CN110003887A - 一种分子印迹比率荧光探针的制备方法及利用其检测土霉素的方法 - Google Patents
一种分子印迹比率荧光探针的制备方法及利用其检测土霉素的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN110003887A CN110003887A CN201910284988.1A CN201910284988A CN110003887A CN 110003887 A CN110003887 A CN 110003887A CN 201910284988 A CN201910284988 A CN 201910284988A CN 110003887 A CN110003887 A CN 110003887A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- terramycin
- concentration
- solution
- sample
- tested
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- KIPLYOUQVMMOHB-MXWBXKMOSA-L [Ca++].CN(C)[C@H]1[C@@H]2[C@@H](O)[C@H]3C(=C([O-])[C@]2(O)C(=O)C(C(N)=O)=C1O)C(=O)c1c(O)cccc1[C@@]3(C)O.CN(C)[C@H]1[C@@H]2[C@@H](O)[C@H]3C(=C([O-])[C@]2(O)C(=O)C(C(N)=O)=C1O)C(=O)c1c(O)cccc1[C@@]3(C)O Chemical compound [Ca++].CN(C)[C@H]1[C@@H]2[C@@H](O)[C@H]3C(=C([O-])[C@]2(O)C(=O)C(C(N)=O)=C1O)C(=O)c1c(O)cccc1[C@@]3(C)O.CN(C)[C@H]1[C@@H]2[C@@H](O)[C@H]3C(=C([O-])[C@]2(O)C(=O)C(C(N)=O)=C1O)C(=O)c1c(O)cccc1[C@@]3(C)O KIPLYOUQVMMOHB-MXWBXKMOSA-L 0.000 title claims abstract description 131
- 229940063650 terramycin Drugs 0.000 title claims abstract description 129
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 title claims abstract description 63
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 73
- VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N methane Chemical compound C VNWKTOKETHGBQD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 55
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 45
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 29
- 229920000344 molecularly imprinted polymer Polymers 0.000 claims abstract description 25
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 claims abstract description 24
- 238000010791 quenching Methods 0.000 claims abstract description 23
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 claims abstract description 23
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 80
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 claims description 33
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 30
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 claims description 28
- 238000000944 Soxhlet extraction Methods 0.000 claims description 28
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 25
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 18
- PCJQOISZFZOTRH-UHFFFAOYSA-K trichloroeuropium;hydrate Chemical compound O.[Cl-].[Cl-].[Cl-].[Eu+3] PCJQOISZFZOTRH-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 17
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 16
- 239000012265 solid product Substances 0.000 claims description 16
- 238000013019 agitation Methods 0.000 claims description 15
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 15
- WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N (3-aminopropyl)triethoxysilane Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)CCCN WYTZZXDRDKSJID-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 13
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 13
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 239000004088 foaming agent Substances 0.000 claims description 12
- 235000000370 Passiflora edulis Nutrition 0.000 claims description 11
- 244000288157 Passiflora edulis Species 0.000 claims description 11
- 239000012895 dilution Substances 0.000 claims description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 claims description 10
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 10
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 9
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 8
- 235000011121 sodium hydroxide Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 7
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 6
- 239000002689 soil Substances 0.000 claims description 6
- BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N Tetraethyl orthosilicate Chemical compound CCO[Si](OCC)(OCC)OCC BOTDANWDWHJENH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 5
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 4
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 4
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 4
- LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M Cetrimonium bromide Chemical compound [Br-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)C LZZYPRNAOMGNLH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 3
- 230000003467 diminishing effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 3
- 125000000913 palmityl group Chemical group [H]C([*])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 3
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 claims description 3
- AISMNBXOJRHCIA-UHFFFAOYSA-N trimethylazanium;bromide Chemical compound Br.CN(C)C AISMNBXOJRHCIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 claims 1
- 125000004494 ethyl ester group Chemical group 0.000 claims 1
- RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N silicic acid Chemical compound O[Si](O)(O)O RMAQACBXLXPBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 235000012239 silicon dioxide Nutrition 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 abstract description 3
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 abstract description 2
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 5
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N hexadecane Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC DCAYPVUWAIABOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000002441 X-ray diffraction Methods 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 3
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 3
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 3
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N Silane Chemical compound [SiH4] BLRPTPMANUNPDV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- HRHBQGBPZWNGHV-UHFFFAOYSA-N azane;bromomethane Chemical compound N.BrC HRHBQGBPZWNGHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012921 fluorescence analysis Methods 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- DKAGJZJALZXOOV-UHFFFAOYSA-N hydrate;hydrochloride Chemical compound O.Cl DKAGJZJALZXOOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N pyridoxine Chemical compound CC1=NC=C(CO)C(CO)=C1O LXNHXLLTXMVWPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910000077 silane Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003313 weakening effect Effects 0.000 description 2
- AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N D-Lyxoflavin Natural products OCC(O)C(O)C(O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N D-erythro-ascorbic acid Natural products OCC1OC(=O)C(O)=C1O ZZZCUOFIHGPKAK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N Riboflavin Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)CN1C=2C=C(C)C(C)=CC=2N=C2C1=NC(=O)NC2=O AUNGANRZJHBGPY-SCRDCRAPSA-N 0.000 description 1
- 229910018557 Si O Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910002808 Si–O–Si Inorganic materials 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930003451 Vitamin B1 Natural products 0.000 description 1
- 229930003471 Vitamin B2 Natural products 0.000 description 1
- 229930003268 Vitamin C Natural products 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000009360 aquaculture Methods 0.000 description 1
- 244000144974 aquaculture Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 125000002915 carbonyl group Chemical group [*:2]C([*:1])=O 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001917 fluorescence detection Methods 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000013335 mesoporous material Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N pyridoxal hydrochloride Natural products CC1=NC=C(CO)C(C=O)=C1O RADKZDMFGJYCBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000452 restraining effect Effects 0.000 description 1
- 229960002477 riboflavin Drugs 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- LIVNPJMFVYWSIS-UHFFFAOYSA-N silicon monoxide Inorganic materials [Si-]#[O+] LIVNPJMFVYWSIS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010189 synthetic method Methods 0.000 description 1
- 229940072172 tetracycline antibiotic Drugs 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000010374 vitamin B1 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011691 vitamin B1 Substances 0.000 description 1
- 235000019164 vitamin B2 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011716 vitamin B2 Substances 0.000 description 1
- 235000019158 vitamin B6 Nutrition 0.000 description 1
- 239000011726 vitamin B6 Substances 0.000 description 1
- 235000019154 vitamin C Nutrition 0.000 description 1
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 description 1
- 229940011671 vitamin b6 Drugs 0.000 description 1
- 239000002351 wastewater Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
- C09K11/06—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing organic luminescent materials
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C09—DYES; PAINTS; POLISHES; NATURAL RESINS; ADHESIVES; COMPOSITIONS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; APPLICATIONS OF MATERIALS NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- C09K—MATERIALS FOR MISCELLANEOUS APPLICATIONS, NOT PROVIDED FOR ELSEWHERE
- C09K11/00—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials
- C09K11/08—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing inorganic luminescent materials
- C09K11/77—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing inorganic luminescent materials containing rare earth metals
- C09K11/7728—Luminescent, e.g. electroluminescent, chemiluminescent materials containing inorganic luminescent materials containing rare earth metals containing europium
- C09K11/7732—Halogenides
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6428—Measuring fluorescence of fluorescent products of reactions or of fluorochrome labelled reactive substances, e.g. measuring quenching effects, using measuring "optrodes"
- G01N2021/6432—Quenching
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
Abstract
一种分子印迹比率荧光探针的制备方法及利用其检测土霉素的方法，它涉及一种分子印迹比率荧光探针的制备方法及检测土霉素的方法。本发明的目的是解决比率荧光材料合成方法成本高及土霉素检测过程中易受环境干扰，检测时间长的问题。制备方法：一、制备碳量子点；二、制备介孔分子印迹聚合物；三、制备分子印迹比率荧光探针。检测土霉素的方法：一、制备分散液；二、确定猝灭常数Ksv；三、检测待测样品，按Stern‑Volmer方程计算出待测样品中土霉素的浓度Qu。优点：检测时间短，有良好的回收率和重现性，对土霉素类药物具有较高的选择性。本发明主要用于制备分子印迹比率荧光探针及检测土霉素。
Description
技术领域
本发明涉及一种分子印迹比率荧光探针的制备方法及检测土霉素的方法。
背景技术
土霉素是一种四环素类抗生素，有良好的抑菌杀菌作用。作为一种广谱抗生素，被广泛应用于水产养殖以及畜牧业中。但是，由于土霉素被广泛使用以致滥用，常常导致部分动物性食品、地下水以及生产废水中土霉素的含量超标。这类药物低浓度的残留在动物性食品中，导致各种细菌产生耐药性，严重威胁着人类健康。现有土霉素的检测方法主要为高效液相色谱法，此类方法设备成本高、预处理复杂、检测周期长。近年来，也有一些研究者采用荧光分析的方法检测土霉素。例如在公开的专利《一种荧光探针及其制备方法、牛奶中土霉素的检测方法》(申请号：201410764252.1)以及专利《荧光探针的制备方法及基于荧光探针的土霉素检测方法》(申请号：201610451659.8)都曾采用荧光分析的检测方法。但两种方法制备的荧光探针都为单一荧光体，抗干扰能力相对较低，并且制备荧光探针的原料都为化学试剂，成本比较昂贵。其中专利《一种荧光探针及其制备方法、牛奶中土霉素的检测方法》中样品检测时间相对较长(大于20min)；而专利《荧光探针的制备方法及基于荧光探针的土霉素检测方法》的检测灵敏度低，定量下限为15μmol/L。
发明内容
本发明的目的是解决比率荧光材料合成方法成本高及土霉素检测过程中易受环境干扰，检测时间长的问题，而提供一种分子印迹比率荧光探针的制备方法及利用其检测土霉素的方法。
一种分子印迹比率荧光探针的制备方法，具体按以下步骤制备的：
一、制备碳量子点：将百香果皮和尿素加入高纯水中，然后置于微波消解罐中，启动微波消解仪，反应时间设定为25min～35min，温度设定为180℃～220℃，反应完成后用一次性注射器和微孔过滤膜过滤，得到碳量子点溶液，将碳量子点溶液在温度为40℃～70℃下旋转蒸发除去溶剂，然后在温度为50℃～70℃下真空干燥20h～30h，得到碳量子点固体产物；步骤一中所述的尿素与百香果皮的质量比为1:(5～7)；步骤一中所述的百香果皮与高纯水的质量比为1:(10～20)；
二、制备介孔分子印迹聚合物：将土霉素放入容器中，再加入高纯水和十六烷基三甲基溴化铵，室温条件下磁力搅拌混合20min～30min，然后加入3-氨丙基三乙氧基硅烷、正硅酸乙酯和浓度为1.5mol/L～2.5mol/L的氢氧化钠水溶液，室温条件下磁力搅拌反应20h～30h，得到带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物，将带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物放在索氏提取装置中，加入索氏提取液，在温度为60℃～70℃下提取22h～26h，得到索氏提取产物，将索氏提取产物洗至中性，得到介孔分子印迹聚合物；步骤二中所述的高纯水的体积与土霉素的质量比为1mL:(3～5)mg；步骤二中所述的土霉素与十六烷基三甲基溴化铵的质量比为1:(1～2)；步骤二中所述的土霉素的质量与3-氨丙基三乙氧基硅烷的体积比为1g:(2～3)mL；步骤二中所述的土霉素的质量与正硅酸乙酯的体积比为1g:(8～12)mL；步骤二中所述的土霉素的质量与浓度为1.5mol/L～2.5mol/L的氢氧化钠水溶液的体积比为1g:(1～3)mL；步骤二中带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物的质量与索氏提取液的体积比为1g:(70～120)mL；步骤二中所述的索氏提取液由乙醇和浓度为1.5mol/L～2.0mol/L的盐酸水溶液混合而成，且索氏提取液中浓度为1.5mol/L～2.0mol/L的盐酸水溶液与乙醇的体积比为1:(9～19)；
三、制备分子印迹比率荧光探针：将碳量子点固体产物加入高纯水中，得到浓度为1mg/mL～2mg/mL的碳量子点溶液，然后将浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液、浓度为1mg/mL～2mg/mL的碳量子点溶液、浓度为5mmol/L～15mmol/L的5'-鸟苷酸二钠溶液、介孔分子印迹聚合物、乙醇和3-氨丙基三乙氧基硅烷加入到容器中，在室温条件下磁力搅拌避光反应20h～30h，得到反应溶液，反应溶液在转速为5000rpm～7000rpm条件下离心5min～10min，得到固体产物，用高纯水洗涤固体产物2～4次，然后在温度为50℃～70℃下进行真空干燥10h～15h，即得到分子印迹比率荧光探针；步骤三中所述的浓度为1mg/mL～2mg/mL的碳量子点溶液和浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1：(3～5)；步骤三中所述的浓度为5mmol/L～15mmol/L的5'-鸟苷酸二钠溶液与浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1:(15～25)；步骤三中所述的介孔分子印迹聚合物的质量与浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1g:(10～20)mL；步骤三中所述的乙醇和浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1:(10～20)；步骤三中所述的3-氨丙基三乙氧基硅烷和浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1:(25～35)。
一种分子印迹比率荧光探针检测土霉素的方法，具体按以下步骤完成的：
一、制备分散液：将分子印迹比率荧光探针分散到高纯水中，得到分散液；步骤一中所述的分子印迹比率荧光探针和高纯水的比为1mg:(3～10)mL；分子印迹比率荧光探针对土霉素的检出限为0.057μmol/L；
二、确定猝灭常数Ksv：①、将分散液与土霉素水溶液按体积比1:1混合均匀，土霉素水溶液中土霉素的浓度为Q1，且0.2μmol/L≤Q1，得到试验组溶液，利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测试验组溶液，得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDs1和发射波长为620nm的铕的荧光强度FEu1；②、按照土霉素水溶液中土霉素浓度递增形式重复步骤二①操作n-1次，第n次操作时，土霉素水溶液中土霉素浓度为Qn，Qn≤2.0μmol/L，利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测浓度为Qn试验组溶液，得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDsn和发射波长为620nm的铕的荧光强度FEun；③、依据Stern-Volmer方程为F1/F2＝Ksv[Q]+b，公式中F1为发射波长为620nm的铕的荧光强度，F1＝FEu1～FEun，F2为发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度，F2＝FCQDs1～FCQDsn，Q为土霉素水溶液中土霉素的浓度，Q＝Q1～Qn，Ksv为猝灭常数，b为常数，根据Q＝Q1～Qn，F1＝FEu1～FEun和F2＝FCQDs1～FCQDsn，计算得到猝灭常数Ksv的值；
三、检测待测样品：①、对待测样品中土霉素进行初步测量，当待测样品中土霉素含量＞2.0μmol/L时，将待测样品进行稀释，至待测样品中土霉素含量≤2.0μmol/L，且≥0.2μmol/L，然后将稀释后待测样品与分散液按体积比1:1混合均匀，得到待测组溶液；当待测样品中土霉素含量≤2.0μmol/L时，将分散液与待测样品按体积比1:1混合均匀，得到待测组溶液；②、利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测待测组溶液，得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDsu和发射波长为620nm的铕的到荧光强度FEuu，依据Stern-Volmer方程为FEuu/FCQDsu＝Ksv[Qu]+b，公式中FEuu为发射波长为620nm的铕的到荧光强度，FCQDsu为发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度，Ksv为猝灭常数，b为常数，Qu为待测样品或稀释后待测样品中土霉素的浓度，根据步骤二中计算得到的猝灭常数Ksv，及检测得到的FEuu和FCQDsu，当待测样品中土霉素含量＞2.0μmol/L时，依据稀释比例，按Stern-Volmer方程计算出待测样品中土霉素的浓度Qu，当待测样品中土霉素含量≤2.0μmol/L，且≥0.2μmol/L时，按Stern-Volmer方程计算出待测样品中土霉素的浓度Qu；当待测样品中土霉素含量≤0.2μmol/L，且≥0.057μmol/L时，定性分析待测样品含有土霉素。
本发明优点：1、本发明采用的原料为生物质材料废弃的百香果皮，材料环保，实现了废物再利用；2、本发明制备得到的分子印迹比率荧光探针合成方法简单，条件易于控制；3、本发明利用分子印迹技术的选择性和比率荧光分析法，使得本发明具有很好的抗干扰能力，提高了分析结果的可靠性。4、本发明检测时间短(样品混合时间为5min，检测时间为2min)，有良好的回收率(回收率＞90％)和重现性(RSD＜4.8％)，对土霉素类药物具有较高的选择性(选择性系数＞2.7)。与现有技术相比，本发明原料环保，合成方法简单，抗干扰性和选择性高，因此应用前景更大。
附图说明
图1是实施例1得到的分子印迹比率荧光探针的透射电镜图；
图2是实施例1得到的分子印迹比率荧光探针的傅里叶变换红外光谱图；
图3是实施例1得到的分子印迹比率荧光探针的X射线衍射谱图；
图4是实施例2步骤二中分子印迹比率荧光探针对不同浓度土霉素的荧光响应曲线。
具体实施方式
具体实施方式一：本实施方式是一种分子印迹比率荧光探针的制备方法，具体按以下步骤制备的：
一、制备碳量子点：将百香果皮和尿素加入高纯水中，然后置于微波消解罐中，启动微波消解仪，反应时间设定为25min～35min，温度设定为180℃～220℃，反应完成后用一次性注射器和微孔过滤膜过滤，得到碳量子点溶液，将碳量子点溶液在温度为40℃～70℃下旋转蒸发除去溶剂，然后在温度为50℃～70℃下真空干燥20h～30h，得到碳量子点固体产物；步骤一中所述的尿素与百香果皮的质量比为1:(5～7)；步骤一中所述的百香果皮与高纯水的质量比为1:(10～20)；
二、制备介孔分子印迹聚合物：将土霉素放入容器中，再加入高纯水和十六烷基三甲基溴化铵，室温条件下磁力搅拌混合20min～30min，然后加入3-氨丙基三乙氧基硅烷、正硅酸乙酯和浓度为1.5mol/L～2.5mol/L的氢氧化钠水溶液，室温条件下磁力搅拌反应20h～30h，得到带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物，将带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物放在索氏提取装置中，加入索氏提取液，在温度为60℃～70℃下提取22h～26h，得到索氏提取产物，将索氏提取产物洗至中性，得到介孔分子印迹聚合物；步骤二中所述的高纯水的体积与土霉素的质量比为1mL:(3～5)mg；步骤二中所述的土霉素与十六烷基三甲基溴化铵的质量比为1:(1～2)；步骤二中所述的土霉素的质量与3-氨丙基三乙氧基硅烷的体积比为1g:(2～3)mL；步骤二中所述的土霉素的质量与正硅酸乙酯的体积比为1g:(8～12)mL；步骤二中所述的土霉素的质量与浓度为1.5mol/L～2.5mol/L的氢氧化钠水溶液的体积比为1g:(1～3)mL；步骤二中带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物的质量与索氏提取液的体积比为1g:(70～120)mL；步骤二中所述的索氏提取液由乙醇和浓度为1.5mol/L～2.0mol/L的盐酸水溶液混合而成，且索氏提取液中浓度为1.5mol/L～2.0mol/L的盐酸水溶液与乙醇的体积比为1:(9～19)；
三、制备分子印迹比率荧光探针：将碳量子点固体产物加入高纯水中，得到浓度为1mg/mL～2mg/mL的碳量子点溶液，然后将浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液、浓度为1mg/mL～2mg/mL的碳量子点溶液、浓度为5mmol/L～15mmol/L的5'-鸟苷酸二钠溶液、介孔分子印迹聚合物、乙醇和3-氨丙基三乙氧基硅烷加入到容器中，在室温条件下磁力搅拌避光反应20h～30h，得到反应溶液，反应溶液在转速为5000rpm～7000rpm条件下离心5min～10min，得到固体产物，用高纯水洗涤固体产物2～4次，然后在温度为50℃～70℃下进行真空干燥10h～15h，即得到分子印迹比率荧光探针；步骤三中所述的浓度为1mg/mL～2mg/mL的碳量子点溶液和浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1：(3～5)；步骤三中所述的浓度为5mmol/L～15mmol/L的5'-鸟苷酸二钠溶液与浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1:(15～25)；步骤三中所述的介孔分子印迹聚合物的质量与浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1g:(10～20)mL；步骤三中所述的乙醇和浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1:(10～20)；步骤三中所述的3-氨丙基三乙氧基硅烷和浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1:(25～35)。
具体实施方式二：本实施方式与具体实施方式一的不同点是：步骤一中所述微孔过滤膜的孔径为0.22μm。其他与具体实施方式一相同。
具体实施方式三：本实施方式与具体实施方式一或二之一不同点是：步骤二中室温条件下以搅拌速度为200rpm～300rpm磁力搅拌混合20min～30min。其他与具体实施方式一或二相同。
具体实施方式四：本实施方式与具体实施方式一至三之一不同点是：步骤二中室温条件下以搅拌速度为200rpm～300rpm磁力搅拌反应20h～30h。其他与具体实施方式一至三相同。
具体实施方式五：本实施方式与具体实施方式一至四之一不同点是：步骤三中在室温条件下以搅拌速度为200rpm～300rpm磁力搅拌避光反应20h～30h。其他与具体实施方式一至四相同。
具体实施方式六：本实施方式是一种分子印迹比率荧光探针检测土霉素的方法，具体按以下步骤完成的：
一、制备分散液：将分子印迹比率荧光探针分散到高纯水中，得到分散液；步骤一中所述的分子印迹比率荧光探针和高纯水的比为1mg:(3～10)mL；分子印迹比率荧光探针对土霉素的检出限为0.057μmol/L；
二、确定猝灭常数Ksv：①、将分散液与土霉素水溶液按体积比1:1混合均匀，土霉素水溶液中土霉素的浓度为Q1，且0.2μmol/L≤Q1，得到试验组溶液，利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测试验组溶液，得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDs1和发射波长为620nm的铕的荧光强度FEu1；②、按照土霉素水溶液中土霉素浓度递增形式重复步骤二①操作n-1次，第n次操作时，土霉素水溶液中土霉素浓度为Qn，Qn≤2.0μmol/L，利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测浓度为Qn试验组溶液，得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDsn和发射波长为620nm的铕的荧光强度FEun；③、依据Stern-Volmer方程为F1/F2＝Ksv[Q]+b，公式中F1为发射波长为620nm的铕的荧光强度，F1＝FEu1～FEun，F2为发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度，F2＝FCQDs1～FCQDsn，Q为土霉素水溶液中土霉素的浓度，Q＝Q1～Qn，Ksv为猝灭常数，b为常数，根据Q＝Q1～Qn，F1＝FEu1～FEun和F2＝FCQDs1～FCQDsn，计算得到猝灭常数Ksv的值；
三、检测待测样品：①、对待测样品中土霉素进行初步测量，当待测样品中土霉素含量＞2.0μmol/L时，将待测样品进行稀释，至待测样品中土霉素含量≤2.0μmol/L，且≥0.2μmol/L，然后将稀释后待测样品与分散液按体积比1:1混合均匀，得到待测组溶液；当待测样品中土霉素含量≤2.0μmol/L时，将分散液与待测样品按体积比1:1混合均匀，得到待测组溶液；②、利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测待测组溶液，得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDsu和发射波长为620nm的铕的到荧光强度FEuu，依据Stern-Volmer方程为FEuu/FCQDsu＝Ksv[Qu]+b，公式中FEuu为发射波长为620nm的铕的到荧光强度，FCQDsu为发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度，Ksv为猝灭常数，b为常数，Qu为待测样品或稀释后待测样品中土霉素的浓度，根据步骤二中计算得到的猝灭常数Ksv，及检测得到的FEuu和FCQDsu，当待测样品中土霉素含量＞2.0μmol/L时，依据稀释比例，按Stern-Volmer方程计算出待测样品中土霉素的浓度Qu，当待测样品中土霉素含量≤2.0μmol/L，且≥0.2μmol/L时，按Stern-Volmer方程计算出待测样品中土霉素的浓度Qu；当待测样品中土霉素含量≤0.2μmol/L，且≥0.057μmol/L时，定性分析待测样品含有土霉素。
比率荧光检测是利用比较两种不同发光体的荧光强度的比值随着目标分析物的变化而变化的检测方法。与单一发射的荧光检测方法相比，比率荧光检测通过建立内标，极大削弱了探针浓度、温度、溶剂极性、环境的pH值等众多难以控制因素的干扰，使得结果更加精准，响应范围更宽。分子印迹技术能够制备与目标分析物在三维空间形状匹配、官能团匹配的只针对目标分析物进行特异性选择识别的聚合物。介孔材料具有一维到三维的规则有序、大小可调的孔道，高比表面积，大孔容，超高的物理化学稳定性以及表面可官能化等优点，使得其在吸附、分离等方面展现出优越性。本实施方式将比率荧光检测与介孔分子印迹相结合得到的分子印迹比率荧光探针，在对于土霉素的检测方面，具有抗干扰能力强、选择性高、分析快速等优点。
具体实施方式一制备的分子印迹比率荧光探针是利用5'-鸟苷酸二钠将发蓝光的碳量子点与发红光的稀土元素铕连接到一起，并引入到分子印迹当中。由于分子印迹技术具有选择性，目标分子土霉素可以通过特定的孔穴进入分子印迹聚合物内部，从而与碳量子点和稀土元素铕产生作用。当体系中不存在目标分子土霉素时，碳量子点在波长为457nm处发出蓝光，而稀土元素铕由于和水的缔合作用荧光很弱。当目标分子土霉素存在时，目标分子土霉素表面的羟基会和碳量子点发生作用从而使碳量子点的荧光减弱。目标分子土霉素表面的羰基会稀土元素铕发生缔合作用，使得稀土元素铕在波长为620nm处的荧光强度增强。利用本发明制备的分子印迹比率荧光探针检测一系列土霉素的浓度，通过Stern-Volmer方程对实验数据进行分析，在浓度0.2μmol/L～2μmol/L之间具有良好的线性关系。
采用下述试验验证本发明效果
实施例1：一种分子印迹比率荧光探针的制备方法，具体按以下步骤制备的：
一、制备碳量子点：将2.0g百香果皮和0.3g尿素加入30mL高纯水中，然后置于微波消解罐中，启动微波消解仪，反应时间设定为30min，温度设定为200℃，反应完成后用一次性注射器和微孔过滤膜过滤，得到碳量子点溶液，将碳量子点溶液在温度为60℃下旋转蒸发除去溶剂，然后在温度为60℃下真空干燥24h，得到碳量子点固体产物；
二、制备介孔分子印迹聚合物：将360mg土霉素放入容器中，再加入90ml高纯水和0.6g十六烷基三甲基溴化铵，室温条件下以搅拌速度为250rpm磁力搅拌混合20min，然后加入0.9mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷、3.6mL正硅酸乙酯和1.05mL浓度为2.0mol/L的氢氧化钠水溶液，室温条件下以搅拌速度为250rpm磁力搅拌反应24h，得到带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物，将带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物放在索氏提取装置中，加入索氏提取液，在温度为60℃下提取24h，得到索氏提取产物，将索氏提取产物洗至中性，得到介孔分子印迹聚合物；步骤二中带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物的质量与索氏提取液的体积比为1g:100mL；步骤二中所述的索氏提取液由乙醇和浓度为2.0mol/L的盐酸水溶液混合而成，且索氏提取液中浓度为2.0mol/L的盐酸水溶液与乙醇的体积比为1:19；
三、制备分子印迹比率荧光探针：将碳量子点固体产物加入高纯水中，得到浓度为1mg/mL的碳量子点溶液，然后将60mL浓度为20mmol/L的六水合氯化铕溶液、15mL浓度为1mg/mL的碳量子点溶液、3.0mL浓度为10mmol/L的5'-鸟苷酸二钠溶液、5.0g介孔分子印迹聚合物、5.0mL乙醇和2.0mL 3-氨丙基三乙氧基硅烷加入到容器中，在室温条件下以搅拌速度为250rpm磁力搅拌避光反应24h，得到反应溶液，反应溶液在转速为6000rpm条件下离心5min，得到固体产物，用高纯水洗涤固体产物3次，然后在温度为60℃下进行真空干燥12h，即得到分子印迹比率荧光探针。
图1是实施例1得到的分子印迹比率荧光探针的透射电镜图，透射电镜可以用来观察形貌，由图1可知，碳量子点-分子印迹复合材料为球状结构，直径约为100～200nm，形状规则且分散性好。
图2是实施例1得到的分子印迹比率荧光探针的傅里叶变换红外光谱图，由图2可知在1081cm-1左右的强宽峰是Si-O-Si的对称伸缩振动峰，因为在463cm-1和793cm-1处显示了Si-O键的振动峰；在1567cm-1左右的峰是C＝O的特征吸收峰；3420cm-1左右的峰是N-H振动吸收峰。
图3是实施例1得到的分子印迹比率荧光探针的X射线衍射谱图，X射线衍射谱图可以反映晶体内部的原子排布规律，从图3中可以看出分子印迹比率荧光探针在24°左右对应一个强宽峰，这说明产物呈现一种长程无序的非晶形状态。这一结果与图1中的透射电镜图中分子印迹比率荧光探针的形貌特征相一致。
实施例2：一种分子印迹比率荧光探针检测土霉素的方法，具体按以下步骤完成的：
一、制备分散液：将分子印迹比率荧光探针分散到高纯水中，得到分散液；步骤一中所述的分子印迹比率荧光探针和高纯水的比为1mg:5mL；分子印迹比率荧光探针对土霉素的检出限为0.057μmol/L；所述分子印迹比率荧光探针是实施例1制备的；
二、确定猝灭常数Ksv：①、将分散液与土霉素水溶液按体积比1:1混合均匀，土霉素水溶液中土霉素的浓度为Q1，且Q1＝0.2μmol/L，得到试验组溶液，利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测试验组溶液，得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDs1和发射波长为620nm的铕的荧光强度FEu1；②、按照土霉素水溶液中土霉素浓度递增形式重复步骤二①操作9次，第10次操作时，土霉素水溶液中土霉素浓度为Q10，Q10＝2.0μmol/L，利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测浓度为Q10试验组溶液，得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDs10和发射波长为620nm的铕的荧光强度FEu10；③、依据Stern-Volmer方程为F1/F2＝Ksv[Q]+b，公式中F1为发射波长为620nm的铕的荧光强度，F1＝FEu1～FEu10，F2为发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度，F2＝FCQDs1～FCQDs10，Q为土霉素水溶液中土霉素的浓度，Q＝Q1～Q10，Ksv为猝灭常数，b为常数，b＝0.1244，根据Q＝Q1～Q10，F1＝FEu1～FEu10和F2＝FCQDs1～FCQDs10，计算得到猝灭常数Ksv＝0.0718；
三、检测待测样品：①、对待测样品中土霉素进行初步测量，确定待测样品中土霉素含量≤2.0μmol/L，且≥0.2μmol/L，将分散液与待测样品按体积比1:1混合均匀，得到待测组溶液；②、利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测待测组溶液，得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDsu和发射波长为620nm的铕的到荧光强度FEuu，依据Stern-Volmer方程为FEuu/FCQDsu＝Ksv[Qu]+b，公式中FEuu为发射波长为620nm的铕的到荧光强度，FCQDsu为发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度，Ksv为猝灭常数，b为常数，Qu为待测样品或稀释后待测样品中土霉素的浓度，根据步骤二中计算得到的猝灭常数Ksv，及检测得到的FEuu和FCQDsu，按Stern-Volmer方程计算出待测样品中土霉素的浓度Qu＝0.32μmol/L。
图4是实施例2步骤二中分子印迹比率荧光探针对不同浓度土霉素的荧光响应曲线，线性方程为FEu/FCQDs＝0.0718Q+0.1244(R2＝0.99)。其中FEu为分子印迹比率荧光探针中铕的荧光强度，FCQDs为分子印迹比率荧光探针中碳量子点的荧光强度，Q为加入的土霉素的浓度。
实施例3：干扰检测：
一、制备分散液：将分子印迹比率荧光探针分散到高纯水中，得到分散液；步骤一中所述的分子印迹比率荧光探针和高纯水的比为1mg:5mL；分子印迹比率荧光探针对土霉素的检出限为0.057μmol/L；所述分子印迹比率荧光探针是实施例1制备的；
二、检测：配置土霉素水溶液作为待测样品，且待测样品中分别添加K+、Na+、Ca2+、Mg2+、Fe3+、Zn2+、Cu2+、Cl-、维生素B1、维生素B2、维生素B6、维生素C、甘氨酸、组氨酸、缬氨酸、丙氨酸、果糖、葡萄糖或蔗糖作为干扰物质，待测样品中干扰物质的浓度为500nmol·L-1，待测样品中土霉素含量为1.0μmol/L，即Q实际值＝1.0μmol/L，将分散液与待测样品按体积比1:1混合均匀，得到待测组溶液；利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测待测组溶液，得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDs和发射波长为620nm的铕的到荧光强度FEu，依据Stern-Volmer方程为FEu/FCQDs＝Ksv[Q检测值]+b，公式中FEu为发射波长为620nm的铕的到荧光强度，FCQDs为发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度，Ksv为猝灭常数，b为常数，Q检测值为待测样品中土霉素的浓度检测值，根据实施例2步骤二中计算得到的猝灭常数Ksv，及检测得到的FEuu和FCQDsu，计算Q检测值，然后依次Q检测值和Q实际值确定检测结果的相对误差，如表1所示。
表1
通过实施例3测定了一系列干扰物质对分子印迹比率荧光探针的影响，结果表明本发明制备的分子印迹比率荧光探针的抗干扰能力较强，选择性高。
Claims (6)
1.一种分子印迹比率荧光探针的制备方法，其特征在于它按以下步骤制备的：
一、制备碳量子点：将百香果皮和尿素加入高纯水中，然后置于微波消解罐中，启动微波消解仪，反应时间设定为25min～35min，温度设定为180℃～220℃，反应完成后用一次性注射器和微孔过滤膜过滤，得到碳量子点溶液，将碳量子点溶液在温度为40℃～70℃下旋转蒸发除去溶剂，然后在温度为50℃～70℃下真空干燥20h～30h，得到碳量子点固体产物；步骤一中所述的尿素与百香果皮的质量比为1:(5～7)；步骤一中所述的百香果皮与高纯水的质量比为1:(10～20)；
二、制备介孔分子印迹聚合物：将土霉素放入容器中，再加入高纯水和十六烷基三甲基溴化铵，室温条件下磁力搅拌混合20min～30min，然后加入3-氨丙基三乙氧基硅烷、正硅酸乙酯和浓度为1.5mol/L～2.5mol/L的氢氧化钠水溶液，室温条件下磁力搅拌反应20h～30h，得到带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物，将带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物放在索氏提取装置中，加入索氏提取液，在温度为60℃～70℃下提取22h～26h，得到索氏提取产物，将索氏提取产物洗至中性，得到介孔分子印迹聚合物；步骤二中所述的高纯水的体积与土霉素的质量比为1mL:(3～5)mg；步骤二中所述的土霉素与十六烷基三甲基溴化铵的质量比为1:(1～2)；步骤二中所述的土霉素的质量与3-氨丙基三乙氧基硅烷的体积比为1g:(2～3)mL；步骤二中所述的土霉素的质量与正硅酸乙酯的体积比为1g:(8～12)mL；步骤二中所述的土霉素的质量与浓度为1.5mol/L～2.5mol/L的氢氧化钠水溶液的体积比为1g:(1～3)mL；步骤二中带有模板分子和致孔剂的介孔分子印迹聚合物的质量与索氏提取液的体积比为1g:(70～120)mL；步骤二中所述的索氏提取液由乙醇和浓度为1.5mol/L～2.0mol/L的盐酸水溶液混合而成，且索氏提取液中浓度为1.5mol/L～2.0mol/L的盐酸水溶液与乙醇的体积比为1:(9～19)；
三、制备分子印迹比率荧光探针：将碳量子点固体产物加入高纯水中，得到浓度为1mg/mL～2mg/mL的碳量子点溶液，然后将浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液、浓度为1mg/mL～2mg/mL的碳量子点溶液、浓度为5mmol/L～15mmol/L的5'-鸟苷酸二钠溶液、介孔分子印迹聚合物、乙醇和3-氨丙基三乙氧基硅烷加入到容器中，在室温条件下磁力搅拌避光反应20h～30h，得到反应溶液，反应溶液在转速为5000rpm～7000rpm条件下离心5min～10min，得到固体产物，用高纯水洗涤固体产物2～4次，然后在温度为50℃～70℃下进行真空干燥10h～15h，即得到分子印迹比率荧光探针；步骤三中所述的浓度为1mg/mL～2mg/mL的碳量子点溶液和浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1：(3～5)；步骤三中所述的浓度为5mmol/L～15mmol/L的5'-鸟苷酸二钠溶液与浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1:(15～25)；步骤三中所述的介孔分子印迹聚合物的质量与浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1g:(10～20)mL；步骤三中所述的乙醇和浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1:(10～20)；步骤三中所述的3-氨丙基三乙氧基硅烷和浓度为15mmol/L～25mmol/L的六水合氯化铕溶液的体积比为1:(25～35)。
2.根据权利要求1所述的一种分子印迹比率荧光探针的制备方法，其特征在于步骤一中所述微孔过滤膜的孔径为0.22μm。
3.根据权利要求1所述的一种分子印迹比率荧光探针的制备方法，其特征在于步骤二中将土霉素放入容器中，再加入高纯水和十六烷基三甲基溴化铵，室温条件下以搅拌速度为200rpm～300rpm磁力搅拌混合20min～30min。
4.根据权利要求1所述的一种分子印迹比率荧光探针的制备方法，其特征在于步骤二中加入3-氨丙基三乙氧基硅烷、正硅酸乙酯和浓度为1.5mol/L～2.5mol/L的氢氧化钠水溶液，室温条件下以搅拌速度为200rpm～300rpm磁力搅拌反应20h～30h。
5.根据权利要求1所述的一种分子印迹比率荧光探针的制备方法，其特征在于步骤三中在室温条件下以搅拌速度为200rpm～300rpm磁力搅拌避光反应20h～30h。
6.利用权利要求1所述的一种分子印迹比率荧光探针检测土霉素的方法，其特征在于它按以下步骤完成的：
一、制备分散液：将分子印迹比率荧光探针分散到高纯水中，得到分散液；步骤一中所述的分子印迹比率荧光探针和高纯水的比为1mg:(3～10)mL；分子印迹比率荧光探针对土霉素的检出限为0.057μmol/L；
二、确定猝灭常数Ksv：①、将分散液与土霉素水溶液按体积比1:1混合均匀，土霉素水溶液中土霉素的浓度为Q1，且0.2μmol/L≤Q1，得到试验组溶液，利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测试验组溶液，得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDs1和发射波长为620nm的铕的荧光强度FEu1；②、按照土霉素水溶液中土霉素浓度递增形式重复步骤二①操作n-1次，第n次操作时，土霉素水溶液中土霉素浓度为Qn，Qn≤2.0μmol/L，利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测浓度为Qn试验组溶液，得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDsn和发射波长为620nm的铕的荧光强度FEun；③、依据Stern-Volmer方程为F1/F2＝Ksv[Q]+b，公式中F1为发射波长为620nm的铕的荧光强度，F1＝FEu1～FEun，F2为发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度，F2＝FCQDs1～FCQDsn，Q为土霉素水溶液中土霉素的浓度，Q＝Q1～Qn，Ksv为猝灭常数，b为常数，根据Q＝Q1～Qn，F1＝FEu1～FEun和F2＝FCQDs1～FCQDsn，计算得到猝灭常数Ksv的值；
三、检测待测样品：①、对待测样品中土霉素进行初步测量，当待测样品中土霉素含量＞2.0μmol/L时，将待测样品进行稀释，至待测样品中土霉素含量≤2.0μmol/L，且≥0.2μmol/L，然后将稀释后待测样品与分散液按体积比1:1混合均匀，得到待测组溶液；当待测样品中土霉素含量≤2.0μmol/L时，将分散液与待测样品按体积比1:1混合均匀，得到待测组溶液；②、利用荧光分光光度计在激发波长为394nm下检测待测组溶液，得到发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度FCQDsu和发射波长为620nm的铕的到荧光强度FEuu，依据Stern-Volmer方程为FEuu/FCQDsu＝Ksv[Qu]+b，公式中FEuu为发射波长为620nm的铕的到荧光强度，FCQDsu为发射波长为457nm的碳量子点的荧光强度，Ksv为猝灭常数，b为常数，Qu为待测样品或稀释后待测样品中土霉素的浓度，根据步骤二中计算得到的猝灭常数Ksv，及检测得到的FEuu和FCQDsu，当待测样品中土霉素含量＞2.0μmol/L时，依据稀释比例，按Stern-Volmer方程计算出待测样品中土霉素的浓度Qu，当待测样品中土霉素含量≤2.0μmol/L，且≥0.2μmol/L时，按Stern-Volmer方程计算出待测样品中土霉素的浓度Qu；当待测样品中土霉素含量≤0.2μmol/L，且≥0.057μmol/L时，定性分析待测样品含有土霉素。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910284988.1A CN110003887B (zh) | 2019-04-10 | 2019-04-10 | 一种分子印迹比率荧光探针的制备方法及利用其检测土霉素的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910284988.1A CN110003887B (zh) | 2019-04-10 | 2019-04-10 | 一种分子印迹比率荧光探针的制备方法及利用其检测土霉素的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN110003887A true CN110003887A (zh) | 2019-07-12 |
| CN110003887B CN110003887B (zh) | 2021-06-18 |
Family
ID=67170782
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910284988.1A Expired - Fee Related CN110003887B (zh) | 2019-04-10 | 2019-04-10 | 一种分子印迹比率荧光探针的制备方法及利用其检测土霉素的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN110003887B (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111024673A (zh) * | 2020-01-20 | 2020-04-17 | 南京医科大学附属逸夫医院 | 一种比率荧光分子印迹聚合物及其制备方法和应用 |
| CN112210367A (zh) * | 2020-10-15 | 2021-01-12 | 郑程程 | 荧光检测探针及测定家禽肝脏组织中药物残留的方法 |
| CN112322280A (zh) * | 2020-10-26 | 2021-02-05 | 南开大学 | 一种哌嗪功能化碳量子点的制备方法及其在土霉素检测中的应用 |
| CN112898965A (zh) * | 2021-03-05 | 2021-06-04 | 河南理工大学 | 一种可视化区分检测用比率荧光探针制备及使用方法 |
| CN113201325A (zh) * | 2021-04-15 | 2021-08-03 | 江苏大学 | 一种比率型荧光探针的制备方法及其在四环素类抗生素检测中的应用 |
| CN113831912A (zh) * | 2021-10-20 | 2021-12-24 | 广东石油化工学院 | 一种基于自身荧光增强的土霉素比率荧光探针及制备与应用 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109370565A (zh) * | 2018-11-22 | 2019-02-22 | 江苏大学 | 一种双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子及其制备方法与应用 |
-
2019
- 2019-04-10 CN CN201910284988.1A patent/CN110003887B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN109370565A (zh) * | 2018-11-22 | 2019-02-22 | 江苏大学 | 一种双发射荧光分子印迹聚合物纳米粒子及其制备方法与应用 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| LI WEI等: "Synthesis of molecularly imprinted carbon dot grafted YVO4:Eu3+ for the ratiometric fluorescent determination of paranitrophenol", 《BIOSENSORS & BIOELECTRONICS》 * |
| LIU HAOCHI等: "A facile, green synthesis of biomass carbon dots coupled with molecularly imprinted polymers for highly selective detection of oxytetracycline", 《JOURNAL OF INDUSTRIAL AND ENGINEERING CHEMISTRY》 * |
| 张靓: "基于介孔分子印迹荧光探针的制备、表征及分析应用", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》 * |
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111024673A (zh) * | 2020-01-20 | 2020-04-17 | 南京医科大学附属逸夫医院 | 一种比率荧光分子印迹聚合物及其制备方法和应用 |
| CN111024673B (zh) * | 2020-01-20 | 2021-08-03 | 南京医科大学附属逸夫医院 | 一种比率荧光分子印迹聚合物及其制备方法和应用 |
| CN112210367A (zh) * | 2020-10-15 | 2021-01-12 | 郑程程 | 荧光检测探针及测定家禽肝脏组织中药物残留的方法 |
| CN112322280A (zh) * | 2020-10-26 | 2021-02-05 | 南开大学 | 一种哌嗪功能化碳量子点的制备方法及其在土霉素检测中的应用 |
| CN112898965A (zh) * | 2021-03-05 | 2021-06-04 | 河南理工大学 | 一种可视化区分检测用比率荧光探针制备及使用方法 |
| CN113201325A (zh) * | 2021-04-15 | 2021-08-03 | 江苏大学 | 一种比率型荧光探针的制备方法及其在四环素类抗生素检测中的应用 |
| CN113201325B (zh) * | 2021-04-15 | 2022-12-16 | 江苏大学 | 一种比率型荧光探针的制备方法及其在四环素类抗生素检测中的应用 |
| CN113831912A (zh) * | 2021-10-20 | 2021-12-24 | 广东石油化工学院 | 一种基于自身荧光增强的土霉素比率荧光探针及制备与应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN110003887B (zh) | 2021-06-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110003887A (zh) | 一种分子印迹比率荧光探针的制备方法及利用其检测土霉素的方法 | |
| Xu et al. | A novel visual ratiometric fluorescent sensing platform for highly-sensitive visual detection of tetracyclines by a lanthanide-functionalized palygorskite nanomaterial | |
| Long et al. | A quadruple-channel fluorescent sensor array based on label-free carbon dots for sensitive detection of tetracyclines | |
| CN102735662B (zh) | 一种锌离子的荧光发射光谱分析法 | |
| CN104792762B (zh) | 一种利用CdTe量子点定量检测沙丁胺醇的方法 | |
| CN103525425B (zh) | 痕量硝基芳香炸药可视化检测的量子点试纸及其制备方法 | |
| CN106525783B (zh) | 一种量子点荧光磺胺印迹传感器的制备方法及其用途 | |
| CN105136758B (zh) | 一种对农残检测的Eu3+标记分子印记传感器制备方法 | |
| CN110308289A (zh) | 氨基糖苷类抗生素多残留同时快速荧光检测试剂及应用 | |
| Yan et al. | Two birds with one stone: Ratiometric sensing platform overcoming cross-interference for multiple-scenario detection and accurate discrimination of tetracycline analogs | |
| Liu et al. | A facile luminescence resonance energy transfer method for detecting cyano-containing pesticides in herbal medicines | |
| CN104280389A (zh) | 一种饮料中甲醛的检测方法 | |
| CN107987282A (zh) | 一种对水稳定的镧系金属-有机框架材料及制备和应用 | |
| Zhang et al. | Development of europium (III) complex functionalized silica nanoprobe for luminescence detection of tetracycline | |
| Yang et al. | A ratiometric fluorescence imprinted sensor based on N-CDs and metal–organic frameworks for visual smart detection of malathion | |
| CN105670630B (zh) | 一种水溶性稀土掺杂纳米晶体及其制备方法和应用 | |
| CN108918859B (zh) | 基于量子点标记仿生荧光免疫分析同时检测甲基对硫磷、毒死蜱和敌百虫的方法 | |
| CN105255484B (zh) | 一种用于有机磷农药检测的SrAl2B2O7:Eu3+荧光探针的制备方法 | |
| Wang et al. | Selective fluorescence determination of chromium (VI) in water samples with terbium composite nanoparticles | |
| CN107099293A (zh) | 用于检测链霉素的链霉素分子印迹‑量子点聚合物及制备方法 | |
| CN107024459A (zh) | 用于检测新霉素的新霉素分子印迹‑量子点聚合物及制备方法 | |
| CN110408397A (zh) | 一种CeCl3:Eu3+荧光探针阵列的制备方法 | |
| CN109928912A (zh) | 一种识别汞离子的荧光探针及其制备和识别方法 | |
| CN109975267A (zh) | 一种融合液液微萃取与sers技术检测铬离子的方法 | |
| CN106198476B (zh) | 一种对Mg2+和Ga3+具有高选择性识别功能的试剂的识别方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20210618 |