CN110049976A

CN110049976A - 布鲁顿氏酪氨酸激酶抑制剂的琥珀酸盐形式和组合物

Info

Publication number: CN110049976A
Application number: CN201780053896.1A
Authority: CN
Inventors: J·M·麦克菲; L·L·纽曼
Original assignee: Than Ao Gen Ma Co; Biogen Idec Inc
Current assignee: Than Ao Gen Ma Co; Biogen Inc; Biogen MA Inc; Viracta Therapeutics Inc
Priority date: 2016-07-21
Filing date: 2017-01-06
Publication date: 2019-07-23
Also published as: CA3031443A1; RU2019104758A3; MX2019000884A; JP7214632B2; IL264341A; BR112019001158A2; JP2019525960A; US20210032218A1; RU2019104758A; EP3487852A1; JP2023052462A; KR20190035769A; SG11201900515PA; AU2017298035B2; WO2018017153A1; AU2017298035A1; US11174243B2

Abstract

本发明提供了可用作布鲁顿氏酪氨酸激酶抑制剂并且表现出针对其的所期望特征的化合物和其组合物。

Description

布鲁顿氏酪氨酸激酶抑制剂的琥珀酸盐形式和组合物

本申请要求2016年7月21日所提交的美国临时专利申请号62/365,353和2016年9月8日所提交的美国临时专利申请第62/385,202号的优先权，其全部内容通过引用结合在此。

背景技术

蛋白激酶是由超过500种蛋白质组成的大型多基因家族，所述蛋白质在肿瘤学、神经学和免疫学中的许多人类疾病的发展和治疗中起关键作用。Tec激酶是非受体酪氨酸激酶，所述非受体酪氨酸激酶由五个成员组成(Tec(在肝细胞癌中表达的酪氨酸激酶)、Btk(布鲁顿氏酪氨酸激酶)、Itk(白细胞介素-2(IL-2)-诱导型T细胞激酶；也被称为Emt或Tsk)、Rlk(静息淋巴细胞激酶；也被称为Txk)和Bmx(染色体X上的骨髓酪氨酸激酶基因；也被称为Etk))并且主要在造血细胞中表达，虽然已在内皮细胞和肝细胞中检测到Bmx和Tec的表达。Tec激酶(Itk、Rlk和Tec)在T细胞中表达并且全部在T细胞受体(TCR)的下游被活化。Btk是B细胞受体(BCR)信号传导的下游介体，所述下游介体参与调节B细胞活化、增殖和分化。更具体地说，Btk含有结合(3,4,5)-三磷酸磷脂酰肌醇(PIP3)的PH结构域。PIP3结合诱导Btk磷酸化磷脂酶C(PLCγ)，所述PLCγ进而水解PIP2以产生两个第二信使，即肌醇三磷酸(IP3)和二酰基甘油(DAG)，所述两个第二信使活化蛋白激酶PKC，所述蛋白激酶PKC然后诱导额外B细胞信号传导。使Btk酶活性失效的突变导致XLA综合征(X连锁无丙种球蛋白血症)，这是一种原发性免疫缺陷。考虑到Tec激酶在B细胞和T细胞信号传导中发挥的关键作用，Tec激酶是自身免疫病症的关注靶标。

因此，本领域非常需要有效的Btk抑制剂。本发明满足了这些和其它需求。

发明内容

现已发现，本发明的新形式和其组合物可用作一种或多种蛋白激酶的抑制剂并表现出针对其的所期望的特征。通常，此类形式和其药学上可接受的组合物可用于治疗或减轻如在本文中详细描述的多种疾病或病症的严重程度。

附图说明

图1示出了化合物2形式1的XRPD图。

图2示出了化合物2形式1的DSC数据(存在一些化合物2形式2)。

图3示出了化合物2形式1的GVS数据。

图4示出了化合物2形式1的TGA数据。

图5示出了化合物2形式2的XRPD图。

图6示出了化合物2形式2的DSC数据。

图7示出了化合物2形式2的GVS数据。

图8示出了化合物2形式2的TGA数据。

图9示出了化合物2形式2的¹H NMR光谱。

图10示出了蒸气扩散实验设置。

图11示出了Cys481Ser突变对共价BTK抑制剂活性和化合物2游离碱的影响。

图12示出了在施用化合物2的单剂量人类研究中平均化合物1血浆浓度相对于时间的关系。

图13示出了在施用化合物2的单剂量人类研究中百分比BTK抑制相对于时间的关系。

图14示出了在施用化合物2的单剂量人类研究中百分比BTK抑制相对于化合物1血浆浓度的关系。

图15示出了化合物2浓度(ng/mL)和百分比BTK抑制相对于时间的关系。未显示针对％BTK抑制的化合物2 50mg。

图16示出了在施用化合物2后根据在下文所述给药的阶段1+阶段3(单独的化合物2 25mg)的％BTK抑制与化合物1血浆浓度(x轴，ng/mL)之间的相关性。

图17示出了针对在HEK293细胞中过表达的C481BTK(WT)和C481S BKT突变体的化合物1和依鲁替尼活性。

具体实施方式

本发明的某些方面的一般描述

以其全部内容通过引用结合在本文中的PCT专利出版物WO2013/185084(于2013年6月7日提交的PCT申请PCT/US13/44800(“所述‘800申请”))描述了某些Btk抑制剂化合物。此类化合物包含(3R,3'R,4'S)-1'-(6-氨基-5-氟嘧啶-4-基)-3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-4'-甲酰胺：

作为游离碱的化合物1在‘800申请中被指定为化合物编号I1。在‘800申请的实例2中详细描述了化合物1的合成，为便于参考在本文中再现了所述实例。

化合物1在BTK抑制的测定中示出了针对BTK的效力(参见例如‘800申请的实例11到实例13)。例如，‘800申请报道了如在体外Btk激酶测定中测量的化合物1具有IC₅₀0.73nM。因此，化合物1可用于治疗一种或多种与BTK活性相关的病症。

期望提供化合物1的固体形式，所述固体形式赋予如改善的水溶性、稳定性、吸收性、生物利用度和易于配制和分离等特征。因此，本发明提供了化合物1的琥珀酸形式，所述琥珀酸形式提供某些此类特征。

化合物2(琥珀酸×化合物1)

根据一个实施例，本发明提供了化学物种化合物2，其包括化合物1和琥珀酸。

在一些实施例中，化合物2被描绘为：

预期化合物2可以以多种固体形式存在。当化合物2呈固体形式时，所述化合物可以是非晶态、结晶或其混合物。下文更详细地描述了示例性固体形式。

在一些实施例中，本发明提供了基本上不含杂质的化合物2。如本文所使用的，术语“基本上不含杂质”意指化合物不含有显著量的外来物质。此类外来物质可以包含过量的琥珀酸、过量的化合物1、残留溶剂或可能由化合物2的制备和/或分离而产生的任何其它杂质。在某些实施例中，存在按重量计至少约95％的化合物2。在本发明的仍其它实施例中，存在按重量计至少约99％的化合物2。

根据一个实施例，化合物2以至少约97、97.5、98.0、98.5、99、99.5、99.8重量百分比的量存在，其中所述百分比基于所述组合物的总重量。根据另一个实施例，化合物2含有总有机杂质的不超过约3.0面积百分比的HPLC，并且在某些实施例中，相对于HPLC色谱图的总面积，含有总有机杂质的不超过约1.5面积百分比的HPLC。在其它实施例中，化合物2含有任何单一杂质的不超过约1.0％面积百分比的HPLC；含有任何单一杂质的不超过约0.6面积百分比的HPLC，并且在某些实施例中，相对于HPLC色谱图的总面积，含有任何单一杂质的不超过约0.5面积百分比的HPLC。

所描绘的化合物2的结构还意味着包含化合物2的所有互变异构形式。另外，在此描绘的结构还意味着包含仅在存在一个或多个同位素富集原子的情况下不同的化合物。例如，除了用氘或氚替代氢或用¹³C-或¹⁴C-富集碳替代碳之外，具有本发明结构的化合物都在本发明的范围内。

已经发现化合物2可以以各种固体形式存在。示例性的此类形式包含多晶型物，如本文所述的那些。

在一些实施例中，化合物2是非晶态的。在一些实施例中，化合物2是非晶态的并且基本上不含结晶化合物2。

在某些实施例中，化合物2是结晶固体。在其它实施例中，化合物2是基本上不含非晶态化合物2的结晶固体。如本文所使用，术语“基本上不含非晶态化合物2”意指所述化合物不含显著量的非晶态化合物2。在某些实施例中，存在按重量计至少约95％的结晶化合物2。在本发明的仍其它实施例中，存在按重量计至少约99％的结晶化合物2。

在一些实施例中，化合物2的(化合物1):(琥珀酸)的化学计量为约1:1。

已经发现化合物2可以以至少两种不同的固体形式存在。

化合物2形式1

在某些实施例中，化合物2形式1的X射线粉末衍射图基本上类似于图1中提供的XRPD。在一些实施例中，化合物2形式1具有选自下表A所列峰中的至少1个、2个、3个、4个或5个光谱峰。

表A-化合物2形式1的XRPD峰位置

在一些实施例中，化合物2形式1的特征在于其具有在其X射线粉末衍射图中的一个或多个峰，所述一个或多个峰选自在约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。在一些实施例中，化合物2形式1的特征在于其具有在其X射线粉末衍射图中的两个或更多个峰，所述两个或更多个峰选自在约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。在一些实施例中，化合物2形式1的特征在于其具有在其X射线粉末衍射图中的三个或更多个峰，所述三个或更多个峰选自在约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。在一些实施例中，化合物2形式1的特征在于其具有在其X射线粉末衍射图中的四个或更多个峰，所述四个或更多个峰选自在约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。在一些实施例中，化合物2形式1的特征在于其具有在其X射线粉末衍射图中的五个或更多个峰，所述五个或更多个峰选自在约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。在一些实施例中，化合物2形式1的特征在于其具有在其X射线粉末衍射图中的六个或更多个峰，所述六个或更多个峰选自在约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。在一些实施例中，化合物2形式1的特征在于其具有在其X射线粉末衍射图中的七个或更多个峰，所述七个或更多个峰选自在约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。在一些实施例中，化合物2形式1的特征在于其具有在其X射线粉末衍射图中的所有八个峰，所述所有八个峰选自在约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。如本文所使用的，当参考度2θ值使用时，术语“约”是指所述值±0.2度2θ。

下文描述了用于制备化合物2形式1的方法。

化合物2形式2

在某些实施例中，化合物2形式2的X射线粉末衍射图基本上类似于图5中提供的XRPD。在一些实施例中，化合物2形式2具有选自下表B所列峰中的至少1个、2个、3个、4个或5个光谱峰。

表B-化合物2形式2的XRPD峰位置

在一些实施例中，化合物2形式2的特征在于其具有在其X射线粉末衍射图中的一个或多个峰，所述一个或多个峰选自在约6.76度、约8.77度、约9.06度、约12.00度、约13.53度、约18.13度、或约20.07度2θ处的那些峰。在一些实施例中，化合物2形式2的特征在于其具有在其X射线粉末衍射图中的两个或更多个峰，所述两个或更多个峰选自在约6.76度、约8.77度、约9.06度、约12.00度、约13.53度、约18.13度、或约20.07度2θ处的那些峰。在一些实施例中，化合物2形式2的特征在于其具有在其X射线粉末衍射图中的三个或更多个峰，所述三个或更多个峰选自在约6.76度、约8.77度、约9.06度、约12.00度、约13.53度、约18.13度、或约20.07度2θ处的那些峰。在一些实施例中，化合物2形式2的特征在于其具有在其X射线粉末衍射图中的四个或更多个峰，所述四个或更多个峰选自在约6.76度、约8.77度、约9.06度、约12.00度、约13.53度、约18.13度、或约20.07度2θ处的那些峰。在一些实施例中，化合物2形式2的特征在于其具有在其X射线粉末衍射图中的五个或更多个峰，所述五个或更多个峰选自在约6.76度、约8.77度、约9.06度、约12.00度、约13.53度、约18.13度、或约20.07度2θ处的那些峰。在一些实施例中，化合物2形式2的特征在于其具有在其X射线粉末衍射图中的六个或更多个峰，所述六个或更多个峰选自在约6.76度、约8.77度、约9.06度、约12.00度、约13.53度、约18.13度、或约20.07度2θ处的那些峰。在一些实施例中，化合物2形式2的特征在于其具有在其X射线粉末图中的所有七个峰，所述所有七个峰选自在约6.76度、约8.77度、约9.06度、约12.00度、约13.53度、约18.13度、或约20.07度2θ处的那些峰。

下文描述了用于制备化合物2形式2的方法。

提供化合物的一般方法

化合物1是根据’800申请中详细描述的方法制备的。

如本文所述，通过将化合物1与琥珀酸组合以形成产物化合物2，化合物2和其形式由化合物1制备。化合物1和琥珀酸的化学计量可以变化。因此，本发明的另一方面提供了用于制备化合物2和其形式的方法。

如上通常所述，在一些实施例中，本发明提供了用于制备化合物2的方法：

其包括以下步骤：

在适于形成化合物2的条件下将化合物1：

与琥珀酸以及任选地适合的溶剂组合。

在一些实施例中，本发明提供了一种制作固体形式的方法，所述固体形式包括化合物1和化合物2形式1的琥珀酸。

在一些实施例中，本发明提供了一种制作固体形式的方法，所述固体形式包括化合物1和化合物2形式2的琥珀酸。

在一些实施例中，本发明提供了一种制作固体形式的方法，所述固体形式包括化合物1和非晶态的琥珀酸。

合适的溶剂可以是任何溶剂系统(例如，一种溶剂或溶剂混合物)，化合物1和/或琥珀酸可溶于或至少部分可溶于所述任何溶剂系统中。

可用于本发明的合适的溶剂的实例包含但不限于质子溶剂、非质子溶剂、极性非质子溶剂或其混合物。在某些实施例中，合适的溶剂包含醚、酯、醇、酮或其混合物。在一些实施例中，溶剂是一种或多种有机醇。

在某些实施例中，合适的溶剂是甲醇、乙醇、2-丙醇或丙酮，其中所述溶剂是无水的或与水结合。在一些实施例中，合适的溶剂包含丙酮、环己酮、甲基叔丁基醚、1,4-二恶烷、乙酸乙酯、乙酸异丙酯、甲醇、乙醇、2-丙醇或水。在一些实施例中，合适的溶剂是乙醇。在一些实施例中，合适的溶剂是无水乙醇。在一些实施例中，合适的溶剂是乙醇和水的混合物。在一些实施例中，合适的溶剂是乙醇和乙酸乙酯的混合物。

在一些实施例中，本发明提供了一种用于制备化合物2的方法，其包括除去溶剂和/或添加溶剂的步骤。在一些实施例中，添加的溶剂与除去的溶剂相同。在一些实施例中，添加的溶剂与除去的溶剂不同。溶剂除去的方法在合成和化学领域中是已知的并且包含但不限于本文和随后实例中描述的那些方法中的任一种方法。

在一些实施例中，用于制备化合物2的方法包括加热和/或冷却制剂的步骤。

在一些实施例中，用于制备化合物2的方法包括搅动和/或搅拌制剂的步骤。

在一些实施例中，用于制备化合物2的方法包括将琥珀酸加入化合物1的溶液或浆液中的步骤。

在一些实施例中，用于制备化合物2的方法包括加热步骤。

在某些实施例中，化合物2从混合物中沉淀。在一些实施例中，化合物2从混合物中结晶。在一些实施例中，在接种溶液(即，将化合物2的晶体添加到溶液中)后，化合物2从溶液中结晶。

化合物2可以从反应混合物中沉淀出来或通过如蒸发、蒸馏、过滤(例如纳米过滤、超滤)、反渗透、吸附和反应等方法去除溶剂的部分或全部、通过添加抗溶剂如庚烷、通过冷却或通过这些方法的不同组合生成。

如上文通常所述，任选地分离化合物2。应理解的是，化合物2可以通过本领域普通技术人员已知的任何合适的物理方法分离。在某些实施例中，通过过滤将沉淀的固体化合物2与上清液分离。在其它实施例中，通过倾析上清液将沉淀的化合物2与上清液分离。

在某些实施例中，通过过滤将化合物2与上清液分离。

在某些实施例中，将分离的化合物2在空气中干燥。在其它实施例中，将分离的化合物2在减压下、任选地在升高的温度下干燥。

如本文所述，化合物2可以是非晶态固体。非晶态固体是本领域的普通技术人员所熟知的并且可以通过各种方法制备，如冻干、熔融、沉淀(例如，从超临界流体)、机械处理(例如，研磨)、淬火冷却、去溶剂化、旋转蒸发、沉淀和喷雾干燥等。

用途、配制品和施用

在许多类型的血液学癌症中，B细胞淋巴恶性肿瘤是由积聚在淋巴结和通常在如血液、骨髓、脾脏以及肝脏等器官中的单克隆、肿瘤性B淋巴细胞引起的。这些癌症的变体包含例如非霍奇金淋巴瘤(NHL)-包含慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(CLL/SLL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、淋巴浆细胞样淋巴瘤/瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(LPL/WM)、套细胞淋巴瘤(MCL)以及弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。这些病症的特征是淋巴结肿大和脾肿大并且最终可能诱导危及生命的器官功能病症。患者还可能具有体质症状(发烧、盗汗和/或体重减轻)和疲劳。患有LPL/WM的患者过量产生免疫球蛋白(Ig)M-产生血浆细胞并且可能产生血浆高粘血症。

针对这些疾病的疗法的目的是诱导肿瘤消退或延迟肿瘤进展以控制疾病相关并发症并且可能延长寿命。需要治疗的患者通常给予化学治疗剂和/或免疫治疗剂。越来越多的非化疗选项可用于前线和复发性疾病，包含依鲁替尼、威尼托克(venetoclax)和艾代拉里斯(idelalisib)。前线组合疗法可以有效提供持久缓解，但大多数患者最终将经历疾病复发。对于这些癌症中的任一种，给出了另外的疗法以试图控制疾病表现。尽管使用了具有不同作用机制的药剂，但经常会出现对治疗的渐进性抗性。患有难治性或多复发进行性疾病(PD)的患者具有不良预后并且最终可能死于其癌症。需要新颖作用机制来为患有B淋巴恶性肿瘤的经受疾病进展的患者提供额外治疗选择。

布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)是TEC激酶家族中的一种非受体酶，所述非受体酶在造血来源的细胞中表达，所述造血来源的细胞包含B细胞、骨髓细胞、肥大细胞以及血小板，其中其调节多种细胞过程，包含增殖、分化、细胞凋亡以及细胞迁移。BTK活化涉及若干B细胞恶性肿瘤的发病机理(Buggy JJ、Elias L，《免疫学国际评论(Int Rev Immunol.)》2012；31(2):119-32；Herman SE、Gordon AL、Hertlein E等人，《血液(Blood)》2011；117(23):6287-96；Kil LP、de Bruijn MJ、van Hulst JA、Langerak AW、Yuvaraj S、Hendriks RW，《美国血液研究期刊(Am J Blood Res)》2013；3(1):71-83；Tai YT、Chang BY、Kong SY等人，《血液(Blood)》2012；120(9):1877-87；Woyach JA、Bojnik E、Ruppert AS等人，《血液(Blood)》2014；123(8):1207-13)。

依鲁替尼(PCI-32765，)是第一个批准用于肿瘤学的BTK抑制剂。BTK的这种口服递送、小分子、不可逆抑制剂已被开发用于治疗B细胞恶性肿瘤。对于具有重度预治疗的FL、MCL、CLL和LPL/WM的受试者，表明依鲁替尼具有大量抗肿瘤活性，从而诱导对淋巴结病和脾肿大的持久消退。基于这些研究，依鲁替尼已获得美国、欧盟(EU)和其它地方的监管机构的批准以治疗MCL、CLL和LPL/WM。

这些数据支持BTK抑制作为癌症治疗方法的概念。然而，在临床中观察到对依鲁替尼的抗性，这导致疾病控制的复发或丧失，从而使患者几乎没有治疗选择。在肿瘤进展的机制中，在依鲁替尼-BTK结合位点处获得的C481突变已被证实是CLL、MCL和WM中肿瘤控制丧失的原因(Woyach JA、Bojnik E、Ruppert AS等人，2014)。产生耐药性的患者还可以通过其它BTK突变或BTK下游突变来实现，如磷脂酶Cγ2(PLCγ2)中的R665W或L845F突变。还观察到在BTK和PLCγ2两者中存在突变(Woyach，2014)。此外，虽然依鲁替尼疗法与第1阶段经历中的剂量限制性毒性(DLT)无关，但长期使用所述药物可能导致不良事件(AE)。这些作用可能与其对多种激酶的不可逆脱靶抑制有关。常见的副作用包含可能由表皮生长因子受体(EGFR)的脱靶抑制引起的轻度到中度腹泻和皮疹(美国包装说明书，2016)，(Gao W、Wang M、Wang L等人，《美国国立癌症研究所期刊(J Natl Cancer Inst.)》2014；106(9))。已经注意到偶尔出现严重出血的瘀伤倾向增加(美国包装说明书，2016)，此类效应可能与TEC激酶响应于血管损伤参与形成稳定的止血栓相关，并且数据示出通过依鲁替尼对BTK和其它TEC激酶进行的同事抑制损害血小板活化。已观察到接受慢性依鲁替尼疗法的3.5％到6.5％的试验参与者中出现心房颤动；实验数据表明依鲁替尼对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)-AKT活性的影响是导致这种心脏效应的潜在原因。

本发明涵盖认识到开发一种有效的抑制剂，与依鲁替尼不同，所述抑制剂不需要C481与BTK相互作用并且具有独特的药代动力学，可能规避患有依鲁替尼难治性疾病的患者中的疾病抗性并可能通过改变BTK相对于其它激酶的选择性为患者提供改善的治疗方案。

在某些实施例中，本发明的化合物用于医药。在一些实施例中，本发明提供了一种降低TEC激酶家族(例如，Tec、Btk、Itk、Txk、Lck和Bmx)中激酶的酶活性的方法。在一些实施例中，此类方法包含使Tec激酶家族的激酶与有效量的Tec激酶家族抑制剂接触。因此，本发明进一步提供了通过使Tec激酶家族成员与本发明的Tec激酶家族抑制剂接触来抑制Tec激酶家族酶活性的方法。如本文所使用，术语“Tec激酶家族成员”是指Tec激酶家族中的任何非受体酪氨酸激酶。在一些实施例中，Tec激酶家族成员是Tec、Btk、Itk、Txk、Lck和Bmx。

在一些实施例中，本发明提供了降低Btk酶活性的方法。在一些实施例中，此类方法包含使Btk与有效量的Btk抑制剂接触。因此，本发明进一步提供了通过使Btk与本发明的Btk抑制剂接触来抑制Btk酶活性的方法。

已经证明不可逆的BTK抑制剂依鲁替尼和阿卡替尼(acalabrutinib)在各种B细胞恶性肿瘤中的有效性(Advani RH等人，《临床肿瘤学期刊(J Clin Oncol.)》2013；31:88-94；Byrd JC等人，《新英格兰医学杂志(N Engl J Med.)》2016；374:323-32)；然而，据报道，由于激酶活性位点上的Cys481Ser突变而获得对依鲁替尼的抗性，从而导致活性显著降低(Binnerts ME等人，《分子癌症疗法(Mol Cancer Ther.)》2015；14(12增刊2)；Woyach JA等人，《新英格兰医学杂志(N Engl J Med.)》2014；370:2286-94)。如针对参与阶段1/2临床试验的患者所报告的，还预期了响应于阿卡替尼暴露的C481抗性突变的发展(Byrd，2016)。

化合物1在亚纳摩尔浓度下抑制BTK活性并且与共价BTK抑制剂不同，所述化合物不需要与激酶活性位点上的Cys481相互作用以获得活性。化合物1还显示出对BTK下游的抑制(例如，其CD69表达、磷脂酶Cγ[PLCγ]磷酸化以及FcεR-介导的CD63表达)。与依鲁替尼和阿卡替尼相比，化合物2(游离碱)的活性不受Cys481Ser突变的影响。参见图11。倍数变化表达为化合物对C481S-BTK的IC50除以化合物对WT BTK的IC50。

这些发现被扩展到基于细胞的测定系统，所述基于细胞的测定系统使用转染的人胚胎肾293(HEK293)细胞来过度表达C481BTK(野生型)或C481S BTK(突变体)(参见图17)。化合物1对C481BTK和C481S BTK的抑制是相似的。然而，依鲁替尼的效力降低了>100倍。这些数据证实了依鲁替尼介导的BTK抑制对C481S突变的敏感性以及这种突变对化合物1抑制活性的最小影响。

此外，与依鲁替尼不同，化合物1不明显抑制表皮生长因子受体(EGFR)并且具有受限的激酶选择性特征(估计了对一组456激酶和激酶变体的活性)。化合物1抑制9种激酶，其中Km和/或IC50和/或Kd＜25nM。在体外激酶测定中，化合物1抑制BTK、ITK以及TEC，其中IC50值分别为0.4nM、24nM以及19nM，并且证明对BMX和TXK没有显著活性(Kd≥200nM)。由于选择性的这些差异，化合物1的激酶选择性特征可以导致对现有BTK抑制剂的改善的安全性和耐受性。

如本文所使用，Btk酶活性是指Btk激酶酶活性。例如，当Btk酶活性降低时，PLCγ的PIP3结合和/或磷酸化降低。在一些实施例中，Btk抑制剂对Btk的半数最大抑制浓度(IC₅₀)小于1μM。在一些实施例中，Btk抑制剂对Btk的IC₅₀小于500nM。在一些实施例中，Btk抑制剂对Btk的IC₅₀小于100nM。在一些实施例中，Btk抑制剂对Btk的IC₅₀小于10nM。在一些实施例中，Btk抑制剂对Btk的IC₅₀小于1nM。在一些实施例中，Btk抑制剂对Btk的IC₅₀为0.1nM到10μM。在一些实施例中，Btk抑制剂对Btk的IC₅₀为0.1nM到1μM。在一些实施例中，Btk抑制剂对Btk的IC₅₀为0.1nM到100nM。在一些实施例中，Btk抑制剂对Btk的IC₅₀为0.1nM到10nM。

在一些实施例中，此类Tec激酶的抑制剂可用于治疗可以通过抑制(即降低)一种或多种Tec激酶的酶活性而减轻的疾病和病症。本发明的化合物是Tec家族激酶的有效抑制剂，并且因此将可用于治疗与Tec家族激酶中的一种或多种的活性相关的疾病。术语“疾病”是指疾病、综合征或疾病状状。因此，本发明提供了治疗有需要的受试者的自身免疫病症、炎性病症、癌症以及癌前病状的方法。本发明进一步提供了治疗对布鲁顿氏酪氨酸激酶抑制有响应的病症的方法。这种方法包含向受试者施用治疗有效量的Tec、Btk、Itk、Txk、Lck和/或Bmx激酶抑制剂。

在一些实施例中，本发明提供了治疗患有对BTK抑制有响应的病症的患者的改进方法，其中患者具有BTK Cys481突变。在一些实施例中，患者具有功能性BTK Cys481突变。在一些实施例中，功能性BTK Cys481突变选自C481S、C481F、C481G或C481T。在一些实施例中，功能性BTK Cys481突变是C481S。在一些实施例中，具有这种BTK Cys481突变的患者先前已接受用BTK抑制剂进行的治疗。在一些实施例中，与没有Cys481突变的BTK相比，具有BTK Cys481突变的患者先前已接受用BTK抑制剂进行的治疗，所述BTK抑制剂对具有Cys481突变的BTK具有较低活性。在一些实施例中，具有BTK Cys481突变的患者先前已接受用依鲁替尼或阿卡替尼进行的治疗。在一些实施例中，本发明提供了治疗患有对BTK抑制有响应的病症的患者的方法，其中BTK对依鲁替尼具有抗性。

在一些实施例中，本发明提供了治疗已接受一种、两种或更多种先前疗法的患者的方法。在一些实施例中，至少一种先前疗法是BTK抑制剂。在一些实施例中，先前疗法BTK抑制剂是依鲁替尼或阿卡替尼。

另一方面，本发明提供了一种治疗患有对BTK抑制有响应的病症的患者的方法，其中患者已经用先前的化学治疗剂治疗并且已经获得了损害先前化学治疗剂活性的突变，所述方法包括向患者施用有效量的所提供的化合物。

WO 2016/054627 A1公开了一种治疗受试者的血液学癌症的方法，其中所述方法包括监测BTK或PLCγ2中获得的突变的存在的步骤，其中影响BTK抑制剂活性的BTK或PLCγ2中获得的突变的存在表明受试者变得对BTK抑制剂具有抗性。

另一方面，本发明提供了一种治疗患有对BTK抑制有响应的病症的患者的方法，其中患者已经用第一BTK抑制剂治疗并且已经获得了损害第一BTK抑制剂活性的突变，所述方法包括向患者施用有效量的所提供的化合物。

另一方面，本发明提供了一种治疗患有对BTK抑制有响应的病症的患者的方法，其中患者已经用第一BTK抑制剂治疗并且已经获得了损害第一BTK抑制剂活性的功能性BTKcys481突变，所述方法包括向患者施用有效量的所提供的化合物。如本文所使用，术语“第一BTK抑制剂”包含任何已知的BTK抑制剂，通过非限制性实例的方式，所述BTK抑制剂包含依鲁替尼(PCI-32765)、阿卡替尼、BGB-3111、GS-4059、ARQ531、RDX06961以及司培替尼(spebrutinib)。在一些实施例中，第一BTK抑制剂是BTK的共价抑制剂。

在一些实施例中，本发明提供了一种治疗患有对BTK抑制有响应的病症的受试者的方法，其包括：

(a)向所述受试者施用包括治疗有效量的第一BTK抑制剂的组合物；

(b)从所述受试者获得血液或组织样品并从其中提取DNA；

(c)分析DNA以识别一个或多个基因序列，所述一个或多个基因序列对第一BTK抑制剂赋予BTK抑制剂抗性；以及

(d)任选地重复步骤(b)和(c)以监测对第一BTK抑制剂赋予BTK抑制剂抗性的获得的突变的存在，以及

(e)向具有对第一BTK抑制剂赋予BTK抑制剂抗性的获得的突变的受试者施用包括治疗有效量的所提供的化合物的组合物。

(b)从所述受试者获得血液或组织样品并从其中提取DNA；

(c)分析所述DNA以识别BTK、PLCγ2或其组合的一个或多个基因序列特征；以及

(d)任选地重复步骤(b)和(c)以监测影响所述第一BTK抑制剂的BTK抑制活性的BTK或PLCγ2中的后天突变的存在，以及

(e)向具有BTK或PLCγ2中的获得的突变的所述受试者施用包括治疗有效量的所提供的化合物的组合物。

在一些实施例中，对BTK抑制有响应的病症是血液学癌症或其它病症。在一些实施例中，血液学癌症是B细胞恶性肿瘤。在一些实施例中，B细胞恶性肿瘤是慢性淋巴细胞白血病、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症或套细胞淋巴瘤。

(a)从所述受试者获得血液或组织样品并从其中提取DNA；

(b)分析DNA以识别一种或多种赋予BTK抑制剂抗性的基因序列；以及

(c)向具有赋予BTK抑制剂抗性的所获得的突变的受试者施用包括治疗有效量的所提供的化合物的组合物。

(a)从所述受试者获得血液或组织样品并从其中提取DNA；

(b)分析所述DNA以识别BTK、PLCγ2或其组合的一个或多个基因序列特征；以确定影响BTK抑制活性的BTK或PLCγ2中的后天突变的存在，以及

(c)向具有BTK或PLCγ2中的获得的突变的受试者施用包括治疗有效量的所提供的化合物的组合物。

应理解的是，对于使用本文所述的所提供的化合物的方法，本发明涵盖化合物1在此些方法中的用途。

术语“自身免疫病症”包含涉及针对天然抗原的不适当的免疫应答的疾病或病症，如急性播散性脑脊髓炎(ADEM)、艾迪生疾病、斑秃、抗磷脂抗体综合征(APS)、溶血性贫血、自身免疫性肝炎、大疱性类天疱疮(BP)、腹腔疾病、皮肌炎、1型糖尿病、古德帕斯丘氏综合征、格雷夫斯病、格林-巴利综合征(GBS)、桥本氏病、特发性血小板减少性紫癜、狼疮或全身性红斑狼疮(SLE)、混合性结缔组织疾病、多发性硬化症、重症肌无力、寻常型天疱疮、血友病伴抑制剂、恶性贫血、多发性肌炎、原发性胆汁性肝硬化、休格伦氏综合征、颞动脉炎和韦格纳氏肉芽肿病。术语“炎性病症”包含涉及急性或慢性炎症的疾病或病症，如过敏、哮喘(例如，过敏性哮喘)、特应性皮炎、前列腺炎、肾小球肾炎、盆腔炎性疾病(PID)、炎性肠病(IBD，例如克罗恩氏病、溃疡性结肠炎)、再灌注损伤、类风湿性关节炎、移植排斥反应(包含具有阳性交叉配血的移植患者)和血管炎。在某些实施例中，本发明提供了治疗批准用利妥昔单抗(针对CD20的单克隆抗体)治疗的疾病、病症或病状的方法，所述疾病、病症或病状包含非霍奇金淋巴瘤(NHL)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、RA、韦格纳氏肉芽肿病(WG)和显微镜下多血管炎(MPA)。在一些实施例中，本发明提供了一种使用本文公开的化合物治疗类风湿性关节炎(RA)、SLE或特应性皮炎的方法。

术语“癌症”包含涉及异常细胞生长和/或增殖的疾病或病症，如神经胶质瘤、甲状腺癌、乳腺癌、肺癌(例如，小细胞肺癌、非小细胞肺癌)、胃癌、胃肠道间质瘤、胰腺癌、胆管癌、卵巢癌、子宫内膜癌、前列腺癌、肾细胞癌、淋巴瘤(例如间变性大细胞淋巴瘤)、白血病(例如急性髓性白血病(AML)、T细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病)、多发性骨髓瘤、恶性间皮瘤、恶性黑色素瘤、套细胞淋巴瘤、中枢神经系统淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤和结肠癌(例如微卫星不稳定性-高结直肠癌)。在一些实施例中，癌症的特征在于B细胞的异常活性，例如B细胞恶性肿瘤。

另一方面，本发明提供了治疗癌症的方法，所述癌症是血液学癌症。在一些实施例中，提供的方法包含向受试者施用治疗有效量的所提供的化合物。术语“血液学癌症”包含血源性肿瘤和涉及造血来源的组织中异常细胞生长和/或增殖的疾病或病症，如淋巴瘤、白血病和骨髓瘤。可以根据本发明治疗的血液学癌症包含例如间变性大细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、B细胞淋巴瘤(例如，ABC-弥漫性大B细胞淋巴瘤、GCB-弥漫性大B细胞淋巴瘤)、T细胞淋巴瘤、套细胞淋巴瘤(MCL)、组织细胞性淋巴瘤、T细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、多发性骨髓瘤、慢性粒细胞白血病、急性淋巴细胞白血病、小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)、淋巴浆细胞样淋巴瘤(LPL)、急性髓性白血病(AML)、急性成髓细胞性白血病、浆细胞白血病和瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(WM，还被称为淋巴浆细胞淋巴瘤)。

在一些实施例中，本发明提供了一种治疗B淋巴(B-细胞)恶性肿瘤的方法。

在一些实施例中，本发明提供了一种治疗急性髓性白血病(如复发性或难治性AML)或骨髓增生异常综合征(MDS)的方法。

在一些实施例中，本发明提供了一种治疗患有自身免疫病症或癌症或癌前病状的患者的方法，由于获得了如C481S、C481F、C481G或C481T等Cys481突变，所述自身免疫病症或癌症或癌前病状对不可逆BTK抑制剂(例如依鲁替尼、阿卡替尼)具有抗性。

术语“癌前病状”包含倾向于或可能变成癌症的病状、异常组织生长和病变。癌前病状包含例如光化性角化病、结肠腺瘤性息肉、宫颈发育不良以及先前血液病症如骨髓纤维化、再生病症性贫血、阵发性夜间血红蛋白尿、真性红细胞增多症和骨髓增生异常综合征。

另一方面，本发明提供了一种化合物2的固体形式在制备用于治疗选自自身免疫病症、炎性病症和癌症的病症的药物中的用途。在一些实施例中，本发明提供了一种固体形式在制备用于治疗类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、特应性皮炎、白血病或淋巴瘤的药物中的用途。在一些实施例中，本发明提供了一种固体形式在制备用于治疗急性髓性白血病或慢性淋巴细胞白血病的药物中的用途。

如本文所用，术语“受试者”是指被施用药物组合物的哺乳动物。示例性受试者包含人以及兽医学和实验室动物如马、猪、牛、狗、猫、兔、大鼠、小鼠和水生哺乳动物。

所选择的适应症和B细胞抑制

如上所述，所提供的化合物可用于治疗疾病，包含RA和SLE。如下文更详细描述的，这些疾病与B细胞有关。因此，本公开涵盖认识到所提供的化合物可用作这些和其它适应症的治疗剂。因此，在一个方面，本发明提供了一种治疗医学病状、疾病或病症的方法，所述医学病状、疾病或病症的病理学特征在于B细胞的异常活性，所述方法包括向受试者施用有效量的本发明的化合物或其组合物。

免疫系统失调是RA的发病机制的核心(Panayi GS等人，《北美风湿病临床学(Rheum Dis Clin North Am.)》2001；27:317-334)。虽然滑膜中大部分浸润性白细胞是T淋巴细胞(主要是活化的CD4+T细胞)和单核细胞/巨噬细胞来源的细胞(其释放如IL-1、TNF-α和IL-6等促炎细胞因子和包含胶原酶和金属蛋白酶的蛋白水解酶)，但是还在滑液中发现了B细胞和浆细胞(Zhang Z、Bridges SL，《北美风湿病临床学(Rheum Dis Clin NorthAm.)》2001；27:335-353)。通过批准用于治疗RA的选择性B细胞耗竭治疗剂利妥昔单抗的功效证明了B细胞及其相关效应子功能在RA中的明确作用(Cohen SB等人,REFLEX试验组,《关节炎与风湿病(Arthritis Rheum.)》2006年9月；54(9):2793-806。

虽然尚未完全了解SLE的病因学，但致病性自身抗体以及免疫复合物的沉积被认为对广泛组织损伤的发展至关重要的(Klippel JH人，《类风湿性疾病的引物(Primer onthe rheumatic diseases)》亚特兰大：关节炎基金会；2001)。可以通过测量通过Fc受体刺激的巨噬细胞对巨噬细胞活化的抑制来研究自身抗体和免疫复合物介导的活化(参见例示-原代人巨噬细胞的FcγR活化)。对自身抗原的耐受性的丧失最终导致对B细胞的刺激以产生通常针对细胞核或细胞质组分的自身抗体。针对细胞核组分的抗体(抗细胞核抗体[ANA])靶向细胞核抗原包含DNA(通常是双链DNA[dsDNA])、RNA、组蛋白和小核核糖核蛋白。这些抗体与形成沉积在组织中的免疫复合物的自身抗原结合、引发炎症反应并且导致组织损伤。除了其在致病性自身抗体产生中的作用之外，B细胞还作为针对T细胞的抗原呈递细胞(APC)起作用，因此在抗原特异性应答的起始中起作用。考虑到免疫系统的体液臂在SLE的发病机理中的核心作用，B细胞或B细胞通路代表了所期望的治疗靶标。最近批准用于SLE的单克隆抗体贝利木单抗阻断BAFF与其表达B细胞的受体结合。这些受体用于活化和增强与在用贝利木单抗治疗后观察到的循环B细胞的减少一致的B细胞的存活。还参见Chan OT等人，《免疫学评论(Immunol Rev.)》1999b；169:107-121；Navarra SV等人，《柳叶刀(Lancet)》2011年2月26日；377(9767):721-31；Furie R等人，《关节炎与风湿病(ArthritisRheum.)》2011年12月；63(12):3918-30；B细胞和髓谱系细胞在如SLE等自身免疫性疾病中的作用进一步得到最近出版物的支持，所述出版物描述了当用小分子不可逆Btk抑制剂(Honigberg，LA PNAS.2010；107:13075)治疗小鼠时在临床前SLE动物模型中的功效。

组合

在某些实施例中，本发明的化合物与另一种药剂组合施用。在一些实施例中，本发明的化合物可用于治疗RA并且与疾病修饰抗风湿药(DMARD)组合施用，包含但不限于：甲氨蝶呤、阿巴西普、硫唑嘌呤、赛妥珠单抗、氯喹和羟氯喹、环孢菌素、D-青霉胺、阿达木单抗、依那西普、戈利木单抗、金盐(包含金诺芬和牛磺酸钠)、英利昔单抗、来氟米特、米诺环素、利妥昔单抗、柳氮磺吡啶、托珠单抗或其组合。在一些实施例中，本发明的化合物与NSAID或皮质类固醇组合施用。在一些实施例中，本发明的化合物可用于治疗SLE并且与用于治疗SLE的药剂组合施用，包含但不限于：皮质类固醇、抗疟药、贝利单抗、霉酚酸酯莫非替(MMF)或霉酚酸酯钠、硫唑嘌呤或其组合。在一些实施例中，本发明的化合物可用于治疗特应性皮炎并且与用于治疗特应性皮炎的局部药剂组合施用，包含但不限于：局部类固醇、他克莫司、甲氨蝶呤、糠酸莫米松(MMF)、硫唑嘌呤、类视黄醇或其组合。

在一些实施例中，本发明提供了一种通过将本发明的化合物或其组合物与至少一种额外活性剂或其组合物组合使用来治疗癌症的方法。

可以与所提供的化合物组合用作第二活性剂的化学治疗抗癌剂的实例包含但不限于烷基化剂(例如，氮芥、苯丁酸氮芥、环磷酰胺、美法仑、异环磷酰胺)、抗代谢物(例如甲氨蝶呤)、极光激酶抑制剂(例如，ZM447439、橙皮苷、VX-680AZD1152)；嘌呤拮抗剂和嘧啶拮抗剂(例如，6-巯基嘌呤、5氟尿嘧啶(5-FU)、阿糖胞苷(Ara-C)、吉西他滨)、纺锤体毒剂(例如，长春碱、长春新碱、长春瑞滨、紫杉醇)、鬼臼毒素(例如，依托泊苷、伊立替康、拓扑替康)、抗生素(例如，多柔比星、柔红霉素、博来霉素、丝裂霉素)、亚硝基脲类(例如，卡莫司汀、洛莫司汀)、无机离子(例如，铂类复合物，如顺铂、卡铂)、酶(例如天冬酰胺酶)、激素(例如，他莫昔芬、亮丙瑞林、氟他胺和甲地孕酮)、拓扑异构酶II抑制剂或毒剂、EGFR(Her1、ErbB-1)抑制剂(例如吉非替尼)、抗体(例如，贝伐单抗、利妥昔单抗)、IMID(例如，沙利度胺、来那度胺)、各种靶向药剂(例如，HDAC抑制剂，如伏立诺他)、Bcl-2抑制剂、VEGF抑制剂、蛋白酶体抑制剂(例如，硼替佐米、卡非佐米)、细胞周期蛋白依赖性激酶(cdk)抑制剂(例如塞利西利)、喹诺酮衍生物(例如，沃沙毒素)和地塞米松。

在其它实施例中，所提供的化合物可以与以下抑制剂在疗法中组合使用：PDK1抑制剂例如GSK2334470(葛兰素史克公司(GlaxoSmithKline))、BX-795、BX-912和BX-320(Berlex)；Akt抑制剂，例如MK-2206(默克公司(Merck))；PI3K抑制剂，例如GDC-0941(皮克立西；基因泰克)、艾代拉里斯(吉利德(Gilead))；BTK抑制剂(例如，GS-4059(吉利德))。

在血液学和实体瘤的治疗中，第二药剂可以包含：PD 1/PD-L1的抑制剂，例如尼妥珠单抗、派姆单抗、皮地利珠单抗、BMS 936559和MPDL328OA；CTLA-4抑制剂，例如伊普利单抗和特普利单抗；以及磷脂酰丝氨酸抑制剂，例如贝伐昔单抗。

在急性髓性白血病的治疗中，第二种药剂包含例如阿糖胞苷(ara-C)、甲基化药剂(例如阿扎胞苷、地西他滨)、柔红霉素和沃沙毒素。

在慢性淋巴细胞白血病的治疗中，第二药剂包含：例如BTK抑制剂(例如，依鲁替尼(PCI-32765)、阿卡替尼、司培替尼)；CD20拮抗剂、如抗CD20抗体(例如，奥法木单抗(Genmab^TM)、阿托珠单抗((Gazyva^TM)、利妥昔单抗(Rituxan^TM)、伊布替莫单抗(Zevalin^TM)、托西单抗、卡鲁单抗、奥克里西单抗(OCREVUS^TM)、veltuzumab)；B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白抑制剂(例如威尼托克(Venclexta^TM)；PI3K抑制剂(例如，皮克立西、艾代拉里斯(Zydelig^TM)、达维利西)；抗CD74抗体(例如米拉珠单抗)；以及烷化剂(例如苯丁酸氮芥)。

在一些实施例中，可以使用第二药剂的组合，如例如CD20拮抗剂和Bcl-2抑制剂(例如利妥昔单抗和威尼托克)的组合。

配制品

本发明的化合物可以呈多种多样的口服、肠胃外、以及局部剂型制备和施用。因此，本发明的化合物可以通过注射(例如静脉、肌内、皮内、皮下、十二指肠内或腹膜内)施用。此外，在此描述的化合物可以通过吸入施用，例如，鼻内。此外，本发明的化合物可以经皮肤施用。还设想的是多个施用途径(例如，肌内、口服、经皮肤)可以用于施用本发明的化合物。因此，本发明还提供了药物组合物，所述药物组合物包括药学上可接受的载剂或赋形剂以及一种或多种本发明的化合物。

对于由本发明的化合物制备药物组合物，药学上可接受的载剂可以是或者固体或液体。固体形式制剂包含粉剂、片剂、丸剂、胶囊剂、扁囊剂、栓剂、以及可分散颗粒。固体载剂可以是一种或多种物质，所述物质还可以充当稀释剂、调味剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂、或封装材料。

在粉剂中，所述载剂是在与精细分散的活性组分的混合物中的精细分散的固体。在片剂中，所述活性组分与具有所需的结合特性的载剂以适合的比例混合并以所希望的形状和尺寸压实。

粉剂和片剂优选地含有5％到70％的活性化合物。适合的载剂是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄芪胶、甲基纤维素、微晶纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语“制剂”旨在包含活性化合物与作为载体提供胶囊的封装材料的配制品，其中具有或不具有其它载体的活性组分由载体包围，该载体由此与活性组分相结合。类似地，扁囊剂以及锭剂包含在内。片剂、粉剂、胶囊剂、丸剂、扁囊剂、以及锭剂可以用作适合于口服施用的固体剂型。

对于制备栓剂，首先将低熔点蜡如脂肪酸甘油酯或可可脂的混合物熔化并且如通过搅拌将活性组分均匀分散于其中。然后将熔融的均匀混合物倾倒入方便大小的模具中，允许冷却，并且从而固化。

液体形式制剂包含溶液、悬浮液、和乳液，例如，水或水/丙二醇溶液。对于肠胃外注射，液体制剂可以被配制在聚乙二醇水溶液中的溶液中。

当需要或希望肠胃外施用时，用于本发明的化合物的特别适合的混合物是可注射的无菌溶液、优选地油性或水性溶液、以及悬浮液、乳液、或包含栓剂的植入物。具体地，用于肠胃外施用的载剂包含右旋糖的水性溶液、盐水、纯水、乙醇、甘油、丙二醇、花生油、芝麻油、聚氧乙烯-嵌段聚合物等。安瓿是方便的单位剂量。本发明的化合物还可以并入脂质体中或经由经皮泵或贴剂施用。适用于本发明的药物混合物包含例如在《医药科学(Pharmaceutical Sciences)》(第17版，麦克出版有限公司(Mack Pub。Co.)，伊斯顿，宾夕法尼亚州)和WO 96/05309中描述的那些(，这两者的教导通过引用结合在此。

适合于口服使用的水性溶液可以通过将活性组分溶解在水中并且如所希望的加入适合的着色剂、调味剂、稳定剂、以及增稠剂制备。适合于口服使用的水性悬浮液可以通过用粘性材料如天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、以及其它熟知的悬浮剂将精细分散的活性组分分散在水中来制作。

还包含的是固体形式制剂，所述固体形式制剂旨在使用之前不久被转化为液体形式制剂以用于口服施用。此类液体组合物包含溶液剂、混悬剂和乳剂。除了活性组分外，这些制剂还可以含有着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人造和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。

在一些实施例中，药物组合物以单位剂型提供例如作为片剂、胶囊、粉剂、溶液、悬浮液、乳剂、颗粒或栓剂。在此类形式中，将组合物再分成含有适量活性成分的单位剂量；单位剂型可以是包装组合物，例如包装粉末、小瓶、安瓿、预充式注射器或含有液体的小袋。单位剂型可以是例如胶囊或片剂本身或者可以是呈包装形式的适当数量的任何此类组合物。这种单位剂型可以含有例如约0.01mg/kg到约250mg/kg并且可以单剂量或以两个或更多个分剂量给予。根据所治疗患者的物种、体重和病状以及患者对药物的个体应答，剂量的变化将必然发生。

根据活性组分的具体施用和效能，活性组分在单位剂量制剂中的量可以从0.1mg至10000mg、更典型地从1.0mg至1000mg、最典型地10mg至500mg变化或调节。如果需要，所述组合物还可以含有其它相容的治疗剂。

一些化合物可以在水中具有有限的溶解度并且因此可能在所述组合物中需要表面活性剂或其它适当的共溶剂。此类共溶剂包含：聚山梨醇酯20、60和80；Pluronic F-68、F-84、和P-103；环糊精；和聚氧乙烯35蓖麻油。此类共溶剂典型地在按重量计约0.01％与约2％之间的水平下使用。

大于单纯的水溶液的粘度的粘度可以是令人希望的，用来减小在调配这些配制品方面的变化性，用来减小配制品的悬浮液或乳液的组分的物理分离和/或以另外的方式用来改进所述配制品。此类粘度构建试剂包括例如聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基纤维素、硫酸软骨素及其盐、透明质酸及其盐、前述的组合。此类试剂典型地在按重量计约0.01％与约2％之间的水平下使用。

本发明的组合物可以另外包含提供持续释放和/或舒适性的组分。此类组分包含高分子量、阴离子类粘液状聚合物、胶凝多糖、和精细分散的药物载剂底物。这些组分在美国专利号4,911,920；5,403,841；5,212,162、和4,861,760中更详细地讨论。出于所有目的这些专利的全部内容以其全文通过引用结合在此。

本公开还提供了包括药物组合物的试剂盒。在某些实施例中，此类试剂盒包含化合物2。所述试剂盒任选地包含用于处方药物的说明书。在某些实施例中，试剂盒包含多剂量。在某些实施例中，试剂盒包含用于施用的装置。所述试剂盒可以包含足够量的每种组分以治疗受试者一周、两周、三周、四周或多个月。所述试剂盒可以包含完整的疗法周期。

有效剂量

由本发明提供的药物组合物包括组合物，其中活性成分以治疗有效量，即以有效实现其预期目的的量包含在内。对特定应用有效的实际量将尤其取决于所治疗的病状。例如，当施用在治疗癌症的方法中时，此类组合物将含有有效实现所期望结果的量的活性成分(例如减少受试者中癌细胞的数量)。

施用的化合物的剂量和频率(单剂量或多剂量)可以根据多种因素而变化，包含施用途径；接受者的大小、年龄、性别、健康、体重、体重指数和饮食；所治疗疾病的性质以及症状程度(例如，对Btk抑制有响应的疾病)；存在其它疾病或其它与健康有关的问题；并行治疗的种类；和来自任何疾病或治疗方案的并发症。其它治疗方案或药剂可以与本发明的方法和化合物结合使用。

对于本文所述的任何化合物，治疗有效量可以最初由细胞培养测定确定。目标浓度将是能够降低如例如使用本文所述的方法测量的激酶酶活性的一种或多种活性化合物的那些浓度。

用于人的治疗有效量可以从动物模型确定。例如，可以配制人的剂量以实现已发现在动物中有效的浓度。如上所述，可以通过监测激酶抑制和向上或向下调节剂量来调节人的剂量。在某些实施例中，所施用的剂量在每天约10mg到约1000mg、每天一次、每天两次或两次以上的范围内。

在一些实施例中，所施用的剂量为约25mg到约300mg。在一些实施例中，所施用的剂量为约50mg到约300mg。在一些实施例中，所施用的剂量大于300mg，例如400mg或500mg。在一些实施例中，所施用的剂量为约50mg到约300mg、每天施用一次、两次或两次以上。在一些实施例中，所施用的剂量为约25mg到约300mg、每天施用一次、两次或两次以上。在一些实施例中，所施用的剂量为约300mg到约500mg、每天施用一次、两次或两次以上。在一些实施例中，所施用的剂量为约50mg、约100mg、约200mg或约300mg。在一些实施例中，所施用的剂量为约25mg、约50mg、约100mg、约200mg、约300mg、约400mg或约500mg。在一些实施例中，所施用的剂量为约50mg、约100mg、约200mg或约300mg、每天施用一次、两次或两次以上。在一些实施例中，所施用的剂量为约25mg、约50mg、约100mg、约200mg、约300mg、约400mg或约500mg、每天施用一次、两次或两次以上。在一些实施例中，所施用的剂量是基于化合物2的量的。在一些实施例中，所施用的剂量是基于化合物1的量的。

剂量可以根据患者和正在使用的化合物的要求而变化。在本发明的上下文中，施用给患者的剂量应足以在患者中实现随时间推移的有益的治疗应答。剂量的大小也将由任何不良副作用的存在、性质和程度决定。总体而言，以小于化合物的最佳剂量的较小的剂量开始治疗。此后，剂量以小增量增加，直到达到在多种情况下的最佳效果。在一些实施例中，剂量范围为0.001％w/v到10％w/v。在一些实施例中，剂量范围为0.1％w/v到5％w/v。

可以单独调整剂量和间隔，以提供对于所治疗的特定临床适应证有效的给予化合物水平。这将提供与个体疾病状态的严重性相称的治疗方案。

为了可以更全面地理解在此描述的本发明，阐述以下实例。应理解，这些实例仅仅是出于说明性的目的，并且不应被解释为以任何方式限制本发明。

实例

以下实例意指说明本发明的某些实施例，并且不限制本发明的范围。

一般实验

缩写

MeOH 甲醇

DMSO 二甲亚砜

EtOH 乙醇

THF 四氢呋喃

EtOAc 乙酸乙酯

DSC 差示扫描量热法

IC 离子色谱法

NMR 核磁共振

TGA 热重分析

XRPD X射线粉末衍射

仪器和方法

A.NMR

通过将恰当量的材料完全溶解在约0.75mL的NMR溶剂(D2O-d6)中来制备用于NMR分析的样品。使用配备有Varian ATB探针的Varian INOVA 400MHz NMR光谱仪在25℃下记录¹H NMR光谱。应用使用标准获取参数的可变数量的扫描(16到256)。每当进行NMR定量时，将预获取延迟设置为10秒。应用恰当的定相和基线校正来处理光谱。

B.XRPD

使用标准Aptuit方法以透射模式将XRPD光谱收集在具有X'celerator检测器的Panalytical X'pert Pro仪器上。使用HighScore Plus软件评估数据。下面列出了所使用的仪器参数。

C.TGA和DSC

在TA Q5000仪器上运行TGA分析。在TA Q2000MDSC仪器上运行DSC分析。下面列出了DSC和TGA方法细节：

D.HPLC

使用以下进行HPLC运行：

柱Phenomenex Luna C18(50x2mm，3μm)；柱温：40℃；

流动相A：0.05％TFA/水；B：0.05％TFA/乙腈

梯度0分钟100％A到8分钟95％B

流速1.0mL/分钟

检测器UV DAD@220nm

E.GVS

通过Hiden Analytical在IGA Sorp仪器上运行GVS分析。下面列出了方法参数。

仪器参数	值
		拟合函数	F1
初始条件	25℃、50％RH、以吸附扫描开始
		结束状态	结束或保持湿度对照

实例1：化合物1的制备

在‘800申请的实例2中详细描述了化合物1的合成，为便于参考在本文中再现了所述实例。

合成反式1'-叔丁基-4'-乙基-3-碘-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-1',4'-二羧酸酯。在N₂下在0℃下向2-氧代-[1,3'-联哌啶]-1',4'-二羧酸反式1'-叔丁酯4'-乙酯8(141mg，2.58mmol，1.0当量)在干甲苯(10mL)中的溶液中依次加入TMEDA(0.89g，7.7mmol，3.0当量)和TMSCl(0.6mg，1.0mmol，2.0当量)。在0.5小时之后，小心地以小部分添加I₂(0.98g，3.87mmol，1.5当量)。在0℃到室温下将反应溶液搅拌16小时。用EtOAc(100mL)稀释混合物，并用Na₂S₂O₃(20mL×2)和盐水(20mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗产物9(2.2g，Y:81％)不经进一步纯化而直接用于下一步骤。ESI-MS(M+H-56)⁺:424.9.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:4.78-4.73(m,1H),4.19-4.04(m,4H),3.55-3.30(m,4H),3.24-3.16(m,2H),2.73-2.60(m,1H),2.22-2.14(m,2H),1.96-1.78(m,2H),1.70-1.60(m,1H),1.44(s,9H),1.25(t,J＝7.2Hz,3H).

合成3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-1',4'-二羧酸反式1'-叔丁酯4'-乙酯。在10℃到15℃下通过加料漏斗将双(三甲基硅基)胺锂在THF(13mL，12mmol，2.0当量)中的1.0M溶液加入3-氯-5-(三氟甲基)苯胺(15g，78mmol，1.2当量)在THF(13mL)中的溶液中。允许将混合物在室温下搅拌20分钟，并且在10℃到15℃下通过加料漏斗添加粗反式1'-叔丁基-4'-乙基-3-碘-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-1',4'-二羧酸酯9(3.7g，65mmol，1.0当量)在THF(13mL)中的溶液30分钟。添加之后，允许将混合物在室温下搅拌30分钟。完成之后，使反应冷却到5℃，并且在维持温度低于20℃同时用水(10mL)缓慢淬灭。用EtOAc(2x 30mL)萃取淬灭的反应。将合并的有机层用饱和盐水(30mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中浓缩。将所产生的粗产物经硅胶纯化，用在庚烷中10％到75％的EtOAc的梯度洗脱，以给出所希望产物10。ESI-MS(M+H-56)⁺:463.1.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:6.92(s,1H),6.71-6.69(m,2H),4.17-4.06(m,4H),3.78-3.68(m,2H),3.46-3.36(m,3H),3.23-3.07(m,2H),2.73-2.65(m,1H),2.44-2.37(m,1H),2.03-1.85(m,3H),1.71-1.61(m,2H),1.46(s,9H),1.27-1.19(m,3H).

合成反式1'-(叔丁氧羰基)-3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-4'-羧酸。向3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-1',4'-二羧酸反式1'-叔丁酯4'-乙酯10(180mg，0.33mmol，1.0当量)在EtOH(5mL)中的溶液中加入NaOH(40mg，0.99mmol，3.0当量)，并且将溶液在80℃下搅拌1小时。将溶剂在真空中浓缩，并且将残余物悬浮在水(10mL)中，并且用HCl(4N)调整成pH＝6。过滤沉淀物以提供作为黄色固体的反式1'-(叔丁氧羰基)-3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-4'-羧酸11(150mg，Y:82％)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。ESI-MS(M+H-85)⁺:463.1.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:6.85(s,1H),6.82(s,1H),6.78(s,1H),4.12-3.96(m,4H),3.53-3.37(m,2H),3.11-3.04(m,2H),2.75-2.67(m,1H),2.24-2.18(m,1H),1.98-1.89(m,3H),1.71-1.58(m,2H),1.44(s,9H).

合成4'-氨基甲酰基-3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-1'-二羧酸反式叔丁酯。向反式1'-(叔丁氧羰基)-3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-4'-羧酸11(70mg，0.14mmol，1.0当量)在DMF(2mL)中的溶液中加入NH₄Cl(22mg，0.41mmol，3.0当量)、HBTU(103mg，0.270mmol，2.0当量)和DIPEA(52mg，0.41mmol，3.0当量)。将反应溶液在室温下搅拌16小时，用EtOAc(10mL)稀释，且用水(5mL)和盐水(5mL)洗涤。将有机相分离并在真空中浓缩以提供粗制油状物，通过制备型HPLC(具有作为移动相的0.05％TFA的MeOH/H₂O)纯化所述粗制油状物以给出作为浅色固体的化合物4'-氨基甲酰基-3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-1'-二羧酸(反式)叔丁酯12(60mg，产率：86％)。ESI-MS(M+H-56)⁺:463.1.¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ:6.87-6.86(m,1H),6.84-6.83(m,1H),6.80(s,1H),4.11-4.03(m,3H),3.53-3.35(m,2H),3.20-3.08(m,2H),2.77-2.74(m,1H),2.25-2.18(m,1H),1.99-1.88(m,3H),1.70-1.60(m,2H),1.46(s,9H).

合成反式3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-4'-甲酰胺。在室温下向4'-氨基甲酰基-3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-1'-二羧酸反式叔丁酯12(60mg，0.11mmol)在CH₂Cl₂(1.0mL)中的溶液中加入CF₃CO₂H(1.0mL)。将反应混合物在室温下搅拌2小时，在真空中浓缩，以给出期望产物13(43mg，90％)，将其不经进一步纯化而用于下一步骤。ESI-MS(M+H)⁺:419.0.

合成反式1'-(6-氨基-5-氟嘧啶-4-基)-3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-4'-甲酰胺。向反式3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-4'-甲酰胺13(42mg，0.10mmol，1.0当量)在1-丁醇(2mL)、6-氯-5-氟嘧啶-4-胺(18mg，0.12mmol，1.2当量)中的溶液中加入DIPEA(26mg，0.20mmol，2.0当量)。将反应溶液在120℃下搅拌16小时。用EtOAc(20mL)稀释混合物，用H₂O(10mL)和盐水(10mL)洗涤，干燥(Na2SO₄)，过滤并在真空中浓缩。通过制备型HPLC(具有作为移动相的0.05％TFA的MeOH/H₂O)纯化粗制品，以给出作为黄色固体的化合物(反式)1'-(6-氨基-5-氟嘧啶-4-基)-3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-4'-甲酰胺14(44mg，产率：83％)。ESI-MS(M+H)⁺:530.0.HPLC:(214nm:100％,254nm:100％).¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ:7.97(s,1H),6.84(s,1H),6.81(s,1H),6.76(s,1H),4.58-4.52(m,2H),4.09-4.03(m,1H),3.52-3.35(m,3H),3.29-3.27(m,4H),3.12-3.05(m,1H),2.24-2.17(m,1H),2.02-1.91(m,3H),1.80-1.63(m,2H).

(3R,3'R,4'S)-1'-(6-氨基-5-氟嘧啶-4-基)-3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-4'-甲酰胺.通过SFC(IA(2x 15cm)、30％EtOH(0.1％DEA)/CO₂，100巴，60mL/分钟)将化合物14的四个非对映异构体的混合物分成三个峰，并且标题化合物对应于峰3。LCMS(Agilent460,254nm):ES(+)MS m/e＝530.1(M+1)@1.20min.¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.77(d,J＝2.01Hz,1H),7.38(br.s.,1H),6.94(s,2H),6.75-6.87(m,2H),6.41-6.66(m,3H),4.29(br.s.,1H),4.23(d,J＝13.05Hz,1H),3.96-4.18(m,2H),3.44(td,J＝6.15,12.30Hz,1H),3.24-3.33(m,1H),3.10(br.s.,1H),2.88(br.s.,1H),2.82(t,J＝12.30Hz,1H),2.13(qd,J＝5.94,12.30Hz,1H),1.74-1.93(m,3H),1.58-1.74(m,1H),1.41-1.58(m,1H).

(3S,3'R,4'S)-1'-(6-氨基-5-氟嘧啶-4-基)-3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-4'-甲酰胺.通过SFC(IA(2x 15cm)、30％EtOH(0.1％DEA)/CO₂，100巴，60mL/分钟)将化合物14的四个非对映异构体的混合物分成三个峰，并且标题化合物对应于峰2。LCMS(Agilent460,254nm):ES(+)MS m/e＝530.1(M+1)@1.19min.¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.77(d,J＝1.76Hz,1H),7.39(br.s.,1H),6.98(s,1H),6.96(s,1H),6.72-6.88(m,2H),6.57(s,2H),6.54(d,J＝7.78Hz,1H),4.05-4.33(m,4H),3.37(t,J＝6.27Hz,2H),3.11(br.s.,1H),2.94(br.s.,1H),2.82(t,J＝12.30Hz,1H),2.02-2.16(m,1H),1.75-1.92(m,3H),1.57-1.74(m,1H),1.36-1.54(m,1H).

(3S,3'S,4'R)-1'-(6-氨基-5-氟嘧啶-4-基)-3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-4'-甲酰胺.通过SFC(IA(2x 15cm)、30％EtOH(0.1％DEA)/CO₂，100巴，60mL/分钟)将化合物14的四个非对映异构体的混合物分成三个峰。通过SFC(AD-H(2x 15cm)，30％iPrOH(0.1％DEA)/CO₂，100巴，60mL/分钟)进一步纯化3个峰中的1个峰以提供标题化合物。LCMS(Agilent 460,254nm):ES(+)MS m/e＝530.1(M+1)@1.20min.¹HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:7.77(d,J＝1.76Hz,1H),7.38(br.s.,1H),6.94(s,2H),6.83(s,1H),6.80(s,1H),6.42-6.66(m,3H),4.18-4.47(m,2H),3.95-4.18(m,2H),3.39-3.52(m,1H),3.24-3.31(m,1H),3.10(br.s.,1H),2.88(br.s.,1H),2.82(t,J＝12.30Hz,1H),2.13(qd,J＝5.91,12.39Hz,1H),1.73-1.92(m,3H),1.58-1.73(m,1H),1.42-1.58(m,1H).

(3R,3'S,4'R)-1'-(6-氨基-5-氟嘧啶-4-基)-3-((3-氯-5-(三氟甲基)苯基)氨基)-2-氧代-[1,3'-联哌啶]-4'-甲酰胺.通过SFC(IA(2x 15cm)、30％EtOH(0.1％DEA)/CO₂，100巴，60mL/分钟)将化合物14的四个非对映异构体的混合物分成三个峰。通过SFC(AD-H(2x 15cm)，30％iPrOH(0.1％DEA)/CO₂，100巴，60mL/分钟)进一步纯化3个峰中的1个峰以提供标题化合物。LCMS(Agilent 460,254nm):ES(+)MS m/e＝530.1(M+1)@1.20min.¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ:7.77(d,J＝1.76Hz,1H),7.39(br.s.,1H),6.98(s,1H),6.96(s,1H),6.73-6.88(m,2H),6.57(s,2H),6.54(d,J＝7.78Hz,1H),4.05-4.35(m,4H),3.37(t,J＝6.15Hz,2H),3.12(br.s.,1H),2.94(br.s.,1H),2.82(t,J＝12.30Hz,1H),2.09(sxt,J＝5.80Hz,1H),1.74-1.92(m,3H),1.56-1.73(m,1H),1.36-1.52(m,1H).

实例2：化合物2的制备

向13.4g的化合物1中加入50mL的EtOH。将所产生的浆液温热到60℃以获得澄清溶液。向此溶液中加入琥珀酸(4.5g，1.5当量)在50mL的EtOH中的浆液，并且将所产生的混合物加热到回流以获得澄清溶液。在2小时内将温度降低到20℃到25℃，并且将混合物在那个温度下搅拌3小时。然后过滤浆液，并用10mL冷EtOH(约4℃)洗涤湿饼。在真空下将固体在50℃下干燥12小时，以给出作为白色固体的含有1.4％DMAP(来自起始材料中的12％DMAP的残余物)的13.0g的化合物2(约90％产率)。

实例3：化合物2的多晶型物

对化合物2进行多晶型筛选以生成和表征结晶形式。考虑其化学多样性和与化合物2的兼容性，选择一系列溶剂系统以产生多晶型物。溶剂/水组合还用于评估水合物形式的存在。

长期浆液(LT)

通过称重约200mg的化合物2、将固体悬浮在0.5mL的溶剂中并且检查过量固体是否仍不溶解来设置在表1中报告的溶剂中的浆液。制备的样品还用于计算化合物2在所使用的溶剂系统中的溶解度。

化合物2溶解度

在20℃下放置一天之后，对针对长期浆液实验制备的浆液进行取样以测量化合物2在所使用的溶剂系统中的溶解度。通过HPLC获得相对于应答因子的溶解度数据；制备溶解在已知浓度下的乙腈/甲醇40/60中的化合物2的六个样品并将其注射在HPLC中。所产生的HPLC区用于计算化合物2的HPLC应答因子(未示出数据)。表1中报告了溶解度计算的结果。

表1：化合物2在各种溶剂中的溶解度

溶剂	溶解度(mg/mL)
		丙酮	11
环己酮	16
		二异丙醚	0
叔丁基甲基醚	1
		1,4-二恶烷	22
乙酸乙酯	2
		乙酸异丙酯	1
甲醇	103
		乙醇	21
2-丙醇	11
		甲苯	0
庚烷	0
		水	1
甲醇/水90/10	100
		乙醇/水90/10	49
2-丙醇/水90/10	41

在溶解度计算之后，将浆液在20℃下搅拌15天。在XRPD和PLM分析之前，在真空下将所获得的固体在室温下过滤并干燥约3小时。对某些样品进行热分析。表2描绘了XRPD结果。大多数长期浆液样品示出具有与起始材料一致的XRPD图的形式2材料。乙酸乙酯和乙酸异丙酯样品示出起始材料到形式1的转化。水样品示出到非晶态材料的部分转化。乙醇/水90/10样品示出形式2到形式1的部分转化。DSC数据确认了这两种形式的存在。

表2：长期浆液物理特性分析结果

温度循环

考虑表1中报告的溶解度数据，将浆液设置在上文报告的溶剂系统中。在20℃到40℃的切换温度下将浆液搅拌48小时，并且反之亦然(在每个温度下搅拌2小时)。将浆液在20℃下搅拌过夜。过滤浆液以分离残余物；在XRPD和PLM分析之前，在真空下将所分离的固体在室温下干燥约3小时。对某些样品进行热分析。表3描绘了XRPD结果。大多数温度循环样品示出具有与起始材料一致的XRPD光谱图的形式2材料。

乙酸乙酯、乙酸异丙酯和乙醇样品示出起始材料到形式1的部分转化。DSC数据确认了形式1和形式2的混合物的存在。

环己酮样品示出XRPD图可以被称为形式2与新型结晶形式的混合物。DSC数据确认了形式2材料的存在，并且示出在135℃下可以与新型熔融相关的吸热事件。在10天后通过XRPD分析的储存在室温下的环己酮样品示出转化为形式2的趋势。

表3：温度循环物体特性分析结果

蒸发

基于上文报告的溶解度数据设置饱和溶液。通过0.45mm PTFE过滤器过滤溶液，并且允许在氮气通量(RH＜10％)下在室温下将滤液在干箱中蒸发至干。通过XRPD和PLM分析所获得的固体。对某些样品进行热分析。表4描绘了XRPD结果。大多数蒸发样品示出具有与起始材料一致的XRPD图的形式2材料。

环己酮样品示出类似于温度循环环己酮样品的XRPD图。DSC分析示出表明多于两种结晶形式的存在的多个事件的存在。

乙醇和乙醇/水90/10样品示出起始材料到形式1的部分转化。

1,4-二恶烷样品示出新的XRPD图。DSC示出表明两个不同形式的存在的两个熔融事件。

表4：蒸发物体特性分析结果

溶剂	晶型
		丙酮	形式2
环己酮	形式2+未知峰
		1,4-二恶烷	未知形式
甲醇	形式2+未知峰
		乙醇	形式1+形式2
2-丙醇	形式2
		甲醇/水90/10	形式2+未知峰
乙醇/水90/10	形式1+形式2
		2-丙醇/水90/10	形式2

密封的饱和溶液

基于上文报告的溶解度数据设置饱和溶液。通过0.45mm PTFE过滤器过滤溶液并收集滤液。将滤液保留在密封的小瓶中并在室温下定期对固体形成进行目视检查(15天)。将未示出固体形成的样品首先储存在4℃下(14天)，并且然后储存在-20℃(7天)，如果需要的话。通过上清液移除来分离所获得的固体，并在通过XRPD和PLM分析之前，将其在室温下在真空烘箱中进行干燥。对某些样品进行热分析。表5描绘了XRPD结果。密封的饱和溶液样品示出形式2XRPD图或形式2与其它形式的混合物。环己酮样品示出类似于温度循环和蒸发环己酮样品的XRPD图。

表5：密封的饱和溶液物理特性分析结果

溶剂	晶型
		丙酮	形式2
环己酮	形式2+未知峰
		甲醇	形式2+未知峰
乙醇	形式1+形式2
		2-丙醇	形式2+未知峰
甲醇/水90/10	形式2
		乙醇/水90/10	形式2+未知峰
2-丙醇/水90/10	形式2+未知峰

蒸气扩散

考虑到上文报告的溶解度数据，将饱和溶液设置在一系列溶剂中。通过0.45μmPTFE过滤器过滤所产生的溶液，并将其置于如图10所描绘的富含抗溶剂的环境中。

定期对溶液的固体形成进行目视检查。通过用移液管移除上清液来分离固体，并在通过XRPD和PLM分析之前，将其在室温下在真空烘箱中干燥约3小时。对某些样品进行热分析。表6报告了用于设置实验和结果的溶剂/抗溶剂对。

使用二异丙醚作为抗溶剂产生的样品示出似乎是形式2材料的XRPD图。一些额外XRPD峰的存在可能表明样品中另一种形式的存在。DSC迹线示出与形式2相关的单个熔融事件。

使用乙酸乙酯或乙酸异丙酯作为抗溶剂产生的样品示出形式1和形式2的形式1材料或混合物的存在。

通过将庚烷用作抗溶剂产生的固体样品示出典型形式2XRPD图。

表6：蒸气扩散物体特性分析结果

放大试验

在反应管中对1g的化合物2进行称重。将起始材料悬浮在15mL的乙酸异丙酯中。将浆液在20℃下搅拌15天。在此时间后，将产物过滤以获得白色固体。在干燥之前通过XRPD分析固体以观察形式1和一些未知峰的存在。将材料在真空烘箱中在40℃下干燥过夜。通过XRPD分析干燥的材料以示出形式1材料的存在。图1示出干燥材料的XRPD光谱。光谱与形式1典型图一致。

还通过DSC、GVS、HPLC、NMR和PLM表征所获得的材料。DSC迹线示出未通过XRPD检测到的少量形式2材料的存在。DSC样品中形式2的存在可能由于在DSC加热斜升期间(图2)转化成形式2的非晶态材料。

GVS图不突显材料的增加的吸湿性(参见图3)。NMR光谱与化合物2结构一致。估计琥珀酸化学计量为1:1。

实例4：人B细胞刺激的方案

从150mL的血液中纯化人B细胞。简而言之，可以用PBS 1/2稀释血液并且离心通过菲可密度梯度。可以通过阴性选择使用来自Milenyi(奥本，加利福尼亚州)的B细胞分离试剂盒II从单核细胞分离B细胞。然后可以用96孔板中10ug/mL的山羊F(ab’)2抗人IgM抗体(杰克逊免疫研究实验室公司(Jackson ImmunoResearch Laboratories)，西格罗夫，宾夕法尼亚州)刺激每孔50,000个B细胞。可以将化合物稀释在DMSO中并添加到细胞中。DMSO的最终浓度为0.5％。可以在3天后使用Promega CellTiter-Glo(麦迪逊，威斯康星州)测量增殖。

实例5：体外BTK激酶测定：BTK-聚GAT-LS测定.

BTK体外测定的目的是通过测量IC₅₀确定针对BTK的化合物效力。在存在活性BTK酶(Upstate 14-552)、ATP和抑制剂的情况下，可以在监测荧光素标记的聚GAT肽(InvitrogenPV3611)的磷酸化的量之后测量化合物抑制。BTK激酶反应可以在黑色96孔板(costar3694)中进行。对于典型测定，可以将激酶缓冲液(10mM Tris-HCl pH 7.5、10mM MgCl₂、200μM Na₃PO₄、5mM DTT、0.01％Triton X-100和0.2mg/mL酪蛋白)中的ATP/肽主混合物(最终浓度；ATP 10μM、聚GAT 100nM)的24μL等分试样加入每个孔中。接下来，可以添加在100％DMSO溶剂中的1μL的4倍40X化合物滴定，随后添加在1X激酶缓冲液(最终浓度为0.25nM)中的15μL的BTK酶混合物。在用28μL的50mM EDTA溶液终止之前，可以将所述测定孵育30分钟。可以将激酶反应的等分试样(5μL)转移到低体积白色384孔板(Corning 3674)中，并且可以添加5μL的2X检测缓冲液(Invitrogen PV3574，具有4nM Tb-PY20抗体(Invitrogen PV3552))。可以覆盖所述板并在室温下孵育45分钟。可以测量分子装置M5(332nm激发；488nm发射；518nm荧光素发射)上的时间分辨荧光(TRF)。可以使用具有从DMSO对照确定的100％酶活性和从EDTA对照确定的0％活性的四参数拟合计算IC₅₀值。

实例6：在人类中的阶段1a单剂量研究

第一次在人类中进行的随机、双盲、安慰剂对照、单剂量研究的阶段1a分3个阶段进行：在阶段1中，8个受试者的四个顺序队列各自被随机指配成渐进地接受以50mg、100mg、200mg和300mg的较高单剂量口服施用的化合物2(n＝每个队列6个；3个男性和3个女性)或安慰剂(n＝每个队列2个；1个男性和1个女性)。

在阶段2中，估计了食物对化合物2的药物代谢动力学的影响。在此阶段中，在两个单独的时机下向处于禁食或进食状态的12个新征募的受试者(6个男性，6个女性；队列6)施用化合物2，其中两个剂量之间时间段≥72小时。化合物2剂量水平为200mg。12个受试者被随机化，使得6个受试者(3个男性，3个女性)在禁食过夜之后接受化合物2，并且6个受试者(3个男性，3个女性)在摄取标准化的高脂餐之后接受化合物2。约4天后，使受试者交叉，使得接受化合物2而在第一阶段不进食的那些受试者然后在进食情况下接受药物，而接受化合物2而在第一阶段进食的那些受试者然后在不进食的情况下接受药物。

阶段3评估来自队列6的已经在研究的阶段2中接受化合物2的12个受试者。在第1天向在禁食状态下的受试者施用25mg剂量的化合物2，并且对受试者随后进行安全性、PK和PD评估。在第4天，在第4天到第9天向然后接受伊曲康唑(有效的CYP3A4抑制剂)的在进食状态下的受试者每天两次地施用200mg的剂量(除在第7天早晨剂量之外)。在第7天早晨，受试者接受200mg剂量的伊曲康唑，随后施用25mg剂量的化合物2(这两种药物均在禁食状态下给予)。然后，随后在第7天、第8天、第9天和第10天对受试者进行安全性、PK和PD评估。将在第1天单独施用化合物2之后观察到的PK结果与在第7天施用化合物2与伊曲康唑之后的这些相同受试者中观察到的结果进行比较。

通过监测不利事件(AE)、实验室异常和心脏发现(ECG)来估计安全性的主要终点。次要终点包括评估血浆浓度-时间曲线下面积(AUC)、最大血浆浓度(Cmax)、最大浓度时间(Tmax)、表观分布体积(Vd/F)、终末消除半衰期(t1/2)、终末消除速率常数(λz)和表观清除率(Cl/F)的PK参数以及全血中BTK抑制的PD参数。

化合物2是琥珀酸盐。测量游离碱(化合物1)的血浆浓度并且将其用于评估PK参数和详细阐述浓度/PD关系。

基于磷酸化的BTK(pBTK)和总BTK(totBTK)计算BTK抑制。在存在蛋白酶和磷酸酶抑制剂(PPi)的情况下裂解所有给药后血液样品和一个给药后样品；在无PPi的情况下裂解第二给药前样品以评估可达到的pBTK中的最大减少。将无PPi的给药前pBTK/totBTK的比率减去有PPi的每个pBTK/totBTK，并且％pBTK相对于给药前计算为：

％BTK抑制然后计算为：

％BTK抑制＝100-(％pBTK相对于给药前)

结果

人口统计学

接受化合物2的24个受试者的中位年龄为55岁(范围：22到64)；在接受安慰剂的8个受试者中，中位年龄为42.5岁(范围：29到65)。接受化合物2的大多数受试者是高加索人(95.8％)；队列1中的仅1个受试者(4.2％)是美洲印第安人/阿拉斯加原住民。

安全性发现

报告了接受化合物2的8个(33％)受试者和接受安慰剂的3个(38％)受试者的治疗中发生的AE(TEAE)。与接受安慰剂的3个(38％)受试者相比，接受化合物2的六个(25％)受试者具有治疗相关的TEAE。

对于接受化合物2的受试者，治疗相关的TEAE包含头痛、恶心和室上性心动过速；额外报告的TEAE包含便秘、支气管炎、疲劳和直立性低血压。没有观察到剂量依赖性毒性的明显模式。在安慰剂组中，所有TEAE被认为是治疗相关的并且包含头痛、恶心和腹泻。

除了经历2级头痛和疲劳的1个受试者(接受300mg的化合物2)之外，AE全部被报道为1级。没有3级或更高级别的AE被报道。没有SAE被报道。所报道的AE、实验室异常或ECG或遥测发现不被认为是临床上有意义的。

PK/PD结果

化合物被迅速吸收，其中中值Tmax＝1小时(范围：0.5到3.0)。跨所有剂量队列的平均t1/2值范围在7.43小时到17小时内。如图12所示，化合物1浓度以多相方式下降。表7中示出了每个队列的平均PK参数。总暴露量(AUC和Cmax)随剂量近似地成比例增加。如图13所示，化合物表明在所有剂量水平上的pBTK的迅速、显著(约100％)且延长的抑制。

表7：化合物1药代动力学参数^a总结

数据被报告为平均值(SD)

AUC_0-24，浓度-时间曲线下面积为时间0到24小时；CL/F，表观清除率；C_max，最大血浆浓度；t_1/2，终末消除半衰期；Vd/F，表观分布体积。

图14中示出了在不同血浆浓度下的pBTK抑制的程度。虽然尚未报道临床疗效的pBTK抑制的特异性靶标水平，但是期望约85％抑制通常对临床活性足够(Byrd JC等人，《新英格兰医学杂志(N Engl J Med.)》2016；374:323-32)。

食物影响

在将200mg化合物2口服施用给进食和禁食状态下的12个受试者之后，估计食物对化合物2的药代动力学的影响。化合物2在进食状态下的吸收率降低，其中Tmax延迟2小时，并且Cmax降低约30％；然而，对化合物2的吸收(AUC)和消除(T1/2)程度没有影响。类似地，两个进食条件下的表观总身体清除率和分布体积相当。总体上，结果指示化合物2可以在进食或不进食的情况下给予。

药物-药物相互作用(CYP3A4抑制的影响)

在12个受试者中评估了强CYP3A4抑制剂、伊曲康唑对口服剂量的25mg化合物2的药代动力学的影响(表7a)。当伊曲康唑与化合物2联合施用时，观察到化合物1血浆暴露量(Cmax和AUC)对应增加约2倍和6.3到7.0倍。这些结果指示化合物1对于CYP3A4是敏感底物(即，示出在存在CYP酶抑制的情况下暴露量增加≥5倍)。基于这些数据，对需要联合施用中等或强CYP3A4抑制剂或诱导剂的药物的受试者的征募可能存在约束，并且在方案疗法期间对这种药物的使用可能存在限制。

表7a

除了tmax(中值(分钟，max))之外，值是算术平均数(CV％)。

PE和90％CI：点估计值和最小二乘几何平均值比率(ANOVA)的90％CI；差分中值和通过用于tmax的Hodges-Lehmann方法计算的非参数的90％CI。

^a N＝11具有可变数据的受试者

缩写：AUC_inf＝从时间0到无穷的浓度-时间曲线下面积；AUC_0-t＝从时间0到最后可测量浓度的时间的浓度-时间曲线下面积；

CL/F＝；Cmax＝最大浓度；N＝队列中受试者的数量；PK＝药代动力学；PD＝药效动力学；T_1/2＝终末血浆消除半衰期；Vz/F＝口服/血管外施用之后在末期阶段的表观分布体积。

药代动力学/药效动力学关系

每个时间点(图15)和总体上(具有LOESS回归曲线和95％置信区间的散点图；图16)呈现了针对阶段1(100mg、200mg和300mg)和阶段3(单独的25mg)的PK与PD测量之间的相关性(化合物1血浆浓度相对于％BTK抑制)。在PK与PD之间观察到明显的相关性。当化合物1血浆浓度较低或接近100ng/mL时，％BTK抑制不大于75％。在化合物1血浆浓度≥200ng/mL的情况下，观察到85％和更高的pBTK抑制。随着浓度增加，抑制增加并且较少可变。对于大多数受试者，高于1000ng/mL的血浆浓度产生抑制>85％并且在很大程度上为约100％。

结论

化合物2在健康受试者中示出有利的安全性和PK/PD曲线。报告了在以其对应的推荐剂量水平施用时依鲁替尼(Binnerts ME等人，《分子癌症疗法(Mol Cancer Ther)》2015；14(12增刊2)；用于口服使用的(依鲁替尼)胶囊[处方信息])，森尼韦尔，加利福尼亚州：Pharmacyclics LLC.；2016；药物评估与研究中心(Center for DrugEvaluation and Research)，205552，《临床药理学综述(Clinical pharmacologyreview)》，(Imbruvica^TM)，2013年7月30日)和阿卡替尼(Byrd JC等人，《新英格兰医学杂志(N Engl J Med.)》，2016；374:323-32)两者的超过暴露量的50mg的最低剂量的平均暴露量(表8)。

表8：BTK抑制剂的平均药代动力学参数(在给药化合物2之后)

仅可针对2到9个患者评估的为6.1小时

AUC_0-24，血浆浓度-时间曲线下面积为时间0到24小时；BID.，每天两次；BTK，布鲁顿氏酪氨酸激酶；C_max最大血浆浓度；t_1/2，终末消除半衰期。

这些结果指出化合物2在这些共价抑制剂上具有改善的PK特性，包含生物利用度和半衰期。期望化合物2的药物特性允许维持足够的血清浓度以提供对BTK的持续抑制，从而产生潜在的临床益处。

安全性、化合物2暴露量的程度以及pBTK抑制的持续时间是令人鼓舞的。这些数据支持每天两次的给药，以在具有和不具有BTK Cys481突变的情况下评估在患有晚期B细胞恶性肿瘤的患者中进行的计划阶段1b/2研究中的安全性和活性。

实例7：化合物2的药代动力学

在大鼠、狗和猴子中进行一系列单剂量PK研究以研究在单次口服施用和单次静脉内(IV)施用化合物2之后化合物2的血浆PK。结果总结在表9中并且在下文详细地描述。

表9.

注意：所有动物接受化合物2；PK结果表示游离碱(化合物1)

缩写：％F＝口服生物利用度：C0＝起始浓度；Cmax＝最大血浆浓度；CMC＝羧甲基纤维素；IV＝静脉内；NA＝不适用；PEG400＝聚乙二醇400；PK＝药代动力学；PO＝口服；SPEW＝PEG400:乙醇:水(1:1:1:7)；T1/2＝终末半衰期；Tmax＝到最大浓度的时间

在雄性Sprague Dawley大鼠中(n＝3)评估化合物2的PK曲线，随后以1mg/kg单次IV施用化合物2并且以5mg/kg单次口服施用。每次施用之后，在0小时(给药前)、给药后0.08小时、0.25小时、0.5小时、0.75小时、2小时、5小时、10小时和24小时收集连续血液样品。表9中报告了PK参数。

进行研究以评估配制为悬浮液或配制为胶囊中固体的化合物2的PK。雄性比格犬(n＝3)接受单次口服灌胃施用作为0.5％w/v K15M中的悬浮液和无菌注射水中0.2％w/v十二烷基硫酸钠(SDS)或作为胶囊中的粉末的35mg/kg和200mg/kg(DRN105-0001)。三个不同的狗用于每个剂量水平。用于35mg/kg口服剂量的狗然后接受单次IV大剂量剂施用在柠檬酸盐缓冲液pH 4.5中10％w/v羟丙基β环糊精中配制的5mg/kg化合物2。不考虑配制品，在IV和口服施用之后观察化合物2游离碱血浆系统性暴露中的动物间差异性。参见表9。

在雄性食蟹猴中(n＝3)研究化合物2的PK，随后以1mg/kg单次IV施用化合物2并且以5mg/kg(DRN105-0042)单次口服施用。每次施用之后，在给药后0.08小时、0.25小时、0.5小时、1小时、2小时、4小时、7小时、16小时和24小时收集连续血液样品。使用非房室PK分析(WinNonlin)来分析数据，并且表9中报告了PK参数。

实例8：化合物1抑制克服针对依鲁替尼的抗性的C481S突变布鲁顿氏酪氨酸激酶

为了解决针对依鲁替尼的所获取的抗性的问题，此实例在慢性淋巴细胞白血病(CLL)的临床前模型中表征了布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)抑制剂化合物1。

方法：通过FICOLL密度离心和rosette-sep阴性选择来从同意的患者的全血中分离原代CLL B细胞。膜联蛋白V和碘化丙啶流式细胞术用于测量患者CLL细胞活力，并且7AAD用于测量间质共培养物。在持续3.2μM CpG刺激之后，通过流式细胞术评估CD40和CD86表达。通过免疫印迹研究原代CLL细胞中的BCR信号传导，随后进行1小时治疗，并且随后用XLA细胞系中的化合物1孵育1小时到24小时。在24小时药物孵育之后，读取MTS值。在用抗CD3和抗CD28进行刺激并且用化合物1孵育1小时之后，通过免疫印迹研究ITK抑制。除非另有说明，否则将化合物1以1μM的浓度用于临床前研究。在FRET激酶测定中测量人重组WT BTK或C481S BTK中的激酶活性。

结果：用WT或C481S BTK转染的XLA细胞的BTK和ERK磷酸化的免疫印迹表明化合物1抑制与WT BTK中依鲁替尼的抑制相当并且大于C481S BTK中依鲁替尼的抑制。使用重组激酶测定，发现化合物1针对WT BTK的IC50为4.6nM，并且C481S BTK为1.1nM，这表明化合物1在突变BTK变体中更有效。另外，发现化合物1比依鲁替尼有效六倍并且比针对C481S BTK的阿卡替尼有效超过640倍。

与依鲁替尼相比，通过BTK磷酸化的免疫印迹，化合物1表明原代患者CLL细胞中BTK的剂量依赖性抑制。用0.1μM、1.0μM和10.0μM化合物1治疗48小时的原代患者细胞的活性被对应地测量为未治疗的病状的96.7％、96.1％和88.1％。在存在HS5间质保护的情况下，在48小时中，化合物1将原代CLL细胞的活力降低了5.5％。发现化合物1将CpG诱导的CD40和CD86表达分别降低了8.7％和15.7％。抗CD3和抗CD28诱导的Jurkat细胞的免疫印迹揭示出化合物1降低了ERK的磷酸化，这暗示对ITK的抑制。

结论：与依鲁替尼不同，化合物1降低C481S BTK中BTK磷酸化。化合物1减少原代患者CLL细胞中的B细胞激活标记物、活力和间质细胞保护并且被示出为抑制ITK。

应理解，虽然已经结合其具体实施方式对本公开进行了描述，但前面的描述旨在说明而非限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求书的范围限定。其它方面、优点以及修改都在以下权利要求书的范围内。

Claims

1.一种固体形式化合物2，其包括化合物1和琥珀酸：

2.根据权利要求1所述的固体形式，其中所述固体形式是结晶固体。

3.根据权利要求2所述的固体形式，其中所述结晶固体基本上不含非晶态化合物2。

4.根据权利要求1所述的固体形式，其中所述固体形式基本上不含杂质。

5.根据权利要求2所述的固体形式，其中所述固体形式是形式1。

6.根据权利要求2或5所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的一个或多个峰是选自约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。

7.根据权利要求6所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的至少两个峰是选自约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。

8.根据权利要求6所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的至少三个峰是选自约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。

9.根据权利要求6所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的至少四个峰是选自约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。

10.根据权利要求6所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的至少五个峰是选自约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。

11.根据权利要求6所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的至少六个峰是选自约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。

12.根据权利要求6所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的至少七个峰是选自约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。

13.根据权利要求6所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的所有八个峰是选自约5.33度、约7.59度、约9.75度、约13.69度、约17.91度、约18.14度、约20.12度、或约24.73度2θ处的那些峰。

14.根据权利要求5所述的固体形式，其XRPD基本上类似于图1中描绘的XRPD。

15.根据权利要求2所述的固体形式，其中所述化合物是形式2。

16.根据权利要求2或15所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的一个或多个峰是选自约6.76度、约8.77度、约9.06度、约12.00度、约13.53度、约18.13度、或约20.07度2θ处的那些峰。

17.根据权利要求16所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的至少两个峰是选自约6.76度、约8.77度、约9.06度、约12.00度、约13.53度、约18.13度、或约20.07度2θ处的那些峰。

18.根据权利要求16所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的至少三个峰是选自约6.76度、约8.77度、约9.06度、约12.00度、约13.53度、约18.13度、或约20.07度2θ处的那些峰。

19.根据权利要求16所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的至少四个峰是选自约6.76度、约8.77度、约9.06度、约12.00度、约13.53度、约18.13度、或约20.07度2θ处的那些峰。

20.根据权利要求16所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的至少五个峰是选自约6.76度、约8.77度、约9.06度、约12.00度、约13.53度、约18.13度、或约20.07度2θ处的那些峰。

21.根据权利要求16所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的至少六个峰是选自约6.76度、约8.77度、约9.06度、约12.00度、约13.53度、约18.13度、或约20.07度2θ处的那些峰。

22.根据权利要求16所述的固体形式，其X射线粉末衍射图中的所有七个峰是选自约6.76度、约8.77度、约9.06度、约12.00度、约13.53度、约18.13度、或约20.07度2θ处的那些峰。

23.根据权利要求15所述的固体形式，其XRPD基本上类似于图5中描绘的XRPD。

24.根据权利要求1所述的固体形式，其中所述固体形式是非晶态固体形式。

25.根据权利要求24所述的固体形式，其中所述固体形式基本上不含结晶化合物2。

26.根据权利要求24所述的化合物，其中所述固体形式基本上不含杂质。

27.一种组合物，其包括根据权利要求1到26中任一项所述的固体形式以及药学上可接受的载剂或赋形剂。

28.一种降低布鲁顿氏酪氨酸激酶的酶活性的方法，其包括使布鲁顿氏酪氨酸激酶与有效量的根据权利要求1到26中任一项所述的固体形式或其组合物接触。

29.一种治疗对布鲁顿氏酪氨酸激酶抑制有响应的病症的方法，其包括向受试者施用有效量的根据权利要求1到26中任一项所述的固体形式或其组合物。

30.一种治疗选自由自身免疫病症、炎性病症、癌症和癌前病状组成的组的病症的方法，其包括向受试者施用有效量的根据权利要求1到26中任一项所述的固体形式或其组合物。

31.根据权利要求29或30所述的方法，其中所述病症选自类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、特应性皮炎、白血病和淋巴瘤。

32.根据权利要求29或30所述的方法，其中所述病症是急性髓性白血病。

33.根据权利要求29或30所述的方法，其中所述病症是B细胞恶性肿瘤。

34.根据权利要求33所述的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是慢性淋巴细胞白血病。

35.根据权利要求33所述的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症或套细胞淋巴瘤。

36.一种治疗以B细胞的异常活性为病理学特征的医学病状、疾病或病症的方法，其包括向受试者施用有效量的根据权利要求1到26中任一项所述的固体形式或其组合物。

37.根据权利要求28到36中任一项所述的方法，其中固体形式或其组合物的所述有效量是约50mg到约300mg。

38.根据权利要求28到36中任一项所述的方法，其中固体形式或其组合物的所述有效量是约25mg到约300mg。

39.根据权利要求37所述的方法，其中固体形式或其组合物的所述有效量是约25mg、约50mg、约100mg、约200mg或约300mg。

40.一种降低布鲁顿氏酪氨酸激酶的酶活性的方法，其包括使布鲁顿氏酪氨酸激酶与有效量的包括化合物1和琥珀酸的化合物2接触

41.一种治疗对布鲁顿氏酪氨酸激酶抑制有响应的病症的方法，其包括向受试者施用有效量的包括化合物1和琥珀酸的化合物2：

42.一种治疗选自由自身免疫病症、炎性病症、癌症和癌前病状组成的组的病症的方法，其包括向受试者施用有效量的包括化合物1和琥珀酸的化合物2：

43.一种治疗以B细胞的异常活性为病理学特征的医学病状、疾病或病症的方法，其包括向受试者施用有效量的包括化合物1和琥珀酸的化合物2：

44.根据权利要求40到43中任一项所述的方法，其中化合物2被配制成包括药学上可接受的载剂或赋形剂的组合物。

45.根据权利要求40到43中任一项所述的方法，其中化合物2是口服的。

46.根据权利要求40到43中任一项所述的方法，其中化合物2的所述有效量是约50mg到约300mg。

47.根据权利要求46所述的方法，其中化合物2的所述有效量是约50mg、约100mg、约200mg或约300mg。

48.根据权利要求40到43中任一项所述的方法，其中化合物2的所述有效量是约25mg到约300mg。

49.根据权利要求48所述的方法，其中化合物2的所述有效量是约25mg、约50mg、约100mg、约200mg或约300mg。

50.根据权利要求41或42所述的方法，其中所述病症选自类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、特应性皮炎、白血病和淋巴瘤。

51.根据权利要求41或42所述的方法，其中所述病症是急性髓性白血病。

52.根据权利要求41或42所述的方法，其中所述病症是B细胞恶性肿瘤。

53.根据权利要求52所述的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是慢性淋巴细胞白血病。

54.根据权利要求52所述的方法，其中所述B细胞恶性肿瘤是瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症或套细胞淋巴瘤。

55.根据权利要求37到54中任一项所述的方法，其中所述固体形式、组合物或化合物每天施用一次、两次或两次以上。

56.一种根据权利要求1到26中任一项所述的固体形式以及药学上可接受的载剂或赋形剂的单位剂型。

57.一种化合物2的单位剂型，所述化合物2包括化合物1和琥珀酸：

58.根据权利要求56或57所述的单位剂型，其包括含量为约50mg到约300mg的化合物2。

59.根据权利要求56或57所述的单位剂型，其包括含量为约50mg、约100mg、约200mg或约300mg的化合物2。

60.根据权利要求56或57所述的单位剂型，其包括含量为约25mg到约300mg的化合物2。

61.根据权利要求56或57所述的单位剂型，其包括含量为约25mg、约50mg、约100mg、约200mg或约300mg的化合物2。

62.根据权利要求56到61中任一项所述的单位剂型，其中所述单位剂型进一步包括药学上可接受的载剂或赋形剂。

63.一种口服配制品，其包括根据权利要求1到26中任一项所述的固体形式以及药学上可接受的载剂或赋形剂。

64.根据权利要求63所述的口服配制品，其包括含量为约50mg到约300mg的化合物2。

65.根据权利要求64所述的口服配制品，其包括含量为约50mg、约100mg、约200mg或约300mg的化合物2。

66.根据权利要求63所述的口服配制品，其包括含量为约25mg到约300mg的化合物2。

67.根据权利要求64所述的口服配制品，其包括含量为约25mg、约50mg、约100mg、约200mg或约300mg的化合物2。

68.一种口服配制品，其包括根据权利要求56到62中任一项所述的单位剂型以及药学上可接受的载剂或赋形剂。

69.一种试剂盒，其包括根据权利要求56到62所述的单位剂型和施药说明书。

70.根据权利要求69所述的试剂盒，其进一步包括处方信息。

71.根据权利要求69所述的试剂盒，其中所述试剂盒包括多个单位剂量。

72.一种治疗患有对BTK抑制有响应的病症的受试者的方法，其中所述受试者已用第一BTK抑制剂治疗并且已获得损害所述第一BTK抑制剂的活性的功能性BTK Cys481突变，所述方法包括向所述受试者施用有效量的化合物1、根据权利要求1到26中任一项所述的固体形式或其组合物。

73.一种治疗患有对BTK抑制有响应的病症的受试者的方法，其包括：

(b)从所述受试者获得血液或组织样品并从其中提取DNA；

(d)任选地重复步骤(b)和(c)以监测BTK或PLCγ2中的后天突变的存在，该突变影响所述第一BTK抑制剂的BTK抑制活性，以及

(e)向BTK或PLCγ2中具有后天突变的所述受试者施用包括治疗有效量的化合物1的组合物、根据权利要求1到26中任一项所述的固体形式或其组合物。

74.一种治疗患有对BTK抑制有响应的病症的受试者的方法，其包括：

(a)从所述受试者获得血液或组织样品并从其中提取DNA；

(b)分析所述DNA以识别BTK、PLCγ2或其组合的一个或多个基因序列特征，以确定BTK或PLCγ2中的后天突变的存在，该突变影响所述第一BTK抑制剂的BTK抑制活性，以及

(c)向BTK或PLCγ2中具有后天突变的所述受试者施用包括治疗有效量的化合物1的组合物、根据权利要求1到26中任一项所述的固体形式或其组合物。

75.根据权利要求72、73或74所述的方法，其中第一BTK抑制剂是依鲁替尼(PCI-32765)、阿卡替尼(acalarabrutinib)或司培替尼(spebrutinib)。

76.根据权利要求72到75中任一项所述的方法，其中固体形式或其组合物的所述有效量是约25mg到约300mg。

77.根据权利要求72到75中任一项所述的方法，其中固体形式或其组合物的所述有效量是约25mg、约50mg、约100mg、约200mg或约300mg。

78.根据权利要求72到75中任一项所述的方法，其中固体形式或其组合物的所述有效量是约25mg、约50mg、约100mg、约200mg或约300mg。

79.根据权利要求28到55或72到78中任一项所述的方法，其中所述受试者具有BTKCys481突变。

80.根据权利要求28到55或72到78中任一项所述的方法，其中所述受试者具有功能性BTK Cys481突变。

81.根据权利要求79或80所述的方法，其中所述突变是C481S、C481F、C481G或C481T。

82.根据权利要求81所述的方法，其中所述突变是C481S。