多肽区域是近似的，并且在一些实施方式中，可以延伸至约氨基酸残基307。MICA*001等位基因的示例性未加工的全长MICA蛋白见图1A(SEQ ID NO:1)，MICB*001等位基因的示例性未加工的全长MICB蛋白见图1B(SEQ ID NO:2)。
在任何结合剂，例如抗体的上下文中，“特异性结合”是指特异性结合抗原或表位的结合剂，例如以高亲和力结合，并且不显著结合其它无关抗原或表位。
“功能性”是指某种分子形式，该分子形式具有天然存在的其类型分子的天然生物活性或任何特定的所需活性，例如通过其与配体分子结合的能力来判断。“功能性”多肽的实例包括通过其抗原结合区与抗原特异性结合的抗体。
“天然杀伤组2D”、“NKG2D”和“NKG2D受体”是指在多种类型的免疫细胞，特别是NK细胞、CD8+T细胞(例如，γδCD8+T细胞和αβCD8+T细胞)和一些CD4+T细胞上发现的细胞表面分子。NKG2D也称为杀伤细胞凝集素样受体，亚家族C，成员4或KLRC4。术语“NKG2D”和“NKG2D受体”包括人NKG2D受体的变体、同种型和物种同源物(参见，例如，Diefenbach等，2002，NatImmunol.3(12):1142-9中描述的同种型)。NKG2D是II型跨膜蛋白，具有胞外C型(即，Ca2+结合性)凝集素样结构域，但缺乏Ca2+结合位点。它可与衔接蛋白如DAP10或DAP12形成异二聚体，识别包括MICA、MICB、ULBP1、ULBP2、ULBP3、ULBP4、ULBP5和ULBP6在内的蛋白配体。应当理解，在本文归属于NKG2D的任何活性，例如细胞活化、抗体识别等，也可以指包含NKG2D的复合物，例如NKG2D-DAP10或NKG2D-DAP12异二聚体。携带NKG2D的免疫效应细胞(例如NK细胞)与表达NKG2D配体(例如MICA或MICB)的应激或患病细胞的相互作用增强针对应激/患病细胞的细胞免疫应答。
“MICA”是指MHC I类链相关基因A蛋白(MICA)，包括人MICA的变体、同种型和物种同源物。与HLA I类蛋白不同，不知MICA蛋白与β2微球蛋白结合。MICA的表达通常由应激诱导，并且MICA用作天然杀伤细胞(NK)受体NKG2D的配体。MICA蛋白包含三个胞外Ig样结构域，即，α-1、α-2和α-3，跨膜域和胞内域。该蛋白在胃上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞、角质形成细胞和单核细胞中表达。MICA的示例性序列可以见于NCBI登录号NP_000238.1(等位基因MICA*001)，示于本公开内容的图1A(SEQ ID NO:1)和NP_001170990.1(等位基因MICA*008.01)。其它示例性MICA序列可以在美国专利公布20110311561中找到，该文献通过引用纳入本文。
“MICB”是指MHC I类链相关基因B蛋白(MICB)，包括人MICB的变体、同种型和物种同源物。与HLA I类蛋白不同，不知MICB蛋白与β2微球蛋白结合。MICB的表达通常由应激诱导，并且MICB用作天然杀伤细胞(NK)受体NKG2D的配体。MICB在氨基酸水平上与MICA具有约84％的序列同一性。MICB蛋白包含三个胞外Ig样结构域，即α-1、α-2和α-3，跨膜域和胞内域。该蛋白在胃上皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞、角质形成细胞和单核细胞中表达。MICB的示例性序列可以见于UniProtKB登录号Q29980.1，示于本公开内容的图1B(SEQ ID NO:2)。其它示例性MICB序列可以在美国专利公布20110311561中找到，其通过引用纳入本文。
“可溶性MICA”或“sMICA”是指含有α-1、α-2和α-3结构域的MICA蛋白，但其不与细胞结合或连接，因此存在于胞外。通常，可溶性MICA缺乏跨膜域。在一些实施方式中，sMICA的功能在于结合NKG2D受体。如本文所用，sMICA包括通过蛋白水解从细胞释放的形式，由于蛋白水解过程的非特异性，该形式可以是不同的。示例性的sMICA包含含有图1A中所示未加工的全长MICA的约24至约297的氨基酸残基的多肽(SEQ ID NO:1)。推定的可溶性MICA蛋白的示例性氨基酸序列也示于图4(SEQ ID NO:7-14)。
“可溶性MICB”或“sMICB”是指含有MICB蛋白的α-1、α-2和α-3结构域的MICB蛋白，但其不与细胞结合或连接，因此存在于胞外。通常，可溶性MICB缺乏跨膜域。如本文所用，sMICB包括通过蛋白水解从细胞释放的形式，由于蛋白水解过程的非特异性，该形式可以是不同的。示例性的sMICB包含图1B中所示未加工的全长MICB的约24至约297的氨基酸残基的多肽(SEQ ID NO:2)。推定的可溶性MICB蛋白的示例性氨基酸序列也示于图5(SEQ ID NO:15-21)。
述及NKG2D配体(例如MICA和MICB)的“脱落”或“脱落的”是指从表达NKG2D配体的细胞的细胞表面释放NKG2D配体的可溶性胞外域片段。此类脱落可由细胞表面NKG2D配体的蛋白水解切割引起，从而导致胞外域片段从细胞表面释放。在一些实施方式中，可溶性胞外域或其片段可以由交替转录物(alternate transcript)编码。
“全长MIC”是指含有α-1、α-2和α-3结构域；跨膜域和胞内域的MIC蛋白。“未加工的全长MIC蛋白”是指翻译后未加工的MIC蛋白，而“全长成熟MIC蛋白”或“全长加工的MIC蛋白”是指MIC蛋白的加工形式，例如去除了前导肽的MIC蛋白。未加工的全长和全长成熟加工的蛋白的长度可因多态性的存在而有所不同。在一些实施方式中，对于MICA，未加工的总长度(含有前导序列)可以为约332至约388个氨基酸，并且在一些实施方式中，对于MICB，为约383个氨基酸。在一些实施方式中，未加工的全长MIC蛋白可以在约332至约388个氨基酸之间变化。对于MICA，加工的MIC蛋白(除去前导序列)可以为约309至约365个氨基酸，对于MICB，可以为约360个氨基酸。对于MICA，示例性的未加工的全长MIC蛋白示于图1A(SEQ IDNO:1)，对于MICB，示于图1B(SEQ ID NO:2)。其他示例性全长MICA和MICB序列可以见于美国专利公布20110311561和国际专利公布WO2013117647，两篇文献通过引用纳入本文。
在蛋白或多肽的上下文中，“膜结合”是指含有胞外域的蛋白或多肽或其至少附着于跨膜域或其它膜附着结构域的部分。膜结合形式可以包括或不包括胞内域。
MIC蛋白(例如，MICA和MICB)的“α-1结构域”是指MICA和MICB蛋白的胞外域上的氨基末端近端Ig样区域(即，G样结构域)(参见，例如，Frigoul和Lefranc，2005,Recent ResDevel Human Genet.3:95-145；通过引用纳入本文)。MICA的示例性α-1结构域含有MICA*001等位基因的未加工MICA蛋白的约24至约108的氨基酸残基。MICB的示例性α-1结构域含有MICB*001等位基因的未加工MICB蛋白的约24至约108的氨基酸残基。
MIC蛋白(例如，MICA和MICB)的“α-2结构域”是指MICA和MICB蛋白的胞外域上的第二Ig样区域(即，G样结构域)(参见，例如，Frigoul和Lefranc，2005,Recent Res DevelHuman Genet.3:95-145；通过引用纳入本文)。MICA的示例性α-2结构域含有MICA*001等位基因的未加工MICA蛋白的约109至约201的氨基酸残基。MICB蛋白的示例性α-2结构域含有MICB*001等位基因的未加工MICB蛋白的约109至约201的氨基酸残基。
MIC蛋白(例如，MICA和MICB)的“α-3结构域”是指MICA和MICB蛋白的胞外域上的跨膜末端近端区域，也称为C样区域(参见，例如，Frigoul和Lefranc，2005,Recent Res DevelHuman Genet.3:95-145；通过引用纳入本文)。在一些实施方式中，α-3结构域含有在α-3结构域中的两个半胱氨酸残基之间形成的二硫键。MICA的示例性α-3结构域含有MICA*001等位基因的未加工MICA蛋白的约205至约296或约205至约297的氨基酸残基。MICB蛋白的示例性α-3结构域含有MICB*001等位基因的未加工MICB蛋白的约205至约296或约205至约297的氨基酸残基。
“抗原”是指可以结合特定抗体的物质，例如但不限于特定的肽、蛋白、核酸或碳水化合物。
“表位”或“抗原决定簇”是指能够被特定抗体识别并特异性结合的抗原部分。当抗原是多肽时，表位可以由相邻的氨基酸和/或通过蛋白的三级折叠而并置的非相邻氨基酸形成。线性表位是由氨基酸的线性序列上的相邻氨基酸形成的表位。蛋白变性后，线性表位可保留。构象或结构表位是由不相邻的氨基酸残基组成的表位，因此由氨基酸的线性序列的分开部分组成，所述氨基酸的线性序列的分开部分通过该分子的折叠，例如通过二级、三级和/或四级结构而彼此接近。蛋白变性后，构象或结构表位可能丧失。在一些实施方式中，表位可以以独特的空间构象包含至少3个、更通常至少5个或8-10个氨基酸。因此，本文使用的表位包括确定表位(defined epitope)，其中抗体仅结合该确定表位的部分。本领域已知许多方法用于绘制和表征蛋白上表位的位置，包括解析抗体-抗原复合物的晶体结构、竞争测定、基因片段表达测定、突变测定和基于合成肽的测定，例如，参见《抗体的使用：实验室手册》(Using Antibodies：A Laboratory Manual)，第11章，Harlow和Lane编，冷泉港实验室出版社，冷泉港，纽约(1999)。
“多态性的”或“多态性”是指存在两种或更多种形式的基因或其部分。具有至少两种不同形式(即，两种不同的核苷酸序列)的基因的一部分被称为“基因的多态性区域”。多态性区域可以是单个核苷酸，其身份在不同等位基因中不同。多态性区域也可以是几个核苷酸长。多态性蛋白是指由于编码基因序列中的多态性而存在两种或更多种形式的蛋白。
“等位基因”是指基因座上的特定基因序列，它是沿着DNA的基因序列的特定碱基对序列的区段所占据的位置。
“蛋白”、“多肽”或“肽”表示通过酰胺键共价连接的至少两个氨基酸的聚合物，无论长度或翻译后修饰(例如，糖基化、磷酸化，脂化、豆蔻酰化、泛素化等)。该定义包括D-和L-氨基酸，以及D-和L-氨基酸的混合物。除非另有说明，否则蛋白质、多肽或肽的氨基酸序列在本文中以常规的N-末端至C-末端方向显示。
“多核苷酸”和“核酸”在本文中可互换使用，并且是指共价连接在一起的两个或更多个核苷。多核苷酸可以完全由核糖核苷组成(即RNA)，完全由2’脱氧核糖核苷酸组成(即DNA)或核糖核苷和2’脱氧核糖核苷的混合物组成。核苷通常通过糖-磷酸键(糖-磷酸骨架)连接在一起，但多核苷酸可包括一个或多个非标准连接物。这种非标准连接物的非限制性实例包括氨基磷酸酯、硫代磷酸酯和酰胺(参见，例如Eckstein,F.,《寡核苷酸好类似物：实用方法》(Oligonucleotides and Analogues:A Practical Approach),牛津大学出版社(1992))。
“可操作地连接”或“可操作性连接”是指其中两个或更多个多核苷酸序列定位成允许(行使)其普通功能的情况。例如，如果启动子能够控制编码序列的表达，则它与该序列可操作地连接。其它调控序列，例如增强子、核糖体结合或进入位点、终止信号、多腺苷酸化序列和信号序列也可操作地连接以允许它们在转录或翻译中行使适当功能。
“氨基酸位置”和“氨基酸残基”可互换使用以指代一氨基酸在多肽链中的位置。在一些实施方式中，氨基酸残基可以表示为“XN”，其中X表示氨基酸，N代表其在多肽链中的位置。如果在同一氨基酸位置发生两种或更多种改变，例如多态性，这些改变可以利用隔开这些改变的“/”来表示。在某一指定残基位置用另一氨基酸残基取代某一氨基酸残基可以表示为XNY，其中X表示原始氨基酸，N表示在多肽链中的位置，Y表示替代或取代氨基酸。当参比一较大多肽，利用这些术语来描述某一多肽或肽部分时，第一个参比数字描述该多肽或肽起始的位置(即，氨基末端)，而第二个参比数字描述该多肽或肽结束的位置(即，羧基端)。例如，经加工的全长MICA的氨基酸190-196位的肽是指其氨基端在该经加工的全长MICA蛋白的190位并且其羧基端在196位的肽。
“多克隆”抗体是指不同抗体分子的组合物，该组合物能与相同或不同抗原上的几种不同的特异性抗原决定簇结合或反应。多克隆抗体也可以视作“单克隆抗体的混合物”。多克隆抗体可以是任何来源，例如嵌合的、人源化的或全人的。
“单克隆抗体”是指从基本上均质的抗体群获得的抗体，即，构成该群的各抗体是相同的，除了可能少量存在天然产生的可能突变。各单克隆抗体针对抗原上单一的决定簇。在一些实施方式中，按照本发明使用的单克隆抗体可以通过Kohler等(1975,Nature 256:495-7)描述的杂交瘤方法或通过重组DNA方法制备。还可以从，例如噬菌体抗体文库分离单克隆抗体。
“嵌合抗体”是指由至少两种不同来源的部分构成的抗体。嵌合抗体可以包含源自第一物种的抗体部分，该部分与另一分子，例如源自第二物种的抗体部分融合。在一些实施方式中，嵌合抗体包含源自非人动物，例如小鼠或大鼠的抗体部分，该部分与源自人的抗体部分融合。在一些实施方式中，嵌合抗体包含与源自人的抗体的恒定区融合的源自非人动物的抗体可变区的全部或部分。
“人源化抗体”是指这样的抗体，该抗体包含嫁接到人框架序列上的(具有)结合特异性的供体抗体，例如供体抗体，如小鼠单克隆抗体的CDR区。“人源化抗体”通常结合与供体抗体相同的表位。
“完全人抗体”或“人抗体”是指仅仅包含人免疫球蛋白序列的抗体。如果在非人细胞，例如小鼠，小鼠细胞中，或在源自小鼠细胞的杂交瘤中产生，完全人抗体可以包含鼠碳水化合物链。
“抗体片段”或“抗原结合部分”是指全长抗体的一部分，通常是其抗原结合或可变域。抗体片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体；和从结合两种或更多种不同抗原的抗体片段形成的多特异性抗体。结合化学计量特性增加或包含可变价位(2、3或4)的抗体片段的几个例子包括三抗体、三价抗体和三聚抗体、四抗体、二-二抗体和(sc(Fv)2)2分子，所有这些均可以用作结合剂，以高亲和性和亲合力结合可溶性抗原(参见，例如Cuesta等.,2010,Trends Biotech.28:355-62)。
“单链Fv”或“sFv”抗体片段包含抗体的VH和VL结构域，其中这些结构域存在于单一多肽链中。Fv多肽通常在VH和VL结构域之间还包含多肽接头，如此使得sFv能够形成所需的结构以供抗原结合。sFv的综述参见Pluckthun，刊于《单克隆抗体药理学》(Pharmacologyof Monoclonal Antibodies),第113卷,第269-315页,Rosenberg和Moore遍.,SV出版社(Springer-Verlag),纽约(1994)。
“二抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，其在同一多肽链中包含与轻链可变域(VL)相连的重链可变域(VH)(VH-VL)。利用短接头使得同一链上的两个结构域之间配对，这些结构域被迫与另一链的互补结构域配对并产生两个抗原结合位点。
“抗原结合域”或“抗原结合部分”是指特异性结合抗原的部分或全部或与抗原的部分或全部互补的抗原结合分子的区域或部分。在一些实施方式中，抗原结合区域可以仅结合抗原的特定部分(例如表位)，特别是抗原较大的情况下。抗原结合域可包含一个或多个抗体可变区，特别是抗体轻链可变区(VL)和抗体重链可变区(VH)，并且特别是VH和VL链各自上的互补决定区(CDR)。
“可变区”和“可变域”可互换使用，以指代赋予各具体抗体的结合和特异性特征的多肽区域。抗体重链中的可变区称为“VH”，而抗体轻链中的可变区称为“VL”。序列中主要的变化通常位于可变域的三个区域，称为VL区和VH区中的“超变区”或“CDR”，并且构成抗原结合位点。可变域的更保守的部分称为框架区FR。
“互补决定区”和“CDR”可互换使用，以指代在抗体分子的重链和轻链多肽的可变区内找到的不连续的抗原结合区域。在一些实施方式中，CDR也描述为“超变区”。天然产生的抗体通常包含六个CDR，三个在VH中(称为：CDR H1或H1；CDR H2或H2；和CDR H3或H3)，三个在VL中(称为：CDR L1或L1；CDR L2或L2；和CDR L3或L3)。现已采用各种方法对CDR结构域划界，应该理解本文包括通过不同的方法限定的CDR。限定CDR的“Kabat”方法利用序列变化并且是最常用的(Kabat等.,1991,“免疫学感兴趣的蛋白序列(Sequences of Proteins ofImmunological Interest),第5版”NIH 1:688-96)。“Chothia”利用结构环的位置(Chothia和Lesk,1987,J Mol Biol.196:901-17)。“AbM”限定的CDR是Kabat和Chothia方法的折中方法，可以利用牛津分子AbM抗体建模软件划界(参见，Martin等.,1989,Proc.Natl Acad SciUSA.86:9268；也参见world wide web www.bioinf-org.uk/abs)。“接触”CDR划界是基于已知抗体-抗原晶体结构的分析(参见，例如MacCallum等.,1996,J.Mol.Biol.262,732-45)。当彼此比较时，通过这些方法划界的CDR通常包括重叠的氨基酸残基或氨基酸残基的亚组。采用各方法限定CDR的残基通常列于下表：
应该理解，包含特定CDR的确切残基数会根据CDR的序列和大小而有所不同，给定抗体可变区的氨基酸序列，本领域技术人员可常规确定哪些残基构成特定的CDR。
Kabat(同上)也确定了适用于任何抗体的可变域序列的编号系统。本领域技术人员可将这种“Kabat编号”系统应用于任何可变域序列。因此，除非另有指出，参考抗体或抗原结合片段中特定氨基酸残基的编号是基于Kabat编号系统。
“框架区”或“FR区”是指作为可变区的一部分而非CDR的一部分的氨基酸残基(例如，采用Kabat、Chothia或AbM限定)。抗体的可变区通常含有四个FR区：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，VL区中的FR区是以下顺序：FR L1-CDR L1-FRL2-CDR L2-FRL3-CDR L3-FRL4，而VH区中的FR区是以下顺序：FR1H-CDR H1-FRH2-CDR H2-FRH3-CDR H3-FRH4。
“人共有框架”是指这样一种框架，其代表人免疫球蛋白VL或VH框架序列集合中最常见发生的氨基酸残基。人免疫球蛋白VL或VH序列集合通常来自可变域序列的亚组。在一些实施方式中，所述亚组序列是在Kabat等(同上)中呈现的亚组。在一些实施方式中，对于VL，所述亚组是在Kabat等(同上)中描述的亚组kappa。在一些实施方式中，对于VH，所述亚组是在Kabat等(同上)中描述的亚组III。
“恒定区”或“恒定域”是指免疫球蛋白轻链或重链中与可变区不同的区域。重链的恒定区通常包含至少以下之一：CH1结构域、铰链(例如，上、中和/或下铰链区)、CH2结构域和CH3结构域。在一些实施方式中，抗体可以具有额外的恒定域CH4和/或CH5。在一些实施方式中，本文所述的抗体包含含有CH1结构域的多肽；含有CH1结构域、至少铰链结构域的一部分和CH2结构域的多肽；含有CH1结构域和CH3结构域的多肽；含有CH1结构域、至少铰链结构域的一部分和CH3结构域的多肽；或含有CH1结构域、至少铰链结构域的一部分、CH2结构域和CH3结构域的多肽。在一些实施方式中，所述抗体包含含有CH3结构域的多肽。轻链的恒定域称为CL，在一些实施方式中，可以是kappa或lambda恒定区。然而，本领域技术人员应该理解，这些恒定域(例如，重链或轻链)可以作修饰，从而它们的氨基酸序列与天然产生的免疫球蛋白分子不同。
“Fc区”或“Fc部分”是指免疫球蛋白重链的C末端区域。Fc区可以是天然序列Fc区或非天然产生的变体Fc区。免疫球蛋白的Fc区通常包含包含恒定域CH2和CH3。虽然Fc区的边界可以有所不同，但在一些实施方式中，可以确定人IgG重链Fc区从C226位的氨基酸残基或从P230向其羧基末端延伸。在一些实施方式中，人IgG Fc区的“CH2结构域”也称为“Cγ2”，通常从约氨基酸残基231延伸至约氨基酸残基340。在一些实施方式中，在完整的天然IgG分子的两个CH2结构域之间可以间插有N-连接的碳水化合物链。在一些实施方式中，人IgG Fc区的“CH3结构域”在CH2结构域的C-末端包含残基，例如从Fc区的约氨基酸残基341到约氨基酸残基447。“功能性Fc区”具有天然序列FC区的“效应物功能”。示范性Fc“效应物功能”包括Clq结合；补体依赖性细胞毒性(CDC)；Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)；吞噬作用；细胞表面受体(例如，LT受体)的下调等等。此类效应物功能通常需要Fc区与结合域(例如抗体可变域)结合，并且可以采用本领域已知的各种试验评估。
“结合亲和力”是指配体与其结合伴侣之间非共价相互作用的总和的强度。在一些实施方式中，结合亲和力是反映配体与其结合伴侣之间一对一相互作用的固有亲和力。亲和力通常以术语平衡结合(KA)或解离常数(KD)表示，进而是解离(koff)和结合速率常数(kon)的倒数比。
“序列同一性百分比(％)”和“序列同源性百分比”在本文中可互换使用，指多核苷酸或多肽之间的比较，通过在比较窗口上比较两个最佳比对序列来确定，其中，与参考序列相比，多核苷酸或多肽序列在比较窗口中的部分可以包括间隙，以便最佳比对两条序列。可以如下计算百分比，确定在两条序列中出现相同核酸碱基或氨基酸残基的位置数以产生匹配位置数，将匹配位置数除以窗口中的位置总数并将该结果乘以100得到序列同一性的百分比。或者，可以如下计算百分比，确定在两条序列中发生相同核酸碱基或氨基酸残基或核酸碱基或氨基酸残基与缺口比对的位置数以产生匹配位置数，将匹配位置数除以比较窗口中的位置总数，并将该结果乘以100得到序列同一性的百分比。本领域技术人员可以理解，有许多已建立的算法可用于比对两条序列。可以通过以下进行序列的最佳比对以供比较，例如可以通过Smith和Waterman的局部同源性算法(1981,Adv Appl Math.2:482)，通过Needleman和Wunsch的同源性比对算法(1970,J Mol Biol.48:443)，通过Pearson和Lipman的检索相似性的方法(1988,Proc Natl Acad Sci USA.85:2444-8)，特别是通过计算机实现这些算法(例如，BLAST、ALIGN、GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA；参见，例如Mount,D.W.,《生物信息学：序列和基因组分析》(Bioinformatics:Sequence and Genome Analysis),第2版.,冷泉港实验室出版社,冷泉港,纽约(2013))。
适用于确定序列同一性和序列相似性百分比的算法的示例是BLAST和BLAST2.0，FASTDB或ALIGN算法，这些算法是公开可用的(例如，NCBI:国家生物技术信息中心)。本领域技术人员可以确定用于比对序列的合适参数。例如，BLASTN程序(用于核苷酸序列)可以使用字长(W)为11、期望值(E)为10、M＝5、N＝-4和两条链的比较作为默认值。采用BLASTP比较氨基酸序列可以使用字长(W)为3、期望值(E)为10和BLOSUM62评分矩阵作为默认值(参见Henikoff和Henikoff,1989,Proc Natl Acad Sci USA.89:10915-9)。
“氨基酸取代”是指用另一种氨基酸替换多肽中的一个氨基酸。“保守性氨基酸取代”是指具有相似侧链的残基的可互换性，因此通常涉及用相同或相似的确定氨基酸类别内的氨基酸取代多肽中的氨基酸。作为示例而非限制，具有脂族侧链的氨基酸可以被另一脂族氨基酸取代，例如丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸和甲硫氨酸；具有羟基侧链的氨基酸被另一具有羟基侧链的氨基酸取代，例如丝氨酸和苏氨酸；具有芳香族侧链的氨基酸被另一具有芳香族侧链的氨基酸取代，例如苯丙氨酸、酪氨酸、色氨酸和组氨酸；具有碱性侧链的氨基酸被另一具有碱性侧链的氨基酸取代，例如赖氨酸、精氨酸和组氨酸；具有酸性侧链的氨基酸被另一具有酸性侧链的氨基酸取代，例如天冬氨酸或谷氨酸；疏水性或亲水性氨基酸分别被另一疏水性或亲水性氨基酸取代。
“氨基酸插入”是指将至少一个氨基酸掺入预定的氨基酸序列中。插入可以是插入一个或两个氨基酸残基；然而，本文考虑了约3至约5、或至多约10或更多个氨基酸残基的较大插入。
“氨基酸缺失”是指从预定的氨基酸序列中除去一个或多个氨基酸残基。缺失可以是去除一个或两个氨基酸残基；然而，本文考虑了约3至约5个、或至多约10个或更多个氨基酸残基的较大缺失。
“识别”是指确定已定特性的存在与否。该过程可包括测量或检测各种特性，包括与表位的结合或缺乏与表位的结合。
“对象”是指哺乳动物，包括但不限于人、非人灵长类动物和非灵长类动物，例如山羊、马和牛。在一些实施方式中，述及人对象时，术语“对象”和“患者”在本文中可互换使用。
“生物样品”是指取自患者或对象的任何生物材料。此类样品包括细胞样品、组织样品和液体样品。“液体样品”包括患者血液、血浆、血清、尿液、脑脊髓液、淋巴液、滑液、胆汁、精液和唾液的样品，等等。样品还可包括组织活检样品、全细胞、细胞裂解物或组织。
“异常”或“异常性”是指与未患有疾病或病症的生物体中观察到的水平或状况在统计学上不同的水平或状况，并且可以表征为信号的量、强度或持续时间的过量或是信号的量、强度或持续时间的缺乏。异常性可以表现为细胞功能、活力或分化状态的异常。异常的相互作用水平也可以大于或小于正常水平，并且可能损害生物体的正常表现或功能。
在疾病或病症的情况下，“升高的”是指与疾病或病症的发生具有统计学显著相关性的物质或分子，例如疾病标记物或指示物高于正常的水平。可以这些水平与适当的对照(例如无疾病的健康对象)进行比较以确定指示疾病存在的水平。
“癌症”和“癌性”是指或描述哺乳动物的生理状况，其中细胞群体的特征在于不受调节的细胞生长。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、胚细胞瘤、肉瘤和白血病。此类癌症的更具体的例子包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、腹膜癌、胃肠道癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝脏癌、膀胱癌、肝癌、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或内膜癌、唾液腺癌、肾癌、前列腺癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌和各种类型的头颈癌。
“增殖性病症”和“增殖性疾病”是指与异常细胞增殖相关的疾病，例如癌症。
“肿瘤”和“赘生物”是指由过度细胞生长或增殖引起的任何组织块，包括良性(非癌性)或恶性(癌性)的，包括癌前病变。
“MIC+疾病或病症”是指表现出一种或多种MIC蛋白(例如MICA和/或MICB)或其部分(例如sMIC)的水平升高的疾病或病症，其与疾病或病症的发生相关。
“MICA+疾病或病症”是指表现出MICA蛋白或其部分(例如sMICA)的水平升高的疾病或病症，其与疾病或病症的发生相关。
“MICB+疾病或病症”是指表现出MICB蛋白或其部分(例如sMICB)的水平升高的疾病或病症，其与疾病或病症的发生相关。
“MIC+肿瘤”或“MIC+癌症”是指肿瘤、赘生物或癌症，其特征在于MIC蛋白或其部分(例如sMICA和/或sMICB)的水平升高。
“MIC+血液系统恶性肿瘤”是指淋巴或骨髓系统细胞的增殖性疾病，其特征在于MIC蛋白或其部分(例如sMICA和/或sMICB)的水平升高。淋巴病症包括急性淋巴细胞白血病和慢性淋巴组织增生性疾病(例如淋巴瘤、骨髓瘤和慢性淋巴细胞白血病)。淋巴瘤包括霍奇金病和非霍奇金淋巴瘤、前体T细胞白血病/淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、MALT淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、B细胞慢性淋巴细胞白血病/淋巴瘤、外周T-细胞淋巴瘤(未另行说明)和蕈样肉芽肿(mycosis fungoides)。慢性淋巴性白血病包括T细胞慢性淋巴性白血病和B细胞慢性淋巴性白血病。骨髓疾病包括慢性髓性疾病和急性髓性白血病。慢性髓性疾病包括慢性骨髓增生性疾病和骨髓增生异常综合征。慢性骨髓增生性疾病包括血管生成性骨髓化生(angiogenic myeloid metaplasia)、原发性血小板增多症、慢性髓性白血病、真性红细胞增多症和非典型骨髓增生性疾病。非典型骨髓增生性疾病包括非典型CML、慢性中性白血病、肥大细胞疾病和慢性嗜酸性粒细胞白血病。
“MIC+病毒感染”是指这样一种病毒感染，其特征在于MIC蛋白或其部分(例如sMICA和/或sMICB)的水平升高。
“治疗”或“治疗的”是指这样一种过程，其旨在通常称为患者的哺乳动物(例如人)的情况中产生有益的变化。有益的改变可以包括例如以下的一种或多种：功能的恢复；症状的减轻；严重程度的减轻；疾病，病症或病情进展的限制或延缓或预防；或患者病情、疾病或病症恶化的限制或延缓。在疾病或病症的情况下，“治疗”、“治疗方法”或“可治疗的”是指治疗实现对疾病或病症的所需药理学和/或生理学作用。就完全或部分预防疾病/病症或其症状而言，该效果可以是预防性的，和/或就部分或完全治愈疾病/病症和/或可归因于疾病/病症的不良作用而言，该效果可以是治疗性的。该术语包括：(a)防止疾病在可能易患该疾病但尚未被诊断为患有疾病的对象中发生；(b)抑制疾病，即阻止其发展；或(c)缓解疾病，即引起疾病的缓解或消退。治疗剂可以在疾病或病症发作之前、期间或之后给予。特别令人感兴趣的是治疗正在发生的疾病，其中治疗稳定或减少患者的不良临床症状。宜在受影响的组织完全丧失功能之前进行此类治疗。
“治疗有效剂量”或“治疗有效量”是指足以在给予有此需要的哺乳动物后产生所需活性的化合物，包括生物化合物或药物组合物的用量。就包含抗体的药物组合物而言，本文所用的术语“治疗有效量/剂量”是指足以在给予哺乳动物后产生有效应答的抗体或其药物组合物的量/剂量。
“药学上可接受的”是指这样一种化合物或组合物，它们通常是安全、无毒的并且在生物学上或其它方面也不是不良的，并且包括对于人类药物和兽医用途可接受的化合物或组合物。该化合物或组合物可以由管理机构批准，或者在美国药典或其它公认的药典中列出，以便用于动物，包括人。
“药学上可接受的赋形剂、运载体或佐剂”是指可以与至少一种治疗剂(例如，本公开的抗体)一起给予对象并且不破坏其药理学活性的赋形剂、运载体或佐剂，当以足以递送治疗量的药剂的剂量给予时，其通常是安全、无毒的，在生物学上或其它方面也不是不良的。
“组合疗法”是指涉及提供至少两种不同疗法以实现指定治疗效果的治疗方案。例如，组合疗法可以包括给予两种或更多种不同的活性成分，例如抗体和化学治疗剂，或针对第一靶标的抗体和针对第二靶标的第二抗体。或者，组合疗法可以包括单独或与另一种疗法(例如放疗和/或手术)的递送一起给予抗体和/或一种或多种其它治疗剂。在给予两种或更多种不同活性成分的情况下，应理解活性成分可以作为相同组合物的一部分或作为不同组合物给予。当作为不同组合物给予时，包含不同活性成分的组合物可以在相同或不同的时间，通过相同或不同的途径，使用相同的不同给药方案给予，所有这些都根据具体情况需要并且由参与的医生或医疗护理人员确定。
“免疫刺激剂”或“免疫激活剂”是指，例如与不存在免疫刺激剂时的免疫应答相比，增强免疫应答的试剂，例如化合物或组合物。在一些实施方式中，免疫刺激剂可通过阻止免疫系统的抑制或通过激活免疫应答起作用。
“疫苗”是指可以给予人或动物以诱导免疫系统反应的化合物或组合物；这种免疫系统反应可导致抗体的产生或导致某些细胞，特别是抗原呈递细胞和免疫系统效应细胞，如T淋巴细胞和B淋巴细胞的活化。疫苗组合物可以是用于预防目的和/或用于治疗目的的组合物。“癌症疫苗”是指引发针对癌症的免疫反应的化合物或组合物。免疫反应可以针对广泛的癌症或针对特定癌症。
6.2sMIC结合抗体
MHC I类链相关基因A蛋白(MICA)和MHC I类链相关基因B蛋白(MICB)是MHC I类链相关(MIC)家族的成员和相关的UL-16结合蛋白(Leelayuwat等.,1994,Immunogenetics40:339-51；Bahram,1994,Proc Natl Acad Sci USA.91:6259-63；Fodil等.,1996,Immunogenetics 44:351-7；Groh等.,1999,Proc Natl Acad Sci USA.96:6879-84；Bauer等.,1999,Science 285(5428):727-9)，并作为结合免疫效应细胞，包括NK、NKT和αβ及γδCD8+T细胞上的C型凝集素样活化受体天然杀伤组2D(Natural Killer Group 2D，NKG2D)的配体。除了啮齿动物家族，MIC配体在大多数哺乳动物中是高度保守的，并且与MHC I类蛋白弱相关。MICA和MICB糖蛋白在氨基酸序列水平上约84％相同(Bahram等.,1994,Proc NatlAcad Sci USA.91:6259-6263；Bahram,1996,Immunogenetics 44:80-81；Bahram和Spies.,1996,Immunogenetics 43:230-233)。MICA和MICB蛋白是应激诱导的，与MHC I类分子相似；然而，已知它们不与beta-2-微球蛋白结合或结合肽。
MIC蛋白在肠上皮中，角质形成细胞、单核细胞和内皮细胞上通常低水平表达，但在应激、转化或某些病毒感染的细胞中被诱导至较高水平(Groh等.,1999,Proc Natl AcadSci USA.96:6879-84；Bauer等.,1999,Science285(5428):727-9；Zwirner等.,1998,Immunogenetics 47:139-41)。携带NKG2D的免疫效应细胞与在细胞表面上表达MIC配体的应激或患病细胞相互作用产生针对应激/患病细胞的细胞免疫反应，最终导致表达MIC的细胞死亡。MIC配体与携带NKG2D受体的免疫细胞结合刺激幼稚T细胞的活化，并且甚至可以在没有适当的TCR连接存在下诱导细胞毒性。在人中，NKG2D受体可以与DAP10一起起到共刺激分子的作用，通过磷脂酰肌醇激酶(PI3K)途径将配体结合信号传递给细胞内部。
在许多类型的肿瘤中NKG2D配体的表达已经见诸报道，据信这是由热激启动子元件的刺激引起基因表达以及由胞内检测到环境损伤或者癌症相关的基因组不稳定性水平增加引起的DNA损伤所致。在癌症患者中，包含alpha-1、-2和-3结构域的MIC胞外结构域经常从细胞中脱落并导致其在效应免疫细胞上的预期受体NKG2D下调(参见，例如Groh等.,2002,Nature 419:734-8)。在一些个体中，MICA糖蛋白在胞内产生，其通常不会成为细胞表面膜结合的，而是被掺入外泌体中并释放到胞外，在此情况下发生与免疫细胞上的NKG2D受体的相互作用(Ashiru等.,2010,Cancer Res.70:481-9)。研究表明，从肿瘤细胞表面脱落的这些肿瘤来源的可溶性MICA和MICB配体(sMICA和sMICB)起到类似诱饵分子的作用，导致在诸如NK、NKT和各种CD8+T细胞等免疫效应细胞上的NKG2D受体下调。sMICA和sMICB的形成似乎需要蛋白二硫键异构酶ERp5的参与，其可以形成瞬时混合二硫化物复合物以使膜结合的MICA和MICB能够作蛋白水解切割(Kaiser等.,2007,Nature 447(7143):482-6)。sMICA和sMICB的形成导致不寻常的情况，其中天然作用是寻找和破坏转化细胞的先天防御系统的效应物被这些诱饵MIC配体分子的免疫抑制作用关闭。通过这种机制，肿瘤细胞能够从免疫系统中隐藏并且可以继续生长。进一步的考虑是，持续的NKG2D配体表达和脱落促进癌症患者中正常罕见的免疫抑制性NKG2D+CD4+T细胞的增殖，并且与sMICA的血清浓度直接相关，从而致使NKG2D共刺激和免疫抑制性T细胞的扩增(参见，例如Groh等.,2006,Nat Immunol.7:755-62)。
与健康个体相比，晚期癌症患者血液中可溶性MIC分子(例如sMICA和/或sMICB)的水平显著升高支持sMICA和sMICB的不利作用(Groh等.,2002,Nature 419:734-8；Salih等.,2002,J Immunol.169:4098-102)。在许多情况下，这些高水平似乎与癌症的临床分期和不良临床结果直接相关(Doubrovina等.,2003,J Immunol.171:6891-9；Wu等.,2004,JClin Invest.114:560-8；Holdenreider等.,2006,Intl J Cancer 118:684-7)。体外实验还表明，添加重组或肿瘤细胞衍生的sMIC蛋白可降低效应免疫细胞，如NK和T细胞上NKG2D受体的水平，并且可通过可溶性配体的中和抗体干扰受体结合来阻断这种作用(Groh等.,2002,Nature 419:734-8)。因此，全身性和肿瘤浸润的效应细胞上的NKG2D表达降低可限制sMIC+患者中针对肿瘤的免疫反应。然而，上述特异性中和啮齿动物抗体极不可能用作人类治疗剂(即使人源化)，因为它们也会结合与细胞结合的MIC配体，因此可能对在正常情况下表达内源性MIC配体的某些细胞产生不良的免疫反应。
MICA和MICB的可溶形式也参与病毒感染过程。例如，呼吸道上皮细胞中的呼吸道合胞病毒(RSV)感染导致MICA的细胞表面表达和sMICA的循环水平上调(Zdrenghea等.,2012,Eur Respir J.39:712-20)。这些较高水平的sMICA可能会损害病毒清除并可能有助于延长感染。同样，已知NK细胞在针对RSV感染的免疫系统反应中发挥关键的细胞毒性作用，正如它们在提出的免疫监视系统中的转化细胞检测中起的作用一样。sMIC诱导效应免疫细胞上NKG2D受体的下调所致的NK细胞功能抑制或可代表避免免疫检测的病毒反应，或者代表在细胞感染期间抗病毒γ干扰素释放后，减少未感染旁观者细胞的细胞溶解的细胞安全机制。考虑到针对病毒的充分免疫应答的产生与已知在RSV感染中发生的NK细胞功能的后续丧失之间的微妙平衡，过量水平的sMICA可能减弱整体抗病毒反应。因此，特别需要在这些RSV感染期间努力降低sMICA水平，特别是在非常年轻的和在老年患者中，在这些患者中长期病毒感染经常导致呼吸道内壁严重损伤，甚至由于难以治疗的继发细菌感染而导致死亡。在人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)(Nolting等.,2010,Virology 406:12-20)或在导致肝细胞癌(HCC)发病的乙型肝炎病毒(HBV)的病毒感染人中也描述了可溶性NKG2D配体的释放。Matusali等(2013,FASEB J.27(6):2440-50)报道，HIV-1感染的淋巴细胞脱落的NKG2D配体诱导NK和CD8+T细胞的NKG2D下调，并导致针对病毒感染细胞的免疫反应抑制。在体外HIV-1感染的CD4+T细胞的培养基中，sMICA、sMICB和sULBP2的水平均升高。此外，与禽流感高活性抗逆转录病毒疗法(HAART)治疗的患者相比，慢性感染的HIV-1患者的sMICA水平高7倍，并且注意到sULBP2有相似的趋势但sMICB未观察到。通过本文所述的抗体和方法降低HIV-1感染中可溶性NKG2D配体的水平可以通过增加NKG2D细胞表面水平来改善NK细胞的细胞毒性功能，从而在HIV-1感染的免疫监视和NK控制中实现整体改善。此外，Kumar等(2012,PLOS One 7:1-6E44743)发现HBV诱导的HCC病例中sMICA显著升高。事实上，sMICA水平升高的HBV+HCC患者的生存率显著低于具有正常水平的患者，可能是因为较高的sMICA水平可能导致针对HBV感染细胞的免疫监视系统的灭活。同样，循环sMIC配体的减少与针对慢性病毒感染的免疫反应性改善相一致。
鉴于它们在免疫监视中的作用，MICA和MICB以及同源受体NKG2D已成为开发用于治疗与MICA和MICB表达相关的各种疾病(例如癌症和自身免疫疾病)的治疗剂的靶标。例如，专利公布WO 98/019167描述了细胞应激调节的人MIC1类基因和某些疾病状态的治疗，包括移植物抗宿主病(GVHD)和癌症。专利公布WO 03/089616、US20050233391、US20100316650；和美国专利号7,771,718描述了可溶性MIC多肽作为癌症和自身免疫疾病或病症的诊断、预后和治疗的标志物。专利公布美国专利号7,666,417和WO 2006/024367描述了用于治疗自身免疫疾病的NKG2D受体/NKG2D配体相互作用阻断剂。专利公布WO2008/036981和美国专利号7,959,916描述了通过使用抗MICA抗体和调节ERp5(蛋白质二硫键异构酶)活性，例如通过ERp5抗体或通过调节ERp5表达来治疗MICA相关病症的方法。美国专利号8,182,809还描述了通过使用抗-MICA抗体抑制MIC脱落(例如，形成可溶性MICA)来治疗癌症的方法。专利公布WO2014/140904描述了区分可溶性MIC蛋白和细胞膜结合的MIC蛋白的抗体。
本公开内容提供结合MICA和/或MICB的alpha-3结构域上的表位的结合剂，特别是抗体，其中抗体结合sMICA和/或sMICB但不结合与细胞膜结合的MICA和/或MICB。抗体区分sMIC和细胞结合的MIC的能力提供了中和sMICA和/或sMICB的治疗方法，藉此减轻从细胞释放的sMICA和/或sMICB在某些类型疾病中的有害作用，例如免疫抑制，同时保留针对在细胞表面表达MICA和/或MICB蛋白的细胞，例如表达MIC蛋白的癌细胞的先天免疫应答。如本文所述，sMIC(例如，sMICA和/或MICB)是截短的蛋白，其通常缺乏跨膜域和胞质尾部但保留三个胞外域alpha-1、alpha-2和alpha-3。图1A的参比MICA氨基序列的胞外结构域从约氨基酸残基24延伸至约297，直至残基307；对于图1B的参比MICB氨基序列，从约氨基酸残基24延伸至约297，直至残基307。图1A的参比MICA氨基序列中的alpha-3结构域从约氨基酸残基205延伸至296/297；而图1A的参比MICB氨基序列中的alpha-3结构域从约氨基酸残基205延伸至296/297。在各种类型的肿瘤和癌症中可以发现的sMIC蛋白由于产生可溶形式的过程而可具有可变的羧基末端。不想受理论束缚，天然存在的可溶形式似乎是由二硫键异构酶，内质网蛋白5(也称为ERp5、PDIA6或P5)的作用所致，其与MICA或MICB蛋白形成复合物并减少alpha-3结构域中的二硫键。蛋白水解切割后，sMIC蛋白在细胞膜附近释放。这些截短似乎不发生在特定的蛋白水解识别位点(参见，例如，Wang等，2009，Biochem Biophys ResComm.387:476-81)，而是以随机的方式在MICA或MICB的同源序列的N238-T243的报道的保守ERp5结合位点下游和跨膜部分上游的alpha-3结构域序列中发生。
在一些实施方式中，本公开内容的抗体结合MIC蛋白，例如MICA和/或MICB的alpha-3结构域上包含氨基酸序列GDVL(SEQ ID NO:23)的表位。序列GDVL(SEQ ID NO:23)存在于图1A所示的MICA*001的参比序列(SEQ ID NO:1)中氨基酸254至257位和图1B所示的MICB*001的参比序列(SEQ ID NO:2)中氨基酸254至257位。在一些实施方式中，抗体结合MIC蛋白的alpha-3结构域的表位序列GDVL(SEQ ID NO:23)中的一个或多个氨基酸残基254G、氨基酸残基255D、氨基酸残基256V和/或氨基酸残基257L。在一些实施方案中，抗体结合alpha-3结构域中的2、3或所有前述氨基酸残基。
在一些实施方式中，表位可在氨基末端和/或羧基末端具有额外的1、2、3、4、5或更多个氨基酸，其中额外的氨基酸可以是围绕所述确定区域或确定氨基酸序列的在天然存在的MICA或MICB氨基酸序列上发现的那些。
在一些实施方式中，抗体结合sMIC蛋白，例如sMICA和/或sMICB的alpha-3结构域上包含QQWGDVLP(SEQ ID NO:22)的氨基酸序列中的表位。序列QQWGDVLP(SEQ ID NO:22)存在于图1A所示MICA*001的参比序列(SEQ ID NO:1)中的氨基酸251至258位，以及图1B所示MICB*001的参比序列(SEQ ID NO:2)中的氨基酸251至258位。在一些实施方式中，抗体结合MIC蛋白的alpha-3结构域的序列QQWGDVLP(SEQ ID NO:22)中的氨基酸残基Q、氨基酸残基Q、氨基酸残基W、氨基酸残基G、氨基酸残基D、氨基酸残基V、氨基酸残基L和/或氨基酸残基P中的一个或多个。在一些实施方式中，抗体结合alpha-3结构域中的2、3、4或更多个前述氨基酸残基。
在一些实施方式中，抗体结合人群中存在的MICA的各种等位基因中存在的特定表位，例如在Robinson等(2003,“IMGT/HLA和IMGT/MHC：主要组织相容性复合物研究的序列数据库(IMGT/HLA and IMGT/MHC:Sequencedatabases for the study of the majorhistocompatibility complex)”,Nucleic Acids Res.31:311-314)中可获得的经鉴定MICA等位基因和Anthony Nolan研究院万维网站www.anthonynolan.org.uk/HIG/data.html；它们通过引用并入本文。因此，在一些实施方式中，抗体结合任何MICA等位基因变体中存在的指定表位，包括选自以下的人MICA等位基因变体：MICA*001、MICA*002:01、MICA*002:02、MICA*002:03、MICA*002:04、MICA*004、MICA*005、MICA*006、MICA*007:01、MICA*007:02、MICA*007:03、MICA*007:04、MICA*007:05、MICA*007:06、MICA*008:01:01、MICA*008:01:02、MICA*008:02、MICA*008:03、MICA*008:04、MICA*008:05、MICA*009:01、MICA*009:02、MICA*010:01、MICA*010:02、MICA*011、MICA*012:01、MICA*012:02、MICA*012:03、MICA*012:04、MICA*013、MICA*014、MICA*015、MICA*016、MICA*017、MICA*018:01、MICA*018:02、MICA*019、MICA*020、MICA*022、MICA*023、MICA*024、MICA*025、MICA*026、MICA*027、MICA*028、MICA*029、MICA*030、MICA*031、MICA*032、MICA*033、MICA*034、MICA*035、MICA*036、MICA*037、MICA*038、MICA*039、MICA*040、MICA*041、MICA*042、MICA*043、MICA*044、MICA*045、MICA*046、MICA*047、MICA*048、MICA*049、MICA*050、MICA*051、MICA*052、MICA*053、MICA*054、MICA*055、MICA*056、MICA*057、MICA*058、MICA*059、MICA*060、MICA*061、MICA*062、MICA*064N、MICA*065、MICA*066、MICA*067、MICA*068、MICA*069、MICA*070、MICA*072、MICA*073、MICA*074、MICA*075、MICA*076和MICA*077。
在一些实施方式中，抗体结合人群中存在的MICB的各种等位基因中存在的特定表位，例如在Robinson等(2003,“IMGT/HLA和IMGT/MHC：主要组织相容性复合物研究的序列数据库(IMGT/HLA and IMGT/MHC:Sequence databases for the study of the majorhistocompatibility complex)”,Nucleic Acids Res.31:311-314)中可获得的经鉴定MICB等位基因和Anthony Nolan研究院万维网站www.anthonynolan.org.uk/HIG/data.html；它们通过引用并入本文。因此，在一些实施方式中，抗体结合任何MICB等位基因变体中存在的指定表位，包括选自以下的人MICB等位基因变体：MICB*001、MICB*002:01:01、MICB*002:01:02、MICB*003、MICB*004:01:01、MICB*004:01:02、MICB*005:01、MICB*005:02:01、MICB*005:02:02、MICB*005:02:03、MICB*005:02:04、MICB*005:03、MICB*005:04、MICB*005:05、MICB*005:06、MICB*005:07、MICB*005:08、MICB*006、MICB*007、MICB*008、MICB*009N、MICB*010、MICB*011、MICB*012、MICB*013、MICB*014、MICB*015、MICB*016、MICB*018、MICB*019、MICB*020、MICB*021N、MICB*022；MICB*023、MICB*024、MICB*025、MICB*026、MICB*027、MICB*028和MICB*029。
应当理解，虽然上文定义的表位是本公开的抗体结合的MIC蛋白的一部分，但这并不排除除了特定的表位之外抗体可以与MIC蛋白上的其它位点相互作用的可能性。
在一些实施方式中，结合特定表位的抗体特异性结合sMIC蛋白，例如sMICA和/或sMICB，但不特异性结合与膜结合的MIC，例如MICA和/或MICB，特别是细胞表面存在的MIC蛋白的胞外域。在一些实施方式中，抗体能够特异性结合sMICA但不特异性结合与膜结合的MICA的胞外域。在一些实施方式中，抗体能够特异性结合sMICB，但不特异性结合与膜结合的MICB的胞外域。在一些实施方式中，抗体结合sMICA和/或sMICB的alpha-3结构域，但不特异性结合与膜结合的MICA和/或MICB的胞外结构域中的alpha-3结构域。在一些实施方式中，抗体结合sMICA的alpha-3结构域，但不特异性结合与膜结合的MICA的胞外结构域中的alpha-3结构域。在一些实施方式中，抗体结合sMICB的alpha-3结构域，但不特异性结合与膜结合的MICB的胞外结构域中的alpha-3结构域。
在一些实施方式中，抗体结合sMICA和/或sMICB的alpha-3结构域中包含氨基酸序列GDVL(SEQ ID NO:23)的表位，但不特异性结合与膜结合的MICA和/或MICB的alpha-3结构域中的相同表位。在一些实施方式中，抗体结合sMICA的alpha-3结构域中包含氨基酸序列GDVL(SEQ ID NO:23)的表位，但不特异性结合与膜结合的MICA的alpha-3结构域中的相同表位。在一些实施方案中，抗体结合sMICB的alpha-3结构域中包含氨基酸序列GDVL(SEQ IDNO:23)的表位，但不特异性结合与膜结合的MICB的alpha-3结构域中的相同表位。
在一些实施方式中，抗体结合sMICA和/或sMICB的alpha-3结构域中包含QQWGDVLP(SEQ ID NO:22)的氨基酸序列中的表位，但不特异性结合与膜结合的MICA和/或MICB的alpha-3结构域中的相同表位。在一些实施方式中，抗体结合sMICA的alpha-3结构域中包含QQWGDVLP(SEQ ID NO:22)的氨基酸序列中的表位，但不特异性结合与结合膜的MICA的alpha-3结构域中的相同表位。在一些实施方式中，抗体结合sMICB的alpha-3结构域中包含QQWGDVLP(SEQ ID NO:22)的氨基酸序列中的表位，但不特异性结合与结合膜的MICB的alpha-3结构域中的相同表位。
在一些实施方式中，与相应的与膜结合的MIC蛋白相比，抗体与含有alpha-3结构域的sMIC蛋白，例如sMICA和/或sMICB，特别是sMICB的结合特异性高至少10倍或更多、至少50倍或更多、至少100倍或更多、至少为500倍或更多或至少1000倍或更多。在一些实施方式中，与结合相应的与膜结合的MIC蛋白相比，抗体与MIC蛋白，例如MICA和/或MICB的分离的alpha-3结构域，特别是sMICB的alpha-3结构域的结合特异性高至少10倍或更多、至少50倍或更多、至少100倍或更多、至少为500倍或更多或至少1000倍或更多。在一些实施方式中，差异特异性是就MICA而言的。在一些实施方式中，差异特异性是就MICB而言的。在一些实施方式中，差异特异性是就由人前列腺癌细胞系DU-145产生的MICB而言的。
在一些实施方式中，本公开的抗体包括与参比抗体竞争结合sMICA和/或sMICB上的指定表位的抗体。在一些实施方式中，与参比抗体竞争的能力可以测量为抑制常数Ki，其根据以下计算：
Ki＝IC50/(1+[参比抗体浓度])/KD
其中IC50是导致与参比抗体结合50％抑制的竞争性抗体浓度，KD是参比抗体的平衡解离常数。
在一些实施方式中，抗体与参比抗体竞争结合sMICA和/或sMICB上的指定表位，具有与参比抗体相同或更高的平衡缔合常数KA，或相同或更低的KD。在一些实施方式中，抗体与参比抗体竞争结合前列腺癌细胞系DU-145产生的sMICB上的指定表位。在一些实施方式中，参比抗体是单克隆抗体5C9。在一些实施方式中，抗体之间的竞争可以通过其中感兴趣抗体或候选抗体抑制参比抗体与共同抗原(例如sMIC的alpha-3结构域)的特异性结合的测定来确定。许多类型的竞争性结合测定是已知的并且可以使用，包括例如固相直接或间接放射免疫测定(RIA)、固相直接或间接酶免疫测定(EIA)、夹心竞争测定、固相直接生物素-抗生物素蛋白EIA、固相直接标记测定和固相直接标记夹心测定。
在一些实施方式中，在所用特定测定条件下最大结合的80％的参比抗体浓度和比参比抗体浓度高10倍的抗体浓度下，如果抗体使参比抗体的结合降低至少约20％或更高，例如至少约20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、95％或甚至更高，或降低任何前述值之间的百分比，则认为抗体与参比抗体竞争。
在一些实施方式中，与本文所述的抗体5C9相比，抗体与前列腺癌细胞系DU-145产生的sMIC结合的平衡缔合常数KA相等或更高。在一些实施方式中，与本文所述的抗体5C9相比，抗体与前列腺癌细胞系DU-145产生的sMICA结合的平衡缔合常数KA相等或更高。在一些实施方式中，与本文所述的抗体5C9相比，抗体与前列腺癌细胞系DU-145产生的sMICB结合的平衡缔合常数KA相等或更高。
在一些实施方式中，与本文所述的抗体5C9相比，抗体与前列腺癌细胞系DU-145产生的sMIC结合的平衡解离常数KD相等或更低。在一些实施方式中，与本文所述的抗体5C9相比，抗体与前列腺癌细胞系DU-145产生的sMICA结合的平衡解离常数KD相等或更低。在一些实施方式中，与本文所述的抗体5C9相比，抗体与前列腺癌细胞系DU-145产生的sMICB结合的平衡解离常数KD相等或更低。
在一些实施方式中，所述抗体的特征在于sMICA和/或sMICB蛋白或其alpha-3结构域的亲和力(KA＝平衡缔合常数或结合速率常数kon/解离速率常数koff之比)的范围在约104至约1012M-1、约105至约1012M-1、约106至约1012M-1、约107至约1012M-1、约108至约1012M-1、约107至约1011M-1、约108至约1011M-1、约107至约1010M-1或约108至约1010M-1。在一些实施方式中，该结合剂的KA为至少约1x 107M-1或更高、至少约1x 108M-1或更高、至少约1x 109M-1或更高、至少约1x 1010M-1或更高、至少约1x 1011M-1或更高或至少约1x 1012M-1或更高。在一些实施方式中，该抗体具有本文所述抗体5C9的KA。在一些实施方式中，该抗体具有的KA为约1x 108M-1至约1x 109M-1或更高(例如，抗体5C9的亲和力)。在一些实施方式中，根据前列腺癌细胞系DU-145产生的sMICB检测KA。
在一些实施方式中，所述抗体的特征在于sMICA和/或sMICB蛋白或其alpha-3结构域的平衡解离常数(KD＝平衡解离常数或解离速率常数koff/结合速率常数kon之比)的范围在约10-4至约10-12M、约10-5至约10-12M、约10-6至约10-12M、约10-7至约10-12M、约10-8至约10- 12M、约10-7至约10-11M、约10-8至约10-11M、约10-7至约10-10M或约10-8至约10-10M。在一些实施方式中，该结合剂的KA为约1x 10-7M或更低、约1x 10-8M或更低、约1x 10-9M或更低、约1x 10-10M或更低、约1x 10-11M或更低或约1x 10-12M或更低。在一些实施方式中，该抗体具有本文所述抗体5C9的KD。在一些实施方式中，该抗体具有的KD为约1x10-9M至约1x 10-10M 1或更低(抗体5C9)。在一些实施方式中，根据前列腺癌细胞系DU-145产生的sMICB检测KD。
在一些实施方式中，所述抗体的特征在于sMICA和/或sMICB蛋白或其alpha-3结构域的kon结合速率常数的范围在约103至约109M-1s-1或更高、约104至约109M-1s-1或更高、约105至约109M-1s-1或更高、约106至约109M-1s-1或更高、约107至约109M-1s-1或更高、约104至约108M-1s-1或更高、约105至约108M-1s-1或更高。在一些实施方式中，该结合剂的kon结合速率常数为至少约1x 103M-1s-1或更高、至少约1x 104M-1s-1或更高、至少约1x 105M-1s-1或更高、至少约1x 106M-1s-1或更高、至少约1x 107M-1s-1或更高、至少约1x 108M-1s-1或更高或至少约1x109M-1s-1或更高。在一些实施方式中，该抗体具有本文所述抗体5C9的kon结合速率常数特征。在一些实施方式中，根据前列腺癌细胞系DU-145产生的sMICB检测kon。
在一些实施方式中，本公开的抗体的特征在于sMICA和/或sMICB蛋白或其alpha-3结构域的koff解离速率常数的范围在约10-3至约10-10s-1或更低、约10-4至约10-10s-1或更低、约10-5至约10-10s-1或更低、约10-6至约10-10s-1或更低、约10-7至约10-10s-1或更低、约10-5至约10-9s-1或更低、约10-6至约10-9s-1或更低、约10-5至约10-8s-1或更低、约10-6至约10-8s-1或更低。在一些实施方式中，该结合剂的koff解离速率常数为约10-3s-1或更低、约10-4s-1或更低、约10-5s-1或更低、约10-6s-1或更低、约10-7s-1或更低、约10-8s-1或更低、约10-9s-1或更低或约10-10s-1或更低。在一些实施方式中，该抗体具有本文所述抗体5C9的koff解离速率常数特征。在一些实施方式中，根据前列腺癌细胞系DU-145产生的sMICB检测koff。
KA或KD以及kon和koff速率常数可以通过本领域已知的任何方法确定，例如表面等离子共振(SPR)筛选(例如，BIAcoreTM SPR分析装置，如Popov等.,1996,Mol Immunol.33:493-502；和Karlsson等.,1991,J Immunol.Methods 145:229-40所述的，纳入本文作为参考)。在一些实施方式中，KA或KD以及kon和koff速率常数可以通过生物层干涉测量法(BLI)来确定，其基于从两个表面反射的白光的干涉图案(参见，例如Rich和Myszka,2007,AnalBiochem.361:1-6；Fransson等.,2010,J Mol Biol.398(2):214-31)，并且可以商品化购得，例如Octet RED96(ForteBio，门洛帕克，加利福尼亚州，美国)。用于确定亲和力和动力学参数的其它方法包括平衡透析和球蛋白沉淀技术(参见，例如Azimzadeh等.,1990,J MolRecognit.3(3):108-16)。
在一些实施方式中，抗体可以具有增强免疫反应的作用，包括以下一种或多种：上调T细胞、天然杀伤(NK)细胞、天然杀伤T(NKT)细胞、γδT细胞、αβT细胞和/或B细胞的功能。在一些实施方式中，T细胞、天然杀伤(NK)细胞、天然杀伤T(NKT)细胞、γδT细胞、αβT细胞和/或B细胞功能中一种或多种的上调包括能够抑制癌症进展或抑制病毒感染的活性增强和/或赋予该活性，如本文进一步描述的。
在一些实施方式中，具有特定特征的抗体能够减弱接种前列腺癌细胞系DU-145异种移植物，例如异种移植到小鼠中的DU-145，特别是异种移植到Rag2-/-小鼠中的DU-145的动物中的sMICB水平，尤其是根据实施例5中所述的方法。在一些实施方式中，具有特定特征的抗体能够减弱异种移植的前列腺癌细胞系DU-145，例如异种移植到小鼠中的DU-145，特别是异种移植到Rag2-/-小鼠中的DU-145的生长，尤其是根据实施例5中所述的方法。在一些实施方式中，抗体减弱具有异种移植的DU-145细胞的动物中sMICB水平的能力和/或减弱异种移植的DU-145细胞生长的能力与细胞因子IL-12组合。
在一些实施方式中，本公开的抗体具有一种或多种以下特征：结合sMIC蛋白的alpha-3结构域上包含QQWGDVLP(SEQ ID NO:22)的氨基酸序列中的表位，特别是alpha-3结构域中包含氨基酸序列GDVL(SEQ ID NO:23)的表位；特异性结合sMIC，例如sMICA和/或sMICB，但不特异性结合与膜结合的MIC，例如MICA和/或MICB，特别是存在于细胞表面的MIC蛋白的胞外域；与抗体5C9相比，与前列腺癌细胞系DU-145产生的sMIC结合的平衡缔合常数KA相等或更大；与抗体5C9相比，与前列腺癌细胞系DU-145产生的sMIC结合的平衡解离常数KD相等或更低；能够降低接种前列腺癌细胞系DU-145异种移植物的小鼠中sMICB的水平；能够减弱异种移植的前列腺癌细胞系DU-145，例如异种移植到小鼠中的DU-145，特别是异种移植到Rag2-/-小鼠中的DU-145的生长；和能够增加IFN-γ的表达，特别是当与IL-12联用时。
在一些实施方式中，本公开的抗体具有以下特征：结合sMIC蛋白的alpha-3结构域上包含QQWGDVLP(SEQ ID NO:22)的氨基酸序列中的表位，特别是alpha-3结构域中包含氨基酸序列GDVL的表位；但不特异性结合与膜结合的MIC，例如MICA和/或MICB，特别是存在于细胞表面的MIC蛋白的胞外域中的相同表位；和涉及前列腺癌细胞系DU-145的至少一种以上特征，例如结合sMICB、降低sMICB水平、和/或减弱异种移植的DU-145的生长。
在本文的一些实施方式中，具有相关特性的抗体可以是多克隆、单克隆、非人、嵌合型、人源化、全人抗体、工程改造的抗体或抗体的片段。所述抗体可以是单特异性(即，结合单一表位-单价)或多特异性(即，结合多于一种表位-多价)，包括双特异性和三特异性抗体(参见，例如Sharkey等.,2010,Cancer Biother Radiopharm.25(1):1-12)；美国专利公布20080069820；通过引用纳入本文)。在一些实施方式中，所述抗体可以是单链抗体或二抗体，其是小的二价和双特异性抗体片段。在一些实施方式中，所述抗体可包括非人抗体，例如从山羊、马、牛、鸡、骆驼、羊驼、家兔、大鼠或小鼠制备，或者可以是基于非人抗体的嵌合型或人源化抗体。在一些实施方式中，所述抗体可包括抗体恒定区的一部分或全部。在一些实施方式中，所述抗体包括对应于选自以下的同种型的恒定区：IgA(例如，IgA1或IgA2)；IgD、IgE、IgG(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)和IgM。
在一些实施方式中，所述抗体包含本文和实施例中所述的抗体5C9的抗原结合特征。表位作图研究鉴定到与5C9抗体结合的表位至少在sMICA和/或sMICB的alpha-3结构域中的氨基酸序列QQWGDVLP(SEQ ID NO:22)，特别是氨基酸序列GDVL(SEQ ID NO:23)中。5C9抗体不结合细胞上表达的与膜结合的MICA/MICB(参见，例如图9)。因此，在一些实施方式中，所述抗体在轻链可变区氨基酸序列中包含CDR L1、CDR L2和CDR L3中的一个或多个，所述轻链可变区氨基酸序列包含SEQ ID NO:24，更尤其是SEQ ID NO:25：
MTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHSNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDLGVYYCFQGSHVPFTFGSGTKLEIK(SEQ ID NO:25)；
在一些实施方式中，所述抗体在重链可变区氨基酸序列中包含CDR H1、CDR H2和CDR H3中的一个或多个，所述重链可变区氨基酸序列包含SEQ ID NO:28，更尤其是SEQ IDNO:29：
QVQLQQSGAELVRPGTSVKVSCKASGYAFTNYLIEWVKQRPGQGLEWIGLIYPGSGGTNYNEKFKGKATLTADKSSSTAYMQLSSLTSDDSAVYFCARIYYGNRDYGMDYWGQGTSVTVSSAK(SEQ ID NO:29)。
在一些实施方式中，所述抗体在轻链可变区氨基酸序列中包含CDR L1、CDR L2和CDR L3，在重链可变区氨基酸序列中包含CDR H1、CDR H2和CDR H3，所述轻链可变区氨基酸序列包含SEQ ID NO:25，所述重链可变区氨基酸序列包含SEQ ID NO:29。
如本领域所理解的和本文所述的，根据具体情况和测定CDR区的本领域已知的各种方法，描绘抗体的CDR区的氨基酸位置/边界可以有所不同。可变区内的一些位置可以视作混合CDR，其原因在于这些位置在一组标准下可以在CDR区内，而在不同组标准下会被视作在CDR区外。在一些实施方式中，可以利用本文所述的Kabat、Chothia或AbM方案，特别是基于Kabat编号系统对上述可变轻链和可变重链中的CDR划界。基于Kabat标准的示范性CDR示于表1。
表1
虽然已经使用Kabat标准限定了上述CDR序列，但应理解CDR可以基于Chothia、AbM和其它方法，包括“接触”方法，IMGT方法(Lefranc等.,2003,Dev Comp Immunol.27:55-77)和计算程序，例如Paratome(Kunik等.,2012,Nucl Acids Res.W521-4；www.ofranlab.org/paratome/)。
在一些实施方式中，所述抗体包含氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示的轻链可变区中的至少1个、2个或所有3个CDR。在一些实施方式中，所述抗体包含氨基酸序列如SEQ IDNO:29所示的重链可变区中的至少1个、2个或所有3个CDR。在一些实施方式中，所述抗体包含氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示的轻链可变区中的至少1个、2个或所有3个CDR，和氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示的重链可变区中的至少1个、2个或所有3个CDR。
在一些实施方式中，所述抗体包含至少1个、2个或3个选自以下的CDR：包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)的CDR L1；包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:41)的CDR L2；包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ ID NO:42)的CDR L3。在一些实施方式中，所述抗体包含至少1个、2个或3个选自以下的CDR：包含氨基酸序列NYLIE(SEQ ID NO:43)的CDR H1；包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ ID NO:44)的CDR H2；包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ ID NO:45)的CDR H3。
在一些实施方式中，所述抗体包含至少1个、2个、3个、4个、5个或所有6个选自以下的CDR：包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)的CDR L1；包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:41)的CDR L2；包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ ID NO:42)的CDR L3；包含氨基酸序列NYLIE(SEQ ID NO:43)的CDR H1；包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQID NO:44)的CDR H2；包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ ID NO:45)的CDR H3。
在一些实施方式中，对于含有一个或多个限定的CDR的抗体的任何实施方式，CDR序列可以具有一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入，只要所述抗体保留相关的功能特性，例如特异性结合sMICA和/或sMICB的alpha-3结构域中特定的表位，但不结合与细胞膜结合的MICA和/或MICB上的表位。在一些实施方式中，CDR序列具有至少1个、2个、3个、4个、5个或更多个氨基酸取代、缺失和/或插入。在一些实施方式中，如果CDR具有氨基酸取代，所述取代包含保守性取代。
在一些实施方式中，所述抗体包含与SEQ ID NO:24，更尤其是SEQ ID NO:25所示氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列相同性的轻链可变区VL。
在一些实施方式中，所述抗体包含与SEQ ID NO:28，更尤其是SEQ ID NO:29所示氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列相同性的重链可变区VH。
在一些实施方式中，所述抗体包含与SEQ ID NO:24，更尤其是SEQ ID NO:25所示氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列相同性的轻链可变区VL，和与SEQ ID NO:28，更尤其是SEQ ID NO:29所示氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列相同性的重链可变区VH。
在一些实施方式中，所述抗体包含含有SEQ ID NO:24，更尤其是SEQ ID NO:25所示氨基酸序列的轻链可变区VL，和含有SEQ ID NO:28，更尤其是SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的重链可变区VH。
在一些实施方式中，与SEQ ID NO:24，更尤其是SEQ ID NO:25所示VL参比序列相比，与所述轻链可变区具有所限定氨基酸序列相同性水平的抗体具有一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入。在一些实施方式中，与轻链可变区参比序列相比，所述抗体包含1、2、3、4、5或更多个氨基酸取代、缺失和/或插入。在一些实施方式中，就氨基酸取代而言，所述取代包括保守性氨基酸取代。具体地说，在一些实施方式中，所述保守性取代存在于轻链可变区参比序列的框架区上(非-CDR区：FRL1、FRL2、FRL3和FRL4)。
在一些实施方式中，与SEQ ID NO:28，更尤其是SEQ ID NO:29所示VH参比序列相比，与所述重链可变区具有所限定氨基酸序列相同性水平的抗体具有一个或多个氨基酸取代、缺失和/或插入。在一些实施方式中，与重链可变区参比序列相比，所述抗体包含1、2、3、4、5或更多个氨基酸取代、缺失和/或插入。在一些实施方式中，就氨基酸取代而言，所述取代包括保守性氨基酸取代。具体地说，在一些实施方式中，所述保守性取代存在于重链可变区参比序列的框架区上(非-CDR区：FRH1、FRH2、FRH3和FRH4)。
在一些实施方式中，具有任何所述抗原结合域的抗体可包含任何合适的框架可变区序列，只要保留所述抗原结合域结合sMICA和/或sMICB，或其alpha-3结构域的功能特性。在一些实施方式中，所述框架序列是啮齿类可变轻链和重链框架序列的那些，特别是小鼠框架序列。在一些实施方式中，所述抗体的框架序列是人重链共有框架序列的那些。VH共有框架序列的例子包括：人VH亚组I共有框架(SEQ ID NO:32)；人VH亚组II共有框架(SEQ IDNO:33)；人VH亚组III共有框架(SEQ ID NO:34)；和人VH亚组VII共有框架(SEQ ID NO:35)(图8)。在一些实施方式中，所述抗体的框架序列包含人κ1轻链共有框架序列。VL共有框架序列的例子包括：人VL kappa亚组I共有框架(SEQ ID NO:36)；人VL kappa亚组II共有框架(SEQ ID NO:37)；人VL kappa亚组III共有框架(SEQ ID NO:38)；和人VL kappa亚组IV共有框架(SEQ ID NO:39)(图8)。
在一些实施方式中，具有任何所述抗原结合域的抗体可以具有任何来源的轻链和/或重链的恒定区。所述恒定区可以是啮齿类、灵长类或其它哺乳动物的。因此，在一些实施方式中，具有任何以上所述抗原结合域的抗体可以具有人恒定区，例如人轻链恒定区CL和/或人重链恒定区。例如，SEQ ID NO:24，更尤其是SEQ ID NO:25所示的VL氨基酸序列可以具有人轻链恒定区，SEQ ID NO:28，更尤其是SEQ ID NO:29所示的VH氨基酸序列可以具有人重链恒定区。在一些实施方式中，人轻链恒定区CL包含人kappa或人lambda恒定区。在一些实施方式中，人重链恒定区包含以下至少一个或全部：人CH1、人绞链区、人CH2和人CH3结构域。在一些实施方式中，重链恒定区包含Fc部分，其中所述Fc部分是人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM同种型。
在一些实施方式中，所述抗体包含选自以下的至少1个、2个或3个CDR：CDR L1，包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)；CDR L2，包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQID NO:41)；CDR L3，包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ ID NO:42)；和人轻链恒定区，特别是人kappa或lambda轻链的人轻链恒定区。
在一些实施方式中，所述抗体包含选自以下的至少1个、2个或3个CDR：CDR H1，包含氨基酸序列NYLIE(SEQ ID NO:43)；CDR H2，包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ IDNO:44)；CDR H3，包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ ID NO:45)；和人重链恒定区，特别是包含以下至少一个或全部的人重链恒定区：人CH1、人绞链区、人CH2和人CH3结构域。在此类实施方式中，所述抗体可以在可变区中包含人框架序列。在一些实施方式中，所述重链恒定区包含Fc部分，其中所述Fc部分是人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM同种型。
在一些实施方式中，所述抗体包含：(i)VL区，具有选自以下的至少1个、2个或3个CDR：CDR L1，包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)；CDR L2，包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:41)；CDR L3，包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ ID NO:42)；和人轻链恒定区，特别是人kappa或lambda轻链的人轻链恒定区；和(ii)VH区，具有选自以下的至少1个、2个或3个CDR：CDR H1，包含氨基酸序列NYLIE(SEQ ID NO:43)；CDR H2，包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ ID NO:44)；CDR H3，包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ ID NO:45)；和人重链恒定区，特别是包含以下至少一个或全部的人重链恒定区：人CH1、人绞链区、人CH2和人CH3结构域。在一些实施方式中，所述重链恒定区包含Fc部分，其中所述Fc部分是人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM同种型。在此类实施方式中，所述抗体可以在可变区中包含人框架序列。
在一些实施方式中，所述抗体包含含有SEQ ID NO:24，更尤其是SEQ ID NO:25所示氨基酸序列的轻链可变区VL，和人轻链恒定(CL)区，特别是人kappa或lambda恒定区；含有SEQ ID NO:28，更尤其是SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的重链可变区VH，和人重链恒定区，特别是包含人CH1、人绞链区、人CH2和人CH3结构域的人重链恒定区。在一些实施方式中，所示重链恒定区包含Fc部分，其中所述Fc部分是人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM同种型。
在一些实施方式中，所述抗体包含3个或更多个抗原结合位点的多聚抗体，例如IgM同种型或合成产生的多聚抗体。IgM抗体通常具有4、5或6个二价结合单元，即，两个重链和两个轻链组装成四聚体、五聚体和/或六聚体。IgM抗体可以具有或不具有J链。表达不具有J链的IgM主要形成六聚体，而表达具有J链的IgM主要形成五聚体。多聚抗体会因较高数量的抗原结合位点而促进与sMICA和/或sMICB的有效结合。在一些实施方式中，IgM抗体可以通过以下方式获得：从经免疫动物分离IgM抗体，分离产生多克隆抗体的表达IgM同种型的细胞系(例如，杂交瘤细胞系等)，或用编码含或不含J链的IgM抗体或IgM可变重链和可变轻链的核酸转染/转化合适细胞系(例如，CHO、COS、3T3、PC12、BHK、Vero、C6神经胶质瘤和HeLa)(参见，例如Azuma等.,2007,Clin Cancer Res.13:2745-50；Mader等.,2013,Advances in Biosci Biotech.4:38-43；美国专利号7,709,615)。在一些实施方式中，可以通过在合适的细胞系中表达将原始分离的IgG抗体类型转换成IgM同种型。例如，Kunert等(2004,AIDS Res Hum Retroviruses,20:755-62)和Wolbank等(2003,J Virol.77:4095-103)描述了将IgG单克隆抗体转换成IgM同种型。在一些实施方式中，可以利用作为多聚抗体产生的单链抗体或抗体片段产生多聚抗体(参见，例如Power等.,2003,Methods MolBiol.207:335-50；Gail等.,1999,FEBS Lett.453(1-2):164-8)。可以通过本领域已知的技术，例如凝胶过滤层析、离子交换层析(例如，羟基磷灰石)和亲和力层析(参见，例如Valasek等.,2011,BioProcess Int’l.9(11):28-37；Gagnon等.,2008,BioPharm Int’l.S26-S36)纯化IgM或单链多聚抗体。在一些实施方式中，所述多聚抗体可包含50％或更高的六聚体、60％或更高的五聚体、或特别是80％或更高的五聚体或六聚体IgM分子。在一些实施方式中，IgM或多聚抗体包含上述抗体结合域，包括抗体5C9的CDR或可变区的各种组合。
在一些实施方式中，所述抗体可以是本公开的抗体的片段(包括全长抗体的诸部分)，并且包括抗原结合或可变区。示范性抗体片段包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段。用木瓜蛋白酶水解消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，Fab’片段，各自具有一个抗原结合位点。用胃蛋白酶所蛋白水解消化产生具有能交叉连接抗原的两个抗原结合片段的F(ab’)2片段，和残留的pFc’片段。其它类型的片段可以包括从抗体片段形成的二抗体、线性抗体、单链抗体和多特异性抗体。抗体片段的功能在于它们保留所需的结合特性，例如特异性结合sMICA和/或sMICB的alpha-3结构域中指定的表位，但不结合与细胞膜结合的MICA和/或MICB的胞外域。
在一些实施方式中，可以用各种标记物标记所述抗体，包括报告分子和可检测标记，例如荧光团、生物发光部分、发光部分、酶、放射性标记和辅基。示例性酶包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶和乙酰胆碱酯酶等。示例性的辅基包括链霉抗生物素蛋白/生物素和洋地黄毒苷，等等。示例性荧光团包括荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯、德克萨斯红和藻红蛋白，等等。示例性发光标记物包括鲁米诺(luminal)。示例性生物发光标记物包括荧光素酶、荧光素和水母发光蛋白。示例性放射性标记包括125I、131I、35S、211At、90Y、186Re、188Re、14C、225Ac、212Bi、227Ac、194Os、223Ra、149Tb和3H，等等。
在一些实施方式中，本公开的抗体可以与效应部分缀合。效应部分可以是抗肿瘤剂、药物、毒素、生物活性蛋白、其它抗体或抗体片段、合成或天然存在的聚合物、核酸(例如DNA和RNA)、螯合金属和纳米颗粒，等等。例如，抗体可以与效应部分，例如细胞毒性剂、放射性核素或药物部分缀合以修饰给定的生物反应。效应部分可以是蛋白或多肽，例如但不限于，毒素(例如，相思豆毒素、蓖麻毒素A、假单胞菌外毒素或白喉毒素)、血栓形成剂或抗血管生成剂(例如血管抑制素或内皮抑素)、或生物反应调节剂，如细胞因子或生长因子(如白介素-I(IL-1)、白介素-2(IL-2)、白介素-6(IL-6)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或神经生长因子(NGF))。
在一些实施方式中，效应部分可以是细胞毒素或细胞毒性剂。示例性细胞毒素和细胞毒性剂包括紫杉醇、苯丁酸氮芥、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、依米嗪、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春碱、秋水仙碱、多柔比星、柔红霉素、二羟基蒽二酮、米托蒽醌、光神霉素、放线菌素D、美法仑、嘌呤霉素及它们的类似物或同系物。
将此类效应部分与抗体缀合的技术是本领域熟知的(参见，例如Hellstrom等.,《受控药物递送》(Controlled Drug Delivery),第2版.,Robinson等编.,第623-53页(1987)；Thorpe等.,1982,Immunol Rev.62:119-58；Dubowchik等.,1999,PharmacolTher.83:67-123；和“抗体-药物缀合物和免疫毒素：从临床前开发到治疗应用(Antibody-Drug Conjugates and Immunotoxins:From Pre-Clinical Development to TherapeuticApplications)”，刊于《癌症药物发现和开发》(Cancer Drug Discovery andDevelopment),Gail Lewis Phillips编.,斯普林格出版社(Springer Publisher)(2012))。
在一些实施方式中，本公开的抗体可以与聚乙二醇(PEG)部分连接。在一些实施方式中，抗体是抗体片段。PEG部分可以通过位于抗体或抗体片段中的任何可用的氨基酸侧链或末端氨基酸官能团连接，例如任何游离氨基、亚氨基、巯基、羟基或羧基。此类氨基酸可以天然存在于抗体或抗体片段中，或者可以采用重组DNA方法工程改造到抗体或片段中。可以利用多个位点连接两个或更多个PEG分子。PEG部分可以通过位于抗体或片段中的至少一个半胱氨酸残基的巯基共价连接。如果利用巯基作为连接点，可以使用适当活化的效应部分(例如，巯基选择性衍生物，如马来酰亚胺和半胱氨酸衍生物)(参见，例如《聚(乙二醇)化学和生物学应用》(Poly(ethyleneglycol)Chemistry and Biological Applications),Milton Harris和S.Zalipsky编.,American Chemical Society,华盛顿,哥伦比亚特区(1997)；《用于生物医学科学的生物缀合蛋白偶联技术》(Bioconjugation ProteinCoupling Techniques for the Biomedical Sciences),M.Aslam和A.Dent编.,GrovePublishers,纽约,1998；和Chapman,2002,Adv Drug Deliv Rev.54:531-45)。
另一方面，本文提供了编码本公开的抗体或抗原结合区的多核苷酸。具体地说，多核苷酸是分离的多核苷酸。多核苷酸可以与一种或多种控制基因表达的异源控制序列可操作地连接，以产生能够表达感兴趣多肽的重组多核苷酸。可以将含有编码相关多肽或蛋白的异源多核苷酸的表达构建物引入合适的宿主细胞中以表达相应的多肽。
在一些实施方式中，所述多核苷酸编码与SEQ ID NO:24，更尤其是SEQ ID NO:25所示氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列相同性的轻链可变区VL。在一些实施方式中，所述多核苷酸编码与SEQ IDNO:28，更尤其是SEQ ID NO:29所示氨基酸序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高序列相同性的重链可变区VH。
在一些实施方式中，所述多核苷酸编码选自以下的一个或多个CDR：CDR L1，包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)；CDR L2，包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ IDNO:41)；CDR L3，包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ ID NO:42)；CDR H1，包含氨基酸序列NYLIE(SEQ ID NO:43)；CDR H2，包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ ID NO:44)；和CDR H3，包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ ID NO:45)。
在一些实施方式中，所述多核苷酸编码选自以下的至少1个、2个或3个CDR：CDRL1，包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)；CDR L2，包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:41)；和CDR L3，包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ ID NO:42)。在一些实施方式中，所述多核苷酸编码选自以下的至少1个、2个或3个CDR：CDR H1，包含氨基酸序列NYLIE(SEQ ID NO:43)；CDR H2，包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ ID NO:44)；和CDR H3，包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ ID NO:45)。
在一些实施方式中，所述多核苷酸编码氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示的轻链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示的重链可变区中的至少1个、2个、3个、4个、5个或全部6个CDR。在一些实施方式中，所述多核苷酸编码选自以下的至少1个、2个、3个、4个、5个或全部6个CDR：CDR L1，包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)；CDR L2，包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:41)；CDR L3，包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ ID NO:42)；CDR H1，包含氨基酸序列NYLIE(SEQ ID NO:43)；CDR H2，包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ ID NO:44)；和CDR H3，包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ IDNO:45)。
在一些实施方式中，所述多核苷酸编码包含选自以下的至少1个、2个或3个CDR的多肽：CDR L1，，包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)；CDR L2，包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:41)；CDR L3，包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ ID NO:42)，和人轻链恒定区，特别是人kappa或lambda轻链的人轻链恒定区。在一些实施方式中，所述多核苷酸编码包含选自以下的至少1个、2个或3个CDR的多肽：CDR H1，包含氨基酸序列NYLIE(SEQ IDNO:43)；CDR H2，包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ ID NO:44)；CDR H3，包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ ID NO:45)，和人重链恒定区，特别是包含以下至少一个或全部的人重链恒定区：人CH1、人绞链区、人CH2和人CH3结构域。在一些实施方式中，编码的重链恒定区包含Fc部分，其中所述Fc部分是人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM同种型。在一些实施方式中，编码的抗体可在可变区中包含人框架序列。
在一些实施方式中，所述多核苷酸编码包含以下的多肽：(i)VL区，具有选自以下的至少1个、2个或3个CDR：CDR L1，包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)；CDRL2，包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:41)；CDR L3，包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ IDNO:42)；和人轻链恒定区，特别是人kappa或lambda轻链的人轻链恒定区；和(ii)VH区，具有选自以下的至少1个、2个或3个CDR：CDR H1，包含氨基酸序列NYLIE(SEQ ID NO:43)；CDRH2，包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ ID NO:44)；CDR H3，包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ ID NO:45)；和人重链恒定区，特别是包含以下至少一个或全部的人重链恒定区：人CH1、人绞链区、人CH2和人CH3结构域。在一些实施方式中，编码的重链恒定区包含Fc部分，其中所述Fc部分是人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM同种型。在此类实施方式中，编码的抗体可在可变区中包含人框架序列。
在一些实施方式中，所述多核苷酸编码包含以下的多肽：(i)轻链可变区VL，包含SEQ ID NO:24，更尤其是SEQ ID NO:25所示氨基酸序列，和人轻链恒定(CL)区，特别是人kappa或lambda恒定区；和(ii)重链可变区VH，包含SEQ ID NO:28，更尤其是SEQ ID NO:29所示氨基酸序列，和人重链恒定区，特别是包含人CH1、人绞链区、人CH2和人CH3结构域的人重链恒定区。在一些实施方式中，编码的重链恒定区包含Fc部分，其中所述Fc部分是人IgG1、IgG2、IgG3、IgG4或IgM同种型。
对于本领域技术人员显而易见的是，蛋白序列的知识描述能够编码主题蛋白序列的所有多核苷酸，因为知道对应于各种氨基酸的所有可能的密码子。编码前述多肽的极大数量的核酸可以基于可能的密码子选择，通过选择组合来制备，并且所有这些变化被认为是就本文所述的多肽具体公开的。
在一些实施方式中，所述多核苷酸在核苷酸水平与(a)SEQ ID NO:26所示参比多核苷酸序列具有至少约80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高的序列相同性，并编码SEQ ID NO:24所示多肽。在一些实施方式中，所述多核苷酸在核苷酸水平与(a)SEQ ID NO:30所示参比多核苷酸序列具有至少约80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高的序列相同性，并编码SEQ ID NO:28所示多肽。
在一些实施方式中，所述多核苷酸在核苷酸水平与(a)SEQ ID NO:27所示参比多核苷酸序列具有至少约80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高的序列相同性，并编码SEQ ID NO:25所示多肽。在一些实施方式中，所述多核苷酸在核苷酸水平与(a)SEQ ID NO:31所示参比多核苷酸序列具有至少约80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％或更高的序列相同性，并编码SEQ ID NO:29所示多肽。
在一些实施方式中，可以多种方式操作本文的多核苷酸以表达编码的多肽。在一些实施方式中，多核苷酸与控制序列可操作地连接，所述控制序列包括复制起点、转录启动子、前导序列、转录增强子、核糖体结合或进入位点、终止序列、多腺苷酸化序列和用于表达多核苷酸和/或相应多肽的选择标记序列。如果使用选择标记基因，合适的标记基因包括但不限于药物抗性标记(例如，G418、潮霉素或甲氨蝶呤等)、荧光蛋白(例如，绿色荧光蛋白及其变体、荧光素酶等)和可检测的酶(例如，beta-半乳糖苷酶、葡糖醛酸酶)。取决于表达载体，在将分离的多核苷酸插入载体之前对其进行操作可能是理想的或必需的。采用重组DNA方法修饰多核苷酸和核酸序列的技术是本领域熟知的。指导可见于Sambrook等.,《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning:A Laboratory Manual),第3版.,冷泉港实验室出版社,纽约(2001)；和《最新分子生物学方法》(Current Protocols in Molecular Biology),Ausubel.F.编.,Greene Pub.Associates(1998),更新至2013。
在一些实施方式中，通过将VL编码核酸操作性连接于编码轻链恒定区CL的另一核酸，可以将编码VL区的核酸制成全长轻链基因。在一些实施方式中，轻链恒定区可以是kappa或lamba，特别是人kappa或lamba轻链恒定区。如本文所述，轻链恒定区的序列是本领域已知的(参见,例如Kabat等.,1991,“免疫学感兴趣的蛋白序列(Sequences of Proteinsof Immunological Interest)”,第五版,NIH出版号.91-3242)。
在一些实施方式中，通过将编码VH的核酸操作性连接于编码重链恒定区(例如CH1、铰链、CH2和/或CH3)的另一核酸，可以将编码VH区的核酸制成全长重链基因。轻链恒定区的序列在本领域中是已知的(参见,例如Kabat等.,1991,“免疫学感兴趣的蛋白序列(Sequences of Proteins of Immunological Interest)”,第五版,NIH出版号.91-3242)。在一些实施方式中，编码的恒定区是IgA(例如IgA1或IgA2)；IgD、IgE、IgG(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)或IgM，特别是IgG1或IgG2，更尤其是IgG2。为产生Fab片段重链基因，编码VH区的核酸可以操作性连接于编码重链CH1恒定区的另一核酸。为了产生scFv基因，编码VH和VL的核酸可以通过编码柔性肽接头，例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3的另一核酸操作性连接在一起，如此通过柔性接头连接的VL和VH区表达为连续的单链蛋白。
在一些实施方式中，多核苷酸可以是表达载体的一部分，其中载体和多核苷酸包括一个或多个可操作连接的控制序列，用于控制多核苷酸的表达和/或编码的多肽的表达。因此，在一些实施方式中，表达载体包含本文公开的多核苷酸，其可操作地连接于一个或多个控制序列以便表达编码的多肽，例如包含SEQ ID NO:25和/或SEQ ID NO:29的多肽，或者在氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示的轻链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示的重链可变区中的1个、2个、3个、4个、5个或全部6个CDR。在一些实施方式中，表达载体包含编码至少1个、2个、3个、4个、5个或所有6个选自以下的CDR的多核苷酸：CDR L1，包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)；CDR L2，包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:41)；CDRL3，包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ ID NO:42)；CDR H1，包含氨基酸序列NYLIE(SEQ IDNO:43)；CDR H2，包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ ID NO:44)；和CDR H3，包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ ID NO:45)。重组表达载体可以是任何载体(例如，质粒或病毒)，其可以方便地进行重组DNA过程并可以实现多核苷酸序列的表达。载体的选择通常取决于载体与要导入载体的宿主细胞的相容性。载体可以是线性或闭环质粒。示例性表达载体包括基于T7或T7lac启动子的载体(pACY：Novagen；pET)；基于杆状病毒启动子的载体(例如，pBAC)；基于Ef1-α和HTLV启动子的载体(例如，pFUSE2；英杰公司，加利福尼亚州，美国)；基于CMV增强子和人铁蛋白轻链基因启动子的载体(例如，pFUSE：英杰公司，加利福尼亚州，美国)；基于CMV启动子的载体(例如，pFLAG：西格玛公司，美国)；和基于二氢叶酸还原酶启动子的载体(例如，pEASE：安进公司，美国)。各种载体可用于感兴趣多肽的瞬时或稳定表达。在一些实施方式中，抗体轻链基因和抗体重链基因可以在分开的载体中，或者两个基因可以在同一表达载体中。在一些实施方式中，用于表达抗体的载体可以已经含有恒定链序列。例如，载体可以含有轻链恒定区的序列，从而将可变轻链区以可操作性连接轻链可变区与可变轻链恒定区的方式插入载体中以产生能够表达抗体轻链的表达载体。载体还可以包括信号肽以促进抗体链从宿主细胞中分泌。类似地，载体可以含有重链恒定区的序列，从而将可变重链区以操作性连接重链可变区与重链恒定区的方式插入载体中以产生能够表达抗体重链的表达载体。
在另一方面，编码多肽的多核苷酸操作性连接于一种或多种控制序列，以便在宿主细胞中表达多肽。因此，在一些实施方式中，宿主细胞包含本文所述的多核苷酸或表达载体，例如编码包含SEQ ID NO:25和/或SEQ ID NO:29的多肽的表达载体或多核苷酸，或者在氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示的轻链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示的重链可变区中的1个、2个、3个、4个、5个或全部6个CDR。在一些实施方式中，所述宿主细胞包含编码至少1个、2个、3个、4个、5个或所有6个选自以下的CDR的表达载体或多核苷酸：CDR L1，包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)；CDR L2，包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQID NO:41)；CDR L3，包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ ID NO:42)；CDR H1，包含氨基酸序列NYLIE(SEQ ID NO:43)；CDR H2，包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ ID NO:44)；和CDR H3，包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ ID NO:45)。用于表达多肽的宿主细胞是本领域熟知的，包括但不限于细菌细胞，如大肠杆菌，酵母细胞；昆虫细胞，如果蝇S2和Spodoptera Sf9细胞；动物细胞，如中国仓鼠卵巢(CHO)、非洲绿猴肾(COS)、幼仓鼠肾(BHK)、小鼠骨髓瘤(如NS0和Sp2/0)和人胚肾(HEK)；和植物细胞。上述宿主细胞的适当培养基和生长条件是本领域熟知的。在一些实施方式中，宿主细胞和表达载体用于表达感兴趣的多肽。在一些实施方式中，宿主细胞包含编码本公开的任何抗体的核酸或本文提供的任何多核苷酸。
在一些实施方式中，包含所述表达载体和多核苷酸宿主细胞在合适的培养基中，在合适表达所编码多肽的培养条件下培养，例如包含SEQ ID NO:25和/或SEQ ID NO:29的多肽，或者在氨基酸序列如SEQ ID NO:25所示的轻链可变区和氨基酸序列如SEQ ID NO:29所示的重链可变区中的1个、2个、3个、4个、5个或全部6个CDR。在一些实施方式中，在合适培养基中培养所述宿主细胞以表达具有至少1个、2个、3个、4个、5个或所有6个选自以下的CDR的多肽：CDR L1，包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)；CDR L2，包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:41)；CDR L3，包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ ID NO:42)；CDRH1，包含氨基酸序列NYLIE(SEQ ID NO:43)；CDR H2，包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ ID NO:44)；和CDR H3，包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ ID NO:45)。在一些实施方式中，体外表达系统可与表达载体一起使用以表达多肽。体外表达系统包括基于大肠杆菌、兔网织红细胞、小麦胚芽、昆虫细胞或人细胞的系统。无论是在宿主细胞中还是在体外表达，可以分离或纯化表达的多肽，如本文进一步描述的。
在一些实施方式中，当将编码抗体基因的重组表达载体引入宿主细胞时，通过在合适的条件下培养宿主细胞一段足以允许抗体在宿主细胞中表达或将抗体分泌入培养基的时间来产生抗体。可以通过本领域已知的分离和/或纯化方法从宿主细胞和/或培养基中回收抗体。
在另一个方面，本公开的抗体可以通过技术人员可获得的各种技术制备。多克隆抗体的制备可采用本领域技术人员熟知的常规方法，例如，Green等.,“多克隆抗血清的产生(Production of Polyclonal Antisera)”刊于:《免疫化学方法》(ImmunochemicalProtocols),Manson编.,Humana Press(1992)；Coligan等.,“在家兔、大鼠、小鼠和仓鼠中产生多克隆抗血清(Production of Polyclonal Antisera in Rabbits,Rats Mice andHamsters)”刊于:《最新免疫学方案》(Current Protocols in Immunology),John Wiley&Sons,Inc.(1992),这些文献通过引用纳入本文。
单克隆抗体的制备也可以采用本领域已知的常规技术，例如，Kohler和Milstein,1975,Nature 256(5517):495-7；Coligan等.,同上,部分2.5.1-2.6.7；《最新免疫学方案》(Current Protocols in Immunology),John Wiley&Sons,Inc.(1992)；和《抗体：实验室手册》(Antibodies:A Laboratory Manual),Harlow和Lane编.,冷泉港出版社,纽约(1988)；“单克隆抗体：方法与方案”(Monoclonal Antibodies:Methods and Protocols)，刊于Methods Mol Biol.,Vol.378,Albitar M便.,Humana Press(2007),这些文献通过引用纳入本文。通常用抗原免疫，随后分离产生抗体的B细胞在小鼠中产生单克隆抗体。然后通过与B细胞的同一物种的另一稳定细胞类型融合使B细胞永生化以产生“杂交瘤”。单个B细胞产生一种特异性抗体(即，克隆单特异性抗体)，其由其一级氨基酸序列及其基础基因序列确定。此外，术语“异源杂交瘤”和“异源骨髓瘤”是指分别通过来自两个不同物种的淋巴细胞和骨髓瘤融合而永生化的淋巴细胞细胞系。可以通过各种已建立的技术从杂交瘤培养物中分离和纯化单克隆抗体。此类分离技术包括用A蛋白琼脂糖凝胶作亲和层析、尺寸排阻层析和离子交换层析(参见，例如Coligan等.,同上,部分2.7.1-2.7.12和部分2.9.1-2.9.3；Barnes等.,免疫球蛋白G(IgG)的纯化(Purification of Immunoglobulin G(IgG)),刊于Methods Mol.Biol.,第10卷,第79-104页,Humana Press(1992))。制备抗体的示例性方法描述于实施例中。
通常，可以利用衍生自DNA、肽或蛋白的免疫原来实现多克隆或单克隆抗体的产生。通过免疫动物产生杂交瘤，动物可以是例如小鼠或家兔，或任何能产生合适抗体反应的动物。在一些实施方式中，通过向动物中引入编码抗原的核酸或蛋白抗原，例如MICA/MICB的胞外域或其片段(如alpha-3结构域)或编码MICA/MICB的胞外域或其片段(如alpha-3结构域)的核酸来进行免疫。在一些实施方式中，可以将含有限定表位的肽缀合至载体，例如匙孔血蓝蛋白，其可以引发比单独的肽更强的抗体反应。此类改变和其它免疫方案是技术人员可获得的。在一些实施方式中，在免疫后可以分离具有所定义特征的多克隆抗体，例如通过利用与膜结合的MIC蛋白吸附抗体制品并用MIC，例如sMICA和/或或sMICB的胞外域对未吸收的抗体作亲和纯化。可以筛选杂交瘤产生的单克隆抗体与所定义表位的结合情况，与sMIC和与膜结合的MIC的结合情况，以及本文所述的其它特征。可以进一步选择产生所需抗体的杂交瘤细胞并用于产生单克隆抗体。
也可以通过常规技术制备嵌合抗体，所述嵌合抗体是具有衍生自非人免疫球蛋白，例如大鼠或小鼠抗体的可变序列和通常选自人免疫球蛋白模板的人免疫球蛋白恒定区(在一些实施方式中)的抗体。一种方法是克隆编码可变区的非人基因和编码恒定区的人基因，并采用重组技术将它们组合以形成嵌合基因。在合适的细胞中表达产生编码嵌合蛋白的mRNA。另一种方法是采用同源重组，其中用人恒定区基因转染啮齿动物或小鼠杂交瘤细胞系，所述人恒定区基因侧接与相应的啮齿动物免疫球蛋白恒定区基因同源的序列。在低频率下，转染的DNA将与啮齿动物基因重组，从而导致人免疫球蛋白恒定区基因序列的插入。用于产生嵌合抗体的各种方法描述于，例如Morrison等.,1984,Proc Natl Acad SciUSA.81:6851-5；Morrison等.,1985,Science 229(4719):1202-7；Neuberger等.,1985,Nature 314:268-71；Oi等.,1986,BioTechniques 4:214-21；Gillies等.,1985,Immunol.Methods 125:191-202；美国专利号5,807,715；美国专利号4,816,567；和美国专利号4,816,397；所有这些文献通过引用纳入本文。
在一些实施方式中，本文的抗体可以制备为人源化抗体，其是含有来自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(例如Fv、Fab、Fab’、F(ab’)2或抗体的其它靶标结合亚结构域)。通常，人源化抗体将包含基本上全部或至少一个，通常是两个可变域，其中所有或基本上所有CDR区对应于非人免疫球蛋白的那些和所有或基本上所有框架区的CDR区是人免疫球蛋白序列的那些。人源化抗体还可以包含免疫球蛋白恒定区的至少一部分或全部，通常是人免疫球蛋白共有序列的恒定区。抗体人源化的方法描述于，例如，Riechmann等.,1988,Nature 332:323-7；美国专利号5,225,539；美国专利号5,530,101；美国专利号5,585,089；美国专利号5,565,332；美国专利号美国专利号5,693,761；美国专利号5,693,762；和美国专利号6,180,370；PCT公布WO 91/09967；Padlan,1991,Mol Immunol.28:489-98；Studnicka等.,1994,Prot Eng.7:805-14；和Roguska等.,1994,Proc Natl Acad Sci USA.91:969-73；所有这些文献均通过引用纳入本文。
利用携带部分人免疫系统而非宿主动物系统的转基因或反式染色体动物(trans-chromosomic animal)可以产生完全人抗体。这些转基因和反式染色体动物包括称为HuMAb小鼠和KM小鼠的小鼠。HuMAb小鼠TM(Medarex,Inc.)含有人免疫球蛋白基因最小基因座(miniloci)，其编码未重排的人重链(mu和gamma)和kappa轻链免疫球蛋白序列，以及使内源mu和kappa链基因座失活的靶向突变(参见，例如Lonberg等.,1994,Nature 368(6474):856-9)。因此，小鼠表现出小鼠IgM或kappa的表达降低，并且引入的人重链和轻链转基因对免疫起反应而经历类别转换和体细胞突变以产生高亲和力人IgG kappa单克隆抗体(Lonberg,N.,1994,《实验药学手册》(Handbook of Experimental Pharmacology)113:49-101；Lonberg,N.和Huszar,D.,1995,Intern Rev Immuno1.13:65-93；和Harding,F.和Lonberg,N.,1995,Ann NY Acad Sci.764:536-46)。HuMAn小鼠的制备和使用以及此类小鼠携带的基因组修饰进一步描述于Tuaillon等.,1994,J Immunol.152:2912-20；Taylor等.,1994,International Immunology 6:579-91；Fishwild等.,1996,Nature Biotech.14:845-51；美国专利号5,545,806；美国专利号5,569,825；美国专利号5,625,126；美国专利号5,633,425；美国专利号5,789,650；美国专利号5,877,397；美国专利号5,661,016；美国专利号5,814,318；美国专利号5,874,299；美国专利号5,770,429；美国专利号5,545,807；和PCT公布WO 92103918、WO 93/12227、WO 94/25585、WO 97113852、WO 98/24884；WO 99/45962和WO 01/14424；所有这些文献的内容通过引用全文纳入本文。可以采用称为异种小鼠TM(Abgenix,Inc.)的替代转基因系统，其描述于Green,LL.,1999,J Immunol Methods,231(1-2):11-23；美国专利号5,939,598；美国专利号6,075,181；美国专利号6,114,598；美国专利号6,150,584和美国专利号6,162,963，所有这些文献通过引用纳入本文。
在一些实施方式中，可以使用在转基因和反式染色体上携带人免疫球蛋白序列的小鼠，例如携带人重链转基因和人轻链反式染色体的小鼠制备产生与指定表位结合并具有本文所述特征的人抗体的细胞，如WO 02/043478中所述。在一些实施方式中，可利用表达人免疫球蛋白的家兔系统产生全人抗体(Rader等.,2000,J Biol Chem.275(18):13668-76)。
在其它实施方式中，可以采用噬菌体展示方法来筛选人免疫球蛋白文库以产生全人单克隆抗体。现有技术中已有此类分离人抗体的噬菌体展示方法，并描述于例如《人单克隆抗体：方法与方案》(Human Monoclonal Antibodies:Methods and Protocols),MethodsMol Biol.,Vol.1060,Steinitz,M编.,Humana Press(2013)；Marks和Bradbury,2004,Methods Mol Biol.,248:161-76；Pansri等.,BMC Biotech.,9:6-22；Rader,C.,2012,Methods Mol Biol.,901:53-79；美国专利号5,223,409；美国专利号5,403,484；美国专利号5,571,698；美国专利号5,427,908；美国专利号5,580,717；美国专利号5,969,108；美国专利号6,172,197；美国专利号5,885,793；美国专利号6,521,404；美国专利号6,544,731；美国专利号6,555,313；美国专利号6,582,915和美国专利号6,593,081。
单链抗体是免疫球蛋白的可变重链和可变轻链的融合蛋白，可以通过噬菌体展示方法得当，其中抗原结合域表达为单一多肽并筛选其特异性结合活性。或者，可以通过从细胞，通常是从表达所需抗体的杂交瘤细胞系克隆编码重链和轻链的核酸来制备单链抗体。通常利用一般在10-25个氨基酸的接头肽连接重链和轻链。接头可以富含甘氨酸、丝氨酸和/或苏氨酸以赋予单链抗体柔韧性和可溶性。产生单链抗体的具体方法描述于，例如Loffler等.,2000,Blood95(6):2098-103；Worn和Pluckthun,2001,J Mol Biol.305,989-1010；Pluckthun,刊于《单克隆抗体药理学》(Pharmacology of Monoclonal Antibodies),第113卷,第269-315页,Rosenburg和Moore编.,Springer-Verlag,纽约(1994)；美国专利号5,840,301；美国专利号5,844,093和美国专利号5,892,020；所有这些文献通过引用纳入本文。在一些实施方式中，所述单链抗体包含含有SEQ ID NO:25所示氨基酸序列的可变轻链中的CDR。在一些实施方式中，所述单链抗体包含含有SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的可变轻链中的CDR。在一些实施方式中，所述单链抗体包含至少1个、2个、3个、4个、5个或所有6个选自以下的CDR：CDR L1，包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)；CDR L2，包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:41)；CDR L3，包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ ID NO:42)；CDR H1，包含氨基酸序列NYLIE(SEQ ID NO:43)；CDR H2，包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ ID NO:44)；和CDR H3，包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ IDNO:45)。在一些实施方式中，所述单链抗体包含含有SEQ ID NO:24，尤其是SEQ ID NO:25所示氨基酸序列的可变轻链区和含有SEQ ID NO:28，尤其是SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的可变重链区。
制备抗体片段也是本领域已知的(参见，例如《抗体：实验室手册》(Antibodies:ALaboratory Manual),Harlow和Lane编.,冷泉港实验室,纽约(1988),通过引用纳入本文)。抗体片段可以通过蛋白水解消化抗体或通过在大肠杆菌中表达编码该片段的核酸来制备。可以通过胃蛋白酶或木瓜蛋白酶消化完整抗体来获得抗体片段。例如，可以通过用胃蛋白酶酶促切割抗体来产生抗体片段，以提供称为F(ab’)2的5S片段。可以使用硫醇还原剂和任选的二硫键断裂所致的巯基的封闭基团来进一步裂解该片段，以产生3.5S Fab’单价片段。或者，使用胃蛋白酶的酶促切割直接产生两个单价Fab’片段和Fc片段。在一些实施方式中，可以使用编码抗体片段的多核苷酸，通过重组技术制备抗体片段。
在用于制备本公开内容的抗体的实施方式中，可将标准技术用于重组DNA、寡核苷酸合成、组织培养和转染(例如，电穿孔、脂质转染等)。酶促反应和纯化技术可以根据制造商的说明书进行，或者如本领域通常实施的或如本文所述进行。前述技术和程序通常可以根据本领域技术人员可获得的常规方法进行，例如本说明书通篇引用和讨论的各种一般的和具体的参考文献中描述的方法(参见，例如Sambrook和Russell,《分子克隆：实验室手册》(Molecular Cloning:A Laboratory Manual),第3版.,第1-3卷,冷泉港实验室出版社,冷泉港,纽约(2001)；《抗体：实验室手册》(Antibodies:A Laboratory Manual),Greenfield,E.A编.,冷泉港实验室出版社,纽约(2012)；和《最新免疫学方案》(Current Protocols inImmunology),Coligan等编.,Wiley(1999),更新至2013)。
适于筛选所需抗体的条件可以使用常规筛选方法中的条件，例如，将细胞或多肽与抗体在水性缓冲溶液中孵育，然后进行几次洗涤。在一些实施方式中，可以将含有特定表位的肽或表达MIC蛋白的细胞固定在固体表面上，例如膜或板，然后使其与候选抗体接触。可以用含有非特异性竞争剂(例如合适的封闭剂)的溶液洗去非特异性结合的抗体。示例性接触条件可包括在冰上或在4℃下孵育30分钟至4小时。或者，可以在室温或37℃下进行接触步骤，并且在某些情况下可能是优选的。此外，可以使用适当的试剂，如封闭剂，例如，牛血清白蛋白、非离子型洗涤剂(例如，NP40、Triton X100、Tween20等)或其它合适的封闭剂(例如，脱脂牛奶)来减少非特异性结合。应当理解，取决于筛选方法的目的，技术人员可以改变和调整接触条件。
在一些实施方式中，候选抗体与含有确定表位的肽的特异性结合可以通过表面等离子体共振(例如，Biacore系统)或生物层干涉测定法(BLI)来测定。对于表面等离子共振，可以将抗体固定在传感器芯片上，并将芯片暴露于含有确定表位的肽。抗体与肽的结合特性可以通过肽与抗体相互作用后局部折射率的变化而直接测量。或者，肽可以与传感器芯片结合，并将芯片暴露于候选抗体(参见，例如Rich,R.L.和Myszka,D.G.,2007,AnalBiochem.361(1):1-6；和Pope等.,2009,J Immunol Meth.341(1-2):86-96；通过引用纳入本文)。对于BLI，肽抗原(或抗体)与生物传感器(例如，光纤探针)结合，并且生物传感器与含有抗体(或肽抗原)的溶液接触。用白光照射生物传感器尖端，并测量干涉图案的变化以检测结合情况。在一些实施方案中，除了表面等离子体共振或BLI，还可以采用一种或多种其它已知方法，例如ELISA、FACS或Western印迹，以确定抗体的抗原位点特异性和合适的抗体结合潜力。
在一些实施方式中，分离的抗体可以进一步纯化，通过以下一种或多种方式检测：(1)采用Lowry法测定的蛋白重量；(2)通过使用氨基酸测序仪，纯化至足以获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度；(3)在还原或非还原条件下通过SDS-PAGE或CE-SDS均匀化。可以使用各种技术来纯化抗体，包括例如但不限于色谱法(例如亲和色谱法，例如用A蛋白、肽表位等；离子交换色谱法，例如阳离子和/或阴离子交换介质；分子筛色谱；疏水色谱；等)、高效液相色谱、差异溶解度等(参见，例如Fisher,“实验室技术”(LaboratoryTechniques),刊于《生物化学和分子生物学》(Biochemistry And Molecular Biology),Work和Burdon编.,Elsevier(1980)；《抗体：实验室手册》,Greenfield,E.A编.,冷泉港实验室出版社，纽约(2012))。通过前述方法测定到，纯化抗体可以是85wt％或更高、90wt％或更高、95wt％或更高、或至少99wt％。
6.3药物组合物
在一些实施方式中，本公开的抗体可以制备成药物组合物，用于治疗与MIC蛋白水平升高相关的疾病或病症，如下文进一步描述的。因此，在一些实施方式中，提供了包含分离的抗体的药物组合物，所述分离的抗体包括两种或更多种抗体的组合，其特异性结合sMIC蛋白，例如sMICA和/或sMICB蛋白的特定表位；和与抗体制剂相容的药学上可接受的载体、赋形剂或运载体。在一些实施方式中，可以制备药物抗体组合物以便通过多种途径，例如静脉内、肌肉内、腹膜内、透皮、皮下、鼻内、鞘内、局部或口服给药。在一些实施方式中，通过将具有所需纯度的抗体与本领域通常使用的任选的药学上可接受的赋形剂、运载体或稳定剂混合，可以制备抗体的治疗制剂，以便作为冻干制剂或作为水溶液储存，所有这些赋形剂、运载体或稳定剂在本文中均称为“载体”，包括例如缓冲剂、稳定剂、防腐剂、等渗剂、非离子洗涤剂、抗氧化剂和其它各种添加剂(参见，例如，《雷明顿：药学科学和实践》(Remington:The Science and Practice of Pharmacy),第19版.,第1和2卷,药学出版社(2012)；和《制备生物药物的制剂和工艺开发》(Formulation and Process DevelopmentStrategies for Manufacturing Biopharmaceuticals),Jameel,F.和Hershenson,S编.Wiley(2010)；通过引用纳入本文)。此类添加剂在所用剂量和浓度下对接受者无毒。
在一些实施方式中，抗体组合物包含缓冲剂。缓冲剂有助于将pH维持在所需范围内，例如接近生理条件的pH范围。适用于本公开抗体的缓冲剂包括有机酸和无机酸及其盐，例如柠檬酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、草酸盐、乳酸盐、磷酸盐、组氨酸、Tris和乙酸盐缓冲剂。
在一些实施方式中，运载体包含减缓微生物生长的防腐剂。适用于抗体制剂的防腐剂包括苯酚、苯甲醇、间甲酚、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、十八烷基二甲基苄基氯化铵、苯扎氯铵(例如氯化物、溴化物和碘化物)、氯化六甲基铵和对羟基苯甲酸烷基酯，如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯、儿茶酚、间苯二酚、环己醇和3-戊醇。在一些实施方式中，防腐剂的存在量可以是0.02％-1％(w/v)。
在一些实施方式中，载体包含等渗剂，有时称为“稳定剂”以确保液体组合物的等渗性，其实例包括多元糖醇，例如三元或更高级糖醇，如甘油，赤藓糖醇，阿拉伯糖醇，木糖醇，山梨糖醇和甘露醇。稳定剂是指广泛类别的赋形剂，其功能范围可以从填充剂到溶解治疗剂或有助于防止变性或粘附于容器壁的添加剂。示例性稳定剂可以是以上列举的多元糖醇；氨基酸如精氨酸、赖氨酸、甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、丙氨酸、鸟氨酸、L-亮氨酸、2-苯丙氨酸、谷氨酸、苏氨酸等；有机糖或糖醇，例如乳糖、海藻糖、水苏糖、甘露醇、山梨糖醇、木糖醇、核糖醇、肌醇、半乳糖醇、甘油等，包括诸如肌醇的环醇；聚乙二醇；氨基酸聚合物；含硫还原剂，如尿素、谷胱甘肽、硫辛酸、硫代乙醇酸钠、硫代甘油、一硫代甘油和硫代硫酸钠；低分子量多肽(例如，10个残基或更少的肽)；载体蛋白，如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；单糖，如木糖、甘露糖、果糖、葡萄糖；二糖，如乳糖、麦芽糖、蔗糖和三糖，如棉子糖；和多糖，如葡聚糖。在一些实施方式中，稳定剂的存在范围可以是每重量份活性蛋白0.1至10,000重量％。
可加入非离子表面活性剂或洗涤剂(有时称为“润湿剂”)以帮助溶解抗体并保护其免受搅动诱导的聚集，这也使得制剂暴露于表面剪切应力而不会引起蛋白变性。合适的非离子表面活性剂包括聚山梨醇酯(20、80等)、泊洛沙姆(184、188等)、pluronic多元醇和聚氧乙烯脱水山梨糖醇单醚(-20、-80等)。在一些实施方式中，非离子表面活性剂的存在范围可以是约0.05mg/mL至约1.0mg/mL，例如约0.07mg/mL至约0.2mg/mL。
额外的赋形剂包括填充剂(例如淀粉)、螯合剂(例如EDTA)、抗氧化剂(例如抗坏血酸、甲硫氨酸、维生素E)和共溶剂。
无菌可注射溶液可以通过将足够量的抗体在适当的溶剂与上面列举的成分中的一种或组合(根据需要)掺混，然后灭菌，例如通过微滤来制备。通常，可以通过将抗体掺入无菌载体中来制备分散体，所述无菌载体含有基础分散介质和根据需要的其它成分，这些成分来自上面列举的和本领域已知的那些。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，优选的制备方法包括真空干燥和冷冻干燥(冻干)，其产生抗体粉末加上任何另外的所需载体。
在一些实施方式中，抗体可以用可以保护抗体免于快速释放的载体制备，例如控释制剂，包括植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚(原酸酯)和聚乳酸。制备此类制剂的方法通常是本领域技术人员已知的(参见，例如，《缓释和控释药物递送系统》(Sustained andControlled Release Drug Delivery Systems),J.R.Robinson编.,Marcel Dekker,Inc.,纽约(1978))。
混合、增溶、稳定、浓缩和冻干以制备药物组合物的各种方法使用适用于抗体治疗剂的标准常规技术(参见，例如Wang等.,2007,J Pharm Sci.96(1):1-26；《雷明顿：药学科学和实践》,第19版.,第1和2卷,药学出版社(2012)；和《制备生物药物的制剂和工艺开发》,Jameel和Hershenson编.,Wiley(2010))。
在一些实施方式中，可以将药物组合物制备成含有预定量的本公开抗体的单位剂型。在一些实施方式中，单位剂型包含但不限于约5mg至约1g、约10mg至约1g、50mg至约1g、100mg至约1g、200mg至约1g、或约500mg至约1g。在一些实施方式中，单位剂型含有约5mg至约900mg、约10mg至约800mg、约50mg至约700mg、约100mg至约600mg或约200mg至约500mg。在一些实施方式中，单位剂量可以基于待治疗的病症和/或给药途径来确定。在一些实施方式中，作为示例而非限制，可以将单位剂型制备为单次使用注射器、自动注射笔或冻干小瓶(例如，用药学上可接受的溶液重建)。每个单位剂量可以单独包装并作为包含一个或多个单位剂量的试剂盒提供，例如两个单位剂量、三个单位剂量、四个单位剂量或五个单位剂量或更多。
6.4抗体的应用
在另一方面，本公开的抗体可以应用于各种诊断和治疗领域。在诊断领域，在一些实施方式中，抗体可用于检测生物样品中sMIC蛋白的存在和/或水平，例如从怀疑或诊断具有以高MIC蛋白水平为特征的疾病，如上皮癌、血液系统恶性肿瘤和自身免疫疾病的患者获得的那些样品。在一些实施方式中，检测sMIC的方法包括使生物样品与本公开的抗体接触；确定或测量抗体的特异性结合以确定样品中sMIC的水平。在一些实施方式中，所述抗体用于检测生物样品中sMICA水平的方法。在一些实施方式中，所述抗体用于检测生物样品中sMICB水平的方法中。诊断方法可以单独使用，或与用作特定疾病或病症的诊断方法的其它方法和标记联用。
生物样品可以是取自对象的用于分析的任何合适样品，包括细胞样品、组织样品和液体样品。在一些实施方式中，液体样品包括血液、血浆、血清、尿液、脑脊液、淋巴液、滑液、胆汁、精液、唾液、泪液和水性或玻璃体液。在一些实施方式中，组织样品包括器官、实体瘤、保存组织、全细胞和细胞裂解物的活检样品。生物样品可以通过适用于特定样品的本领域已知方法制备，包括先通过机械方法破坏、暴露于冷冻条件下(例如液氮)或暴露于化学品(例如洗涤剂、酸或碱)，再与抗体反应。用于检测sMIC蛋白的存在和/或水平的测定法包括本领域中通常采用的那些，包括ELISA、免疫组织化学、竞争性和夹心测定法以及空间抑制测定法，等等。
检测抗体的特异性结合(例如，抗体-sMIC蛋白复合物)可依赖于使用含有报告分子或可检测标记的抗体，例如荧光标记、可检测酶或可检测的缀合系统。在一些实施方式中，抗体的特异性结合可依赖于二级检测剂，例如与一抗特异性结合的另一抗体。可以用报道分子、可检测标记或可检测的缀合物标记二抗。
在一些实施方式中，本文的诊断方法可用于检测怀疑患有以MIC+水平升高为特征的疾病或病症的对象的生物样品中的sMICA和/或sMICB水平，其可提供疾病存在和/或疾病进展的指示。
在一些实施方式中，诊断方法可用于检测已经诊断患有以MIC+水平升高为特征的疾病和/或病症的对象的生物样品中的sMICA和/或sMICB水平，其可以确认疾病的存在和/或疾病的进展。
在一些实施方式中，诊断方法可用于检测已经历治疗的对象中的sMICA和/或sMICB水平，以便基于sMICA和/或sMICB水平的变化确定治疗剂和/或治疗方案的功效，和/或疾病复发的可能性。
如上所述，各种疾病与sMICA和/或sMICB的水平升高或异常相关。虽然MICA和MICB及其与携带NKG2D的免疫效应细胞的相互作用参与了应激或患病细胞的免疫监视，最终以MIC+细胞死亡告终，但可溶性MIC蛋白的存在下调了NKG2D受体水平，从而使得MIC+肿瘤在面临通常有活性的免疫系统时能够存活。例如，已经在癌症患者的血液中鉴定出sMICA和/或sMICB水平升高，但在“正常”个体中未发现，并且这与癌症分期的严重性相关(Salih等.,2002,J Immunol.169:4098-102；Doubrovina等.,2003,J Immunol.171:6891-9；Wu等.,2004,J Clin Invest.114:560-8；和Holdenreider,2006,Intl J Cancer 118:684-7)。
在一些实施方式中，当sMICA和/或sMICB从细胞脱落或释放时，本文的抗体选择性地且特异性地结合于它们，从而为中和sMICA和/sMICB的有害作用提供了基础。使用选择性结合MIC蛋白的脱落形式的抗体的优点是抗体不太可能与细胞表面上表达的MIC蛋白结合，从而降低了免疫效应细胞的不适当激活所致的病理性自身免疫反应的可能性。此外，抗体与细胞膜上存在的MICA和/或MICB不存在显著结合可以保留免疫介导的对表达MIC的肿瘤细胞的破坏作用，例如通过NK细胞介导的细胞毒性反应。因此，在一些实施方式中，本公开的抗体可以用于降低需要这种治疗(即，减少)的对象中sMICA和/或sMICB水平的方法，其中所述方法包括给予有此需要的对象有效量的本公开的抗体以降低对象中sMICA和/或sMICB的水平。
在一些实施方式中，待治疗的对象的MIC蛋白，例如MICA和/或MICB水平升高。在各种实施方式中，MIC蛋白水平升高与疾病或病症的存在相关。水平升高可以存在于从对象获得的细胞、组织或生物样品中。在一些实施方式中，待治疗的对象的sMICA和/或sMICB水平升高。当提及作为疾病或病症指标的分子(例如，MICA和/或MICB)的水平时，术语“升高的”或其语法等同物，包括“更高”或“更大”等，是指与不具有该疾病的群体(例如，健康对象)中的分子水平相比，具有疾病或病症的群体中该分子的量更高是具有统计学显著性的。在一些实施方式中，在疾病群体或来自患有疾病或病症的对象的生物样品中，MICA和/或MICB(例如sMICA和/或sMICB)的水平比不具有该疾病或病症的对照群体或者从没有疾病或病症的对象获得的对照生物样品中相同分子的水平至少高10％、至少高25％、至少高50％、至少高75％和/或至少高90％。
已经鉴定到多种疾病表现出MICA和/或MICB水平升高。在各种实施方式中，此类疾病包括肿瘤、癌症和血液恶性肿瘤。在一些实施方式中，待治疗的对象患有MIC+肿瘤或癌症，或MIC+血液恶性肿瘤。因此，在一些实施方式中，本公开的抗体可用于治疗患有MIC+肿瘤或癌症的对象，该方法包括给予患有MIC+肿瘤或癌症的对象治疗有效量的本文所述的抗体。在一些实施方式中，MIC+肿瘤或癌症是MICA+和/或MICB+肿瘤或癌症。在一些实施方式中，待治疗的MIC+肿瘤或癌症可选自：脑癌、胆道癌、骨癌、肝癌、胃癌、睾丸癌、宫颈癌、卵巢癌、阴道癌和外阴癌、子宫内膜癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、恶性间皮瘤癌、口腔癌、头颈癌、咽喉癌、胸腺癌、胃肠道间质瘤(GIST)癌、鼻咽癌、食道癌、结肠癌、肛门癌、乳腺癌、肺癌(如非小细胞肺癌、小细胞肺癌、支气管癌等)、前列腺癌、阴茎癌、膀胱癌、胰腺癌、神经母细胞瘤、胶质瘤、肝细胞癌和肾癌。在一些实施方式中，本公开的抗体用于治疗各种类型的上皮肿瘤或癌症，包括但不限于肺癌、乳腺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、肝癌、卵巢癌、肾细胞癌、前列腺癌和黑素瘤。在一些实施方式中，选择用于治疗的癌症是前列腺癌。
在一些实施方式中，抗体用于治疗MIC+血液恶性肿瘤的方法中。因此，在一些实施方式中，本公开的抗体可用于治疗患有MIC+血液恶性肿瘤的对象，该方法包括给予患有MIC+血液恶性肿瘤的对象治疗有效量的本文所述的抗体。在一些实施方式中，MIC+血液恶性肿瘤是MICA+和/或MICB+恶性血液病。在一些实施方式中，血液恶性肿瘤是白血病或淋巴瘤。在一些实施方式中，待治疗的MIC+血液恶性肿瘤可选自：急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、急性单核细胞白血病(AMol)、淋巴瘤(例如，霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤)和多发性骨髓瘤。
在一些实施方式中，抗体可用于治疗具有病毒感染的对象，所述病毒感染的特征在于MIC蛋白水平升高，更特别是sMICA和/或sMICB的水平升高。如上所述，病毒感染中MICA和/或MICB的更高表达，特别是更高水平的sMICA和/或sMICB似乎通过sMIC介导的免疫抑制延长和/或增加感染的严重性。在一些实施方式中，治疗患有以MIC+蛋白水平升高为特征的病毒感染的对象的方法包括给予患有以MIC+蛋白水平升高为特征的病毒感染的对象治疗有效量的本公开的抗体。在一些实施方式中，MIC+病毒感染是MICA+和/或MICB+病毒感染。表现出sMIC蛋白水平升高的示例性病毒感染包括乙型肝炎病毒(HBV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人鼻病毒(HRV)、人巨细胞病毒(HCMV)、丙型肝炎病毒(HCV)和人类免疫缺陷病毒(HIV)的感染，等等。
在一些实施方式中，治疗感染乙型肝炎病毒(HBV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、人鼻病毒(HRV)、人巨细胞病毒(HCMV)、丙型肝炎病毒(HCV)或人免疫缺陷病毒(HIV：例如，HIV-1、HIV-2)的对象的方法包括给予感染了HBV、RSV、HRV、HCMV、HCV或HIV-1的对象施用治疗有效量的本公开的抗体。
可将本文所述的任何抗体和抗体组合物，特别是药物组合物给予对象。可以将抗体递送至(但不限于)哺乳动物的关节、鼻粘膜、血液、肺、肠、肌肉组织、皮肤或腹膜腔。在一些实施方式中，抗体组合物可以通过静脉内、腹膜内、肌肉内、皮下、直肠内、阴道内、鞘内、气管内、皮内、口服或通过吸入给药，或通过随时间逐渐灌注给药。在另一实例中，抗体的气溶胶制剂可通过吸入给予对象。在任何给定情况下，给药的合适途径将取决于具体抗体、对象、疾病的性质和严重程度以及对象的身体状况等。
给药剂量可以基于给药途径等；配方的性质；对象的疾病或病症的性质；对象的体型、体重、表面积、年龄和性别以及所给予的其它药物。考虑到可获得的抗体组合物的种类、各种给药途径的不同效率以及待治疗的疾病或病症，可预期给药剂量有广泛的变化。如本领域所理解的，可以使用标准经验程序来调整这些剂量水平的变化以便优化。在一些实施方式中，为了治疗本文所述的适应症，本公开的抗体的有效剂量可以为约0.0001-100mg/kg体重、0.001至约75mg/kg体重、0.005mg/kg至约50mg/kg体重、约0.01mg/kg至约30mg/kg体重、或约0.01至5mg/kg体重。在一些实施方式中，剂量可为单次(例如推注)给药约0.001mg/kg体重、约0.01mg/kg体重、约0.3mg/kg体重、约1mg/kg体重、约3mg/kg体重、约5mg/kg体重或约10mg/kg体重，或在1-10mg/kg体重的范围内。
可以调整剂量方案以提供所需的反应，例如治疗反应、可控毒性或副作用等。例如，可以给予单次推注，可以随时间给予几个分剂量，或者可以根据治疗情况的需要按比例减少或增加剂量。根据需要，用本文提供的任何组合物作治疗的持续时间可以是从短至一天到无限期的任何时间长度。给药可以是单次推注或重复给药，例如，在一天、两天、三天、五天、一周、两周、三周、一个月、五周、六周、七周、两个月、三个月或更长时间之后。重复给药可以是相同剂量或不同剂量。例如，按照治疗疾病所需，例如消除疾病，引起缓解或停止疾病进展，确定的剂量方案持续一段时间，例如，2周至6个月、3个月至1或2年、6个月至3或4年、8个月至18个月等等。在一些实施方式中，初始治疗可以是2周至2个月的确定剂量方案，然后是维持剂量方案，其中维持剂量可以与初始治疗相同或更低的剂量，根据治疗疾病或病症所需进行重复，例如，每两周一次、每月一次、每两月一次或每四月一次，或根据医疗专业人员确定的需要为基础。
在一些实施方式中，抗体可以随时间以单剂量或几个剂量给予。在一些实施方式中，抗体可以作为诱导疗法给予，即，一系列用于治疗疾病的治疗措施中的第一个，然后用抗体作维持治疗。
在一些实施方式中，抗体可以与适于治疗以MIC蛋白水平升高为特征的疾病或病症的其它治疗剂联用。在一些实施方式中，治疗对象的癌症的方法包括给予有此需要的对象治疗有效量的本公开的抗体，并辅助给予治疗有效量的第二治疗剂以治疗癌症。在一些实施方式中，治疗对象的病毒感染的方法包括给予有此需要的对象治疗有效量的本公开的抗体，并且辅助给予治疗有效量的第二治疗剂以治疗病毒感染。在组合疗法中，本公开的抗体可以和一种或多种组合治疗剂并行(例如，同时)、顺序、一起或分开给予。
在一些实施方式中，本公开的抗体与用于治疗肿瘤和癌症的化疗剂联用。合适的化疗剂可以包括细胞毒性剂、抗代谢剂(例如，叶酸拮抗剂、嘌呤类似物、嘧啶类似物等)、拓扑异构酶抑制剂(例如喜树碱衍生物、蒽二酮、蒽环霉素、表鬼臼毒素、喹啉生物碱等)、抗微管剂(如紫杉烷、长春花生物碱)、蛋白合成抑制剂(如头孢噻肟、喜树碱衍生物、喹啉生物碱)、烷基化剂(如烷基磺酸盐、乙烯亚胺、氮芥、亚硝基脲、铂衍生物、三氮烯类等)、生物碱、萜类化合物和激酶抑制剂。通常用于治疗增殖性疾病(例如癌症和肿瘤)的示例性化疗剂包括，例如但不限于，阿法替尼、阿瑞替尼、阿替替尼、阿利特替、阿维哌啶、阿米那定、阿米替尼、阿西替尼、阿扎胞苷、硫唑嘌呤、巴非替尼、巴拉西尼、苯达莫司汀、博来霉素、博苏替尼(bosutinib)、硼替佐米、卡非佐米、伊克昔佐米、奥罗佐米(oprozomib)、德兰佐米(delanzomib)、玛丽佐米(marizomib)、白消安、卡博替尼(cabozantinib)、喜树碱、卡奈替尼(canertinib)、卡培他滨、卡巴他赛、卡铂、卡莫司汀、森瑟替尼(cenisertib)、瑟替尼(ceritinib)、苯丁酸氮芥、顺铂、克拉屈滨、氯法拉滨、克莱拉尼、克里唑替尼、环磷酰胺、阿糖胞苷、达拉非尼(dabrafenib)、达卡巴嗪、达西替尼、放线菌素D、达诺瑟替(danusertib)、达沙替尼、柔红霉素、地西他滨、迪那昔丽(dinaciclib)、多西紫杉醇、多韦替尼、阿霉素、表柔比星、表阿霉素、甲磺酸艾日布林、厄洛替尼、埃诺替康(etirinotecan)、依托泊苷、依维莫司、依西美坦、氟尿嘧啶、氟达拉滨、氟尿嘧啶、吉非替尼、吉西他滨、羟基脲、依鲁替尼、依替替尼、伊达比星、异环磷酰胺、伊马替尼、伊特斯特(imetelstat)、埃塔瑟替(ipatasertib)、伊立替康、伊沙匹隆、拉帕替尼、来那度胺、他替尼(lestaurtinib)、洛莫司汀、卢西塔尼(lucitanib)、马赛替尼(masitinib)、美法仑、巯嘌呤、甲氨蝶呤、米哚妥林、丝裂霉素、米托蒽醌、目里替尼(mubritinib)、奈拉滨、那替尼、尼罗替尼、尼达尼布、高三尖杉酯碱(omacetaxine mepesuccinate)、奥兰替尼(orantinib)、奥沙利铂、紫杉醇、帕布昔利布(palbociclib)、帕佛酰胺氨丁三醇(palifosfamide tris)、帕唑帕尼、培利替尼(pelitinib)、培美曲塞、喷司他丁、普卡米星(plicamycin)、普纳替尼、颇佐替尼(poziotinib)、普拉曲沙、甲基苄肼、奎扎替尼(quizartinib)、雷替曲塞、雷拉芬尼(regorafenib)、鲁索利替尼、赛昔利布(seliciclib)、索拉非尼、链脲佐菌素、苏拉替尼(sulfatinib)、舒尼替尼、他莫昔芬、坦度替尼(tandutinib)、替莫唑胺、替西罗莫司、替尼泊苷、利那替尼、硫鸟嘌呤、噻替哌、托泊替康、丙戊酸、戊柔比星、凡德他尼、威罗菲尼长春新碱、长春碱、长春瑞滨、长春地辛等。在一些实施方式中，可以选择不会不利影响对象的免疫反应的化疗剂。
在一些实施方式中，抗体可以与用于治疗肿瘤和癌症的生物药物联用。可与本文抗体联用的示例性生物药物包括，抗BAFF(例如贝利木单抗)；抗CCR4(例如，莫加木珠单抗)；抗CD19/CD3(例如，比图莫单抗(blinatumomab))；抗CD20(例如，奥图珠单抗(obinutuzumab)、利妥昔单抗、替伊莫单抗(ibritumomab tiuxetan)、奥法木单抗、托西莫单抗)；抗CD22(例如，卢莫西地(moxetumomab pasudotox))；抗CD30(例如本妥昔单抗)；抗CD33(例如，吉妥单抗)；抗CD37(例如，奥图珠单抗(otlertuzumab))；抗CD38(例如，达雷木单抗)；抗CD52(例如，阿仑单抗)；抗CD56(例如洛伐珠单抗(lorvotuzumab mertansine))；抗CD74(例如米拉珠单抗)；抗CD105；抗-CD248(TEM1)(例如，欧特西珠单抗)；抗-CTLA4(例如，曲美木单抗(tremelimumab)、易普利木单抗(ipilimumab))；抗EGFL7(例如，帕萨珠单抗(parsatuzumab))；抗EGFR(HER1/ERBB1)(例如，帕尼单抗、尼妥珠单抗、耐昔妥珠单抗、西妥昔单抗、伊咖珠单抗(imgatuzumab)、伏妥昔单抗)；抗FZD7(例如，凡迪图单抗(vantictumab))；抗HER2(ERBB2/neu)(例如，玛格昔单抗(margetuximab)、帕妥珠单抗、曲妥珠单抗-美坦新偶联物、曲妥珠单抗)；抗HER3(ERBB3)；抗HGF(例如，利妥木单抗、飞图珠单抗(ficlatuzumab))；抗IGF-1R(例如，盖尼塔单抗、飞图木单抗(figitumumab)、昔图木单抗(cixutumumab)、达图珠单抗(dalotuzumab))；抗IGF-2R；抗KIR(例如，乐卢单抗(lirilumab)、昂图珠单抗(onartuzumab))；抗MMP9；抗PD-1(例如，尼卢单抗(nivolumab)、皮利珠单抗(pidilizumab)、兰利珠单抗(lambrolizumab))；抗PD-L1；抗PDGFRα(例如，雷莫芦单抗、托图单抗(tovetumab))；抗PD-L2；抗PIGF(例如，阿柏西普)；抗RANKL(例如，狄诺塞麦)；抗TNFRSF9(CD137/4-1BB)(例如，乌瑞芦单抗)；抗TRAIL-R1/DR4、R2/D5(例如，杜拉乐明)；抗TRAIL-R1/D4(例如，马帕木单抗)；抗TRAIL-R2/D5(例如，康图木单抗(conatumumab)、沙木单抗、阿颇单抗(apomab))；抗VEGFA(例如，贝伐单抗、阿柏西普)；抗VEGFB(例如，阿柏西普)；和抗VEGFR2(例如，雷莫芦单抗)。
特别地，本文描述的抗体可以与调节或激活(例如刺激)免疫系统的治疗剂联用。在一些实施方式中，这些可包含主动激活免疫系统的试剂，或抑制免疫激活下调的试剂。免疫激活或免疫刺激剂可以是小分子化合物、抗体、反义化合物、基因治疗剂等。用于治疗性免疫激活剂的各种生物学靶标包括，作为示例而非限制，CTLA-4、KIR(杀伤细胞免疫球蛋白样受体)、PD-1、PD-L1、PD-L2、CD137、CD227、IL-15受体、IL-6、IL-6受体、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3和载脂蛋白J(簇集蛋白)。在一些实施方式中，免疫系统活化剂包括针对治疗靶标的抗体或其它结合剂，例如抗-CTLA4、抗-PD-1、抗-PD-L1、抗-PD-L2、抗-CD137、抗TGF-β1、抗TGF-β2、抗TGF-β3和抗载脂蛋白J(簇集蛋白)。在一些实施方式中，第二治疗剂包括检查点抑制剂，特别是抗-CTLA4、抗-PD-1、抗-PD-L1或抗-PD-L2。示例性免疫活化剂包括易普利木单抗、曲美木单抗(Ribas等.,2013,J Clin Oncol.31:616-22)、尼卢单抗(Wolchok等.,2013,N Engl J Med.369:122-33)、BMS-936559(MDX-1105:Brahmer等.,2012,N Engl JMed.366:2455-65)、MEDI4736(抗-PD-L1)、MPDL3280A(抗-PD-L1)、兰利珠单抗(Hamid等.,2013,N Engl J Med.369:134-44)、皮利珠单抗(抗-PD-1；Berger R等2008,Clin CanRes.14:3044-51)、AMP-224(PD-L2-Ig)、兰利珠单抗、乌瑞芦单抗(Li和Liu,2013,ClinPharm:Advances&Application 5(增刊1):47-53)、PF-05082566(Fisher等.,2012,CancImmunol Immunother.61:1721-33)、ALT-803(IL-15超级激动剂复合物(IL-15superagonist complex)；Xu等,2013,Canc Res.73:3075-86；Zhu等,2009,JImmunol.183:3598-607)、AB-16B5(抗-簇集蛋白)、吡非尼酮(Noble等.,2011,Lancet 377:1760-9)、弗索木单抗(fresolimumab)(Trachtman等.,Kidney Int.79:1236-43)、苏昔单抗(sultiximab)和托珠单抗。
在一些实施方式中，与抗体联用的免疫调节或活化剂可包含刺激免疫系统反应的细胞因子或趋化因子，特别是细胞因子或趋化因子的人形式。在一些实施方式中，治疗对象中以MIC蛋白水平升高为特征的疾病或病症(例如sMIC+癌症或病毒感染)的方法包括给予有此需要的对象治疗有效量的本公开的抗体，并辅助给予治疗有效量的免疫调节或激活细胞因子或趋化因子。示例性细胞因子和趋化因子可以选自：IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21、GM-CSF、IFN-α和CCL-21，特别是IL-12或IL-15。在一些实施方式中，免疫刺激性细胞因子和趋化因子可以离体使用以处理免疫细胞，特别是从待治疗的对象或患者获得的免疫细胞。特别地，可以刺激NK细胞活性的免疫活化剂，包括例如但不限于IL-12和IL-15可以用于组合治疗中。在一些实施方式中，细胞因子或趋化因子可以是细胞因子或趋化因子的重组形式。
在一些实施方式中，本文描述的抗体可以与癌症疫苗联用，所述癌症疫苗包括用癌症疫苗活化的抗原呈递细胞(例如，树突细胞)。示例性的癌症疫苗包括前列腺酸性磷酸酶(例如)；gp-96-Ig(例如，HS-410)；PANVAC；HER2/neu(例如，内佩目特(nelipepimut)-S，AVX901)；DCVax(R)-L；林佩目特(rindopepimut)；IMA950(多肿瘤相关肽)；肿瘤来源的热激蛋白gp96(Vitespen)；存活肽(例如，ISA-51：美国专利公布20110091489)；EGFRvIII-NY-ESO-1(例如ADU-623)；CD-133；叶酸结合蛋白疫苗E39和J65；HLA-A2肿瘤抗原肽；癌胚抗原(CEA)；通用肿瘤抗原癌胚抗原/未成熟层粘连蛋白受体蛋白(OFA/iLRP)；乳腺珠蛋白-A；bi-shRNA弗林蛋白酶；HLA-A*2402限制性表位肽CDCA1、URLC10、KIF20A、DEPDC1和MPHOSPH1；高度糖基化的MUC1(例如，ONT-10)；聚ICLC；人端粒酶逆转录酶(例如，hTERT、UV1、GV1001)；HPV P16 37-63-肽；HPV-16-E7(例如，ADX11-001)、pNGVL4a-Sig；带状疱疹疫苗GSK1437173A；NY-ESO-1抗原；白血病相关抗原WT1；bcr-ablp210-b3a2断裂点衍生的五肽CMLVAX100；具有GM-CSF的肺癌细胞(例如，GVAX)；Wilms肿瘤基因1(WT1)肽(例如OCV-501)；人MUC1抗原(例如L-BLP25)；MUC1肽特莫泰德(tecemotide)；HLA-A*0201限制性表位肽URLC10、VEGFR1和/或VEGFR2 9URLC10；癌症-睾丸抗原(例如，URLC10、CDCA1、KIF20A、MAGE-C1、MAGE-A3/6等)；自噬体富集疫苗Dribble、L523S蛋白；RNA来源的肺癌疫苗CV9202；CSF-470疫苗；黑色素瘤抗原MAGE-3.A1；黑素瘤抗原NA17.A2；黑色素瘤抗原IMP321；黑素瘤抗原LAG-3；IBBL抗原(例如，A2/4-1BBL)黑素瘤疫苗；MART-1；gp100(例如，g209-2M、G280-9V)；KRN7000；PVX-410；PROSTVAC；肽pyroEHWSYGLRPG(PEP223)；前列腺特异性抗原和PSMA抗原(例如，BPX-201)。
在一些实施方式中，与抗体联用的癌症疫苗可以是肿瘤细胞或肿瘤细胞裂解物，该疫苗包括用肿瘤细胞或肿瘤细胞裂解物活化的抗原呈递细胞(例如，树突细胞)。可用作疫苗的示例性肿瘤细胞和相应的肿瘤细胞裂解物包括膀胱癌细胞、成胶质细胞瘤细胞、乳腺癌细胞、宫颈癌细胞、淋巴瘤细胞、肾癌细胞、白血病细胞、肺癌细胞、黑素瘤细胞、多发性骨髓瘤细胞、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌细胞、肝癌细胞和前列腺癌细胞。
在一些实施方式中，抗体可以与用于治疗病毒感染的抗病毒药物联用，所述病毒感染的特征在于存在升高的MIC，例如乙型肝炎病毒、呼吸道合胞病毒、人巨细胞病毒、丙型肝炎病毒、人鼻病毒和人类免疫缺陷病毒感染。用于治疗乙型肝炎病毒感染的药物包括干扰素(例如干扰素α-2b或peg化的干扰素)、拉米夫定、阿德福韦酯、恩替卡韦、替比夫定和替诺福韦。用于治疗呼吸道合胞病毒的药物包括RSV超免疫球蛋白；帕利珠单抗；苯并咪唑BMS-433771、TMC353121和JNJ-2408068；利巴韦林；和反义磷酰二胺吗啉代寡聚物(参见综述，Olszewska和Openshaw,2009,Expert Opin Emerg Drugs 14(2):207-17)。用于治疗丙型肝炎病毒的药物包括干扰素(例如，干扰素α-2b或peg化干扰素)、波西普韦、特拉普韦、利巴韦林、西美瑞韦、索非布韦、达卡他韦、瓦帕他韦(velpatasvir)、艾尔巴韦、格拉利韦(grazoprevir)、奥比他韦、帕利普韦、利托那韦、达沙布韦、雷迪帕韦及它们的组合。治疗人类免疫缺陷病毒的药物包括依非韦伦、恩曲他滨、替诺福韦地索普西富马酸盐、利匹韦林、可比司他、拉米夫定、齐多夫定、阿巴卡韦、扎西他滨、司他夫定、奈韦拉平、依曲韦林、拉韦定、替拉那韦、茚地那韦、沙奎那韦甲磺酸盐、洛匹那韦、利托那韦、达芦那韦、阿扎那韦硫酸盐、奈非那韦甲磺酸盐、马拉韦罗、拉替拉韦、恩夫韦及它们的组合。
在组合疗法的一些实施方式中，本文描述的抗体可以在给予其它治疗剂之前、同时或之后使用。在一些实施方式中，本公开内容的抗体和组合治疗剂可以在同一天连续给予患者，例如在相同的患者就诊期间。连续给药可以分开1、2、3、4、5、6、7或8小时或更长时间。在一些实施方式中，本公开的抗体和组合治疗剂可以分开给予，例如，在不同的日子，例如，抗体和组合治疗剂可以1天、2天或3天、一周、两周或每月的间隔给予。根据本文的指导，本领域技术人员将明白组合本公开的抗体和其它治疗剂的其它治疗方案。
在另一方面，本公开提供了包含可用于实施本文所述抗体和方法的材料的制品和试剂盒。在一些实施方式中，制品可包含含有本公开抗体的容器。合适的容器包括瓶子、小瓶、袋子和注射器等。容器可以由各种材料制成，例如塑料或玻璃。在一些实施方式中，容器可具有无菌进入端口，例如用于插入皮下注射针头的塞子或膜。在一些实施方式中，试剂盒包括注射器，特别是填充有一定剂量的本公开抗体的单次使用注射器或自动注射笔式注射器，特别是限定单位剂量的抗体。
在一些实施方式中，制品还可包括至少第二容器，其含有与抗体联用的材料，例如无菌水或无菌缓冲液，例如用于重构组合物。在一些实施方式中，第二容器或第三容器可包含额外的治疗剂，包括与本公开的抗体组合联用的化疗剂或生物剂。
在一些实施方式中，所述制品包含标签或包装插页，其描述了用于治疗一种或多种疾病的组合物。制品还可以包括组合物的使用说明书或描述以及在合适的电子介质上的它们的使用说明，例如光盘和静态随机存取存储器芯片。
可将制品以包括容器、包装插页和/或电子介质的试剂盒的形式提供。还可以包括商业销售和使用者所需的其它材料，例如其它缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和注射器。
现在已经一般性地描述了本发明，通过参考以下实施例将更容易理解本发明，这些实施例是以举例说明的方式提供的，而非限制性的。
7.实施例
实施例1：产生针对MICA的alpha-3结构域的单克隆抗体的相关方法
杆状病毒表达产生胞外alpha-3结构域MICA免疫原.为了制备MICA的胞外alpha-3结构域作为抗体产生的免疫原，使用杆状病毒蛋白表达系统在表达的MICA上产生适当的蛋白糖基化。合成产生重组alpha-3结构域MICA cDNA(等位基因001)连同合适的限制酶位点，所述cDNA对应于编码MICA的alpha-3结构域的残基205至297(图1C：SEQ ID NO:3)的GenBank MICA序列NP_000238.1(图1)，其是加工的MICA蛋白的氨基酸残基182至274(例如，图4-A)，以便进一步亚克隆到杆状病毒转移载体中，然后连接到合适的DNA克隆载体中。杆状病毒转移载体含有六个C-末端组氨酸残基标签用于纯化。具有纯化标签和切割位点的示例性MICA肽免疫原也可以选自以下，其中MICA序列加下划线：
(A)MEFVPPMVNVTRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQT WVATRICQGEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSENLYFQGHHHHHH(SEQ ID NO:46)；
(B)MEFRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQ GEEQRFTCYMEHSGNHSTHPVPSENLYFQGHHHHHH(SEQ ID NO:47)；
(C)MEFRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQ GEEQRFTCYMEHSGNHSTHENLYFQGHHHHHH(SEQ ID NO:48)；和
(D)MEFRSEASEGNITVTCRASGFYPWNITLSWRQDGVSLSHDTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRICQ GEEQRENLYFQGHHHHHH(SEQ ID NO:49).
可以采用类似的策略从MICB制备alpha-3结构域作为用于免疫小鼠的重组蛋可以采用类似的策略从MICB制备α-3结构域作为用于免疫小鼠的重组蛋白(图1D中呈现的序列：SEQ ID NO：4)。具有纯化标签和切割位点的示例性MICB肽免疫原也可以选自以下，其中MICB序列加下划线：白(图1D中呈现的序列：SEQ ID NO:4)。具有纯化标签和切割位点的示例性MICB肽免疫原也可以选自以下，其中MICB序列加下划线：
(A)MEFVPPMVNVTCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQT WVATRIRQGEEQRFTCYMEHSGNHGTHPVPSENLYFQGHHHHHH(SEQ ID NO:50)；
(B)MEFCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQ GEEQRFTCYMEHSGNHGTHPVPSENLYFQGHHHHHH(SEQ ID NO:51)；
(C)MEFCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQ GEEQRFTCYMEHSGNHGTHENLYFQGHHHHHH(SEQ ID NO:52)；和
(D)MEFCSEVSEGNITVTCRASSFYPRNITLTWRQDGVSLSHNTQQWGDVLPDGNGTYQTWVATRIRQ GEEQRENLYFQGHHHHHH(SEQ ID NO:53).
在确认亚克隆中的MICA和另外的DNA序列后，使用杆状病毒表达系统在大肠杆菌细菌中重组两种DNA组分以产生含有重组病毒DNA的杆粒构建体。利用含正确序列的重组杆粒克隆，通过转染到Sf9昆虫细胞中来产生重组杆状病毒。
为了产生重组蛋白，在无血清培养基(例如SF-900(生命技术公司-LifeTechnologies))中用重组病毒感染Sf9细胞，并在感染后第4或5天收获细胞。为了从感染的细胞中纯化MICA alpha-3结构域多肽，裂解细胞，短暂离心以收集上清液，然后使用Ni2+螯合进行亲和层析。通过在层析之前向样品缓冲液中加入8M尿素来改善蛋白质回收率。利用碳酸盐缓冲液作透析除去尿素。纯蛋白也可以通过离心过滤器(米康公司-Amicon)浓缩，以获得更稳定的蛋白制剂。
单克隆抗体产生和初步筛选.在水溶液(约0.5mg/ml)中制备alpha-3结构域MICA免疫原，并采用RapidPrimeTM方法(精准免疫公司-ImmunoPrecise，不列颠哥伦比亚省，加拿大)在两周时间内将其注射到免疫活性小鼠中五次。免疫后，取出免疫小鼠淋巴组织中的淋巴细胞，利用聚乙二醇(PEG)或PEG衍生物将淋巴细胞与鼠SP2/O骨髓瘤细胞作化学融合，从而进行永生化。融合细胞在含甲基纤维素的半固体HAT药物选择培养基中生长，以选择能够产生抗体的克隆B细胞/骨髓瘤融合杂交瘤细胞。杂交瘤克隆的初步筛选涉及通过ELISA测试含有抗体的上清液结合重组抗原(MICA的alpha-3结构域)的能力。初步筛选从总共测定的948(15％)个杂交瘤克隆中命中146个，而同种型分析鉴定了特定抗体类型的98/146个克隆(67％)，相当于948个初始克隆的10％。
采用间接ELISA的二级筛选.进行几个二级间接ELISA筛选以帮助选择高质量的杂交瘤克隆用于进一步分析。评估含有抗体的杂交瘤上清液与以下物质的结合情况：(a)测试alpha-3结构域MICA蛋白；(b)His标记的蛋白，与MIC蛋白质无关，以排除潜在的结合His标签的抗体；(c)来自人MICA的重组大肠杆菌产生的胞外域蛋白(包括完整的alpha-3亚结构域，但没有His标签)(生物基础公司-Bio Basic，马卡姆，加拿大)；和(d)来自人MICB的重组大肠杆菌产生的胞外域蛋白(包括完整的alpha-3亚结构域，但没有His标签)(生物基础公司，马卡姆，加拿大)。
将上述蛋白在4℃下，在碳酸盐缓冲液(pH9.6)中与ELISA板结合过夜，浓度范围为每孔0.1至0.2μg。然后用脱脂奶粉/PBS pH 7.4封闭平板，洗涤，然后用一抗(100μl杂交瘤上清液)或用阳性对照MIC鼠单克隆抗体(BAMO3，MIC alpha-3特异性IgG2a mAb；和BAMO1，MIC alpha1+2特异性IgG1mAb；二者均来自MBL国际公司-MBL International，马萨诸塞州，美国)或同种型匹配的阴性对照抗体处理1小时。洗涤后，用第二山羊抗小鼠IgG/IgM(H+L)-HRP缀合的抗体处理各孔1小时。将HRP底物四甲基联苯胺(TMB)加入洗涤的孔中，并避光显色5分钟。通过加入1M HCl终止反应，并在450nm下读板。
这些ELISA实验仅获得少数杂交瘤上清液与His-标记的蛋白反应非常弱，表明产生的抗体是靶标，即MICA特异性的。所测试的许多杂交瘤产生的抗体与alpha-3靶MICA蛋白以及细菌产生的MICA和/或MICB蛋白强烈结合，从而能够收集具有不同结合能力的不同克隆。回顾来看，ELISA实验还表明，对照MIC抗体BAMO3(MIC alpha-3特异性)而非BAMO1(MICalpha1+2特异性)能够通过间接ELISA产生针对对照重组alpha-3MICA靶蛋白的强信号，从而证实测试alpha-3结构域抗原确实在杆状病毒系统中正确表达。
采用流式细胞术测定的二级筛选.二级筛选利用含相同抗体的上清液，通过间接ELISA来测试它们结合MICA或MICB蛋白的重组胞外域(alpha-1、-2和-3结构域)的能力，以及通过流式细胞术分析它们不结合表达MIC的热激HCT116结肠癌和DU-145前列腺癌细胞的细胞表面上的MIC蛋白的能力。
为了测定与细胞结合的MIC蛋白的结合情况，将表达MIC的热激DU-145前列腺癌细胞在42℃下热处理90分钟，然后在37℃下恢复22小时。恢复后，对非酶促解离的细胞进行台盼蓝生存力测试，测定到97％的存活率水平。然后用一抗处理热激DU-145细胞，所述一抗选自以下之一：(a)测试杂交瘤上清液；(b)仅能够结合alpha-3MIC亚结构域的阳性对照鼠抗体(上述BAMO3mAB：MBL国际公司，马萨诸塞州，美国)，或(c)与阳性对照抗体或测试杂交瘤上清液同种型匹配的阴性对照鼠抗体。在温育和充分洗涤后，用异硫氰酸荧光素(FITC)缀合的山羊抗小鼠IgG二抗(桑塔克鲁兹生物技术公司-Santa Cruz Biotechnology Inc.，加利福尼亚州，美国)处理细胞。然后用碘化丙锭(PI)染色细胞以测量活力，重悬于防腐剂缓冲液中，然后利用BD FACS-Caliber机器进行流式细胞术。
检测到阳性对照抗体(alpha-3特异性)与细胞表面的强结合，但是没有观察到与阴性对照抗体或杂交瘤测试上清液的结合，所述上清液中的抗体先前已经在ELISA试验中确定与MICA alpha-3亚结构域重组蛋白结合和与细菌表达的MICA或MICB胞外域重组蛋白结合。具体地说，来自杂交瘤克隆5C9(IgG2)的抗体不能结合DU-145细胞上的细胞表面表达的MIC蛋白(图9)。
实施例2：与MIC蛋白结合的抗体的表征
结合亲和力分析.通过生物层干涉法(Bio-Layer Interferometry,BLI)，利用Pall ForteBio Octet RED96机器(PFB公司-Pall ForteBio，加利福尼亚州，美国)直接测量MICA alpha-3重组抗原和测试抗体之间的生物分子相互作用。对测试MICA单克隆抗体5C9以及两种对照抗体进行实时动力学分析，其中一种可以结合alpha-3MICA亚结构域抗原(阳性对照)，其中一种不能结合(阴性对照)，如先前通过ELISA确定的。Octet RED96设备根据生物层干涉法的原理运行，这是可测量分子相互作用和复合物形成的一种无标记技术。该技术的关键组成部分是光学生物传感器，其尖端浸没在测试孔的液体中，然后用于测定光波之间的干涉图案。此处，配体(单克隆抗体)通过先前结合的抗小鼠IgG的捕获作用而定位于生物传感器的表面，而分析物生物分子(抗原)保持在溶液中。测量配体和分析物之间的结合反应并实时报告。监测结合和解离动力学特性并计算KD值。该模型假设配体与分析物以1:1相互作用。
在pH7.4，阳性对照MICA抗体(BAMO3)对于结合MICA alpha-3重组蛋白的亲和力常数KD为约6.0×10-9M。不紧密结合的阴性对照抗体的KD约为9.6×10-6M。克隆5C9的抗体的测得KD约为3.3×10-9M。
抗原结合域的测序.用含有去污剂的缓冲液裂解杂交瘤细胞，并通过标准方法分离mRNA。利用使用5'RACE(RLM-RACE)和基因特异性反向引物进行RT-PCR，其扩增小鼠免疫球蛋白重链(IgG1)和轻链(kappa)可变区序列。通过凝胶电泳分离反应混合物，并将含有特异性PCR条带的凝胶切除。将纯化的PCR产物克隆到pCR-Blunt II-TOPO载体中，并将构建体转化到大肠杆菌中。每个链挑选23个菌落，并先对扩增区域的存在作PCR筛选，再进行测序。对每条链的PCR阳性克隆(约8至10)进行测序。通过BLAST分析DNA序列以确认与小鼠抗体序列的同源性。抗体5C9的可变区序列描绘于图7(A-H)。
实施例3：MIC抗体的表位作图
采用PPB公司(Pepscan Presto BV，莱利斯塔德，荷兰)的HiSenseTM表位作图程序测定抗体结合的表位。构建源自MICA*001alpha-3序列的一系列重叠合成肽以评估与测试抗体的结合情况。此外，产生含有双丙氨酸突变的MICA肽并用于证实特定氨基酸对抗体结合能力的重要性。
肽的合成：为了重建靶分子的表位，合成了肽文库。通过用亲水性聚合物制剂接枝，然后利用二环己基碳二亚胺(DCC)与叔丁氧基羰基-六亚甲基二胺(BocHMDA)和N-羟基苯并三唑(HOBt)反应，然后使用三氟乙酸(TFA)裂解Boc-基团，得到氨基官能化的聚丙烯载体。采用标准的Fmoc-肽合成，通过定制改进的JANUS液体处理站(珀金埃尔默公司，PerkinElmer)在氨基官能化的固体支持物上合成肽。最后，用过量的H2O彻底洗涤肽阵列，并在含有1％SDS/0.1％β-巯基乙醇的PBS(pH 7.2)的破碎缓冲液中于70℃超声处理30分钟，然后在H2O中再超声处理45分钟。
ELISA筛选：在基于Pepscan的ELISA中测试抗体与每种合成肽的结合情况。将肽阵列与一抗溶液一起温育(4℃过夜)。洗涤后，将肽阵列与1/1000稀释的合适抗体过氧化物酶缀合物(SBA；家兔抗小鼠IgG(H+L)HRP缀合物，南非生物技术公司-Southern Biotech)在25℃温育1小时。洗涤后，加入过氧化物酶底物2,2'-连氮基-二-3-乙基苯并噻唑啉磺酸盐(ABTS)和20μl/ml的3％H2O2。1小时后，测量显色。用电荷耦合器件(CCD)-相机和图像处理系统定量测定显色情况。
结果：利用Pepscan开发的软件确定表位。超过400种肽的分析的记录数据表明，基于经加工MICA序列的编号，5C9抗体识别具有核心序列228_QQWGDVLP_235(SEQ ID NO:22)的肽。另外，数据表明在231_GDVL_234(SEQ ID NO:23)范围内具有MICA残基双丙氨酸突变的肽消除了抗体的结合能力。为评估所鉴定的线性表位的结构特征，利用人MICA的3D结构。图6描绘了基于表位作图研究，与抗体5C9相互作用的MICA上的表位残基的表面定位。
实施例4：评估与前列腺癌DU-145细胞脱落的MIC蛋白的结合情况
为了证明抗体与DU-145前列腺癌细胞脱落的MIC配体的结合情况，采用消减免疫沉淀方法来监测和定量测定特异性结合情况。在该过程中，DU-145细胞(来自ATCC)生长至高密度，然后在42℃热激处理90分钟。然后将组织培养基更换为含有2％FBS的低血清培养基，使细胞恢复48小时。此时收获条件化的培养基并冷冻备用。在4℃，利用蛋白G PLUS-琼脂糖珠(桑塔克鲁兹生物技术公司，加利福尼亚州)结合阳性对照抗体BAMO3(IgG2a)、测试杂交瘤上清抗体(IgG2b)或合适的正常小鼠同种型对照(各种同种型；桑塔克鲁兹生物技术公司，加利福尼亚州)，3小时。温育后，充分洗涤具有新结合的抗体的小珠，以便进一步用于评估它们在DU-145条件化培养基中结合脱落的sMIC配体的能力。然后将处理过的小珠加入确定量的条件化培养基中，然后在4℃、温和搅拌下温育过夜，以诱导免疫沉淀。温育后，将小珠轻轻离心以沉淀小珠，并从测试条件化培养基中取出小珠并丢弃。随后通过ELISA测定到，结合sMIC配体的抗体/小珠复合物导致剩余的条件化培养基中sMIC配体水平降低。由DU-145细胞释放的主要sMIC配体被确定为sMICB，并且因此使用来自MBL国际公司(马萨诸塞州)的MICB ELISA试剂盒(抗体-匹配的组装人MICB试剂盒(Ab-Match Assembly HumanMICB kit)与抗体-匹配的通用缓冲试剂盒(Ab-Match Universal buffer kit))进行测定(参见图10)。与同种型(阴性)对照相比，抗体/小珠复合物捕获sMICB的处理导致ELISA信号降低。纯化的BAMO3MICA/B抗体(当膜结合时也能够结合MICA/B)用作阳性对照并且使样品中sMICB的量减少约83％。与同种型对照相比，来自杂交瘤上清液的5C9抗体使sMICB水平降低约51％。
实施例5：对Rag2-/-小鼠中前列腺癌DU-145异种移植物生长的影响
DU-145细胞在含有2mM L-谷氨酰胺、1mM丙酮酸钠、0.1mM非必需氨基酸、1.5g/L碳酸氢钠和10％FBS的改良Eagle最低必需培养基中，在37℃、5％CO2的环境中培养。在研究第0天，将5.0×106个DU-145肿瘤细胞皮下植入雄性Rag2-/-小鼠的背部。在研究第31天将小鼠随机分成各种治疗组。所有治疗组在研究第32天开始给药并在研究第56天完成。小鼠每周称重两次，并且如方案所示，每周两次经腹膜内注射400μg同种型对照或5C9抗体，除了最后一周，它们被给药三次。按计划，待给予重组小鼠IL-12(生物传奇公司-BioLegend，加利福尼亚州)的小鼠每周三次接受0.5μg的瘤周注射。用卡尺测量肿瘤尺寸来监测肿瘤生长。对于整个研究，每周2次获得肿瘤长度和宽度测量值。根据方程式L X W2/2计算肿瘤体积，其中长度(mm)是肿瘤的较长轴。在研究第10、36、43天和终止时收集血样。从血液样品中产生血清，并用于随后的ELISA实验中以测量sMICB水平。在研究终止时，收集脾脏并称重。
结果：异种移植模型：图11显示了每个研究组随时间的平均肿瘤体积。与同种型对照相比，两种单一疗法(5C9抗体或IL-12)均无显著差异(P>0.05，学生T检验，双尾)，虽然在研究第58天测量时，注意到这些组中平均肿瘤大小分别减少30％和32％(图12)。如研究第58天评估的，使用5C9抗体和IL-12的组合治疗的平均肿瘤体积有统计学显著的降低(53％)(P<0.05)。这些数据与提出的5C9抗体的作用机制一致，该抗体结合并降低sMICB的血液水平，藉此促进NK细胞上的同源受体NKG2D识别表面结合的MIC配体，该作用通过添加免疫刺激性IL-12而增强。关于脾脏重量(图14)，与同种型对照相比，在同种型对照和单独的5C9或5C9加IL-12治疗组之间发现统计学上显著的差异，其中脾脏重量分别增加约2或3倍。单独含有IL-12的治疗组没有显著差异。对于研究中的任何动物，在治疗期间没有显著的体重减轻，或在尸检时没有整体毒性。
免疫测定：图13显示了用于评估小鼠血清中sMICB水平的ELISA结果。sMICB水平随着肿瘤大小的增加而增加，因此，在研究第10天的早期时间点仅检测到非常低的水平，而随着研究和肿瘤体积发展，通常注意到更高的水平。在研究第36、43和53-58天，测定四个研究组的血清样品中的sMICB水平。当比较mAb 5C9加IL-12的组合治疗组(学生T检验，双尾；在研究第36、43和53-58天P值分别＝0.03、0.001和0.002)与同种型对照时，实现统计学显著的降低。统计分析表明，在研究第36天(P＝0.08)和第43天(P＝0.09)，仅接受含有mAb5C9的治疗组达到显著性。值得注意的是，与研究第36天的单用5C9相比，单用IL-12治疗组中的sMICB水平降低有延迟，这一事实可能表明治疗类型之间的作用机制存在差异。
除了sMICB之外，还通过夹心捕获ELISA测定小鼠血清的IFN-γ。为了测量IFN-γ，根据制造商的说明书使用Affymetrix/eBioscience小鼠IFN-γELISA即用试剂盒。图15显示研究第36天的IFN-γ变化。使用学生T-检验(双尾)计算P值。P值低于0.05被认为是显著的。图15中的标记“*”是指P<0.05。5C9或IL-12单一疗法与同种型对照均未表现出显著不同；然而，5C9和IL-12的组合治疗与单一疗法或同种型对照显著不同(学生T检验，双尾；P值<0.05)。在稍后的研究日测试小鼠血清中的IFN-γ表明所有治疗组仅具有低水平并且彼此之间没有显著差异(数据未显示)。
在研究的第10、36、43和58天，根据制造商的使用说明书，还利用AbcamSimpleStep ELISA试剂盒测定小鼠血清中的IP-10(CXCL10)。图16显示了在研究过程中IP-10的变化情况。在研究第36天，注意到与同种型对照相比，对于包括5C9和IL-12单一疗法以及5C9与IL-12组合的治疗组，IP-10有显著增加(学生T检验，双尾；P值<0.05)。在研究第43和58天，组合治疗组继续与同种型对照存在显著不同。所有药物治疗组的平均IP-10水平似乎在研究第36天或其附近达到峰值，但此后降低。这些数据与对治疗起反应的IFN-γ表达诱导IP-10相一致。
出于说明和描述的目的，上文已经呈现了对本发明的特定实施方式的描述。它们并非旨在穷举或将本发明限制于所公开的精确形式，鉴于上述教导，许多修改和变化都是可能的。
本文引用的所有专利、专利申请、出版物和参考文献通过引用明确纳入，其程度如同每份单独的出版物或专利申请被具体和单独地表明通过引用纳入。
序列表
<110> 诺瓦罗技科斯生物科技有限公司
<120> 针对MICA和MICB蛋白的抗体
<130> NBI-003WO
<150> 62/410,282
<151> 2016-10-19
<160> 53
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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gtgagatcca tgaagacagc agcaccaggg gctcccggca tttctactac gatggggagc 420
tcttcctctc ccaaaacctg gagactcaag aatcgacagt gccccagtcc tccagagctc 480
agaccttggc tatgaacgtc acaaatttct ggaaggaaga tgccatgaag accaagacac 540
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tggccatcag gagaacagtg ccccccatgg tgaatgtcac ctgcagcgag gtctcagagg 660
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<213> 智人(Homo sapiens)
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<400> 18
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180 185 190
Ser Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Ser Phe Tyr Pro
195 200 205
Arg Asn Ile Thr Leu Thr Trp Arg Gln Asp Gly Val Ser Leu Ser His
210 215 220
Asn Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu Pro Asp Gly Asn Gly Thr Tyr
225 230 235 240
Gln Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile Arg Gln Gly Glu Glu Gln Arg Phe
245 250 255
Thr Cys Tyr Met Glu His Ser Gly Asn His Gly Thr His Pro Val Pro
260 265 270
Ser
<210> 19
<211> 273
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 19
Pro His Ser Leu Arg Tyr Asn Leu Met Val Leu Ser Gln Asp Gly Ser
1 5 10 15
Val Gln Ser Gly Phe Leu Ala Glu Gly His Leu Asp Gly Gln Pro Phe
20 25 30
Leu Arg Tyr Asp Arg Gln Lys Arg Arg Ala Lys Pro Gln Gly Gln Trp
35 40 45
Ala Glu Asn Val Leu Gly Ala Lys Thr Trp Asp Thr Glu Thr Glu Asp
50 55 60
Leu Thr Glu Asn Gly Gln Asp Leu Arg Arg Thr Leu Thr His Ile Lys
65 70 75 80
Asp Gln Lys Gly Gly Leu His Ser Leu Gln Glu Ile Arg Val Cys Glu
85 90 95
Ile His Glu Asp Ser Ser Thr Arg Gly Ser Arg His Phe Tyr Tyr Asp
100 105 110
Gly Glu Leu Phe Leu Ser Gln Asn Leu Glu Thr Gln Glu Ser Thr Val
115 120 125
Pro Gln Ser Ser Arg Ala Gln Thr Leu Ala Met Asn Val Thr Asn Phe
130 135 140
Trp Lys Glu Asp Ala Met Lys Thr Lys Thr His Tyr Arg Ala Met Gln
145 150 155 160
Ala Asp Cys Leu Gln Lys Leu Gln Arg Tyr Leu Lys Ser Gly Val Ala
165 170 175
Ile Arg Arg Thr Val Pro Pro Met Val Asn Val Thr Cys Ser Glu Val
180 185 190
Ser Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Ser Phe Tyr Pro
195 200 205
Arg Asn Ile Thr Leu Thr Trp Arg Gln Asp Gly Val Ser Leu Ser His
210 215 220
Asn Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu Pro Asp Gly Asn Gly Thr Tyr
225 230 235 240
Gln Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile Arg Gln Gly Glu Glu Gln Arg Phe
245 250 255
Thr Cys Tyr Met Glu His Ser Gly Asn His Gly Thr His Pro Val Pro
260 265 270
Ser
<210> 20
<211> 273
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 20
Pro His Ser Leu Arg Tyr Asn Leu Met Val Leu Ser Gln Asp Gly Ser
1 5 10 15
Val Gln Ser Gly Phe Leu Ala Glu Gly His Leu Asp Gly Gln Pro Phe
20 25 30
Leu Arg Tyr Asp Arg Gln Lys Arg Arg Ala Lys Pro Gln Gly Gln Trp
35 40 45
Ala Glu Asp Val Leu Gly Ala Glu Thr Trp Asp Thr Glu Thr Glu Asp
50 55 60
Leu Thr Glu Asn Gly Gln Asp Leu Arg Arg Thr Leu Thr His Ile Lys
65 70 75 80
Asp Gln Lys Gly Gly Leu His Ser Leu Gln Glu Ile Arg Val Cys Glu
85 90 95
Ile His Glu Asp Ser Ser Thr Arg Gly Ser Arg His Phe Tyr Tyr Asn
100 105 110
Gly Glu Leu Phe Leu Ser Gln Asn Leu Glu Thr Gln Glu Ser Thr Val
115 120 125
Pro Gln Ser Ser Arg Ala Gln Thr Leu Ala Met Asn Val Thr Asn Phe
130 135 140
Trp Lys Glu Asp Ala Met Lys Thr Lys Thr His Tyr Arg Ala Met Gln
145 150 155 160
Ala Asp Cys Leu Gln Lys Leu Gln Arg Tyr Leu Lys Ser Gly Val Ala
165 170 175
Ile Arg Arg Thr Val Pro Pro Met Val Asn Val Thr Cys Ser Glu Val
180 185 190
Ser Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Ser Phe Tyr Pro
195 200 205
Arg Asn Ile Thr Leu Thr Trp Arg Gln Asp Gly Val Ser Leu Ser His
210 215 220
Asn Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu Pro Asp Gly Asn Gly Thr Tyr
225 230 235 240
Gln Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile Arg Gln Gly Glu Glu Gln Lys Phe
245 250 255
Thr Cys Tyr Met Glu His Ser Gly Asn His Gly Thr His Pro Val Pro
260 265 270
Ser
<210> 21
<211> 273
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 21
Pro His Ser Leu Arg Tyr Asn Leu Met Val Leu Ser Gln Asp Gly Ser
1 5 10 15
Val Gln Ser Gly Phe Leu Ala Glu Gly His Leu Asp Gly Gln Pro Phe
20 25 30
Leu Arg Tyr Asp Arg Gln Lys Arg Arg Ala Lys Pro Gln Gly Gln Trp
35 40 45
Ala Glu Asp Val Leu Gly Ala Glu Thr Trp Asp Thr Glu Thr Glu Asp
50 55 60
Leu Thr Glu Asn Gly Gln Asp Leu Arg Arg Thr Leu Thr His Ile Lys
65 70 75 80
Asp Gln Lys Gly Gly Leu His Ser Leu Gln Glu Ile Arg Val Cys Glu
85 90 95
Ile His Glu Asp Ser Ser Thr Arg Gly Ser Arg His Phe Tyr Tyr Asn
100 105 110
Gly Glu Leu Phe Leu Ser Gln Asn Leu Glu Thr Gln Glu Ser Thr Val
115 120 125
Pro Gln Ser Ser Arg Ala Gln Thr Leu Ala Met Asn Val Thr Asn Phe
130 135 140
Trp Lys Glu Asp Ala Met Lys Thr Lys Thr His Tyr Arg Ala Met Gln
145 150 155 160
Ala Asp Cys Leu Gln Lys Leu Gln Arg Tyr Leu Lys Ser Gly Val Ala
165 170 175
Ile Arg Arg Thr Val Pro Pro Met Val Asn Val Thr Cys Ser Glu Val
180 185 190
Ser Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Ser Phe Tyr Pro
195 200 205
Arg Asn Ile Thr Leu Thr Trp Arg Gln Asp Gly Val Ser Leu Ser His
210 215 220
Asn Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu Pro Asp Gly Asn Gly Thr Tyr
225 230 235 240
Gln Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile Arg Gln Gly Glu Glu Gln Arg Phe
245 250 255
Thr Cys Tyr Met Glu His Ser Gly Asn His Gly Thr His Pro Val Pro
260 265 270
Ser
<210> 22
<211> 8
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 22
Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu Pro
1 5
<210> 23
<211> 4
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 23
Gly Asp Val Leu
1
<210> 24
<211> 140
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 24
Met Lys Leu Pro Val Arg Leu Leu Val Leu Met Phe Trp Ile Pro Ala
1 5 10 15
Ser Ser Ser Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val
20 25 30
Ser Leu Gly Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile
35 40 45
Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro
50 55 60
Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
65 70 75 80
Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
85 90 95
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys
100 105 110
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu
115 120 125
Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser
130 135 140
<210> 25
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 25
Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly Asp Gln Ala
1 5 10 15
Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn
20 25 30
Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu
35 40 45
Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val
65 70 75 80
Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly Ser His Val
85 90 95
Pro Phe Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 26
<211> 393
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 26
atgaagttgc ctgttaggct gttggtgctg atgttctgga ttcctgcttc cagcagtgat 60
gttttgatga cccaaactcc actctccctg cctgtcagtc ttggagatca agcctccatc 120
tcttgcagat ctagtcagag cattgtacat agtaatggaa acacctattt agaatggtac 180
ctgcagaaac caggccagtc tccaaagctc ctgatctaca aagtttccaa ccgattttct 240
ggggtcccag acaggttcag tggcagtgga tcagggacag atttcacact caagatcagc 300
agagtggagg ctgaggatct gggagtttat tactgctttc aaggttcaca tgttccattc 360
acgttcggct cggggacaaa gttggaaata aaa 393
<210> 27
<211> 327
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 27
atgacccaaa ctccactctc cctgcctgtc agtcttggag atcaagcctc catctcttgc 60
agatctagtc agagcattgt acatagtaat ggaaacacct atttagaatg gtacctgcag 120
aaaccaggcc agtctccaaa gctcctgatc tacaaagttt ccaaccgatt ttctggggtc 180
ccagacaggt tcagtggcag tggatcaggg acagatttca cactcaagat cagcagagtg 240
gaggctgagg atctgggagt ttattactgc tttcaaggtt cacatgttcc attcacgttc 300
ggctcgggga caaagttgga aataaaa 327
<210> 28
<211> 160
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 28
Met Glu Trp Ser Gly Val Phe Ile Phe Leu Leu Ser Val Thr Ala Gly
1 5 10 15
Val His Ser Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg
20 25 30
Pro Gly Thr Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe
35 40 45
Thr Asn Tyr Leu Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Ile Gly Leu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn
65 70 75 80
Glu Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser
85 90 95
Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val
100 105 110
Tyr Phe Cys Ala Arg Ile Tyr Tyr Gly Asn Arg Asp Tyr Gly Met Asp
115 120 125
Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr
130 135 140
Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly Asp Thr Thr Gly
145 150 155 160
<210> 29
<211> 123
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 29
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Leu Ile Glu Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Leu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Ile Tyr Tyr Gly Asn Arg Asp Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser Ala Lys
115 120
<210> 30
<211> 426
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 30
atggaatgga gcggagtctt tatctttctc ctgtcagtaa ctgcaggtgt tcactcccag 60
gtccagctgc agcagtctgg agctgagctg gtaaggcctg ggacttcagt gaaggtgtcc 120
tgcaaggctt ctggatacgc cttcactaat tacttgatag agtgggtaaa gcagaggcct 180
ggacagggcc ttgagtggat tggactgatt tatcctggaa gtggtggtac taactacaat 240
gagaaattca agggcaaggc aacactgact gcagacaaat cctccagcac tgcctacatg 300
cagctcagca gcctgacatc tgatgactct gcggtttatt tctgtgcaag aatctactat 360
ggtaacaggg actatggtat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 420
gccaaa 426
<210> 31
<211> 369
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 31
caggtccagc tgcagcagtc tggagctgag ctggtaaggc ctgggacttc agtgaaggtg 60
tcctgcaagg cttctggata cgccttcact aattacttga tagagtgggt aaagcagagg 120
cctggacagg gccttgagtg gattggactg atttatcctg gaagtggtgg tactaactac 180
aatgagaaat tcaagggcaa ggcaacactg actgcagaca aatcctccag cactgcctac 240
atgcagctca gcagcctgac atctgatgac tctgcggttt atttctgtgc aagaatctac 300
tatggtaaca gggactatgg tatggactac tggggtcaag gaacctcagt caccgtctcc 360
tcagccaaa 369
<210> 32
<211> 87
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 32
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Trp Val
20 25 30
Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Val Thr Ile
35 40 45
Thr Ala Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu
50 55 60
Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Gln Gly
65 70 75 80
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
85
<210> 33
<211> 87
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 33
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Trp Ile
20 25 30
Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly Arg Val Thr Ile
35 40 45
Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val
50 55 60
Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Gln Gly
65 70 75 80
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
85
<210> 34
<211> 87
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 34
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Trp Val
20 25 30
Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Arg Phe Thr Ile
35 40 45
Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu
50 55 60
Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Gln Gly
65 70 75 80
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
85
<210> 35
<211> 87
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 35
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ser Glu Leu Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Trp Val
20 25 30
Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly Arg Phe Val Phe
35 40 45
Ser Leu Asp Thr Ser Val Ser Thr Ala Tyr Leu Gln Ile Ser Ser Leu
50 55 60
Lys Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Trp Gly Gln Gly
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Val Ser Ser
85
<210> 36
<211> 80
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala
20 25 30
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly
35 40 45
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp
50 55 60
Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
65 70 75 80
<210> 37
<211> 80
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 37
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
20 25 30
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly
35 40 45
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp
50 55 60
Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
65 70 75 80
<210> 38
<211> 80
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 38
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala
20 25 30
Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly
35 40 45
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp
50 55 60
Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
65 70 75 80
<210> 39
<211> 79
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 39
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro
20 25 30
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly
35 40 45
Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp
50 55 60
Val Ala Val Tyr Tyr Cys Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile
65 70 75
<210> 40
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 40
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu
1 5 10 15
<210> 41
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 41
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 42
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 42
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Phe Thr
1 5
<210> 43
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 43
Asn Tyr Leu Ile Glu
1 5
<210> 44
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 44
Leu Ile Tyr Pro Gly Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Asn Glu Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 45
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 45
Ile Tyr Tyr Gly Asn Arg Asp Tyr Gly Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 46
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 46
Met Glu Phe Val Pro Pro Met Val Asn Val Thr Arg Ser Glu Ala Ser
1 5 10 15
Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Gly Phe Tyr Pro Trp
20 25 30
Asn Ile Thr Leu Ser Trp Arg Gln Asp Gly Val Ser Leu Ser His Asp
35 40 45
Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu Pro Asp Gly Asn Gly Thr Tyr Gln
50 55 60
Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile Cys Gln Gly Glu Glu Gln Arg Phe Thr
65 70 75 80
Cys Tyr Met Glu His Ser Gly Asn His Ser Thr His Pro Val Pro Ser
85 90 95
Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly His His His His His His
100 105
<210> 47
<211> 101
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 47
Met Glu Phe Arg Ser Glu Ala Ser Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr Cys
1 5 10 15
Arg Ala Ser Gly Phe Tyr Pro Trp Asn Ile Thr Leu Ser Trp Arg Gln
20 25 30
Asp Gly Val Ser Leu Ser His Asp Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu
35 40 45
Pro Asp Gly Asn Gly Thr Tyr Gln Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile Cys
50 55 60
Gln Gly Glu Glu Gln Arg Phe Thr Cys Tyr Met Glu His Ser Gly Asn
65 70 75 80
His Ser Thr His Pro Val Pro Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly His
85 90 95
His His His His His
100
<210> 48
<211> 97
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 48
Met Glu Phe Arg Ser Glu Ala Ser Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr Cys
1 5 10 15
Arg Ala Ser Gly Phe Tyr Pro Trp Asn Ile Thr Leu Ser Trp Arg Gln
20 25 30
Asp Gly Val Ser Leu Ser His Asp Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu
35 40 45
Pro Asp Gly Asn Gly Thr Tyr Gln Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile Cys
50 55 60
Gln Gly Glu Glu Gln Arg Phe Thr Cys Tyr Met Glu His Ser Gly Asn
65 70 75 80
His Ser Thr His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly His His His His His
85 90 95
His
<210> 49
<211> 83
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 49
Met Glu Phe Arg Ser Glu Ala Ser Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr Cys
1 5 10 15
Arg Ala Ser Gly Phe Tyr Pro Trp Asn Ile Thr Leu Ser Trp Arg Gln
20 25 30
Asp Gly Val Ser Leu Ser His Asp Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu
35 40 45
Pro Asp Gly Asn Gly Thr Tyr Gln Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile Cys
50 55 60
Gln Gly Glu Glu Gln Arg Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly His His His
65 70 75 80
His His His
<210> 50
<211> 109
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 50
Met Glu Phe Val Pro Pro Met Val Asn Val Thr Cys Ser Glu Val Ser
1 5 10 15
Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Ser Phe Tyr Pro Arg
20 25 30
Asn Ile Thr Leu Thr Trp Arg Gln Asp Gly Val Ser Leu Ser His Asn
35 40 45
Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu Pro Asp Gly Asn Gly Thr Tyr Gln
50 55 60
Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile Arg Gln Gly Glu Glu Gln Arg Phe Thr
65 70 75 80
Cys Tyr Met Glu His Ser Gly Asn His Gly Thr His Pro Val Pro Ser
85 90 95
Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly His His His His His His
100 105
<210> 51
<211> 101
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 51
Met Glu Phe Cys Ser Glu Val Ser Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr Cys
1 5 10 15
Arg Ala Ser Ser Phe Tyr Pro Arg Asn Ile Thr Leu Thr Trp Arg Gln
20 25 30
Asp Gly Val Ser Leu Ser His Asn Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu
35 40 45
Pro Asp Gly Asn Gly Thr Tyr Gln Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile Arg
50 55 60
Gln Gly Glu Glu Gln Arg Phe Thr Cys Tyr Met Glu His Ser Gly Asn
65 70 75 80
His Gly Thr His Pro Val Pro Ser Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly His
85 90 95
His His His His His
100
<210> 52
<211> 97
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 52
Met Glu Phe Cys Ser Glu Val Ser Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr Cys
1 5 10 15
Arg Ala Ser Ser Phe Tyr Pro Arg Asn Ile Thr Leu Thr Trp Arg Gln
20 25 30
Asp Gly Val Ser Leu Ser His Asn Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu
35 40 45
Pro Asp Gly Asn Gly Thr Tyr Gln Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile Arg
50 55 60
Gln Gly Glu Glu Gln Arg Phe Thr Cys Tyr Met Glu His Ser Gly Asn
65 70 75 80
His Gly Thr His Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly His His His His His
85 90 95
His
<210> 53
<211> 83
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial sequence)
<400> 53
Met Glu Phe Cys Ser Glu Val Ser Glu Gly Asn Ile Thr Val Thr Cys
1 5 10 15
Arg Ala Ser Ser Phe Tyr Pro Arg Asn Ile Thr Leu Thr Trp Arg Gln
20 25 30
Asp Gly Val Ser Leu Ser His Asn Thr Gln Gln Trp Gly Asp Val Leu
35 40 45
Pro Asp Gly Asn Gly Thr Tyr Gln Thr Trp Val Ala Thr Arg Ile Arg
50 55 60
Gln Gly Glu Glu Gln Arg Glu Asn Leu Tyr Phe Gln Gly His His His
65 70 75 80
His His His

Claims (30)

1.一种分离的抗体，所述抗体特异性结合人MIC蛋白的alpha-3-结构域中包含氨基酸序列GDVL(SEQ ID NO:23)的表位。
2.一种分离的抗体，所述抗体特异性结合人MIC蛋白的alpha-3-结构域中包含氨基酸序列QQWGDVLP(SEQ ID NO:22)的表位。
3.如权利要求1或2所述的分离的抗体，其特征在于，所述抗体特异性结合可溶性MIC(sMIC)蛋白的胞外域，但不特异性结合与膜结合的MIC蛋白的胞外域。
4.如权利要求3所述的分离的抗体，其特征在于，所述sMIC蛋白是sMICA，所述与膜结合的MIC蛋白是与膜结合的MICA。
5.如权利要求3所述的分离的抗体，其特征在于，所述sMIC蛋白是sMICB，所述与膜结合的MIC蛋白是与膜结合的MICB。
6.如权利要求1-5中任一项所述的分离的抗体，其特征在于，所述抗体能够结合人前列腺癌细胞系DU-145产生的sMICB，平衡解离常数KD约为单克隆抗体5C9的KD或更低。
7.如权利要求1-6中任一项所述的分离的抗体，其特征在于，所述抗体包含SEQ ID NO:25所示轻链可变区氨基酸序列中的1、2或3个CDR，和包含SEQ ID NO:29所示重链可变区氨基酸序列中的1、2或3个CDR。
8.如权利要求7所述的分离的抗体，其特征在于，所述抗体包含：
CDR L1，包含氨基酸序列RSSQSIVHSNGNTYLE(SEQ ID NO:40)；
CDR L2，包含氨基酸序列KVSNRFS(SEQ ID NO:41)；
CDR L3，包含氨基酸序列FQGSHVPFT(SEQ ID NO:42)；
CDR H1，包含氨基酸序列NYLIE(SEQ ID NO:43)；
CDR H2，包含氨基酸序列LIYPGSGGTNYNEKFKG(SEQ ID NO:44)；和
CDR H3，包含氨基酸序列IYYGNRDYGMDY(SEQ ID NO:45)。
9.如权利要求1-8中任一项所述的分离的抗体，其特征在于，所述抗体包含含有SEQ IDNO:25所示氨基酸序列的轻链可变区VL，和含有SEQ ID NO:29所示氨基酸序列的重链可变区VH。
10.如权利要求1-9中任一项所述的分离的抗体，其特征在于，所述抗体包含选自人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4的人重链同种型。
11.如权利要求1-10中任一项所述的分离的抗体，其特征在于，包括单克隆抗体。
12.如权利要求1-11中任一项所述的分离的抗体，其特征在于，包括嵌合抗体。
13.如权利要求1-11中任一项所述的分离的抗体，其特征在于，包括人源化抗体。
14.如权利要求1-13中任一项所述的分离的抗体，其特征在于，包括抗体片段。
15.如权利要求1-14中任一项所述的分离的抗体，其特征在于，包括纯化的抗体。
16.一种药物组合物，包含权利要求1-15中任一项所述的分离的抗体和药学上可接受的运载体。
17.一种降低sMIC蛋白水平升高的对象中的sMIC蛋白水平的方法，包括给予有此需要的对象有效量的权利要求1-15中任一项所述的分离的抗体或权利要求16所述的药物组合物。
18.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述sMIC蛋白是sMICA。
19.如权利要求17所述的方法，其特征在于，所述sMIC蛋白是sMICB。
20.一种治疗具有疾病或病症的对象的方法，所述疾病或病症的特征在于MIC蛋白水平升高，包括给予有此需要的对象治疗有效量的权利要求1-15中任一项所述的分离的抗体或权利要求16所述的药物组合物。
21.如权利要求20所述的方法，其特征在于，所述疾病或病症是MIC+癌症或肿瘤。
22.如权利要求21所述的方法，其特征在于，所述MIC+癌症或肿瘤包括MICA+癌症或肿瘤。
23.如权利要求21所述的方法，其特征在于，所述MIC+癌症或肿瘤包括MICB+癌症或肿瘤。
24.如权利要求21-23中任一项所述的方法，其特征在于，所述MIC+癌症或肿瘤是脑癌、肝癌、胃癌、睾丸癌、宫颈癌、卵巢癌、阴道癌和外阴癌、黑色素瘤、鳞状细胞癌、恶性间皮瘤癌、口腔癌、头颈癌、咽喉癌、胸腺癌、胃肠道间质瘤(GIST)癌、鼻咽癌、食道癌、结肠癌、肛门癌、乳腺癌、肺癌、前列腺癌、阴茎癌、膀胱癌、胰腺癌、神经母细胞瘤、胶质瘤、肝细胞癌或肾癌。
25.如权利要求21-23中任一项所述的方法，其特征在于，所述MIC+癌症或肿瘤包括血液恶性肿瘤。
26.如权利要求25所述的方法，其特征在于，所述血液恶性肿瘤是白血病或淋巴瘤。
27.如权利要求25所述的方法，其特征在于，所述血液恶性肿瘤选自急性淋巴细胞白血病(ALL)、急性髓性白血病(AML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、慢性髓性白血病(CML)、急性单核细胞白血病(AMol)，淋巴瘤，例如霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤；或多发性骨髓瘤。
28.如权利要求17-27中任一项所述的方法，其特征在于，所述抗体与免疫调节趋化因子或细胞因子组合给予。
29.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述免疫调节趋化因子或细胞因子是IL-2、IL-7、IL-12、IL-15、IL-18、IL-21、GM-CSF、IFN-γ或CCL-21。
30.如权利要求28所述的方法，其特征在于，所述趋化因子或细胞因子是IL-12或IL-15。
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