CN110062634A - 非酒精性脂肪肝病患者中纤维化的抑制 - Google Patents

Abstract

本发明涉及抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者的肝纤维化的发展，包括向受试者施用大于300mg/天的3β‑花生酰氨基‑7α,12α‑二羟基‑5β‑胆甾烷‑24‑酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者的肝纤维化的发展。

Description

非酒精性脂肪肝病患者中纤维化的抑制

本申请要求2017年3月22日提交的美国临时申请No.62/475,132和2016年11月10日提交的美国临时申请No.62/420,009的权益。

背景技术

纤维化

纤维结缔组织的形成是由于损伤或炎症引起的组织损伤后正常愈合过程的一部分。在此过程中，包括巨噬细胞在内的活化免疫细胞刺激成纤维细胞的增殖和活化，成纤维细胞又沉积结缔组织。然而，结缔组织的异常或过度产生可能导致纤维物质的积聚，从而干扰组织的正常功能。即使在原始损伤愈合后，纤维化生长也可以增殖并侵入健康的周围组织。在修复或反应过程中发生的过度结缔组织的这种异常形成被称为纤维化。

肝脏纤维化，在本文中也称为肝纤维化，可由各种类型的慢性肝损伤(特别是如果涉及炎性成分)引起。自限性急性肝损伤(例如，急性病毒性疱疹病毒A)，即使在暴发时，也不一定会扭曲支架结构并因此通常不会引起纤维化，尽管肝细胞损失。然而，诸如慢性酒精中毒、营养不良、血色素沉着症以及接触毒药、毒素或药物等因素可能会因接触肝毒性化学物质而导致慢性肝损伤和肝纤维化。由手术或与机械性胆道梗阻相关的其他形式的损伤引起的肝脏瘢痕形成也可导致肝纤维化。

纤维化本身不一定是症状，但它可导致门静脉高压(其中瘢痕变形血液流经肝脏)或肝硬化(其中瘢痕导致正常肝结构的破坏和肝功能障碍)的发展。这些病理中的每一种的程度决定了肝纤维化病症的临床表现。例如，先天性肝纤维化影响门静脉分支，很大程度上保留了薄壁组织。结果是门静脉高压症而保留了肝细胞功能。

治疗

在其初始阶段，如果病因是可逆的(例如病毒清除)，肝纤维化可能会消退。因此，大多数可用的治疗方案旨在消除肝损伤的基础，例如消除慢性病毒性肝炎中的乙型肝炎病毒或丙型肝炎病毒、戒除酒精性肝病中的酒精、去除重金属(例如血色素沉着症中的铁或Wilson病中的铜)，以及胆道梗阻中的胆管减压。

旨在逆转纤维化的治疗通常对于长期使用而言毒性太大(例如皮质类固醇、青霉胺)或未证实有效(例如秋水仙碱)。存在于乳蓟中的水飞蓟素是一种用于治疗肝纤维化的流行替代药物，似乎是安全的但缺乏疗效。

潜在的治疗药物

已经报道了开发用于治疗肝病的特异性抗纤维化剂的尝试。例如，美国专利号8,729,046涉及使用核酸或核酸类似物的组合治疗组织纤维化的方法，包括肝纤维化。具体地，核酸或其类似物靶向miR23b簇的微小RNA。美国专利6,562,829公开了用于治疗肝纤维化的组合物以及使用和制造该组合物的方法，该组合物包含喹唑啉酮衍生物，优选卤夫酮。美国专利8,858,954涉及用于预防和治疗肝纤维化或非酒精性脂肪肝疾病的药物组合物，其包含50至90重量％的冬虫夏草菌丝体粉末和10至50重量％的浓缩黄芪粉末。

美国专利公开No.2015/359805涉及Farnesoid X受体(FXR)调节剂，其可用于治疗胆汁淤积性疾病，特别是其中C6含有乙基并且C24羧基被转化为硫酸盐基团的胆汁酸衍生物。建议治疗的疾病包括酒精性肝病、活体供肝移植肝再生、先天性肝纤维化、胆总管结石和肉芽肿性肝病。U.S.2008/187633涉及治疗和/或预防非酒精性肝炎(NASH)和/或原发性胆汁性肝硬化的方法，包括向有需要的受试者施用包含二十碳五烯酸或其衍生物的药物组合物。FXR激动剂，即改良胆汁酸的奥贝胆酸，正处于原发性胆汁性肝硬化的III期临床试验中。据报道，这种药物的使用通常与瘙痒等副作用有关。

熊去氧胆酸(UDCA，Ursodiol)是最常用于原发性胆汁性肝硬化的治疗剂。它是次级胆汁酸之一，是肠道细菌的代谢副产物。该药被认为有助于减少胆汁淤积并改善血液检查结果(肝功能检查)。然而，它对症状的影响很小，是否可以改善预后是有争议的。为了缓解通常由肝脏除去的循环中的胆汁酸引起的瘙痒，可以对原发性胆汁性肝硬化患者开具消胆胺(胆汁酸螯合剂)。该药剂可以帮助吸收肠道中的胆汁酸而防止其进入血流。替代药物包括康力龙、纳曲酮和利福平。

奥贝胆酸(OCA，Ocaliva)是一种半合成胆汁酸类似物，在特定肝脏和胃肠道疾病的2期和3期研究中正在开发。美国食品和药物管理局于2016年5月27日加速批准Ocaliva与熊去氧胆酸(UDCA)组合用于在对UDCA响应不足的成人中治疗原发性胆汁性胆管炎(PBC)，或作为无法耐受UDCA的成人的单一治疗剂。此外，在NASH患者中进行的2期试验表明，施用OCA减少了肝脏炎症和纤维化的标志物并增加了胰岛素敏感性。

WO2014/197777和WO2016/094570涉及公开为肌成纤维细胞转分化和活化的抑制剂的小分子化合物。建议用于治疗尤其是脂肪肝的药物和组合公开于例如WO 2016/112305和EP2632925(乙酰辅酶A羧化酶抑制剂)以及WO 2016/154258(双重PPARδ/γ激动剂)。建议将一些公开的化合物与各种其他药物组合使用。

许多患者对纤维化疾病的可用治疗不响应，并且长期治疗受到毒性和副作用的限制。因此，仍然需要开发旨在减少纤维化，特别是肝纤维化的治疗方式。对已确认的肝硬化和门静脉高压以及减轻纤维化的安全有效治疗的开发将是非常有益的。

发明内容

脂肪酸胆汁酸结合物

脂肪酸胆汁盐缀合物，也称为脂肪酸胆汁酸缀合物(FABAC)，是可用于改善与胆汁酸或胆固醇代谢相关的病症的合成分子家族。据信FABAC降低血液胆固醇浓度/降低肝脏脂肪水平并溶解胆结石(Gilat等,Hepatology 2003；38:436-442；和Gilat等,Hepatology2002；35:597-600)。FABAC包括3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸，也称为Aramchol。

美国专利6,384,024、6,395,722和6,589,946公开了某些FABAC及其在胆汁中溶解胆固醇胆结石和治疗动脉硬化的用途。这些和其他的FABAC在美国专利7,501,403、8,975,246和8,110,564中公开，用于治疗脂肪肝、降低血液胆固醇水平和治疗高血糖症、糖尿病、胰岛素抗性和肥胖症。Safadi等(Clin Gastroenterol Hepatol.2014年12月；12(12):2085-91)以及WO 2015/019358和WO 2015/019359公开了FABAC的进一步治疗用途。WO2015/083164中公开了某些FABAC的胺盐。

本发明涉及抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者的肝纤维化的发展，包括向受试者施用大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者中的肝纤维化的发展。

本发明提供Aramchol和包含Aramchol的药物，用于本发明的任何方法。

本发明涉及治疗有效量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐在患有非酒精性脂肪肝疾病且纤维化评分为零的人类受试者中抑制肝纤维化发展中的用途，包括给予受试者大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者的肝纤维化的发展。

本发明提供3β-花生酰氨基-7α，12α-二羟基-5β-胆烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，用于抑制患有非酒精性脂肪肝疾病且纤维化评分为零的人类受试者的肝纤维化的发展，包括向受试者施用大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而用于抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者中肝纤维化的发展，包括向受试者施用大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者中肝纤维化的发展。

本发明提供一种药物，其包含3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，用于抑制患有非酒精性脂肪肝疾病且纤维化评分为零的人类受试者的肝纤维化的发展，包括向受试者施用大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而用于抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者的肝纤维化的发展，包括向受试者施用大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者中肝纤维化的发展。

本发明提供一种药物包装(package)，其包含a)3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐；b)用于抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者中肝纤维化发展的说明书，包括给予受试者大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者中肝纤维化的发展。

通过以下描述和附图，本发明的其他目的、特征和优点将变得清楚。

附图说明

图1通过宏观评估证明了Aramchol对肝硬化的作用。图1A：盐水对照；图1B：在10周内每周两次用TAA(20mg/100克体重)处理；图1C：用TAA和Aramchol 1mg/kg处理；图1D：用TAA和Aramchol 5mg/kg处理。

图2通过显微镜评估(Masson Goldner染色后)证明Aramchol对肝纤维化的作用。图2A：平均纤维化评分(TAA-黑色，Aramchol-白色，OCA-灰色)；图2B：代表性样品(仅TAA-左；TAA和Aramchol 1mg/kg-中；TAA和Aramchol 5mg/kg-右)。

图3描述了Aramchol对LX-2人肝星状细胞中C0L1A1表达的影响。“Ctrl S1,S2和S3”代表三个独立实验中的对照组(盐水处理的细胞)；“A S1,S2和S3”代表在这些实验中用Aramchol处理的细胞的结果。

图4描述了Aramchol对LX-2人肝星状细胞中PPAR-γ表达的影响。“Ctrl S1,S2和S3”代表三个独立实验中的对照组(盐水处理的细胞)；“A S1,S2和S3”代表在这些实验中用Aramchol处理的细胞的结果。

图5描述了与DMSO对照相比，Aramchol对LX-2人肝星状细胞的胶原产生的影响。

图6描述了在0.1MCD饮食中Aramchol对肝脏脂肪变性的影响。图6A：使用苏丹III的组织学染色；图6B：苏丹III染色细胞的定量。

图7描述了在0.1MCD饮食中Aramchol对巨噬细胞活化和浸润的影响。图7A：组织学染色-F4/80和CD64；图7B：F4/80和CD64阳性细胞的定量。

图8描述了在0.1MCD饮食(组织学-天狼星红)中Aramchol对纤维化的影响。图8A：使用天狼星红的组织学染色；图8B：天狼星红染色细胞的定量。

图9描述了使用来自0.1MCD小鼠的肝提取物的Aramchol对胶原产生的影响。

图10描述了在0.1MCD饮食中Aramchol对0.1MCD小鼠中肝脏生物化学的影响。图10A：对照(灰色)和Aramchol处理的(黑色)0.1MCD小鼠肝脏中代谢物的定量；图10B：相关的肝脏生化途径的示意图。

具体实施方式

Aramchol

Aramchol在化学上命名为3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸，并由以下化学结构表示：

根据本发明的一个实施方案，本发明的组合、组合物、方法和包(package)可包含其游离酸形式的Aramchol。根据本发明的一个实施方案，Aramchol为其盐形式。盐可以是胺基盐。胺基盐可选自葡甲胺、赖氨酸和氨丁三醇盐。

本发明的其他实施方案涉及使用脂肪酸胆汁酸结合物(FABAC)或其盐的组合物、方法和包装。根据一些实施方案，FABAC具有式I：

W-X-G(I)

其中G代表胆汁酸或其胆汁盐基；W代表一个或两个具有6-22个碳原子的脂肪酸基团；X表示选自下组的键合成分：杂原子、直接C-C键和C＝C键。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

根据一些实施方案，键合基团选自：NH、P、S、O和直接C-C或C＝C键。每种可能性代表本发明的单独实施方案。根据一些实施方案，键合基团是NH。

根据一些实施方案，所述一个或两个脂肪酸基团中的每一个是选自下组的脂肪酸基团：花生酸、硬脂酸、山萮酸、棕榈酸、花生四烯酸，二十碳五烯酸和油酸。每种可能性代表本发明的单独实施方案。根据一些实施方案，所述一个或两个脂肪酸基团是花生酸的基团。每种可能性代表本发明的单独实施例。

根据一些实施方案，W代表两个脂肪酸基团，各自独立地包含6-22个碳原子；和其中每个所述脂肪酸基团独立地键合到选自下组的键合基团X：杂原子、直接C-C键和C＝C键。根据一些实施方案，W代表单个脂肪酸基团。

根据一些实施方案，胆汁酸选自：胆酸、熊去氧胆酸、鹅脱氧胆酸、脱氧胆酸、石胆酸及其衍生物。每种可能性代表本发明的单独实施方案。在另一个实施方案中，胆汁酸是胆酸、鹅脱氧胆酸或脱氧胆酸。在另一个实施方案中，胆汁酸不是熊去氧胆酸和石胆酸。根据一些实施方案，胆汁酸是胆酸。

适应症

本发明部分基于以下令人惊讶的发现：Aramchol不依赖于其报道的对脂肪肝和脂肪变性的活性发挥有效的抗纤维化作用，并且在各种实验模型中抑制纤维化的发展。具体地，用Aramchol(5mg/kg)治疗显著抑制体内硫代乙酰胺(TAA)模型中毒素诱导的肝硬化、坏死和肝纤维化的发展。还发现Aramchol出乎意料地优于奥贝胆酸(OCA)，其在测试的实验条件下没有引起这些参数的统计学显著降低。此外，Aramchol通过PPARγ上调显著降低LX-2人肝星状细胞中的C0L1A1表达。

因此，独立于其报道的NAFLD受试者的肝脏代谢活性，本文令人惊讶地发现Aramchol在治疗新患者群体和患者亚群方面是有效的，例如治疗患有NAFLD或NASH的患者还没有发展成纤维化。本发明有利地提供这些新患者群体的治疗，其具有增强的功效和/或安全性以及最小化的副作用。

本发明提供一种抑制患有非酒精性脂肪肝疾病并且纤维化评分为零的人类受试者中肝纤维化发展的方法，该方法包括给予受试者大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者中肝纤维化的发展。在一个实施方案中，所治疗的人类受试者患有非酒精性脂肪肝病(NAFLD)。

在一个实施方案中，所治疗的人类受试者受到非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的丙酮。

在一个实施方案中，人类受试者患有NAFLD但不患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。在一个实施方案中，人类受试者具有至少4的NAFLD活性(NAS)评分。在一个实施方案中，人类受试者具有至少5，至少6或至少7的NAFLD活性(NAS)评分。在一个实施方案中，人类受试者具有至少1的气球样变评分，至少1的炎症评分和至少1的脂肪变性评分。

在一个实施方案中，人类受试者患有NAFLD但不患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

在一个实施方案中，人类受试者患有II型糖尿病或前驱糖尿病。糖尿病前期需要以下3个标准之一：75g OGTT后的空腹血浆葡萄糖>100mg/dl(5.5mmol/l)或2hPG>140mg/dl(7.8mmol/l)或HbAlc>5.7％后。HbA1c可由研究人员自行决定重复。

在一个实施方案中，人类受试者具有高脂肪和高热量的饮食。如本文所用，高脂肪、高热量饮食每天含有至少4000卡路里，其中约50％来自脂肪。

在一个实施方案中，人类受试者对生活方式干预抵抗。

在一个实施方案中，人类受试者对饮食干预抵抗。

给药和剂型

根据一些实施方案，待给药的化合物(例如，Aramchol)是组合物(称为本发明的组合物)的形式，其包含治疗有效量的至少一种所述化合物。如本文所用，术语“有效量”是指能够减少和/或减轻如本文所述的病症或症状的化合物的量。当然，根据本发明施用的化合物的具体剂量将由围绕病例的特定情况确定，包括例如施用的化合物、施用途径、受试者的生理状态和严重性、正在治疗的病情。

本发明提供一种药物，其包含大于300mg的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)，用于给予人类受试者，包括任何上文所述的人类受试者。

在一个实施方案中，药物包含大于350mg的Aramchol。在一个实施方案中，药物包含350mg至1200mg的Aramchol。在一个实施方案中，药物包含400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg或1200mg的Aramchol。在一个实施方案中，药物包含400mg至1100mg、或500mg至1000mg、或600mg至900mg的Aramchol。在一个实施方案中，药物包含400mg或600mg的Aramchol。

在一个实施方案中，药物每天施用。本发明还提供3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)，其以大于300mg的日剂量用于给予人类受试者。在一个实施方案中，人类受试者是上文列举的任何人类受试者。

在一个实施方案中，Aramchol的日剂量大于350mg。在一个实施方案中，Aramchol的日剂量为350mg至1200mg。在一个实施方案中，Aramchol的日剂量为400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg或1200mg。在一个实施方案中，Aramchol的日剂量为400mg至1100mg、或500mg至1000mg、或600mg至900mg。在一个实施方案中，Aramchol的日剂量为每天400mg或600mg。

可以使用任何合适的途径将本发明的药物或Aramchol给予受试者。

根据一些实施方案，合适的施用途径可以是全身性途径。根据一些实施方案，给药是全身给药。根据一些实施方案，组合物被配制用于全身给药。

在本发明方法的另一个实施方案中，Aramchol是Aramchol游离酸的形式。在本发明方法的另一个实施方案中，Aramchol是胺基盐的形式。在某些特定的实施方案中，盐是葡甲胺、赖氨酸或氨丁三醇Aramchol盐。每种可能性代表本发明的单独实施方案。

根据另一个实施方案，全身给药是通过肠内途径进行的。根据另一个实施方案，通过肠内途径给药是口服给药。根据一些实施方案，组合物被配制用于口服给药。

因此，本发明提供通过向受试者施用Aramchol来治疗本申请中所述受试者的方法，其中每天向受试者施用至少350mg Aramchol。在一个实施方案中，每天向受试者施用350mg至1200mg的Aramchol。在一个实施方案中，每天向受试者施用400mg、500mg、600mg、700mg、800mg、900mg、1000mg、1100mg或1200mg的Aramchol。在一个实施方案中，每天向受试者施用400mg至1100mg、或500mg至1000mg、或600mg至900mg的Aramchol。在一个实施方案中，每天向受试者施用400mg或600mg的Aramchol。

在一个实施方案中，药物或Aramchol在早晨、下午或晚上施用。

在一个实施方案中，药物或Aramchol在进餐的同时或在30分钟内施用；

在一个实施方案中，膳食是早餐，午餐或晚餐。

在一个实施方案中，膳食是高脂肪膳食。高脂肪餐是一种膳食，其中约500至600卡路里是脂肪卡路里。

在一个实施方案中，膳食是高热量膳食。高热量膳食是一种约800至1000卡路里的膳食。

在一个实施方案中，药物或Aramchol与水一起施用。在一个实施方案中，药物或Aramchol与至少100或至少200mL的水一起施用。在一个实施方案中，Aramchol在至少52周、至少72周、至少96周、至少2年、至少3年或至少4年的过程中施用。

本发明涉及治疗有效量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐用于抑制患有非酒精性脂肪肝疾病并且纤维化评分为零的人类受试者中的肝纤维化发展的用途，包括向受试者施用大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者的肝纤维化的发展。

本发明提供3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，用于抑制患有非酒精性脂肪肝疾病且纤维化评分为零的人类受试者中肝纤维化的发展，包括给予受试者大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)，或其药学上可接受的盐，从而用于抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者的肝纤维化的发展，包括向受试者施用大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者的肝纤维化的发展。

本发明提供一种药物，其包含3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，用于抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者中肝纤维化发展，包括向受试者施用大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)，或其药学上可接受的盐，从而抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者的肝纤维化的发展，包括向受试者施用大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者中肝纤维化的发展。

本发明提供药物包装，其包含a)3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐；b)用于抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者中肝纤维化发展的说明书，包括给予受试者大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者的肝纤维化的发展。

根据一些实施方案，口服给药为硬或软明胶胶囊、丸剂、胶囊、包括包衣片剂的片剂、糖衣丸、酏剂、悬浮液、液体、凝胶、浆液或糖浆及其控释形式。因此，本发明提供了以片剂，胶囊或液体形式给予Aramchol的方法。

用于口服给药的合适载体是本领域熟知的。口服使用的组合物可以使用固体赋形剂制备，任选地研磨所得混合物，并在根据需要加入合适的助剂后加工颗粒混合物，以获得片剂或糖衣丸核心。合适的赋形剂的非限制性实例包括填充剂，例如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇，纤维素制剂，例如玉米淀粉、小麦淀粉、大米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基-纤维素和羧甲基纤维素钠，和/或生理学上可接受的聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。

如果需要，可以加入崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或海藻酸或其盐，例如海藻酸钠。可以配制用于分配器的例如明胶的胶囊和药筒，其含有化合物和合适的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。

用于口服给药的固体剂型包括但不限于胶囊、片剂、丸剂、粉剂和颗粒剂。在这种固体剂型中，活性化合物与至少一种惰性的药学上可接受的载体如蔗糖、乳糖或淀粉混合。正常情况下，这些剂型还可包含除惰性稀释剂以外的其他物质，例如润滑剂。在胶囊、片剂和丸剂的情况下，剂型还可包含缓冲剂。片剂和丸剂可另外用肠溶包衣制备。如本文所用，术语“肠溶包衣”是指控制消化系统内组合物吸收位置的包衣。用于肠溶包衣的材料的非限制性实例是脂肪酸、蜡、植物纤维或塑料。

用于口服给药的液体剂型可以进一步含有佐剂，例如润湿剂、乳化剂和悬浮剂，以及甜味剂、调味剂和芳香剂。

根据一些实施方案，明确排除用脂肪酸如二十碳五烯酸乙酯、二十碳五烯酸及其酰胺、盐和磷脂的伴随治疗。在其他实施方案中，排除了与胆汁酸如熊去氧胆酸和石胆酸的伴随治疗。在其他实施方案中，排除了与维生素D受体激动剂、乙酰辅酶A羧化酶抑制剂、双重PPARδ/γ激动剂和肌成纤维细胞转分化和激活抑制剂的伴随治疗。根据有利的实施方案，Aramchol或其药学上可接受的盐用作唯一的活性成分。

根据一些实施方案，组合物在延长的时期内以几种剂量施用，直至达到足够的反应。

如本文所公开的，发现Aramchol是一种具有意想不到效果的治疗剂，即使在作为单一治疗剂使用时，在缺乏辅助治疗时，也能够抑制纤维化的发展并降低星状细胞中肝硬化和胶原合成的可能性。因此，根据本发明方法的有利实施方案，Aramchol或其药学上可接受的盐作为唯一的活性成分施用。在另一个实施方案中，受试者是人。

患者结果

在一个实施方案中，Aramchol或包含Aramchol的药物的施用防止受试者的NAFLD活性(NAS)评分恶化。

在一个实施方案中，Aramchol或包含Aramchol的药物的施用防止受试者的脂肪变性、活化和纤维化(SAF)活性评分恶化。

在一个实施方案中，抑制肝纤维化的发展包括预防纤维化评分的恶化。在一个实施方案中，预防是在开始给予Aramchol后52、65、72或96周进行预防。

在一个实施方案中，预防是在开始给予Aramchol后2年、3年或4年预防。

在一个实施方案中，Aramchol或包含Aramchol的药物的施用改善了受试者的NAFLD活性(NAS)评分。

在一个实施方案中，在开始给予Aramchol或包含Aramchol的药物时，受试者的NAS评分为至少4，并且受试者的NAS评分的改善是至少2分的改善。

在一个实施方案中，Aramchol或包含Aramchol的药物的施用改善了受试者的脂肪变性、活化和纤维化(SAF)活性评分。

在一个实施方案中，受试者的SAF活性评分在Aramchol或包含Aramchol的药物的施用开始时为至少4，并且受试者的SAF活性评分的改善是至少2分的改善。

在一个实施方案中，改善是在开始给予Aramchol后52、65、72或96周的改善。

在一个实施方案中，改善是在开始给予Aramchol后2、3或4年内的改善。

在一个实施方案中，抑制肝纤维化的发展包括相对于未用Aramchol治疗的患者减少肝纤维化的进展。

在一个实施方案中，Aramchol或包含Aramchol的药物的施用抑制非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的进展。

在一个实施方案中，抑制NAFLD的进展包括相对于未用Aramchol治疗的患者预防进展或减少进展。

在一个实施方案中，人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并且Aramchol的施用抑制NASH的进展。

在一个实施方案中，抑制NASH进展包括相对于未用Aramchol治疗的患者预防进展或减少进展。

在一个实施方案中，人类受试者在给药开始时未患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并且Aramchol的施用抑制从非酒精性脂肪肝病(NAFLD)向NASH的进展；

在一个实施方案中，进展是在开始给予Aramchol后52、65、72或96周的进展。

在一个实施方案中，进展是在开始给予Aramchol后2、3或4年进展。

在一个实施方案中，人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并且Aramchol的施用使受试者中的NASH消退。

在一个实施方案中，NASH拆分包括具有0的气球样变评分和0或1的炎症评分的人类受试者。

在一个实施方案中，Aramchol或包含Aramchol的药物的施用在开始施用后52、65、72或96周在受试者中分解NASH。

在一个实施方案中，Aramchol或包含Aramchol的药物的施用在开始施用后2、3或4年内在受试者中分解NASH。

在一个实施方案中，相对于Aramchol给药开始时的水平，给予Aramchol或包含Aramchol的药物降低了受试者中肝脏甘油三酯的水平。

在一个实施方案中，Aramchol或包含Aramchol的药物的施用相对于Aramchol施用开始时的比例降低了受试者中肝脏甘油三酯与水的比率。

在一个实施方案中，肝脏甘油三酯与水的比率降低大于10％。

在一个实施方案中，肝甘油三酯与水的比率降低10％至40％。

在一个实施方案中，肝甘油三酯与水的比率降低15％至35％。

在一个实施方案中，肝甘油三酯与水的比率降低20％至30％。

在一个实施方案中，相对于给药开始时的水平或比例，Aramchol或包含Aramchol的药物的施用在受试者中：

a.降低血红蛋白AIC或HOMA-IR的水平；

b.降低纤维蛋白原、CK-18、C反应蛋白(CRP)、TNFα、IL-6和纤维化试验(NFS)的水平；

c.降低瘦素与adinopectin的比例；或

d.增加adinopectin水平；

在一个实施方案中，给予Aramchol或包含Aramchol的药物：

a.相对于在Aramchol给药开始时人类受试者体重，减少人类受试者的体重；

b.相对于在Aramchol给药开始时人类受试者腰围，减少人类受试者的腰围；或

c.相对于在Aramchol给药开始时人类受试者脂肪肝指数，减少人类受试者的脂肪肝指数。

在一个实施方案中，减少或增加是在开始施用后2、4、8、24、40、52、65、72或96周减少或增加。

在一个实施方案中，减少或增加是从开始施用开始的2、3或4年减少或增加。

因此，在各种实施方案中，考虑了有效实现上述结果的药物或Aramchol。在一个实施方案中，药物或Aramchol在开始给药后2、4、8、24、40、52、65、72或96周、或2年、3年或4年有效。

在另一个实施方案中，根据本发明的方法施用Aramchol或其药学上可接受的盐抑制在肝星状细胞中的胶原合成(例如，COL1A1表达)。在另一个实施方案中，根据本发明的方法施用Aramchol或其药学上可接受的盐增强了肝星状细胞中PPAR-γ的表达。

应当理解，在提供参数范围的情况下，本发明还提供该范围内的所有整数及其十分之一的数。例如，“0.2-5mg/kg/天”公开了0.2mg/kg/天、0.3mg/kg/天、0.4mg/kg/天、0.5mg/kg/天、0.6mg/kg/天直到5mg/kg/天的内容。

本文公开的每个实施例被认为适用于每个其他公开的实施例。因此，本文描述的各种元件的所有组合都在本发明的范围内。

呈现以下实施例以更全面地说明本发明的一些实施方案。然而，它们不应被解释为限制本发明的广泛范围。

实施例

以下提供实施例以便于更完整地理解本发明。以下实施例说明了制备和实施本发明的示例性模式。然而，本发明的范围不限于这些实施例中公开的具体实施方案，这些实施方案仅用于说明的目的。

实施例1-硫代乙酰胺(TAA)诱导的肝纤维化——用于肝硬化的模型

通过在10周内每周两次腹膜内注射TAA(20mg/100g体重)在Wistar大鼠中诱导肝纤维化。腹腔TAA的应用导致肝脏中心性坏死、转氨酶活性升高和肝纤维化强烈。治疗组还包括共同给予Aramchol(1或5mg/kg口服)或奥贝胆酸(OCA，5mg/kg)。还包括对照组的盐水处理的大鼠(没有施用TAA)。然后处死大鼠，并在Masson Goldner染色后肉眼观察肝脏的肝硬化和坏死病变的迹象，并在显微镜下观察。对每个样品测定以0-4的等级计算的纤维评分，其中0表示无纤维化，4表示晚期纤维化和肝硬化。

从图1-2中可以看出，用Aramchol(5mg/kg)治疗显著地防止了TAA诱导的纤维化。该治疗以剂量依赖性方式显著降低了坏死和肝硬化的发展(图1)，以及组织中的纤维化评分和胶原分布(图2)。相比之下，OCA没有引起这些参数的统计学显著降低。

因此，令人惊讶地发现Aramchol是有效的抗纤维化和抗肝硬化剂。还发现Aramchol出乎意料地优于OCA并且提供改善的、有效的肝纤维化治疗。

来自TAA中毒的肝硬化和门静脉高压可能最终导致急性肝衰竭和肝性脑病等相关病症的发展，并且TAA模型也用于评估这些现象。因此，如本文所公开的，在一些实施方案中，Aramchol也可用于预防急性或致命的肝衰竭和/或肝或门体系统脑病，例如毒素诱导的肝衰竭和/或肝性脑病。

实施例2-抑制星状细胞中胶原蛋白的合成

将LX2细胞(每孔150,000个细胞)接种在含有抗生素、谷氨酰胺和牛胎儿血清的DMEM培养基中。孵育24小时后，将培养基更换为0％血清并再培养16小时。然后，加入Aramchol(10mM)，24小时后用Trizol提取RNA。

令人惊讶的是，如图3和4中可见，通过PPARγ上调，Aramchol降低了LX-2人肝星状细胞中的COL1A1表达。

一致地，相对于DMSO对照，Aramchol显著下调LX-2人肝星状细胞中的胶原产生(图5)。同样，令人惊讶地发现Aramchol可特异性地有效减少星状细胞中胶原的产生。

实施例3-Aramchol在MCD饮食动物模型中减少确认的纤维化

下面描述的研究使用NASH的0.1％蛋氨酸和胆碱缺乏(0.1MCD)的饮食小鼠模型研究Aramchol的作用机制及其对纤维化的潜在影响。

向C57B1/6喂食甲硫氨酸和胆碱缺乏(MCD)的饮食和对照饮食，并在4周后处死。MCD饮食诱导转氨酶升高和肝组织学特征的改变，其特征在于脂肪变性、局部炎症、肝细胞坏死和纤维化。这些变化迅速发生，并且在形态上与在人类NASH中观察到的相似。在这项研究中，MCD饮食含有0.1％的蛋氨酸，以最大限度地减少和稳定体重减轻。在第二周结束时，在确认已建立的NASH后，通过管饲法口服给予Aramchol(5mg/Kg/天)或载体(n＝10，每种条件)给0.1MCD喂养的小鼠。对照饮食喂养的小鼠也用载体治疗相同的持续时间(n＝10)。在实验结束时，获得血液和肝脏样品。实验设计图如下所示：

该研究的结果显示：1)用Aramchol处理显著下调肝脏中的脂肪变性(图6)；2)用Aramchol处理显著下调/正常化肝脏中巨噬细胞的浸润和活化状态(图7)；3)Aramchol治疗显著下调肝脏纤维化/正常化(图8)；4)Aramchol显著下调肝脏中的胶原蛋白(图9)；5)Aramchol在0.1％MCD小鼠中显著上调谷胱甘肽并提高GSH/GSSG比率(图10)。

另外，Aramchol处理进一步降低了SCD1活性，这通过SCD1表达、FA(16：1)/FA(16：0)比率和单不饱和FA(MUFA)总含量的显著降低(其导致甘油二酯(DG)和TG的肝含量降低)得到证实。Aramchol处理改善了氧化应激，如GSH/GSSG比率的正常化、细胞氧化还原电位的生物标志物和包括oxLA的总oxFA含量的显著降低(其与人NASH中的肝损伤有关)所显示。

具体实施方式的前述描述将充分地揭示本发明的一般性质，其他人可以通过应用当前知识，容易地修改和/或适应各种应用，这些具体实施方式而无需过度实验且不脱离一般概念，因此，在所公开的实施例的等同物的含义和范围内，应当并且旨在理解这些改编和修改。应理解，本文采用的措辞或术语是出于描述的目的而非限制。用于执行各种公开的功能的装置、材料和步骤可以采用各种替代形式而不背离本发明。

实施例4

简要总结

本实验是一项多中心、IIb期、随机、双盲、安慰剂对照研究，旨在评估两种Aramchol剂量对18至75岁的受试者中的有效性和安全性，该受试者在进入研究前6个月期间进行肝活组织检查来确定患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并超重或肥胖以及糖尿病前期或II型糖尿病。

干预

药物：Aramchol

受试者将按如下方式使用Aramchol：

a.一片400mg的Aramchol和一片匹配的Aramchol安慰剂。

b.一片400mg的Aramchol和一片200mg的Aramchol。

c.两片Aramchol匹配安慰剂。早餐后30分钟内用一杯水(250毫升)口服片剂。

在研究期间，受试者可以连续3天省略研究药物。

其他名称：安慰剂

研究组

实验组：Aramchol 600mg

a.一片400mg的Aramchol和一片200mg的Aramchol

b.干预：药物：Aramchol

实验组：Aramchol 400mg

a.一片400mg的Aramchol和一片匹配的Aramchol安慰剂

b.干预：药物：Aramchol

安慰剂比较组

a.两片匹配的Aramchol安慰剂

b.干预：药物：Aramchol

招募人数

240

入选标准

男性或女性年龄18至75岁。

女性体重指数在25kg/m²至40kg/m²之间或腰围在88cm至200cm之间，男性在102cm至200cm之间。如果偏差超过上限，请咨询MRI中心，以确保机器适合患者。

已知II型糖尿病或根据美国糖尿病协会的糖尿病前期。糖尿病前期需要以下3个标准之一：75g OGTT后的空腹血浆葡萄糖>100mg/dl(5.5mmol/l)或2hPG>140mg/dl(7.8mmol/l)或HbAlc>5.7％后。HbA1c可由研究人员自行决定重复。

在筛选期间或在筛选访视前6个月内进行诊断性肝活检的组织学证实的脂肪性肝炎，通过中心实验室阅读载玻片确认。(脂肪变性≥1+炎症≥1+气球≥1)。总活动NAS得分为4或更高。

通过NMRS测量，肝脏中的肝脏脂肪浓度为5.5％或更高。

活检NAS评分为4分或以上。

正常的合成肝功能(血清白蛋白>3.2g/dl，INR 0.8-1.2，结合胆红素<35μmol/L)。

了解研究的性质和签署书面知情同意书。

在研究项目中对有潜力的女性进行负妊娠试验。

在整个研究期间(包括口服避孕药)以及在研究开始时进行阴性妊娠试验的具有潜在可能性的避孕儿童的女性。

高血压患者必须在筛选前至少2个月内通过稳定剂量的抗高血压药物进行良好控制。

如果在肝脏活检诊断前至少3个月停止或至少维持稳定剂量，可以包括之前接受过维生素E(>400lU/天)、多不饱和脂肪酸(>2g/天)或熊去氧胆酸或鱼油治疗的患者(并且在试用期间没有开始)。如果它们在活组织检查之前稳定至少12个月，则允许这些治疗剂量，并且在整个研究期间可以保持稳定。(允许使用低于上述量的剂量，不得有冲洗或稳定期限制)。

对于患有II型糖尿病的患者，必须控制血糖(糖基化血红蛋白A1c≤9％)，而在登记前6个月内任何HbA1c变化不应超过1.5％。如果患者自我监测血糖，则允许使用抗糖尿病药物治疗(排除16中提到的除外)。HbA1c可由研究人员自行决定重复。

排除标准

排除标准：

在随机化的时间患有除NASH以外的其他活动性(急性或慢性)肝病的患者(例如病毒性肝炎，除非在筛查前至少3年根除；遗传性血色素沉着症；Wilson病；α肝炎病毒缺乏症；酒精性肝病；药物性肝病)。

临床或组织学记录的肝硬化患者

在过去五年中已知的酒精和/或任何其他药物滥用或依赖。

除了糖尿病、神经系统、肺、内分泌、精神疾病、肿瘤性疾病或肾病综合征之外，已知的临床显著或存在临床意义的心血管、胃肠道、代谢、以及研究者认为可以排除在研究之外。

患有家族性(即遗传性)高甘油三酯血症和家族性(即遗传性)高胆固醇血症的患者。

已知干扰药物吸收分布、代谢或排泄的任何疾病或病症的历史或存在，包括胆盐代谢物(例如炎症性肠病(IBD)、既往肠道(回肠或结肠)手术、慢性胰腺炎、乳糜泻或以前的迷走神经切断术、正在进行的慢性便秘

患有心脏或脑起搏器的患者(即植入式神经装置)。

筛查前最后三个月的手术，包括金属装置的支架植入(例如膝盖，臀部等)

随机化前6个月内体重减轻超过5％。

肝活检5年内进行减肥手术的历史。

不受控制的动脉高血压。

怀孕和哺乳的妇女。

II型以外的糖尿病(I型，内分泌病，遗传综合征等)。

HIV感染的患者。

根据病史，每日酒精摄入量，女性>20克/天，男性>30克/天(平均每天)。

用其他抗糖尿病药物治疗：GLP-1受体激动剂和噻唑烷二酮类药物(TZDs)，除非在活组织检查前至少12个月开始，并且稳定剂量治疗6个月。在GLP-1受体激动剂停止的情况下，根据病史，应至少在活组织检查前6个月。

SGLT-2抑制剂、二甲双胍、贝特类、他汀类、胰岛素、DPP-4抑制剂和磺酰脲类，除非处方剂量在活组织检查前的最后6个月内保持稳定。

在筛选访视前12个月内，用丙戊酸、他莫昔芬、甲氨蝶呤、胺碘酮进行治疗，或用抗胆碱能药物、皮质类固醇、高剂量雌激素和四环素的慢性治疗。

用抗生素慢性治疗(例如利福昔辛)。

顺势疗法和/或替代疗法。在随机化前至少48小时，应在筛选期间停止任何治疗。

不受控制的甲状腺功能减退症定义为甲状腺刺激素>2倍正常上限(ULN)。在筛选前控制甲状腺功能障碍至少6个月是允许的。

肾功能不全患者eGFR<40。

原因不明的血清肌酸磷酸激酶(CPK)>正常上限(UNL)的3倍。有CPK升高原因的患者可在随机化前重复测量；CPK重新测试>3X ULN导致排除。

患有不适合进行NMRS的病症的患者(由PI或MRI设施确定)。

对Aramchol或片剂中的任何赋形剂过敏

对胆酸或胆汁酸螯合剂的超敏反应

详细描述

本研究是一项多中心、IIb期、随机、双盲、安慰剂对照研究，旨在评估两种Aramchol剂量对18至75岁受试者的疗效和安全性，该受试者在进入研究前6个月期间进行肝活组织检查来确定患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并超重或肥胖以及糖尿病前期或II型糖尿病。

符合条件的受试者将参加三个治疗组：Aramchol 400和600mg片剂组和安慰剂片剂，比例为2：2：1。

受试者将在研究地点进行11次预定就诊：筛选(随访1(第-4至0周))、基线(随访2(第0天))、随访3(第2周)、随访4(第4周)、随访5(第8周)、随访6(第12周)、随访7(第24周)、随访8(第32周)、随访9(第40周)和随访10(第52周至治疗结束/提前终止随访))。在完成研究治疗期后，受试者将在没有研究药物的情况下追踪13周的额外时间(直到随访11(第65周))。

在筛选期间，将通过血液测试、肝脏活组织检查和NMRS评估疾病的严重程度。

在研究期间，将进行以下评估：

a.每次研究随访都将测量生命体征。

b.将在筛选随访、24周、治疗结束/提前终止和第65周访问时进行身体检查。

将进行以下血液检查：在筛选随访、基线、第2、4、8、24、40、52和65周(追踪结束)期间进行全血细胞计数(CBC)，血清化学(包括电解质、肝酶、直接和总胆红素、葡萄糖、脂质谱、包括甘油三酯、胆固醇、HDL、LDL和VLDL、CPK、肌酐、尿素、白蛋白，碱性磷酸酶)，ESR和尿分析。在筛选随访期间将进行血清学(HBV、HCV和HIV)。凝血(纤维蛋白原、PT/INR、aPTT)将在筛选和基线、第24周、治疗结束/提前终止和第65周随访中测量。胰岛素(HOMA)将在筛选、第24周和治疗结束/提前终止就诊时进行测量。HbAlC将在筛选、第8周、第24周、第40周和治疗结束/提前终止就诊时进行测量。C反应蛋白、瘦素、Adlponectin、CK-18(M30和M65)、铁蛋白、PAI-1、IL-6、TNF-α、FGF-19、C4(7-α-羟基-4-胆固醇-3-酮)、血清胆汁酸、B-羟基丁酸盐和游离脂肪酸在基线随访和治疗结束时进行。在这些随访中采集的血液样本，将针对可能的生物标志物进行测试，包括但不限于Fetuine A和GDF15。在筛选随访期间将测量TSH、T3和T4。在筛选访问期间将对具有生育潜力的女性进行β-hCG。收集血清样本并保持冷冻直至研究结束，以防需要进行特殊调查。该样本将在筛选期间收集并访问10/提前终止。

在筛选、基线、第24周、治疗结束和第65周访视时测量体重和腰围。在筛选随访期间将测量高度。

在筛选访视期间，随访7(第24周)和治疗结束访问时将进行ECG。

在筛选和治疗结束时，所有受试者将进行两次NMR扫描。

只有在研究者认为有必要时才会进行FibroMax测试

在筛选和治疗结束访视期间进行肝脏活组织检查。筛查访问中的活组织检查只有在访问前<5个月内未进行时才进行。

代谢组学血液检测将在筛选，访问7和治疗结束/提前终止访问时进行。从一些同意的患者(约15名)中，将取肝脏活检样本进行分析。

内皮功能将在选定的部位进行。该测试将在基线访问期间进行，然后进行研究治疗并结束治疗/提前终止就诊。

在基线(随访2)、第4周(随访4)、第12周(随访6)、第24周(随访7)、第40周(随访9)、治疗结束(随访10)并追踪(随访11)时从在以色列的患者收集Aramchol谷水平的血液样本(给药前)。在墨西哥、美国和香港的选定地点，将在随访4(每个国家最多10个受试者)收集一份血液样本(给药前)，以测试人群(例如，非洲裔美国人、亚洲人、西班牙裔)之间的Aramchol血液水平差异。

用于基因分析的血液样本将在基线随访期间从所有同意的患者中获取，将被保持冷冻并且仅在研究结束时进行分析。

生活方式问卷将在所有随访中完成。

在整个研究过程中将监测不良事件。

在整个研究过程中将监测伴随药物。

电话联系将在第16、20、28、36、44和48周进行。一旦120名受试者在研究治疗下完成24周的随访期，将进行临时安全性分析。独立的DSMB将分析安全数据并建议继续采取行动。所有患者将继续在研究方案下进行治疗，直到知道分析结论。

安全性评估将包括治疗紧急AE的频率和严重程度，临床上显著的实验室异常，ECG变化和体检结果。

结果

测量的主要和次要结果(400毫克组)

通过磁共振波谱(MRS)测量，用400mg Aramchol治疗显著降低肝脏甘油三酯比率。

用磁力共振光谱法(MRS)测量，用400mg Aramchol治疗降低肝脏甘油三酯比率10-40％。

通过磁共振波谱法(MRS)测量，用400mg Aramchol治疗降低肝脏甘油三酯比率15％-35％。

通过磁共振波谱法(MRS)测量，用400mg Aramchol治疗降低肝脏甘油三酯比率20％-30％。

与使用安慰剂治疗的受试者相比，用400mg Aramchol治疗导致显著更高比例的受试者具有纤维化改善(即减少>或＝至1分)，且没有NASH恶化。

与使用安慰剂治疗的受试者相比，用400mg Aramchol治疗导致显著更高比例的受试者具有纤维化改善(即减少>或＝至1分)，且没有NASH恶化。与使用安慰剂治疗的受试者相比，改善比率为至少2。

与使用安慰剂治疗的受试者相比，用400mg Aramchol治疗导致显著更高比例的受试者具有NAS评分改善(即改善至少2分)，且纤维化评分没有恶化。

与使用安慰剂治疗的受试者相比，用400mg Aramchol治疗导致显著更高比例的受试者具有SAF活性评分改善(即改善至少2分)，且纤维化评分没有恶化。

与使用安慰剂治疗的受试者相比，用400mg Aramchol治疗导致显著更高比例的受试者具有NASH消退(气球样变评分为0，炎症为0或1)的受试者的比例显著更高，且没有纤维化恶化。

测量的探索性结果(400毫克组)

用400mg Aramchol治疗对受试者纤维化评分恶化的抑制显著高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的抑制。

对患有肝纤维化的受试者用400mg Aramchol治疗使受试者的纤维化评分显著高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

对患有1a期肝纤维化的受试者用400mg Aramchol治疗显著改善了受试者的纤维化评分，其高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

对患有1b期肝纤维化的受试者用400mg Aramchol治疗显著改善了受试者的纤维化评分，其高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

对患有1c期肝纤维化的受试者用400mg Aramchol治疗显著改善了受试者的纤维化评分，其高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

对患有2期肝纤维化的受试者用400mg Aramchol治疗显著改善了受试者的纤维化评分，其高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

对患有3期肝纤维化的受试者用400mg Aramchol治疗显著改善了受试者的纤维化评分，其高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

对患有4期肝纤维化的受试者用400mg Aramchol治疗显著改善了受试者的纤维化评分，其显著高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

对患有肝纤维化的受试者用400mg Aramchol治疗改善了受试者的SAF评分，高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用400mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致没有纤维化评分恶化的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用400mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致具有纤维化改善(即降低＞或＝至1)的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用400mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致具有纤维化改善(即降低＞或＝至1)而没有NASH恶化的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的受试者相比，用400mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致具有纤维化改善的受试者(即降低＞或＝至1)而没有NASH恶化的受试者的比例显著更高。与用安慰剂治疗的肝纤维化患者相比，改善率为至少2。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的患者相比，用400mg Aramchol治疗导致具有NAS评分改善(即改善至少2分)的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的患者相比，用400mg Aramchol治疗导致具有NAS评分改善(即改善至少2分)而纤维化评分没有恶化的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的患者相比，用400mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致具有SAF活性评分改善(即改善至少2分)的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的患者相比，用400mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致具有SAF活性评分改善(即改善至少2分)而纤维化评分没有恶化的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的患者相比，用400mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致具有NASH消退(气球样变为0，炎症为0或1)的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的患者相比，用400mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致具有NASH消退(气球样变为0，炎症为0或1)而纤维化评分没有恶化的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的患者相比，用400mg Aramchol治疗未患有肝纤维化的受试者导致纤维化评分没有恶化受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的患者相比，用400mg Aramchol治疗导致具有NAS评分改善(即改善至少2分)的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的患者相比，用400mg Aramchol治疗导致具有NAS评分改善(即改善至少2分)而纤维化评分没有恶化的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的患者相比，用400mg Aramchol治疗导致具有SAF活性评分改善(即改善至少2分)的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的患者相比，用400mg Aramchol治疗导致具有SAF活性评分改善(即改善至少2分)而纤维化评分没有恶化的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的患者相比，用400mg Aramchol治疗导致具有NASH消退(气球样变为0，炎症为0或1)的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的患者相比，用400mg Aramchol治疗导致具有NASH消退(气球样变为0，炎症为0或1)而纤维化评分没有恶化的受试者的比例显著更高。

测量的主要和次要结果(600毫克组)

通过磁共振波谱(MRS)测量，用600mg Aramchol治疗显著降低肝脏甘油三酯比率。

用磁力共振光谱法(MRS)测量，用600mg Aramchol治疗降低肝脏甘油三酯比率10-40％。

通过磁共振波谱法(MRS)测量，用600mg Aramchol治疗降低肝脏甘油三酯比率15％-35％。

通过磁共振波谱法(MRS)测量，用600mg Aramchol治疗降低肝脏甘油三酯比率20％-30％。

与使用安慰剂治疗的受试者相比，用600mg Aramchol治疗导致显著更高比例的受试者具有纤维化改善(即减少>或＝至1分)，且没有NASH恶化。

与使用安慰剂治疗的受试者相比，用600mg Aramchol治疗导致显著更高比例的受试者具有纤维化改善(即减少>或＝至1分)，且没有NASH恶化。与使用安慰剂治疗的受试者相比，改善比率为至少2。

与使用安慰剂治疗的受试者相比，用600mg Aramchol治疗导致显著更高比例的受试者具有NAS评分改善(即改善至少2分)，且纤维化评分没有恶化。

与使用安慰剂治疗的受试者相比，用600mg Aramchol治疗导致显著更高比例的受试者具有SAF活性评分改善(即改善至少2分)，且纤维化评分没有恶化。

与使用安慰剂治疗的受试者相比，用600mg Aramchol治疗导致显著更高比例的受试者具有NASH消退(气球样变评分为0，炎症为0或1)的受试者的比例显著更高，且没有纤维化恶化。

测量的探索性结果(600毫克组)

用600mg Aramchol治疗对受试者纤维化评分恶化的抑制显著高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的抑制。

对患有肝纤维化的受试者用600mg Aramchol治疗使受试者的纤维化评分显著高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

对患有1a期肝纤维化的受试者用600mg Aramchol治疗显著改善了受试者的纤维化评分，其高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

对患有1b期肝纤维化的受试者用600mg Aramchol治疗显著改善了受试者的纤维化评分，其高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

对患有1c期肝纤维化的受试者用600mg Aramchol治疗显著改善了受试者的纤维化评分，其高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

对患有2期肝纤维化的受试者用600mg Aramchol治疗显著改善了受试者的纤维化评分，其高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

对患有3期肝纤维化的受试者用600mg Aramchol治疗显著改善了受试者的纤维化评分，其高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

对患有4期肝纤维化的受试者用600mg Aramchol治疗显著改善了受试者的纤维化评分，其显著高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

对患有肝纤维化的受试者用600mg Aramchol治疗改善了受试者的SAF评分，高于基于Aramchol对受试者肝脏甘油三酯的作用所预期的评分。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用600mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致没有纤维化评分恶化的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用600mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致具有纤维化改善(即降低＞或＝至1)的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的受试者相比，用600mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致具有纤维化改善(即降低＞或＝至1)而没有NASH恶化的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的受试者相比，用600mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致具有纤维化改善的受试者(即降低＞或＝至1)而没有NASH恶化的受试者的比例显著更高。与用安慰剂治疗的肝纤维化患者相比，改善率为至少2。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的患者相比，用600mg Aramchol治疗导致具有NAS评分改善(即改善至少2分)的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的患者相比，用600mg Aramchol治疗导致具有NAS评分改善(即改善至少2分)而纤维化评分没有恶化的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的患者相比，用600mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致具有SAF活性评分改善(即改善至少2分)的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的患者相比，用600mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致具有SAF活性评分改善(即改善至少2分)而纤维化评分没有恶化的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的患者相比，用600mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致具有NASH消退(气球样变为0，炎症为0或1)的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的患有肝纤维化的患者相比，用600mg Aramchol治疗患有肝纤维化的受试者导致具有NASH消退(气球样变为0，炎症为0或1)而纤维化评分没有恶化的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的患者相比，用600mg Aramchol治疗未患有肝纤维化的受试者导致纤维化评分没有恶化受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的患者相比，用600mg Aramchol治疗导致具有NAS评分改善(即改善至少2分)的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的患者相比，用600mg Aramchol治疗导致具有NAS评分改善(即改善至少2分)而纤维化评分没有恶化的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的患者相比，用600mg Aramchol治疗导致具有SAF活性评分改善(即改善至少2分)的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的患者相比，用600mg Aramchol治疗导致具有SAF活性评分改善(即改善至少2分)而纤维化评分没有恶化的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的患者相比，用600mg Aramchol治疗导致具有NASH消退(气球样变为0，炎症为0或1)的受试者的比例显著更高。

与用安慰剂治疗的未患有肝纤维化的患者相比，用600mg Aramchol治疗导致具有NASH消退(气球样变为0，炎症为0或1)而纤维化评分没有恶化的受试者的比例显著更高。

讨论

基于本文所述的研究，令人惊讶地发现Aramchol是有效的抗纤维化和抗肝硬化剂。还发现Aramchol出乎意料地优于OCA，并且为肝纤维化提供了改进的有效治疗。因此，Aramchol可用于预防急性或致命的肝衰竭和/或肝或门体系统脑病，例如毒素诱导的肝衰竭和/或肝性脑病。

此外，还令人惊讶地发现Aramchol可有效逆转已确认的纤维化。Aramchol治疗通过减少脂质积累(苏丹红染色)、纤维化(天狼星红和SMA染色)和炎症(F4/80和CD64染色)来确定改善肝脏组织学。实际上，除了NASH的主要病理学外，Aramchol还对纤维化有影响，即脂肪变性和炎症。

本文提供的结果表明，Aramchol下调人星状细胞的胶原蛋白产生，Aramchol的作用是通过下调SCD 1和上调谷胱甘肽产生来介导的，而Aramchol对纤维化的作用是通过脂肪变性的下调来调节的。炎症以及直接通过下调星状细胞的胶原蛋白产生。总之，本文的信息支持如权利要求中所述的Aramchol在人类患者中的作用。

对于高于本文所述的剂量的Aramchol，预期其结果类似于实施例4中的400mg或600mg剂量的结果。

Claims (36)

1.一种抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者中肝纤维化发展的方法，包括：给予受试者大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，由此抑制所述受试者中肝纤维化的发展。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

3.根据权利要求2所述的方法，其中所述人类受试者的NAFLD活性(NAS)评分为至少4、至少5、至少6或至少7。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中所述人类受试者的气球样变评分为至少1，炎症评分为至少1，并且脂肪变性评分为至少1。

5.根据权利要求1所述的方法，其中所述人类受试者未患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)。

6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述人类受试者患有II型糖尿病或前驱糖尿病。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中每天向所述受试者施用350mg至1200mg的Aramchol。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中每天向所述受试者施用400mg或600mg的Aramchol。

9.根据权利要求1-8中任一项所述的方法，其中将所述Aramchol口服给药。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中将所述Aramchol在早晨、下午或晚上施用。

11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中将所述Aramchol用水给药、或与膳食同时给药或在膳食30分钟内给药；

优选地，其中所述膳食是早餐、午餐或晚餐；

更优选地，其中所述膳食是高脂肪膳食或高热量膳食。

12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述Aramchol在至少52周、至少72周、至少96周、至少2年、至少3年或至少4年的过程中施用。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述Aramchol的施用防止受试者的NAFLD活性(NAS)评分或受试者的脂肪变性、活化和纤维化(SAF)活性评分的恶化。

14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中抑制肝纤维化的发展包括预防纤维化评分的恶化。

15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中所述Aramchol的施用改善受试者的NAFLD活性(NAS)评分、或受试者的脂肪变性、活化和纤维化(SAF)活动评分。

16.根据权利要求15所述的方法，其中所述受试者的NAS评分在Aramchol给药开始时为至少4，并且所述受试者的NAS评分的改善是至少2分的改善，由多于一个参数贡献；

b)所述受试者的SAF活动评分在Aramchol给药开始时为至少4，并且所述受试者的SAF活动评分的改善为至少2分的改善。

17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中抑制肝纤维化的发展包括相对于未用Aramchol治疗的患者减少肝纤维化的进展。

18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中Aramchol的施用抑制非酒精性脂肪肝病(NAFLD)的进展。

19.根据权利要求17所述的方法，其中抑制NAFLD的进展包括相对于未用Aramchol治疗的患者预防进展或减少进展。

20.根据权利要求1-4和6-19中任一项所述的方法，其中所述人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并且Aramchol的施用抑制NASH的进展。

21.根据权利要求20所述的方法，其中抑制NASH的进展包括相对于未用Aramchol治疗的患者预防进展或减少进展。

22.根据权利要求5-15或17-19中任一项所述的方法，其中所述人类受试者在给药开始时未患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并且Aramchol的施用抑制非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)发展为NASH。

23.根据权利要求13-22中任一项所述的方法，其中所述预防、改善或进展是在开始给予Aramchol后52周、65周、72周或96周、或2年、3年或4年的预防、改善或进展。

24.根据权利要求1-4和6-21中任一项所述的方法，其中所述人类受试者患有非酒精性脂肪性肝炎(NASH)，并且Aramchol的施用使受试者中的NASH消退。

25.根据权利要求24所述的方法，其中NASH消退包括具有气球样变评分为0和炎症评分为0或1的人类受试者。

26.根据权利要求24或25所述的方法，其中Aramchol的给药在给药开始后52周、65周、72周或96周、或2年、3年或4年内在受试者中消退NASH。

27.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中，相对于通过MRS测量的开始施用Aramchol时的肝脏甘油三酯与水的比率，Aramchol的施用降低了受试者中肝脏甘油三酯与水的比率。

28.根据权利要求27所述的方法，其中肝脏甘油三酯与水的比率降低10％至40％。

29.根据权利要求1-28中任一项所述的方法，其中Aramchol的给药：

a)降低血红蛋白AIC或HOMA-IR的水平；

b)降低纤维蛋白原、CK-18、C反应蛋白(CRP)、TNFα、IL-6和纤维化试验(NFS)的水平；

c)降低瘦素与adinopectin的比例；或

d)相对于给药开始时的水平或比率，增加受试者中adinopectin的水平；

e)相对于在开始施用Aramchol时人类受试者的体重，降低人类受试者的体重；

f)相对于在开始施用Aramchol时人类受试者的腰围，减少人类受试者的腰围；或

g)相对于在开始施用Aramchol时人类受试者的脂肪肝指数，降低人类受试者的脂肪肝指数。

30.根据权利要求1-29中任一项所述的方法，其中所述人类受试者具有高脂肪和高热量的饮食；和/或抵抗生活方式干预或抵抗饮食干预。

31.根据权利要求1-30中任一项所述的方法，其中所述受试者未经Aramchol治疗。

32.根据权利要求31所述的方法，其中所述受试者未经NAFLD治疗。

33.治疗有效量的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐的用途，其用于抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者中肝纤维化发展，包括向受试者施用大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者中的肝纤维化的发展。

34.3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，其用于抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者中肝纤维化发展，包括给予受试者大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者中肝纤维化发展，包括向受试者施用大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者中的肝纤维化的发展。

35.包含3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐的药物，用于抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者中肝纤维化发展，包括给予受试者大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者中肝纤维化发展，包括向受试者施用大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者中的肝纤维化的发展。

36.一种药物包装，其包含a)3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐；b)用于抑制患有非酒精性脂肪肝病并且纤维化评分为零的人类受试者中肝纤维化发展的说明书，包括给予受试者大于300mg/天的3β-花生酰氨基-7α,12α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸(Aramchol)或其药学上可接受的盐，从而抑制所述受试者中的肝纤维化的发展。