CN110036024B - 肌肉性能改善化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含至少2种组分的化合物，其中第一组分是来自人或小鼠集聚蛋白C末端的nLG3结构域，和其中至少一种第二组分选自蛋白质或拮抗性抗体，其在肌肉生长抑制素存在下抑制ActR2B诱导的信号传导活性，其中组分通过连接实体连接。这些化合物是神经肌肉疾病和问题的有效治疗方法。

Description

肌肉性能改善化合物
【技术领域】
本公开涉及治疗影响肌肉功能的病理性病症或疾病的方法以及用于此类治疗的化合物。该方法特别适用于治疗，预防，改善或诊断病理性疾病。
【背景技术】
肌肉是负责生物体内所有运动的收缩组织。任何肌肉功能的丧失在很大程度上或多或少都是有害的。肌肉功能的关键要素是强度，力量和耐力。肌肉力量是肌肉或肌肉群在最大收缩时施加的力的量，通常抵抗外部负荷。肌肉力量表示为肌肉或肌肉群在单次，最大努力期间克服阻力所施加的最大可测量力。肌肉力量是力量迅速发展并结合力量和速度。这是工作的速度。肌肉耐力是肌肉或肌肉群长时间维持或反复施加抵抗力的能力。
这些表现可以通过在测试方案中对受试者进行定期评估来评估，例如运动器械。最重要的是肌肉耐力的丧失。例如，6分钟步行测试或“6MWT”的改进(参见，例如，Bautmans等人(BMC Geriatr.2004Jul23；4：6)和Enright(Respir Care.2003年8月；48(8)：783-5))是美国食品和药物管理局等监管机构批准用于治疗影响肌肉功能的病理性疾病的先决条件。
有许多病理性疾病可导致肌肉功能丧失。如本文所用，“病理性病症”包括但不限于神经肌肉疾病。神经肌肉疾病是一个非常广泛的术语，包括许多疾病和疾病，这些疾病和疾病直接损害肌肉的功能，是自愿肌肉的病理，或间接地，是神经或神经肌肉接头的病理。
一种可导致肌肉功能丧失的病理性疾病是肌肉萎缩。肌肉萎缩的原因很多，包括用皮质醇，地塞米松，倍他米松，泼尼松，甲基强的松龙或泼尼松龙等糖皮质激素治疗的结果。肌肉萎缩也可以是由于神经创伤引起的去神经支配或退行性，代谢性或炎性神经病变(例如，Guillian-Barre综合征，外周神经病或暴露于环境毒素或药物)的结果。
此外，肌肉萎缩可能是肌病的结果，如肌强直；先天性肌病，包括纤维状肌病，多/微小肌病和肌管(中央核)肌病；线粒体肌病；家族性周期性麻痹；炎性肌病；代谢性肌病，如由糖原或脂质贮积病引起；皮肌炎；多发性肌炎；包涵体肌炎；骨化性肌炎；横纹肌溶解和肌红蛋白尿。
肌病可能由肌肉营养不良综合征引起，如Duchenne型，Becker型，肌强直，筋膜肱骨，Emery-Dreifuss，眼咽，肩胛骨，肢带，福山，先天性肌营养不良或遗传性远端肌病。肌肉骨骼疾病也可以是骨质疏松症，骨折，身材矮小或侏儒症。
其他可导致肌肉功能丧失的病理障碍是成人运动神经元病，婴儿脊髓性肌萎缩，肌萎缩侧索硬化，幼年脊髓性肌萎缩，多灶性导管阻滞的自身免疫性运动神经病变，中风或脊髓损伤导致的瘫痪，骨骼由于创伤，长期卧床休息，自愿不活动，不自主不活动，代谢压力或营养不足，癌症，艾滋病，禁食，甲状腺疾病，糖尿病，良性先天性张力减退，中枢性核心疾病，烧伤，慢性阻塞性肺病，肝脏疾病(例如纤维化，肝硬化)，败血症，肾衰竭，充血性心力衰竭，衰老，太空旅行或在零重力环境中度过的时间。
可治疗的年龄相关病症的实例包括肌肉减少症，皮肤萎缩，肌肉萎缩，脑萎缩，动脉粥样硬化，动脉硬化，肺气肿，骨质疏松症，骨关节炎，免疫功能不全，高血压，痴呆，亨廷顿病，阿尔茨海默病，白内障，年龄相关性黄斑变性，前列腺癌，中风，预期寿命减少，虚弱，记忆力减退，皱纹，肾功能受损和年龄相关的听力损失；代谢紊乱，包括II型糖尿病，代谢综合征，高血糖和肥胖。当然，患者可能同时患有一种或多种这些病症，例如肌肉减少症和肺气肿，或肌肉减少症和肾功能受损。
被认为是本文所述的“病理性病症”的其他病症包括急性和/或慢性肾病或衰竭，肝纤维化或肝硬化，癌症如乳腺癌，帕金森病；与神经元死亡相关的疾病，如肌萎缩侧索硬化，脑萎缩，或痴呆和贫血。此外，由于年龄，创伤或不活动而遭受损失。
进一步的病症包括恶病质，与类风湿性关节炎相关的恶病质和与癌症相关的恶病质。
迄今为止，很少有可靠或有效的疗法可用于治疗这些疾病。
已经解决了肌肉问题的各个方面。例如，肌肉质量减少的一种潜在治疗途径是抑制肌肉生长抑制素。肌肉生长抑制素，有时称为GDF-8(生长分化因子-8)，是属于结构相关信号蛋白的转化生长因子-β(TGF-β)超家族的二聚体生长和分化因子家族之一。这些蛋白质通过受体丝氨酸激酶的异二聚体复合物发出信号，所述受体丝氨酸激酶包括至少2种I型受体，ActRIB(ALK4)和ActRIC(ALK7)和2种II型受体，ActRIIA(ACVR2A)和ActR2B(ACVR2B)。这些受体都是跨膜蛋白，由具有富含半胱氨酸区域的配体结合细胞外结构域，跨膜结构域和具有预测的丝氨酸/苏氨酸特异性的细胞质结构域组成。I型受体对于信号传导是必需的，而II型受体是结合配体和I型受体表达所必需的。在配体结合后，I型和II型受体形成稳定的复合物，导致II型受体磷酸化I型受体。
激活素受体II B(ActR2B)是肌肉生长抑制素(GDF8)的受体，但是TGF-β超家族的许多其他成员，如激活素B，激活素AB，抑制素A，抑制素B，GDF3，GDF11，Nodal，BMP2，BMP4，BMP7，BMP9和BMP10也与ActR2B结合并激活(参见例如Tsuchida等，Endocrine journal2008 55(1)，11-21)。阻断ActR2B与其配体的相互作用可以产生有益作用。肌肉生长抑制素和这种受体之间的相互作用通过Smad依赖性途径调节骨骼肌分化的抑制作用(SMADs是细胞内蛋白质，它将细胞外信号从转化生长因子β配体(如肌肉生长抑制素)转导到细胞核，在那里它们激活下游基因)。因此，通过抑制或阻止肌肉生长抑制素与ActR2B的结合，可以诱导骨骼肌的形成。
各种团体都在研究这个问题。Bogdanovich等(Nature，2002,420：418-421)描述了抗肌肉生长抑制素抗体能够阻断肌肉生长抑制素，导致杜氏肌营养不良小鼠模型中肌肉量的增加。Bradley等(Cell Mol.Life.Sci.2008,65：2119-2124)综述了调节肌肉生长抑制素/ActR2B相互作用的不同可用方法，包括上述抗肌生长抑制素抗体，通过给予肌肉生长抑制素前肽，给予卵泡抑素以阻断肌肉生长抑制素受体，给予HDAC抑制剂以诱导卵泡抑素产生，给予阻止肌肉生长抑制素结合受体的改变的肌肉生长抑制素肽，并给予肌肉生长抑制素的可溶性诱饵受体，由此抑制成熟肌肉生长抑制素的释放。
肌肉生长抑制素起到抑制肌纤维生长和肌肉干细胞生长的作用。研究表明，缺乏肌肉生长抑制素或用阻断肌肉生长抑制素活性的物质治疗的动物肌肉量明显增大。此外，在肌肉生长抑制素基因的2个拷贝中具有突变的个体具有显著增加的肌肉质量并且在许多情况下比正常强。在特定情况下，在N Engl J Med 2004；350：2682-268(2004年6月24日)中描述，出生时异常肌肉发育的婴儿被证实缺乏肌肉生长抑制素，据信由于其产生的基因缺陷。
最近的一些出版物试图将其作为一种治疗方法，例如：
·肌肉生长抑制素结合蛋白，例如ActR2B多肽(例如US7842663和US8614292)，
·卵泡抑素(例如US6004937)
·抗ActR2B抗体(例如US 8,551,482)
·抗肌肉生长抑制素抗体(例如，US7261893，US8063188，US8415159，US8551482和US8710212)
·抗激活素抗体(例如，US20150037339 A1，WO 2009137075 A1)
肌肉肥大和/或萎缩不是全部。另一个因素是去神经支配。
肌肉收缩是由神经冲动通过释放电子和化学信息触发的。神经还为肌纤维提供了许多营养因子，这些因素对于肌肉的健康和正常运作至关重要。神经和肌肉之间的联系通过称为神经肌肉接头(NMJ)的高度复杂的突触结构发生。NMJ的丧失导致肌肉功能的降低，而与肌肉本身的解剖学和生物化学完整性无关。
一些方法集中于防止神经肌肉连接的丧失。为了正确维持NMJ，例如，Wu等人(Development，2010年4月；137(7)：1017-33.doi：10.1242/dev.038711)和Tezuka等人(Proc Natl Acad Sci，USA.2014年11月18日；111(46)：16556-61)已经证明，集聚蛋白(agrin)对于它们的形成和维持神经肌肉接头是重要的。
然而，已经发现即使肌肉量增加和寻求保留NMJ的治疗的组合也不能防止肌肉性能的丧失(通过在跑步机上适当治疗的小鼠的表现来测量)。简而言之，虽然有许多方法可以改善肌肉问题的个别方面，但目前还没有任何方法可以抵消肌肉性能的整体损失。
【发明内容】
现已发现，一组特定的连接蛋白，多肽和单克隆抗体在改善肌肉性能方面具有特殊效果。因此，提供了包含至少2种组分的化合物，第一组分是来自人或小鼠集聚蛋白C末端的nLG3结构域，和至少一种第二组分，其选自在肌肉生长抑制素存在下抑制ActR2B诱导的信号传导活性的蛋白质或拮抗性抗体，且所述组分通过连接实体连接。
另外提供了一种改善肌肉性能的方法，包括给予有效量的如上定义的化合物。
“改善肌肉性能”意味着肌肉耐力尤其得到改善。令人惊讶的事实是，虽然上文定义的化合物不能提供更多的肌肉质量(肌肉生长抑制素)，但它们也不能有效地聚集乙酰胆碱受体(比完全活性的集聚蛋白片段低至少100-1000倍)，通过耐力衡量的整体肌肉性能显著改善。这可以通过下文描述的实验方法证明。
关于适用于本公开内容并在本公开中描述的氨基酸序列，序列应与下文列出的序列至少75％相同。更特别地，它们可以是80％，85％，90％或95％相同，最特别是95％相同。在集聚蛋白中的插入物的情况下(下文详细描述)，插入物应至少95％相同。在一个具体实施方案中，所有氨基酸序列至少95％相同。
第一个组分是来自集聚蛋白C末端的nLG3结构域。集聚蛋白是一种大型的乙酰肝素蛋白多糖，分子量为400～600kDa(数据库登录号NP-940978)。蛋白质核心由约2000个氨基酸组成，其质量约为225kDa。它是由9个K(kunitz型)结构域，2个LE(层粘连蛋白-EGF样)结构域，一个SEA(精子蛋白，肠激酶和集聚蛋白)结构域，4个EG(表皮生长因子样)结构域和3个LG(层粘连蛋白球状)结构域组成的多结构域蛋白质。集聚蛋白是一种非常重要的蛋白质，由于呼吸衰竭，集聚蛋白缺陷小鼠在出生时死亡。这是由于对于肌纤维的正确神经支配严格需要集聚蛋白，并且这些小鼠不能构建适当的NMJ这一事实。
集聚蛋白存在于几种剪接变体中，并且可以表达为分泌蛋白，其含有N末端NtA(N-末端集聚蛋白)结构域，其是集聚蛋白的最丰富形式，并且是在运动神经元中表达的主要形式。它在神经元的胞体中产生，沿着轴突传递并从运动神经的轴突末端释放到NMJ的突触间隙中。在这里，它充当LRP4的激动剂，也可能成为基底层的组成部分。在CNS中，大多数集聚蛋白通过在缺少N末端NtA结构域的N末端的可变剪接而表达为II型跨膜蛋白(Bezakova和Ruegg，2003)。
集聚蛋白中富含丝氨酸/苏氨酸(S/T)的片段负责高度糖基化，含有几个糖基化和葡糖胺聚糖附着位点，从而产生大量的蛋白聚糖。尽管大多数C端20kDa片段足以诱导AChR聚集，但是对于肌肉细胞，乙酰胆碱受体(AChR)聚集活性的完全活性需要从第一个EG结构域开始的C端，75kDa的集聚蛋白部分(Bezakova和Ruegg，2003)。集聚蛋白的相互作用配偶体的几个结合位点，包括α-苦杏仁苷，肝素，一些整联蛋白和LRP4，被定位到C-末端区域。大的硫酸氢盐侧链是肝素结合蛋白的结合位点，例如一些生长因子。
在人类集聚蛋白的C末端部分，有2个可选的剪接位点y和z。在y位点，可能存在0、4、17或21(4+17)个氨基酸的插入物，并且在z位点存在可以是0、8、11或19(8+11)个氨基酸的插入物。y位点中4个插入的氨基酸的功能是产生肝素结合位点。运动神经元主要表达y4集聚蛋白。关于NMJ成熟的集聚蛋白最重要的剪接位点是z位点，使集聚蛋白具有作为乙酰胆碱受体聚集剂活性的能力。众所周知，在剪接位点y(y4z8)的4-氨基酸插入物存在下，在z位点插入8个氨基酸的全长集聚蛋白产生在培养的肌管聚集测定中具有半最大AChR聚集活性为35pM的集聚蛋白变体。插入11个氨基酸产生半最大AChR聚集活性，而19个氨基酸插入产生110pM的半最大AChR聚集活性。在该位点没有插入的集聚蛋白在体外培养的肌管中聚集乙酰胆碱受体时没有活性(Bezakova和Ruegg，2003)。因此，聚集测定中最活跃形式的集聚蛋白是y4z8变体，其由运动神经元表达。
发现含有LG2，EG4和LG3结构域的集聚蛋白(y4z8)的40kDa C-末端片段在AChR聚集中具有活性，在AchR聚集活性中EC50为130pM，而较短片段仅具有较低活性。具有z8插入的C末端LG3结构域，即所谓的LG3z8结构域，表现出仅13nM的半最大AChR聚集活性，其比40kDa片段低100倍(Bezakova和Ruegg，2003)。
在NMJ的发育和成熟过程中，集聚蛋白是参与乙酰胆碱受体聚集的分子的关键参与者。虽然NMJ通过神经递质乙酰胆碱不稳定，但由运动神经元分泌的集聚蛋白通过MuSK(膜结合受体酪氨酸激酶)的磷酸化来稳定和增加AChR的聚集。假定集聚蛋白与MuSK的相互作用是通过LRP4介导的，LRP4是一种低密度脂蛋白受体(LDLR)相关蛋白。发现集聚蛋白(y4z8)对LRP4的亲和力比集聚蛋白(y4z0)高10倍，从而产生在体外培养的肌管测定中观察到的不同集聚蛋白剪接变体的差异AChR聚集活性。在集聚蛋白结合时，LRP4引起MuSK的自磷酸化，然后MuSK激活信号级联以表达和聚集乙酰胆碱受体。已经显示，集聚蛋白的44kD片段导致肌细胞表面上乙酰胆碱受体聚集的形成(参见Hettwer等(PLOS ONE 2014年2月，第9卷，第2期，e88739))，这被认为是形成NMJ的第一步。
本公开中使用的术语“LG3”是指SEQ ID NO：1的源自人或小鼠的22kDa C末端集聚蛋白片段(所有序列都附于本公开内容并形成其一部分)。本公开中使用的术语“nLG3”是指LG3片段，其在z位点还含有8、11或19个氨基酸的插入。z位点处的插入序列是ELTNEIPA(z8，SEQ ID NO：2)，PETLDSRALFS(z11，SEQ ID NO：3)或ELTNEIPAPETLDSRALFS(z19，SEQ ID NO：4，SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3的组合)。nLG3的实例是SEQ ID NO：5。
本公开中使用的术语“(h)LG3”是指SEQ ID NO：6的人源22kDa C末端集聚蛋白片段。本公开中使用的术语“(h)nLG3”表示(h)LG3片段，其还包含在z位点插入8、11或19个氨基酸。插入序列位于z-位点ELANEIPV(z8，SEQ ID NO：7)，PETLDSGALHS(z11，SEQ ID NO：8)或ELANEIPVPETLDSGALHS(z19，SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：9的组合)。(h)nLG3的具体实例是SEQ ID NO：10。
nLG3可在N-末端或C-末端包含额外的氨基酸。N-末端的这些额外氨基酸是例如由于通过重组合成制备方法并在合适的细胞中表达而存在。
还包括在集合蛋白质的一个或多个结构域直至集聚蛋白的天然N-末端在N-末端含有延伸的蛋白质，以及糖基化的或以其他方式在人集聚蛋白的翻译后，酶促或化学修饰的蛋白质变体。
第二组分选自在肌肉生长抑制素存在下抑制ActR2B介导的信号传导活性的蛋白质或拮抗性抗体。如本文所用的第二组分的实例是指蛋白质或拮抗性抗体，例如actR2B(AcvRIIB，actRIIB)或acvRA(actR2，actRII)，alk4，alk5。术语ActR是指SEQ ID NO：11中定义的小鼠ActR2B受体的可溶性细胞外部分。该细胞外部分是突出到细胞周围环境中的跨膜蛋白的任何部分。术语(h)ActR是指SEQ ID NO：12(AAC64515.1，GI：3769443)中定义的人ActR2B受体的细胞外部分。另一个例子是SEQ ID NO：25中定义的卵泡抑素。
抑制ActR2B介导的信号传导活性的单克隆抗体(mAb)的实例是ActRmAb(US8551482)。抗体由轻链(LC)和重链(HC)组成。ActRmAb的LC(ActRmAb(LC))的典型实例如SEQ ID NO：29中定义。ActRmAb的HC(ActRmAb(HC))如SEQ ID NO：28中定义。与ActRmAb(HC)连接的(h)nLG3(ActRmAb(HC)-(h)nLG3)定义于SEQ ID NO：30。抗体的另一个实例是MyomAb(US8063188)。该抗体针对肌肉生长抑制素并阻止肌肉生长抑制素与(h)ActR受体的结合。MyomAb的LC(MyomAb(LC))的典型实例如SEQ ID NO：32中定义。MyomAb的HC(MyomAb(HC))如SEQ ID NO：31中定义。与MyomAb(HC)连接的(h)nLG3(MyomAb(HC)-(h)nLG3)定义于SEQ IDNO：33。
通过测定可以容易地确定该ActR2B介导的mAb的信号抑制活性。这样的测定可以包括，例如，Smad依赖性报告基因测定，抑制肌肉生长抑制素诱导的Smad磷酸化(P-SmadELISA)和抑制肌肉生长抑制素诱导的骨骼肌细胞分化抑制(例如通过肌酸激酶测定)。
在一些实施方案中，第二组分抑制肌肉生长抑制素诱导的信号传导，如在Smad依赖性报告基因测定中测量的，IC50为10nM或更低，1nM或更低，或100pM或更低。
在一些情况下，根据本发明的化合物可能包含另外的组分，这意味着将存在由2个连接实体连接的3个组分。第3组分起稳定剂组分的作用，即它增加体内血清半衰期。这可能是由于破坏减少，肾脏清除率降低或其他药代动力学作用。“体内血清半衰期”是指在生物体血液中循环的蛋白质的半衰期。已知与免疫球蛋白(IgG分子)的Fc区融合可赋予所需的药代动力学特性并增加血清半衰期。术语“IgG分子的Fc区”是指同种型IgG的免疫球蛋白的Fc结构域，如本领域技术人员所熟知的。IgG分子的Fc区是IgG分子(IgG1，IgG2，IgG3和IgG4)的负责增加IgG分子的体内血清半衰期的一部分。
还可以选择第3组分以赋予所需的性质。例如，一些结构域特别适用于通过亲和层析分离所得蛋白质。出于亲和纯化的目的，使用用于亲和色谱的相关基质，例如谷胱甘肽-，淀粉酶-和镍-或钴-共轭树脂。许多这样的基质以“试剂盒”形式提供，例如Pharmacia GST纯化系统和QIAexpressTM。系统(Qiagen)与(HIS6)融合配偶体一起使用。作为另一个例子，可以选择第3结构域以便于检测ActR2B多肽。此类检测结构域的实例包括各种荧光蛋白(例如GFP)以及“表位标签”，其通常是可获得特异性抗体的短肽序列。众所周知的特异性单克隆抗体易于获得的表位标签包括FLAG，流感病毒血细胞凝集素(HA)和c-myc标签。在一些情况下，第3结构域可能具有蛋白酶切割位点，例如因子Xa或凝血酶，其允许相关蛋白酶部分消化融合蛋白，从而从中释放重组蛋白。然后可以通过随后的色谱分离从第3结构域中分离释放的蛋白质。在某些优选的实施方案中，ActR结构域和(h)nLG3结构域与在体内稳定所得多肽的结构域连接。
第3组分的典型实例是“Fc”结构域SEQ ID NO：14。
同样地，与人血清白蛋白的融合可以赋予所需的性质。可以选择的其他类型的融合结构域包括多聚化(例如，二聚化，四聚化)结构域和功能结构域(赋予额外的生物学功能，例如进一步刺激肌肉生长)。
连接实体是短链氨基酸，连接2个蛋白质组分。该非结构化接头可以对应于ActR2B的细胞外结构域的C末端的大约15个氨基酸的非结构化区域(“尾部”)，或者它可以是5至15、20、30、50或更多个的相对不含二级结构的氨基酸的人工序列。接头可以富含甘氨酸和脯氨酸残基，并且可以例如含有苏氨酸/丝氨酸和甘氨酸的重复序列。通常使用序列GGGS的多个重复(甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-丝氨酸)。甘氨酸提供灵活性，Serin是极性的。连接可以富含甘氨酸和脯氨酸残基，并且可以例如含有苏氨酸/丝氨酸和甘氨酸的重复序列(例如，TG4或SG4重复)。典型的接头序列“L”是如SEQ ID NO：13中定义。融合蛋白可包括纯化子序列，例如表位标签，FLAG标签，多组氨酸序列和GST融合体。
与Fc结构域连接的含ActR结构域的蛋白质的实例是ActR-Fc(SEQ ID NO：19)，Fc-ActR(SEQ ID NO：20)和(h)ActR-Fc(SEQ ID NO：21)(Cadena等人，J Appl Physiol 109：635-642,2010)。与Fc结构域连接的卵泡抑素的实例在SEQ ID NO：26中定义。
与Fc结构域连接的含有nLG3结构域的蛋白质的实例是nLG3-Fc(SEQ ID NO：16)，Fc-nLG3(SEQ ID NO：15)和Fc-(h)nLG3(SEQ ID NO：17)。还构建了没有插入Fc-(h)LG3(SEQID NO：18)的LG3结构域的实例。
特定实施方案包括以下组分：
A-L-B、
B-L-A、
A-L-C-L-B、
B-L-C-L-A、
C-L-B-L-A、
C-L-A-L-B、
B-L-A-L-C、
A-L-B-L-C、
A-L-D、
D-L-A、
A-L-E、
E-L-A，
在其中
A代表含有集聚蛋白nLG3结构域的蛋白质，
B代表ActRIB，ActRIC，ActRIIA，ActR2B受体蛋白和卵泡抑素的细胞外结构域
C代表“稳定剂”结构域，
D代表针对ActRIB，ActRIC，ActRIIA和ActR2B受体蛋白的抑制ActR2B介导的信号的mAb，
E代表针对TGF-β超家族成员的抑制ActR2B介导的信号的mAb L代表连接实体，
特别的组合是B-L-C-L-A，D-L-A和E-L-A。
这些特定组合的实例是：SEQ ID NO：22中定义的ActR-Fc-nLG3，SEQ ID NO：23中定义的(h)ActR-Fc-(h)nLG3，SEQ ID NO：27中定义的Fol-Fc-nLG3，SEQ ID NO：30中定义的与(h)nLG3连接的ActRmAb(HC)(ActRmAb(HC)-(h)nLG3)，SEQ ID NO：33中定义的与(h)nLG3连接的MyomAb(HC)(MyomAb(HC)-(h)nLG3)。抗体的相应轻链需要与重链共表达以产生完全功能的抗体。
根据本发明的抗体的重链和轻链可以表达为连续的单链蛋白，第一和第二组分通过连接实体连接(参见例如Bird等，1988Science 242：423-426；Huston等，1988Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-5883；McCafferty等，1990Nature 348：552-554)。连续的单链蛋白可以与(h)nLG3连接。
本公开的化合物可以通过已知方法制备。例如，编码化合物的DNA在合适的表达系统中表达，随后纯化得到的蛋白质。几种原核和真核表达系统适用于本公开化合物的产生和分泌。原核表达系统包括但不限于在大肠埃希氏菌(E.coli)中表达。真核表达系统包括在小鼠骨髓瘤细胞中的表达，在昆虫细胞中的杆状病毒介导的表达，以及在人胚肾(HEK)细胞中的表达，在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的瞬时表达以及在巴斯德毕赤酵母(Pichiapastoris)中的稳定表达。这些系统的优点是它们可以很容易地适应无血清条件，以减少上清液中污染蛋白质的量，并且可以适应大规模生产。另外，可以使用多种细胞系，包括HEK293T和HEK293细胞，COS细胞，CHO细胞，HeLa细胞，H9细胞，Jurkat细胞，NIH3T3细胞，C127细胞，CV1细胞，CAP细胞或SF细胞。
取决于所用表达系统的类型，可以适当地调整组分的序列，因为哺乳动物，酵母，昆虫和植物细胞都可以引入可以受肽的氨基酸序列影响的不同糖基化模式。通常，用于人类的蛋白质将在提供适当糖基化的哺乳动物细胞系中表达，例如HEK293或CHO细胞系，尽管预期其他哺乳动物表达细胞系也是有用的。
可以通过标准蛋白质纯化技术纯化本公开的化合物。可以使用蛋白A或G纯化免疫球蛋白G。可以使用IMAC纯化带His标签的蛋白，但也可以使用离子交换层析或使用肝素柱的亲和纯化。也可以使用通过针对集聚蛋白的C末端部分产生的抗体进行纯化。然后可以使用羟基磷灰石柱或通过凝胶过滤进一步纯化洗脱的蛋白质。
本发明的化合物可用于药物组合物。因此，本公开内容提供了药物组合物，其包含至少一种如上所述的化合物，其与药学上可接受的载体一起配制。
本公开的药物组合物特别可用于治疗导致肌肉功能丧失的病理状况。这些条件的非限制性实例包括：
·用皮质醇，地塞米松，倍他米松，泼尼松，甲基强的松龙或泼尼松龙等糖皮质激素治疗后肌肉萎缩；
·由于神经创伤或退行性，代谢性或炎性神经病变(例如，Guillian-Barre综合征，外周神经病变或暴露于环境毒素或药物)导致的去神经支配导致的肌肉萎缩；
·由肌病，如肌强直；先天性肌病，包括纤维状肌病，多/微小肌病和肌管(中央核)肌病；线粒体肌病；家族性周期性麻痹；炎性肌病；代谢性肌病，如由糖原或脂质贮积病引起的；皮肌炎；多发性肌炎；包涵体肌炎；骨化性肌炎；横纹肌溶解症和肌红蛋白尿引起的肌肉萎缩；
·由肌肉营养不良综合征，如Duchenne型，Becker型，肌强直，筋膜鞘，Emery-Dreifuss，眼咽，肩胛骨，肢带，福山，先天性肌营养不良或遗传性远端肌病引起的肌病；
·骨质疏松症，骨折，身材矮小或侏儒症等肌肉骨骼疾病；
·成人运动神经元疾病，婴儿脊髓性肌萎缩，肌萎缩侧索硬化，幼年脊髓性肌萎缩，多灶性导管阻滞的自身免疫性运动神经病变，中风或脊髓损伤导致的瘫痪，创伤引起的骨骼固定，卧床休息延长，自愿不活动，非自愿不活动，代谢应激或营养不足，癌症，艾滋病，禁食，甲状腺疾病，糖尿病，良性先天性张力减退，中心核心疾病，烧伤，慢性阻塞性肺病，肝病(纤维化，肝硬化等实例)，败血症，肾功能衰竭，充血性心力衰竭，衰老，太空旅行或在零重力环境中度过的时间；
·年龄相关疾病，如肌肉减少症，皮肤萎缩，肌肉萎缩，脑萎缩，动脉粥样硬化，动脉硬化，肺气肿，骨质疏松症，骨关节炎，免疫功能不全，高血压，痴呆，亨廷顿病，阿尔茨海默病，白内障，年龄相关性黄斑变性，前列腺癌，中风，预期寿命减少，虚弱，记忆力减退，皱纹，肾功能受损和年龄相关的听力损失；代谢紊乱，包括II型糖尿病，代谢综合征，高血糖和肥胖。当然，患者可能同时患有一种或多种这些病症，例如肌肉减少症和肺气肿，或肌肉减少症和肾功能受损。
·病理性疾病，如急性和/或慢性肾病或衰竭，肝纤维化或肝硬化，癌症如乳腺癌，帕金森病；与神经元死亡相关的疾病，如肌萎缩侧索硬化，脑萎缩，或痴呆和贫血。此外，由于年龄，创伤或不活动而遭受损失。
·进一步的病症，如恶病质，与类风湿性关节炎相关的恶病质和与癌症相关的恶病质。
本发明的药物化合物还可以联合治疗给药，即与其他药剂联合给药。例如，组合疗法可包括本公开的抗ActR2B抗体与至少一种其他肌肉质量/强度增加剂组合，例如IGF-1，IGF-2或IGF-1或IGF-2的变体，抗肌生长抑制素抗体，肌肉生长抑制素前肽，结合ActR2B但不激活它的肌肉生长抑制素诱饵蛋白，β2激动剂，Ghrelin激动剂，SARM，GH激动剂/模拟物或卵泡抑素。本公开的药物化合物还可以与Nusinersen或类似化合物联合给药。Nusinersen是一种反义寡核苷酸，可调节SMN2基因的交替剪接，在功能上将其转化为SMN1基因，是一种用于脊髓性肌萎缩的研究药物。
如本文所用，“药学上可接受的载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂，分散介质，包衣，抗细菌剂和抗真菌剂，等渗剂和吸收延迟剂等。载体应适合于静脉内，肌肉内，皮下，肠胃外，脊柱或表皮施用(例如通过注射或输注)。取决于施用途径，本公开的化合物可以涂覆在材料中以保护化合物免受酸和可能使化合物失活的其他天然条件的作用。
本公开的化合物可以是药学上可接受的盐的形式。“药学上可接受的盐”是指保留母体化合物的所需生物活性并且不赋予任何不期望的毒理学作用的盐(参见例如Berge，SM等，1977J.Pharm.Sci.66：1-19)。这些盐的实例包括酸加成盐和碱加成盐。酸加成盐包括衍生自无毒无机酸的那些，例如盐酸，硝酸，磷酸，硫酸，氢溴酸，氢碘酸，磷等，以及来自无毒有机酸，例如脂族单羧酸和二羧酸，苯基-取代的链烷酸，羟基链烷酸，芳族酸，脂族和芳族磺酸等。碱加成盐包括衍生自碱土金属的那些，例如钠，钾，镁，钙等，以及来自无毒有机胺，例如N，N'-二苄基乙二胺，N-甲基葡糖胺，氯普鲁卡因，胆碱，二乙醇胺，乙二胺，普鲁卡因等。
本公开的药物组合物还可包含药学上可接受的抗氧化剂。药学上可接受的抗氧化剂的实例包括：水溶性抗氧化剂，例如抗坏血酸，半胱氨酸盐酸盐，硫酸氢钠，偏亚硫酸氢钠，亚硫酸钠等；油溶性抗氧化剂，如抗坏血酸棕榈酸酯，丁基化羟基苯甲醚(BHA)，丁基化羟基甲苯(BHT)，卵磷脂，没食子酸丙酯，α-生育酚等；和金属螯合剂，如柠檬酸，乙二胺四乙酸(EDTA)，山梨糖醇，酒石酸，磷酸等。
可以在本公开的药物组合物中使用的合适的水性和非水性载体的实例包括水，乙醇，多元醇(例如甘油，丙二醇，聚乙二醇等)，及其合适的混合物，植物油，例如橄榄油和可注射的有机酯，如油酸乙酯。例如，通过使用包衣材料如卵磷脂，通过在分散体的情况下保持所需的粒度，以及通过使用表面活性剂，可以保持适当的流动性。
这些组合物还可含有佐剂，如防腐剂，润湿剂，乳化剂和分散剂。通过上文的灭菌程序和通过包含各种抗细菌剂和抗真菌剂，例如对羟基苯甲酸酯，氯丁醇，苯酚山梨酸等，可以确保防止微生物的存在。还可能需要在化合物中包括等渗剂，例如糖，氯化钠等。此外，通过包含延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸铝和明胶，可以延长可注射药物形式的吸收。
药学上可接受的载体包括无菌水溶液或分散液和用于临时制备无菌可注射溶液或分散液的无菌粉末。这种介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域已知的。除非任何常规介质或试剂与活性化合物不相容，否则考虑将其用于本公开的药物化合物中。补充的活性化合物也可以掺入化合物中。
治疗组合物通常必须在制造和储存条件下是无菌和稳定的。该化合物可以配制成溶液，微乳液，脂质体或适合于高药物浓度的其他有序结构。载体可以是溶剂或分散介质，其含有例如水，乙醇，多元醇(例如甘油，丙二醇和液体聚乙二醇等)及其合适的混合物。例如，通过使用诸如卵磷脂的涂层，通过在分散的情况下保持所需的粒度和通过使用表面活性剂，可以保持适当的流动性。在许多情况下，可以在化合物中包括等渗剂，例如糖，多元醇如甘露醇，山梨糖醇或氯化钠。通过在化合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸盐和明胶，可以实现可注射化合物的延长吸收。
无菌可注射溶液可以通过将所需量的活性化合物与上面列举的一种或多种试剂的组合(如果需要)一起掺入适当的溶剂中，然后进行灭菌微滤来制备。通常，通过将活性化合物掺入无菌媒质中来制备分散体，所述无菌媒质含有基础分散介质和来自上面列举的那些的所需其他试剂。在用于制备无菌可注射溶液的无菌粉末的情况下，制备方法是真空干燥和冷冻干燥(冻干)，其产生活性剂粉末加上来自其先前无菌过滤溶液的任何其他所需试剂。
可以与载体材料组合以产生单一剂型的化合物的量将根据所治疗的受试者和具体的给药方式而变化。可以与载体材料组合以产生单一剂型的活性剂的量通常是产生治疗效果的化合物的量。通常，在百分之百中，与药学上可接受的载体组合的该量为活性剂的约0.01％至约99％，活性剂的约0.1％至约70％，或约1％至约30％。。
调整剂量方案以提供最佳的所需反应(例如治疗反应)。例如，可以施用单次推注，可以随时间施用几个分开的剂量，或者可以根据治疗情况的紧急程度按比例减少或增加剂量。以剂量单位形式配制肠胃外化合物以便于给药和剂量均匀是特别有利的。如本文所用的剂量单位形式是指适合作为待治疗受试者的单位剂量的物理上离散的单位；每个单元含有预定量的活性化合物，经计算可与所需的药物载体一起产生所需的治疗效果。本公开内容的剂量单位形式的说明书由直接取决于活性化合物的独特特征和要实现的特定治疗效果决定，以及配制这种活性化合物用于处理个人敏感度的具体限制。
对于化合物的给药，剂量范围为约0.0001至100mg/kg，更通常为0.01至5mg/kg宿主体重。例如，剂量可以是0.3mg/kg体重，1mg/kg体重，3mg/kg体重，5mg/kg体重或10mg/kg体重或在1-10mg/kg或3-7mg/kg的范围内。示例性治疗方案需要每周施用一次，每2周施用一次，每3周施用一次，每4周施用一次，每月施用一次，每3个月施用一次或每3至6个月施用一次。或者，该化合物可以每年约一次或仅一次给药。这种给药可以静脉内或皮下进行。本公开化合物的剂量方案包括通过静脉内施用1mg/kg体重或3mg/kg体重，使用以下给药方案之一给予抗体：每4周一次，6个剂量，然后每3个月；每3周一次；一次3mg/kg体重，然后每3周1mg/kg体重。
剂量应该是导致肌肉性能增强的剂量。在各种实施方案中，效果是对骨骼肌的影响。在各种实施方案中，剂量引起肌肉肥大，内部器官(例如心脏，肺，肝，肾)的大小不超过比例增加。可以通过测量质量或体积来比较这种比例增加。
在一些方法中，可以同时施用2种或更多种具有不同结合特异性的根据本发明的化合物，在这种情况下，施用的每种化合物的剂量落在所示的范围内。化合物通常多次给药。单剂量之间的间隔可以是例如每周，每月，每3个月，每6个月或每年。如通过测量患者中化合物对靶抗原的血液水平所指示的，间隔也可以是不规则的。在一些方法中，调节剂量以达到约1-1000μg/ml的血浆抗体浓度，并且在一些方法中约25-300μg/ml。
或者，化合物可以作为持续释放制剂给药，在这种情况下需要较低频率的给药。剂量和频率取决于患者中化合物的半衰期。通常，人抗体显示出最长的半衰期，其次是人源化抗体，嵌合抗体和非人抗体。给药的剂量和频率可以根据治疗是预防性还是治疗性而变化。在预防性应用中，相对较低的剂量在较长时间内以相对不频繁的间隔施用。一些患者在余生中继续接受治疗。在治疗应用中，有时需要以相对短的间隔施用相对高的剂量直至疾病进展减少或终止或直至患者显示疾病症状的部分或完全改善。此后，可以给患者施用预防方案。
可以改变本公开的药物组合物中化合物的实际剂量水平，以便获得有效实现特定患者，化合物和给药方式的所需治疗反应的化合物的量，而对病人无毒性。选择的剂量水平取决于多种药代动力学因素，包括所用本发明特定化合物的活性，或其酯，盐或酰胺，使用的具体化合物的给药途径，给药时间，排泄速率，治疗的持续时间，与所用特定化合物组合使用的其他药物，化合物和/或材料，所治疗患者的年龄，性别，体重，状况，一般健康状况和既往病史，以及像医学领域众所周知的因素。
本发明化合物的“治疗有效剂量”可导致疾病症状严重程度降低，疾病无症状期的频率和持续时间增加，或预防由于疾病折磨导致的损伤或残疾，即增加肌肉质量和/或力量。
本公开的化合物可以使用本领域已知的多种方法中的一种或多种通过一种或多种施用途径施用。如本领域技术人员所理解的，给药途径和/或方式将根据所需结果而变化。本公开内容的抗体的施用途径包括静脉内，肌肉内，皮内，腹膜内，皮下，脊柱或其他肠胃外施用途径，例如通过注射或输注。本文所用的短语“肠胃外给药”是指除肠内和局部给药以外的给药方式，通常通过注射，包括但不限于静脉内，肌肉内，动脉内，鞘内，囊内，眶内，心内，皮内，腹膜内，经气管内，皮下，皮下，关节内，包膜下，蛛网膜下，脊柱内，硬膜外和胸骨内注射和输注。在一个实施方案中，抗体是静脉内施用的。在另一个实施方案中，皮下施用抗体。
或者，本公开的化合物可以通过非肠胃外途径施用，例如局部，表皮或粘膜施用途径，例如，鼻内，口服，阴道，直肠，舌下或局部。
活性化合物可以用载体制备，所述载体将保护化合物免于快速释放，例如控释制剂，包括植入物，透皮贴剂和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的，生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯，聚酐，聚乙醇酸，胶原，聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的许多方法是专利的或本领域技术人员通常已知的。见，例如，持续和控制释放药物递送系统，J.R.Robinson，ed.，Marcel Dekker，Inc.，New York，1978。
该化合物可与本领域已知的医疗装置一起施用。例如，在一个实施方案中，本发明的化合物可以与无针皮下注射装置一起施用，例如美国专利No.4,522,587；5,399,163；5,383,851；5,312,335；5,064,413；4,941,880；4,790,824或4,596,556中所示的装置。可用于本公开的众所周知的植入物和模块的实例包括：美国专利No.4,487,603，其示出了用于以受控速率分配药物的可植入微输液泵；美国专利No.4,486,194，其显示了用于通过皮肤施用药物的治疗装置；美国专利No.4,447,233，其示出了用于以精确输注速率输送药物的药物输注泵；美国专利No.4,447,224，其显示了用于连续药物递送的可变流动植入式输注装置；美国专利No.4,439,196，其显示了具有多室隔室的渗透药物递送系统；和美国专利4,475,196，其显示了渗透性药物递送系统。许多其他这样的植入物，递送系统和模块是本领域技术人员已知的并且包括由MicroCHIPSTM(马萨诸塞州贝德福德)制造的那些。
在某些实施方案中，可以配制本公开的化合物以确保体内适当的分布。例如，血脑屏障(BBB)排除了许多高亲水性化合物。为了确保本发明的化合物穿过BBB(如果需要)，可以将它们配制在例如脂质体中。对于制备脂质体的方法，参见例如，美国专利第4,522,811号；5,374,548；和5,399,331。脂质体可包含一个或多个选择性转运到特定细胞或器官中的部分，从而增强靶向药物递送(参见例如V.V.Ranade，1989J.Clin Pharmacol.29：685)。靶向部分的实例包括叶酸或生物素(参见例如美国专利号5,416,016)；甘露糖苷(Umezawa等，1988Biochem.Biophys.Res.Commun 153：1038)；抗体(P.G.Bloeman等，1995FEBSLett.357：140；M.Owais等，1995Antimicrob.Agents Chemother.39：180)；表面活性蛋白A受体(Briscoe等，1995Am.J.Physiol.1233：134)；p120(Schreier等，1994J.Biol.Chem.269：9090)；另见K.Keinanen；M.L.Laukkanen，1994FEBS Lett.346：123；J.J.Killion；I.J.Fidler，1994Imrnunomethods 4：273。
本公开化合物的另一个令人惊讶和有益的效果是它们比本领域已知的肌肉生长抑制素抑制剂更具特异性。
众所周知，肌肉生长抑制素阻断剂不仅对肌肉纤维有影响，而且对卫星细胞也有多种作用。卫星细胞是干细胞和祖细胞的异质群体，是骨骼肌生长，维持和再生所必需的。肌肉生长抑制素阻断剂切换这些肌肉干细胞的生长和分化(McCroskery等人(2003)J.CellBiol.162,1135-1147)。
肌肉生长抑制素阻断剂对肌纤维有不同的作用；它们关闭肌肉细丝的蛋白质降解(负责肌肉收缩)并开启肌丝的蛋白质合成(Curr Opin Support Palliat Care，2011年12月；5(4)：334-341)。肌球蛋白是肌肉蛋白丝家族的名称，因其在肌肉收缩中的作用而闻名-它们包含一系列ATP依赖性运动蛋白，并以其在肌肉收缩中的作用而闻名。在肌肉收缩期间，肌肉细丝(如肌球蛋白)可能会受损，需要降解并被新的细丝取代。已知肌肉蛋白质降解中的人突变导致近端肌肉无力和肥厚性心肌病。在Olivé等人的论文(Human MolecularGenetics，2015,1-13)中，证实了患者的肌纤维含有由肌球蛋白和肌球蛋白相关蛋白形成的内含物。
肌肉生长抑制素阻断剂还阻断肌肉细丝的蛋白质降解，因此长期暴露于肌肉生长抑制素抑制剂导致受损肌肉细丝积聚是可行的。这可能是肌肉生长抑制素阻断剂如ActR-Fc，ActRmAb和MyomAb的不良副作用。这可以解释这些蛋白质在诸如跑步机的表现测定中的相对低的活性。
本公开中描述的nLG3与ActR-Fc，ActRmAb和MyomAb的偶联产生了在其作用模式中更具特异性的新化合物。ActR-Fc-nLG3，ActRmAb-nLG3和MyomAb-nLG3等蛋白质仅激活卫星细胞，对肌肉纤维没有直接影响。目前，尚不清楚这些蛋白质在其作用方式中如何达到这种新的特异性水平。一种解释，但不以任何方式限制本公开的范围，可以是Act RIIB受体也使用LRP-蛋白作为共同受体。众所周知，nLG3与LRP4结合。与LRP4结合非常重要。用作对照的蛋白质ActR-Fc-LG3(注意LG3和nLG3之间的差异)导致与ActR-Fc相似的重量和肌肉增加，因此添加LG3结构域对于这种新活性是不够的(见图12)。LG3结构域必须具有合适的插入物，使其能够结合LRP4。该结果还表明，ActR-Fc的C末端的庞大残基不太可能是ActR-Fc-nLG3的新作用的原因。
因此，本公开还提供了在不对肌纤维产生直接作用的情况下特异性激活骨骼肌的肌卫星细胞的方法，包括用如上所述的化合物治疗肌肉。
【附图说明】
参考以下实施例和相关附图进一步描述本发明，所述实施例和相关附图描绘了特定实施方案并且不以任何方式进行限制。
下面提供了对图1-11的更详细说明，但基本细节如下：
图1显示了乙酰胆碱受体聚集(点)的形成。
图2显示了许多组合物的考马斯染色的SDS-PAGE凝胶
图3显示了相对体重随时间的增加。
图4显示用媒质和许多化合物处理的小鼠的相对肌肉重量。
图5显示了处理小鼠的旋转杆表现。
图6显示了相对体重随时间的增加。
图7显示了相对肌肉湿重。
图8显示了老年小鼠的跑步机表现。
图9显示了跑步机运行期间每分钟激励电脉冲的数量。
图10显示了在媒质给药的第3周期间(治疗前GS)小鼠的平均握力(GS)表现。
图11肌肉病理学概述。
图12显示了相对体重随时间的增加。
【实施例】
【蛋白质的合成】
cDNA是商业上获得的。通过限制酶NotI和HindIII将cDNA克隆到哺乳动物基因表达载体pEvi3(evitria AG，瑞士)中。使用市售的DNA纯化试剂盒(Macherey Nagel，德国)在低内毒素条件下制备质粒DNA。使用SEQ ID NO：34获得蛋白质Fc-nLG3。使用SEQ ID NO：35构建蛋白质nLG3-Fc。使用SEQ ID NO：36构建Fc-(h)nLG3。使用SEQ ID NO：37构建Fc-(h)LG3。使用SEQ ID NO：38构建Fc-ActR。使用SEQ ID NO：39构建ActR-Fc。使用SEQ ID NO：40构建(h)ActR-Fc。使用SEQ ID NO：41构建ActR-Fc-nLG3。
使用SEQ ID NO：42构建(h)ActR-Fc-(h)nLG3，使用SEQ ID NO：43构建(h)ActR-Fc-(h)LG3，使用SEQ ID NO：44构建ActRmAb(LC)，及使用SEQ ID NO：45构建ActRmAb(HC)。使用SEQ ID NO：46构建ActRmAb(HC)-(h)nLG3。使用SEQ ID NO：47构建MyomAb(LC)，及使用SEQ ID NO：48构建MyomAb(HC)。使用SEQ ID NO：49构建MyomAb(HC)-(h)nLG3。分别使用SEQID NO：50和SEQ ID NO：51构建Fol-Fc和Fol-Fc-nLG3。
【蛋白质的生产和纯化】
所有蛋白质均由CHO K1细胞产生。种子在eviGrowTM培养基(evitria AG，瑞士)中生长，该培养基是化学成分确定的无动物成分的无血清培养基。转染和生产在eviMakeTM(evitria AG，瑞士)(一种不含动物成分，无血清的培养基)中，在37℃和5％CO2下进行。通过用IgG重链和轻链表达载体DNA同时转染而产生ActRmAb和MyomAb。得到的抗体分别命名为ActmAb和MyomAb。ActRmAb-(h)nLG3通过同时转染用ActRmAb(HC)-(h)nLG3和ActRmAb(LC)产生的载体DNA来制备。得到的抗体命名为ActmAb-(h)nLG3。MyomAb-(h)nLG3通过同时转染用MyomAb(HC)-(h)nLG3和MyomAb(LC)产生的载体DNA来制备。得到的抗体命名为MyomAb-(h)nLG3。
在转染后第8天通过离心，并无菌过滤(0.2μm)而收获上清液。随后通过Bio-RadBioLogic DuoFlow FPLC系统上的蛋白A亲和层析纯化靶蛋白，其中PBS作为洗涤缓冲液，0.1mol/l甘氨酸pH 3.0作为洗脱缓冲液，1mol/l TRIS pH 10作为中和缓冲液。
【通过SDS-PAGE凝胶电泳鉴定蛋白质】
将每种化合物在4×LDS样品缓冲液(Invitrogen)和10×还原剂(Invitrogen)中洗脱，达到1μg的浓度。将样品在70℃加热10分钟，随后在4-12％Bis-Tris Plus凝胶(Invitrogen)上运行。凝胶在200V电压下运行35分钟。通过凝胶的考马斯染色鉴定靶蛋白质级分。将凝胶留在考马斯染色溶液(0.26％考马斯蓝，10％乙酸，25％甲醇)中4小时。除去考马斯溶液后，然后将凝胶在脱色溶液(10％乙酸，25％甲醇)中温育过夜，以除去过量的染料。使用密度计(BioRad)扫描凝胶并拍摄图像。
【乙酰胆碱受体聚集在C2C12小鼠细胞上】
C2C12小鼠肌肉细胞与来自ATCC的骨骼肌成肌细胞(ATCC-LGC Standards Srl，意大利)培养，其在含有10％FBS(Sigma)、含有2mM L-谷氨酰胺，100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素(均购自Invitrogen-Gibco)的Dulbecco改良Eagle培养基(DMEM)高葡萄糖(Sigma，意大利)中培养。将它们在8孔室载玻片上在先前培养基中培养2-3天，然后用DMEM和3％FBS替换，以获得肌管。将肌管与集聚蛋白构建体以10μM(microM)温育24小时，并在室温下用2％多聚甲醛固定20分钟。通过将细胞与Alexafluor 555-缀合的α-银环蛇毒素(1:500；Invitrogen，Itally)在室温下温育1小时，对样品进行AChR染色。然后冲洗细胞，并用一滴PB 0.1M安装盖玻片。通过确定随机视野中的平均AChR聚集数，用荧光显微镜以40x的放大倍数比较AChR聚集水平。
【动物研究】
【道德声明】
涉及使用实验动物的所有程序均按照意大利国民(DL n.116，GU，Supp.40，1992年2月18日；许可证号17/2010-B，2010年6月30日)和欧洲共同体理事会指令1986年11月24日(86/609/EEC)进行。
【动物】
【九周龄的动物】
在一个实验中，将9周龄雄性C57BL/6小鼠(每组n＝5，Harlan，意大利)随机分组，然后用蛋白质皮下处理。使用的蛋白质在图中表示。磷酸盐缓冲盐水(PBS)，pH 7.4用作媒质对照。剂量为10mg/kg并且在第1、3、5、8、10、12天每周施用3次，持续2周治疗。混合物的总剂量为20mg/kg，由ActR-Fc和Fc-nLG3的1:1混合物组成，使得每种蛋白质以10mg/kg给予。在开始给药后25天给药前每周测定体重3次，用CO2使小鼠安乐死。收集腓肠肌，股四头肌和肱三头肌并称重。
【22月龄的动物】
在老龄小鼠实验中，使用24只雄性小鼠，株C57/BL6(在法国Charles River购买)。在实验程序开始时，小鼠是22月龄。称重动物，打耳洞；将小鼠保持在常规笼中，每笼5只，在12/12小时光照/黑暗循环下，自由提供食物和水。连续5周每周3次实施皮下注射(10mg/kg)。对于5周治疗，在第1、3、5、8、10、12、15、17、19、22、24、26、29、31、33天注射化合物。将动物随机分成3个实验组：对照组(PBS)接受PBS注射，处理组接受AcrR-Fc-nLG3和ActR-Fc。
【体重】
在整个实验中每周测量小鼠体重5次。
【转杆】
转杆测量在转杆TM装置(Ugo Basile，意大利)的7650加速模型上进行。将小鼠放在转杆的杆上。杆从4rpm到32rpm慢慢加速。记录小鼠停留在杆上的时间，当小鼠不再能够留在杆上时，测试终止。标准试验中的最长试验持续时间为5分钟。在延长试验中，最长试验持续时间为30分钟。指出了不同处理组的转杆表现。标准偏差表示为误差条(每组N＝5)。在2次运动试验后，在治疗的第18天和第21天进行标准试验。数据是2天平均四次。延长试验在治疗的第21天进行。
【跑步锻炼】
在下午，每周3次在跑步机设备(Panlab，Harvard Apparatus)上训练小鼠。该仪器能够在各个通道中同时锻炼多达五只小鼠。在开始化合物注射之前，在跑步机上训练小鼠3周，然后在化合物/PBS给药期间训练3周。使用加速跑步机方案测试每只小鼠。简而言之，在任何实验之前，小鼠适当地适应跑步机。在实验运行前的几天，将小鼠放在跑步机的各自跑道上，关闭电栅网并使皮带移动，让它们探测仪器几分钟。在实验过程中，小鼠在跑步前预热。为此，皮带以低速(16厘米/秒)启动，并且电栅网逐渐接通至0.2mA。预热期为2分钟。在预热期后，测试小鼠的跑步表现。跑步机速度从16厘米/秒开始，每分钟加速1厘米。加速持续到小鼠达到疲惫状态。如果小鼠每分钟接受10次或更多次电击，则该水平被认为是耗竭状态，并且针对该特定小鼠停止实验。耗竭后，电栅网停用，小鼠返回其笼子。评估每只小鼠的运行距离，每分钟所受的电击次数以及电击总次数。
【握力测试】
使用握力计(Ugo Basile，Varese，意大利)测量前肢握力。在实验的前6周期间，对照和处理的小鼠每周测试2次，并且在最后2周的实验中每周测试5次。持住小鼠的尾巴，并使其前爪抓住T形杆。一旦小鼠用2个爪子抓住杆，将小鼠从杆上拉开，直到小鼠释放杆。数字仪表显示小鼠施加在杆上的张力水平(以克为单位)。每只动物进行五次连续测试，通过分析排除最低值和最高值，并取平均值。
【肌肉分离和储存】
通过颈脱位处死小鼠。脱位后，用镊子和剪刀迅速将新鲜的骨骼肌(肱三头肌，股四头肌和腓肠肌)从皮肤和骨骼中切除。分离后立即测定湿肌肉重量。然后，将肌肉(每只小鼠3只)置于含有Killik(用于中性葡萄糖酸盐的嵌入培养基(Bio-Optica，Milan；05-9801))的Peel-A-Way包埋模具(Sigma-Aldrich；E6032-1cs)中，用于冷冻切片。使用可能覆盖肌肉的最小量的Killik，从而允许快速冷冻发生。然后将模具立即转移到装有异戊烷(1-甲基丁烷；Sigma-Aldrich；M32631)和干冰(-80℃)的烧杯中20-40秒(较长的接触时间可导致样品中形成裂缝；时间不足会导致冷冻伪像)，然后将肌肉样本转移到干冰中。将样品保存在-80℃的冰箱中而用于长期储存。
将每只小鼠的另外3只肌肉快速放入管中并用至少1ml的RNAlater(Sigma-Aldrich)覆盖，以便通过立即RNA酶失活来稳定和保护RNA。将样品在4℃下保持24小时，然后从管中取出RNAlater并将样品储存在-80℃直至使用。
【冷冻切片】
在冷冻切片之前，将样品置于低温恒温器中至少20分钟，然后进一步处理。将样品用Killik包埋介质安装在低温恒温器的圆形金属底座上。制备20μm厚的横截面并在温(RT)胶凝的Superfrost载玻片(Thermo Scientific Menzel(217655))上收集。将切片在室温下干燥1小时，然后在-20℃下储存。
【肌肉的形态测量分析】
将小鼠肌肉的横截面用苏木精Gill№2(Sigma-Aldrich(GHS232))和曙红Y1％水溶液进行染色(参见H/E染色程序)。对来自每个实验组的3个横截面进行形态测量分析。评估以下参数：(1)外周和中心成核纤维的面积和周长，(2)相对于纤维数量的核的总数，(3)相对于总数的中心核的百分比。
【数据分析和统计】
数据表示为平均值±S.D.(平均值的标准偏差)。Student氏非配对t检验用于确定实验组之间的显著差异。*p＜0.05的值被认为是显著的，**p＜0.01非常显著，***p＜0.001极其显著。
参考附图解释所获得的结果。
图1显示了乙酰胆碱受体聚集(点)的形成。1A，媒质处理的对照；1B，Fc-nLG3；1C，nLG3-Fc；1D，ActR-Fc-nLG3。如所预期，可见高浓度(10μM)的Fc-集聚蛋白(1B)和集聚蛋白-Fc(1C)AChR聚集。然而，使用ActR-Fc-nLG3(1D)和PBS(1A)没有看到明显的聚集。只有偶然的，可能是可见自发的聚集。此外，nLG3-Fc-ActR处理的细胞也未在C2C12处理的细胞上显示出聚集(结果未显示)。如所预期的，AChR聚集出现在nLG3-Fc和Fc-nLG3处理的C2C12细胞上，尽管仅在高浓度下。在1μM时没有可见的聚集。目前尚不清楚为什么actR-Fc-nLG3没有显示出AChR聚集。ActR-Fc-nLG3的“ActR”部分可能抑制聚集的形成。这可能是由于空间阻碍导致不能进行适当的集聚蛋白结合或集聚蛋白和肌肉生长抑制素信号通路干扰所致。
图2显示了考马斯染色的SDS-PAGE凝胶：Fc-nLG3(泳道1)；nLG3-Fc(泳道2)；Fc-ActR(泳道3)；ActR-Fc(泳道4)；ActR-Fc-nLG3(泳道5)；(h)ActR-Fc(泳道6)；Fc-(h)nLG3(泳道7)；(h)ActR-Fc-(h)nLG3(泳道8)；(h)ActR-Fc-(h)LG3(泳道9)；ActRmAb(Lane10)；ActRmAb-(h)nLG3(泳道11)；MyomAb(泳道12)；MyomAb-(h)nLG3(泳道13)。所有观察到的蛋白质条带均如预期。ActR和(h)ActR衍生物的蛋白质条带是模糊的，因为该蛋白质是糖基化的并且糖基化程度产生相同蛋白质的多个条带。
图3显示了相对体重随时间的增加。用媒质，ActR-Fc，Fc-nLG3，ActR-Fc-nLG3和ActR-Fc和Fc-nLG3的1:1混合物处理9周龄小鼠(图3A)；媒质，(h)ActR-Fc，(h)Fc-(h)nLG3，和(h)ActR-Fc-(h)nLG3(图3B)；媒质，ActmAb和ActmAb-nLG3(图3C)；媒质，MyomAb和MyomAB-(h)nLG3(图3D)。如所预期的，ActR-Fc，ActR-Fc-nLG3和ActR-Fc+Fc-nLG3混合物处理的小鼠在第15天与媒质处理的小鼠相比具有显著增加的体重。令人惊讶的是，与ActR-Fc，ActR-Fc-nLG3和ActR-Fc+Fc-nLG3混合物相比，ActR-Fc-nLG3处理的小鼠具有显著更低的体重。此外(h)Fc-(h)nLG3，ActmAb-nLG3 MyomAb-(h)nLG3与其相对对照化合物相比具有显著更低的体重(h)ActR-Fc，ActmAb和MyomAb。
图4显示用媒质，ActR-Fc，Fc-nLG3，ActR-Fc-nLG3，及ActR-Fc、Fc-nLG3、(h)ActR-Fc、Fc-(h)nLG3、(h)ActR-Fc-(h)nLG3、ActmAb、ActmAb-nLG3、MyomAb和MyomAB-(h)nLG3的1:1混合物处理的小鼠的相对肌肉重量。与媒质处理的小鼠的肌肉相比，计算腓肠肌，股四头肌和肱三头肌的相对平均肌肉重量。相对肌肉重量的结果类似于总体重的结果。如所预期的，除Fc-nLG3外的所有化合物具有显著增加的相对肌肉重量。令人惊讶的是，与对照化合物相比，另外携带nLG3或人类nLG3(h)nLG3，ActR-Fc-nLG3，(h)ActR-Fc-(h)nLG3ActmAb-(h)nLG3 MyomAb-(h)nLG3的化合物具有显著更低的体重。
图5显示了小鼠的旋转杆表现。ActR-Fc，Fc-nLG3，及ActR-Fc和Fc-nLG3，ActmAb，MyomAb的1:1混合物处理的小鼠的表现没有显著增加。令人惊讶的是，与其对照化合物ActR-Fc，ActmAb，MyomAb相比，含有nLG3 resp(h)nLG3的化合物ActR-Fc-nLG3，ActmAb-nLG3和MyomAB-(h)nLG3的表现显著增加。
图6显示了相对体重随时间的增加。计算每周的相对平均体重。在实验的前3周期间，用媒质(PBS)处理所有22只老鼠。在接下来的五周内，用媒质，ActR-Fc和ActR-Fc-nLG3处理老年小鼠。在第3周后，与媒质相比，ActR-Fc给药的动物达到非常显著的体重增加水平。在第3周后，与媒质相比，给予ActR-Fc-nLG3的动物具有显著增加的体重，但显著低于ActR-Fc的体重。
图7显示了相对肌肉湿重。与媒质处理的小鼠的肌肉相比，计算腓肠肌，股四头肌和肱三头肌的相对平均肌肉重量。与媒质相比，ActR-Fc给药的动物具有非常显著水平的肌肉重量。与媒质相比，ActR-Fc-nLG3给药的动物的肌肉重量显著增加，但显著低于ActR-Fc的体重。
图8显示了老年小鼠的跑步机表现。图8A显示了在媒质给药第3周期间(治疗前)的跑步机表现。在这个时间点，所有组的表现都非常相似。图8B显示了第5周和第6周期间(治疗后)的平均跑步机表现。ActR-Fc和媒质处理的小鼠的表现在处理后比处理前低(不显著)。随着年龄的增长，这些小鼠的跑步机表现可能会下降。令人惊讶的是，与治疗前相比，治疗后ActR-Fc-nLG3治疗小鼠的表现得到改善(p＝X)。这表明，尽管老鼠年龄较大，但在跑步机的表现有所提高。处理小鼠中ActR-Fc-nLG3的表现显著高于媒质和ActR-Fc处理的小鼠。这表明用ActR-Fc-nLG3治疗改善了老年小鼠的肌肉耐力。
图9显示了在第5周和第6周在跑步机上跑动期间每分钟的激励电脉冲的平均数。当它们耗尽时，小鼠需要更多的电脉冲。ActR-Fc和媒质处理的小鼠需要比ActR-Fc-nLG3处理的小鼠更多的脉冲。p＜0.001是非常显著的。有趣的是，在前9分钟内，所有3组小鼠都需要大约相同数量的脉冲，没有统计学差异。随着跑步机上的时间增加，ActR-Fc-nLG3处理的小鼠的表现要好得多，并且所述小鼠比媒质和ActR-Fc处理的小鼠需要更少的脉冲。这也清楚地表明用ActR-Fc-nLG3处理的小鼠具有改善的肌肉耐力。
图10显示了在媒质给药的第3周期间(治疗前GS)小鼠的平均握力(GS)表现。在这个时间点，所有组的表现都非常相似。图10B显示了第5周和第6周期间(治疗后GS)的平均握力(GS)表现。处理后媒质处理小鼠的表现低于处理前(显著)。处理之后ActR-Fc和ActR-Fc-nLG3处理的小鼠的表现高于处理之前(显著)。处理后ActR-Fc-nLG3和ActR-Fc处理的小鼠的GS表现非常相似，并且与媒质处理的小鼠相比，2者都显著增加。因此，化合物ActR-Fc-nLG3的施用保留了作为ActR-Fc的增加的肌肉强度性能。
图11肌肉病理学概述。测定媒质，ActR-Fc和ActR-Fc-nLG3处理的小鼠的横截面积(CSA)和每个肌纤维的细胞核数。根据这些结果，计算每个CSA的核数。在图11中，描绘了CSA的相对值，每个纤维的每个核的核数和每个CSA的核数。与媒质处理的小鼠相比，ActR-Fc(p＜0.001)和ActR-Fc-nLG3(p＜0.05)处理的小鼠具有统计学上显著增加的CSA和每个纤维的核数。此外，与ActR-Fc-nLG3相比，ActR-Fc处理的小鼠具有显著增加的CSA(p＜0.01)和细胞核数(p＜0.05)。然而，与媒质或ActR-Fc-nLG3相比，ActR-Fc处理的小鼠具有显著减少的每个纤维区域的核数(p＜0.05)。卫星细胞的活动促进了核的形成。随着卫星细胞的生长和分化，它们将与现有的肌纤维融合，从而导致肌纤维更多核。
图12显示了相对体重随时间的增加。用媒质，(h)ActR-Fc，(h)ActR-Fc-(h)nLG3，和(h)ActR-Fc-(h)LG3处理9周龄小鼠。在第19天，与媒质处理的小鼠相比，ActR-Fc，(h)ActR-Fc-(h)nLG3和(h)ActR-Fc-(h)LG3处理的小鼠具有显著增加的相对体重(分别为p＜0.001，p＜0.05，p＜0.001)。(h)ActR-Fc-(h)LG3和(h)ActR-Fc的相对体重没有显著差异。值得注意的是，与(h)ActR-Fc-(h)nLG3相比，(h)ActR-Fc-(h)LG3处理的小鼠具有显著(p>0.01)更高的体重。这2种蛋白质仅在(h)nLG3中的8个氨基酸序列插入物不同。该插入物负责与LRP4受体结合，因此(h)nLG3与LRP4受体结合，而(h)LG3不结合。用(h)ActR-Fc-(h)nLG3处理的小鼠显示与ActR-Fc-nLG3相似的生长曲线(图3)。
从这些结果看，似乎ActR-Fc-nLG3的肌肉生长仅由肌肉干细胞(即卫星细胞)的生长引起，所述肌肉干细胞与肌纤维融合导致更多的细胞核。更多的细胞核将导致肌纤维中更高的蛋白质合成，从而导致ActR-Fc-nLG3，(h)ActR-Fc-(h)nLG3，ActRmAb-nLG3和MyomAb-nLG3处理动物中肌肉的适度增加和体重增加。用ActR-Fc处理也导致更多的细胞核，但是纤维生长超过比例，实际上导致更低的核密度。
序列表
<110> Pharmafox
Pharmafox therapeutics AG
Pharmafox
<120> 肌肉性能改善化合物
<130> AFR
<160> 51
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 186
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 1
Ser Val Gly Asp Leu Glu Thr Leu Ala Phe Asp Gly Arg Thr Tyr Ile
1 5 10 15
Glu Tyr Leu Asn Ala Val Thr Glu Ser Glu Lys Ala Leu Gln Ser Asn
20 25 30
His Phe Glu Leu Ser Leu Arg Thr Glu Ala Thr Gln Gly Leu Val Leu
35 40 45
Trp Ile Gly Lys Val Gly Glu Arg Ala Asp Tyr Met Ala Leu Ala Ile
50 55 60
Val Asp Gly His Leu Gln Leu Ser Tyr Asp Leu Gly Ser Gln Pro Val
65 70 75 80
Val Leu Arg Ser Thr Val Lys Val Asn Thr Asn Arg Trp Leu Arg Val
85 90 95
Arg Ala His Arg Glu His Arg Glu Gly Ser Leu Gln Val Gly Asn Glu
100 105 110
Ala Pro Val Thr Gly Ser Ser Pro Leu Gly Ala Thr Gln Leu Asp Thr
115 120 125
Asp Gly Ala Leu Trp Leu Gly Gly Leu Gln Lys Leu Pro Val Gly Gln
130 135 140
Ala Leu Pro Lys Ala Tyr Gly Thr Gly Phe Val Gly Cys Leu Arg Asp
145 150 155 160
Val Val Val Gly His Arg Gln Leu His Leu Leu Glu Asp Ala Val Thr
165 170 175
Lys Pro Glu Leu Arg Pro Cys Pro Thr Leu
180 185
<210> 2
<211> 8
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 2
Glu Leu Thr Asn Glu Ile Pro Ala
1 5
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 3
Pro Glu Thr Leu Asp Ser Arg Ala Leu Phe Ser
1 5 10
<210> 4
<211> 19
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 4
Glu Leu Thr Asn Glu Ile Pro Ala Pro Glu Thr Leu Asp Ser Arg Ala
1 5 10 15
Leu Phe Ser
<210> 5
<211> 194
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 5
Ser Val Gly Asp Leu Glu Thr Leu Ala Phe Asp Gly Arg Thr Tyr Ile
1 5 10 15
Glu Tyr Leu Asn Ala Val Thr Glu Ser Glu Leu Thr Asn Glu Ile Pro
20 25 30
Ala Glu Lys Ala Leu Gln Ser Asn His Phe Glu Leu Ser Leu Arg Thr
35 40 45
Glu Ala Thr Gln Gly Leu Val Leu Trp Ile Gly Lys Val Gly Glu Arg
50 55 60
Ala Asp Tyr Met Ala Leu Ala Ile Val Asp Gly His Leu Gln Leu Ser
65 70 75 80
Tyr Asp Leu Gly Ser Gln Pro Val Val Leu Arg Ser Thr Val Lys Val
85 90 95
Asn Thr Asn Arg Trp Leu Arg Val Arg Ala His Arg Glu His Arg Glu
100 105 110
Gly Ser Leu Gln Val Gly Asn Glu Ala Pro Val Thr Gly Ser Ser Pro
115 120 125
Leu Gly Ala Thr Gln Leu Asp Thr Asp Gly Ala Leu Trp Leu Gly Gly
130 135 140
Leu Gln Lys Leu Pro Val Gly Gln Ala Leu Pro Lys Ala Tyr Gly Thr
145 150 155 160
Gly Phe Val Gly Cys Leu Arg Asp Val Val Val Gly His Arg Gln Leu
165 170 175
His Leu Leu Glu Asp Ala Val Thr Lys Pro Glu Leu Arg Pro Cys Pro
180 185 190
Thr Leu
<210> 6
<211> 186
<212> PRT
<213> 人
<400> 6
Ser Ala Gly Asp Val Asp Thr Leu Ala Phe Asp Gly Arg Thr Phe Val
1 5 10 15
Glu Tyr Leu Asn Ala Val Thr Glu Ser Glu Lys Ala Leu Gln Ser Asn
20 25 30
His Phe Glu Leu Ser Leu Arg Thr Glu Ala Thr Gln Gly Leu Val Leu
35 40 45
Trp Ser Gly Lys Ala Thr Glu Arg Ala Asp Tyr Val Ala Leu Ala Ile
50 55 60
Val Asp Gly His Leu Gln Leu Ser Tyr Asn Leu Gly Ser Gln Pro Val
65 70 75 80
Val Leu Arg Ser Thr Val Pro Val Asn Thr Asn Arg Trp Leu Arg Val
85 90 95
Val Ala His Arg Glu Gln Arg Glu Gly Ser Leu Gln Val Gly Asn Glu
100 105 110
Ala Pro Val Thr Gly Ser Ser Pro Leu Gly Ala Thr Gln Leu Asp Thr
115 120 125
Asp Gly Ala Leu Trp Leu Gly Gly Leu Pro Glu Leu Pro Val Gly Pro
130 135 140
Ala Leu Pro Lys Ala Tyr Gly Thr Gly Phe Val Gly Cys Leu Arg Asp
145 150 155 160
Val Val Val Gly Arg His Pro Leu His Leu Leu Glu Asp Ala Val Thr
165 170 175
Lys Pro Glu Leu Arg Pro Cys Pro Thr Pro
180 185
<210> 7
<211> 8
<212> PRT
<213> 人
<400> 7
Glu Leu Ala Asn Glu Ile Pro Val
1 5
<210> 8
<211> 11
<212> PRT
<213> 人
<400> 8
Pro Glu Thr Leu Asp Ser Gly Ala Leu His Ser
1 5 10
<210> 9
<211> 19
<212> PRT
<213> 人
<400> 9
Glu Leu Ala Asn Glu Ile Pro Val Pro Glu Thr Leu Asp Ser Gly Ala
1 5 10 15
Leu His Ser
<210> 10
<211> 194
<212> PRT
<213> 人
<400> 10
Ser Ala Gly Asp Val Asp Thr Leu Ala Phe Asp Gly Arg Thr Phe Val
1 5 10 15
Glu Tyr Leu Asn Ala Val Thr Glu Ser Glu Leu Ala Asn Glu Ile Pro
20 25 30
Val Glu Lys Ala Leu Gln Ser Asn His Phe Glu Leu Ser Leu Arg Thr
35 40 45
Glu Ala Thr Gln Gly Leu Val Leu Trp Ser Gly Lys Ala Thr Glu Arg
50 55 60
Ala Asp Tyr Val Ala Leu Ala Ile Val Asp Gly His Leu Gln Leu Ser
65 70 75 80
Tyr Asn Leu Gly Ser Gln Pro Val Val Leu Arg Ser Thr Val Pro Val
85 90 95
Asn Thr Asn Arg Trp Leu Arg Val Val Ala His Arg Glu Gln Arg Glu
100 105 110
Gly Ser Leu Gln Val Gly Asn Glu Ala Pro Val Thr Gly Ser Ser Pro
115 120 125
Leu Gly Ala Thr Gln Leu Asp Thr Asp Gly Ala Leu Trp Leu Gly Gly
130 135 140
Leu Pro Glu Leu Pro Val Gly Pro Ala Leu Pro Lys Ala Tyr Gly Thr
145 150 155 160
Gly Phe Val Gly Cys Leu Arg Asp Val Val Val Gly Arg His Pro Leu
165 170 175
His Leu Leu Glu Asp Ala Val Thr Lys Pro Glu Leu Arg Pro Cys Pro
180 185 190
Thr Pro
<210> 11
<211> 115
<212> PRT
<213> 小鼠
<400> 11
Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu
1 5 10 15
Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp
20 25 30
Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile
35 40 45
Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp
50 55 60
Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys
65 70 75 80
Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu
85 90 95
Pro Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr
100 105 110
Leu Leu Thr
115
<210> 12
<211> 115
<212> PRT
<213> 人
<400> 12
Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu
1 5 10 15
Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp
20 25 30
Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile
35 40 45
Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp
50 55 60
Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys
65 70 75 80
Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu
85 90 95
Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr
100 105 110
Leu Leu Thr
115
<210> 13
<211> 15
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 13
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15
<210> 14
<211> 227
<212> PRT
<213> 人
<400> 14
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys
225
<210> 15
<211> 435
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 15
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Val Gly Asp Leu Glu Thr Leu Ala Phe Asp Gly Arg Thr Tyr
245 250 255
Ile Glu Tyr Leu Asn Ala Val Thr Glu Ser Glu Leu Thr Asn Glu Ile
260 265 270
Pro Ala Glu Lys Ala Leu Gln Ser Asn His Phe Glu Leu Ser Leu Arg
275 280 285
Thr Glu Ala Thr Gln Gly Leu Val Leu Trp Ile Gly Lys Val Gly Glu
290 295 300
Arg Ala Asp Tyr Met Ala Leu Ala Ile Val Asp Gly His Leu Gln Leu
305 310 315 320
Ser Tyr Asp Leu Gly Ser Gln Pro Val Val Leu Arg Ser Thr Val Lys
325 330 335
Val Asn Thr Asn Arg Trp Leu Arg Val Arg Ala His Arg Glu His Arg
340 345 350
Glu Gly Ser Leu Gln Val Gly Asn Glu Ala Pro Val Thr Gly Ser Ser
355 360 365
Pro Leu Gly Ala Thr Gln Leu Asp Thr Asp Gly Ala Leu Trp Leu Gly
370 375 380
Gly Leu Gln Lys Leu Pro Val Gly Gln Ala Leu Pro Lys Ala Tyr Gly
385 390 395 400
Thr Gly Phe Val Gly Cys Leu Arg Asp Val Val Val Gly His Arg Gln
405 410 415
Leu His Leu Leu Glu Asp Ala Val Thr Lys Pro Glu Leu Arg Pro Cys
420 425 430
Pro Thr Leu
435
<210> 16
<211> 436
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 16
Ser Val Gly Asp Leu Glu Thr Leu Ala Phe Asp Gly Arg Thr Tyr Ile
1 5 10 15
Glu Tyr Leu Asn Ala Val Thr Glu Ser Glu Leu Thr Asn Glu Ile Pro
20 25 30
Ala Glu Lys Ala Leu Gln Ser Asn His Phe Glu Leu Ser Leu Arg Thr
35 40 45
Glu Ala Thr Gln Gly Leu Val Leu Trp Ile Gly Lys Val Gly Glu Arg
50 55 60
Ala Asp Tyr Met Ala Leu Ala Ile Val Asp Gly His Leu Gln Leu Ser
65 70 75 80
Tyr Asp Leu Gly Ser Gln Pro Val Val Leu Arg Ser Thr Val Lys Val
85 90 95
Asn Thr Asn Arg Trp Leu Arg Val Arg Ala His Arg Glu His Arg Glu
100 105 110
Gly Ser Leu Gln Val Gly Asn Glu Ala Pro Val Thr Gly Ser Ser Pro
115 120 125
Leu Gly Ala Thr Gln Leu Asp Thr Asp Gly Ala Leu Trp Leu Gly Gly
130 135 140
Leu Gln Lys Leu Pro Val Gly Gln Ala Leu Pro Lys Ala Tyr Gly Thr
145 150 155 160
Gly Phe Val Gly Cys Leu Arg Asp Val Val Val Gly His Arg Gln Leu
165 170 175
His Leu Leu Glu Asp Ala Val Thr Lys Pro Glu Leu Arg Pro Cys Pro
180 185 190
Thr Leu Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
195 200 205
Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu
210 215 220
Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
225 230 235 240
Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
245 250 255
His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu
260 265 270
Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr
275 280 285
Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn
290 295 300
Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro
305 310 315 320
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln
325 330 335
Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val
340 345 350
Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val
355 360 365
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
370 375 380
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
385 390 395 400
Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
405 410 415
Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu
420 425 430
Ser Pro Gly Lys
435
<210> 17
<211> 435
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 17
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Ala Gly Asp Val Asp Thr Leu Ala Phe Asp Gly Arg Thr Phe
245 250 255
Val Glu Tyr Leu Asn Ala Val Thr Glu Ser Glu Leu Ala Asn Glu Ile
260 265 270
Pro Val Glu Lys Ala Leu Gln Ser Asn His Phe Glu Leu Ser Leu Arg
275 280 285
Thr Glu Ala Thr Gln Gly Leu Val Leu Trp Ser Gly Lys Ala Thr Glu
290 295 300
Arg Ala Asp Tyr Val Ala Leu Ala Ile Val Asp Gly His Leu Gln Leu
305 310 315 320
Ser Tyr Asn Leu Gly Ser Gln Pro Val Val Leu Arg Ser Thr Val Pro
325 330 335
Val Asn Thr Asn Arg Trp Leu Arg Val Val Ala His Arg Glu Gln Arg
340 345 350
Glu Gly Ser Leu Gln Val Gly Asn Glu Ala Pro Val Thr Gly Ser Ser
355 360 365
Pro Leu Gly Ala Thr Gln Leu Asp Thr Asp Gly Ala Leu Trp Leu Gly
370 375 380
Gly Leu Pro Glu Leu Pro Val Gly Pro Ala Leu Pro Lys Ala Tyr Gly
385 390 395 400
Thr Gly Phe Val Gly Cys Leu Arg Asp Val Val Val Gly Arg His Pro
405 410 415
Leu His Leu Leu Glu Asp Ala Val Thr Lys Pro Glu Leu Arg Pro Cys
420 425 430
Pro Thr Pro
435
<210> 18
<211> 427
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 18
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Ala Gly Asp Val Asp Thr Leu Ala Phe Asp Gly Arg Thr Phe
245 250 255
Val Glu Tyr Leu Asn Ala Val Thr Glu Ser Glu Lys Ala Leu Gln Ser
260 265 270
Asn His Phe Glu Leu Ser Leu Arg Thr Glu Ala Thr Gln Gly Leu Val
275 280 285
Leu Trp Ser Gly Lys Ala Thr Glu Arg Ala Asp Tyr Val Ala Leu Ala
290 295 300
Ile Val Asp Gly His Leu Gln Leu Ser Tyr Asn Leu Gly Ser Gln Pro
305 310 315 320
Val Val Leu Arg Ser Thr Val Pro Val Asn Thr Asn Arg Trp Leu Arg
325 330 335
Val Val Ala His Arg Glu Gln Arg Glu Gly Ser Leu Gln Val Gly Asn
340 345 350
Glu Ala Pro Val Thr Gly Ser Ser Pro Leu Gly Ala Thr Gln Leu Asp
355 360 365
Thr Asp Gly Ala Leu Trp Leu Gly Gly Leu Pro Glu Leu Pro Val Gly
370 375 380
Pro Ala Leu Pro Lys Ala Tyr Gly Thr Gly Phe Val Gly Cys Leu Arg
385 390 395 400
Asp Val Val Val Gly Arg His Pro Leu His Leu Leu Glu Asp Ala Val
405 410 415
Thr Lys Pro Glu Leu Arg Pro Cys Pro Thr Pro
420 425
<210> 19
<211> 357
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 19
Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu
1 5 10 15
Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp
20 25 30
Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile
35 40 45
Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp
50 55 60
Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys
65 70 75 80
Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu
85 90 95
Pro Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr
100 105 110
Leu Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
130 135 140
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
145 150 155 160
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
165 170 175
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
180 185 190
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
195 200 205
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
210 215 220
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
225 230 235 240
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
245 250 255
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
260 265 270
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
275 280 285
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
290 295 300
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
305 310 315 320
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
325 330 335
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
340 345 350
Leu Ser Pro Gly Lys
355
<210> 20
<211> 357
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 20
Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly
1 5 10 15
Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met
20 25 30
Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His
35 40 45
Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val
50 55 60
His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr
65 70 75 80
Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly
85 90 95
Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile
100 105 110
Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val
115 120 125
Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser
130 135 140
Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu
145 150 155 160
Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro
165 170 175
Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val
180 185 190
Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met
195 200 205
His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser
210 215 220
Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
225 230 235 240
Gly Ser Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp
245 250 255
Glu Leu Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu
260 265 270
Gln Asp Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly
275 280 285
Thr Ile Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys
290 295 300
Tyr Asp Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr
305 310 315 320
Phe Cys Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu
325 330 335
Pro Glu Pro Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala
340 345 350
Pro Thr Leu Leu Thr
355
<210> 21
<211> 357
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 21
Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu
1 5 10 15
Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp
20 25 30
Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile
35 40 45
Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp
50 55 60
Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys
65 70 75 80
Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu
85 90 95
Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr
100 105 110
Leu Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
130 135 140
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
145 150 155 160
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
165 170 175
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
180 185 190
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
195 200 205
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
210 215 220
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
225 230 235 240
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
245 250 255
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
260 265 270
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
275 280 285
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
290 295 300
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
305 310 315 320
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
325 330 335
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
340 345 350
Leu Ser Pro Gly Lys
355
<210> 22
<211> 565
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 22
Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu
1 5 10 15
Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp
20 25 30
Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile
35 40 45
Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp
50 55 60
Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys
65 70 75 80
Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu
85 90 95
Pro Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr
100 105 110
Leu Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
130 135 140
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
145 150 155 160
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
165 170 175
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
180 185 190
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
195 200 205
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
210 215 220
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
225 230 235 240
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
245 250 255
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
260 265 270
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
275 280 285
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
290 295 300
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
305 310 315 320
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
325 330 335
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
340 345 350
Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
355 360 365
Gly Gly Gly Ser Val Gly Asp Leu Glu Thr Leu Ala Phe Asp Gly Arg
370 375 380
Thr Tyr Ile Glu Tyr Leu Asn Ala Val Thr Glu Ser Glu Leu Thr Asn
385 390 395 400
Glu Ile Pro Ala Glu Lys Ala Leu Gln Ser Asn His Phe Glu Leu Ser
405 410 415
Leu Arg Thr Glu Ala Thr Gln Gly Leu Val Leu Trp Ile Gly Lys Val
420 425 430
Gly Glu Arg Ala Asp Tyr Met Ala Leu Ala Ile Val Asp Gly His Leu
435 440 445
Gln Leu Ser Tyr Asp Leu Gly Ser Gln Pro Val Val Leu Arg Ser Thr
450 455 460
Val Lys Val Asn Thr Asn Arg Trp Leu Arg Val Arg Ala His Arg Glu
465 470 475 480
His Arg Glu Gly Ser Leu Gln Val Gly Asn Glu Ala Pro Val Thr Gly
485 490 495
Ser Ser Pro Leu Gly Ala Thr Gln Leu Asp Thr Asp Gly Ala Leu Trp
500 505 510
Leu Gly Gly Leu Gln Lys Leu Pro Val Gly Gln Ala Leu Pro Lys Ala
515 520 525
Tyr Gly Thr Gly Phe Val Gly Cys Leu Arg Asp Val Val Val Gly His
530 535 540
Arg Gln Leu His Leu Leu Glu Asp Ala Val Thr Lys Pro Glu Leu Arg
545 550 555 560
Pro Cys Pro Thr Leu
565
<210> 23
<211> 565
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 23
Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu
1 5 10 15
Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp
20 25 30
Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile
35 40 45
Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp
50 55 60
Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys
65 70 75 80
Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu
85 90 95
Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr
100 105 110
Leu Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
130 135 140
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
145 150 155 160
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
165 170 175
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
180 185 190
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
195 200 205
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
210 215 220
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
225 230 235 240
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
245 250 255
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
260 265 270
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
275 280 285
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
290 295 300
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
305 310 315 320
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
325 330 335
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
340 345 350
Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
355 360 365
Gly Gly Gly Ser Ala Gly Asp Val Asp Thr Leu Ala Phe Asp Gly Arg
370 375 380
Thr Phe Val Glu Tyr Leu Asn Ala Val Thr Glu Ser Glu Leu Ala Asn
385 390 395 400
Glu Ile Pro Val Glu Lys Ala Leu Gln Ser Asn His Phe Glu Leu Ser
405 410 415
Leu Arg Thr Glu Ala Thr Gln Gly Leu Val Leu Trp Ser Gly Lys Ala
420 425 430
Thr Glu Arg Ala Asp Tyr Val Ala Leu Ala Ile Val Asp Gly His Leu
435 440 445
Gln Leu Ser Tyr Asn Leu Gly Ser Gln Pro Val Val Leu Arg Ser Thr
450 455 460
Val Pro Val Asn Thr Asn Arg Trp Leu Arg Val Val Ala His Arg Glu
465 470 475 480
Gln Arg Glu Gly Ser Leu Gln Val Gly Asn Glu Ala Pro Val Thr Gly
485 490 495
Ser Ser Pro Leu Gly Ala Thr Gln Leu Asp Thr Asp Gly Ala Leu Trp
500 505 510
Leu Gly Gly Leu Pro Glu Leu Pro Val Gly Pro Ala Leu Pro Lys Ala
515 520 525
Tyr Gly Thr Gly Phe Val Gly Cys Leu Arg Asp Val Val Val Gly Arg
530 535 540
His Pro Leu His Leu Leu Glu Asp Ala Val Thr Lys Pro Glu Leu Arg
545 550 555 560
Pro Cys Pro Thr Pro
565
<210> 24
<211> 557
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 24
Glu Ala Glu Thr Arg Glu Cys Ile Tyr Tyr Asn Ala Asn Trp Glu Leu
1 5 10 15
Glu Arg Thr Asn Gln Ser Gly Leu Glu Arg Cys Glu Gly Glu Gln Asp
20 25 30
Lys Arg Leu His Cys Tyr Ala Ser Trp Arg Asn Ser Ser Gly Thr Ile
35 40 45
Glu Leu Val Lys Lys Gly Cys Trp Leu Asp Asp Phe Asn Cys Tyr Asp
50 55 60
Arg Gln Glu Cys Val Ala Thr Glu Glu Asn Pro Gln Val Tyr Phe Cys
65 70 75 80
Cys Cys Glu Gly Asn Phe Cys Asn Glu Arg Phe Thr His Leu Pro Glu
85 90 95
Ala Gly Gly Pro Glu Val Thr Tyr Glu Pro Pro Pro Thr Ala Pro Thr
100 105 110
Leu Leu Thr Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly
115 120 125
Gly Ser Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu
130 135 140
Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr
145 150 155 160
Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val
165 170 175
Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val
180 185 190
Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser
195 200 205
Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu
210 215 220
Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala
225 230 235 240
Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro
245 250 255
Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln
260 265 270
Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala
275 280 285
Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr
290 295 300
Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu
305 310 315 320
Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser
325 330 335
Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser
340 345 350
Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly
355 360 365
Gly Gly Gly Ser Ala Gly Asp Val Asp Thr Leu Ala Phe Asp Gly Arg
370 375 380
Thr Phe Val Glu Tyr Leu Asn Ala Val Thr Glu Ser Glu Lys Ala Leu
385 390 395 400
Gln Ser Asn His Phe Glu Leu Ser Leu Arg Thr Glu Ala Thr Gln Gly
405 410 415
Leu Val Leu Trp Ser Gly Lys Ala Thr Glu Arg Ala Asp Tyr Val Ala
420 425 430
Leu Ala Ile Val Asp Gly His Leu Gln Leu Ser Tyr Asn Leu Gly Ser
435 440 445
Gln Pro Val Val Leu Arg Ser Thr Val Pro Val Asn Thr Asn Arg Trp
450 455 460
Leu Arg Val Val Ala His Arg Glu Gln Arg Glu Gly Ser Leu Gln Val
465 470 475 480
Gly Asn Glu Ala Pro Val Thr Gly Ser Ser Pro Leu Gly Ala Thr Gln
485 490 495
Leu Asp Thr Asp Gly Ala Leu Trp Leu Gly Gly Leu Pro Glu Leu Pro
500 505 510
Val Gly Pro Ala Leu Pro Lys Ala Tyr Gly Thr Gly Phe Val Gly Cys
515 520 525
Leu Arg Asp Val Val Val Gly Arg His Pro Leu His Leu Leu Glu Asp
530 535 540
Ala Val Thr Lys Pro Glu Leu Arg Pro Cys Pro Thr Pro
545 550 555
<210> 25
<211> 288
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 25
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Lys Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ser Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Gly Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Ser Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
<210> 26
<211> 530
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 26
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Lys Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ser Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Gly Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Ser Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp
290 295 300
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
305 310 315 320
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
325 330 335
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
340 345 350
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
355 360 365
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
370 375 380
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
385 390 395 400
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
405 410 415
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
420 425 430
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
435 440 445
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
450 455 460
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
465 470 475 480
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
485 490 495
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
500 505 510
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
515 520 525
Gly Lys
530
<210> 27
<211> 738
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 27
Gly Asn Cys Trp Leu Arg Gln Ala Lys Asn Gly Arg Cys Gln Val Leu
1 5 10 15
Tyr Lys Thr Glu Leu Ser Lys Glu Glu Cys Cys Ser Thr Gly Arg Leu
20 25 30
Ser Thr Ser Trp Thr Glu Glu Asp Val Asn Asp Asn Thr Leu Phe Lys
35 40 45
Trp Met Ile Phe Asn Gly Gly Ala Pro Asn Cys Ile Pro Cys Lys Glu
50 55 60
Thr Cys Glu Asn Val Asp Cys Gly Pro Gly Lys Lys Cys Arg Met Asn
65 70 75 80
Lys Lys Asn Lys Pro Arg Cys Val Cys Ala Pro Asp Cys Ser Asn Ile
85 90 95
Thr Trp Lys Gly Pro Val Cys Gly Leu Asp Gly Lys Thr Tyr Arg Asn
100 105 110
Glu Cys Ala Leu Leu Lys Ala Arg Cys Lys Glu Gln Pro Glu Leu Glu
115 120 125
Val Gln Tyr Gln Gly Lys Cys Lys Lys Thr Cys Arg Asp Val Phe Cys
130 135 140
Pro Gly Ser Ser Thr Cys Val Val Asp Gln Thr Asn Asn Ala Tyr Cys
145 150 155 160
Val Thr Cys Asn Arg Ile Cys Pro Glu Pro Ser Ser Ser Glu Gln Tyr
165 170 175
Leu Cys Gly Asn Asp Gly Val Thr Tyr Ser Ser Ala Cys His Leu Arg
180 185 190
Lys Ala Thr Cys Leu Leu Gly Arg Ser Ile Gly Leu Ala Tyr Glu Gly
195 200 205
Lys Cys Ile Lys Ala Lys Ser Cys Glu Asp Ile Gln Cys Gly Gly Gly
210 215 220
Lys Lys Cys Leu Trp Asp Ser Lys Val Gly Arg Gly Arg Cys Ser Leu
225 230 235 240
Cys Asp Glu Leu Cys Pro Asp Ser Lys Ser Asp Glu Pro Val Cys Ala
245 250 255
Ser Asp Asn Ala Thr Tyr Ala Ser Glu Cys Ala Met Lys Glu Ala Ala
260 265 270
Cys Ser Ser Gly Val Leu Leu Glu Val Lys His Ser Gly Ser Cys Asn
275 280 285
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Asp
290 295 300
Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly
305 310 315 320
Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile
325 330 335
Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu
340 345 350
Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His
355 360 365
Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg
370 375 380
Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys
385 390 395 400
Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu
405 410 415
Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr
420 425 430
Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu
435 440 445
Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp
450 455 460
Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val
465 470 475 480
Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp
485 490 495
Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His
500 505 510
Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro
515 520 525
Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly
530 535 540
Ser Val Gly Asp Leu Glu Thr Leu Ala Phe Asp Gly Arg Thr Tyr Ile
545 550 555 560
Glu Tyr Leu Asn Ala Val Thr Glu Ser Glu Leu Thr Asn Glu Ile Pro
565 570 575
Ala Glu Lys Ala Leu Gln Ser Asn His Phe Glu Leu Ser Leu Arg Thr
580 585 590
Glu Ala Thr Gln Gly Leu Val Leu Trp Ile Gly Lys Val Gly Glu Arg
595 600 605
Ala Asp Tyr Met Ala Leu Ala Ile Val Asp Gly His Leu Gln Leu Ser
610 615 620
Tyr Asp Leu Gly Ser Gln Pro Val Val Leu Arg Ser Thr Val Lys Val
625 630 635 640
Asn Thr Asn Arg Trp Leu Arg Val Arg Ala His Arg Glu His Arg Glu
645 650 655
Gly Ser Leu Gln Val Gly Asn Glu Ala Pro Val Thr Gly Ser Ser Pro
660 665 670
Leu Gly Ala Thr Gln Leu Asp Thr Asp Gly Ala Leu Trp Leu Gly Gly
675 680 685
Leu Gln Lys Leu Pro Val Gly Gln Ala Leu Pro Lys Ala Tyr Gly Thr
690 695 700
Gly Phe Val Gly Cys Leu Arg Asp Val Val Val Gly His Arg Gln Leu
705 710 715 720
His Leu Leu Glu Asp Ala Val Thr Lys Pro Glu Leu Arg Pro Cys Pro
725 730 735
Thr Leu
<210> 28
<211> 445
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 28
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Asn Pro Val Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 29
<211> 217
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 29
Gln Ser Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Ser Tyr
20 25 30
Asn Tyr Val Asn Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu
35 40 45
Met Ile Tyr Gly Val Ser Lys Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu
65 70 75 80
Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Thr Phe Ala Gly Gly
85 90 95
Ser Tyr Tyr Gly Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105 110
Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser Glu
115 120 125
Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp Phe
130 135 140
Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro Val
145 150 155 160
Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn Lys
165 170 175
Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys Ser
180 185 190
His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
195 200 205
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
210 215
<210> 30
<211> 653
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 30
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Tyr Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Asn Pro Val Ser Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Trp Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro
115 120 125
Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val
130 135 140
Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala
145 150 155 160
Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly
165 170 175
Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly
180 185 190
Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys
195 200 205
Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu
225 230 235 240
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu
245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys
260 265 270
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys
275 280 285
Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu
290 295 300
Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys
305 310 315 320
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys
325 330 335
Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser
340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys
355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln
370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly
385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln
405 410 415
Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn
420 425 430
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly
435 440 445
Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gly Asp Val
450 455 460
Asp Thr Leu Ala Phe Asp Gly Arg Thr Phe Val Glu Tyr Leu Asn Ala
465 470 475 480
Val Thr Glu Ser Glu Leu Ala Asn Glu Ile Pro Val Glu Lys Ala Leu
485 490 495
Gln Ser Asn His Phe Glu Leu Ser Leu Arg Thr Glu Ala Thr Gln Gly
500 505 510
Leu Val Leu Trp Ser Gly Lys Ala Thr Glu Arg Ala Asp Tyr Val Ala
515 520 525
Leu Ala Ile Val Asp Gly His Leu Gln Leu Ser Tyr Asn Leu Gly Ser
530 535 540
Gln Pro Val Val Leu Arg Ser Thr Val Pro Val Asn Thr Asn Arg Trp
545 550 555 560
Leu Arg Val Val Ala His Arg Glu Gln Arg Glu Gly Ser Leu Gln Val
565 570 575
Gly Asn Glu Ala Pro Val Thr Gly Ser Ser Pro Leu Gly Ala Thr Gln
580 585 590
Leu Asp Thr Asp Gly Ala Leu Trp Leu Gly Gly Leu Pro Glu Leu Pro
595 600 605
Val Gly Pro Ala Leu Pro Lys Ala Tyr Gly Thr Gly Phe Val Gly Cys
610 615 620
Leu Arg Asp Val Val Val Gly Arg His Pro Leu His Leu Leu Glu Asp
625 630 635 640
Ala Val Thr Lys Pro Glu Leu Arg Pro Cys Pro Thr Pro
645 650
<210> 31
<211> 454
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 31
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Arg Lys Val
20 25 30
Gly Ser Ser Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Leu Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Arg Asn Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Arg Ala Ile Thr Thr Val Ile Gly Gly Gly Thr Phe Asp
100 105 110
Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 32
<211> 213
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 32
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Ser Ser Ile Ser Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
35 40 45
Asp Thr Ser Lys Leu Ala Arg Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu
65 70 75 80
Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Tyr Leu His Pro Leu Thr
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro
100 105 110
Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr
115 120 125
Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys
130 135 140
Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu
145 150 155 160
Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser
165 170 175
Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala
180 185 190
Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe
195 200 205
Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 33
<211> 662
<212> PRT
<213> 重组体
<400> 33
Gln Leu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Arg Lys Val
20 25 30
Gly Ser Ser Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Ile Gly His Ile Tyr Trp Asp Asp Asp Lys Arg Leu Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Arg Asn Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Arg Ala Ile Thr Thr Val Ile Gly Gly Gly Thr Phe Asp
100 105 110
Leu Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys
115 120 125
Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly
130 135 140
Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro
145 150 155 160
Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr
165 170 175
Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val
180 185 190
Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn
195 200 205
Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro
210 215 220
Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu
225 230 235 240
Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn
290 295 300
Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
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Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Lys Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
450 455 460
Gly Gly Gly Gly Ser Ala Gly Asp Val Asp Thr Leu Ala Phe Asp Gly
465 470 475 480
Arg Thr Phe Val Glu Tyr Leu Asn Ala Val Thr Glu Ser Glu Leu Ala
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Gly Ser Ser Pro Leu Gly Ala Thr Gln Leu Asp Thr Asp Gly Ala Leu
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660
<210> 34
<211> 1381
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 34
gcggccgcca tgaactttgg tctgaggctg atttttctgg tgctgactct gaagggggtg 60
cagtgtgaca aaacccacac ctgcccacct tgtcctgccc ctgaactgct gggaggacct 120
tctgtgtttc tgttcccacc aaaaccaaaa gataccctga tgatctctag aacccctgag 180
gtgacatgtg tggtggtgga tgtgtctcat gaggaccctg aggtcaaatt caactggtac 240
gtggatggag tggaagtcca caatgccaaa accaagccta gagaggaaca gtacaattca 300
acctacagag tggtcagtgt gctgactgtg ctgcatcagg attggctgaa tggcaaggaa 360
tacaagtgta aagtctcaaa caaggccctg cctgctccaa ttgagaaaac aatctcaaag 420
gccaagggac agcctaggga accccaggtc tacaccctgc caccttcaag agaggaaatg 480
accaaaaacc aggtgtccct gacatgcctg gtcaaaggct tctacccttc tgacattgct 540
gtggagtggg agtcaaatgg acagcctgag aacaactaca aaacaacccc ccctgtgctg 600
gattctgatg gctctttctt tctgtactcc aaactgactg tggacaagtc tagatggcag 660
caggggaatg tcttttcttg ctctgtcatg catgaggctc tgcataacca ctacactcag 720
aaatccctgt ctctgtctcc tggcaaaggc ggcggaggat ccgggggtgg gggaagcggc 780
ggaggaggta gtgtgggaga cctggagacc ctggcttttg acgggcggac atacattgaa 840
tacctgaacg ctgtgaccga gagtgaactg actaatgaga tccctgcaga aaaggccctg 900
cagtcaaacc acttcgagct gtccctgagg accgaagcaa cacagggact ggtcctgtgg 960
atcggcaaag tgggagagcg agcagactac atggccctgg ctattgtgga tggccatctg 1020
cagctgtctt atgacctggg aagtcagcca gtggtcctga ggtctacagt caaagtgaac 1080
actaatagat ggctgagggt gcgggctcac agagagcatc gcgaagggag cctgcaggtc 1140
ggtaatgaag caccagtgac cggctccagc cctctgggag caactcagct ggacaccgat 1200
ggggctctgt ggctgggagg actgcagaag ctgccagtcg gccaggctct gcccaaagca 1260
tacgggacag gttttgtggg gtgcctgcga gatgtggtcg tgggtcaccg tcagctgcac 1320
ctgctggagg acgctgtcac taagcctgaa ctgagacctt gccctaccct gtgataagct 1380
t 1381
<210> 35
<211> 1389
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 35
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtagtg tgggagacct ggagaccctg gcttttgacg ggcggacata cattgaatac 120
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tcaaaccact tcgagctgtc cctgaggacc gaagcaacac agggactggt cctgtggatc 240
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ctgtcttatg acctgggaag tcagccagtg gtcctgaggt ctacagtcaa agtgaacact 360
aatagatggc tgagggtgcg ggctcacaga gagcatcgcg aagggagcct gcaggtcggt 420
aatgaagcac cagtgaccgg ctccagccct ctgggagcaa ctcagctgga caccgatggg 480
gctctgtggc tgggaggact gcagaagctg ccagtcggcc aggctctgcc caaagcatac 540
gggacaggtt ttgtggggtg cctgcgagat gtggtcgtgg gtcaccgtca gctgcacctg 600
ctggaggacg ctgtcactaa gcctgaactg agaccttgcc ctaccctggg cggtggagga 660
tccggtggag gcggttctgg cggcggtggt agtgacaaaa cccacacctg cccaccttgt 720
cctgcccctg aactgctggg aggaccttct gtgtttctgt tcccaccaaa accaaaagat 780
accctgatga tctctagaac ccctgaggtg acatgtgtgg tggtggatgt gtctcatgag 840
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aagcctagag aggaacagta caattcaacc tacagagtgg tcagtgtgct gactgtgctg 960
catcaggatt ggctgaatgg caaggaatac aagtgtaaag tctcaaacaa ggccctgcct 1020
gctccaattg agaaaacaat ctcaaaggcc aagggacagc ctagggaacc ccaggtctac 1080
accctgccac cttcaagaga ggaaatgacc aaaaaccagg tgtccctgac atgcctggtc 1140
aaaggcttct acccttctga cattgctgtg gagtgggagt caaatggaca gcctgagaac 1200
aactacaaaa caaccccccc tgtgctggat tctgatggct ctttctttct gtactccaaa 1260
ctgactgtgg acaagtctag atggcagcag gggaatgtct tttcttgctc tgtcatgcat 1320
gaggctctgc ataaccacta cactcagaaa tccctgtctc tgtctcctgg caaatgatag 1380
taaaagctt 1389
<210> 36
<211> 1379
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 36
cggccgccat gaactttggt ctgaggctga tttttctggt gctgactctg aagggggtgc 60
agtgtgacaa aacccacacc tgcccacctt gtcctgcccc tgaactgctg ggaggacctt 120
ctgtgtttct gttcccacca aaaccaaaag ataccctgat gatctctaga acccctgagg 180
tgacatgtgt ggtggtggat gtgtctcatg aggaccctga ggtcaaattc aactggtacg 240
tggatggagt ggaagtccac aatgccaaaa ccaagcctag agaggaacag tacaattcaa 300
cctacagagt ggtcagtgtg ctgactgtgc tgcatcagga ttggctgaat ggcaaggaat 360
acaagtgtaa agtctcaaac aaggccctgc ctgctccaat tgagaaaaca atctcaaagg 420
ccaagggaca gcctagggaa ccccaggtct acaccctgcc accttcaaga gaggaaatga 480
ccaaaaacca ggtgtccctg acatgcctgg tcaaaggctt ctacccttct gacattgctg 540
tggagtggga gtcaaatgga cagcctgaga acaactacaa aacaaccccc cctgtgctgg 600
attctgatgg ctctttcttt ctgtactcca aactgactgt ggacaagtct agatggcagc 660
aggggaatgt cttttcttgc tctgtcatgc atgaggctct gcataaccac tacactcaga 720
aatccctgtc tctgtctcct ggcaaaggcg gcggaggatc cgggggtggg ggaagcggcg 780
gaggaggtag cgccggagac gtggacacat tggcatttga tggaaggaca tttgttgagt 840
acctcaatgc ggtcacagaa agcgaactcg ccaacgaaat acctgtggag aaagccctac 900
agagtaatca cttcgagctg agtttaagaa ccgaggctac acagggccta gtgctttggt 960
ccggaaaggc caccgagcgg gctgactatg tggccctggc tatcgtggac ggtcatctgc 1020
agctgtcgta taatttgggc agccaaccag tggtcctcag atctactgtg cccgtcaaca 1080
caaatcgctg gcttagagtt gttgcacatc gcgagcaaag agagggcagc ttgcaagtgg 1140
ggaatgaagc ccctgtcacc ggaagcagcc ctctcggtgc cactcagttg gataccgatg 1200
gagccctgtg gcttggcggt ttgccagagt tgccagttgg ccctgctctg cccaaggcct 1260
atgggactgg cttcgttgga tgccttcgcg acgtggtggt cggccgtcac ccccttcacc 1320
ttctcgaaga tgcagtcacc aagccagaat tacgcccttg tccaacccct tgataagct 1379
<210> 37
<211> 1357
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 37
gcggccgcca tgaactttgg tctgaggctg atttttctgg tgctgactct gaagggggtg 60
cagtgtgaca aaacccacac ctgcccacct tgtcctgccc ctgaactgct gggaggacct 120
tctgtgtttc tgttcccacc aaaaccaaaa gataccctga tgatctctag aacccctgag 180
gtgacatgtg tggtggtgga tgtgtctcat gaggaccctg aggtcaaatt caactggtac 240
gtggatggag tggaagtcca caatgccaaa accaagccta gagaggaaca gtacaattca 300
acctacagag tggtcagtgt gctgactgtg ctgcatcagg attggctgaa tggcaaggaa 360
tacaagtgta aagtctcaaa caaggccctg cctgctccaa ttgagaaaac aatctcaaag 420
gccaagggac agcctaggga accccaggtc tacaccctgc caccttcaag agaggaaatg 480
accaaaaacc aggtgtccct gacatgcctg gtcaaaggct tctacccttc tgacattgct 540
gtggagtggg agtcaaatgg acagcctgag aacaactaca aaacaacccc ccctgtgctg 600
gattctgatg gctctttctt tctgtactcc aaactgactg tggacaagtc tagatggcag 660
caggggaatg tcttttcttg ctctgtcatg catgaggctc tgcataacca ctacactcag 720
aaatccctgt ctctgtctcc tggcaaaggc ggcggaggat ccgggggtgg gggaagcggc 780
ggaggaggta gcgccggaga cgtggacaca ttggcatttg atggaaggac atttgttgag 840
tacctcaatg cggtcacaga aagcgagaaa gccctacaga gtaatcactt cgagctgagt 900
ttaagaaccg aggctacaca gggcctagtg ctttggtccg gaaaggccac cgagcgggct 960
gactatgtgg ccctggctat cgtggacggt catctgcagc tgtcgtataa tttgggcagc 1020
caaccagtgg tcctcagatc tactgtgccc gtcaacacaa atcgctggct tagagttgtt 1080
gcacatcgcg agcaaagaga gggcagcttg caagtgggga atgaagcccc tgtcaccgga 1140
agcagccctc tcggtgccac tcagttggat accgatggag ccctgtggct tggcggtttg 1200
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cttcgcgacg tggtggtcgg ccgtcacccc cttcaccttc tcgaagatgc agtcaccaag 1320
ccagaattac gcccttgtcc aaccccttga taagctt 1357
<210> 38
<211> 1147
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 38
gcggccgcca tgaactttgg tctgaggctg atttttctgg tgctgactct gaagggggtg 60
cagtgtgaca aaacccacac ctgcccacct tgtcctgccc ctgaactgct gggaggacct 120
tctgtgtttc tgttcccacc aaaaccaaaa gataccctga tgatctctag aacccctgag 180
gtgacatgtg tggtggtgga tgtgtctcat gaggaccctg aggtcaaatt caactggtac 240
gtggatggag tggaagtcca caatgccaaa accaagccta gagaggaaca gtacaattca 300
acctacagag tggtcagtgt gctgactgtg ctgcatcagg attggctgaa tggcaaggaa 360
tacaagtgta aagtctcaaa caaggccctg cctgctccaa ttgagaaaac aatctcaaag 420
gccaagggac agcctaggga accccaggtc tacaccctgc caccttcaag agaggaaatg 480
accaaaaacc aggtgtccct gacatgcctg gtcaaaggct tctacccttc tgacattgct 540
gtggagtggg agtcaaatgg acagcctgag aacaactaca aaacaacccc ccctgtgctg 600
gattctgatg gctctttctt tctgtactcc aaactgactg tggacaagtc tagatggcag 660
caggggaatg tcttttcttg ctctgtcatg catgaggctc tgcataacca ctacactcag 720
aaatccctgt ctctgtctcc tggcaaaggc ggcggaggat ccgggggtgg gggaagcggc 780
ggaggaggta gcgaagccga aactcgtgaa tgtatctact ataacgccaa ttgggagctg 840
gaaaggacta accagtctgg cctggagcgg tgtgagggag aacaggacaa gagactgcac 900
tgctacgctt cctggcgcaa ttccagcggg accattgagc tggtgaagaa aggttgttgg 960
ctggacgatt tcaactgtta cgatcgacag gaatgcgtgg caaccgagga aaatccccag 1020
gtctattttt gctgttgcga gggcaacttc tgcaatgaaa ggtttacaca tctgcctgag 1080
ccaggaggac ccgaagtgac ctacgaacca ccccctaccg cccctactct gctgacctga 1140
taagctt 1147
<210> 39
<211> 1152
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 39
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtgaag ccgaaactcg tgaatgtatc tactataacg ccaattggga gctggaaagg 120
actaaccagt ctggcctgga gcggtgtgag ggagaacagg acaagagact gcactgctac 180
gcttcctggc gcaattccag cgggaccatt gagctggtga agaaaggttg ttggctggac 240
gatttcaact gttacgatcg acaggaatgc gtggcaaccg aggaaaatcc ccaggtctat 300
ttttgctgtt gcgagggcaa cttctgcaat gaaaggttta cacatctgcc tgagccagga 360
ggacccgaag tgacctacga accaccccct accgccccta ctctgctgac cggcggtgga 420
ggatccggtg gaggcggttc tggcggcggt ggtagtgaca aaacccacac ctgcccacct 480
tgtcctgccc ctgaactgct gggaggacct tctgtgtttc tgttcccacc aaaaccaaaa 540
gataccctga tgatctctag aacccctgag gtgacatgtg tggtggtgga tgtgtctcat 600
gaggaccctg aggtcaaatt caactggtac gtggatggag tggaagtcca caatgccaaa 660
accaagccta gagaggaaca gtacaattca acctacagag tggtcagtgt gctgactgtg 720
ctgcatcagg attggctgaa tggcaaggaa tacaagtgta aagtctcaaa caaggccctg 780
cctgctccaa ttgagaaaac aatctcaaag gccaagggac agcctaggga accccaggtc 840
tacaccctgc caccttcaag agaggaaatg accaaaaacc aggtgtccct gacatgcctg 900
gtcaaaggct tctacccttc tgacattgct gtggagtggg agtcaaatgg acagcctgag 960
aacaactaca aaacaacccc ccctgtgctg gattctgatg gctctttctt tctgtactcc 1020
aaactgactg tggacaagtc tagatggcag caggggaatg tcttttcttg ctctgtcatg 1080
catgaggctc tgcataacca ctacactcag aaatccctgt ctctgtctcc tggcaaatga 1140
tagtaaaagc tt 1152
<210> 40
<211> 1152
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 40
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtgaag ccgaaactcg tgaatgtatc tactataacg ccaattggga gctggaaagg 120
actaaccagt ctggcctgga gcggtgtgag ggagaacagg acaagagact gcactgctac 180
gcttcctggc gcaattccag cgggaccatt gagctggtga agaaaggttg ttggctggac 240
gatttcaact gttacgatcg acaggaatgc gtggcaaccg aggaaaatcc ccaggtctat 300
ttttgctgtt gcgagggcaa cttctgcaat gaaaggttta cacatctgcc tgaggcagga 360
ggacccgaag tgacctacga accaccccct accgccccta ctctgctgac cggcggtgga 420
ggatccggtg gaggcggttc tggcggcggt ggtagtgaca aaacccacac ctgcccacct 480
tgtcctgccc ctgaactgct gggaggacct tctgtgtttc tgttcccacc aaaaccaaaa 540
gataccctga tgatctctag aacccctgag gtgacatgtg tggtggtgga tgtgtctcat 600
gaggaccctg aggtcaaatt caactggtac gtggatggag tggaagtcca caatgccaaa 660
accaagccta gagaggaaca gtacaattca acctacagag tggtcagtgt gctgactgtg 720
ctgcatcagg attggctgaa tggcaaggaa tacaagtgta aagtctcaaa caaggccctg 780
cctgctccaa ttgagaaaac aatctcaaag gccaagggac agcctaggga accccaggtc 840
tacaccctgc caccttcaag agaggaaatg accaaaaacc aggtgtccct gacatgcctg 900
gtcaaaggct tctacccttc tgacattgct gtggagtggg agtcaaatgg acagcctgag 960
aacaactaca aaacaacccc ccctgtgctg gattctgatg gctctttctt tctgtactcc 1020
aaactgactg tggacaagtc tagatggcag caggggaatg tcttttcttg ctctgtcatg 1080
catgaggctc tgcataacca ctacactcag aaatccctgt ctctgtctcc tggcaaatga 1140
tagtaaaagc tt 1152
<210> 41
<211> 1770
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 41
cggccgccat gaattttgga ctgaggctga ttttcctggt gctgaccctg aaaggcgtcc 60
agtgtgaagc cgaaactcgt gaatgtatct actataacgc caattgggag ctggaaagga 120
ctaaccagtc tggcctggag cggtgtgagg gagaacagga caagagactg cactgctacg 180
cttcctggcg caattccagc gggaccattg agctggtgaa gaaaggttgt tggctggacg 240
atttcaactg ttacgatcga caggaatgcg tggcaaccga ggaaaatccc caggtctatt 300
tttgctgttg cgagggcaac ttctgcaatg aaaggtttac acatctgcct gagccaggag 360
gacccgaagt gacctacgaa ccacccccta ccgcccctac tctgctgacc ggcggtggag 420
gatccggtgg aggcggttct ggcggcggtg gtagtgacaa aacccacacc tgcccacctt 480
gtcctgcccc tgaactgctg ggaggacctt ctgtgtttct gttcccacca aaaccaaaag 540
ataccctgat gatctctaga acccctgagg tgacatgtgt ggtggtggat gtgtctcatg 600
aggaccctga ggtcaaattc aactggtacg tggatggagt ggaagtccac aatgccaaaa 660
ccaagcctag agaggaacag tacaattcaa cctacagagt ggtcagtgtg ctgactgtgc 720
tgcatcagga ttggctgaat ggcaaggaat acaagtgtaa agtctcaaac aaggccctgc 780
ctgctccaat tgagaaaaca atctcaaagg ccaagggaca gcctagggaa ccccaggtct 840
acaccctgcc accttcaaga gaggaaatga ccaaaaacca ggtgtccctg acatgcctgg 900
tcaaaggctt ctacccttct gacattgctg tggagtggga gtcaaatgga cagcctgaga 960
acaactacaa aacaaccccc cctgtgctgg attctgatgg ctctttcttt ctgtactcca 1020
aactgactgt ggacaagtct agatggcagc aggggaatgt cttttcttgc tctgtcatgc 1080
atgaggctct gcataaccac tacactcaga aatccctgtc tctgtctcct ggcaaaggcg 1140
gcggaggatc cgggggtggg ggaagcggcg gaggaggtag tgtgggagac ctggagaccc 1200
tggcttttga cgggcggaca tacattgaat acctgaacgc tgtgaccgag agtgaactga 1260
ctaatgagat ccctgcagaa aaggccctgc agtcaaacca cttcgagctg tccctgagga 1320
ccgaagcaac acagggactg gtcctgtgga tcggcaaagt gggagagcga gcagactaca 1380
tggccctggc tattgtggat ggccatctgc agctgtctta tgacctggga agtcagccag 1440
tggtcctgag gtctacagtc aaagtgaaca ctaatagatg gctgagggtg cgggctcaca 1500
gagagcatcg cgaagggagc ctgcaggtcg gtaatgaagc accagtgacc ggctccagcc 1560
ctctgggagc aactcagctg gacaccgatg gggctctgtg gctgggagga ctgcagaagc 1620
tgccagtcgg ccaggctctg cccaaagcat acgggacagg ttttgtgggg tgcctgcgag 1680
atgtggtcgt gggtcaccgt cagctgcacc tgctggagga cgctgtcact aagcctgaac 1740
tgagaccttg ccctaccctg tgataagctt 1770
<210> 42
<211> 1771
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 42
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtgaag ccgaaactcg tgaatgtatc tactataacg ccaattggga gctggaaagg 120
actaaccagt ctggcctgga gcggtgtgag ggagaacagg acaagagact gcactgctac 180
gcttcctggc gcaattccag cgggaccatt gagctggtga agaaaggttg ttggctggac 240
gatttcaact gttacgatcg acaggaatgc gtggcaaccg aggaaaatcc ccaggtctat 300
ttttgctgtt gcgagggcaa cttctgcaat gaaaggttta cacatctgcc tgaggcagga 360
ggacccgaag tgacctacga accaccccct accgccccta ctctgctgac cggcggtgga 420
ggatccggtg gaggcggttc tggcggcggt ggtagtgaca aaacccacac ctgcccacct 480
tgtcctgccc ctgaactgct gggaggacct tctgtgtttc tgttcccacc aaaaccaaaa 540
gataccctga tgatctctag aacccctgag gtgacatgtg tggtggtgga tgtgtctcat 600
gaggaccctg aggtcaaatt caactggtac gtggatggag tggaagtcca caatgccaaa 660
accaagccta gagaggaaca gtacaattca acctacagag tggtcagtgt gctgactgtg 720
ctgcatcagg attggctgaa tggcaaggaa tacaagtgta aagtctcaaa caaggccctg 780
cctgctccaa ttgagaaaac aatctcaaag gccaagggac agcctaggga accccaggtc 840
tacaccctgc caccttcaag agaggaaatg accaaaaacc aggtgtccct gacatgcctg 900
gtcaaaggct tctacccttc tgacattgct gtggagtggg agtcaaatgg acagcctgag 960
aacaactaca aaacaacccc ccctgtgctg gattctgatg gctctttctt tctgtactcc 1020
aaactgactg tggacaagtc tagatggcag caggggaatg tcttttcttg ctctgtcatg 1080
catgaggctc tgcataacca ctacactcag aaatccctgt ctctgtctcc tggcaaaggc 1140
ggcggaggat ccgggggtgg gggaagcggc ggaggaggta gcgccggaga cgtggacaca 1200
ttggcatttg atggaaggac atttgttgag tacctcaatg cggtcacaga aagcgaactc 1260
gccaacgaaa tacctgtgga gaaagcccta cagagtaatc acttcgagct gagtttaaga 1320
accgaggcta cacagggcct agtgctttgg tccggaaagg ccaccgagcg ggctgactat 1380
gtggccctgg ctatcgtgga cggtcatctg cagctgtcgt ataatttggg cagccaacca 1440
gtggtcctca gatctactgt gcccgtcaac acaaatcgct ggcttagagt tgttgcacat 1500
cgcgagcaaa gagagggcag cttgcaagtg gggaatgaag cccctgtcac cggaagcagc 1560
cctctcggtg ccactcagtt ggataccgat ggagccctgt ggcttggcgg tttgccagag 1620
ttgccagttg gccctgctct gcccaaggcc tatgggactg gcttcgttgg atgccttcgc 1680
gacgtggtgg tcggccgtca cccccttcac cttctcgaag atgcagtcac caagccagaa 1740
ttacgccctt gtccaacccc ttgataagct t 1771
<210> 43
<211> 1747
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 43
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtgaag ccgaaactcg tgaatgtatc tactataacg ccaattggga gctggaaagg 120
actaaccagt ctggcctgga gcggtgtgag ggagaacagg acaagagact gcactgctac 180
gcttcctggc gcaattccag cgggaccatt gagctggtga agaaaggttg ttggctggac 240
gatttcaact gttacgatcg acaggaatgc gtggcaaccg aggaaaatcc ccaggtctat 300
ttttgctgtt gcgagggcaa cttctgcaat gaaaggttta cacatctgcc tgaggcagga 360
ggacccgaag tgacctacga accaccccct accgccccta ctctgctgac cggcggtgga 420
ggatccggtg gaggcggttc tggcggcggt ggtagtgaca aaacccacac ctgcccacct 480
tgtcctgccc ctgaactgct gggaggacct tctgtgtttc tgttcccacc aaaaccaaaa 540
gataccctga tgatctctag aacccctgag gtgacatgtg tggtggtgga tgtgtctcat 600
gaggaccctg aggtcaaatt caactggtac gtggatggag tggaagtcca caatgccaaa 660
accaagccta gagaggaaca gtacaattca acctacagag tggtcagtgt gctgactgtg 720
ctgcatcagg attggctgaa tggcaaggaa tacaagtgta aagtctcaaa caaggccctg 780
cctgctccaa ttgagaaaac aatctcaaag gccaagggac agcctaggga accccaggtc 840
tacaccctgc caccttcaag agaggaaatg accaaaaacc aggtgtccct gacatgcctg 900
gtcaaaggct tctacccttc tgacattgct gtggagtggg agtcaaatgg acagcctgag 960
aacaactaca aaacaacccc ccctgtgctg gattctgatg gctctttctt tctgtactcc 1020
aaactgactg tggacaagtc tagatggcag caggggaatg tcttttcttg ctctgtcatg 1080
catgaggctc tgcataacca ctacactcag aaatccctgt ctctgtctcc tggcaaaggc 1140
ggcggaggat ccgggggtgg gggaagcggc ggaggaggta gcgccggaga cgtggacaca 1200
ttggcatttg atggaaggac atttgttgag tacctcaatg cggtcacaga aagcgagaaa 1260
gccctacaga gtaatcactt cgagctgagt ttaagaaccg aggctacaca gggcctagtg 1320
ctttggtccg gaaaggccac cgagcgggct gactatgtgg ccctggctat cgtggacggt 1380
catctgcagc tgtcgtataa tttgggcagc caaccagtgg tcctcagatc tactgtgccc 1440
gtcaacacaa atcgctggct tagagttgtt gcacatcgcg agcaaagaga gggcagcttg 1500
caagtgggga atgaagcccc tgtcaccgga agcagccctc tcggtgccac tcagttggat 1560
accgatggag ccctgtggct tggcggtttg ccagagttgc cagttggccc tgctctgccc 1620
aaggcctatg ggactggctt cgttggatgc cttcgcgacg tggtggtcgg ccgtcacccc 1680
cttcaccttc tcgaagatgc agtcaccaag ccagaattac gcccttgtcc aaccccttga 1740
taagctt 1747
<210> 44
<211> 732
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 44
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtcagt ccgccctaac ccagcccgca agcgtttcag gttctcccgg gcagagtatt 120
acaatcagtt gcaccgggac ctccagcgat gtcggcagct ataactacgt gaattggtac 180
cagcaacatc ccggcaaagc acctaagctc atgatctatg gtgtttccaa acgacccagc 240
ggagtgtcca acaggttttc tggatccaaa tcgggcaata cagccagcct gaccatttcg 300
gggctacaag cggaggatga agcagactac tactgtggaa ctttcgcagg cgggtcctac 360
tatggggtgt tcggaggcgg caccaagctc acggtgttag gtcagccaaa agcggcgcca 420
tccgtcaccc tgttccctcc ctcatccgag gaactgcagg ccaataaggc tacactggtc 480
tgtctgatta gcgacttcta ccctggggcc gtgactgtgg cttggaaagc cgattcttct 540
cccgtgaaag ctggagtgga aacaaccacc ccctctaaac agagcaacaa caaatacgct 600
gcctcttcat acctgtccct gacccctgaa cagtggaaat ctcaccggtc ttactcatgc 660
caggtgacac acgagggatc aactgtggag aaaaccgtgg ctcctaccga atgttcatga 720
tagtaaaagc tt 732
<210> 45
<211> 1416
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 45
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtcagg ttcagttggt tcagtcaggt gccgaggtga agaagcctgg ggcttccgtg 120
aaggtttctt gcaaagcctc cggctacaca tttacttcca gctatataaa ctgggtgcga 180
caggctcctg gtcagggact cgaatggatg ggaacaataa accccgtgtc agggtccact 240
tcatacgctc agaagtttca gggccgggta acaatgacca gagatacctc aatctccacc 300
gcctacatgg aactgagtcg ccttcggtca gatgacactg ccgtgtatta ctgtgcaagg 360
gggggctggt ttgattactg gggacagggt actctggtta ctgtctcgag cgctagcaca 420
aagggcccta gtgtgtttcc tctggctccc tcttccaaat ccacttctgg tggcactgct 480
gctctgggat gcctggtgaa ggattacttt cctgaacctg tgactgtctc atggaactct 540
ggtgctctga cttctggtgt ccacactttc cctgctgtgc tgcagtctag tggactgtac 600
tctctgtcat ctgtggtcac tgtgccctct tcatctctgg gaacccagac ctacatttgt 660
aatgtgaacc acaaaccatc caacactaaa gtggacaaaa aagtggaacc caaatcctgt 720
gacaaaaccc acacctgccc accttgtcct gcccctgaac tgctgggagg accttctgtg 780
tttctgttcc cccccaaacc aaaggatacc ctgatgatct ctagaacccc tgaggtgaca 840
tgtgtggtgg tggatgtgtc tcatgaggac cctgaggtca aattcaactg gtacgtggat 900
ggagtggaag tccacaatgc caaaaccaag cctagagagg aacagtacaa ttcaacctac 960
agagtggtca gtgtgctgac tgtgctgcat caggattggc tgaatggcaa ggaatacaag 1020
tgtaaagtct caaacaaggc cctgcctgct ccaattgaga aaacaatctc aaaggccaag 1080
ggacagccta gggaacccca ggtctacacc ctgccacctt caagagagga aatgaccaaa 1140
aaccaggtgt ccctgacatg cctggtcaaa ggcttctacc cttctgacat tgctgtggag 1200
tgggagtcaa atggacagcc tgagaacaac tacaaaacaa ccccccctgt gctggattct 1260
gatggctctt tctttctgta ctccaaactg actgtggaca agtctagatg gcagcagggg 1320
aatgtctttt cttgctctgt catgcatgag gctctgcata accactacac tcagaaatcc 1380
ctgtctctgt ctcccgggaa atgatagtaa aagctt 1416
<210> 46
<211> 2035
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 46
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtcagg ttcagttggt tcagtcaggt gccgaggtga agaagcctgg ggcttccgtg 120
aaggtttctt gcaaagcctc cggctacaca tttacttcca gctatataaa ctgggtgcga 180
caggctcctg gtcagggact cgaatggatg ggaacaataa accccgtgtc agggtccact 240
tcatacgctc agaagtttca gggccgggta acaatgacca gagatacctc aatctccacc 300
gcctacatgg aactgagtcg ccttcggtca gatgacactg ccgtgtatta ctgtgcaagg 360
gggggctggt ttgattactg gggacagggt actctggtta ctgtctcgag cgctagcaca 420
aagggcccta gtgtgtttcc tctggctccc tcttccaaat ccacttctgg tggcactgct 480
gctctgggat gcctggtgaa ggattacttt cctgaacctg tgactgtctc atggaactct 540
ggtgctctga cttctggtgt ccacactttc cctgctgtgc tgcagtctag tggactgtac 600
tctctgtcat ctgtggtcac tgtgccctct tcatctctgg gaacccagac ctacatttgt 660
aatgtgaacc acaaaccatc caacactaaa gtggacaaaa aagtggaacc caaatcctgt 720
gacaaaaccc acacctgccc accttgtcct gcccctgaac tgctgggagg accttctgtg 780
tttctgttcc caccaaaacc aaaagatacc ctgatgatct ctagaacccc tgaggtgaca 840
tgtgtggtgg tggatgtgtc tcatgaggac cctgaggtca aattcaactg gtacgtggat 900
ggagtggaag tccacaatgc caaaaccaag cctagagagg aacagtacaa ttcaacctac 960
agagtggtca gtgtgctgac tgtgctgcat caggattggc tgaatggcaa ggaatacaag 1020
tgtaaagtct caaacaaggc cctgcctgct ccaattgaga aaacaatctc aaaggccaag 1080
ggacagccta gggaacccca ggtctacacc ctgccacctt caagagagga aatgaccaaa 1140
aaccaggtgt ccctgacatg cctggtcaaa ggcttctacc cttctgacat tgctgtggag 1200
tgggagtcaa atggacagcc tgagaacaac tacaaaacaa ccccccctgt gctggattct 1260
gatggctctt tctttctgta ctccaaactg actgtggaca agtctagatg gcagcagggg 1320
aatgtctttt cttgctctgt catgcatgag gctctgcata accactacac tcagaaatcc 1380
ctgtctctgt ctcctggcaa aggcggcgga ggatccgggg gtgggggaag cggcggagga 1440
ggtagcgccg gagacgtgga cacattggca tttgatggaa ggacatttgt tgagtacctc 1500
aatgcggtca cagaaagcga actcgccaac gaaatacctg tggagaaagc cctacagagt 1560
aatcacttcg agctgagttt aagaaccgag gctacacagg gcctagtgct ttggtccgga 1620
aaggccaccg agcgggctga ctatgtggcc ctggctatcg tggacggtca tctgcagctg 1680
tcgtataatt tgggcagcca accagtggtc ctcagatcta ctgtgcccgt caacacaaat 1740
cgctggctta gagttgttgc acatcgcgag caaagagagg gcagcttgca agtggggaat 1800
gaagcccctg tcaccggaag cagccctctc ggtgccactc agttggatac cgatggagcc 1860
ctgtggcttg gcggtttgcc agagttgcca gttggccctg ctctgcccaa ggcctatggg 1920
actggcttcg ttggatgcct tcgcgacgtg gtggtcggcc gtcaccccct tcaccttctc 1980
gaagatgcag tcaccaagcc agaattacgc ccttgtccaa ccccttgata agctt 2035
<210> 47
<211> 720
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 47
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtgaca tccaaatgac ccagtctcca tcctccctga gcgcgagtgt gggtgatcgc 120
gtgactataa cctgctccgc atcctcatca atctcgtaca tgcactggta tcagcagaag 180
cctggaaagg cacccaagct gcttatatac gatacctcta aattggcaag aggggttccc 240
tccagattct ctgggagcgg gtctggtacc gactttactc taacgatctc atcactgcaa 300
ccggaagatt tcgccacata ctattgccag cagtggtacc tgcaccccct cacattcgga 360
ggtggcacga aagtggaaat caagcgtacg gtcgcggcgc cttctgtgtt cattttcccc 420
ccatctgatg aacagctgaa atctggcact gcttctgtgg tctgtctgct gaacaacttc 480
taccctagag aggccaaagt ccagtggaaa gtggacaatg ctctgcagag tgggaattcc 540
caggaatctg tcactgagca ggactctaag gatagcacat actccctgtc ctctactctg 600
acactgagca aggctgatta cgagaaacac aaagtgtacg cctgtgaagt cacacatcag 660
gggctgtcta gtcctgtgac caaatccttc aataggggag agtgctgata gtaaaagctt 720
<210> 48
<211> 1443
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 48
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtcaat tgcaattgca agagagcggg cccggactcg tgaaaccatc tgagaccctc 120
tccctcacct gcaccgtttc cggattctcc ctccggaaag tcggaagttc agtgtcctgg 180
atcagacagc ctcccggcaa gggcctggaa tggattggac acatctattg ggatgacgat 240
aagcgcctga atccctccct gcgcaatcgc gtgacaatca gcgtggatac cagcaagaat 300
caattctcac tgaaactttc tagcgtaaca gctgctgaca cggctgtata ttattgcgcc 360
cgccgcgcta ttactactgt catcggaggt gggacgttcg atctgtgggg acaggggact 420
ctggttactg tctcgagcgc tagcacaaag ggccctagtg tgtttcctct ggctccctct 480
tccaaatcca cttctggtgg cactgctgct ctgggatgcc tggtgaagga ttactttcct 540
gaacctgtga ctgtctcatg gaactctggt gctctgactt ctggtgtcca cactttccct 600
gctgtgctgc agtctagtgg actgtactct ctgtcatctg tggtcactgt gccctcttca 660
tctctgggaa cccagaccta catttgtaat gtgaaccaca aaccatccaa cactaaagtg 720
gacaaaaaag tggaacccaa atcctgtgac aaaacccaca cctgcccacc ttgtcctgcc 780
cctgaactgc tgggaggacc ttctgtgttt ctgttccccc ccaaaccaaa ggataccctg 840
atgatctcta gaacccctga ggtgacatgt gtggtggtgg atgtgtctca tgaggaccct 900
gaggtcaaat tcaactggta cgtggatgga gtggaagtcc acaatgccaa aaccaagcct 960
agagaggaac agtacaattc aacctacaga gtggtcagtg tgctgactgt gctgcatcag 1020
gattggctga atggcaagga atacaagtgt aaagtctcaa acaaggccct gcctgctcca 1080
attgagaaaa caatctcaaa ggccaaggga cagcctaggg aaccccaggt ctacaccctg 1140
ccaccttcaa gagaggaaat gaccaaaaac caggtgtccc tgacatgcct ggtcaaaggc 1200
ttctaccctt ctgacattgc tgtggagtgg gagtcaaatg gacagcctga gaacaactac 1260
aaaacaaccc cccctgtgct ggattctgat ggctctttct ttctgtactc caaactgact 1320
gtggacaagt ctagatggca gcaggggaat gtcttttctt gctctgtcat gcatgaggct 1380
ctgcataacc actacactca gaaatccctg tctctgtctc ccgggaaatg atagtaaaag 1440
ctt 1443
<210> 49
<211> 2062
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 49
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtcaat tgcaattgca agagagcggg cccggactcg tgaaaccatc tgagaccctc 120
tccctcacct gcaccgtttc cggattctcc ctccggaaag tcggaagttc agtgtcctgg 180
atcagacagc ctcccggcaa gggcctggaa tggattggac acatctattg ggatgacgat 240
aagcgcctga atccctccct gcgcaatcgc gtgacaatca gcgtggatac cagcaagaat 300
caattctcac tgaaactttc tagcgtaaca gctgctgaca cggctgtata ttattgcgcc 360
cgccgcgcta ttactactgt catcggaggt gggacgttcg atctgtgggg acaggggact 420
ctggttactg tctcgagcgc tagcacaaag ggccctagtg tgtttcctct ggctccctct 480
tccaaatcca cttctggtgg cactgctgct ctgggatgcc tggtgaagga ttactttcct 540
gaacctgtga ctgtctcatg gaactctggt gctctgactt ctggtgtcca cactttccct 600
gctgtgctgc agtctagtgg actgtactct ctgtcatctg tggtcactgt gccctcttca 660
tctctgggaa cccagaccta catttgtaat gtgaaccaca aaccatccaa cactaaagtg 720
gacaaaaaag tggaacccaa atcctgtgac aaaacccaca cctgcccacc ttgtcctgcc 780
cctgaactgc tgggaggacc ttctgtgttt ctgttcccac caaaaccaaa agataccctg 840
atgatctcta gaacccctga ggtgacatgt gtggtggtgg atgtgtctca tgaggaccct 900
gaggtcaaat tcaactggta cgtggatgga gtggaagtcc acaatgccaa aaccaagcct 960
agagaggaac agtacaattc aacctacaga gtggtcagtg tgctgactgt gctgcatcag 1020
gattggctga atggcaagga atacaagtgt aaagtctcaa acaaggccct gcctgctcca 1080
attgagaaaa caatctcaaa ggccaaggga cagcctaggg aaccccaggt ctacaccctg 1140
ccaccttcaa gagaggaaat gaccaaaaac caggtgtccc tgacatgcct ggtcaaaggc 1200
ttctaccctt ctgacattgc tgtggagtgg gagtcaaatg gacagcctga gaacaactac 1260
aaaacaaccc cccctgtgct ggattctgat ggctctttct ttctgtactc caaactgact 1320
gtggacaagt ctagatggca gcaggggaat gtcttttctt gctctgtcat gcatgaggct 1380
ctgcataacc actacactca gaaatccctg tctctgtctc ctggcaaagg cggcggagga 1440
tccgggggtg ggggaagcgg cggaggaggt agcgccggag acgtggacac attggcattt 1500
gatggaagga catttgttga gtacctcaat gcggtcacag aaagcgaact cgccaacgaa 1560
atacctgtgg agaaagccct acagagtaat cacttcgagc tgagtttaag aaccgaggct 1620
acacagggcc tagtgctttg gtccggaaag gccaccgagc gggctgacta tgtggccctg 1680
gctatcgtgg acggtcatct gcagctgtcg tataatttgg gcagccaacc agtggtcctc 1740
agatctactg tgcccgtcaa cacaaatcgc tggcttagag ttgttgcaca tcgcgagcaa 1800
agagagggca gcttgcaagt ggggaatgaa gcccctgtca ccggaagcag ccctctcggt 1860
gccactcagt tggataccga tggagccctg tggcttggcg gtttgccaga gttgccagtt 1920
ggccctgctc tgcccaaggc ctatgggact ggcttcgttg gatgccttcg cgacgtggtg 1980
gtcggccgtc acccccttca ccttctcgaa gatgcagtca ccaagccaga attacgccct 2040
tgtccaaccc cttgataagc tt 2062
<210> 50
<211> 1671
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 50
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtggta actgttggct gcggcaggct aaaaatggta gatgtcaggt gctgtataaa 120
accgaactgt caaaagaaga gtgttgctcc acaggaaggc tgtctaccag ttggacagag 180
gaagacgtga acgataatac tctgttcaag tggatgatct ttaacggcgg cgcccctaat 240
tgcattccct gtaaagagac ctgcgaaaac gtggattgtg gacctgggaa gaaatgcaga 300
atgaacaaga aaaataagcc tcgctgcgtg tgtgcacccg attgcagcaa catcacctgg 360
aagggcccag tctgtggact ggacgggaaa acatacagga atgagtgcgc actgctgaag 420
gcccggtgta aagaacagcc agagctggaa gtgcagtatc agggcaagtg caagaaaact 480
tgtagagacg tcttctgccc cggctcctct acttgtgtgg tcgatcagac caacaatgcc 540
tactgcgtga cttgtaaccg catctgcccc gagccttcta gttcagaaca gtacctgtgt 600
ggtaatgatg gcgtcacata ttccagcgct tgccacctgc gaaaggcaac ttgtctgctg 660
ggacgttcca ttgggctggc ctatgagggc aaatgcatca aggctaaatc ctgcgaagac 720
attcagtgtg ggggtggcaa gaaatgtctg tgggatagta aagtgggtag gggccggtgc 780
tctctgtgtg acgaactgtg ccccgactca aaatccgatg aacctgtctg tgcaagcgac 840
aatgccacct acgcttctga gtgtgccatg aaggaagctg cctgctcaag cggcgtgctg 900
ctggaagtca aacatagcgg tagttgtaat ggcggtggag gatccggtgg aggcggttct 960
ggcggcggtg gtagtgacaa aacccacacc tgcccacctt gtcctgcccc tgaactgctg 1020
ggaggacctt ctgtgtttct gttcccacca aaaccaaaag ataccctgat gatctctaga 1080
acccctgagg tgacatgtgt ggtggtggat gtgtctcatg aggaccctga ggtcaaattc 1140
aactggtacg tggatggagt ggaagtccac aatgccaaaa ccaagcctag agaggaacag 1200
tacaattcaa cctacagagt ggtcagtgtg ctgactgtgc tgcatcagga ttggctgaat 1260
ggcaaggaat acaagtgtaa agtctcaaac aaggccctgc ctgctccaat tgagaaaaca 1320
atctcaaagg ccaagggaca gcctagggaa ccccaggtct acaccctgcc accttcaaga 1380
gaggaaatga ccaaaaacca ggtgtccctg acatgcctgg tcaaaggctt ctacccttct 1440
gacattgctg tggagtggga gtcaaatgga cagcctgaga acaactacaa aacaaccccc 1500
cctgtgctgg attctgatgg ctctttcttt ctgtactcca aactgactgt ggacaagtct 1560
agatggcagc aggggaatgt cttttcttgc tctgtcatgc atgaggctct gcataaccac 1620
tacactcaga aatccctgtc tctgtctcct ggcaaatgat agtaaaagct t 1671
<210> 51
<211> 2290
<212> DNA
<213> 重组体
<400> 51
gcggccgcca tgaattttgg actgaggctg attttcctgg tgctgaccct gaaaggcgtc 60
cagtgtggta actgttggct gcggcaggct aaaaatggta gatgtcaggt gctgtataaa 120
accgaactgt caaaagaaga gtgttgctcc acaggaaggc tgtctaccag ttggacagag 180
gaagacgtga acgataatac tctgttcaag tggatgatct ttaacggcgg cgcccctaat 240
tgcattccct gtaaagagac ctgcgaaaac gtggattgtg gacctgggaa gaaatgcaga 300
atgaacaaga aaaataagcc tcgctgcgtg tgtgcacccg attgcagcaa catcacctgg 360
aagggcccag tctgtggact ggacgggaaa acatacagga atgagtgcgc actgctgaag 420
gcccggtgta aagaacagcc agagctggaa gtgcagtatc agggcaagtg caagaaaact 480
tgtagagacg tcttctgccc cggctcctct acttgtgtgg tcgatcagac caacaatgcc 540
tactgcgtga cttgtaaccg catctgcccc gagccttcta gttcagaaca gtacctgtgt 600
ggtaatgatg gcgtcacata ttccagcgct tgccacctgc gaaaggcaac ttgtctgctg 660
ggacgttcca ttgggctggc ctatgagggc aaatgcatca aggctaaatc ctgcgaagac 720
attcagtgtg ggggtggcaa gaaatgtctg tgggatagta aagtgggtag gggccggtgc 780
tctctgtgtg acgaactgtg ccccgactca aaatccgatg aacctgtctg tgcaagcgac 840
aatgccacct acgcttctga gtgtgccatg aaggaagctg cctgctcaag cggcgtgctg 900
ctggaagtca aacatagcgg tagttgtaat ggcggtggag gatccggtgg aggcggttct 960
ggcggcggtg gtagtgacaa aacccacacc tgcccacctt gtcctgcccc tgaactgctg 1020
ggaggacctt ctgtgtttct gttcccacca aaaccaaaag ataccctgat gatctctaga 1080
acccctgagg tgacatgtgt ggtggtggat gtgtctcatg aggaccctga ggtcaaattc 1140
aactggtacg tggatggagt ggaagtccac aatgccaaaa ccaagcctag agaggaacag 1200
tacaattcaa cctacagagt ggtcagtgtg ctgactgtgc tgcatcagga ttggctgaat 1260
ggcaaggaat acaagtgtaa agtctcaaac aaggccctgc ctgctccaat tgagaaaaca 1320
atctcaaagg ccaagggaca gcctagggaa ccccaggtct acaccctgcc accttcaaga 1380
gaggaaatga ccaaaaacca ggtgtccctg acatgcctgg tcaaaggctt ctacccttct 1440
gacattgctg tggagtggga gtcaaatgga cagcctgaga acaactacaa aacaaccccc 1500
cctgtgctgg attctgatgg ctctttcttt ctgtactcca aactgactgt ggacaagtct 1560
agatggcagc aggggaatgt cttttcttgc tctgtcatgc atgaggctct gcataaccac 1620
tacactcaga aatccctgtc tctgtctcct ggcaaaggcg gcggaggatc cgggggtggg 1680
ggaagcggcg gaggaggtag tgtgggagac ctggagaccc tggcttttga cgggcggaca 1740
tacattgaat acctgaacgc tgtgaccgag agtgaactga ctaatgagat ccctgcagaa 1800
aaggccctgc agtcaaacca cttcgagctg tccctgagga ccgaagcaac acagggactg 1860
gtcctgtgga tcggcaaagt gggagagcga gcagactaca tggccctggc tattgtggat 1920
ggccatctgc agctgtctta tgacctggga agtcagccag tggtcctgag gtctacagtc 1980
aaagtgaaca ctaatagatg gctgagggtg cgggctcaca gagagcatcg cgaagggagc 2040
ctgcaggtcg gtaatgaagc accagtgacc ggctccagcc ctctgggagc aactcagctg 2100
gacaccgatg gggctctgtg gctgggagga ctgcagaagc tgccagtcgg ccaggctctg 2160
cccaaagcat acgggacagg ttttgtgggg tgcctgcgag atgtggtcgt gggtcaccgt 2220
cagctgcacc tgctggagga cgctgtcact aagcctgaac tgagaccttg ccctaccctg 2280
tgataagctt 2290

Claims (6)

1.化合物，其选自：
SEQ ID NO：34所示的Fc-nLG3，
SEQ ID NO：35所示的nLG3-Fc，
SEQ ID NO：36所示的Fc-(h)nLG3，
SEQ ID NO：37所示的Fc-(h)LG3，
SEQ ID NO：38所示的Fc-ActR，
SEQ ID NO：39所示的ActR-Fc，
SEQ ID NO：40所示的(h)ActR-Fc，
SEQ ID NO：41所示的ActR-Fc-nLG3，
SEQ ID NO：42所示的(h)ActR-Fc-(h)nLG3，
SEQ ID NO：43所示的(h)ActR-Fc-(h)LG3，
SEQ ID NO：44所示的ActRmAb(LC)，
SEQ ID NO：45所示的ActRmAb(HC)，
SEQ ID NO：46所示的ActRmAb(HC)-(h)nLG3，
SEQ ID NO：47所示的MyomAb(LC)，
SEQ ID NO：48所示的MyomAb(HC)，
SEQ ID NO：49所示的MyomAb(HC)-(h)nLG3，
SEQ ID NO：50所示的Fol-Fc，及
SEQ ID NO：51所示的Fol-Fc-nLG3。
2.改善肌肉性能的组合物，其包含有效量的权利要求1的化合物。
3.药物组合物，其包含至少一种根据权利要求1的化合物，与药学上可接受的载体一起配制。
4.治疗导致肌肉功能丧失的病理状态的组合物，其包含有效量的权利要求1的化合物，所述病理状态是下列中的一种或多种：
糖皮质激素治疗后肌肉萎缩；
由于神经创伤或退行性，代谢性或炎性神经病变导致的去神经支配导致的肌肉萎缩；
由肌强直、先天性肌病、线粒体肌病、家族性周期性麻痹、炎性肌病、代谢性肌病、皮肌炎、多发性肌炎、包涵体肌炎、骨化性肌炎、横纹肌溶解症或肌红蛋白尿引起的肌肉萎缩；
由Duchenne型，Becker型，筋膜肱骨，Emery-Dreifuss，眼咽，肩胛骨，肢带，福山，先天性肌营养不良或遗传性远端肌病引起的肌病；
肌肉骨骼疾病；
成人运动神经元病，婴儿脊髓性肌萎缩，肌萎缩侧索硬化，幼年脊髓性肌萎缩，多灶性导管阻滞的自身免疫性运动神经病变，中风或脊髓损伤导致的瘫痪，创伤引起的骨骼固定，卧床休息延长，自愿不活动，不自主不活动，营养不足，艾滋病，禁食，甲状腺疾病，良性先天性张力减退，中心核心疾病，慢性阻塞性肺病，败血症，肾功能衰竭或充血性心力衰竭；
肌肉减少症，皮肤萎缩，动脉硬化，肺气肿，骨质疏松症，骨关节炎，免疫功能低下，高血压，痴呆，白内障，年龄相关性黄斑变性，中风，预期寿命缩短，虚弱，记忆力减退，皱纹，肾功能受损或年龄相关的听力损失；
代谢综合征；
急性和/或慢性肾病或衰竭，肝纤维化或肝硬化；
与神经元死亡相关的疾病；或
恶病质。
5.权利要求4的组合物，其中
所述糖皮质激素是肌皮质醇，地塞米松，倍他米松，泼尼松，甲基强的松龙或泼尼松龙；
所述退行性，代谢性或炎性神经病变是Guillian-Barre综合征或外周神经病变；
所述肌肉骨骼疾病是骨质疏松症，骨折，身材矮小或侏儒症；
所述与神经元死亡相关的疾病是肌萎缩侧索硬化，脑萎缩或痴呆；
所述恶病质是与类风湿性关节炎相关的恶病质；
所述代谢综合征是糖尿病、高血糖或肥胖；
所述动脉硬化是动脉粥样硬化；
所述与神经元死亡相关的疾病是亨廷顿病或阿尔茨海默病；
所述先天性肌病是纤维状肌病，多/微小肌病或肌管中央核肌病；且
所述代谢性肌病是由糖原或脂质贮积病引起的。
6.权利要求5的组合物，其中所述糖尿病是II型糖尿病。
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