CN110004160B

CN110004160B - 孝顺竹转录因子BmMYB26及其编码基因与应用

Info

Publication number: CN110004160B
Application number: CN201910437958.XA
Authority: CN
Inventors: 魏强; 郭琳; 丁雨龙; 张春霞
Original assignee: Nanjing Forestry University
Current assignee: Nanjing Forestry University
Priority date: 2019-05-23
Filing date: 2019-05-23
Publication date: 2022-04-19
Anticipated expiration: 2039-05-23
Also published as: CN110004160A

Abstract

本发明公开一种孝顺竹BmMYB26转录因子及其编码基因与应用。本发明所提供的转录因子BmMYB26，属MYB转录因子家族，来源于孝顺竹(Bambusa multiplex)，将其命名为BmMYB26，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所编码蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO.2所示。通过基因克隆表达与对比分析，揭示了孝顺竹BmMYB26转录因子编码基因系统进化地位和在促进植物生长与调控细胞壁加厚上的重要功能，并提供了一种应用该基因的方法，该基因将在研究植物细胞壁生长分子机制、提高植物对逆境胁迫的抗性和改良竹材性状等应用中发挥重要作用。

Description

孝顺竹转录因子BmMYB26及其编码基因与应用

技术领域

本发明涉及植物基因工程技术领域，具体是一种MYB转录因子及其编码基因与应用，尤其是涉及孝顺竹BmMYB26转录因子及其编码基因与应用。

背景技术

植物次生分生组织的活动，尤其是维管形成层的活动，使植物根、茎加粗，细胞壁加厚。对于无维管形成层的单子叶植物而言，次生生长主要是细胞壁加厚的过程。植物细胞次生壁是植物机械支撑的主要结构，如木质部的导管细胞次生壁的形成、纤维细胞的次生加厚，都是植物支撑作用的主要来源。因此，了解和研究植物细胞壁形成的分子机制，克隆出能调控细胞壁加厚的基因，在木材、竹材改良或者农作物抗倒伏等重要性状中具有十分关键的现实意义。

众多的转录因子家族如NAC、MYB、WRKY、AP2/EREBP、MADS等均参与了植物次生生长的网络调控。其中，MYB转录因子作为植物中最大的一类转录因子，参与了胁迫响应(Baldoni，E.等，International Journal of Molecular Sciences，16，15811-15851，(2015))、激素合成(Wang，等，BMC Genomics,16：17， (2015))、信号转导等多种活动。目前已在许多物种中鉴定出参与细胞壁次生发育相关的MYB转录因子，包括位于次生壁调控网络最顶层的MYB26，调控网络的主开关MYB46，MYB83，以及MYB43，MYB52，MYB103等众多MYB家族转录因子(Zhang等，Frontiers in Plant Science，9：1535，(2018))，这些转录因子在多级转录网络中参与调控了细胞壁成分纤维素、半纤维素和木质素的合成。有研究(Yang等，Plant Physiology，175：333-350(2017)；Yang等， Plant Cell，19(2)：534-548(2007))表明，在模式植物拟南芥中，MYB26转录因子可通过激活NST(NAC SECONDARY WALL-PROMOTING FACTOR)，正向调控纤维细胞与药室内壁次生壁的沉积。

竹类植物作为一种可快速生长的禾本科竹亚科的植物，在人们的衣食住行中都有着非常重要的利用价值。竹秆是竹子利用最多的部分，可被用于建筑、编织应用与工艺、生物能源等方面。从发育的角度来看，竹秆的生长分为地下笋芽的生长、竹笋的快速生长以及竹秆的材质生长三个阶段，目前对于竹类植物的研究大多集中在前两者(Wei等，NewPhytologist，214(1)：81-96.(2017)； Wei等，Tree Physiology 38(4)：641-654.(2018))，在竹材材性方面的研究几近空白。另一方面，在竹秆中，纤维细胞所占比例为整个秆壁组织的40％(RAI V. 等，Gene，478(1/2)：19-27.(2011))，且细胞壁随着竹龄的增加而逐渐加厚。因此，受MYB转录因子调控的细胞壁的加厚对于竹材的形成有着不可替代的作用，借助同为禾本科植物的水稻，筛选与挖掘关键基因从而应用到竹材改良、作物抗逆等方面具有非常重要的意义。

发明内容

发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的在于提供一种孝顺竹BmMYB26转录因子及其编码基因，可用于研究植物细胞壁生长分子机制及进一步的应用在植物改良育种中；本发明的另一目的是提供一种孝顺竹 BmMYB26转录因子基因在植物基因工程中应用的方法，可增强植物细胞壁的加厚，可在提高植物对逆境胁迫抗性、改良竹材材性等植物生长性状改良的植物基因工程中发挥重要作用。

技术方案：为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案如下：

一种孝顺竹转录因子BmMYB26，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

所述孝顺竹转录因子BmMYB26的表达蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2 所示。

所述孝顺竹转录因子BmMYB26在促进植物生长或植物改良育种中的应用。

所述孝顺竹转录因子BmMYB26的载体。

一种利用孝顺竹转录因子BmMYB26培育植物新品种的方法，包括以下步骤：构建所述孝顺竹转录因子BmMYB26的载体；将所构建的转录因子 BmMYB26的载体转化到植物或植物细胞中；培育筛选得到的植物新品种。

所述的促进植物生长或植物改良育种包括：使植物细胞壁增厚，有提高植物对逆境胁迫抗性或改良竹材性状的潜能。

有益效果：相比于现有技术，本发明的优点为：

本发明以孝顺竹竹笋为材料，首次获得孝顺竹BmMYB26转录因子编码基因，并提供一种应用该基因的植物转基因方法；试验表明孝顺竹BmMYB26转录因子基因在植物基因工程中可应用于增强植物细胞壁的加厚，将会在提高植物对逆境胁迫抗性、改良竹材材性等植物生长性状改良的植物基因工程中发挥重要作用。

附图说明

图1为BmMYB26转录因子扩增产物凝胶电泳图谱图；

图2为BmMYB26转录因子系统发生树图；

图3为BmMYB26转录因子蛋白疏水性分析结果图；

图4为BmMYB26转基因水稻与组培野生型水稻“日本晴”植株表型图；图中从左到右的植株分别为野生型水稻、过表达植株OX10、过表达植株OX12、过表达植株OX13；OX为overexpression缩写；

图5为BmMYB26转基因水稻与组培野生型水稻秆鞘在电镜下的细胞壁厚度观察结果图；左列组图由上到下分别为野生型水稻植株的外部秆鞘细胞、内部秆鞘细胞与纤维细胞，右列组图由上到下分别为过表达植株OX13与野生型植株相对应部位的细胞；框内为所述各部位细胞的具体位置标注。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。以下实施例中未作具体说明的分子生物学实验方法，均参照《分子克隆实验指南》(第三版)J.萨姆布鲁克一书中所列的具体方法进行，或者按照试剂盒和产品说明书进行。

实施例1：孝顺竹BmMYB26转录因子编码基因的获得

1.RNA提取

提取材料为孝顺竹竹笋，RNA提取使用原平皓RNAPure超纯快速提取试剂盒，按照操作说明书提取，贮存于-80℃备用。

2.cDNA第一链合成和反转录PCR

采用全式金(北京)one-step cDNA合成试剂盒，按照操作指南将总RNA 反转录成cDNA。反应体系和反应条件分别为：2μg制备的总RNA，Anchored Oligo(dT)₁₈Primer 1μL，10μL的2×TS Reaction Mix，1μL TransScript RT/RI Enzyme Mix，1μL的gDNA Remover，加RNase-free Water补到20μL，轻轻混匀后离心。PCR仪42℃反转录30min，85℃ 5s；冰上冷却；离心后存放于-20 ℃待用。

3.PCR扩增BmMYB26的CDS区域

根据孝顺竹转录组测序结果，挑选注释为MYB26的基因序列，其序列ID 为BmuUn079438。在其CDS区域以外的上下游设计了两条引物MYB26-S(5′ -TCAGGAGTCCAGGAAGAGAGA-3′)和MYB26-A(5′ -ACCTACCGAAATACCCCAAA-3′)作为PCR反应的引物。

所用PCR酶为TOYOBO高保真酶，反应体系为50μL：ddH₂O，34μL； 10×Buffer，5μL；dNTP，5μL；Mg²⁺，2μL；正向引物，1μL；反向引物，1μL； cDNA，1μL；KOD-Plus酶，1μL。PCR程序为：94℃5min；94℃40s，56℃40s， 72℃ 55s，循环38次；72℃ 10min。将所得PCR产物经1.2％的琼脂糖凝胶电泳分离获得一段约900bp的片断，如图1所示。纯化回收后，送金斯瑞生物科技有限公司(南京)测序。测序结果为序列表SEQ ID NO.1中所示的由起始密码子“ATG”至终止密码子“TAA”为止的CDS区域序列，即自该序列的5′端第58位至969位碱基；表达序列表中SEQ ID NO.2所示，由303个氨基酸残基组成的蛋白质。

实施例2：孝顺竹BmMYB26转录因子功能分析

1.序列比较分析

为了分析孝顺竹BmMYB26同其他物种MYB转录因子的亲缘关系，用 MEGA7建立了BmMYB26同其他物种MYB转录因子的系统进化树。结果(图 2)表明BmMYB26同模式植物拟南芥的AtMYB26亲缘关系最近，同属一簇。

分别用TMpred2.0和Genedoc分别分析了BmMYB26的二级结构和跟其他物种的同源性。分析结果表明BmMYB26有26个跨膜结构域，如图3所示；并且跟拟南芥、玉米、水稻与细胞壁发育相关的MYB有较高的同源性。

2.水稻转基因分析

2.1载体构建

测序正确的PCR产物连接至全式金(北京)的pEASY-Blunt载体上，连接体系为：4.5μl DNA，0.5μl Vector。轻轻混匀后室温放置5min，然后置于冰上。

取感受态细胞Trans1-T1置于冰上融化，加入上述连接后的载体，轻弹混匀，冰浴30min；42℃水浴热激30s，立即置于冰上2min；加入1mL室温的不含抗生素的LB培养基，200rpm 37℃培养1h；8000rpm离心1min获得菌体，吸去大部分上清，留200μL培养基重悬菌体。涂布至含有氨苄卡纳霉素LB平板；置于37℃培养箱过夜培养。挑取10个单克隆至含4mLLB培养基的试管中分别摇菌，37℃200rpm18小时后，抽提质粒，并送质粒至金斯瑞公司测序。测序正确的质粒命名为pEASY-Blunt-BmMYB26。

2.2表达载体构建

该部分由武汉伯远生物公司代为操作。

设计有酶切位点的引物进行PCR反应，引物序列分别为：

BmMYB26(+)：5′-cagtGGTCTCacaacatggggcaccactcctgctg-3′；

BmMYB26(-)：5′-cgatGGTCTCagggaatccaatgaggttgcg-3′；

融合GFP(+)：5′-cagtGGTCTCatccctgtatcgtgaagggcgagga-3′；

融合GFP(-)：5′-cagtGGTCTCatacatcagttgtagagctcgtcca-3′。

反应体系为50μL：Buffer，25μL；dNTPs，10μL；正向引物，1μL；反向引物，1μL；cDNA，1μL；ddH₂O，11μL；Kod酶，1μL。PCR程序为：94℃ 5min； 94℃ 30s，50℃ 45s，72℃ 49s，循环30次；72℃ 10min，16℃ 30min。1％琼脂糖凝胶电泳后，分别将909bp与720bp的电泳条带切下，放在同一个体系中溶胶回收(回收产物标记为：rDNAm融2)，测序无误后进行酶切连接。

酶切连接体系为20μL：Buffer：2μL，BsaI/Eco31I：1μL，T4-ligase：1μL pBWA(V)HU-ccdB：4μL，rDNAm融2∶4μL，H₂O：8μL。连接过程为：37℃ 20min；37℃ 10min，20℃ 10min，5个循环；37℃ 20min，80℃ 5min。

将5-10μL连接产物转化大肠杆菌感受态，涂卡纳霉素抗性平皿，37℃培养12小时，挑取10个菌斑同时进行1.5mL EP管接菌和PCR鉴定。鉴定所用引物为pBWA(V)HU-ccdB鉴定引物：pubiseq+，NOSseq-R，Pbw2+，Pbw2-。

检测引物组1：

pubiseq+：5′-CCTGCCTTCATACGCTATTTATTTGCTTGG[4238]-3′

NOSseq-R：5′-CAAGACCGGCAACAGGATTCAATC[6043]-3′

检测电泳条带：1825bp；

检测引物组2：

Pbw2+：5′-GCAACGCTCTGTCATCGTTACAAT[11654]-3′

Pbw2-：5′-GCGATTAAGTTGGGTAACGCCAGGG[6528]-3′

检测电泳条带：6657bp；

PCR反应体系为25μL，组分为：H₂O：16.5μL，buffer：2.5μL，Mg²⁺：2μL， dNTP：1μL，pubiseq+/Pbw2+：1μL，NOSseq-R/Pbw2-：1μL，taq酶：1U，Template： 1μL。反应程序为：94℃50min；94℃ 30s，50℃ 45s，72℃ 49s，30个循环； 72℃ 10min；16℃ 30min。

取1～3个阳性条带对应的菌液100μL送样测序，其余400μL菌液接种到含有卡纳霉素抗性的5-10mL的LB中，试管摇菌，送菌液测序，与BmMYB26 序列一致的菌液提取质粒待转化农杆菌。将菌株，质粒保存到数据库(该处数据库为武汉伯远生物科技有限公司所构建的项目载体的库，一般会为客户把菌种保留6～12个月)。

2.3农杆菌转化

1)200ng质粒，加40μL农杆菌感受态细胞混匀后按以下条件进行电转化 (U，1.8KV；R，200Ω；C，25μF)。

2)电击后添加800ul SOC液体培养基，28℃培养1h；SOC液体培养基成分为：2％(w/v)胰蛋白胨，0.5％(w/v)酵母提取物，10mM NaCl，2.5mM KCl， 10mM MgCl₂，20mM葡萄糖。

3)4000rpm离心10分钟收集菌体，200μL SOC重悬，涂在含100μg/mL 壮观霉素，利福平40μg/mL，链霉素100μg/mL LB固体培养基上，28℃倒置培养48h-72h。

2.4农杆菌介导的水稻愈伤组织的转化

2.4.1水稻愈伤组织的诱导

取粳稻品种“日本晴”的成熟种子，机械脱壳，挑选饱满无菌斑优质种子，进行消毒；将消毒过后的种子接种到愈伤组织诱导培养基上进行诱导，以水稻成熟胚为材料诱导愈伤组织。

愈伤诱导培养基(NB)：N6大量元素+B5微量元素+B5有机物+Fe盐+ 30g/L蔗糖+500mg/L谷氨酰胺+500mg/L脯氨酸+300mg/L水解酪蛋白 +2mg/L 2，4-D+3.0g/L植物凝胶，调节pH至5.8。

N6大量元素包括：1650mg/L NH₄NO₃，1900mg/L KNO₃，440mg/L CaCl₂·2H₂O，370mg/L MgSO₄·7H₂O，170mg/L KH₂PO₄。

B5微量元素包括：0.83mg/L KI，6.2mg/L H₂BO₃，22.3mg/L MnSO₄·4H₂O， 8.6mg/LZnSO₄·7H₂O，0.25mg/L Na₂MoO₄·2H₂O，0.025mg/L CuSO₄·5H₂O， 0.025mg/L CoCl₂·6H₂O。

B5有机物包括：100mg/L 0肌醇，0.5mg/L烟酸，0.5mg/L盐酸吡哆醇， 0.1mg/L盐酸硫胺素，2mg/L甘氨酸。

2.4.2农杆菌准备

挑取农杆菌单菌落，置于含适量抗生素的YEB培养基中，28℃，220rpm 摇菌培养；4000rmp离心10min，倒掉上清，用悬浮介质(10mm MgCl₂和100 mmAS)重悬菌体，调OD₆₀₀值至0.6左右，光下活化2h。

YEB培养基为：牛肉浸膏5g/L，酵母提取物1g/L，蛋白胨：5g/L，蔗糖： 5g/L，MgSO₄·7H₂O：0.5g/L，调pH为7.0，Kana：50mg/L，Rif：50mg/L。

2.4.3水稻愈伤组织的筛选及分化

挑选浅黄色、颗粒状、质地比较坚硬密实的愈伤组织，置于携带目的基因的农杆菌悬浮液中侵染，之后置于共培养基上培养。共培养基为：N6大量元素 +B5微量元素+B5有机物+Fe盐+30g/L麦芽糖+500mg/L水解酪蛋白+ 2g/L肌醇+100μmol/LAS+3g/L植物凝胶+2mg/L2，4-D，pH调为5.5。

将长势良好的愈伤组织取出晾干，转入筛选培养基上进行第一次筛选，将具有抗性愈伤的初始愈伤组织转入新的培养基进行第二次筛选。最后挑选抗性愈伤，移入分化培养基进行诱导分化成苗，待苗生长至1cm左右再移至生根培养基。同时进行不侵染农杆菌的愈伤组织的诱导及分化作为野生型对照苗。

筛选培养基为：NB+50mg/L潮霉素+200mg/L头孢唑林钠+200mg/L 羟苄青霉素，pH调为5.8。

愈伤预分化培养基为：NB+20g/L山梨醇+5mg/LABA+3mg/L CuSO₄+ 3mg/L BA+1mg/LNAA+50mg/L潮霉素+100mg/L头孢唑林钠+100mg/L 羟苄青霉素，pH调为5.8。

愈伤分化培养基为：N6大量元素+B5微量元素+B5有机物+20g/L蔗糖+20g/山梨醇+500mg/L水解酪蛋白+2mg/L BA+1mg/L NAA+50mg/L 潮霉素+3.0g/L植物凝胶+100mg/L羟苄青霉素+100mg/L头孢唑林钠，pH 调为5.8。

生根培养基为：1/2MS+20g/L蔗糖+3.0g/L植物凝胶+100mg/L羟苄青霉素+100mg/L头孢唑林钠，pH调为5.8。

2.4.4水稻阳性克隆苗的鉴定

水稻试管苗长至10cm左右大小，通过CTAB法提取DNA，对试管苗进行 PCR鉴定。具体步骤为：

研磨：取转基因苗，加入CTAB研磨好后，再加适量的CTAB；水溶：30min，每10min摇一次；将样品冷却至正常温度后，加氯仿异戊醇，体积与CTAB相同，振荡20min；离心10min，将上清转移至EP管中；加0.7倍的异丙醇(提前放入-20℃冰箱中预冷)，轻摇，可观察丝状物，放入冰箱中静置30min；离心5min，弃上清；用70％的酒精清洗，移液枪吹打使其悬浮，每管均需加入 ddH₂O和RNA酶；1％琼脂糖凝胶检测。

将检测为阳性克隆的水稻苗置于水稻培养箱中进行培养，打开瓶盖进行练苗，培养条件为光照700UM，温度28℃，湿度RH70％，光照14h，黑暗10h。三天后取出小苗，冲洗掉根部培养基，使用盆栽的方法进行培养，所用土壤为大田土。

2.5转基因植株表型及细胞壁厚度观察

随机选择转基因过表达的植株与野生型植株，取其中一株分蘖，用双面刀片在基部5cm处截取约0.5cm长度的秆径，70％FAA抽气固定48h，酒精梯度脱水，临界点干燥，常规扫描电镜制样，JSM-6300扫描电镜观察拍照。

结果如图4和图5所示。图4所示为野生型水稻和转基因植株的表型对比，由图可知，与野生型植株相比，转基因株系的植株长势更好，苗高更高，分蘖更强壮。图5所示为野生型与转基因植株细胞层面上的观察比较，由图可知，转基因植株的细胞壁与野生型相比更厚。具体体现为：与野生型相比，转基因植株外部与内部的秆鞘细胞、纤维细胞的细胞壁均显著增厚。上述结果表明 BmMYB26在促进植物生长及调控植物细胞壁发育上发挥着重要作用。细胞壁的增厚在形态上体现为植株更强壮，从而使植物具有抗逆性强(包括抗倒伏、抗旱等)的优点；另一方面，BmMYB26对于竹类植物的材性构建的分子调控机制与竹材性状改良同样具有重要研究与应用价值。

序列表

<110> 南京林业大学

<120> 孝顺竹转录因子BmMYB26及其编码基因与应用

<130> 100

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1089

<212> DNA

<213> Bambusa multiplex

<400> 1

ctgccagtgt gaagtgagag ccttcaggag tccaggaaga gagatagaga gggagagatg 60

gggcaccact cctgctgcaa caagcagaag gtcaggaggg gcctgtggtc accagaggaa 120

gacgagaagc tcgtcaagta catctccaca catggccatg gttgctggag ctcagtccca 180

agacaagctg ggctgcagag gtgtggcaag agctgcaggc tgaggtggat caactacctg 240

aggccggacc tgaagagggg aagcttctcg ctgcaggagg aggccctcat cattgagctc 300

cacagggtgc tagggaacag gtgggcccag atagccaagc atctgcctgg tagaacggac 360

aatgaggtga agaacttttg gaactccacc atcaagaaga agctcatatc tcaggctgtg 420

ggcagcctcc accccggtaa catcccttcc tctgcagact tgtactacaa cattctggat 480

gcggcaggac aaggcatcgc agctgcgggg tgcacatcac tgaacggggt ggacaatgca 540

gctcaagcag tcacgcagtc tcttccatct tccgtgcaca actccgtggc ggcatgggcc 600

aatttcagct ctcagccact gttccccccc ggccacgccg tccaaggcgg cgatctccag 660

tacgccgtcg acggggagtt catcaagctg tgtcgcgccg cggatgctta cccggagcac 720

ggcgccgatg acatcgcaag ccagtgcaaa gcaagtgatc tcgtggctca agaaggcgcg 780

gctcggagct gccgcccggt gtttgtcgaa ccgaagggcg ccggcgcttt cgtgggcgag 840

ccggtcatgg gtcccgtggc ggatttcatg gatgccatcc tggggtcgtc gtcgacgtct 900

gcggccagtg cttcctctgt cgacagcttc tcggcgaaca ccggcacgca acctcattgg 960

attccctgaa ataatgtttg gggtatttcg gtaggtgtgg gttgatctag ttcgcatcct 1020

taatttcagg gatatatggc ataatcggtg tatataatct ttttatatat gaaaaagggt 1080

ataaagtgc 1089

<210> 2

<211> 303

<212> PRT

<213> Bambusa multiplex

<400> 2

Met Gly His His Ser Cys Cys Asn Lys Gln Lys Val Arg Arg Gly Leu

1 5 10 15

Trp Ser Pro Glu Glu Asp Glu Lys Leu Val Lys Tyr Ile Ser Thr His

20 25 30

Gly His Gly Cys Trp Ser Ser Val Pro Arg Gln Ala Gly Leu Gln Arg

35 40 45

Cys Gly Lys Ser Cys Arg Leu Arg Trp Ile Asn Tyr Leu Arg Pro Asp

50 55 60

Leu Lys Arg Gly Ser Phe Ser Leu Gln Glu Glu Ala Leu Ile Ile Glu

65 70 75 80

Leu His Arg Val Leu Gly Asn Arg Trp Ala Gln Ile Ala Lys His Leu

85 90 95

Pro Gly Arg Thr Asp Asn Glu Val Lys Asn Phe Trp Asn Ser Thr Ile

100 105 110

Lys Lys Lys Leu Ile Ser Gln Ala Val Gly Ser Leu His Pro Gly Asn

115 120 125

Ile Pro Ser Ser Ala Asp Leu Tyr Tyr Asn Ile Leu Asp Ala Ala Gly

130 135 140

Gln Gly Ile Ala Ala Ala Gly Cys Thr Ser Leu Asn Gly Val Asp Asn

145 150 155 160

Ala Ala Gln Ala Val Thr Gln Ser Leu Pro Ser Ser Val His Asn Ser

165 170 175

Ser Ala Ala Trp Ala Asn Phe Ser Ser Gln Pro Leu Phe Phe Phe Gly

180 185 190

His Ala Val Gln Gly Gly Asp Leu Gln Tyr Ala Val Asp Gly Glu Phe

195 200 205

Ile Lys Leu Cys Arg Ala Ala Asp Ala Tyr Pro Glu His Gly Ala Asp

210 215 220

Asp Ile Ala Ser Gln Cys Lys Ala Ser Asp Leu Val Ala Gln Glu Gly

225 230 235 240

Ala Ala Arg Ser Cys Arg Pro Val Phe Val Glu Pro Lys Gly Ala Gly

245 250 255

Ala Phe Val Gly Glu Pro Val Met Gly Pro Val Ala Asp Phe Met Asp

260 265 270

Ala Ile Leu Gly Ser Ser Ser Thr Ser Ala Ala Ser Ala Ser Ser Val

275 280 285

Asp Ser Phe Ser Ala Asn Thr Gly Thr Gln Phe His Trp Ile Phe

290 295 300

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> MYB26-S引物序列(Artificial)

<400> 3

tcaggagtcc aggaagagag a 21

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> MYB26-A引物序列(Artificial)

<400> 4

acctaccgaa ataccccaaa 20

<210> 5

<211> 35

<212> DNA

<213> BmMYB26(+)引物序列(Artificial)

<400> 5

cagtggtctc acaacatggg gcaccactcc tgctg 35

<210> 6

<211> 31

<212> DNA

<213> BmMYB26 (-)引物序列(Artificial)

<400> 6

cgatggtctc agggaatcca atgaggttgc g 31

<210> 7

<211> 35

<212> DNA

<213> 融合GFP(+)引物序列(Artificial)

<400> 7

cagtggtctc atccctgtat cgtgaagggc gagga 35

<210> 8

<211> 35

<212> DNA

<213> 融合GFP(-)引物序列(Artificial)

<400> 8

cagtggtctc atacatcagt tgtagagctc gtcca 35

<210> 9

<211> 30

<212> DNA

<213> pubiseq+引物序列(Artificial)

<400> 9

cctgccttca tacgctattt atttgcttgg 30

<210> 10

<211> 24

<212> DNA

<213> NOSseq-R引物序列(Artificial)

<400> 10

caagaccggc aacaggattc aatc 24

<210> 11

<211> 24

<212> DNA

<213> Pbw2+引物序列(Artificial)

<400> 11

gcaacgctct gtcatcgtta caat 24

<210> 12

<211> 25

<212> DNA

<213> Pbw2-引物序列(Artificial)

<400> 12

gcgattaagt tgggtaacgc caggg 25

Claims

1.一种孝顺竹转录因子BmMYB26，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.权利要求1所述孝顺竹转录因子BmMYB26在促进植物生长或植物改良育种中的应用。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的促进植物生长或植物改良育种包括：使植物细胞壁增厚，提高植物对逆境胁迫抗性或改良竹材性状。

4.含有权利要求1所述孝顺竹转录因子BmMYB26的载体。

5.一种利用孝顺竹转录因子BmMYB26培育植物新品种的方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)构建权利要求4所述孝顺竹转录因子BmMYB26的载体；

2)将1）构建的载体转化到植物或植物细胞中；

3)培育筛选得到植物新品种。