CN110024807A - 一种生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物、其制备方法及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物、其制备方法及用途，组合物含氟啶虫胺腈为30~200µg/ml，短帚霉DLHA为1×103~1×106个孢子/ml；其制备方法是将95%氟啶虫胺腈原药用丙酮配成1×104µg/ml的母液，4℃低温保存；短帚霉DLHA菌剂成品活菌浓度为1×103‑1×106个孢子/ml；将氟啶虫胺腈与短帚霉DLHA湿菌体混合，配制成含氟啶虫胺腈为30‑200µg/ml、短帚霉DLHA为1×103‑1×106个孢子/ml的组合物。本发明对蔬菜蚜虫、小菜蛾具有较好的防治效果，环境友好。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体来说涉及一种生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物，同时还涉及该生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物的制备方法，及该生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物在防治蔬菜蚜虫、小菜蛾方面的用途。
背景技术
蔬菜蚜虫(Brevicoryne brassicae(Linnaeus))和小菜蛾(Plutella xylostella(L.))是十字花科蔬菜上的主要害虫，它不仅直接危害蔬菜，还传播多种病毒病，常使蔬菜遭受严重损失。各地蚜虫和小菜蛾危害高峰期因季节或气候原因各不相同，防治时期及防治药剂也各有差异。近年来，蔬菜蚜虫和小菜蛾一直是严重威胁蔬菜生产的主要害虫，对这2种害虫的防治迫在眉睫。长期以来，生产上主要靠化学防治药剂吡虫啉(Imidacloprid)、噻虫嗪(Thiamethoxam)等来防治蔬菜蚜虫；使用高效氯氰菊酯(Beta cypermethrin)、联苯菊酯(Bifenthrin)等来防治小菜蛾。由于蚜虫和小菜蛾具有繁殖速率高、遗传变异大和适合度高的特性，多年连续大量使用化学药剂使得这2种害虫对主要防治药剂产生严重的抗药性。因此，亟待寻找新的虫害防治解决方案。
作用于烟碱类乙酰胆碱受体的化学杀虫剂氟啶虫胺腈是一种高效、快速并且持效期长的内吸性杀菌剂，纯品为灰白色粉末，熔点112.9℃，闪点为173.8℃，密度为1.5191g/ml。短帚霉DLHA是一种条件致病菌，目前还未用于害虫的防治。同时，微生物菌剂次生代谢产物对害虫具有致病作用、对植物具有促生作用，且绿色、环保、安全，在害虫绿色防控中具有重要的应用价值。
发明内容
本发明的目的在于克服上述缺点而提供的一种对蔬菜蚜虫和小菜蛾具有较好的防治效果，环境友好的生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物。
本发明的另一目的在于提供该生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物的制备方法。
本发明的再一目的在于提供该生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物在防治蔬菜蚜虫和小菜蛾方面的用途。
本发明的一种生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物，其中：含氟啶虫胺腈为30～200μg/ml，短帚霉DLHA为1×103～1×106个孢子/ml。
其中：短帚霉DLHA (Scopulariopsis brevicaulis DLHA)，其形态特征：该菌形成的菌落在PDA平板上，28℃，培养7天后产生白色菌落，生长较慢，菌丝分枝、有隔、透明、细长，分生孢子球形或柠檬形、壁厚、表面光滑，有帚状枝。
该菌种已于2018年7月5日保藏在中国典型培养物保藏中心(地址：湖北省武汉市武昌珞珈山，武汉大学)，保藏号：CCTCC M 2018453，名称为：短帚霉DLHA (Scopulariopsisbrevicaulis DLHA)。
本发明的一种生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将95％氟啶虫胺腈原药用丙酮配成1×104μg/ml的母液，4℃低温保存，待用；
(2)在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)培养基上28℃培养短帚霉DLHA7d后无菌水洗涤培养基表面的孢子收集短帚霉DLHA湿菌体；然后8000rpm离心10分钟，取DLHA湿菌体与菌体保藏液，按质量体积比为1:50配成菌剂，菌剂成品活菌浓度为1×103-1×106个孢子/ml；
(3)将氟啶虫胺腈与短帚霉DLHA湿菌体混合，配制成含氟啶虫胺腈为30-200μg/ml、短帚霉DLHA为1×103-1×106个孢子/ml的组合物。
上述的生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物的制备方法，其中马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA)的配制方法为：去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉16g，加去离子水至1L，pH 6.8～7.2，经120℃灭菌20分钟后备用。
上述的生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物的制备方法，其中菌体保藏液为0.01mol/L磷酸盐缓冲液、0.001mol/L的Tween 40非离子型表面活性剂。
本发明的一种生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物在防治蔬菜蚜虫和小菜蛾方面的用途。
本发明与现有技术相比，具有明显的有益效果，从以上技术方案可知：本发明将氟啶虫胺腈与高效生防菌进行组合，短帚霉用湿菌与菌种保藏液配制而成，氟啶虫胺腈先用丙酮配成1×104μg/ml的母液，使用时用含0.01％吐温40的无菌水稀释。该组合物可以直接喷雾蔬菜叶片。经活体试验表明，短帚霉DLHA与氟啶虫胺腈组合物对蔬菜蚜虫和小菜蛾具有较好的杀虫作用，且具有较长时间的预防作用。虫害防治效果比氟啶虫胺腈单独作用、及短帚霉单独作用时的防治效果好。由于组合物对害虫的作用位点多，对环境友好，可有效解决蔬菜蚜虫和小菜蛾对传统防治药剂产生的抗药性问题，有利于蔬菜的安全可持续发展。因此，其用于蔬菜蚜虫和小菜蛾的防治具有广阔的发展空间，同时也是农业绿色安全可持续发展的需要。
具体实施方式
实施例1
一种生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将95％氟啶虫胺腈原药用丙酮配成1×104μg/ml的母液，4℃低温保存，待用；
(2)在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉16g，加去离子水至1L，pH 6.8，经120℃灭菌20分钟后备用)培养基上培养短帚霉DLHA，7d后无菌水洗涤培养基表面的孢子收集短帚霉DLHA湿菌体；然后8000rpm离心10分钟，取DLHA湿菌体与菌体保藏液(菌体保藏液为0.01mol/L磷酸盐缓冲液、0.001mol/L的Tween 40非离子型表面活性剂)，按质量体积比为1:50配成菌剂，菌剂成品活菌浓度为1×103-1×106个孢子/ml；
(3)将氟啶虫胺腈与短帚霉DLHA湿菌体混合，配制成含氟啶虫胺腈为200μg/ml、含短帚霉DLHA为1×103个孢子/ml的生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物。
实施例2
一种生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将95％氟啶虫胺腈原药用丙酮配成1×104μg/ml的母液，4℃低温保存，待用；
(2)在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉16g，加去离子水至1L，pH7，经120℃灭菌20分钟后备用)培养基上培养短帚霉DLHA，7d后无菌水洗涤培养基表面的孢子收集短帚霉DLHA湿菌体；然后8000rpm离心10分钟，取DLHA湿菌体与菌体保藏液(菌体保藏液为0.01mol/L磷酸盐缓冲液、0.001mol/L的Tween 40非离子型表面活性剂)，按质量体积比为1:50配成菌剂，菌剂成品活菌浓度为1×103-1×106个孢子/ml；
(3)将氟啶虫胺腈与短帚霉DLHA湿菌体混合，配制成含氟啶虫胺腈为30μg/ml、短帚霉DLHA为1×106个孢子/ml的组合物。
实施例3
一种生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物的制备方法，包括以下步骤：
(1)将95％氟啶虫胺腈原药用丙酮配成1×104μg/ml的母液，4℃低温保存，待用。
(2)在马铃薯葡萄糖琼脂培养基(去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉16g，加去离子水至1L，pH 7.2，经120℃灭菌20分钟后备用)培养基上培养短帚霉DLHA，7d后无菌水洗涤培养基表面的孢子收集短帚霉DLHA湿菌体；然后8000rpm离心10分钟，取DLHA湿菌体与菌体保藏液(菌体保藏液为0.01mol/L磷酸盐缓冲液、0.001mol/L的Tween 40非离子型表面活性剂)，按质量体积比为1:50配成菌剂，菌剂成品活菌浓度为1×103-1×106个孢子/ml；
(3)将氟啶虫胺腈与短帚霉DLHA湿菌体混合，配制成含氟啶虫胺腈为60μg/ml、含短帚霉DLHA为1×104个孢子/ml的组合物。
试验例：实施例1-3制得的短帚霉DLHA与氟啶虫胺腈组合物对蔬菜蚜虫和小菜蛾的杀虫试验
蔬菜蚜虫和小菜蛾的防治试验在蔬菜大田中进行，待蔬菜上出现大量蚜虫和小菜蛾时开始实验。
生防菌处理组Ⅰ，将制得的1×106个孢子/ml短帚霉菌剂均匀喷雾至蔬菜叶片表面，直至流失；
氟啶虫胺腈处理组Ⅱ，200μg/ml的氟啶虫胺腈喷雾，直至流失；
实施例1组合物处理组(I)，200μg/ml的氟啶虫胺腈与1×103个孢子/ml短帚霉组合物喷雾，直至流失；
实施例2组合物处理组(II)，30μg/ml的氟啶虫胺腈与1×106个孢子/ml短帚霉组合物喷雾，直至流失；
实施例3组合物处理组(Ⅲ)，60μg/ml的氟啶虫胺腈与1×104个孢子/ml短帚霉组合物喷雾，直至流失；
氯氰菊酯对照处理组Ⅳ，2.5％氯氰菊酯悬浮剂1000倍稀释喷雾，直至流失；
空白对照组Ⅴ，喷雾无菌水。每处理处理甘蓝60株。20天后观察记录害虫的危害情况，并调查虫情指数，计算防效。
按照以下的方法统计，根据死亡率进行防效统计：
式中：
P2——防效，单位为百分率(％)；
P1——处理死亡率，单位为百分率(％)；
P0——空白对照死亡率，单位为百分率(％)。
田间试验表明，短帚霉DLHA与氟啶虫胺腈菌剂组合物组能够很好的防治蔬菜蚜虫和小菜蛾，其对蔬菜蚜虫的防治效果达到91.73％以上，其对小菜蛾的防效达89.99％以上。
表1各组施用20天后对甘蓝蚜虫的防效
表2各组施用20天后对小菜蛾的防效
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，任何未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (5)
1.一种生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物，其中：含氟啶虫胺腈为30~200 µg/ml，短帚霉DLHA为1×103~ 1×106个孢子/ml，其中：短帚霉DLHA已于2018年7月5日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏号：CCTCC M 2018453，名称为：短帚霉DLHA (Scopulariopsisbrevicaulis DLHA)。
2.一种生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物的制备方法，包括以下步骤：
（1）将95%氟啶虫胺腈原药用丙酮配成1×104µg/ml的母液，4℃低温保存，待用；
（2）在马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）培养基上28℃培养短帚霉DLHA7d后无菌水洗涤培养基表面的孢子收集短帚霉DLHA湿菌体；然后8000rpm离心10分钟，取DLHA湿菌体与菌体保藏液，按质量体积比为1:50配成菌剂，菌剂成品活菌浓度为1×103-1×106个孢子/ml；
（3）将氟啶虫胺腈与短帚霉DLHA湿菌体混合，配制成含氟啶虫胺腈为30-200 µg/ml、短帚霉DLHA为1×103-1×106个孢子/ml的组合物。
3.如权利要求2所述的生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物的制备方法，其中马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA）的配制方法为：去皮马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂粉16g ，加去离子水至1L，pH 6.8～7.2，经120℃灭菌20分钟后备用。
4.如权利要求2或3所述的生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物的制备方法，其中菌体保藏液为0.01 mol/L磷酸盐缓冲液、0.001mol/L的Tween 40非离子型表面活性剂。
5.一种生防真菌和氟啶虫胺腈的组合物在防治蔬菜蚜虫、小菜蛾方面的用途。
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