CN110004123A

CN110004123A - 一种茶树蔗糖合酶CsSUS2、制备方法及应用

Info

Publication number: CN110004123A
Application number: CN201910313826.6A
Authority: CN
Inventors: 宋传奎; 许淼晶; 张娜; 荆婷婷; 赵明月; 靳洁阳
Original assignee: Anhui Agricultural University AHAU
Current assignee: Anhui Agricultural University AHAU
Priority date: 2019-04-18
Filing date: 2019-04-18
Publication date: 2019-07-12

Abstract

本发明属于分子生物技术领域，特别涉及一种茶树蔗糖合酶CsSUS2、制备方法及应用，包括以茶树cDNA为模板，设计引物，PCR扩增目的基因；构建连接体系反应得表达载体；将构建载体转化至感受态细胞中并扩大培养；茶树蔗糖合酶的分离纯化。本发明从制备的蔗糖合酶CsSUS2纯度高，能促进UDP‑Glucose的原位再生，提高苯乙醇糖苷的合成效率。

Description

一种茶树蔗糖合酶CsSUS2、制备方法及应用

技术领域

本发明属于分子生物技术领域，特别涉及一种茶树蔗糖合酶CsSUS2、制备方法及应用。

背景技术

蔗糖运输是茶树生长发育过程中负责碳资源配置的中心系统。具体流程为茶树在生长发育过程中，通过协调体内不同器官和不同位置细胞的蔗糖合成和分解位点来控制碳的分布。而茶树蔗糖合酶对蔗糖的合成和分解具有可逆的催化作用，其为调控蔗糖的分配提供了直接和可逆的手段。根据代谢环境，茶树蔗糖合酶通过与细胞膜、细胞器和细胞骨架肌动蛋白的相互作用改变其在细胞中的位置，从而直接影响茶树不同位置纤维素、淀粉的生物合成，以及愈伤组织的形成。

苯乙醇糖苷是一类植物源天然产物，是以苯乙醇基及其衍生物(羟基、甲氧基苯乙醇)为苷元，以葡萄糖、鼠李糖等为糖配基合成的糖苷类化合物。苯乙醇糖苷具有免疫调节、抗癌症、抗疲劳、抗衰老，保护神经系统等多种药理活性，大量研究表明:该类化合物具有广泛的药理活性，如:抗菌、抗炎、抗病毒、抗氧化、增强免疫力、神经保护、保肝、强心等广泛应用于保健食品、环境适应药品以及化妆品行业。

目前苯乙醇糖苷的制备方法：(1)传统制备方法是从植物中直接提取，一般采取水或有机溶剂萃取，例如醇提法，以醇类作为提取溶剂将苯乙醇糖苷成分提取出来，醇提工艺适合工业化生产，仍然是研究较多的工艺，但是，传统制备方法是受植物体本身性质影响较大，含有苯乙醇糖苷的植物资源稀有，且含量比较低，而且提取工艺复杂；(2)化学合成制备，化学合成是解决市场需求的有效途径，主要是以酪醇类似物为底物，以重金属盐为主要催化剂进行糖苷化反应，但是，化学合成糖苷技术往往存在反应条件复杂、不易控制、对实验设备要求较高、步骤多、原料价格昂贵等缺点，且大都需要进行选择性保护、活化或使用昂贵的金属催化剂，也非常容易造成环境污染问题；(3)生物酶法制备，苯乙醇糖苷的最后一步反应是由糖基转移酶(GT)所催化的，特异性的催化糖基从活性中间体UDP-Glucose(UDPG，尿苷二磷酸葡萄糖)转移到酪醇分子上，近年来，人们从天然植物种子材料、真菌中提取酶或将全细胞用于催化实验，利用固液体发酵或工业转化等手段合成苯乙醇糖苷。生物催化合成方法由于高效、环境友好等优势，一直是学术研究和工业应用所关注的热点技术，但是，以UDP-Glucose(UDPG，尿苷二磷酸葡萄糖)为反应底物成本高，尿苷二磷酸(UDP)作为糖苷制备的反应的产物之一会很大程度地抑制GT活性，随着UDP在反应混合物中的积累，反应速率将会逐渐降低。所以，本发明探索分离纯化了一种茶树蔗糖合酶，并将其应用到苯乙醇糖苷的制备中。

发明内容

本发明从制备的蔗糖合酶CsSUS2纯度高，能促进UDP-Glucose的原位再生，提高苯乙醇糖苷的合成效率。

本发明提供了一种茶树蔗糖合酶CsSUS2的制备方法，包括以下步骤：

目的基因克隆：以茶树cDNA为模板，设计引物，然后进行PCR反应；

其中，引物序列：

SalI：5’-gatatcggatccgaattcgagctccgtcgacgcatggggagaaggttgatgaaacccca-3’，

Notl：5’-gtggtggtggtggtggtgctcgagtgcggccgcttaggaaacatgcctggccgtaggttctg-3’；

PCR反应体系：500ng/μL的茶树cDNA模板2μL，10μM的上、下游引物各2μL，高保真聚合酶24μL，ddH2O添至50μL；

构建表达载体：构建连接体系，置于37℃水浴25-30min再置冰浴5min；

其中，连接体系为：5×CEⅡBuffer取2μL，pET-32a⁺取3μL，PCR产物2μL，ExnaseⅡ试剂1μL，ddH2O添至10μL；

转化：将构建载体转化至感受态细胞中，扩大培养得含CsSUS2基因全长的工程菌；

茶树蔗糖合酶的分离纯化：离心取沉淀，－80℃下2-4h；加入1×washbuffer，超声破碎后离心得沉淀；沉淀加水混匀后过纯化柱，得茶树蔗糖合酶CsSUS2。

优选地，PCR反应条件：94℃预变性3min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸3min，共进行30个循环，最后72℃延伸10min；4℃保存。

优选地，第一次离心条件为：4℃、5000rpm，离心时间为10min，且重复一次；第二次离心条件为：4℃、10000rpm，离心时间为20min。

一种根据上述茶树蔗糖合酶CsSUS2制备方法制得的茶树蔗糖合酶CsSUS2。

一种根据上述茶树蔗糖合酶CsSUS2在合成苯乙醇糖苷中的应用。

优选地，上述应用包括以下步骤：

S1，PH值为7.5且100mM的Tris-Hcl、DTT、2.5mM的UDPG、10μg/μL的GT、20mM的苯乙醇、10μg/μL的茶树蔗糖合酶CsSUS2、100M的蔗糖以体积比21:1:1:1:1:1:1混合，然后30℃、400rpm条件下反应10h；

S2，加入色谱级乙酸乙酯萃取，4℃、15000rpm条件下离心30-40min，分别得乙酸乙酯层和溶液层；

S3，溶液层重复S2操作，合并两次乙酸乙酯层，真空浓缩，得固体苯乙醇糖苷。

与现有技术相比，本发明的有益效果：

本发明蔗糖合酶CsSUS2纯度高，催化蔗糖与UDP反应重新生成UDPG，即UDPG的原位再生，在生产等量苯乙醇糖苷的基础上大幅度地减小了UDPG的消耗，提高苯乙醇糖苷的合成效率，降低了苯乙醇糖苷的生产成本，适合工业化生产；同时通过消耗UDP来防止出现随着反应进行UDP会逐渐积累降低反应速率的缺陷。

附图说明

图1为本发明实施例2中高效液相色谱图；

图2为本发明实施例2中产物质谱分析图；

图3为本发明实施例2中图1中的峰面积图。

具体实施方式

下面结合附图1-2对本发明的一个具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制，实施例中涉及的生物化学操作如PCR扩增、构建载体、细胞转化、分离纯化、电泳等过程如无特殊说明均属于本领域常规操作手段，涉及试剂均能通过公共渠道获得。

实施例1

一种茶树蔗糖合酶CsSUS2的制备方法，包括以下步骤：

目的基因克隆：以茶树cDNA为模板，用SnapGene Viewer软件对目的基因设计特异性引物，然后进行PCR反应；PCR产物用1.2％琼脂糖凝胶电泳检测得到一条大小为2000bp左右的条带，即克隆成功。

其中，引物序列：

SalI：5’-gatatcggatccgaattcgagctccgtcgacgcatggggagaaggttgatgaaacccca-3’，如SEQ ID NO.1所示；

Notl：5’-gtggtggtggtggtggtgctcgagtgcggccgcttaggaaacatgcctggccgtaggttctg-3’，如SEQ ID NO.2所示；

PCR反应体系：500ng/μL的茶树cDNA模板2μL，10μM的上、下游引物各2μL，高保真聚合酶(例如，10×Taq mix酶)24μL，ddH2O添至50μL；

PCR反应条件：94℃预变性3min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸3min，共进行30个循环，最后72℃延伸10min；4℃保存。

构建表达载体：构建连接体系并用移液器上下吹打，避免产生气泡，先置于37℃水浴25-30min再置于冰上冰浴5min；

其中，连接体系为：5×CEⅡBuffer取2μL，pET-32a⁺(购自通用生物系统(安徽)有限公司)3μL，PCR产物2μL，ExnaseⅡ试剂1μL，ddH2O添至10μL。

转化：将构建载体转化至BL21感受态细胞中，扩大培养得含CsSUS2基因全长的工程菌；

具体转化过程：

(1)取100μL感受态细胞Trans1T1悬液冰上溶解，加入质粒DNA(此质粒DNA为构建好的表达载体)，每10μL质粒DNA加入20μL感受态细胞。

(2)用枪头轻轻混匀，冰上放置25-30min后，于42℃水浴中加热60-90s，然后迅速在冰上冷却3～5min。

(3)加入500μL LB液体培养基，37℃200rpm振荡培养1-2h，使菌体恢复正常生长状态，并扩大培养。

(4)取500μL菌液均匀涂在含Amp(终浓度为100μg/ml)的LB平板上，菌液完全被培养基吸收后，倒置培养皿，于37℃恒温培养箱中培养12h左右，待形成单个菌落停止培养。

(5)挑取单菌落于摇菌管加入液体LB+Amp培养基5-10ml摇混后提取质粒为克隆载体。

6)取100μL感受态细胞BL21悬液冰上溶解，加入克隆载体(每10μL质粒加入20μL感受态细胞)。

(7)用枪头轻轻混匀，冰上放置25-30min后，于42℃水浴中加热60-90s，然后迅速在冰上冷却3～5min。

(8)加入500μL LB液体培养基，37℃200rpm振荡培养1-2h，使菌体恢复正常生长状态，并扩大培养。

(9)取500μL菌液均匀涂在含Amp+cl-(终浓度为100μg/ml)的LB平板上，菌液完全被培养基吸收后，倒置培养皿，于37℃恒温培养箱中培养12h左右，待形成单个菌落停止培养。

(10)挑单菌于10ml的LB(含100μg/ml Amp+cl-)中，37℃，200r/min培养5-10h至菌液混浊。

(11)将混浊菌液倒入已配制好的500mlLB(含100μg/ml Amp+cl-)液体培养基中，37℃，200r/min培养4～6h至OD₆₀₀＝0.6-0.8。

(12)冷却到16-18℃后，加入1mM IPTG(100μg/ml)在16℃、200r/min培养22h。

茶树蔗糖合酶的分离纯化：4℃、5000rpm条件下离心10min，且重复一次，每次离心均取沉淀，置于－80℃下2-4h；加入1×wash buffer震荡至无大菌块为止，超声破碎10min，4℃、10000rpm下离心时间20min，得沉淀。

沉淀加水混匀得蛋白溶液，将垫片置于纯化柱(His亲和层析柱)中，加入200-400μL含有His标签的树脂，用10mL的1×wash buffer(Buffer A)一次5mL洗两次柱子；将蛋白溶液倒入柱子中封口，置于4℃层析柜过夜摇动柱子，使树脂与蛋白充分融合；从层析柜中取出柱子，打开柱子下方使液体流出，继而用1×wash buffer(Buffer A)洗两次柱子，每次用5mL。取1.5mL离心管置于冰上，将柱子放在1.5mL离心管上，用洗脱液Buffer B洗脱3次，每次加入300μL并充分融合5min，最后得到的即为纯的茶树蔗糖合酶CsSUS2。纯化后的蛋白用SDS-PAGE蛋白胶检测。

一种上述方法制得的茶树蔗糖合酶CsSUS2，氨基酸序列为：MGRRLMKPHQIMEVIDKAIEDKRERARVLEGLLGQVFSSTQEVAINPPYVALAVRQSPGFWEFFKVNANSLEVDSITAKDYLKLKEIVYDENWAMDKNALEIDFGACDFSTPRLTLSSSIGNGVDFMSKFMTSRISGDLERAKPLLEYLLALDHHGENLMINENINTVSKLQAGLIVADVYVSALPKNTPYQNFEQKLKEWGFEKGWGENADRVKETMKILSEILQAPDPIKMESFFRRLPNIFKIVIFSVHGYFGQSDVLGLPDTGGQVVYILDQVKALEEELLLRIKQQGLSVKPQILVVTRLIPDAKGTKCSEEIEPVLNTTHSHILRVPFKTDKGVLHQWDATSKVLKHLECKPDLILGNYTDGNLVASLMASKLGVTLGTIAHALEKTKYEDSDVKWKELDPKYHFSCQFTADLIAMNSADFIITSTYQEIAGSKKRAGQYESHQAFTMPGLCRVVSGINVFDPKFNIAAPGAEQAVYFPFTEKNKRFTSFHPAIEELLYANKDNHEHIGFLADKKKPIIFSMARLDTVKNITGLVEWYGKNKRLRNLANLVVVAGFFDPSKSKDREEIAEINKMHTLIEKYQLKGQIRWIAAQTDRYRNGELYRCIADTKGAFVQPAFYEAFGLTVIEAMNCGLPTFATNQGGPAEIIVDGVSGFHVDPNNDDESSNKIADFFEKCKVDAEYWNKVSQEGLKRIYECYSWKIYANKVLNMGSLYGFWRQLNKEQKQAKQRYIQLFYNLLFRNRAKSIAIPSAEAQKTAPTPTTKPQETAMPKPKETEILKAQETAKTAITKPPEPTARHVS，如SEQ ID NO.3所示。

实施例2

一种上述茶树蔗糖合酶CsSUS2在合成苯乙醇糖苷中的应用。

上述茶树蔗糖合酶CsSUS2在合成苯乙醇糖苷的应用，包括以下步骤：

S1，PH值为7.5且100mM的Tris-Hcl、DTT、2.5mM的UDPG、10μg/μL的GT(为糖基转移酶CsUGT85A53，源于专利201710311140.4)、20mM的苯乙醇、10μg/μL的茶树蔗糖合酶CsSUS2、100M的蔗糖以体积比21:1:1:1:1:1:1混合，然后30℃、400rpm条件下反应10h；

S2，加入色谱级乙酸乙酯震荡萃取，置于4℃的超声环境中混匀萃取30-40min，4℃、15000rpm条件下离心30min，分别得乙酸乙酯层和溶液层；

S3，溶液层重复S2萃取操作，合并两次乙酸乙酯层，浓缩，得固体苯乙醇糖苷，加入350μL质谱级的甲醇，震荡使沉淀充分溶解，过0.22μL的有机膜注入液相进样瓶中保存。

为验证本申请的应用效果，分别对现有利用GT合成苯乙醇糖苷(与实施例1中的合成区别仅在于未添加茶树蔗糖合酶CsSUS2)、实施例1中的方法得到的苯乙醇糖苷分别进行了高效液相色谱检测，在正离子模式下提取山萘酚糖苷的分子量307。结果如图1-3：从图1中可以看出，根据峰高低表示苯乙醇糖苷生成量，实线表示加入蔗糖合酶的反应体系，虚线表示糖基转移酶的酶活反应体系。加入蔗糖合酶后苯乙醇糖苷的含量显著高于正常糖基转移酶反应生成苯乙醇糖苷。图2为苯乙醇糖苷的质谱分析图。从图3中可以看出，通过计算图1中的峰面积，加入蔗糖合酶反应后糖苷生成量高于正常糖基转移酶反应的50％。根据结果显示，实现了茶树中UDPG原位再生体系，即可以在反应中通过加入廉价的蔗糖，使蔗糖合酶和糖基转移酶共同作用，既可以使苯乙醇糖苷生成量增加，又可以通过发挥蔗糖合酶的分解作用产生生产糖苷所需的UDPG。

需要说明的是，本发明权利要求书中采用的步骤方法与上述实施例相同，为了防止赘述，本发明的描述了优选的实施例，但本领域内的技术人员一旦得知了基本创造性概念，则可对这些实施例做出另外的变更和修改。所以，所附权利要求意欲解释为包括优选实施例以及落入本发明范围的所有变更和修改。

显然，本领域的技术人员可以对本发明进行各种改动和变型而不脱离本发明的精神和范围。这样，倘若本发明的这些修改和变型属于本发明权利要求及其等同技术的范围之内，则本发明也意图包含这些改动和变型在内。

序列表

<120> 一种茶树蔗糖合酶CsSUS2、制备方法及应用

<141> 2019-04-12

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 59

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

gatatcggat ccgaattcga gctccgtcga cgcatgggga gaaggttgat gaaacccca 59

<210> 2

<211> 62

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

gtggtggtgg tggtggtgct cgagtgcggc cgcttaggaa acatgcctgg ccgtaggttc 60

tg 62

<210> 3

<211> 807

<212> PRT

<213> 人工序列

<400> 3

Met Gly Arg Arg Leu Met Lys Pro His Gln Ile Met Glu Val Ile Asp

1 5 10 15

Lys Ala Ile Glu Asp Lys Arg Glu Arg Ala Arg Val Leu Glu Gly Leu

20 25 30

Leu Gly Gln Val Phe Ser Ser Thr Gln Glu Val Ala Ile Asn Pro Pro

35 40 45

Tyr Val Ala Leu Ala Val Arg Gln Ser Pro Gly Phe Trp Glu Phe Phe

50 55 60

Lys Val Asn Ala Asn Ser Leu Glu Val Asp Ser Ile Thr Ala Lys Asp

65 70 75 80

Tyr Leu Lys Leu Lys Glu Ile Val Tyr Asp Glu Asn Trp Ala Met Asp

85 90 95

Lys Asn Ala Leu Glu Ile Asp Phe Gly Ala Cys Asp Phe Ser Thr Pro

100 105 110

Arg Leu Thr Leu Ser Ser Ser Ile Gly Asn Gly Val Asp Phe Met Ser

115 120 125

Lys Phe Met Thr Ser Arg Ile Ser Gly Asp Leu Glu Arg Ala Lys Pro

130 135 140

Leu Leu Glu Tyr Leu Leu Ala Leu Asp His His Gly Glu Asn Leu Met

145 150 155 160

Ile Asn Glu Asn Ile Asn Thr Val Ser Lys Leu Gln Ala Gly Leu Ile

165 170 175

Val Ala Asp Val Tyr Val Ser Ala Leu Pro Lys Asn Thr Pro Tyr Gln

180 185 190

Asn Phe Glu Gln Lys Leu Lys Glu Trp Gly Phe Glu Lys Gly Trp Gly

195 200 205

Glu Asn Ala Asp Arg Val Lys Glu Thr Met Lys Ile Leu Ser Glu Ile

210 215 220

Leu Gln Ala Pro Asp Pro Ile Lys Met Glu Ser Phe Phe Arg Arg Leu

225 230 235 240

Pro Asn Ile Phe Lys Ile Val Ile Phe Ser Val His Gly Tyr Phe Gly

245 250 255

Gln Ser Asp Val Leu Gly Leu Pro Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr

260 265 270

Ile Leu Asp Gln Val Lys Ala Leu Glu Glu Glu Leu Leu Leu Arg Ile

275 280 285

Lys Gln Gln Gly Leu Ser Val Lys Pro Gln Ile Leu Val Val Thr Arg

290 295 300

Leu Ile Pro Asp Ala Lys Gly Thr Lys Cys Ser Glu Glu Ile Glu Pro

305 310 315 320

Val Leu Asn Thr Thr His Ser His Ile Leu Arg Val Pro Phe Lys Thr

325 330 335

Asp Lys Gly Val Leu His Gln Trp Asp Ala Thr Ser Lys Val Leu Lys

340 345 350

His Leu Glu Cys Lys Pro Asp Leu Ile Leu Gly Asn Tyr Thr Asp Gly

355 360 365

Asn Leu Val Ala Ser Leu Met Ala Ser Lys Leu Gly Val Thr Leu Gly

370 375 380

Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Glu Asp Ser Asp Val

385 390 395 400

Lys Trp Lys Glu Leu Asp Pro Lys Tyr His Phe Ser Cys Gln Phe Thr

405 410 415

Ala Asp Leu Ile Ala Met Asn Ser Ala Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr

420 425 430

Tyr Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Lys Arg Ala Gly Gln Tyr Glu Ser

435 440 445

His Gln Ala Phe Thr Met Pro Gly Leu Cys Arg Val Val Ser Gly Ile

450 455 460

Asn Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile Ala Ala Pro Gly Ala Glu Gln

465 470 475 480

Ala Val Tyr Phe Pro Phe Thr Glu Lys Asn Lys Arg Phe Thr Ser Phe

485 490 495

His Pro Ala Ile Glu Glu Leu Leu Tyr Ala Asn Lys Asp Asn His Glu

500 505 510

His Ile Gly Phe Leu Ala Asp Lys Lys Lys Pro Ile Ile Phe Ser Met

515 520 525

Ala Arg Leu Asp Thr Val Lys Asn Ile Thr Gly Leu Val Glu Trp Tyr

530 535 540

Gly Lys Asn Lys Arg Leu Arg Asn Leu Ala Asn Leu Val Val Val Ala

545 550 555 560

Gly Phe Phe Asp Pro Ser Lys Ser Lys Asp Arg Glu Glu Ile Ala Glu

565 570 575

Ile Asn Lys Met His Thr Leu Ile Glu Lys Tyr Gln Leu Lys Gly Gln

580 585 590

Ile Arg Trp Ile Ala Ala Gln Thr Asp Arg Tyr Arg Asn Gly Glu Leu

595 600 605

Tyr Arg Cys Ile Ala Asp Thr Lys Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala Phe

610 615 620

Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Ile Glu Ala Met Asn Cys Gly Leu

625 630 635 640

Pro Thr Phe Ala Thr Asn Gln Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val Asp

645 650 655

Gly Val Ser Gly Phe His Val Asp Pro Asn Asn Asp Asp Glu Ser Ser

660 665 670

Asn Lys Ile Ala Asp Phe Phe Glu Lys Cys Lys Val Asp Ala Glu Tyr

675 680 685

Trp Asn Lys Val Ser Gln Glu Gly Leu Lys Arg Ile Tyr Glu Cys Tyr

690 695 700

Ser Trp Lys Ile Tyr Ala Asn Lys Val Leu Asn Met Gly Ser Leu Tyr

705 710 715 720

Gly Phe Trp Arg Gln Leu Asn Lys Glu Gln Lys Gln Ala Lys Gln Arg

725 730 735

Tyr Ile Gln Leu Phe Tyr Asn Leu Leu Phe Arg Asn Arg Ala Lys Ser

740 745 750

Ile Ala Ile Pro Ser Ala Glu Ala Gln Lys Thr Ala Pro Thr Pro Thr

755 760 765

Thr Lys Pro Gln Glu Thr Ala Met Pro Lys Pro Lys Glu Thr Glu Ile

770 775 780

Leu Lys Ala Gln Glu Thr Ala Lys Thr Ala Ile Thr Lys Pro Pro Glu

785 790 795 800

Pro Thr Ala Arg His Val Ser

805

Claims

1.一种茶树蔗糖合酶CsSUS2的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

其中，引物序列：

SalI：5’-gatatcggatccgaattcgagctccgtcgacgcatggggagaaggttgatgaaacccca-3’，

构建表达载体：构建连接体系，置于37℃水浴25-30min再冰浴5min；

茶树蔗糖合酶的分离纯化：离心取沉淀，－80℃下放置2-4h；加入1×washbuffer，超声破碎后离心得沉淀；沉淀加水混匀后过纯化柱，得茶树蔗糖合酶CsSUS2。

2.如权利要求1所述的茶树蔗糖合酶CsSUS2制备方法，其特征在于，PCR反应条件：94℃预变性3min，94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸3min，共进行30个循环，最后72℃延伸10min；4℃保存。

3.如权利要求1所述的茶树蔗糖合酶CsSUS2制备方法，其特征在于，第一次离心条件为：4℃、5000rpm，离心时间为10min，且重复一次；第二次离心条件为：4℃、10000rpm，离心时间为20min。

4.一种根据权利要求1所述的茶树蔗糖合酶CsSUS2制备方法制得的茶树蔗糖合酶CsSUS2。

5.一种根据权利要求4所述的茶树蔗糖合酶CsSUS2在合成苯乙醇糖苷中的应用。

6.如权利要求5所述的茶树蔗糖合酶CsSUS2在合成苯乙醇糖苷中的应用，其特征在于，包括以下步骤：