CN110068643A - 一种基于液相色谱串联质谱测定医用食品中维生素的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及医用食品中维生素的测定技术领域，特别涉及一种基于液相色谱串联质谱测定医用食品中维生素的方法，包括水溶性维生素检测前处理；脂溶性维生素检测前处理；标准曲线的制备；液相色谱条件；质谱条件；测定法；空白试验；计算；检测方法灵敏度、准确度和精密度。本发明提供的技术方案带来的有益效果是：将现阶段的维生素的检测方法进行优化，完成省时、省力、省料、高效准确的方法研究，极大的提高特医食品的检验效率，不仅能推动企业自身的发展，同时对监管的方便有效也有极大的促进作用。实现医用食品14种维生素同时检测的标准化，大大缩短医用食品中维生素测定时间。

Description

一种基于液相色谱串联质谱测定医用食品中维生素的方法
技术领域
本发明涉及医用食品中维生素的测定技术领域，特别涉及一种基于液相色谱串联质谱测定医用食品中维生素的方法。
背景技术
目前，医用食品中维生素的检测主要是高效液相色谱法，且一种维生素一种检测方法，例如维生素A检测方法为GB 5413.9，维生素K1检测方法为GB 5413.10，检测同一种医用食品中多种维生素时就需要多次处理，不仅耗时而且浪费人力物力增加检测成本，不能满足GB 29922-2013种同时检测14种维生素的要求。
发明内容
为了解决现有技术的问题，本发明提供了一种省时、省力、省料、高效准确的基于液相色谱串联质谱测定医用食品中维生素的方法。
本发明所述技术方案如下：
一种基于液相色谱串联质谱测定医用食品中维生素的方法，具体包括以下步骤：
1.样品制备
1.1 水溶性维生素检测前处理
准确称取样品2g(精确至0.01g)混合均匀的样品于50mL棕色容量瓶中，加入40mL水，超声1min，冷却至室温，用水定容至刻度，摇匀；取10mL溶液于离心管中，加入20mL100％浓度的乙醇，摇晃混匀2min，3500r/min离心15min；上清液过0.22μm滤膜后供高效液相色谱-串联质谱法测定；
1.2 脂溶性维生素检测前处理
准确称取样品2g(精确至0.01g)经均质处理的试样于50mL具塞离心管中，加入60℃热水10mL溶解样品，加入0.4g抗坏血酸，20mL乙醇，10mL20％的氢氧化钾溶液，涡旋30s后放入恒温振荡器中，80℃避光水浴30min，取出放入冷水浴降温；冷却后溶液中加入20mL正己烷，振荡10min，6000r/min离心3min，取上层有机相，水相再加入20mL正己烷，合并有机相，净化；上清液过0.22μm滤膜后供高效液相色谱-串联质谱法测定；
2、标准曲线的制备
准确吸取适量的维生素混合标准工作液，用空白基质溶液将其稀释成质量浓度分别为0 μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L、150μg/L、200μg/L供高效液相色谱 -串联质谱法测定；
3、测定
3.1 液相色谱条件
(1)色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm(2.1*50mm)；
(2)流动相：A：5mM乙酸铵+0.1％甲酸水溶液，B：0.1％甲酸甲醇溶液；
(3)流速：0.4mL/min；
(4)柱温：40℃；
(5)进样量：10μL
3.2 质谱条件
(1)离子源：电喷雾离子源，正离子模式；
(2)扫描方式：多反应监测(MRM)；
(3)脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适的高纯气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；
(4)毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值优化至最优灵敏度；
(5)监测离子
3.3 测定法
测定样品溶液，分别得到样品中各维生素色谱峰面积，代入校正曲线计算含量；以超纯水作为空白样品，在相同条件下进行测定，计算空白样品中各维生素本底值，即得各样品中维生素含量；样品溶液中各维生素的响应值均应在仪器测定的线性范围之内；
4、空白试验
除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作；
5、计算
计算样品中各维生素的含量：
式中：X-样品中各维生素组分的含量，单位为克每千克(μg/100g)；c-样品浓度，单位为μg/mL；V-试样总体积，单位为毫升(mL)；f-稀释倍数；100-试样中量以每100g 计算的换算系数；m-试样质量，单位为克(g)；
6、检测方法灵敏度、准确度和精密度
6.1 灵敏度
6.2 准确度
6.3 精密度
本发明提供的技术方案带来的有益效果是：
将现阶段的维生素的检测方法进行优化，完成省时、省力、省料、高效准确的方法研究，极大的提高特医食品的检验效率，不仅能推动企业自身的发展，同时对监管的方便有效也有极大的促进作用。实现医用食品14种维生素同时检测的标准化，大大缩短医用食品中维生素测定时间。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例对本发明实施方式作进一步地详细描述。
一种基于液相色谱串联质谱测定医用食品中维生素的方法，具体包括以下步骤：
1 材料与方法
1.1 仪器设备
1.1.1 高效液相色谱-串联质谱仪(配电喷雾离子源)。
1.1.2 微孔滤头：0.22μm。
1.1.3 离心机：转速12000r/min。
1.2 试剂
以下所用的试剂，除特别注明外均为分析纯试剂，水应符合GB/T 6682规定的一级水。
4.1 维生素标准品(纯度＞98％)；
4.2 乙醇
4.3 氢氧化钾
4.4 正己烷
4.5 无水硫酸钠
4.6 甲酸铵：色谱纯
4.7 乙酸乙酯：色谱纯
4.8 甲醇：色谱纯
4.9 甲酸：色谱纯
4.10 标准储备溶液(100μg/mL)：准确称量适量的各维生素对照品溶解，分别配制成 100μg/mL的标准储备溶液，-20℃冰箱中保存，有效期3个月。
4.11 混合维生素标准储备溶液(1μg/mL)：于避光环境下分别准确量取适量的各维生素标准储备液，用流动相稀释并定容，配制成混合溶液，有效期1个月。
2 测定步骤
2.1 样品制备
2.1.1 水溶性维生素检测前处理
准确称取样品2g(精确至0.01g)混合均匀的样品于50mL棕色容量瓶中，加入40mL水，超声1min，冷却至室温，用水定容至刻度，摇匀。取10mL溶液于离心管中，加入20mL100％浓度的乙醇，摇晃混匀2min，3500r/min离心15min，上清液过0.22μm滤膜后供高效液相色谱-串联质谱法测定；
2.1.2 脂溶性维生素检测前处理
准确称取样品2g(精确至0.01g)经均质处理的试样于50mL具塞离心管中，加入60℃热水10mL溶解样品，加入0.4g抗坏血酸，20mL乙醇，10mL20％的氢氧化钾溶液，涡旋30s后放入恒温振荡器中，80℃避光水浴30min，取出放入冷水浴降温。
冷却后溶液中加入20mL正己烷，振荡10min，6000r/min离心3min，取上层有机相，水相再加入20mL正己烷，合并有机相，净化。
上清液过0.22μm滤膜后供高效液相色谱-串联质谱法测定。
2.2 标准曲线的制备
准确吸取适量的维生素混合标准工作液，用空白基质溶液将其稀释成质量浓度分别为0 μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L、150μg/L、200μg/L供高效液相色谱 -串联质谱法测定。
2.3 测定
2.3.1 液相色谱条件
(1)色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm(2.1*50mm)；
(2)流动相：A：5mM乙酸铵+0.1％甲酸水溶液，B：0.1％甲酸甲醇溶液，梯度淋洗见表1；
表1梯度淋洗表
(3)流速：0.4mL/min；
(4)柱温：40℃；
(5)进样量：10μL
2.3.2 质谱条件
(1)离子源：电喷雾离子源，正离子模式；
(2)扫描方式：多反应监测(MRM)；
(3)脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适的高纯气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；
(4)毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值优化至最优灵敏度；
(5)监测离子；
2.3.3 测定法
测定样品溶液，分别得到样品中各维生素色谱峰面积，代入校正曲线计算含量。以超纯水作为空白样品，在相同条件下进行测定，计算空白样品中各维生素本底值，即得各样品中维生素含量。样品溶液中各维生素的响应值均应在仪器测定的线性范围之内。
2.4 空白试验
除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作。
3、计算
按式(1)计算样品中各维生素的含量。
式中：
X-样品中各维生素组分的含量，单位为克每千克(μg/100g)；
c-样品浓度，单位为μg/mL；
V-试样总体积，单位为毫升(mL)；
f-稀释倍数；
100-试样中量以每100g计算的换算系数；
m-试样质量，单位为克(g)；
注：计算结果需扣除空白值，测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。
4 检测方法灵敏度、准确度和精密度
4.1 灵敏度
4.2 准确度
4.3 精密度
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (1)

1.一种基于液相色谱串联质谱测定医用食品中维生素的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：
S1.样品制备
1.1水溶性维生素检测前处理
准确称取样品2g混合均匀的样品于50mL棕色容量瓶中，加入40mL水，超声1min，冷却至室温，用水定容至刻度，摇匀；取10mL溶液于离心管中，加入20mL100％浓度的乙醇，摇晃混匀2min，3500r/min离心15min；上清液过0.22μm滤膜后供高效液相色谱-串联质谱法测定；
1.2脂溶性维生素检测前处理
准确称取样品2g经均质处理的试样于50mL具塞离心管中，加入60℃热水10mL溶解样品，加入0.4g抗坏血酸，20mL乙醇，10mL20％的氢氧化钾溶液，涡旋30s后放入恒温振荡器中，80℃避光水浴30min，取出放入冷水浴降温；冷却后溶液中加入20mL正己烷，振荡10min，6000r/min离心3min，取上层有机相，水相再加入20mL正己烷，合并有机相，净化；上清液过0.22μm滤膜后供高效液相色谱-串联质谱法测定；
S2、标准曲线的制备
准确吸取适量的维生素混合标准工作液，用空白基质溶液将其稀释成质量浓度分别为0μg/L、10.0μg/L、20.0μg/L、50.0μg/L、100μg/L、150μg/L、200μg/L供高效液相色谱-串联质谱法测定；
S3、测定
3.1液相色谱条件
(1)色谱柱：ACQUITY UPLC BEH C18 1.7μm；
(2)流动相：A：5mM乙酸铵+0.1％甲酸水溶液，B：0.1％甲酸甲醇溶液；
(3)流速：0.4mL/min；
(4)柱温：40℃；
(5)进样量：10μL
3.2质谱条件
(1)离子源：电喷雾离子源，正离子模式；
(2)扫描方式：多反应监测；
(3)脱溶剂气、锥孔气、碰撞气均为高纯氮气或其他合适的高纯气体；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求；
(4)毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量等电压值优化至最优灵敏度；
(5)监测离子
3.3测定法
测定样品溶液，分别得到样品中各维生素色谱峰面积，代入校正曲线计算含量；以超纯水作为空白样品，在相同条件下进行测定，计算空白样品中各维生素本底值，即得各样品中维生素含量；样品溶液中各维生素的响应值均应在仪器测定的线性范围之内；
S4、空白试验
除不加试样外，采用完全相同的测定步骤进行平行操作；
S5、计算
计算样品中各维生素的含量：
式中：X-样品中各维生素组分的含量，单位为克每千克；c-样品浓度，单位为μg/mL；V-试样总体积，单位为毫升；f-稀释倍数；100-试样中量以每100g计算的换算系数；m-试样质量，单位为克；
S6、检测方法灵敏度、准确度和精密度
6.1灵敏度
6.2准确度
6.3精密度。
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