JP2019537607A - 非アルコール性脂肪性肝疾患の患者における線維化の抑制 - Google Patents

Abstract

本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制することに関し、その対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与し、それにより、前記対象の肝線維症の発症を抑制することを含む。【選択図】なし

Description

本出願は、２０１７年３月２２日に出願された米国仮特許出願第６２／４７５、１３２号、および２０１６年１１月１０日に出願された米国仮特許出願第６２／４２０、００９号の利益を主張する。

線維症
線維状結合組織の形成は、損傷または炎症による組織損傷後の正常な治癒過程の一部である。この過程の間、マクロファージなどの活性化免疫細胞は、線維芽細胞の増殖および活性化を刺激し、次に、結合組織を沈着させる。しかし、結合組織の異常なまたは過剰な産生は、線維状物質の蓄積に繋がり得、その結果、組織の正常な機能を妨害する。元の損傷が治癒した後になっても、線維増殖は拡大し、健康な周囲組織を侵害し得る。修復または反応性過程で発生するこのような異常な過剰結合組織の形成は、線維化と呼ばれる。

肝臓の線維化は、本明細書では肝線維症とも呼ばれ、様々な種類の慢性肝臓損傷により、特に、炎症性要素が伴う場合に、引き起こされ得る。自己限定性の、急性肝損傷（例えば、急性ウイルス性肝炎Ａ）は、劇症型であっても、足場構造を変型させるとは限らず、したがって、通常、肝細胞が減少するにもかかわらず、線維症を生じない。しかし、慢性アルコール症、栄養障害、血色素症、および毒物、毒素または薬物への曝露などの因子は、肝細胞障害型の化学物質への曝露が原因で、慢性肝損傷および肝線維症をもたらす場合がある。手術または機械的な胆管閉塞に関連する他の形態の損傷により引き起こされる肝臓瘢痕もまた、肝線維症につながり得る。

線維症それ自体は、症候性とは限らないが、門脈圧亢進症、または肝硬変の発症に繋がり得る。門脈圧亢進症の場合は、瘢痕が肝臓を通る血流を歪ませ、また、肝硬変の場合は、瘢痕が正常な肝臓構造を破壊し、肝機能障害を生ずる。これらの病態のそれぞれの程度が、肝線維化傷害の臨床症状を決定する。例えば、先天性肝線維症は、門脈分岐部に影響を及ぼし、実質にはほとんど影響を与えない。結果は、門脈圧亢進症で、肝細胞機能には影響を与えない。

治療
その初期段階では、原因が可逆的な場合（例えば、ウイルスクリアランスにより）、肝線維症は、退行する。したがって、大部分の利用可能な治療選択肢は、慢性ウイルス性肝炎のＢ型肝炎ウイルスまたはＣ型肝炎ウイルスの除去、アルコール性肝疾患における禁酒、血色素症における鉄またはウィルソン病における銅などの重金属の除去、および胆管閉塞における胆管の除圧などにより肝損傷の根源を除去するように設計されている。

線維症を元に戻すことを目的とした治療は通常、長期使用すると毒性が強すぎる（例えば、副腎皮質ステロイド、ペニシラミン）または効果が証明されていない（例えば、コルヒチン）マリアアザミ中に存在するシリマリンは、肝線維症の治療によく使われる代替医薬であり、安全と思われるが、効力が劣る。

有望な治療薬
肝疾患の治療用の特定の抗線維化薬の開発の試みが報告されてきた。例えば、米国特許第８、７２９、０４６号は、核酸または核酸類似体の組み合わせを用いた、肝臓の線維化を含む組織の線維化を治療する方法に関する。具体的には、核酸またはその類似体は、ｍｉＲ２３ｂクラスターのマイクロＲＮＡを標的とする。米国特許第６、５６２、８２９号は、肝線維症を治療するための組成物および該組成物の使用および製造方法、キナゾリノン誘導体、好ましくはハロフジノンを含む組成物を開示している。米国特許第８、８５８、９５４号は、肝線維症または非アルコール性脂肪性肝疾患を予防および治療するための医薬組成物に関し、該組成物は、５０〜９０重量％の冬虫夏草菌糸体粉末、および１０〜５０重量％の濃縮レンゲソウ粉末を含む。

米国特許出願公開第２０１５／３５９８０５号は、胆汁鬱滞性疾患の治療に使用できるファルネソイドＸ受容体（ＦＸＲ）モジュレーター、特に、Ｃ６がエチルを含み、Ｃ２４カルボキシ基がサルフェート基に変換された胆汁酸誘導体に関する。治療されることが示唆された傷害には、アルコール性肝疾患、生体移植肝再生、先天性肝線維症、総胆管結石、および肉芽腫性肝疾患が含まれる。米国特許出願公開第２０１４／１８７６３３号は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）および／または原発性胆汁性肝硬変の治療および／または予防方法に関し、該方法は、エイコサペンタエン酸またはこれらの誘導体を含む医薬組成物を、それを必要としている対象に投与することを含む。改変胆汁酸であるＦＸＲアゴニストのオベチコール酸は、原発性胆汁性肝硬変のための第ＩＩＩ相臨床試験中である。この薬物の使用は、通常、そう痒症などの副作用が付随すると報告されている。

ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ、ウルソジオール）は、原発性胆汁性肝硬変の治療に最も頻繁に使われる。それは、二次胆汁酸の内の１つで、腸内細菌の代謝副産物である。この薬物は、胆汁うっ滞の低減を支援すると考えられており、血液検査結果（肝機能検査）を改善する。しかし、症状に対しては最小限の効果しかなく、予後が改善するかどうかは議論の余地がある。通常は肝臓により除去される循環中の胆汁酸が原因のそう痒を緩和するために、コレスチラミン（胆汁酸封鎖剤）を原発性胆汁性肝硬変患者に対し処方し得る。この試薬は、血流中に再入するのではなく、排出するように、腸中での胆汁酸の吸収を助け得る。代わりの試薬には、スタノゾロール、ナルトレキソンおよびリファンピシンが挙げられる。

オベチコール酸（ＯＣＡ、Ｏｃａｌｉｖａ）は、半合成胆汁酸類似体であり、特定の肝臓および消化管状態用として、２相および３相臨床試験で開発中である。ＦＤＡは、２０１６年５月２７日にＯｃａｌｉｖａに対し、ウルソデオキシコール酸（ＵＤＣＡ）に不十分な応答を有する成人について、またはＵＤＣＡに耐容性のない成人の単一療法剤として、ＵＤＣＡと組み合わせた原発性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）の治療用として、迅速承認を与えた。さらに、ＮＡＳＨ患者の第２相試験は、ＯＣＡの投与が肝炎および線維症のマーカーを低減し、インスリン感受性を高めることを示した。

国際公開第２０１４／１９７７３８号および同第２０１６／０９４５７０号は、筋線維芽細胞分化転換および活性化の阻害剤として開示された小分子化合物に関する。特に脂肪肝に治療用として示唆された薬物および組み合わせが、例えば、国際公開第２０１６／１１２３０５号および欧州特許第２６３２９２５号（アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ阻害剤）ならびに国際公開第２０１６／１５４２５８号（二重ＰＰＡＲデルタ／ガンマアゴニスト）で開示された。これらの開示化合物の内のいくつかが、種々の他の薬物と組み合わせて使用されることが示唆された。

多くの患者は、線維性障害の利用可能な治療に応答せず、長期治療は、毒性および副作用により限定されている。したがって、線維症、特に肝線維症を低減させることを目的とした治療法の開発に対する必要性が残されている。既発症の肝硬変および門脈圧亢進症のための、ならびに線維症を弱めるための安全で効果的な治療薬の開発は、極めて有益であろう。

脂肪酸胆汁酸コンジュゲート
脂肪酸胆汁酸塩コンジュゲートは、脂肪酸胆汁酸コンジュゲート（Ｆａｔｔｙ Ａｃｉｄ Ｂｉｌｅ Ａｃｉｄ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）（ＦＡＢＡＣ）とも呼ばれ、胆汁酸またはコレステロール代謝に関連する状態を改善するために使用され得る合成分子のファミリーである。ＦＡＢＡＣは、血中コレステロール濃度を下げ、肝脂肪レベルを低減し、胆石を溶解すると考えられている（Ｇｉｌａｔ ｅｔ ａｌ．、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２００３；３８：４３６−４４２；ａｎｄ Ｇｉｌａｔ ｅｔ ａｌ．、Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ ２００２；３５：５９７−６００）。ＦＡＢＡＣは、アラムコールとしても知られる、３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸を含む。

米国特許第６、３８４、０２４号、同第６、３９５、７２２号、同第６、５８９、９４６号は、特定のＦＡＢＡＣおよびコレステロール胆汁中の胆石の溶解および動脈硬化症の治療におけるそれらの使用を開示している。これらおよび追加のＦＡＢＡＣは、米国特許第７、５０１、４０３号、同第８、９７５、２４６号および同第８、１１０、５６４号で、脂肪肝の治療における、血中コレステロールレベルの低減におけるおよび高血糖、糖尿病、インスリン抵抗性および肥満症の治療における使用に関して開示された。ＦＡＢＡＣのさらなる治療的使用は、Ｓａｆａｄｉ ｅｔ ａｌ．（Ｃｌｉｎ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ Ｈｅｐａｔｏｌ．２０１４ Ｄｅｃ；１２（１２）：２０８５−９１）および国際公開第２０１５／０１９３５８号および同第２０１５／０１９３５９号で開示されている。特定のＦＡＢＡＣのアミン塩は、国際公開第２０１５／０８３１６４号で開示されている。

本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制することに関し、その対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与し、それにより、前記対象の肝線維症の発症を抑制することを含む。

本発明は、本発明の方法のいずれかで使用するためのアラムコールおよびアラムコールを含む薬物を提供する。

本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するための治療有効量の３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩の使用に関し、その対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与し、それにより、前記対象の肝線維症の発症を抑制することを含む。

本発明は、対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するために、３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を提供し、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するために、その対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与し、それにより前記対象の肝線維症の発症を抑制することを含む。

本発明は、対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するために、３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を含む薬物を提供し、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するために、その対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与し、それにより前記対象の肝線維症の発症を抑制することを含む。

本発明は、（ａ）３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩；および（ｂ）非アルコール性脂肪性肝疾患に罹患し、線維症スコア０を有するヒト対象の肝線維症の発症の抑制のための、その対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与し、それにより、前記対象の肝線維症の発症を抑制するための使用説明書を含む医薬品パッケージを提供する。

本発明の他の目的、特徴および利点は、以下の説明と図面から明らかとなろう。

肉眼での評価による肝硬変に対するアラムコールの効果を示す。図１Ａ−生理食塩水対照； 図１Ｂ−ＴＡＡ（２０ｍｇ／１００ｇ体重）で１０週間にわたり週２回処理； 図１Ｃ−ＴＡＡおよびアラムコール１ｍｇ／ｋｇによる処理； 図１Ｄ−ＴＡＡおよびアラムコール５ｍｇ／ｋｇによる処理。 顕微鏡での評価（マッソンゴールドナー染色後）による肝線維症に対するアラムコールの効果を示す。図２Ａ−平均線維化スコア（ＴＡＡ−黒色、アラムコール−白色、ＯＣＡ−灰色）； 図２Ｂ−代表的試料（ＴＡＡのみ−左；ＴＡＡおよびアラムコール１ｍｇ／ｋｇ−中央；ＴＡＡおよびアラムコール５ｍｇ／ｋｇ−右）。 ＬＸ−２ヒト肝臓星状細胞中のＣＯＬ１Ａ１発現に対するアラムコールの効果を示す。「Ｃｔｒｌ Ｓ１、Ｓ２およびＳ３」は、３種の別々の実験における対照（生理食塩水処理細胞）を表す；「Ａ Ｓ１、Ｓ２およびＳ３」は、これらの実験におけるアラムコール処理細胞の結果を表す。 ＬＸ−２ヒト肝臓星状細胞中のＰＰＡＲ−γ発現に対するアラムコールの効果を示す。「Ｃｔｒｌ Ｓ１、Ｓ２およびＳ３」は、３種の別々の実験における対照（生理食塩水処理細胞）を表す；「Ａ Ｓ１、Ｓ２およびＳ３」は、これらの実験におけるアラムコール処理細胞の結果を表す。 ＬＸ−２ヒト肝臓星状細胞からのコラーゲン産生に対するアラムコールの効果を、ＤＭＳＯ対照と比較して、示す。 ０．１ＭＣＤ食の場合の脂肪肝に対するアラムコールの効果を示す。図６Ａ−スダンＩＩＩを用いた組織染色； 図６Ｂ−スダンＩＩＩ染色細胞の定量化。 ０．１ＭＣＤ食の場合のマクロファージ活性化および浸潤に対するアラムコールの効果を示す。図７Ａ−組織染色−Ｆ４／８０およびＣＤ６４ 図７Ｂ−ＣＤ６４陽性細胞の定量化。 図７Ｃ−Ｆ４／８０陽性細胞の定量化。 ０．１ＭＣＤ食の場合の線維症に対するアラムコールの効果を示す（組織像−シリウスレッド）。図８Ａ−シリウスレッドを用いた組織染色； 図８Ｂ−シリウスレッド染色細胞の定量化。 ０．１ＭＣＤマウス由来の肝臓抽出物を用いて、コラーゲン産生に対するアラムコールの効果を示す。 ０．１ＭＣＤマウスの肝臓生化学に対するアラムコールの効果を示す。図１０Ａ−対照（灰色）およびアラムコール処理（黒色）０．１ＭＣＤマウスの肝臓中の代謝物の定量化； 図１０Ｂ−関連する肝臓生化学的経路の概略図。

アラムコール
アラムコールは、化学名３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸であり、次の化学構造により表される：

本発明の一実施形態では、本発明の組み合わせ、組成物、方法およびパッケージは、遊離酸型のアラムコールを含み得る。本発明の一実施形態では、アラムコールはその塩型である。塩は、アミン系塩であってよい。アミン系塩は、メグルミン、リシンおよびトロメタミン塩からなる群から選択し得る。

本発明の他の実施形態は、脂肪酸胆汁酸コンジュゲート（ＦＡＢＡＣ）、またはその塩を使用した組成物、方法およびパッケージに関する。いくつかの実施形態では、ＦＡＢＡＣは、式Ｉである：
Ｗ−Ｘ−Ｇ （Ｉ）
式中、Ｇは、胆汁酸またはその胆汁酸塩ラジカルを表し；Ｗは、１種または２種の、６〜２２個の炭素原子を有する脂肪酸ラジカルを表し；およびＸは、ヘテロ原子、直接Ｃ−Ｃ結合およびＣ＝Ｃ結合からなる群より選択される結合メンバーを表す。それぞれの可能性は、本発明の別の実施形態となる。

いくつかの実施形態では、結合メンバーは、ＮＨ、Ｐ、Ｓ、Ｏおよび直接Ｃ−Ｃ結合またはＣ＝Ｃ結合からなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別の実施形態となる。いくつかの実施形態では、結合メンバーはＮＨである。

いくつかの実施形態では、前記１種または２種の脂肪酸ラジカルのそれぞれは、アラキジル酸、ステアリン酸、ベヘン酸、パルミチン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸およびオレイン酸からなる群より選択される脂肪酸のラジカルである。それぞれの可能性は、本発明の別の実施形態となる。いくつかの実施形態では、前記１種または２種の脂肪酸ラジカルは、アラキジル酸である。それぞれの可能性は、本発明の別の実施形態となる。

いくつかの実施形態では、Ｗは、６〜２２個の炭素原子をそれぞれ独立に含む２種の脂肪酸ラジカルを表し；それぞれの前記脂肪酸ラジカルは、ヘテロ原子、直接Ｃ−Ｃ結合およびＣ＝Ｃ結合からなる群より選択される結合メンバーＸに独立に結合される。いくつかの実施形態では、Ｗは、単一脂肪酸ラジカルを表す。

いくつかの実施形態では、胆汁酸は、コール酸、ウルソデオキシコール酸、ケノデオキシコール酸、デオキシコール酸、リトコール酸およびこれらの誘導体からなる群より選択される。それぞれの可能性は、本発明の別の実施形態となる。別の実施形態では、胆汁酸は、コール酸、ケノデオキシコール酸、またはデオキシコール酸である。別の実施形態では、胆汁酸は、ウルソデオキシコール酸およびリトコール酸以外のものである。いくつかの実施形態では、胆汁酸は、コール酸である。

適応症
本発明は、報告された脂肪肝および脂肪症に対する作用とは別に、アラムコールが効力の高い抗線維化効果を発揮し、種々の実験モデルにおいて線維症の発症を抑制するという意外な発見に、一部は基づいている。具体的には、アラムコール（５ｍｇ／ｋｇ）による治療は、インビボチオアセタミド（ＴＡＡ）モデルで、毒素誘導による肝硬変、壊死および肝線維症の発症を有意に抑制した。アラムコールはまた、意外にも、オベチコール酸（ＯＣＡ）よりすぐれていることが明らかになった。ＯＣＡは、試験した実験条件下で、これらのパラメーターの統計的に有意な低減を誘導しなかった。さらに、アラムコールは、ＰＰＡＲγの上方制御によりＬＸ−２ヒト肝臓星状細胞中のＣＯＬ１Ａ１発現を有意に低減させた。

したがって、ＮＡＦＬＤの対象の肝臓代謝に対する報告された作用とは別に、アラムコールは、驚くべきことに、まだ線維症を発症していないＮＡＦＬＤまたはＮＡＳＨの患者の治療などの、新規患者集団および患者亜集団の治療に効果的であることが本明細書で明らかにされる。本発明は、これらの新規患者集団の治療を高い効力および／または安全性および最小の副作用で提供するという利点がある。

本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患に罹患し、線維症スコア０を有するヒト対象の肝線維症の発症を抑制するための方法を提供し、該方法は、その対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与し、それにより、前記対象の肝線維症の発症を抑制することを含む。
ある実施形態では、治療されるヒト対象は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）を罹患している。

ある実施形態では、治療されるヒト対象は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）を罹患している。

ある実施形態では、治療されるヒト対象は、ＮＡＦＬＤを罹患しているが、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は罹患していない。ある実施形態では、ヒト対象は、少なくとも４のＮＡＦＬＤ活性（ＮＡＳ）スコアを有する。ある実施形態では、ヒト対象は、少なくとも５、少なくとも６、または少なくとも７のＮＡＦＬＤ活性（ＮＡＳ）スコアを有する。ある実施形態では、ヒト対象は、少なくとも１のバルーニングスコア、少なくとも１の炎症スコア、および少なくとも１の脂肪症スコアを有する。

ある実施形態では、治療されるヒト対象は、ＮＡＦＬＤを罹患しているが、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）は罹患していない。

ある実施形態では、３人のヒト対象がＩＩ型糖尿病または糖尿病前症に罹患している。糖尿病前症には次の３つの判定基準の内の１つが必要である：空腹時血糖値＞１００ｍｇ／ｄｌ（５．５ｍｍｏｌ／ｌ）または７５ｇ ＯＧＴＴ後の２ｈＰＧ＞１４０（７．８ｍｍｏｌ／ｌ）ｍｇ／ｄｌまたはＨｂＡ１ｃ＞５．７％。ＨｂＡ１ｃは、試験責任医師の裁量で反復測定できる。

ある実施形態では、ヒト対象は、高脂肪および高カロリー食を摂取する。本明細書で使用される場合、高脂肪、高カロリー食は、少なくとも１日当たり４０００カロリーであり、その約５０％は脂肪由来である。

ある実施形態では、ヒト対象は、ライフスタイル介入に対し抵抗性である。

ある実施形態では、ヒト対象は、食事介入に対し抵抗性である。

投与および剤形
いくつかの実施形態では、投与される化合物（例えば、アラムコール）は、治療有効量の少なくとも１種の前記化合物を含む組成物（本発明の組成物と呼ばれる）の形態である。本明細書で使用される場合、「有効量」という用語は、本明細書に記載の障害または症状を軽減および／または弱めることができる化合物の量を意味する。本発明により投与される化合物の特定の投与量は、無論、例えば、投与される化合物、投与経路、対象の生理学的状態、および治療される状態を含む、特定の周辺環境により決定されるであろう。

本発明は、本明細書で前述のいずれかのヒト対象を含むヒト対象への投与に使用するための、３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）を含む薬物を提供する。

ある実施形態では、薬物は、３５０ｍｇのアラムコールを含む。ある実施形態では、薬物は、３５０ｍｇ〜１２００ｍｇのアラムコールを含む。ある実施形態では、薬物は、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、または１２００ｍｇのアラムコールを含む。ある実施形態では、薬物は、４００ｍｇ〜１１００ｍｇ、または５００ｍｇ〜１０００ｍｇ、または６００ｍｇ〜９００ｍｇのアラムコールを含む。ある実施形態では、薬物は、４００ｍｇまたは６００ｍｇのアラムコールを含む。

ある実施形態では、薬物は、毎日投与される。

本発明はまた、３００ｍｇを超える一日量でヒト対象への投与に使用するための、３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）を提供する。ある実施形態では、ヒト対象は、本明細書で前述のいずれかのヒト対象である。

ある実施形態では、アラムコールの一日量は、３５０ｍｇを超える。ある実施形態では、アラムコールの一日量は、３５０ｍｇ〜１２００ｍｇである。ある実施形態では、アラムコールの一日量は、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、または１２００ｍｇである。ある実施形態では、アラムコールの一日量は、４００ｍｇ〜１１００ｍｇ、または５００ｍｇ〜１０００ｍｇ、または６００ｍｇ〜９００ｍｇである。ある実施形態では、アラムコールの一日量は、１日当たり４００ｍｇまたは６００ｍｇである。

任意の好適な経路を用いて、本発明の薬物またはアラムコールを対象に投与してよい。

いくつかの実施形態では、好適な投与経路は、全身性経路であり得る。いくつかの実施形態では、投与は、全身投与である。いくつかの実施形態では、組成物は、全身投与用に処方される。

本発明の方法の別の実施形態では、アラムコールはアラムコール遊離酸の形態である。本発明の方法の別の実施形態では、アラムコールはアミン系塩の形態である。ある特定の実施形態では、塩はメグルミン、リシンまたはトロメタミンアラムコール塩である。それぞれの可能な形態は、本発明の別の実施形態となる。

別の実施形態では、全身投与は、腸内経路を介する。別の実施形態では、腸内経路による投与は、経口投与である。いくつかの実施形態では、組成物は、経口投与用に製剤される。

したがって、本発明は、アラムコールを対象に投与することにより、本出願で記載の対象を治療する方法を提供し、１日当たり少なくとも３５０ｍｇのアラムコールが対象に投与される。ある実施形態では、１日当たり３５０ｍｇ〜１２００ｍｇのアラムコールが対象に投与される。ある実施形態では、１日当たり４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、７００ｍｇ、８００ｍｇ、９００ｍｇ、１０００ｍｇ、１１００ｍｇ、または１２００ｍｇのアラムコールが対象に投与される。ある実施形態では、１日当たり、４００ｍｇ〜１１００ｍｇ、または５００ｍｇ〜１０００ｍｇ、または６００ｍｇ〜９００ｍｇのアラムコールが対象に投与される。ある実施形態では、１日当たり４００ｍｇまたは６００ｍｇのアラムコールが対象に投与される。

ある実施形態では、薬物またはアラムコールが午前、午後、または夕方に投与される。

ある実施形態では、薬物またはアラムコールが食事と同時に、または食事の３０分以内に、投与される。

ある実施形態では、食事は、朝食、昼食、または夕食である。

ある実施形態では、食事は、高脂肪食である。高脂肪食は、約５００〜６００カロリーが脂肪カロリーである食事である。

ある実施形態では、食事は、高カロリー食である。高カロリー食は、約８００〜１０００カロリーの食事である。

ある実施形態では、薬物またはアラムコールが水と共に投与される。ある実施形態では、薬物またはアラムコールが少なくとも１００または少なくとも２００ｍＬの水と共に投与される。

ある実施形態では、アラムコールは、少なくとも５２週、少なくとも７２週、少なくとも９６週、少なくとも２年、少なくとも３年、または少なくとも４年にわたって投与される。

本発明は、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するための、治療有効量の３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩の使用に関し、その対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与し、それにより、前記対象の肝線維症の発症を抑制することを含む。

本発明は、対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するために、３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を提供し、それにより、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するために、その対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与し、それにより前記対象の肝線維症の発症を抑制することを含む。

本発明は、対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するために、３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を含む薬物を提供し、それにより、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するために、その対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与し、それにより前記対象の肝線維症の発症を抑制することを含む。

本発明は、（ａ）３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩；および（ｂ）非アルコール性脂肪性肝疾患に罹患し、線維症スコア０を有するヒト対象の肝線維症の発症の抑制のための、その対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与し、それにより、前記対象の肝線維症の発症を抑制するための使用説明書を含む医薬品パッケージを提供する。

いくつかの実施形態では、経口投与は、硬ゼラチンカプセルまたは軟ゼラチンカプセル、丸薬、カプセル剤、被覆錠剤を含む錠剤、糖衣錠、エリキシル剤、懸濁剤、液剤、ゲル剤、スラリーまたはシロップ剤、およびこれらの徐放性の製剤の形態である。したがって、本発明は、錠剤、カプセル剤、または液剤の形態のアラムコールの投与方法を提供する。

経口投与用の好適な担体は当該技術分野で周知である。経口使用のための組成物は、固体の賦形剤を使用し、得られた混合物を必要に応じて粉砕し、錠剤または糖衣錠コアを得るために、必要に応じて好適な補助剤を添加した後、顆粒の混合物を処理して作製することができる。適切な賦形剤の非限定的例には、ラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖などの増量剤、セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボメチルセルロース、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの生理学的に許容可能なポリマーが挙げられる。

必要に応じ、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩、例えば、アルギン酸ナトリウムなどの崩壊剤を加えてよい。ディスペンサーに使用される、例えば、ゼラチン製のカプセルおよびカートリッジは、化合物および好適な粉末基剤、例えば、ラクトースまたはデンプンの粉末混合物を含めて製剤し得る。

経口投与用の固形剤形には、限定されないが、カプセル剤、錠剤、丸薬、散剤、および粒剤が挙げられる。このような固形剤形では、活性化合物は少なくとも１種の不活性な薬学的に許容可能な担体、例えば、スクロース、ラクトースまたはデンプンなどと混合される。このような剤形はまた、通常の実施方法と同じく、不活性希釈剤以外の追加の物質、例えば、滑沢剤を含むことができる。カプセル剤、錠剤および丸剤の場合、剤形は緩衝剤も含み得る。錠剤および丸剤はさらに、腸溶コーティングを用いて調製することができる。本明細書で使用される場合、用語の「腸溶コーティング」は、消化器系内で組成物吸収の位置を制御するコーティングを意味する。腸溶コーティングに使われる材料の非限定的例は、脂肪酸、ワックス、植物繊維またはプラスチックである。

経口投与用の液体剤形は、湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、甘味料、香味料、および芳香剤などのアジュバントをさらに含んでもよい。

いくつかの実施形態では、エイコサペンタン酸エチル、エイコサペンタエン酸、ならびにこれらのアミド、塩およびリン脂質などの脂肪酸との併用療法は、明示的に除外される。他の実施形態では、ウルソデオキシコール酸およびリトコール酸などの胆汁酸との併用療法は、除外される。他の実施形態では、ビタミンＤ受容体アゴニスト、アセチル−ＣｏＡカルボキシラーゼ阻害剤、二重ＰＰＡＲデルタ／ガンマアゴニスト、および筋線維芽細胞分化転換および活性化の阻害剤との併用療法は除外される。有利な実施形態では、アラムコールまたはその薬学的に許容可能な塩は、単独の有効成分として使用される。

いくつかの実施形態では、組成物は、いくつかの投与量で、十分な応答が達成されるまで、長期間にわたり投与される。

本明細書で開示されるように、アラムコールは、意外にも、補助療法の非存在下で単独治療薬として使用した場合でも、線維症の発症を抑制し、肝硬変および星状細胞中のコラーゲン合成の可能性を低減することができる強力な治療薬であることが明らかになった。したがって、本発明の方法の有利な実施形態では、アラムコールまたはその薬学的に許容可能な塩は、単独の有効成分として投与される。別の実施形態では、対象は、ヒトである。

患者の転帰
ある実施形態では、アラムコールまたはアラムコールを含む薬物の投与は、対象のＮＡＦＬＤ活性（ＮＡＳ）スコアの悪化を防止する。

ある実施形態では、アラムコールまたはアラムコールを含む薬物の投与は、対象の脂肪症、活動性および線維症（ＳＡＦ）スコアの悪化を防止する。

ある実施形態では、肝線維症の発症を抑制することは、線維症スコアの悪化の防止を含む。

ある実施形態では、防止は、アラムコールの投与の開始から５２、６５、７２、または９６週での防止である。

ある実施形態では、防止は、アラムコールの投与の開始から２、３、または４年での防止である。

ある実施形態では、アラムコールまたはアラムコールを含む薬物の投与は、対象のＮＡＦＬＤ活性（ＮＡＳ）スコアを改善する。

ある実施形態では、対象のＮＡＳスコアは、アラムコールまたはアラムコールを含む薬物の投与開始時に少なくとも４であり、対象のＮＡＳスコアの改善は、少なくとも２ポイントの改善である。

ある実施形態では、アラムコールまたはアラムコールを含む薬物の投与は、対象の脂肪症、活動性および線維症（ＳＡＦ）スコアを改善する。

ある実施形態では、対象のＳＡＦスコアは、アラムコールまたはアラムコールを含む薬物の投与開始時に少なくとも４であり、対象のＳＡＦスコアの改善は、少なくとも２ポイントの改善である。

ある実施形態では、改善は、アラムコールの投与の開始から５２、６５、７２、または９６週での改善である。

ある実施形態では、改善は、アラムコールの投与の開始から２、３、または４年での改善である。

ある実施形態では、肝線維症の発症の抑制は、アラムコールで治療されていない患者に比べて、肝線維症の進行を低減させることを含む。

ある実施形態では、アラムコールまたはアラムコールを含む薬物の投与は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の進行を抑制する。

ある実施形態では、ＮＡＦＬＤ進行の抑制は、アラムコールで治療されていない患者に比べて、進行の防止、または進行の低減を含む。

ある実施形態では、ヒト対象は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に罹患し、アラムコールの投与は、ＮＡＳＨの進行を抑制する。

ある実施形態では、ＮＡＳＨ進行の抑制は、アラムコールで治療されていない患者に比べて、進行の防止、または進行の低減を含む。

ある実施形態では、ヒト対象は、投与の開始時には、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に罹患しておらず、アラムコールの投与は、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）からＮＡＳＨへの進行を抑制する。

ある実施形態では、進行は、アラムコールの投与の開始から５２、６５、７２、または９６週での進行である。

ある実施形態では、進行は、アラムコールの投与の開始から２、３、または４年での進行である。

ある実施形態では、ヒト対象は、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に罹患しており、アラムコールの投与は、対象のＮＡＳＨを消失させる。

ある実施形態では、ＮＡＳＨの消失は、０のバルーニングスコア、および０または１の炎症スコアを有するヒト対象を含む。

ある実施形態では、アラムコールまたはアラムコールを含む薬物の投与は、投与開始から５２、６５、７２、または９６週でのＮＡＳＨの消失である。

ある実施形態では、アラムコールまたはアラムコールを含む薬物の投与は、投与開始から２、３、または４年でのアラムコールによる対象のＮＡＳＨの消失を含む。

ある実施形態では、アラムコールまたはアラムコールを含む薬物の投与は、対象の肝臓トリグリセリドのレベルを、アラムコールの投与開始時のレベルに比べて、下げる。

ある実施形態では、アラムコールまたはアラムコールを含む薬物の投与は、対象の肝臓トリグリセリドの水に対する比率を、アラムコールの投与開始時の比率に比べて、小さくする。

ある実施形態では、肝臓トリグリセリドの水に対する比率を１０％超低減する。

ある実施形態では、肝臓トリグリセリドの水に対する比率を１０％〜４０％低減する。

ある実施形態では、肝臓トリグリセリドの水に対する比率を１５％〜３５％低減する。

ある実施形態では、肝臓トリグリセリドの水に対する比率を２０％〜３０％低減する。

ある実施形態では、アラムコールまたはアラムコールを含む薬物の投与は、投与の開始時のレベルまたは比率に比べて、対象の：
ａ．ヘモグロビンＡ１ＣまたはＨＯＭＡ−ＩＲのレベルを低減する；
ｂ．フィブリノーゲン、ＣＫ−１８、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦα、ＩＬ６および線維症試験（ＮＦＳ）のレベルを低減する；
ｃ．レプチンのアジノペクチンに対する比率を低減する；または
ｄ．アジノペクチンのレベルを高める。

ある実施形態では、アラムコールまたはアラムコールを含む薬物の投与は：
ａ．アラムコールの投与の開始時のヒト対象の体重に比べて、ヒト対象の体重を低減する；
ｂ．アラムコールの投与の開始時のヒト対象の胴回りに比べて、ヒト対象の胴回りを低減する；または
ｃ．アラムコールの投与の開始時のヒト対象の脂肪肝指数に比べて、ヒト対象の脂肪肝指数を低減する。

ある実施形態では、低減または増加は、アラムコールの投与の開始から２、４、８、２４、４０、５２、６５、７２、または９６週での低減または増加である。

ある実施形態では、低減または増加は、アラムコールの投与の開始から２、３、または４年での低減または増加である。

したがって、種々の実施形態では、薬物またはアラムコールは、上記転帰を達成するのに効果的であることが意図されている。
ある実施形態では、薬物またはアラムコールは、アラムコールの投与の開始から２、４、８、２４、４０、５２、６５、７２、もしくは９６週、または２年、３年、もしくは４年で効果的である。

別の実施形態では、本発明の方法によるアラムコールまたはその薬学的に許容可能な塩の投与は、肝臓星状細胞中でのコラーゲン合成（例えば、ＣＯＬ１Ａ１発現）を抑制する。別の実施形態では、本発明の方法によるアラムコールまたはその薬学的に許容可能な塩の投与は、肝臓星状細胞中のＰＰＡＲ−γ発現を高める。

パラメーターの範囲が与えられる場合、その範囲内の全ての整数、およびその１０分の１もまた、本発明により提供されることは理解されよう。例えば、「０．２〜５ｍｇ／ｋｇ／日」は、０．２ｍｇ／ｋｇ／日、０．３ｍｇ／ｋｇ／日、０．４ｍｇ／ｋｇ／日、０．５ｍｇ／ｋｇ／日、０．６ｍｇ／ｋｇ／日など、５．０ｍｇ／ｋｇ／日までの開示である。

本明細書で開示のそれぞれの実施形態は、開示された他の各実施形態のそれぞれにも適用可能であることが意図されている。したがって、本明細書に記載の各種要素の全ての組み合わせは、本発明の範囲内にある。

本発明のいくつかの実施形態をより完全に説明するために、以下の実施例が提供される。しかし、これらの実施例は、いかなる観点からも、本発明の広い範囲を制限するものと解釈されるべきではない。

実施例
実施例は、本発明のより完全な理解を容易にするために以下に提供されている。以下の実施例は、例示方式により本発明の作製および実施について示す。しかし、本発明の範囲は、例示のみを目的とするこれらの実施例で開示される特定の実施形態に限定されるものではない。

実施例１−チオアセタミド（ＴＡＡ）誘導線維症−肝硬変モデル
ＴＡＡ（２０ｍｇ／１００ｇ体重）の週２回、１０週にわたる腹腔内注射により、肝線維症をウィスターラットで誘導した。ＴＡＡの腹腔内適用は、肝臓小葉中心壊死、アミノ基転移酵素活性上昇および堅牢な肝線維症を生じる。治療群には、さらにアラムコール（１または５ｍｇ／ｋｇ経口）またはオベチコール酸（ＯＣＡ、５ｍｇ／ｋｇ）の同時投与を含めた。対照群の生理食塩水処理ラット（ＴＡＡ投与なし）をさらに含めた。その後、ラットを屠殺し、肝臓の肝硬変および壊死性病変の徴候を目視で観察し、マッソンゴールドナー染色後に、顕微鏡で観察した。０〜４のスケールで計算した線維症スコアを、それぞれの試料に対し決定した。この場合、０は線維症なしで、４は進行型線維症および肝硬変を示す。

図１〜２からわかるように、アラムコール（５ｍｇ／ｋｇ）により治療は、ＴＡＡ誘導線維症を有意に防いだ。治療は、壊死および肝硬変の発症を有意に低減し（図１）、線維化スコアおよび組織中のコラーゲン分布を有意に用量依存的に低減した。対照的に、ＯＣＡは、これらのパラメーターの統計的に有意な低減を誘導しなかった。

したがって、アラムコールは、意外にも、強力な抗線維化および抗肝硬変剤であることが明らかになった。アラムコールはまた、意外にも、ＯＣＡより優れており、肝線維症に対する改善された効果的な治療を提供することも明らかになった。

ＴＡＡ中毒由来の肝硬変および門脈圧亢進症は、最終的に、急性肝不全および肝性脳症などの関連状態の発症に繋がる場合があり、ＴＡＡモデルはまた、これらの事象の評価にも使用される。したがって、本明細書で開示のように、アラムコールはまた、いくつかの実施形態では、急性または致命的肝不全および／または肝性脳症または門脈体循環性脳症、例えば、毒素による肝不全および／または肝性脳症を防止するために使用し得る。

実施例２−星状細胞中のコラーゲン合成の抑制
ＬＸ２細胞（１５０、０００個の細胞／ウエル）を抗生物質、グルタミンおよびウシ胎仔血清含有ＤＭＥＭ培地に播種した。２４時間のインキュベーション後、培地を０％血清に変更し、さらに追加の１６時間にわたりインキュベートした。その後、アラムコール（１０ｍＭ）を加え、２４時間後、ＲＮＡをトリゾールで抽出した。

驚くべきことに、図３および４からわかるように、ＬＸ−２ヒト肝臓星状細胞中のＣＯＬ１Ａ１発現は、ＰＰＡＲγの上方制御を介して、アラムコールにより低減された。

常に、アラムコールは、ＤＭＳＯ対照と比較して、ＬＸ−２ヒト肝臓星状細胞中のコラーゲン産生を有意に下方制御する（図５）。この場合も、アラムコールは、意外にも、特に星状細胞中のコラーゲンの産生を低減させるのに効果的であることが明らかになった。

実施例３−アラムコールは、ＭＣＤ食動物モデルの既発症線維症を低減する
以下に記載の試験は、０．１％メチオニンおよびコリン欠乏（０．１ＭＣＤ）食ＮＡＳＨマウスモデルを用いて、アラムコールの作用機序および線維症に対するその潜在的作用を調査する。

Ｃ５７Ｂｌ／６にメチオニンおよびコリン欠乏（ＭＣＤ）食および対照食を与え、４週後屠殺した。ＭＣＤ食は、アミノトランスフェラーゼ上昇および脂肪症、局所炎症、肝細胞壊死および線維症を特徴とする肝臓の組織学的特徴の変化を誘導する。これらの変化は、急速に起こり、ヒトＮＡＳＨで観察されるものと形態学的に類似である。この調査では、ＭＣＤ食は、０．１％のメチオニンを含め、減量を最小限にし、安定させた。第２週の終わりに、既発症ＮＡＳＨの確認後、０．１ＭＣＤ摂取マウスを経管栄養によりアラムコール（５ｍｇ／ｋｇ／日）またはビークル（各条件、ｎ＝１０）で経口処理した。対照食摂取マウスはまた、同じ時間にわたりビークルで処理された（ｎ＝１０）。実験の終了時点で、血液および肝臓試料を取得した。実験計画の図を以下に示す：

調査からの結果は、以下を示した：（１）アラムコールによる処理は、肝臓中の脂肪症を有意に下方制御する（図６）；（２）アラムコールによる処理は、肝臓中のマクロファージの浸潤および活性化状態を有意に下方制御／正常化する（図７）；（３）アラムコールによる処理は、肝臓の線維症を有意に下方制御／正常化する（図８）；（４）アラムコールは、肝臓中のコラーゲンを有意に下方制御する（図９）；および（５）アラムコールは、グルタチオンを有意に下方制御し、０．１％ＭＣＤマウス中のＧＳＨ／ＧＳＳＧ比を上昇させる（図１０）。

さらに、アラムコール処理は、ＳＣＤ１活性を低減し、これは、ＦＡ（１６：１）／ＦＡ（１６：０）におけるおよびモノ不飽和ＦＡ（ＭＵＦＡ）の合計含量における、ＳＣＤ１発現の顕著な減少により明らかにされ、これは、ジグリセリド（ＤＧ）およびＴＧの肝臓含量の低下に繋がる。ＧＳＨ／ＧＳＳＧ比率の正規化、細胞レドックス電位のバイオマーカー、およびヒトＮＡＳＨにおける肝損傷に関連するｏｘＬＡを含む総ｏｘＦＡ含量の顕著な低減により示されるように、アラムコール処理は、酸化ストレスを改善した。

前述の特定の実施形態の記載は、現在の知識を適用することにより、他者が過度の実験を行わず、また一般的概念から逸脱せずに、様々な適用例に向けてそのような特定の実施形態を容易に改良および／または適合させることができるという本発明の一般的性質を完全に明らかにしており、それゆえそのような適合および改良は、開示された実施形態の均等物の意味および範囲に入るものと解釈すべきであり、また、そう解釈されることを意図している。本明細書で用いられた表現または用語は、説明を目的とし、限定を目的とするものではないことを理解されたい。様々な開示された機能を実施するための手段、材料、およびステップは、本発明から逸脱せずに様々な代替形態をとることが可能である。

実施例４
概要
これは、多施設第ＩＩｂ相ランダム化二重盲検プラセボ対照試験であり、試験に入る前の６ヶ月の期間中に実施された肝臓生検により確認された非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の、体重過剰または肥満症で前糖尿病またはＩＩ型糖尿病の１８〜７５歳の被験者に対する２種のアラムコール投与量の効力と安全性を評価するように設計された試験である。

介入
薬物：アラムコール
被験者は、アラムコールを以下のように投与される：
ａ．１錠のアラムコール４００ｍｇおよびアラムコールと釣り合う用量の１錠のプラセボ。
ｂ．１錠のアラムコール４００ｍｇおよび１錠のアラムコール２００ｍｇ。
ｃ．アラムコールと釣り合う用量の２錠のプラセボ。錠剤は朝の朝食後３０分以内にコップ１杯の水（２５０ｍｌ）と共に経口摂取するとよい。

試験中、被験者は、最大３連続日まで試験薬を省略することが許容される。

別名：プラセボ

試験群
実験：アラムコール６００ｍｇ
ａ．１錠のアラムコール４００ｍｇおよび１錠のアラムコール２００ｍｇ。
ｂ．介入：薬物：アラムコール。

実験：アラムコール４００ｍｇ。
ａ．１錠のアラムコール４００ｍｇおよび１アラムコールと釣り合う用量の１錠のプラセボ。
ｂ．介入：薬物：アラムコール。

プラセボ対照薬：プラセボ。
ａ．アラムコールと釣り合う用量の２錠のプラセボ。
ｂ．介入：薬物：アラムコール。

推定登録者数
２４０人

選択規準
１８歳〜７５歳の男性または女性。

２５ｋｇ／ｍ^２〜４０ｋｇ／ｍ^２のＢＭＩまたは８８ｃｍ〜２００ｃｍの胴回りの女性、および１０２ｃｍ〜２００ｃｍの胴回りの男性。上限値を超える偏差がある場合は、ＭＲＩ施設に相談し、装置が患者に適切であることを確実にするべきである。

米国糖尿病学会による既知のＩＩ型糖尿病または糖尿病前症。糖尿病前症には次の３つの判定基準の内の１つが必要である：空腹時血糖値＞１００ｍｇ／ｄｌ（５．５ｍｍｏｌ／ｌ）または７５ｇ ＯＧＴＴ後の２ｈＰＧ＞１４０（７．８ｍｍｏｌ／ｌ）ｍｇ／ｄｌまたはＨｂＡ１ｃ＞５．７％。ＨｂＡ１ｃは、試験責任医師の裁量で反復測定できる。

スクリーニング中またはスクリーニング来診前６ヶ月以内に実施された診断的肝臓生検時に組織学的に証明され、中央検査室のスライドの読み値により確認された脂肪性肝炎。（脂肪肝≧１＋炎症≧１＋バルーニング≧１）。４以上の合計活性ＮＡＳスコア。

ＮＭＲＳで測定して、５．５％以上の肝臓中の肝臓脂肪濃度。

生検による４以上の活性ＮＡＳスコア。

正常総合肝機能（血清アルブミン＞３．２ｇ／ｄｌ、ＩＮＲ ０．８〜１．２、抱合型ビリルビン＜３５μｍｏｌ／Ｌ）。

試験の性質の理解および書面でのインフォームドコンセントのサイン。

妊娠可能な女性の場合の試験登録時妊娠検査陰性。

試験期間中の妊娠可能な女性の信頼性の高い避妊の実施（経口避妊薬を含む）ならびに試験登録時妊娠検査陰性。

高血圧患者は、スクリーニングの前少なくとも２ヶ月間にわたり、抗高血圧薬物の安定な投与により管理良好でなければならない。

以前にビタミンＥ（＞４００ＩＵ／日）、多価不飽和脂肪酸（＞２ｇ／日）またはウルソデオキシコール酸もしくは魚油で治療した患者は、診断的肝臓生検の前少なくとも３ヶ月間に、停止したまたはその間安定な投与を少なくとも維持した場合（および試験中に開始しない場合）、選択できる。これらの治療−投与は、生検前少なくとも１２ヶ月間安定であり、試験の全期間にわたり安定のまま維持できる場合、許容される。（上記で示した量未満の投与量は、休薬期間または安定な期間の制約なしに許容される）。

ＩＩ型糖尿病の患者の場合、血糖は、制御されなければならない（グリコシル化ヘモグロビンＡ１ｃ≦９％）、また、同時に、どのようなＨｂＡ１ｃ変化も登録前６ヶ月間、１．５％を超えるべきでない。抗糖尿病薬物による治療（除外基準１６に記載のものを除く）は、患者により血糖が自己測定される場合、許容される。ＨｂＡ１ｃは、試験責任医師の裁量で反復測定できる。

除外基準
除外基準：
ランダム化の時点で、ＮＡＳＨ以外の他の活性（急性または慢性）肝疾患（例えば、スクリーニングの少なくとも３年前に根絶されない場合のウイルス性肝炎；遺伝性ヘモクロマトーシス；ウィルソン病；α１アンチトリプシン欠損症；アルコール性肝障害；薬剤誘発性肝疾患）を有する患者。

臨床的にまたは組織学的に実証された肝硬変を有する患者。

最近５年間における、既知のアルコールおよび／またはいずれか他の薬物乱用または依存。

試験責任医師の判断で試験からの除外の理由になる、臨床的に有意な心臓血管、消化管、糖尿病以外の代謝、神経系、肺性、内分泌、精神的、腫瘍性疾患またはネフローゼ症候群の既知の病歴または存在。

家族性（すなわち、遺伝的）高トリグリセリド血症および家族性（すなわち、遺伝的）高コレステロール血症を有する患者。

吸収分布、胆汁酸塩代謝物を含む薬物の吸収分布、代謝または排泄と干渉することが知られているいずれかの疾患または状態（例えば、炎症性腸疾患（ＩＢＤ））、以前の腸（回腸または結腸）手術、慢性膵炎、セリアック病または以前の迷走神経切除の病歴または存在。進行中の慢性便秘。

心臓または脳ペースメーカー（すなわち、埋め込み型神経学的装置）を有する患者。

金属性装置のステント留置を伴うスクリーニング前３ヶ月の間の手術（例えば、膝、股関節、など）。

ランダム化前の６ヶ月以内に５％を超える体重減少。

肝臓生検の前５年間以内に肥満外科手術の病歴。

無制御動脈高血圧。

妊婦および授乳中の女性。

ＩＩ型以外の糖尿病（Ｉ型、内分泌疾患、遺伝的症候群、など）。

ＨＩＶ感染症の患者。

毎日のアルコール摂取量＞女性で２０ｇ／日、男性で＞３０ｇ／日（１日平均）（病歴に応じて）。

他の抗糖尿病性薬による治療：ＧＬＰ−１受容体アゴニストおよびチアゾリジンジオン（ＴＺＤ）、但し、生検の少なくとも１２ヶ月前に開始し、６ヶ月間の安定な投与の場合はこの限りではない。ＧＬＰ−１受容体アゴニストを停止した場合には、病歴に応じて、生検の少なくとも６ヶ月前であるべきである。

ＳＧＬＴ−２阻害剤、メトホルミン、フィブラート、スタチン、インスリン、ＤＰＰ−４阻害剤およびスルホニル尿素、但し、処方投与量が生検の６ヶ月前の間安定であった場合はこの限りではない。

バルプロ酸、タモキシフェン、メトトレキセート、アミオダロンによる治療または抗コリン剤、副腎皮質ステロイド、高用量エストロゲンおよびテトラサイクリンによるスクリーニング来診の前の１２ヶ月以内の治療。

抗生物質（例えば、リファキシミン）による長期治療。

ホメオパシー療法および／または代替療法。いずれの治療も、ランダム化の少なくとも４８時間前のスクリーニング期間中、停止すべきである。

甲状腺刺激ホルモン＞２ｘ正常の上限値（ＵＬＮ）として定義される無制御甲状腺機能低下症。スクリーニングの前少なくとも６ヶ月間制御された甲状腺機能障害は、許容される。

ｅＧＦＲ＜４の腎機能不全患者。

原因不明の血清クレアチンホスホキナーゼ（ＣＰＫ）＞３ｘ正常の上限値（ＵＬＮ）。ＣＰＫ上昇の理由の患者は、ランダム化の前に繰り返して測定してよいが、再試験ＣＰＫ＞３ｘＵＬＮは、除外基準に該当する。

ＮＭＲＳを実施するのが適切でない状態の患者（臨床試験責任医師により、またはＭＲＩの機能により決定される）。

アラムコールまたは錠剤中のいずれかの賦形剤に対する過敏症。

コール酸または胆汁酸封鎖剤に対する過敏症。

詳細説明
これは、多施設第ＩＩｂ相ランダム化二重盲検プラセボ対照試験であり、試験に入る前の６ヶ月の期間中に実施された肝臓生検により確認された非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の、体重過剰または肥満症で前糖尿病またはＩ型糖尿病の１８〜７５歳の被験者に対する２種のアラムコール投与量の効力と安全性を評価するように設計された試験である。

適格被験者は、３つの治療群に登録される。２：２：１の比率のアラムコール４００および６００ｍｇ錠剤およびプラセボ錠剤群。

被験者は、試験施設において、次記の１１回の予定された来診で評価される：スクリーニング時（来診１（−４週目〜０週目））、ベースライン（来診２（０日目））、来診３（２週目）、来診４（４週目）、来診５（８週目）、来診６（１２週目）、来診７（２４週目）、来診８（３２週目）、来診９（４０週目）、および来診１０（５２週目〜（治療の終わり／早期終了来診））。試験治療期間の完了後、被験者は、さらに１３週の間、試験薬物なしで追跡調査される（来診１１（６５週目）まで）。

スクリーニング期間中、疾患の重症度が血液検査、肝臓生検およびＮＭＲＳを用いて評価される。

試験中、次の評価が実施される：
ａ．バイタルサインが各試験来診時に測定される。
ｂ．身体検査が、スクリーニング来診時、２４週目、治療の終わり／早期終了時、および６５週目の来診時に実施される。

次の血液検査が実施される：スクリーニング来診中、ベースライン、２、４、８、２４、４０、５２および６５週目（追跡調査の終わり）の来診時に、全血球数（ＣＢＣ）、血液生化学検査（電解質、肝臓酵素、直接および総ビリルビン量、グルコース、トリグリセリド、コレステロール、ＨＤＬ、ＬＤＬおよびＶＬＤＬを含む脂質プロファイル、ＣＰＫ、クレアチニン、尿素、アルブミン、アルカリフォスファターゼ）、ＥＳＲおよび尿検査。血清学（ＨＢＶ、ＨＣＶおよびＨＩＶ）がスクリーニング来診中に実施される。凝血（フィブリノーゲン、ＰＴ／ＩＮＲ、ａＰＴＴ）が、スクリーニングおよびベースライン、２４週目、治療の終わり／早期終了および６５週目の来診時に測定される。インスリン（ＨＯＭＡ）がスクリーニング、２４週目および治療の終わり／早期終了来診時に測定される。ＨｂＡ１ｃがスクリーニング、８、２４、４０週目および治療の終わり／早期終了来診時に測定される。Ｃ反応性タンパク質、レプチン、アディポネクチン、ＣＫ−１８（Ｍ３０およびＭ６５）、フェリチン、ＰＡＩ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦアルファ、ＦＧＦ−１９、Ｃ４（７−α−ヒドロキシ−４−コレステン−３−オン）、プール血清胆汁酸、Ｂ−ヒドロキシブチレートおよび遊離脂肪酸が、ベースライン来診および治療期間の終わりに測定される。これらの来診時に採取された血液試料は、限定されないが、フェチュインＡおよびＧＤＦ１５を含む、予測されるバイオマーカーの検査が行われる。ＴＳＨ、Ｔ３およびＴ４がスクリーニング来診中に測定される。出産可能な女性のβ−ｈＣＧ検査がスクリーニング来診中に実施される。血清試料が収集され、特殊な調査の実施が必要となる場合に備えて、試験終了まで凍結保持される。この試料は、スクリーニングおよび来診１０／早期終了時に収集される。

体重および胴回りが、スクリーニング、ベースライン、２４週目、治療の終わり／早期終了および６５週目の来診時に測定される。身長がスクリーニング来診中に測定される。

ＥＣＧがスクリーニング来診、来診７（２４週目）および治療終了来診時に実施される。

全被験者は、スクリーニングおよび治療終了来診時に２回のＮＭＲＳスキャンを受ける。

試験責任医師が必要と考える場合にのみ、ＦｉｂｒｏＭａｘ試験が実施される。

肝臓生検がスクリーニングおよび治療終了来診時に実施される。スクリーニング来診時の生検は、この来診の６ヶ月以内に生検が行われなかった場合にのみ、実施される。

メタボロミクス血液検査は、スクリーニング、来診７および治療の終わり／早期終了の来診時に実施される。幾人かの同意患者（約１５人）から、肝臓生検由来試料を分析用に採取する。

内皮機能検査が選択施設で実施される。試験は、試験治療が行われる前にベースライン来診時および治療の終わり／早期終了の来診時に実施される。

アラムコールトラフレベルの血液試料が、イスラエルの患者からベースライン（投与前）（来診２）、４週目（来診４）、１２週目（来診６）、２４週目（来診７）、４０週目（来診９）、治療の終わり（来診１０）および追跡調査（来診１１）時に収集される。メキシコ、米国および香港の選択施設で、来診４（投与前）（国当たり最大１０人の被験者）で１つの血液試料が収集され、集団（例えば、アフリカ人、アメリカ人、アジア人、ヒスパニックの人）間のトラフアラムコール血中濃度差異の試験が行われる。

遺伝子分析用の血液試料が、ベースライン来診中に全同意患者から採取され、凍結して保持され、試験終了時にのみ分析される。

ライフスタイル質問票が全ての来診時に記入される。

有害事象が試験期間を通してモニターされる。

併用薬が試験期間を通してモニターされる。

１６、２０、２８、３６、４４および４８週目に、電話連絡が実施される。１２０人の被験者が試験治療下の２４週の追跡調査期間が完了するとすぐに、中間安全性分析が実施される。独立したＤＳＭＢが、安全性データを分析し、継続すべき進め方について提言する。全ての患者は、分析の結論がわかるまで、試験プロトコルに基づいて治療を継続する。

安全性評価は、治療期間中に発現したＡＥの頻度と重症度、臨床的に有意な検査室異常性、ＥＣＧの変化および身体検査所見を含む。

結果
主要および副次評価項目（４００ｍｇ群）
４００ｍｇのアラムコールによる治療は、磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）により測定して、肝臓トリグリセリド比率を有意に低減する。

４００ｍｇのアラムコールによる治療は、磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）により測定して、肝臓トリグリセリド比率を１０〜４０％低減する。

４００ｍｇのアラムコールによる治療は、磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）により測定して、肝臓トリグリセリド比率を１５％〜３５％低減する。

４００ｍｇのアラムコールによる治療は、磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）により測定して、肝臓トリグリセリド比率を２０％〜３０％低減する。

４００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した被験者に比べて、ＮＡＳＨの悪化なしに、有意により高い比率の線維症改善（すなわち、１ポイント以上の低減）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した被験者に比べて、ＮＡＳＨの悪化なしに、有意により高い比率の線維症改善（すなわち、１ポイント以上の低減）を有する被験者を生ずる。改善比率は、プラセボで治療した被験者に比べて、少なくとも２である。

４００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した被験者に比べて、線維症スコアの悪化なしに、有意により高い比率のＮＡＳスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した被験者に比べて、線維症スコアの悪化なしに、有意により高い比率のＳＡＦスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した被験者に比べて、線維症の悪化なしに、有意により高い比率のＮＡＳＨの消失（０のバルーニング、０または１の炎症）を有する被験者を生ずる。

探索的評価項目（４００ｍｇ群）
４００ｍｇのアラムコールによる治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測を有意に超えて、被験者の線維症スコアの悪化を抑制する。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測を有意に超えて、被験者の線維症スコアを改善する。

４００ｍｇのアラムコールによるステージ１ａ肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測の効果を有意に超えて、被験者の線維症スコアを改善する。

４００ｍｇのアラムコールによるステージ１ｂ肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測の効果を有意に超えて、被験者の線維症スコアを改善する。

４００ｍｇのアラムコールによるステージ１ｃ肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測の効果を有意に超えて、被験者の線維症スコアを改善する。

４００ｍｇのアラムコールによるステージ２肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測の効果を有意に超えて、被験者の線維症スコアを改善する。

４００ｍｇのアラムコールによるステージ３肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測の効果を有意に超えて、被験者の線維症スコアを改善する。

４００ｍｇのアラムコールによるステージ４肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測の効果を有意に超えて、被験者の線維症スコアを改善する。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測を超えて、被験者のＳＡＦスコアを改善する。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患している被験者に比べて、有意により高い比率の線維症スコアの悪化のない被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患している被験者に比べて、有意により高い比率の線維症改善（すなわち、１ポイント以上の低減）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患している被験者に比べて、ＮＡＳＨの悪化なしに、有意により高い比率の線維症改善（すなわち、１ポイント以上の低減）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した被験者に比べて、ＮＡＳＨの悪化なしに、有意により高い比率の線維症改善（すなわち、１ポイント以上の低減）を有する被験者を生ずる。改善比率は、プラセボで治療した肝線維症を罹患している被験者に比べて、少なくとも２である。

４００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患している被験者に比べて、有意により高い比率のＮＡＳスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患している被験者に比べて、線維症スコアの悪化なしに、有意により高い比率のＮＡＳスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症を罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患している被験者に比べて、有意により高い比率のＳＡＦスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症を罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患している被験者に比べて、線維症スコアの悪化なしに、有意により高い比率のＳＡＦスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患している被験者に比べて、有意により高い比率のＮＡＳＨの消失（０のバルーニング、０または１の炎症）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患している被験者に比べて、線維症の悪化なしに、有意により高い比率のＮＡＳＨの消失（０のバルーニング、０または１の炎症）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患していない被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患していない被験者に比べて、有意により高い比率の線維症スコアの悪化のない被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患していない被験者に比べて、有意により高い比率のＮＡＳスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患していない被験者に比べて、線維症スコアの悪化なしに、有意により高い比率のＮＡＳスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症を罹患していない被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患していない被験者に比べて、有意により高い比率のＳＡＦスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症を罹患していない被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患していない被験者に比べて、線維症スコアの悪化なしに、有意により高い比率のＳＡＦスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患していない被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患していない被験者に比べて、有意により高い比率のＮＡＳＨの消失（０のバルーニング、０または１の炎症）を有する被験者を生ずる。

４００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患していない被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患していない被験者に比べて、線維症の悪化なしに、有意により高い比率のＮＡＳＨの消失（０のバルーニング、０または１の炎症）を有する被験者を生ずる。

主要および副次評価項目（６００ｍｇ群）
６００ｍｇのアラムコールによる治療は、磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）により測定して、肝臓トリグリセリド比率を有意に低減する。

６００ｍｇのアラムコールによる治療は、磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）により測定して、肝臓トリグリセリド比率を１０〜４０％低減する。

６００ｍｇのアラムコールによる治療は、磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）により測定して、肝臓トリグリセリド比率を１５％〜３５％低減する。

６００ｍｇのアラムコールによる治療は、磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）により測定して、肝臓トリグリセリド比率を２０％〜３０％低減する。

６００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した被験者に比べて、ＮＡＳＨの悪化なしに、有意により高い比率の線維症改善（すなわち、１ポイント以上の低減）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した被験者に比べて、ＮＡＳＨの悪化なしに、有意により高い比率の線維症改善（すなわち、１ポイント以上の低減）を有する被験者を生ずる。改善比率は、プラセボで治療した被験者に比べて、少なくとも２である。

６００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した被験者に比べて、線維症スコアの悪化なしに、有意により高い比率のＮＡＳスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した被験者に比べて、線維症スコアの悪化なしに、有意により高い比率のＳＡＦスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した被験者に比べて、線維症の悪化なしに、有意により高い比率のＮＡＳＨの消失（０のバルーニング、０または１の炎症）を有する被験者を生ずる。

探索的評価項目（６００ｍｇ群）
６００ｍｇのアラムコールによる治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測を有意に超えて、被験者の線維症スコアの悪化を抑制する。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測を有意に超えて、被験者の線維症スコアを改善する。

６００ｍｇのアラムコールによるステージ１ａ肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測の効果を有意に超えて、被験者の線維症スコアを改善する。

６００ｍｇのアラムコールによるステージ１ｂ肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測の効果を有意に超えて、被験者の線維症スコアを改善する。

６００ｍｇのアラムコールによるステージ１ｃ肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測の効果を有意に超えて、被験者の線維症スコアを改善する。

６００ｍｇのアラムコールによるステージ２肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測の効果を有意に超えて、被験者の線維症スコアを改善する。

６００ｍｇのアラムコールによるステージ３肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測の効果を有意に超えて、被験者の線維症スコアを改善する。

６００ｍｇのアラムコールによるステージ４肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測の効果を有意に超えて、被験者の線維症スコアを改善する。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、被験者の肝臓トリグリセリドに対するアラムコールの効果に基づく予測を超えて、被験者のＳＡＦスコアを改善する。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患している被験者に比べて、有意により高い比率の線維症スコアの悪化のない被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患している被験者に比べて、有意により高い比率の線維症改善（すなわち、１ポイント以上の低減）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患している被験者に比べて、ＮＡＳＨの悪化なしに、有意により高い比率の線維症改善（すなわち、１ポイント以上の低減）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した被験者に比べて、ＮＡＳＨの悪化なしに、有意により高い比率の線維症改善（すなわち、１ポイント以上の低減）を有する被験者を生ずる。改善比率は、プラセボで治療した肝線維症を罹患している被験者に比べて、少なくとも２である。

６００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患している被験者に比べて、有意により高い比率のＮＡＳスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患している被験者に比べて、線維症スコアの悪化なしに、有意により高い比率のＮＡＳスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症を罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患している被験者に比べて、有意により高い比率のＳＡＦスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症を罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患している被験者に比べて、線維症スコアの悪化なしに、有意により高い比率のＳＡＦスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患している被験者に比べて、有意により高い比率のＮＡＳＨの消失（０のバルーニング、０または１の炎症）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患している被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患している被験者に比べて、線維症の悪化なしに、有意により高い比率のＮＡＳＨの消失（０のバルーニング、０または１の炎症）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患していない被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患していない被験者に比べて、有意により高い比率の線維症スコアの悪化のない被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患していない被験者に比べて、有意により高い比率のＮＡＳスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患していない被験者に比べて、線維症スコアの悪化なしに、有意により高い比率のＮＡＳスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症を罹患していない被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患していない被験者に比べて、有意により高い比率のＳＡＦスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症を罹患していない被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症を罹患していない被験者に比べて、線維症スコアの悪化なしに、有意により高い比率のＳＡＦスコアの改善（すなわち、少なくとも２ポイントの改善）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患していない被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患していない被験者に比べて、有意により高い比率のＮＡＳＨの消失（０のバルーニング、０または１の炎症）を有する被験者を生ずる。

６００ｍｇのアラムコールによる肝線維症に罹患していない被験者に対する治療は、プラセボで治療した肝線維症に罹患していない被験者に比べて、線維症の悪化なしに、有意により高い比率のＮＡＳＨの消失（０のバルーニング、０または１の炎症）を有する被験者を生ずる。

考察
本明細書に記載の調査に基づいて、アラムコールは、意外にも、強力な抗線維化および抗肝硬変剤であることが明らかになった。アラムコールはまた、意外にも、ＯＣＡより優れており、肝線維症に対する改善された効果的な治療を提供することも明らかになった。したがって、アラムコールは、急性または致命的肝不全および／または肝性脳症または門脈体循環性脳症、例えば、毒素による肝不全および／または肝性脳症を防止するために使用し得る。

さらに、アラムコールはまた、意外にも、既発症線維症を元に戻すのに効果的であることも明らかになった。アラムコール治療は、脂質蓄積（スダン赤染色）、線維症（シリウスレッドおよびＳＭＡ染色）および炎症（Ｆ４／８０およびＣＤ６４染色）の低減により明らかなように肝臓組織を改善する。実際に、アラムコールは、ＮＡＳＨの主要な病態、すなわち、脂肪症および炎症に加えて、線維症に対する効果も有する。

本明細書で提供した結果は、アラムコールがヒト星状細胞からのコラーゲン産生を下方制御し、アラムコールの効果はＳＣＤ１の下方制御およびグルタチオン産生の上方制御により媒介され、アラムコールの線維症に対する効果は、脂肪症および炎症の下方制御により媒介され、ならびに星状細胞からのコラーゲン産生の下方制御により直接媒介されることを示す。まとめると、本明細書の情報は、特許請求の範囲で記載のアラムコールのヒト患者における効果を裏付ける。

実施例４の４００ｍｇまたは６００ｍｇ投与量のものと類似の結果は、本明細書で記載のアラムコールのより高い投与量に対しても予測される。

Claims (36)

1. 非アルコール性脂肪性肝疾患に罹患しており、かつ、０の線維症スコアを有するヒト対象の肝線維症の発症を抑制するための方法であって、
   前記対象に、１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与するステップを含み、
   それにより、前記対象の肝線維症の発症を抑制する、方法。
2. 前記ヒト対象が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に罹患している、請求項１に記載の方法。
3. 前記ヒト対象が、少なくとも４、少なくとも５、少なくとも６、または少なくとも７のＮＡＦＬＤ活性（ＮＡＳ）スコアを有する、請求項２に記載の方法。
4. 前記ヒト対象が、少なくとも１のバルーニングスコア、少なくとも１の炎症スコア、および少なくとも１の脂肪症スコアを有する、請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
5. 前記ヒト対象が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に罹患していない、請求項１に記載の方法。
6. 前記ヒト対象が、ＩＩ型糖尿病または糖尿病前症に罹患している、請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
7. １日当たり３５０ｍｇ〜１２００ｍｇのアラムコールが前記対象に投与される、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
8. １日当たり４００ｍｇ〜６００ｍｇのアラムコールが前記対象に投与される、請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
9. 前記アラムコールが経口投与される、請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
10. 前記アラムコールが、午前、午後、または夕方に投与される、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
11. 前記アラムコールが、水と共に、または食事と同時に、または食事の３０分以内に投与され、好ましくは、前記食事が朝食、昼食、または夕食であり、より好ましくは、前記食事が高脂肪食または高カロリー食である、請求項１〜１０のいずれかに記載の方法。
12. 前記アラムコールが、少なくとも５２週、少なくとも７２週、少なくとも９６週、少なくとも２年、少なくとも３年、または少なくとも４年にわたって投与される、請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。
13. 前記アラムコールの投与が、
    前記対象のＮＡＦＬＤ活性（ＮＡＳ）スコアの悪化、または前記対象の脂肪症、活動性および線維症（ＳＡＦ）スコアの悪化を防止する、請求項１〜１２のいずれかに記載の方法。
14. 前記肝線維症の発症を抑制することが、線維症スコアの悪化の防止を含む、請求項１〜１３のいずれかに記載の方法。
15. 前記アラムコールの投与が、前記対象のＮＡＦＬＤ活性（ＮＡＳ）スコアを改善する、または前記対象の脂肪症、活動性および線維症（ＳＡＦ）スコアを改善する、請求項１〜１４のいずれかに記載の方法。
16. 前記対象のＮＡＳスコアが、アラムコールの投与開始時に少なくとも４であり、前記対象のＮＡＳスコアの改善が、少なくとも２ポイントの改善であり、
    前記対象のＳＡＦスコアが、アラムコールの投与開始時に少なくとも４であり、前記対象のＳＡＦスコアの改善が、少なくとも２ポイントの改善である、請求項１５に記載の方法。
17. 前記肝線維症の発症の抑制が、アラムコールで治療されていない患者に比べて、肝線維症の進行を低減することを含む、請求項１〜１６のいずれかに記載の方法。
18. 前記アラムコールの投与が、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）の進行を抑制する、請求項１〜１７のいずれかに記載の方法。
19. ＮＡＦＬＤの進行の抑制が、アラムコールで治療されていない患者に比べて、ＮＡＦＬＤの進行の防止、または進行の低減することを含む、請求項１７に記載の方法。
20. 前記ヒト対象が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に罹患しており、
    前記アラムコールの投与が、ＮＡＳＨの進行を抑制する、請求項１〜４および請求項６〜１９のいずれかに記載の方法。
21. ＮＡＳＨの進行の抑制が、アラムコールで治療されていない患者に比べて、進行の防止、または進行の低減することを含む、請求項２０に記載の方法。
22. 前記ヒト対象が、前記投与の開始時には、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に罹患しておらず、前記アラムコールの投与が、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）からＮＡＳＨへの進行を抑制する、請求項５〜１５および請求項１７〜１９のいずれかに記載の方法。
23. 前記防止、改善、または進行が、前記アラムコールの投与の開始から、５２、６５、７２、または９６週での、または２、３、または４年での防止、改善、または進行である、請求項１３〜２２のいずれかに記載の方法。
24. 前記ヒト対象が、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）に罹患しており、
    前記アラムコールの投与が、前記対象のＮＡＳＨを消失させる、請求項１〜４および請求項６〜２１のいずれかに記載の方法。
25. ＮＡＳＨの消失が、０のバルーニングスコアおよび０または１の炎症スコアを有する前記ヒト対象を含む、請求項２４に記載の方法。
26. 前記アラムコールの投与が、前記投与開始から５２、６５、７２、または９６週で、または２、３、または４年で、前記対象のＮＡＳＨを消失させる、請求項２４または２５に記載の方法。
27. 前記アラムコールの投与が、ＭＲＳで測定して、前記対象の肝臓トリグリセリドの水に対する比率を、前記アラムコールの投与開始時の比率に比べて小さくすることを含む、請求項１〜２６のいずれかに記載の方法。
28. 前記アラムコールの投与が、ＭＲＳで測定して、前記対象の肝臓トリグリセリドの水に対する比率を、前記アラムコールの投与開始時の比率に比べて１０％〜４０％低減させることを含む、請求項２７に記載の方法。
29. 前記アラムコールの投与が、
    （ａ）アラムコールの投与の開始時のレベルまたは比率に比べて、ヘモグロビンＡ１ＣまたはＨＯＭＡ−ＩＲのレベルの低減、
    （ｂ）アラムコールの投与の開始時のレベルまたは比率に比べて、フィブリノーゲン、ＣＫ−１８、Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、ＴＮＦα、ＩＬ６および線維症試験（ＮＦＳ）のレベルの低減、
    （ｃ）アラムコールの投与の開始時のレベルまたは比率に比べて、レプチンのアジノペクチンに対する比率の低減、
    （ｄ）アラムコールの投与の開始時のレベルまたは比率に比べて、アジノペクチンのレベルの増大、
    （ｅ）前記アラムコールの投与の開始時のヒト対象の体重に比べて、前記ヒト対象の体重の低減、
    （ｆ）前記アラムコールの投与の開始時のヒト対象の胴回りに比べて、前記ヒト対象の胴回りの低減、または
    （ｇ）前記アラムコールの投与の開始時の前記ヒト対象の脂肪肝指数に比べて、前記ヒト対象の脂肪肝指数の低減、を含む、請求項１〜２８のいずれかに記載の方法。
30. 前記ヒト対象が、高脂肪および高カロリー食を摂取する、および／またはライフスタイル介入に抵抗性である、または食事介入に抵抗性である、請求項１〜２９のいずれかに記載の方法。
31. 前記対象が、アラムコール治療を受けたことがない、請求項１〜３０のいずれかに記載の方法。
32. 前記対象が、ＮＡＦＬＤ治療を受けたことがない、請求項３１に記載の方法。
33. 非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するための、治療有効量の３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩の使用であって、前記対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与し、それにより、前記対象の肝線維症の発症を抑制することを含む、使用。
34. 対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するための、３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩であって、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するために、前記対象に１日当たり３００ｍｇを超える量で投与し、それにより前記対象の肝線維症の発症を抑制する、３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩。
35. 対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与することを含む、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するための、３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を含む薬物であって、非アルコール性脂肪性肝疾患を罹患し、線維症スコアが０のヒト対象の肝線維症の発症を抑制するために、前記対象に１日当たり３００ｍｇを超える量で投与し、それにより前記対象の肝線維症の発症を抑制する、３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を含む薬物。
36. （ａ）３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩；および（ｂ）非アルコール性脂肪性肝疾患に罹患し、線維症スコア０を有するヒト対象の肝線維症の発症の抑制のための、前記対象に１日当たり３００ｍｇを超える３β−アラキジルアミド−７α、１２α−ジヒドロキシ−５β−コラン−２４−酸（アラムコール）、またはその薬学的に許容可能な塩を投与し、それにより、前記対象の肝線維症の発症を抑制するための使用説明書を含む、医薬品パッケージ。

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