CN110057963B - 一种Na18F注射液中氟离子含量的高效液相色谱检测方法 - Google Patents

一种Na18F注射液中氟离子含量的高效液相色谱检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明属于高效液相色谱分析领域，具体的说涉及一种Na18F注射液中氟离子含量的高效液相色谱检测方法。本发明的高效液相色谱条件为：色谱柱为阴离子交换色谱柱，流动相为醋酸盐和氯化盐混合液，采用紫外检测器，或联用放射性检测器。本发明提供的高效液相色谱检测方法分离效率高，检测灵敏度高，应用范围广。

Description

一种Na18F注射液中氟离子含量的高效液相色谱检测方法
技术领域
本发明属于高效液相色谱分析技术领域，具体的说涉及一种Na18F注射液中氟离子含量的高效液相色谱检测方法。
背景技术
Na18F注射液(Na18F生理盐水溶液)能够高灵敏度、高特异性地针对肿瘤骨转移进行早期诊断、检测复发和预后监测，并协助医生确定最优的治疗方案。另外，近年来的研究显示，Na18F也能够有效鉴别高风险的冠状动脉粥样硬化斑块，有助于对该疾病进行早期干预以防止不良临床事件。因此，商业化生产的Na18F对上述疾病的诊断和治疗均具有很高的价值。
尽管Na18F是一种优良的骨显像剂，但是氟化物摄入过量会产生急性和慢性毒性。对氟离子含量进行限度检测是对Na18F注射液进行质量控制的项目之一。欧洲药典规定Na18F中氟离子含量不得超过4.52mg/V(V为推荐最大注射剂量)。若规定Na18F注射液给药最大体积为10mL，通过换算可知，注射液中氟离子浓度上限为0.452mg/mL，或者NaF的浓度上限为1mg/mL，也就是说当Na18F注射液中NaF浓度低于1mg/mL时，氟离子含量方能满足限度要求。
目前已报道了多种用于Na18F分析的色谱法，包括薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)。然而，已报道的这些方法用于Na18F常规检测大多有缺陷。例如，受色谱板和展开剂的影响，应用单个色谱板的TLC测量Na18F放射化学纯度是不准确的；目前还没有可靠的TLC方法能够对Na18F中的氟离子含量进行准确检测。欧洲药典(European Pharmacopoeia8.0)使用配置了紫外和放射性检测器的HPLC用于Na18F注射液的质控，流动相为4g/L(0.1M)氢氧化钠溶液，如此高浓度的氢氧化钠溶液碱性很强，具有腐蚀性，会损害常规的液相色谱系统，而需要采用特殊的耐腐蚀部件；此外为减少系统噪声，使用时还需采用惰性气体对流动相进行保护，操作不便。不同于欧洲药典的方法，美国药典(USP 35)使用了电导检测器和放射性检测器，流动相为3mM硫酸，色谱柱为L31阴离子交换柱，然而一般放射性药物质控实验室缺乏配备电导检测器的HPLC，因而该方法的适用性较差，且所用的稀硫酸流动相可能影响药液中化学成分的稳定性。
发明内容
本发明的目的是针对上述现状问题，旨在提供一种操作简便、快速准确的用于检测Na18F 注射液中氟离子含量的高效液相色谱法。
为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：
本发明所述的一种Na18F注射液中氟离子含量的高效液相色谱检测方法，该方法的色谱条件为：色谱柱采用阴离子交换色谱柱；流动相由醋酸盐和氯化盐混合液组成；检测器采用紫外检测器，或联用放射性检测器以检测放射性18F阴离子。
进一步地，所述阴离子交换色谱柱为Dionex CarboPacTM PA1分析柱。
进一步地，所述醋酸盐浓度为15～105mmol/L，优选醋酸盐浓度为100mmol/L。
进一步地，所述氯化盐浓度为23～27mmol/L，优选氯化盐浓度为25mmol/L。
进一步地，所述醋酸盐选自醋酸钠、醋酸铵、醋酸钾中的任意一种或几种，优选醋酸盐为醋酸钠。
进一步地，所述氯化盐选自氯化钠、氯化钾中的任意一种或几种，优选氯化盐为氯化钠。
进一步地，所述流动相流速为0.8～1.2mL/min，优选流速为1.0mL/min。
进一步地，所述柱温为20～30℃，优选柱温为25℃。
进一步地，所述检测波长为200～220nm，优选检测波长为220nm。
进一步地，所述进样体积为5～80μL，优选进样体积为20μL。
进一步地，所述检测方法采用等度洗脱的方式进行分离。
进一步地，所述检测方法采用生理盐水(0.9％)为空白样品，1mg/mL NaF水溶液和1mg/mL NaF/生理盐水(0.9％)作为对照品。
进一步地，所述检测方法对Na18F注射液中含有的氟离子及氯离子两种阴离子的保留时间显著不同，即氯离子不干扰氟离子的检测。18F阴离子的放射性峰保留时间比氟阴离子的 UV吸收峰保留时间约滞后0.1min，这是由于放射性检测器置于UV检测器后，因而存在延迟效应造成的。对延迟效应校正后，18F阴离子的UV谱保留时间与18F阴离子的放射性谱保留时间是一致的。
通过本发明所述检测方法Na18F注射液时，可以获得以下结论：
1)当紫外谱图和放射性谱图均出现氟离子峰，则说明其中必然含有18F；
2)当紫外谱图出现氟离子峰，而放射性谱图不出现氟离子峰，则说明其中只含有19F；
3)当紫外谱图和放射性谱图均不出现氟离子峰，则说明体系中几乎不含氟离子(18F/19F)； 4)当紫外谱图不出现氟离子峰，而放射性谱图出现氟离子峰，则说明体系中含有18F，但
其含量低于紫外检测器的检测限。
进一步地，通过本发明的所述检测方法，可以计算氟离子的含量，计算方法如下：
采用本发明的检测方法，测定一系列已知NaF浓度的生理盐水样品，以NaF浓度为横坐标，UV吸收峰峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，计算可得本方法的检测限。最终通过测定待测样品的峰面积，计算得到待测样品的NaF浓度，从而可以判定样品中氟离子含量是否在限度范围内。
本发明的有益效果：
本发明提供了一种Na18F注射液中氟离子含量的高效液相色谱检测方法。通过本发明提供的技术方案，能准确的检测Na18F注射液中氟离子含量及放射化学纯度。该检测方法能够满足氟离子限度检测的要求；具备分离效率高、检测灵敏度高、操作自动化等优点；且该法可用于所有含氟离子的物质检测，适用范围广。
附图说明：
图1为实施例1中样品A色谱图。
图2为实施例1中样品B色谱图。
图3为实施例1中样品C色谱图。
图4为实施例1中样品D色谱图。
图5为实施例1中样品D放射性谱图。
图6为NaF/生理盐水系列样品的标准曲线图。
具体实施方式：
为了使本发明的内容更容易被清楚地理解，下文结合具体实施例对本发明的内容做进一步详细地说明，所述的实施例目的仅用于说明和描述本发明当前的最佳模式，但本发明的保护范围不以任何方式受此处所述实施例的限制。
实施例1
1)检测仪器：安捷伦HPLC 1260
2)色谱条件：
色谱柱采用Dionex CarboPacTM PA1分析柱，柱温为25℃；流动相由100mmol/L醋酸钠和25mmol/L氯化钠组成，流速为1.0mL/min，等度洗脱；采用紫外检测器与放射性检测器联用，检测波长220nm。
2)分析样品：
样品A——1mg/mL NaF水溶液；
样品B——生理盐水；
样品C——1mg/mL NaF/生理盐水溶液；
样品D——待测Na18F注射液。
3)测定方法：
取各分析样品20μL，分别注入液相色谱仪，按照上述色谱条件完成测定；谱图如图1～5 所示。
4)结果显示：
样品A：氟离子峰保留时间为2.004min，结果见表1；
表1
序号 时间 峰面积 峰高 峰宽 对称因子 峰面积％ 类型
1 1.247 938.2 301.5 0.0476 0.62 79.117 PBN
2 2.004 247.7 69.4 0.0594 1.206 20.883 VVN
样品B：氯离子峰保留时间为3.524min，结果见表2；
表2
序号 时间 峰面积 峰高 峰宽 对称因子 峰面积％ 类型
1 1.255 263.1 86.7 0.0463 0.651 16.241 BB
2 3.524 1356.8 60.4 0.3743 0 83.759 PPN
样品C：氟离子峰与氯离子峰分离度良好，能达到基线分离，保留时间分别为1.982min 和3.494min；结果见表3；
表3
序号 时间 峰面积 峰高 峰宽 对称因子 峰面积％ 类型
1 1.257 497.7 165.6 0.046 0.69 23.499 BB
2 1.982 245.4 66.9 0.0611 0 11.586 PMN
3 3.494 1374.8 63.4 0.3612 0 64.915 MPN
样品D：紫外谱图——不含氟离子峰，氯离子峰保留时间为3.514min；结果见表4。
表4
序号 时间 峰面积 峰高 峰宽 对称因子 峰面积％ 类型
1 1.253 271.9 91.4 0.0456 0.7 16.872 BB
2 3.514 1339.5 62.7 0.356 0 83.128 MPN
样品D：放射性谱图——18F离子峰保留时间为2.112min，放射化学纯度为100％；结果见表5。
表5
序号 时间 峰面积 峰高 峰宽 对称因子 峰面积％ 类型
1 2.112 603.2 88.3 0.0987 0.508 100 VV
结论：待测Na18F注射液中氟离子浓度低于HPLC检测限度(由标准曲线和空白样分析计算得到：检测限为6μg/mL；按最大给药体积10mL计，氟离子浓度限度为0.452mg/mL)；且放射化学纯度较高，符合参考的药典标准(USP 35放射化学纯度>95％)。
实施例2改变流动相流速
1)检测仪器：与实施例1相同。
2)色谱条件：
流速0.8～1.2mL/min。其他条件与实施例1相同。
2)分析样品：
样品C—1mg/mL NaF生理盐水。
3)测定方法：
取分析样品20μL，注入液相色谱仪，按照上述色谱条件完成测定。
4)结果显示：
样品C(0.8mL/min)：氟离子峰与氯离子峰分离度良好，能达到基线分离，保留时间分别为2.467min和4.348min；
样品C(0.95mL/min)：氟离子峰与氯离子峰分离度良好，能达到基线分离，保留时间分别为2.088min和3.685min；
样品C(1.05mL/min)：氟离子峰与氯离子峰分离度良好，能达到基线分离，保留时间分别为1.893min和3.329min；
样品C(1.2mL/min)：氟离子峰与氯离子峰分离度良好，能达到基线分离，保留时间分别为1.654min和2.912min。
实施例3改变流动相组成
1)检测仪器：与实施例1相同。
2)色谱条件：
流动相由15～105mmol/L醋酸钠和23～27mmol/L氯化钠组成。其他条件与实施例1相同。
2)分析样品：
样品C—1mg/mL NaF/生理盐水。
3)测定方法：
取分析样品20μL，注入液相色谱仪，按照上述色谱条件完成测定。
4)结果显示：
样品C(15mmol/L醋酸钠/25mmol/L氯化钠)：氟离子峰与氯离子峰分离度良好，能达到基线分离，保留时间分别为2.591min和3.3min。
样品C(75mmol/L醋酸钠/25mmol/L氯化钠)：氟离子峰与氯离子峰分离度良好，能达到基线分离，保留时间分别为2.081min和3.483min。
样品C(100mmol/L醋酸钠/23mmol/L氯化钠)：氟离子峰与氯离子峰分离度良好，能达到基线分离，保留时间分别为2.009min和3.688min。
样品C(100mmol/L醋酸钠/27mmol/L氯化钠)：氟离子峰与氯离子峰分离度良好，能达到基线分离，保留时间分别为1.954min和3.33min。
实施例4改变柱温
1)检测仪器：与实施例1相同。
2)色谱条件：
柱温20～30℃。其他条件与实施例1相同。
2)分析样品：
样品C—1mg/mL NaF/生理盐水。
3)测定方法：
取分析样品20μL，注入液相色谱仪，按照上述色谱条件完成测定。
4)结果显示：
样品C(20℃)：氟离子峰与氯离子峰分离度良好，能达到基线分离，保留时间分别为1.957min和3.449min。
样品C(30℃)：氟离子峰与氯离子峰分离度良好，能达到基线分离，保留时间分别为 1.993min和3.52min。
实施例5同时改变流动相组成和流速
1)检测仪器：与实施例1相同。
2)色谱条件：
流动相由95～105mmol/L醋酸钠和25mmol/L氯化钠组成，流速1.2mL/min。其他条件与实施例1相同。
2)分析样品：
样品C—1mg/mL NaF/生理盐水。
3)测定方法：
取分析样品20μL，注入液相色谱仪，按照上述色谱条件完成测定。
4)结果显示：
样品C(95mmol/L醋酸钠/25mmol/L氯化钠)：氟离子峰与氯离子峰分离度良好，能达到基线分离，保留时间分别为2min和3.485min。
样品C(105mmol/L醋酸钠/25mmol/L氯化钠)：氟离子峰与氯离子峰分离度良好，能达到基线分离，保留时间分别为1.964min和3.495min。
实施例6
色谱柱采用Dionex CarboPacTM PA1分析柱，柱温为25℃；流动相由100mmol/L醋酸钠和25mmol/L氯化钠组成，流速为1.0mL/min，等度洗脱；采用紫外检测器，检测波长220nm。
测定一系列不同NaF浓度的生理盐水标准溶液，进行HPLC分析。以NaF浓度为横坐标(x)，氟离子峰面积为纵坐标(y)，绘制标准曲线，如图6所示，线性拟合结果为： y＝249.47670x-1.32652，R2＝0.99995，表明氟离子的HPLC紫外吸收峰面积与浓度之间有良好的线性关系。

Claims (7)

1.一种Na18F注射液中氟离子含量的高效液相色谱检测方法，其特征在于，色谱条件为：
色谱柱采用阴离子交换色谱柱，所述阴离子交换色谱柱为Dionex CarboPacTM PA1分析柱；
流动相由醋酸盐和氯化盐混合液组成，所述醋酸盐浓度为15～105mmol/L，氯化盐浓度为23～27mmol/L；
检测器采用紫外检测器，或联用放射性检测器。
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱检测方法，其特征在于所述醋酸盐选自醋酸钠、醋酸钾、醋酸铵中的任意一种或几种。
3.根据权利要求1所述的高效液相色谱检测方法，其特征在于所述氯化盐选自氯化钠、氯化钾中的任意一种或几种。
4.根据权利要求1所述的高效液相色谱检测方法，其特征在于所述流动相流速为0.8～1.2mL/min。
5.根据权利要求1所述的高效液相色谱检测方法，其特征在于所述色谱柱的柱温为20～30℃。
6.根据权利要求1所述的高效液相色谱检测方法，其特征在于所述检测器的检测波长为200～230nm。
7.根据权利要求1所述的高效液相色谱检测方法，其特征在于所述注射液的进样体积为5～80μL。
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