CN110031571B

CN110031571B - 一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法

Info

Publication number: CN110031571B
Application number: CN201910433803.9A
Authority: CN
Inventors: 吴秉宇; 费婷; 罗辰; 虞桂君; 王先颖; 吴达
Original assignee: Shanghai Tobacco Group Co Ltd
Current assignee: Shanghai Tobacco Group Co Ltd
Priority date: 2019-05-23
Filing date: 2019-05-23
Publication date: 2021-09-07
Anticipated expiration: 2039-05-23
Also published as: CN110031571A

Abstract

本发明提供一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法，包括：将卷烟样品平衡、抽吸、捕集、萃取、过柱后制备获得的样品溶液，采用气相色谱质谱法进行测定，确定样品溶液中香兰素和乙基香兰素的含量。本发明提供的一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法，能够有效降低基质干扰，灵敏度高、重复性好、回收率高，能够完全满足卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素的分析需要。

Description

一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法

技术领域

本发明属于卷烟理化指标检测技术领域，涉及一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法。

背景技术

香兰素和乙基香兰素，具有香荚兰香气及浓郁的奶香，是两种重要的食品添加剂，广泛应用于糖果、蛋糕、饮料等食品的生产加工。在烟草行业，香兰素和乙基香兰素常用于改善和丰富卷烟的香气质和吸味，或者通过外加香方式赋予卷烟额外的特征香味，其主流烟气中香兰素和乙基香兰素的含量，能直观和准确地反映消费者感知的香气量。但欧盟的研究发现，大剂量的摄入香兰素类物质对人体有较大的危害，过度摄入可导致头痛、恶心、呕吐、呼吸困难，甚至损伤肝肾等；我国也对婴幼儿食品中香兰素和乙基香兰素的使用提出5mg/100g的限量要求(中华人民共和国卫生部公告2008年第21号)。此外香兰素的添加会导致主流烟气中苯系物和酚类物质含量的增加。因此，准确测定卷烟尤其是卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素的含量，不仅是卷烟香气质量控制和评价的重要指标，同时也对吸烟与健康具有重要意义。

综合文献调研结果，可知现有的香兰素和乙基香兰素检测方法主要有分光光度法、毛细管电泳法、液相色谱法、液相色谱-质谱联用法、气相色谱法、气相色谱-质谱联用法等。但卷烟主流烟气成分复杂，且香兰素及乙基香兰素的含量非常少(一般小于2μg/支)，常规方法无法满足主流烟气中香兰素和乙基香兰素的定量检测要求。在国内烟草行业中，目前未见针对卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量测定的报道。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法，用于解决现有技术中缺乏能准确检测卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的方法的问题。

为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法，包括：将卷烟样品平衡、抽吸、捕集、萃取、过柱后制备获得的样品溶液，采用气相色谱质谱法进行测定，确定样品溶液中香兰素和乙基香兰素的含量。

较佳地，所述香兰素的CAS号为121-33-5，所述乙基香兰素的CAS号为121-32-4。

较佳地，所述样品溶液的制备包括以下步骤：

1)将卷烟样品平衡、抽吸后，用滤片捕集卷烟烟气，再在滤片中加入乙醇和内标工作液进行振荡萃取后，获得萃取液；

2)将萃取液过萃取柱后静置、洗脱、浓缩、过滤，即得所需样品溶液。

优选地，步骤1)中，所述卷烟样品平衡时处于不拆小盒包装薄膜的状态。

优选地，步骤1)中，所述卷烟样品的平衡条件为：温度：22±1℃；相对湿度：60±5％；平衡时间：60±5min。

优选地，步骤1)中，所述卷烟样品按照国家标准GB/T19609-2004《卷烟用常规分析用吸烟机测定总粒相物和焦油》规定的方法，采用吸烟机进行抽吸卷烟烟气。

更优选地，所述吸烟机为20孔道转盘式吸烟机。

优选地，步骤1)中，所述卷烟样品抽吸的具体条件为：环境温度为22±1℃；相对湿度为60±5％；抽吸容量为35±2mL；抽吸频率为1-3次/60秒；抽吸持续时间为2±0.5秒/每口。

更优选地，所述卷烟样品抽吸的具体条件为：环境温度为22℃；相对湿度为60％；抽吸容量为35mL；抽吸频率为2次/60秒；抽吸持续时间为2秒/每口。

优选地，步骤1)中，所述滤片为剑桥滤片。更优选地，所述剑桥滤片的规格为Φ92mm。

优选地，步骤1)中，所述滤片的捕集量为15-25支卷烟烟气/每片。更优选地，所述滤片的捕集量为20支卷烟烟气/每片。

优选地，步骤1)中，所述乙醇为常规使用的无水乙醇。

优选地，步骤1)中，所述内标工作液为香兰素-d3的二氯甲烷溶液。具体来说，所述内标工作液是准确称取香兰素-d3标准品加入二氯甲烷溶解所得。

更优选地，所述内标工作液中香兰素-d3的浓度为150-250μg/mL。最优选地，所述内标工作液中香兰素-d3的浓度为200μg/mL。

优选地，步骤1)中，所述滤片加入的乙醇的用量为45-55mL/每片。更优选地，所述滤片加入的乙醇的用量为50mL/每片。

优选地，步骤1)中，所述滤片加入的内标工作液的用量为0.20-0.30mL/每片。更优选地，所述滤片加入的内标工作液的用量为0.25mL/每片。

优选地，步骤1)中，所述振荡萃取的条件为：振荡时间：40±5min；振荡频率：200±10rpm。更所述振荡萃取的条件为：振荡时间：40min；振荡频率：200rpm。

优选地，步骤2)中，所述萃取柱为硅藻土固相萃取柱。

优选地，步骤2)中，所述静置的时间为10-20min。更优选地，所述静置的时间为15min。

优选地，步骤2)中，所述洗脱采用的洗脱液为二氯甲烷。

更优选地，所述洗脱液与萃取液加入的体积之比为30:7-8。最优选地，所述洗脱液与萃取液加入的体积之比为30:7.5。

优选地，步骤2)中，所述浓缩采用定量浓缩仪进行。

优选地，步骤2)中，所述浓缩后浓缩液的体积为0.5-2.0mL。更优选地，所述浓缩后浓缩液的体积为1.0mL。

优选地，步骤2)中，所述过滤为滤膜过滤。更优选地，所述滤膜过滤中采用的滤膜为0.45μm滤膜。

较佳地，所述采用气相色谱质谱法进行测定，包括以下步骤：

A)配制标准样品：取香兰素和乙基香兰素的标准品，加入内标工作液，再加入二氯甲烷溶解定容，配成标准工作液；

B)样品检测：采用气相色谱质谱法分别测定标准工作液和样品溶液，比较保留时间进行定性，采用内标标准曲线法进行定量，确定样品溶液中香兰素和乙基香兰素的含量。

优选地，步骤A)中，所述标准工作液是将香兰素和乙基香兰素标准品的混合储备溶液，加入内标工作液，并加入二氯甲烷进行逐级稀释后获得。

更优选地，所述混合储备溶液中香兰素和乙基香兰素的浓度均为200.0μg/mL。

更优选地，所述混合储备溶液置于4℃的冰箱中保存。

更优选地，所述混合储备溶液的保存期限为6个月。

优选地，步骤A)中，所述内标工作液为香兰素-d3的二氯甲烷溶液。

更优选地，所述内标工作液中的香兰素-d3，在标准工作液中的浓度为0.9-1.1μg/mL。进一步优选地，所述内标工作液中的香兰素-d3，在标准工作液中的浓度为1.0μg/mL。

优选地，步骤A)中，所述标准工作液中香兰素和乙基香兰素的浓度范围均为0.2-20.0μg/mL。

优选地，步骤B)中，所述气相色谱质谱法中，所述气相色谱的测定条件为：

色谱柱：DB-HeavyWAX毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度：280℃；进样量：1.0μL；载气：高纯氦气，载气纯度≥99.999％；载气流速：1.0ml/min；分流比：20：1；升温程序：初始温度80℃保持2min，以10℃/min的速率升至280℃保持2min。

优选地，步骤B)中，所述气相色谱质谱法中，所述质谱的测定条件为：

电离方式：电子轰击(EI)离子源；电离能量：70eV；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：280℃；溶剂延迟：3min；扫描方式：选择离子监测(SIM)。

更优选地，所述质谱测定中选择的定量离子分别为：香兰素-d3 155、香兰素152、乙基香兰素166；所述质谱测定中选择的定性离子分别为：香兰素-d3 126、香兰素81、乙基香兰素137。

优选地，步骤B)中，所述内标标准曲线法包括以下步骤：

a)按步骤A)制备一系列不同浓度的标准工作液，分别进行GC-MS检测，获得香兰素或乙基香兰素/内标的色谱峰面积比与相应香兰素或乙基香兰素/内标的浓度比的线性关系，绘制相应的标准工作曲线，计算得到香兰素和乙基香兰素的标准工作曲线的回归方程；

b)将步骤1)中样品溶液进行GC-MS检测，将获得的香兰素或乙基香兰素与内标的色谱峰面积比，代入步骤a)中香兰素或乙基香兰素的标准工作曲线的回归方程，并根据内标物的已知浓度，计算得到样品溶液中香兰素和乙基香兰素的浓度。

更优选地，所述标准工作曲线中，以香兰素或乙基香兰素与内标的色谱峰面积比为纵坐标(Y轴)，其相应香兰素或乙基香兰素与内标的浓度比为横坐标(X轴)。

优选地，步骤B)中，所述样品溶液中香兰素和乙基香兰素的含量，按公式(1)进行计算，获得卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素的含量，所述公式(1)为：

其中，X为主流烟气中香兰素或乙基香兰素的含量，μg/支；c为样品溶液中香兰素或乙基香兰素的含量，μg/mL；V为样品溶液的体积，mL；N为抽吸并经滤片捕集的卷烟数量，支。

如上所述，本发明提供的一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法，采用固相萃取法，利用气相色谱-质谱联用首次实现卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的定量测定。该种测定方法首次建立了卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素的同时测定方法，同时采用固相萃取法，有效降低基质干扰，并提升检测灵敏度，。该种测定方法灵敏度高、重复性好、回收率高，能够完全满足卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素的分析需要。

附图说明

图1显示为本发明的卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素测定的气相色谱图1A、1B，其中，图1A为标准工作液中香兰素和乙基香兰素测定的气相色谱图；图1B为实际样品溶液中香兰素和乙基香兰素测定的气相色谱图。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。

以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。

以下实施例使用的材料、试剂和仪器如下：

1、材料与试剂

香兰素、乙基香兰素、香兰素-d3(纯度均≥99.0％，上海百灵威化学技术有限公司)；乙醇(色谱纯，美国ACS恩科化学)；二氯甲烷(色谱纯，美国TEDIA天地有限公司)(固相萃取洗脱液)；大孔硅藻土固相萃取柱(固相萃取法)(3g/10mL，上海安谱实验科技股份有限公司)；卷烟样品购自市场，原料烟由上海烟草集团有限责任公司提供。

2、仪器

Borgwaldt RM20H转盘型吸烟机(德国博瓦特公司)；Agilent 7890B-5977B气质联用仪(美国安捷伦公司)；AE200型电子分析天平(感量：0.0001g，瑞士Mettler Toledo公司)；HY-2A调速多用振荡器(上海康曼技电子科技有限公司)；Syncore Analyst定量浓缩仪(瑞士Buchi公司)。

在一个具体实施例中，对于卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量，包括以下的测定过程。

1、样品溶液的制备

在不拆小盒包装薄膜的状态下，将卷烟样品在温度(22±1)℃、相对湿度(60±5)％下平衡60±5min。再按照国家标准GB/T19609-2004《卷烟用常规分析用吸烟机测定总粒相物和焦油》规定的方法，采用20孔道转盘式吸烟机在温度(22±1)℃、相对湿度(60±5)％下抽吸卷烟烟气，每口抽吸2±0.5秒，抽吸容量为35±2mL，抽吸频率为1-3次/60秒。然后，采用剑桥滤片捕集卷烟烟气，每一片剑桥滤片的捕集量为15-25支卷烟烟气。捕集完后，将剑桥滤片置于锥形瓶中，加入乙醇及150-250μg/mL的内标工作液，滤片加入的乙醇的用量为45-55mL/每片，滤片加入的内标工作液的用量为0.20-0.30mL/每片，以200±10rpm速率振荡萃取40±5min后，得到萃取液。然后，取萃取液过硅藻土固相萃取柱，静置10-20min后，用二氯甲烷进行洗脱，洗脱液与萃取液加入的体积之比为30:7-8。再用定量浓缩仪浓缩至0.5-2.0mL，经0.45μm有机滤膜过滤后，得到样品溶液。

2、标准工作液的制备

准确称取香兰素和乙基香兰素的标准品，用二氯甲烷溶解并定容，配成混合储备溶液，混合储备溶液中香兰素和乙基香兰素的浓度均为200.0μg/mL。混合储备溶液置于4℃的冰箱中保存，保存期限为6个月。

准确称取香兰素-d3标准品，用二氯甲烷溶解并定容，配成内标工作液，内标工作液中香兰素-d3浓度为150-250μg/mL。

分别移取一系列不同体积的混合储备溶液，再加入相同体积的内标工作液，用二氯甲烷溶解并定容，配成一系列不同浓度的标准工作液，标准工作液中香兰素的浓度范围为0.2-20.0μg/mL，乙基香兰素的浓度范围为0.2-20.0μg/mL。内标香兰素-d3的浓度为0.9-1.1μg/mL。

3、检测

采用气相色谱质谱法分别测定标准工作液和样品溶液，比较保留时间进行定性，采用内标标准曲线法进行定量，确定样品溶液中香兰素和乙基香兰素的含量。

其中，气相色谱的测定条件为：色谱柱：DB-HeavyWAX毛细管色谱柱(30m×0.25mm×0.25μm)；进样口温度：280℃；进样量：1.0μL；载气：高纯氦气，载气纯度≥99.999％；载气流速：1.0ml/min；分流比：20：1；升温程序：初始温度80℃保持2min，以10℃/min的速率升至280℃保持2min。

质谱的测定条件为：电子轰击(EI)离子源；电离能量：70eV；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：280℃；溶剂延迟：3min；扫描方式：选择离子监测(SIM)。

其中，所述质谱测定中选择的定量离子分别为：香兰素-d3 155、香兰素152、乙基香兰素166；所述质谱测定中选择的定性离子分别为：香兰素-d3 126、香兰素81、乙基香兰素137。

将样品溶液中香兰素和乙基香兰素的含量，按公式(1)进行计算，获得卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素的含量，所述公式(1)为：

实施例1

1、样品溶液的制备

在不拆小盒包装薄膜的状态下，将卷烟样品在温度22℃、相对湿度60％下平衡60min。再按照国家标准GB/T19609-2004《卷烟用常规分析用吸烟机测定总粒相物和焦油》规定的方法，采用20孔道转盘式吸烟机在温度22℃、相对湿度60％下抽吸卷烟烟气，每口抽吸2秒，抽吸容量为35mL，抽吸频率为2次/60秒。然后，采用剑桥滤片捕集卷烟烟气，剑桥滤片的规格为Φ92mm，每一片剑桥滤片的捕集量为20支卷烟烟气。捕集完后，将剑桥滤片置于250mL锥形瓶中，加入50mL乙醇及0.25mL的200μg/mL内标工作液，滤片加入的乙醇的用量为50mL/每片，滤片加入的内标工作液的用量为0.25mL/每片，以200rpm速率振荡萃取40min后，得到萃取液。取7.5mL萃取液，过硅藻土固相萃取柱，静置15min后，用30mL二氯甲烷进行洗脱，洗脱液与萃取液加入的体积之比为30:7.5。再用定量浓缩仪浓缩至1.0mL，经0.45μm有机滤膜过滤后，得到样品溶液。

2、标准工作液的制备

分别准确称取香兰素和乙基香兰素的标准品各10mg(精确到0.1mg)，用二氯甲烷溶解并定容于50mL容量瓶中，配成混合储备溶液，混合储备溶液中香兰素和乙基香兰素的浓度均为200.0μg/mL。混合储备溶液置于4℃的冰箱中保存，保存期限为6个月。

准确称取香兰素-d3标准品10mg(精确到0.1mg)，用二氯甲烷溶解并定容于50mL容量瓶，配成内标工作液，内标工作液中香兰素-d3浓度为200.0μg/mL。

分别移取0.050，0.125，0.250，0.500，1.250，2.500，5.000mL的混合储备溶液至7个50mL容量瓶中，再加入0.250mL内标工作液，用二氯甲烷定容，，配成浓度分别为0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0μg/mL的香兰素和乙基香兰素的标准工作液。

3、检测

采用气相色谱质谱法分别测定标准工作液和样品溶液，比较保留时间进行定性，采用内标标准曲线法进行定量，确定样品溶液中香兰素和乙基香兰素的浓度。

其中，气相色谱质谱法测定标准工作液和样品溶液的色谱图见图1。样品溶液和标准工作液中各化合物的质谱参数及保留时间见下表1。

表1

化合物	CAS号	保留时间/min	定量离子	定性离子
					香兰素-d3(内标)		18.56	155	126
香兰素	121-33-5	18.58	152	81
					乙基香兰素	121-32-4	18.21	166	137

实施例2

分别将实施例1的步骤2中配制的一系列不同浓度的标准工作液，以香兰素或乙基香兰素与内标的色谱峰面积比为纵坐标(Y轴)，其相应香兰素或乙基香兰素与内标的浓度比为横坐标(X轴)，进行GC-MS分析，得到香兰素和乙基香兰素的回归方程及其相关系数，如表2所示。由表2可知，香兰素和乙基香兰素的标准曲线的线性关系良好，相关系数r＞0.9995。将最低浓度的基质配标工作液进行做10次GC/MS平行检测分析，以3倍标准偏差对应的浓度为检出限，获得香兰素的检出限为9.1ng/支，乙基香兰素的检出限为6.5ng/支，具有较高的灵敏度。

表2

注：Y：峰面积比；X：浓度比

实施例3

取已知香兰素和乙基香兰素含量的品牌卷烟为对象，按实施例1的步骤1制备样品溶液，按实施例1的步骤3进行重复检测6次，其结果见表3。由表3可知，相对标准偏差(RSD％)＜3％，该方法的重复性较好。

表3香兰素和乙基香兰素测定的重复性结果(n＝6)

目标物	1	2	3	4	5	6	RSD(％)
								香兰素(μg/mL)	0.45	0.46	0.47	0.46	0.47	0.45	2.14
乙基香兰素(μg/mL)	2.15	2.16	2.19	2.20	2.13	2.20	1.35

在含有样品的滤片中分别加入低中高三个水平的标准溶液，按实施例1的步骤3进行检测，其结果见表4。由表4可知，，低、中、高三个水平的加标回收率均在90.1％-102.8％之间，说明该方法的回收率较高。

表4香兰素和乙基香兰素的回收率

加标浓度	香兰素回收率％	乙基香兰素回收率％
			低浓度(1μg/mL)	96.3	106.0
中浓度(2μg/mL)	107.2	107.7
			高浓度(4μg/mL)	103.3	105.6

实施例5

采用本方法测定了8种不同品牌卷烟样品中的香兰素和乙基香兰素的含量，结果见下表5。由表5可知，该方法能够准确定量测定卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素的含量。

表5

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。

Claims

1.一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法，包括：将卷烟样品平衡、抽吸、捕集、萃取、过柱后制备获得的样品溶液，采用气相色谱质谱法进行测定，确定样品溶液中香兰素和乙基香兰素的含量；

所述样品溶液的制备包括以下步骤：

1）将卷烟样品平衡、抽吸后，用滤片捕集卷烟烟气，再在滤片中加入乙醇和内标工作液进行振荡萃取后，获得萃取液；

2）将萃取液过萃取柱后静置、洗脱、浓缩、过滤，即得所需样品溶液；

所述采用气相色谱质谱法进行测定，包括以下步骤：

A）配制标准样品：取香兰素和乙基香兰素的标准品，加入内标工作液，再加入二氯甲烷溶解定容，配成标准工作液；

B）样品检测：采用气相色谱质谱法分别测定标准工作液和样品溶液，比较保留时间进行定性，采用内标标准曲线法进行定量，确定样品溶液中香兰素和乙基香兰素的含量；

步骤B）中，所述气相色谱质谱法中，所述气相色谱的测定条件为：

色谱柱：DB-HeavyWAX毛细管色谱柱，30m×0.25mm×0.25μm；进样口温度：280℃；进样量：1.0μL；载气：高纯氦气，载气纯度≥99.999%；载气流速：1.0ml/min；分流比：20：1；升温程序：初始温度80℃保持2min，以10℃/min的速率升至280℃保持2min；

所述萃取柱为硅藻土固相萃取柱；所述洗脱采用的洗脱液为二氯甲烷。

2.根据权利要求1所述的一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法，其特征在于，所述步骤1）中，包括以下条件中的任一项或多项：

A1）所述卷烟样品的平衡条件为：温度：21-23℃；相对湿度：55-65%；平衡时间：55-65min；

A2）所述卷烟样品抽吸的具体条件为：环境温度为21-23℃；相对湿度为55-65%；抽吸容量为33-37mL；抽吸频率为1-3次/60秒；抽吸持续时间为1.5-2.5秒/每口；

A3）所述滤片的捕集量为15-25支卷烟烟气/每片；

A4）所述内标工作液为香兰素-d3的二氯甲烷溶液；

A5）所述滤片加入的乙醇的用量为45-55mL/每片；

A6）所述滤片加入的内标工作液的用量为0.20-0.30mL/每片；

A7）所述振荡萃取的条件为：振荡时间：35-45min；振荡频率：190-210rpm。

3.根据权利要求1所述的一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法，其特征在于，所述步骤2）中，包括以下条件中的任一项或多项：

B1）所述静置的时间为10-20min；

B2）所述洗脱液与萃取液加入的体积之比为30:7-8；

B3）所述浓缩后浓缩液的体积为0.5-2.0mL；

B4）所述过滤为滤膜过滤。

4.根据权利要求1所述的一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法，其特征在于，所述步骤A）中，包括以下条件中的任一项或多项：

C1）所述内标工作液为香兰素-d3的二氯甲烷溶液；

C2）所述内标工作液中的香兰素-d3，在标准工作液中的浓度为0.9-1.1μg/mL；

C3）所述标准工作液中香兰素和乙基香兰素的浓度范围均为0.2-20.0μg/mL。

5.根据权利要求1所述的一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法，其特征在于，步骤B）中，所述气相色谱质谱法中，所述质谱的测定条件为：

电离方式：电子轰击EI离子源；电离能量：70eV；离子源温度：230℃；四级杆温度：150℃；传输线温度：280℃；溶剂延迟：3min；扫描方式：选择离子监测SIM。

6.根据权利要求5所述的一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法，其特征在于，所述质谱测定中选择的定量离子分别为：香兰素-d3 155、香兰素152、乙基香兰素166；所述质谱测定中选择的定性离子分别为：香兰素-d3 126、香兰素81、乙基香兰素137。

7.根据权利要求1所述的一种卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素含量的测定方法，其特征在于，步骤B）中，所述样品溶液中香兰素和乙基香兰素的含量，按公式（1）进行计算，获得卷烟主流烟气中香兰素和乙基香兰素的含量，所述公式（1）为：

，其中，X为主流烟气中香兰素或乙基香兰素的含量，μg/支；c为样品溶液中香兰素或乙基香兰素的含量，μg/mL；V为样品溶液的体积，mL；N为抽吸并经滤片捕集的卷烟数量，支。