CN109985231A

CN109985231A - 一种蛋白在制备预防和治疗痴呆症的药物中的应用

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Publication number: CN109985231A
Application number: CN201810002892.7A
Authority: CN
Inventors: 张英豪; 付晶鹏; 顾晓雯; 宛佳; 李小灵; 孙荣勋; 闫桂蕊
Original assignee: Shanghai Qingliu Biological Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Shanghai Puyou Biomedical Co ltd
Priority date: 2018-01-02
Filing date: 2018-01-02
Publication date: 2019-07-09
Also published as: WO2019134481A1

Abstract

本发明提供了一种蛋白在制备预防和治疗痴呆症的药物中的应用，其是sDSS1蛋白应用于制备退行性痴呆症和血管性痴呆症预防药物，或这些疾病前期、早期、中期、晚期治疗药物。sDSS1蛋白与Aβ蛋白发生相互作用，帮助Aβ蛋白清除，屏蔽Aβ蛋白细胞毒性；在动物体上有效降低Aβ沉积，减少可溶性Aβ蛋白浓度并缓解疾病症状。sDSS1蛋白极具临床应用价值。

Description

一种蛋白在制备预防和治疗痴呆症的药物中的应用

技术领域

本发明内容涉及sDSS1蛋白药物在制备预防和治疗痴呆症的药物中的应用，包括用于制备退行性痴呆症和血管性痴呆症的预防药物，或用于制备这些疾病前期、早期、中期或晚期的治疗药物。

背景技术

痴呆症(Dementia)是是脑部疾病的一类，此症导致患者思维能力和学习记忆力长期而逐渐地退化，最常见的痴呆症是阿尔兹海默病(Alzheimer’s Disease，AD)，占痴呆症患者的50-70％，其他还包括血管性痴呆症、路易氏体型痴呆症等。国际阿尔茨海默症协会(Alzheimer’s Disease International)2015年公布的数据显示，全球痴呆症人数大约4680万人，2030年全球患者预计将达到7500万[1]。AD是一种典型的神经退行性疾病，临床表现为进行性学习记忆功能降低和神经系统损伤。AD患者典型病理特征是神经组织中出现β-淀粉样蛋白(β-amyloid，Aβ)斑块和tau蛋白沉积。β淀粉样蛋白假说认为神经组织中Aβ蛋白产生和清除失衡导致的毒性蛋白进行性堆积及由此引起的突触功能紊乱、神经元死亡是导致疾病的关键机制[2][3]。基于β淀粉样蛋白假说，研究人员希望通过药物抑制Aβ蛋白的生成和聚集，或者促进Aβ清除，从而达到预防或治疗疾病的目的[4]。基于动物实验的AD研究结果表明，抗体[5][6]、多肽类药物[7]、小分子类药物[8]可以阻断Aβ聚集或生成，减少斑块形成，减轻动物疾病指征。因此，药物抑制并清除Aβ病理性沉积或可成为治疗AD的有效途径。

过去十几年来，包括礼来、阿斯利康、强生、辉瑞、罗氏在内的数十家医药企业投入数百亿美元研发AD治疗药物，但均遭遇失败，由此可见AD治疗药物开发的困难性与复杂性。礼来公司(Lily)以Aβ蛋白为靶点单抗药物solanezumab，在III期临床实验中显示能够减缓34％中期AD患者的认知能力下降以及18％患者的行为能力下降，但是受广泛的副作用、综合效应评价不具有统计学差异等因素影响，该药物于2016年12月宣布失败。百健(Biogen)2017年3月宣布，Ib期临床实验研究表明，针对Aβ蛋白的实验性单抗药物aducanumab能够减少患者大脑中的β淀粉样蛋白，并且能够改善患者的认知水平。除了上述公司以外，2017年，国际药业巨头，如罗氏、礼来、阿斯利康、默沙东各自宣布了针对AD疾病的新药开发计划，由此可见医药产业界对AD疾病的重点关注。

Shfm1(split hand/split foot malformation type 1)基因是人蟹爪病中的关键基因之一，进化上高度保守，其编码的蛋白DSS1参与到稳定基因组、同源基因重组、DNA损伤修复和细胞增殖等过程[9-12]。本专利发明人的研究结果显示DSS1蛋白作为标签可以通过耗能的酶促反应添加到氧化蛋白上，帮助细胞清除氧化蛋白[13]。这些结果显示DSS1蛋白在生物活动中的重要作用。

以上内容的引文如下：

1.Alzheimer’s Disease International(2016)World Alzheimer Report 2015:the global impact of dementia,an analysis of prevalence,incidence,cost andtrends.

2.Gupta A,Iadecola C(2015)Impaired Aβclearance:a potential linkbetween atherosclerosis and Alzheimer's disease.FrontAging Neurosci 7:115.

3.Bu XL,Xiang Y,Jin WS,Wang J,Shen LL,Huang ZL,Zhang K,Liu YH,Zeng F,Liu JH,Sun HL,Zhuang ZQ,Chen SH,Yao XQ,Giunta B,Shan YC,Tan J,Chen XW,DongZF,Zhou HD,Zhou XF,Song W,Wang YJ(2017)Blood-derived amyloid-βprotein inducesAlzheimer's disease pathologies.Mol Psychiatry.[Epub ahead of print]

4.Citron M.(2010)Alzheimer's disease:strategies for diseasemodification.Nat Rev Drug Discov 9(5):387-98.

5.Winblad B,Andreasen N,Minthon L,Floesser A,Imbert G,Dumortier T,Maguire RP,Blennow K,Lundmark J,Staufenbiel M,Orgogozo JM,Graf A(2012)Safety,tolerability,and antibody response of active Aβimmunotherapy with CAD106 inpatients with Alzheimer's disease:randomised,double-blind,placebo-controlled,first-in-human study.Lancet Neurol 11(7):597-604.

6.Sevigny J,Chiao P,Bussière T,Weinreb PH,Williams L,Maier M,DunstanR,Salloway S,Chen T,Ling Y,O'Gorman J,Qian F,Arastu M,Li M1,Chollate S,Brennan MS,Quintero-Monzon O,Scannevin RH,Arnold HM,Engber T,Rhodes K,FerreroJ,Hang Y,Mikulskis A,Grimm J,Hock C,Nitsch RM,Sandrock A.The antibodyaducanumab reduces Aβplaques in Alzheimer’s disease.Nature 537:50–56.

7.Chang L,Cui W,Yang Y,Xu S,Zhou W,Fu H,Hu S,Mak S,Hu J,Wang Q,Ma VP,Choi TC,Ma ED,Tao L,Pang Y,Rowan MJ,Anwyl R,Han Y,Wang Q(2015)Protectionagainstβ-amyloid-induced synaptic and memory impairments via alteringβ-amyloid assembly by bis(heptyl)-cognitin.Sci Rep 5:10256.

8.Kim HY,Kim HV,Jo S,Lee CJ,Choi SY,Kim DJ,Kim Y(2015)EPPS rescueshippocampus-dependent cognitive deficits in APP/PS1 mice by disaggregation ofamyloid-βoligomers and plaques.Nat Commun 6:8997.

9.Van Silfhout AT,van den Akker PC,Dijkhuizen T,Verheij JB,Olderode-Berends MJ,Kok K,Sikkema-Raddatz B,van Ravenswaaij-Arts CM(2009)Split hand/foot malformation due to chromosome 7q aberrations(SHFM1):additional supportfor functional haploinsufficiency as the causative mechanism.Eur J Hum Genet17(11):1432-8.

10.Li J,Zou C,Bai Y,Wazer DE,Band V,Gao Q(2006)DSS1is required forthe stability of BRCA2.Oncogene 25:1186–1194.

11.Liu J,Doty T,Gibson B,Heyer WD(2010)Human BRCA2protein promotesRAD51filament formation on RPA-covered singlestranded DNA.Nat Struct Mol Biol17:1260–1262.

12.Zhou Q,Kojic M,Cao Z,Lisby M,Mazloum NA,Holloman WK(2007)Dss1interaction with Brh2as a regulatory mechanism for recombinationalrepair.Mol Cell Biol 2:2512–2526.

13.Zhang Y,Chang FM,Huang J,Junco JJ,Maffi SK,Pridgen HI,Catano G,Dang H,Ding X,Yang F,Kim DJ,Slaga TJ,He R,Wei SJ(2014)DSSylation,a novelprotein modification targets proteins induced by oxidative stress,andfacilitates their degradation in cells.Protein Cell 5(2):124-40.

发明内容

Aβ蛋白过渡蓄积是AD发病的关键因素之一，通过药物清除Aβ或抑制Aβ聚集是治疗AD疾病的主要途径之一。本发明提供的sDSS1蛋白可以与Aβ蛋白结合从而加速Aβ蛋白清除，减少Aβ蛋白过渡蓄积，改善疾病症状，具备用于制备临床上AD及其他痴呆症预防药物和治疗药物的潜力。

具体的技术方案如下：

一种蛋白在制备预防和治疗痴呆症的药物中的应用，所述的应用是把sDSS1蛋白用于制备痴呆症预防药物和治疗药物。

优选地，所述的痴呆症是指退行性痴呆症，包括早老性痴呆症、老年性痴呆症、路易氏体型痴呆症、额颞叶型痴呆症。

优选地，所述的痴呆症是血管性痴呆症。

优选地，所述的痴呆症是痴呆前期痴呆症、轻度痴呆期痴呆症、中度痴呆期痴呆症、重度痴呆期痴呆症。

优选地，所述的sDSS1蛋白包括人、黑猩猩、倭黑猩猩、大猩猩、红毛猩猩、白颊长臂猿、川金丝猴、恒河猴、滇金丝猴、东非狒狒、安哥拉疣猴、白顶白眉猴、鬼狒、豚尾猴中的任一sDSS1蛋白序列形成的基础蛋白，其中人sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1，黑猩猩sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2，倭黑猩猩sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：3，大猩猩sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：4，红毛猩猩sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：5，白颊长臂猿sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：6，川金丝猴sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：7,恒河猴sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：8，滇金丝猴sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：9，东非狒狒sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：10，安哥拉疣猴sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：11，白顶白眉猴sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：12，鬼狒sDSS1的氨基酸序列如SEQ IDNO：13，豚尾猴sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：14。

优选地，所述的sDSS1蛋白是与所述的基础蛋白相似度达到70％以上的第一种蛋白。

优选地，所述的sDSS1蛋白是以所述的基础蛋白的氮端58个氨基酸为基础，在氮端或碳端融合其他多肽片段，用于融合的多肽片段的结构特征或氨基酸序列特征与所述的基础蛋白的碳端31个序列相同或相似的第二种蛋白。

优选地，所述的sDSS1蛋白是以所述的基础蛋白的氮端58个氨基酸为基础，在氮端或碳端融合其他氨基酸片段，融合后的蛋白能实现跨膜转运功能的第三种蛋白。

优选地，所述的sDSS1蛋白是利用所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白或第三种蛋白与该种蛋白自身、载体蛋白、抗体或其他任意长度氨基酸片段连接形成的融合蛋白。

优选地，所述的sDSS1蛋白是所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白或融合蛋白进行的修饰产生的多肽/蛋白修饰物。

优选地，所述多肽/蛋白修饰物是针对氨基酸侧链上的氨基、氨基酸侧链上的羰基、氮端末端氨基、碳端末端羰基、半胱氨酸、酪氨酸、丝氨酸、色氨酸进行的特异性或非特异性的1-20个位点的化学修饰。

优选地，所述多肽/蛋白修饰物的修饰方法包括糖基化修饰、脂肪酸修饰、酰基化修饰、Fc片段融合、白蛋白融合、聚乙二醇修饰、右旋糖苷修饰、肝素修饰、聚乙烯吡咯烷酮修饰、聚氨基酸修饰、多聚唾液酸修饰、壳聚糖及其衍生物修饰、凝集素修饰、海藻酸钠修饰、卡波姆修饰、聚乙烯吡咯烷酮修饰、羟丙基甲基纤维素修饰、羟丙基纤维素修饰、乙酰化修饰、甲酰化修饰、磷酸化修饰、甲基化修饰、磺酸化修饰以及其他医药上可用的多肽/蛋白药物修饰方法的一种或一种以上。

优选地，所述的sDSS1蛋白是利用所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白或融合蛋白的氨基酸序列为基础进行的20种基本氨基酸以外的氨基酸进行的1-31个任意氨基酸位点替换的非天然氨基酸替代蛋白。

优选地，所述的非天然氨基酸替代蛋白的氨基酸替换包括替换成羟脯氨酸、羟赖氨酸、硒代半胱氨酸、D-型氨基酸或者人工合成的非天然氨基酸及其衍生物。

优选地，所述的sDSS1蛋白是把所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白、融合蛋白、多肽/蛋白修饰物或非天然氨基酸替代蛋白与医药上可应用的药物载体形成的部分或全部复合体。

优选地，所述复合体的药物载体包含肠溶衣制剂、胶囊、微球/囊、脂质体、微乳液、复乳液、纳米颗粒、磁颗粒、明胶和凝胶中的一种或一种以上。

优选地，所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白、融合蛋白、多肽/蛋白修饰物或复合体发挥屏蔽毒性蛋白毒性的工作浓度为不小于20μg/mL。

优选地，所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白、融合蛋白、多肽/蛋白修饰物或复合体发挥屏蔽毒性蛋白毒性的摩尔浓度比率为不小于0.010；所述摩尔浓度比率是指反应体系中蛋白、多肽/蛋白修饰物或复合体的摩尔浓度与毒性蛋白摩尔浓度的比率。

优选地，所述的sDSS1蛋白是以个体自身sDSS1蛋白为靶点，通过外源药物影响个体自身sDSS1蛋白的水平。

优选地，所述的药物是以sDSS1蛋白、sDSS1蛋白的基因、sDSS1的基因的调控元件或sDSS1的基因的转录产物为药物作用靶点。

优选地，所述的药物是通过影响血液或脑脊液中蛋白酶/肽酶活性从而调节sDSS1蛋白在血液或脑脊液中的含量。

优选地，所述的药物是化学小分子药物、抗体、多肽/蛋白药物、核酸药物或纳米药物形成的第一种药物。

优选地，所述的sDSS1蛋白是以所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白、融合蛋白、多肽/蛋白修饰物、复合体、第一种药物中的任一一种成分的两种或多种的组合形成的第二种药物。

优选地，所述的sDSS1蛋白是以所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白、融合蛋白、多肽/蛋白修饰物、、非天然氨基酸替代蛋白、复合体、第一种药物中的任一一种成分的一种、两种或多种与医药上可用的赋形剂的组合形成的第三种药物。

优选地，所述的sDSS1蛋白是通过表达体系把编码所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白或融合蛋白的核苷酸序列导入体内并表达获得的第四种蛋白。

优选地，所述的表达体系是真核表达质粒载体、腺病毒、腺相关病毒、慢病毒、逆转录病毒、杆状病毒、疱疹病毒、伪狂犬病毒、ZFN基因编辑技术、TALEN基因编辑技术、CRISPR/Cas基因编辑技术或其他医疗上可用的基因编辑技术或病毒载体。

优选地，所述的sDSS1蛋白是通过移植细胞在个体体内获得的所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白或融合蛋白形成的第五种蛋白。

优选地，所述的细胞是任意一种人的干细胞、前体细胞或成体细胞。

优选地，所述的干细胞是胚胎干细胞、诱导多能干细胞、转分化得到的细胞，或者来源于原代培养的干细胞、由母细胞分化得到的多能或单能干细胞。

优选地，所述的sDSS1蛋白是通过移植组织或器官在个体体内获得的所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白或融合蛋白形成的第六种蛋白。

优选地，所述的组织是脑、肝、肾、脾、胰岛的完整器官或部分组织块，或血液、脂肪、肌肉、骨髓、皮肤。

优选地，所述的sDSS1蛋白是通过血清、脑脊液、组织间液输注引入个体体内的第七种蛋白。

优选地，所述的预防药物是包含基础蛋白、第一种至第七种任一蛋白、融合蛋白、多肽/蛋白修饰物、非天然氨基酸替代蛋白、复合体、第一种药物、第二种药物、第三种药物、在表达体系、细胞、组织、器官、体液、组织液的蛋白药物、多肽药物、核酸药物、化学小分子药物、细胞产品、商业化移植组织、注射液、冻干粉、保健品、食品添加剂中的一种或多种。

优选地，所述的治疗药物是包含基础蛋白、第一种至第七种任一蛋白、融合蛋白、多肽/蛋白修饰物、非天然氨基酸替代蛋白、复合体、第一种药物、第二种药物、第三种药物、在表达体系、细胞、组织、器官、体液、组织液的蛋白药物、多肽药物、核酸药物、化学小分子药物、细胞产品、商业化移植组织、注射液、冻干粉、保健品、食品添加剂中的一种或多种。

本发明的特点和/或有益效果有：

1.本发明提供的sDSS1蛋白与Aβ蛋白结合，抑制Aβ蛋白聚集并降低Aβ蛋白与其受体蛋白的结合能力，有效缓解Aβ蛋白引起的细胞毒性。

2.本发明提供的sDSS1蛋白可以加速小胶质细胞清除Aβ蛋白，并且屏蔽Aβ寡聚物毒性，减少Aβ寡聚物引起的小胶质细胞激活。

3.本发明提供的sDSS1蛋白在CL4176线虫上显著改善AD模型线虫的疾病症状，降低线虫组织中Aβ蛋白的蓄积。

4.本发明提供的sDSS1蛋白帮助小鼠清除Aβ，减少血液中Aβ水平。给AD模型APP/PS1小鼠长时间注射sDSS1蛋白可以有效减少脑组织中Aβ斑块沉积。

5.本发明提供的sDSS1蛋白是人和其他灵长类动物所具有的蛋白，分子量相对较小，免疫原性低，并且体内存在天然的蛋白降解机制，因此，临床应用不会引起明显的免疫反应或其他的毒副效应，安全可靠。

综上，本发明提供了一种用于痴呆症治疗的sDSS1蛋白药物，通过分子水平、细胞水平和动物水平的实验验证，sDSS1蛋白可以与Aβ蛋白结合，抑制Aβ聚集，降低Aβ蛋白与受体的结合效率，促进小胶质细胞清除Aβ并减少小胶质细胞激活。在动物实验中，sDSS1蛋白促进血液中Aβ清除，减少组织中Aβ蛋白的过渡蓄积，缓解疾病症状。sDSS1蛋白免疫原性较低，药效显著，具备用于临床上制备痴呆症预防药物，或者用于制备治疗前期、早期、中期、晚期痴呆症药物的潜力。

附图说明

下面结合附图，对本发明做进一步详细的阐述，以使本发明能够清楚、完整，但不是为了限制本发明的保护范围。

图1A-图1B.分子实验显示Aβ蛋白与sDSS1蛋白结合。

图1A，分别把Aβ1-42蛋白和Aβ1-40蛋白与sDSS1蛋白进行孵育，用Aβ蛋白抗体可以检测到Aβ1-42蛋白与sDSS1蛋白形成的复合物(分子量10KD-37KD之间，第3泳道和第4泳道)。Aβ1-40蛋白单独孵育形成部分二聚体，与sDSS1蛋白孵育可以减少二聚体形成。

图1B，用sDSS1蛋白抗体同样可以检测到sDSS1蛋白与Aβ1-42蛋白(第3泳道和第4泳道)或sDSS1蛋白与Aβ1-40蛋白(第6泳道和第7泳道)形成复合物(分子量37-150KD之间)，并且复合物形成随着反应体系中sDSS1蛋白浓度增加而增加。

图1C.ThT实验检测Aβ1-40蛋白聚集。Aβ1-40蛋白在24小时开始出现上升曲线，显示聚集体形成。按照分子量比率加入5％或10％sDSS1蛋白能抑制上升曲线，延长检测时间也没有观察到上升曲线，提示没有Aβ1-40蛋白聚集发生。

图1D.ThT实验检测Aβ1-42蛋白聚集。Aβ1-42蛋白在12小时就发生聚集，显示出上升曲线。按照分子量比率加入5％或10％sDSS1蛋白后，能抑制上升曲线，延长检测时间也没有观察到上升曲线，提示没有Aβ1-42蛋白聚集发生。

图2A-图2B.分子实验显示Aβ蛋白寡聚物与sDSS1蛋白结合。

图2A，分别把Aβ1-42蛋白寡聚物和Aβ1-40蛋白寡聚物与sDSS1蛋白进行孵育，用Aβ蛋白抗体可以检测到Aβ1-42蛋白与sDSS1蛋白形成的复合物(分子量10KD-37KD之间，第3泳道和第4泳道)。Aβ1-42蛋白与sDSS1蛋白的反应没有检测到明显的差异。

图2B，利用sDSS1蛋白抗体可以检测到sDSS1蛋白与Aβ1-42寡聚物(第3泳道)或sDSS1蛋白与Aβ1-40寡聚物(第5泳道)形成的复合物(分子量37-150KD之间)。

图2C.ThT实验检测sDSS1蛋白与Aβ1-40寡聚物反应。在30μM Aβ1-40寡聚物中按照分子量比率加入50％和100％sDSS1蛋白，可以见到Aβ1-40寡聚物荧光值提高，在12小时检测时间内荧光值基本保持不变。

图2D.ThT实验检测sDSS1蛋白与Aβ1-42寡聚物反应。在30μM Aβ1-42寡聚物中按照分子量比率加入50％和100％sDSS1蛋白，可以见到Aβ1-42寡聚物荧光值提高。在12小时检测限内，Aβ1-42寡聚物的荧光值还有上升，加入sDSS1蛋白后，荧光值上升减慢。

图3A.sDSS1蛋白不能与RAGE受体蛋白相互作用。分子互作仪检测结果显示，在结合曲线上，可以看到sDSS1蛋白进样后，看不到明显的上升结合曲线，也看不到明显的解离曲线。

图3B.sDSS1蛋白抑制Aβ蛋白与RAGE受体蛋白的相互作用。Aβ1-42蛋白可以结合到RAGE受体蛋白上，加入sDSS1蛋白后可以抑制Aβ蛋白与RAGE结合效率，Aβ蛋白结合量下降，并且该效应呈现典型的剂量依赖效应。sDSS1蛋白浓度越大，Aβ蛋白结合效率越低。

图4A-图4C.细胞实验验证sDSS1蛋白屏蔽Aβ1-42寡聚物毒性并保护N2a细胞活力。

图1A，Aβ1-42寡聚物引起N2a细胞毒性，加入Aβ1-42寡聚物引起细胞异常聚集和变圆，sDSS1蛋白可以缓解这些现象。

图2B，检测细胞活力发现sDSS1蛋白可以减少细胞活力受Aβ1-42寡聚物影响，等量的sDSS1蛋白加入后，细胞活力几乎不受Aβ1-42寡聚物毒性的影响。

图2C，Aβ1-42引起细胞毒性，显示为溶液LDH含量上升，加入sDSS1蛋白后，溶液LDH含量显著降低，显示细胞毒性水平下降。每组N＝5。数据经ANOVE分析，＊，p-value<0.05；＊＊，p-value<0.01。

图5A-图5B.细胞实验验证sDSS1蛋白屏蔽Aβ1-42寡聚物毒性并保护原代神经元细胞活力。

图5A，10μM Aβ1-42寡聚物可以引起神经元细胞活力下降，加入5μM和10μM sDSS1蛋白后，细胞活力可以被挽回。

图5B，sDSS1蛋白能减少Aβ1-42蛋白引起的细胞毒性水平上升，10μM sDSS1蛋白可以保护细胞几乎不受Aβ1-42寡聚物毒性的影响。每组N＝10。数据经ANOVE分析，＊，p-value<0.05；＊＊，p-value<0.01。

图6A-图6B.sDSS1蛋白促进小胶质细胞清除Aβ蛋白。

图6A，培养基中同时添加Aβ1-42蛋白和sDSS1蛋白，24小时后检测到小胶质细胞胞浆Aβ蛋白的浓度显著高于只添加Aβ蛋白的对照，随着添加的sDSS1蛋白浓度增加，胞浆Aβ蛋白浓度增加。

图6B，相应的，在添加sDSS1蛋白的培养液中的Aβ1-42蛋白的含量显著低于只添加Aβ的对照样品，且呈现剂量依赖效应。每组N＝3。数据经ANOVE分析，＊，p-value<0.05；＊＊，p-value<0.01。

图6C-图6D.sDSS1蛋白降低Aβ1-42蛋白寡聚物引起的小胶质细胞激活。

图6C，Aβ1-42蛋白寡聚物引起小胶质细胞的激活，表现为BV2细胞ROS水平提高，添加不同浓度的sDSS1蛋白后，BV2细胞ROS水平逐渐下降，接近对照组细胞水平。

图6D，Aβ1-42蛋白寡聚物刺激小胶质细胞释放炎症因子TNF-α，sDSS1蛋白添加后减少TNF-α释放。每组N＝3。数据经ANOVE分析，＊，p-value<0.05；＊＊，p-value<0.01。

图7A.sDSS1蛋白缓解CL4176线虫的疾病症状。随着培养时间延长，AD模型CL4176线虫的瘫痪率逐渐上升，在培养液中加入sDSS1蛋白可以显著减慢瘫痪率上升。且缓解效率呈现药物剂量依赖性，随着sDSS1蛋白浓度增加，缓解效应增强。在26小时，对照组未瘫痪线虫的比率仅仅为15.09％，500μg/mL sDSS1蛋白给药组为39.47％，1000μg/mL sDSS1蛋白给药组为65.71％。到了43小时，对照组线虫几乎全部瘫痪(未瘫痪线虫比率小于1％)，而500μg/mL sDSS1蛋白给药组中，未瘫痪的线虫比例为18.42％，1000μg/mL sDSS1蛋白给药组为48.57％。每组线虫数量为90条。该实验重复3次，数据经Log-rank(Mantel-Cox)test分析，＊＊＊，p-value<0.001。

图7B.免疫组织荧光染色检测C14176线虫组织Aβ1-42沉积。AD模型4176线虫组织经过固定和免疫荧光染色，Aβ1-42特异性抗体用于显示Aβ蛋白(绿色荧光)，Hoechst染料用于染色细胞核(蓝色荧光)，白色箭头指示Aβ斑块沉积。在对照组线虫组织中可见典型的Aβ1-42斑块和弥散的Aβ沉淀。经过500μg/mL sDSS1蛋白处理，Aβ斑块和弥散性沉积显著减少。1000μg/mL sDSS1蛋白给药组几乎看不到斑块，弥散性沉积较少。

图7C-图7D.4176线虫组织研磨液中Aβ1-42聚集体和总Aβ蛋白含量减少。

图7C，用Western blotting方法检测线虫组织研磨液中Aβ1-42聚集体，可见经过sDSS1蛋白处理后，多数Aβ聚集体条带减少或完全消失(黑色箭头指示位置)。

图7D，经过ELISA检测组织研磨液中总Aβ蛋白量，发现sDSS1蛋白给药组线虫组织总Aβ蛋白显著降低，1000μg/mL sDSS1蛋白给药组含量仅仅是对照组的59.07％。实验中每组用的线虫数量为400条。

图8A-图8B.sDSS1蛋白促进小鼠血液中Aβ蛋白清除。

图8A，给小鼠静脉注射Aβ蛋白制造急性Aβ上升模型，结果显示sDSS1蛋白给药能加速Aβ蛋白清除。随着sDSS1蛋白给药量增加，Aβ含量明显下降。

图8B，给AD模型APP/PS1小鼠注射sDSS1蛋白，在血液中也可以检测到Aβ水平显著降低。急性模型每组5只小鼠，APP/PS1小鼠每组3只。数据经ANOVE分析，＊＊，p-value<0.01；＊＊＊，p-value<0.001。

图9A-图9C.sDSS1蛋白降低APP/PS1小鼠脑组织Aβ斑块沉积。

图9A，经FSB染料染色后，在11月龄APP/PS1小鼠脑组织中可以看到大量Aβ斑块沉淀(蓝色荧光)，sDSS1蛋白给药后，脑组织海马区斑块沉积下降，显示斑块数量减少，亮度降低。

图9B，图片用Phototshop CS软件处理后，统计斑块面积，结果显示sDSS1蛋白给药后脑组织斑块面积显著低于对照组。

图9C，按照斑块大小统计小型斑块(图9A中标记为1)、中型斑块(图9A中标记为2)、大型斑块(图9A中标记为3)数量，数据显示与对照组相比，sDSS1蛋白给药后组织中中型斑块以及大型斑块数量显著下降，小型斑块没有显著差异。APP/PS1小鼠每组3只。数据经ANOVE分析，n.s.，p-value>0.5；＊＊，p-value<0.01。

具体实施方式

以下内容将结合实例对本发明中的优选方案进行说明和验证，不是对本发明的范围进行限定。本发明的所有范围限定以权利要求书中的限定为准。

下述实施案例中所用的实验方法如无特殊说明，均为常规实验方法。

下述实施案例中所用的sDSS1蛋白为本公司自行生产的人源sDSS1蛋白，蛋白序列见SEQ ID NO：1。本公司对蛋白品质进行质量控制，经检测蛋白纯度大于95％，内毒素(小于3EU/mg蛋白)和其他杂质残留符合标准，可用于动物实验而不引起明显的动物毒性反应。

下述实施案例中材料和试剂，除了sDSS1蛋白其他均可以通过商业途径获取。

实施例1、sDSS1蛋白抑制Aβ蛋白聚集。

实验方法

1.ThT实验Aβ1-42和Aβ1-40蛋白委托苏州强耀生物科技有限公司合成并制成冻干粉，蛋白纯度经检测大于95％。硫代黄素T染料(ThT，Sigam-Aldrich，T3516)首先用甲醇溶解为1mg/mL(3.1mM)，继续用PBS稀释为1mM。Aβ蛋白用20mM NaOH溶解为2mg/mL并用PBS稀释为100μΜ。sDSS1蛋白用PBS稀释为1mg/mL(100μM)。实验在PBS环境中进行，首先在1.5mL离心管中补充需要添加PBS，然后依次加入sDSS1蛋白、Aβ蛋白和ThT染料，sDSS1蛋白摩尔浓度根据预设的浓度梯度添加。对于Aβ1-42蛋白，Aβ蛋白和ThT染料的摩尔浓度分别为30μM和5μM；对于Aβ1-40蛋白，Aβ蛋白和ThT染料的摩尔浓度分别为30μM和10μM。完成后，溶液在混悬仪上震荡混匀，然后取200μL加入到黑色荧光检测板(Costar，3792)中，每组两个复孔。黑色荧光检测板放入多功能酶标仪(Molecular Devices，SpectraMax i3x)上检测荧光值，设置激发光450nm，发射光485nm，检测间隔30分钟，连续检测48个小时。

2.蛋白质相互作用Aβ1-42和Aβ1-40蛋白单体用PBS稀释到20μM并与10μM或20μMsDSS1蛋白混合，20μM Aβ蛋白作为阳性对照。蛋白液混匀后放在4℃孵育过夜。孵育的蛋白液中加入5ⅹ上样缓冲液，混匀并在100℃加热10分钟，制备的样品用于Western Blotting分析。

3.蛋白免疫印迹实验(Western Blotting)15μL制备的上样样品加入上样孔，10％预制胶(Life technology公司C#NP0321BOX)分离蛋白后转移到PVDF膜上。膜依次经过5％脱脂牛奶封闭1小时，第一级抗体Rabbit-anti-Aβ(Cell Signaling Technology公司,#8243)或Rabbit-anti-sDSS1(发明人委托上海睿智化学研究有限公司制备)4℃孵育过夜，TBST溶液清洗三遍；第二级抗体(Goat-anti-rabbit HRP抗体)室温孵育2小时。用TBST清洗三遍，完成后用发光液显影并用X光片显示条带。

实验结果

在缓冲液中，把Aβ1-42或Aβ1-40蛋白与sDSS1蛋白进行共孵育，检测孵育后的混合物，可以看到Aβ1-42蛋白与sDSS1蛋白形成复合物(分子量10KD-37KD)。Aβ1-40蛋白与sDSS1蛋白共孵育可以显著减少二聚体的形成(图1A)。用sDSS1蛋白抗体同样科技检测到Aβ蛋白与sDSS1蛋白复合物信号，并且随着sDSS1蛋白浓度增加，复合物信号增强(图1B)。Aβ1-42或Aβ1-40单体蛋白发生聚集，形成淀粉样沉淀，与ThT染料结合后荧光强度增强。在对照组，可以看到随着孵育时间延长，荧光亮度逐渐增强，显示Aβ1-40和Aβ1-42蛋白发生聚集。但是，在反应体系中加入不同浓度的sDSS1蛋白后，荧光亮度不增加并持续保持在初始值附近，说明sDSS1蛋白显著抑制了Aβ蛋白聚集。而且，最低仅需要在反应体系中添加5％的sDSS1蛋白即可抑制Aβ蛋白聚集反应(图1C，图1D)。这些结果说明，sDSS1蛋白可以与Aβ蛋白发生相互作用形成复合物，并抑制Aβ蛋白聚集体形成过程。

实施例2、sDSS1蛋白与Aβ蛋白寡聚物结合。

实验方法

1.Aβ1-42蛋白溶解及寡聚物制作1mg Aβ1-42或Aβ1-40蛋白加入500μL 20mM NaOH溶液，震荡混匀10分钟后，超声10分钟帮助蛋白溶解。用PBS溶液稀释到100μM，稀释液放在4℃孵育24小时，12000g离心10分钟除去可能的沉淀，获得Aβ1-42或Aβ1-40寡聚物。Aβ寡聚物按照孵育前Aβ单体蛋白浓度来标注。

2.ThT实验sDSS1蛋白用PBS稀释为1mg/mL(100μM)。实验在PBS条件下进行，首先在1.5mL离心管中补充需要添加PBS，然后依次加入sDSS1蛋白、Aβ蛋白寡聚物和ThT染料，sDSS1蛋白摩尔浓度根据预设的浓度梯度添加。对于Aβ1-42蛋白，Aβ蛋白和ThT染料的摩尔浓度分别为30μM和5mΜ；对于Aβ1-40蛋白，Aβ蛋白和ThT染料的摩尔浓度分别为30μM和10mΜ。完成后，溶液在混悬仪上震荡混匀，然后取200μL加入到黑色荧光检测板(Costar，3792)中，每组两个复孔。黑色荧光检测板放入多功能酶标仪上检测荧光值，设置激发光450nm，发射光485nm，检测间隔30分钟，连续检测12个小时。

3.蛋白质相互作用Aβ1-42或Aβ1-40蛋白寡聚物用PBS稀释到20μM并与10μM或20μMsDSS1蛋白混合，20μM Aβ寡聚物作为阳性对照。蛋白液混匀后放在4℃孵育过夜。孵育的蛋白液中加入5ⅹ上样缓冲液，混匀并在100℃加热10分钟，制备的样品用于WesternBlotting分析。

4.蛋白免疫印迹实验(Western Blotting)15μL制备的上样样品加入上样孔，4-12％预制胶(Life technology公司C#NP0321BOX)分离蛋白后转移到PVDF膜上。膜依次经过5％脱脂牛奶封闭1小时，第一级抗体Rabbit-anti-Aβ(Cell Signaling Technology公司,#8243)或Rabbit-anti-sDSS1(发明人委托上海睿智化学研究有限公司制备)4℃孵育过夜，TBST溶液清洗三遍；第二级抗体(Goat-anti-rabbit HRP抗体)室温孵育2小时。用TBST清洗三遍，完成后用发光液显影并用X光片显示条带。

实验结果

Aβ1-40或Aβ1-42的寡聚物是Aβ蛋白产生细胞毒性的主要形式。为了检测sDSS1蛋白与Aβ蛋白寡聚物的反应，首先孵育Aβ蛋白形成寡聚物形式，然后与sDSS1蛋白进行共同孵育并进行western blotting和ThT检测。结果显示，用Aβ蛋白抗体可以检测到sDSS1蛋白与Aβ1-42寡聚物形式的反应，复合物含量随着反应体系中sDSS1蛋白浓度增加而增加(图2A)。用sDSS1蛋白抗体同样可以检测sDSS1蛋白与Aβ蛋白形成的复合物(图2B)。在ThT荧光实验中，可以看到sDSS1蛋白可以与Aβ1-40或Aβ1-42的淀粉样沉淀发生反应，sDSS1蛋白与Aβ1-40淀粉样沉淀反应后，荧光强度增加(图2C)；sDSS1蛋白与Aβ1-42淀粉样沉淀反应后，荧光强度显著降低(图2D)。以上结果说明，sDSS1蛋白也能与Aβ蛋白寡聚物形式发生结合形成复合物，这些相互作用可能抑制Aβ蛋白的细胞毒性。

实施例3、sDSS1蛋白降低Aβ蛋白与受体蛋白的结合效率。

实验方法

1.分子互作实验利用生物大分子相互作用仪(GE，Biacore3000)检测RAGE蛋白与sDSS1蛋白的结合效率。首先用PBS冲洗芯片20分钟直到基线稳定，继续用1μg/mL RAGE蛋白上的His标签把蛋白耦联到传感片NTA芯片(GE)，耦联量大约50RU。把sDSS1蛋白稀释到10μg/mL，上样量20μL，上样时间200秒。完成后，用PBS溶液冲洗，检测洗脱曲线。

2.配体受体结合实验本实验采用ELISA方法检测Aβ蛋白单体与糖基化蛋白受体(receptor of advanced glycation end product，RAGE)结合效率的变化。RAGE蛋白购自北京义翘神州科技有限公司(11629-H02H)。空白酶标板用PBS清洗一遍，每孔加入100μL用PBS稀释的0.5μg/mL RAGE蛋白4℃孵育过夜，完成后用PBS清洗一遍。加入PBS稀释的2％BSAin PBST(0.05％Tween 20)在37℃封闭1个小时，完成后用PBS清洗一遍。加入100μLAβ1-42蛋白或Aβ1-42蛋白与sDSS1蛋白混合物，设置Aβ1-42蛋白浓度分别为0.625μg/mL和0.3125μg/mL以及sDSS1蛋白浓度分别为0.2μg/mL和1μg/mL，室温孵育2小时。用PBST(0.05％Tween20)清洗一遍，加入100μL Rabbit-anti-Aβ(1：10000稀释在PBST溶液，包含0.5％BSA)，室温孵育1小时，完成后用PBST清洗三遍。继续加入100μL辣根过氧化物酶(HRP)耦联的山羊来源抗兔抗体(1：10000稀释在PBST溶液，包含0.5％BSA)，室温孵育1小时，完成后用PBST清洗6遍。加入200μL TMB显色液，室温孵育30分钟，完成后加入50μL终止液。96孔板在酶标仪上读取450nm吸光度值，反映配基配体结合量。

实验结果

利用BIAcore设备，检测发现sDSS1蛋白与RAGE蛋白不能发生结合，在BIAcore上显示没有明显的结合峰(图3A)。ELISA实验显示，Aβ1-42蛋白作为配体可以与RAGE蛋白结合，显示较高的结合量。加入0.2μg/mL和1μg/mL sDSS1蛋白可以降低Aβ1-42与RAGE的结合量，并且该效应呈现明显的浓度依赖效应(图3B)。这些结果说明，sDSS1蛋白与Aβ1-42蛋白反应后可以降低Aβ蛋白结合与受体的结合效率。

实施例4、sDSS1蛋白屏蔽Aβ寡聚物引起的细胞毒性。

实验方法

1.细胞培养小鼠来源神经瘤母细胞(N2a)购自中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库(细胞目录号：TCM29)。N2a细胞培养在含10％胎牛血清(FBS,Gibco,10091148)的Dulbecco's Modified Eagle Medium(DMEM，ThermoFisher Scientific,11995065)完全培养液中，每两天传代一次。

2.原代神经元培养怀孕16天的小鼠用乙醚深度麻醉后颈椎脱臼处死，解剖出E16期胎鼠。胎鼠用冰冷冻麻醉后，压迫颈椎处死，解剖出鼠脑，浸泡在预冷的DMEM溶液(含2％双抗)中，用眼科镊除去软脑膜并反复清洗去除血迹。解剖额叶皮层并用眼科剪剪碎组织，所有组织收集到离心管中，加入5mL 0.05％胰酶消化液在室温下消化15分钟。完成后，加入等体积DMEM完全培养基终止消化，反复吹打组织并用40μm细胞滤器过滤，获得细胞悬液。细胞计数后按照3.0ⅹ10⁴细胞每孔加入96孔板中，200μL DMEM完全培养基，培养板放在37℃培养。24小时后，换成200μL神经元培养基，包含98％Neurobasal(Gibco，21103049)，2％B27supplement(Gibco，17504044)，1％GlutaMAX-1supplement(Gibco，35050061)。以后每两天换一次新鲜神经元培养基。培养的神经元8天之后成熟可以用于后续实验。

2.Aβ1-42蛋白溶解及寡聚物制作1mg Aβ1-42用无血清的DMEM-/-培养基稀释到100μM，稀释液放在4℃孵育24小时，获得Aβ1-42寡聚物蛋白。Aβ寡聚物蛋白按照孵育前Aβ单体蛋白浓度来标注。

3.细胞毒性实验N2a细胞按照2ⅹ10⁴细胞每孔接种到96孔板中。细胞贴壁12小时后，换成无血清DMEM培养基，细胞饥饿处理24小时。Aβ1-42寡聚物用无血清DMEM稀释成20μM溶液。阴性对照组用无血清DMEM，阳性对照组加入20μM Aβ蛋白溶液，实验组除了20μM Aβ蛋白，分别包含10μM、20μM sDSS1蛋白。对于神经元细胞，细胞成熟后，用无血清DMEM按照N2a细胞实验过程稀释Aβ并设置相同的sDSS1蛋白梯度。神经元处理48小时。收集96孔板中的细胞的上清液，100g离心10分钟取上清液用于细胞毒性水平检测；细胞用于细胞活力检测。

4.细胞毒性水平检测乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒购自碧云天生物科技有限公司(C0016)。检测酶活性时，首先根据试剂盒说明书配置好足量检测工作液。在96孔板中每孔加入120μL细胞毒性实验中收集的上清液，然后加入60μL检测工作液，稍混匀，在37℃孵育30分钟。在酶标仪上检测490nm吸光度值，吸光度高低与细胞毒性水平成正比。

5.细胞活力检测细胞增殖/细胞毒性检测试剂盒(CCK-8)购自东仁化学科技(上海)有限公司(CK04)。用无血清DMEM按照1：20(体积比，v/v)稀释CCK-8溶液制成工作液。96孔中的细胞处理完成后，弃去旧培养基，每孔加入100μl CCK-8工作液。培养板放在培养箱中孵育1-2小时，然后在多功能酶标仪上检测450nm吸光度值，反映细胞活力。

实验结果

为了检测sDSS1蛋白对Aβ1-42蛋白寡聚物细胞毒性的屏蔽作用，分别检测sDSS1蛋白对小鼠神经瘤母细胞和原代培养小鼠神经元的保护效应。实验结果显示，Aβ1-42寡聚物蛋白能引起N2a细胞明显的细胞毒性，寡聚物处理48小时导致细胞变圆及异常聚集，加入sDSS1蛋白可以减少细胞毒性反应(图4A)。用CCK-8试剂盒检测细胞活力发现，sDSS1蛋白可以显著屏蔽Aβ1-42寡聚物引起的细胞活力下降，20μM sDSS1蛋白可以保护细胞几乎不受Aβ1-42寡聚物的影响(图4B)。LDH试剂盒检测细胞毒性反应水平，结果显示sDSS1蛋白组的细胞毒性反应水平明显下降(图4C)。在小鼠原代神经元细胞上，sDSS1蛋白同样显示对Aβ寡聚物毒性的屏蔽效应，神经元的细胞活力受到sDSS1蛋白保护(图5A)，细胞毒性反应水平下降(图5B)。这些结果显示，sDSS1蛋白可以显著屏蔽Aβ寡聚物蛋白引起的细胞毒性。

实施例5、sDSS1蛋白促进小胶质细胞清除Aβ蛋白并减少小胶质细胞激活。

实验方法

1.细胞培养小鼠小胶质细胞(BV2)购自国家实验细胞资源共享平台(3111C0001CCC000063)。BV2细胞培养在含10％FBS的DMEM培养液中，每两天传代一次。

2.Aβ清除实验BV2细胞按照3ⅹ10⁵每孔接种到6孔板中，细胞贴壁12小时。Aβ蛋白预先用DMEM完全培养液稀释成1μM溶液。阴性对照组不加蛋白，阳性对照组加入1μM Aβ蛋白溶液，实验组除了1μM Aβ蛋白，分别包含0.5μM、2μM sDSS1蛋白。处理24小时后，收集上清液500μL，100g离心10分钟，取上清液用于ELISA实验检测Aβ1-42水平。离心收集所有细胞，裂解液后12000g离心收取裂解上清液用于ELISA检测Aβ1-42水平。细胞裂解液用BCA蛋白定量试剂盒(ThermoFisher，23252)进行蛋白浓度定量。

3.BV2细胞激活实验BV2细胞按照1.5ⅹ10⁵每孔接种到6孔板中，12小时后换成无血清的DMEM培养基，细胞饥饿处理24小时。Aβ1-42寡聚物用无血清DMEM稀释成20μM溶液。阴性对照组不加蛋白，阳性对照组加入20μM Aβ蛋白溶液，实验组除了20μM Aβ蛋白，分别包含10μM、20μM sDSS1蛋白。细胞处理24小时后，收集上清液，100g离心10分钟取上清液用于ELISA实验检测溶液TNFα水平。收集所有细胞用于ROS水平检测。

4.ELISA检测将上述Aβ清除实验中获得培养液用于ELISA实验中，培养液样品用试剂盒提供的标准品蛋白稀释液(Standard diluent buffer)稀释50倍用于后续检测。按ELISA试剂盒(Invitrogen，Human Aβ42ELISA kit，KHB3441)说明书要求，依次完成标准品蛋白和待测线虫蛋白孵育和清洗，加入显色底物孵育20分钟，加入终止液，在酶标仪上检测450nm吸光度值。根据标准曲线计算出蛋白样品中的Aβ蛋白浓度。

5.ROS水平检测活性氧检测试剂盒购自碧云天生物科技有限公司(S0033)。阳性对照细胞预先在37℃用1μM Rosup处理20分钟。取300μL细胞悬液，100g离心5分钟，加PBS清洗细胞两次。加入300μL无血清DMEM稀释的荧光探针(DCFDA)(1:1000)，37℃孵育20分钟。100g离心5分钟，用PBS清洗细胞三次，用流式细胞仪(Millipore，guava Easycyte)检测。绿色荧光(488nm)强度反映了细胞ROS水平。

6.TNFα水平检测BV2细胞激活实验中收集的上清液用试剂盒提供的StandardDilute buffer稀释10倍用于ELISA检测。按ELISA试剂盒(Invitrogen，TNF alpha MouseELISA Kit，KMC3011C)说明书要求，依次完成标准品蛋白和待测线虫蛋白孵育和清洗，加入显色底物孵育20分钟，加入终止液，在酶标仪上检测450nm吸光度值。根据标准曲线计算出上清液中的TNFα浓度。

实验结果

小胶质细胞是神经组织中清除Aβ蛋白等毒性蛋白的主要细胞。为了在检测sDSS1蛋白能否帮助小胶质细胞清除Aβ蛋白，在培养的小鼠小胶质细胞中加入1μM Aβ1-42蛋白和不同浓度的sDSS1蛋白。结果显示，小胶质细胞胞浆中检测到Aβ蛋白，随着sDSS1蛋白加入，细胞胞浆Aβ蛋白浓度显著提高(图6A)。相应的，培养液中Aβ蛋白残留减少，随着溶液中sDSS1蛋白浓度增加，Aβ蛋白浓度越来越低(图6B)。这些结果说明sDSS1蛋白帮助小胶质细胞清除Aβ蛋白。在培养液中加入高浓度Aβ蛋白寡聚物并加入不同浓度的sDSS1蛋白，可以看到培养液中的sDSS1蛋白能显著降低激活的小胶质细胞数量，细胞ROS水平显著降低(图6C)，炎症因子TNF-α释放随着sDSS1蛋白浓度增加逐渐降低(图6D)。这些结果说明，sDSS1蛋白能刺激小胶质细胞清除Aβ蛋白并屏蔽Aβ寡聚物对小胶质细胞的影响。

实施例6、sDSS1蛋白降低AD模型线虫的疾病症状。

实验方法

1.AD模型线虫瘫痪检测线虫实验平台由上海南方模式生物科技股份有限公司提供，AD线虫模型由线虫实验平台提供。首先将成年CL4176线虫挑入固体培养基中，放入16℃培养箱，培养2小时后，挑出全部成虫，将虫卵放入16℃培养箱。48小时后，培养皿转入25℃培养箱中继续培养并分别加入不同浓度的sDSS1蛋白药物处理，对照组0μg/ml，低剂量组500μg/ml，高剂量组1000μg/ml。药物连续处理18小时后，开始统计CL4167线虫瘫痪个数，每2小时统计一次，统计完毕后作图分析。线虫瘫痪标准是金属丝轻触线虫时，线虫身体僵直不能活动。

2.线虫蛋白样品收集CL4176线虫在不同浓度药物中处理20小时，完成后收集线虫，每组400条线虫。线虫用PBS清洗三遍并盛装在1.5mL离心管中，每管加入150μL线虫裂解液(线虫裂解液含62mM Tris-HCl，2％SDS，10％甘油，4％β-巯基乙醇，cocktail蛋白酶抑制剂)，液氮冻融2次，60Hz超声5分钟，12000rpm离心10分钟，取上清液即为线虫总蛋白。线虫蛋白加入上样缓冲液(Loading buffer)并在100℃加热处理10分钟，制成可用于Weternblotting分析的蛋白样品。

3.Western Blotting线虫蛋白样品用SDS-PAGE电泳进行分离，电泳条件为：10％变性预制胶胶(C#NP0321BOX，购自Life technology公司)，MES电泳液，200V，30分钟。电泳完毕后，进行转膜，转膜条件为：100V恒压湿转60分钟，PVDF膜。完成的膜首先用5％脱脂奶粉(溶解在PBST中)室温封闭1小时，然后依次用兔来源Aβ抗体稀释液4℃孵育过夜(1:3000稀释在封闭液中)，PBST清洗三次，HRP耦联驴来源抗兔抗体稀释液室温孵育1小时(1：5000稀释到PBST中)。ECL显色后压片并拍照保存。内参采用tubulin蛋白(抗体购自碧云天生物技术有限公司，AF0001)。

4.ELISA检测将上述Western blotting实验中提取的线虫总蛋白用于ELISA实验中，蛋白样品用试剂盒提供的标准品蛋白稀释液(Standard diluent buffer)稀释三倍用于后续检测，蛋白稀释液加入体积根据Western blotting实验中内参的数据进行调整，保证加入的总蛋白量一致。按ELISA试剂盒说明书要求，依次完成标准品蛋白和待测线虫蛋白孵育和清洗，加入显色底物孵育20分钟，加入终止液，在酶标仪上检测450nm吸光度值。根据标准曲线计算出蛋白样品中的Aβ蛋白浓度。

5.线虫免疫组织化学染色CL4176线虫在不同浓度药物中处理20小时，完成后收集线虫，每组50-100条线虫。线虫用PBS清洗一遍并盛装在1.5mL离心管中，弃去上清后加入4％多聚甲醛(溶解在PBS中，pH7.2)4℃条件下固定过夜。固定好的线虫首先用清洗缓冲液(包含10mm Tris/HCl，1％Triton-X100，1mM EDTA，pH7.4)冲洗一遍。线虫依次用继续用含1％β巯基乙醇的清洗液室温孵育1小时，硼酸缓冲液(包含25mM H₃BO₃，12.5mM NaOH，10mMDTT，pH9.2)室温孵育1慢慢5分钟，含1％H₂O₂的清洗缓冲液室温孵育15分钟。完成后，线虫用清洗缓冲液清洗一遍，加入封闭液(包含1％BSA、0.5％Triton-X100，1mM EDTA，PBS)室温封闭两个小时。处理好的线虫依次经过一抗稀释液(Aβ抗体，1：100稀释到封闭液中)4℃孵育过夜，二抗稀释液(按照1：1000比例添加Hoechst)(Donkey-anti-Rabbit-Alex Fluor 488(购自Life Technology公司，A-11008)按照1：5000稀释在PBST中)室温孵育1小时。PBST清洗三遍，完成后封片并用Confocol激光共聚焦显微镜(Nikon，Nikon C1Plus)观察，拍照分析。

实验结果

CL4176线虫作为AD动物模型用于检测急性Aβ1-42蛋白蓄积引起的毒性，被用于药物评价。在线虫瘫痪实验中，加入不同浓度的sDSS1蛋白可以显著降低线虫瘫痪水平，且效应呈现出显著的浓度依赖(图7A)。在43小时后检测，对照组未瘫痪线虫的比例低于1％，而给药组仍旧有18.42％(500μg/mL sDSS1蛋白)和48.57％(1000μg/mL sDSS1蛋白)的线虫表现正常。总体分析，半数线虫发生瘫痪的中位时间分别是对照组22小时、低浓度给药组24小时、高浓度给药组42小时。这些结果说明，sDSS1蛋白能有效降低AD模型线虫的疾病症状。利用免疫组织化学检测线虫体内Aβ沉积，可以在对照线虫体内看到明显的颗粒状聚集体，而sDSS1蛋白给药组没有检测到聚集体或者检测到很少的颗粒，说明sDSS1蛋白减少了Aβ聚集物形成(图7B)。利用Western blotting实验检测线虫研磨液中Aβ蛋白含量，结果同样表明，sDSS1蛋白减少了Aβ蛋白多聚体的含量(图7C)。用ELISA实验检测组织裂解液中Aβ1-42蛋白含量，可以看到sDSS1蛋白处理的线虫中Aβ蛋白显降低，1000μg/mL sDSS1蛋白处理组Aβ蛋白量仅是对照组的59.09％(图7D)。通过以上实验，我们在AD线虫模型上验证sDSS1蛋白可以降低Aβ1-42聚集体形成，减少组织Aβ蓄积，缓解AD模型线虫的疾病症状。

实施例7、sDSS1蛋白加速小鼠体内Aβ蛋白的清除。

实验方法

1.APP/PS1小鼠血液Aβ清除实验APP/PS1小鼠(2月龄，雄性)购自南京大学模式动物中心。APP/PS1小鼠从8月龄开始，按照25mg/kg体重连续尾静脉注射sDSS1蛋白8周，完成后处死小鼠，取血并离心取血浆用于ELISA检测血液中Aβ1-42水平。

2.Aβ蛋白急性清除实验ICR小鼠(6-8周龄，雄性)购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。小鼠根据体重分成四组，包括阴性对照组(注射生理盐水)、阳性对照组(Aβ蛋白单独给药)、低剂量给药组(Aβ给药和5mg/kg体重注射sDSS1蛋白)、高剂量给药组(Aβ给药和30mg/kg体重注射sDSS1蛋白)。实验开始时，小鼠首先根据分组尾静脉注射sDSS1蛋白，阴性对照组和阳性对照组注射等量PBS，1小时后，阳性对照组和给药组按照10mg/kg体重尾静脉注射Aβ蛋白，阴性对照组注射等量生理盐水。注射完成后，小鼠正常饲养，2小时后处死小鼠，心脏取血，3500g离心20分钟取血浆用于ELISA检测Aβ1-42水平。

3.ELISA检测将上述实验中获得的血浆样品(必要时稀释1-3倍)用于ELISA实验。按ELISA试剂盒说明书要求，依次完成标准品蛋白和待测血浆样品的孵育和清洗，加入显色底物孵育20分钟，加入终止液，在酶标仪上检测450nm吸光度值。根据标准曲线计算出血浆中的Aβ蛋白浓度。

实验结果

为了检测sDSS1蛋白能否帮助清除Aβ蛋白，我们分别采用急性Aβ水平增加模型和慢性Aβ水平增加模型。在急性模型中，通过尾静脉注射高浓度Aβ1-42蛋白，同时注射sDSS1蛋白。实验结果显示，不同浓度的sDSS1蛋白给药都能显著降低血液Aβ蛋白水平，并且该效应呈现出一定的剂量依赖性(图8A)。在慢性模型中，给AD模型APP/PS1小鼠长时间尾静脉注射sDSS1蛋白，结果发现sDSS1蛋白同样能减少血液Aβ蛋白的水平(图8B)。这两个结果说明sDSS1蛋白能帮助清除小鼠血液中Aβ蛋白。

实施例8、sDSS1蛋白降低AD模型小鼠脑组织斑块沉积。

实验方法

1.AD模型小鼠给药APP/PS1小鼠(2月龄，雄性)购自南京大学模式动物中心。APP/PS1小鼠从9月龄开始，按照50mg/kg体重连续尾静脉注射sDSS1蛋白8周，完成后小鼠用于行为学实验检测。行为学实验完成后，小鼠处死，取血浆用于血液指标检测，取脑组织并在4％多聚甲醛固定用于免疫组织化学染色分析斑块沉积水平。

2.免疫组织化学实验处理完成的小鼠依次用50m生理盐水和50m预冷的4％多聚甲醛溶液进行心脏灌注，完成后取脑组织浸泡在4％多聚甲醛中固定2天，完成后用30％蔗糖溶液脱水并用包埋剂包埋制成组织块。脑组织用冰冻切片机切成10um厚的脑片用于后续免疫组织化学分析。脑片首先用PBS清洗一遍除去包埋剂，然后用FSB工作液(Dojindo,F308)(用50％乙醇溶液稀释成0.05％工作液)孵育30分钟，完成后切片浸泡到饱和碳酸锂溶液中，最后用50％乙醇溶液清洗一遍。切片用封片剂封片并用荧光显微镜观察，拍照分析淀粉样沉淀斑块数量和大小。

实验结果

AD模型小鼠给药8周后，脑片经染色观察组织中Aβ斑块沉积水平。结果显示，在对照组11月龄APP/PS1sDSS1小鼠的脑组织中检测到大小不一的斑块，但是sDSS1蛋白给药8周之后，组织中斑块沉积显著降低(图9A)。利用photoshop CS软件统计斑块面积，结果给药组斑块面积仅是对照组三分之一(图9B)。根据斑块大小统计斑块数量，结果看到给药组小鼠脑组织中型斑块数量显著降低，几乎找不到大型斑块沉积(图9C)。这些结果说明，sDSS1蛋白给药能显著降低AD模型小鼠脑组织Aβ蛋白沉积。

序列表

<110> 上海清流生物医药科技有限公司

<120> 一种蛋白在制备预防和治疗痴呆症的药物中的应用

<160> 14

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 89

<212> PRT

<213> 人类(Homosapiens)

<400> 1

Met Ser Glu Lys Lys Gln Pro Val Asp Leu Gly Leu Leu Glu Glu Asp

1 5 10 15

Asp Glu Phe Glu Glu Phe Pro Ala Glu Asp Trp Ala Gly Leu Asp Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Ala His Val Trp Glu Asp Asn Trp Asp Asp Asp Asn Val

35 40 45

Glu Asp Asp Phe Ser Asn Gln Leu Arg Ala Thr Val Leu Leu Met Ile

50 55 60

Leu Val Cys Glu Thr Pro Tyr Gly Cys Tyr Val Leu His Gln Lys Gly

65 70 75 80

Arg Met Cys Ser Ala Phe Leu Cys Cys

85

<210> 2

<211> 89

<212> PRT

<213> 黑猩猩(Pantroglodytes)

<400> 2

Met Ser Glu Lys Lys Gln Pro Val Asp Leu Gly Leu Leu Glu Glu Asp

1 5 10 15

Asp Glu Phe Glu Glu Phe Pro Ala Glu Asp Trp Ala Gly Leu Asp Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Ala His Val Trp Glu Asp Asn Trp Asp Asp Asp Asn Val

35 40 45

Glu Asp Asp Phe Ser Asn Gln Leu Arg Ala Thr Val Leu Leu Met Ile

50 55 60

Leu Val Cys Glu Thr Pro Tyr Gly Cys Tyr Val Leu His Gln Lys Gly

65 70 75 80

Arg Met Cys Ser Ala Phe Leu Cys Cys

85

<210> 3

<211> 89

<212> PRT

<213> 倭黑猩猩(Panpaniscus)

<400> 3

Met Ser Glu Lys Lys Gln Pro Val Asp Leu Gly Leu Leu Glu Glu Asp

1 5 10 15

Asp Glu Phe Glu Glu Phe Pro Ala Glu Asp Trp Ala Gly Leu Asp Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Ala His Val Trp Glu Asp Asn Trp Asp Asp Asp Asn Val

35 40 45

Glu Asp Asp Phe Ser Asn Gln Leu Arg Ala Thr Val Leu Leu Met Ile

50 55 60

Leu Val Cys Glu Thr Pro Tyr Gly Cys Tyr Val Leu His Gln Lys Gly

65 70 75 80

Arg Met Cys Ser Ala Phe Leu Cys Cys

85

<210> 4

<211> 89

<212> PRT

<213> 大猩猩(Nomascusleucogenys)

<400> 4

Met Ser Glu Lys Lys Gln Pro Val Asp Leu Gly Leu Leu Glu Glu Asp

1 5 10 15

Asp Glu Phe Glu Glu Phe Pro Ala Glu Asp Trp Ala Gly Leu Asp Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Ala His Val Trp Glu Asp Asn Trp Asp Asp Asp Asn Val

35 40 45

Glu Asp Asp Phe Ser Asn Gln Leu Arg Ala Thr Val Leu Leu Met Val

50 55 60

Leu Val Cys Glu Thr Pro Tyr Gly Cys Tyr Val Leu His Gln Lys Glu

65 70 75 80

Arg Met Cys Ser Ala Phe Leu Cys Cys

85

<210> 5

<211> 89

<212> PRT

<213> 红毛猩猩(Gorillagorilla)

<400> 5

Met Ser Glu Lys Lys Gln Pro Val Asp Leu Gly Leu Leu Glu Glu Asp

1 5 10 15

Asp Glu Phe Glu Glu Phe Pro Ala Glu Asp Trp Ala Gly Leu Asp Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Ala His Val Trp Glu Asp Asn Trp Asp Asp Asp Asn Val

35 40 45

Glu Asp Asp Phe Ser Asn Gln Leu Arg Val Thr Val Leu Leu Met Ile

50 55 60

Leu Val Cys Glu Thr Leu Tyr Gly Cys Tyr Val Leu His Gln Lys Gly

65 70 75 80

Arg Met Cys Ser Ala Phe Leu Cys Cys

85

<210> 6

<211> 89

<212> PRT

<213> 白颊长臂猿(Pongoabelii)

<400> 6

Met Ser Glu Lys Lys Gln Pro Val Asp Leu Gly Leu Leu Glu Glu Asp

1 5 10 15

Asp Glu Phe Glu Glu Phe Pro Ala Glu Asp Trp Ala Gly Leu Asp Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Ala His Val Trp Glu Asp Asn Trp Asp Asp Asp Asn Val

35 40 45

Glu Asp Asp Phe Ser Asn Gln Leu Arg Ala Thr Ile Leu Leu Met Ile

50 55 60

Leu Val Cys Glu Thr Pro Tyr Gly Cys Tyr Val Leu His Gln Lys Gly

65 70 75 80

Arg Met Cys Ser Ala Phe Leu Cys Cys

85

<210> 7

<211> 89

<212> PRT

<213> 川金丝猴(Rhinopithecus roxellana)

<400> 7

Met Ser Glu Lys Lys Gln Pro Val Asp Leu Gly Leu Leu Glu Glu Asp

1 5 10 15

Asp Glu Phe Glu Glu Phe Pro Ala Glu Asp Trp Ala Gly Leu Asp Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Ala His Val Trp Glu Asp Asn Trp Asp Asp Asp Asn Val

35 40 45

Glu Asp Asp Phe Ser Asn Gln Leu Arg Ala Thr Val Leu Leu Met Ile

50 55 60

Lys Val Tyr Glu Thr Pro Tyr Gly Cys Tyr Ile Leu His Gln Lys Gly

65 70 75 80

Arg Met Cys Ser Ala Phe Leu Cys Cys

85

<210> 8

<211> 89

<212> PRT

<213> 恒河猴(Macacamulatta)

<400> 8

Met Ser Glu Lys Lys Gln Pro Val Asp Leu Gly Leu Leu Glu Glu Asp

1 5 10 15

Asp Glu Phe Glu Glu Phe Pro Ala Glu Asp Trp Ala Gly Leu Asp Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Ala His Val Trp Glu Asp Asn Trp Asp Asp Asp Asn Val

35 40 45

Glu Asp Asp Phe Ser Asn Gln Leu Arg Ala Thr Val Leu Leu Met Ile

50 55 60

Lys Val Tyr Glu Thr Pro Tyr Gly Cys Tyr Ile Leu His Gln Lys Gly

65 70 75 80

Arg Met Cys Ser Ala Phe Leu Cys Cys

85

<210> 9

<211> 89

<212> PRT

<213> 滇金丝猴(Rhinopithecusbieti)

<400> 9

Met Ser Glu Lys Lys Gln Pro Val Asp Leu Gly Leu Leu Glu Glu Asp

1 5 10 15

Asp Glu Phe Glu Glu Phe Pro Ala Glu Asp Trp Ala Gly Leu Asp Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Ala His Val Trp Glu Asp Asn Trp Asp Asp Asp Asn Val

35 40 45

Glu Asp Asp Phe Ser Asn Gln Leu Arg Ala Thr Val Leu Leu Met Ile

50 55 60

Lys Val Tyr Glu Thr Pro Tyr Gly Cys Tyr Ile Leu His Gln Lys Gly

65 70 75 80

Arg Met Cys Ile Ala Phe Leu Cys Cys

85

<210> 10

<211> 89

<212> PRT

<213> 东非狒狒(Colobusangolensis)

<400> 10

Met Ser Glu Lys Lys Gln Pro Val Asp Leu Gly Leu Leu Glu Glu Asp

1 5 10 15

Asp Glu Phe Glu Glu Phe Pro Ala Glu Asp Trp Ala Gly Leu Asp Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Ala His Val Trp Glu Asp Asn Trp Asp Asp Asp Asn Val

35 40 45

Glu Asp Asp Phe Ser Asn Gln Leu Arg Ala Thr Val Leu Leu Met Lys

50 55 60

Lys Val Tyr Glu Thr Pro Tyr Gly Cys Tyr Ile Leu His Gln Lys Gly

65 70 75 80

Arg Met Cys Ser Ala Phe Leu Cys Cys

85

<210> 11

<211> 89

<212> PRT

<213> 安哥拉疣猴(Cercocebusatys)

<400> 11

Met Ser Glu Lys Lys Gln Pro Val Asp Leu Gly Leu Leu Glu Glu Asp

1 5 10 15

Asp Glu Phe Glu Glu Phe Pro Ala Glu Asp Trp Ala Gly Leu Asp Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Ala His Val Trp Glu Asp Asn Trp Asp Asp Asp Asn Val

35 40 45

Glu Asp Asp Phe Ser Asn Gln Leu Arg Ala Thr Val Leu Leu Met Ile

50 55 60

Lys Val Tyr Glu Thr Pro Tyr Gly Cys Tyr Ile Leu His Gln Lys Gly

65 70 75 80

Arg Met Cys Ser Ala Phe Leu Cys Cys

85

<210> 12

<211> 89

<212> PRT

<213> 白顶白眉猴(M.leucophaeus)

<400> 12

Met Ser Glu Lys Lys Gln Pro Val Asp Leu Gly Leu Leu Glu Glu Asp

1 5 10 15

Asp Glu Phe Glu Glu Phe Pro Ala Glu Asp Trp Ala Gly Leu Asp Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Ala His Val Trp Glu Asp Asn Trp Asp Asp Asp Asn Val

35 40 45

Glu Asp Asp Phe Ser Asn Gln Leu Arg Ala Thr Val Leu Leu Met Ile

50 55 60

Lys Val Tyr Glu Thr Pro Tyr Gly Cys Tyr Ile Leu His Gln Lys Gly

65 70 75 80

Arg Met Cys Ser Ala Phe Leu Cys Cys

85

<210> 13

<211> 89

<212> PRT

<213> 鬼狒(Macacanemestrina)

<400> 13

Met Ser Glu Lys Lys Gln Pro Val Asp Leu Gly Leu Leu Glu Glu Asp

1 5 10 15

Asp Glu Phe Glu Glu Phe Pro Ala Glu Asp Trp Ala Gly Leu Asp Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Ala His Val Trp Glu Asp Asn Trp Asp Asp Asp Asn Val

35 40 45

Glu Asp Asp Phe Ser Asn Gln Leu Arg Ala Thr Val Leu Leu Met Ile

50 55 60

Lys Val Tyr Glu Thr Pro Tyr Gly Cys Tyr Ile Leu His Gln Lys Gly

65 70 75 80

Arg Met Cys Ser Ala Phe Leu Cys Cys

85

<210> 14

<211> 89

<212> PRT

<213> 豚尾猴(Papioanubis)

<400> 14

Met Ser Glu Lys Lys Gln Pro Val Asp Leu Gly Leu Leu Glu Glu Asp

1 5 10 15

Asp Glu Phe Glu Glu Phe Pro Ala Glu Asp Trp Ala Gly Leu Asp Glu

20 25 30

Asp Glu Asp Ala His Val Trp Glu Asp Asn Trp Asp Asp Asp Asn Val

35 40 45

Glu Asp Asp Phe Ser Asn Gln Leu Arg Ala Thr Val Leu Leu Met Ile

50 55 60

Lys Val Tyr Glu Thr Pro Tyr Gly Cys Tyr Ile Leu His Gln Lys Gly

65 70 75 80

Arg Met Cys Ser Ala Phe Leu Cys Cys

85

Claims

1.一种蛋白在制备预防和治疗痴呆症的药物中的应用，其特征在于，所述的应用是把sDSS1蛋白用于制备痴呆症预防药物和治疗药物。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的痴呆症是指退行性痴呆症，包括早老性痴呆症、老年性痴呆症、路易氏体型痴呆症、额颞叶型痴呆症。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的痴呆症是血管性痴呆症。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的痴呆症是痴呆前期痴呆症、轻度痴呆期痴呆症、中度痴呆期痴呆症、重度痴呆期痴呆症。

5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白包括人、黑猩猩、倭黑猩猩、大猩猩、红毛猩猩、白颊长臂猿、川金丝猴、恒河猴、滇金丝猴、东非狒狒、安哥拉疣猴、白顶白眉猴、鬼狒、豚尾猴中的任一sDSS1蛋白序列形成的基础蛋白，其中人sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：1，黑猩猩sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2，倭黑猩猩sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：3，大猩猩sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：4，红毛猩猩sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：5，白颊长臂猿sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：6，川金丝猴sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：7,恒河猴sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：8，滇金丝猴sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：9，东非狒狒sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：10，安哥拉疣猴sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：11，白顶白眉猴sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：12，鬼狒sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：13，豚尾猴sDSS1的氨基酸序列如SEQ ID NO：14。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白是与所述的基础蛋白相似度达到70％以上的第一种蛋白。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白是以所述的基础蛋白的氮端58个氨基酸为基础，在氮端或碳端融合其他多肽片段，用于融合的多肽片段的结构特征或氨基酸序列特征与所述的基础蛋白的碳端31个序列相同或相似的第二种蛋白。

8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白是以所述的基础蛋白的氮端58个氨基酸为基础，在氮端或碳端融合其他氨基酸片段，融合后的蛋白能实现跨膜转运功能的第三种蛋白。

9.根据权利要求5-8任一所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白是利用所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白或第三种蛋白与该种蛋白自身、载体蛋白、抗体或其他任意长度氨基酸片段连接形成的融合蛋白。

10.根据权利要求5-9任一所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白是所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白或融合蛋白进行的修饰产生的多肽/蛋白修饰物。

11.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述多肽/蛋白修饰物是针对氨基酸侧链上的氨基、氨基酸侧链上的羰基、氮端末端氨基、碳端末端羰基、半胱氨酸、酪氨酸、丝氨酸、色氨酸进行的特异性或非特异性的1-20个位点的化学修饰。

12.根据权利要求10所述的应用，其特征在于，所述多肽/蛋白修饰物的修饰方法包括糖基化修饰、脂肪酸修饰、酰基化修饰、Fc片段融合、白蛋白融合、聚乙二醇修饰、右旋糖苷修饰、肝素修饰、聚乙烯吡咯烷酮修饰、聚氨基酸修饰、多聚唾液酸修饰、壳聚糖及其衍生物修饰、凝集素修饰、海藻酸钠修饰、卡波姆修饰、聚乙烯吡咯烷酮修饰、羟丙基甲基纤维素修饰、羟丙基纤维素修饰、乙酰化修饰、甲酰化修饰、磷酸化修饰、甲基化修饰、磺酸化修饰以及其他医药上可用的多肽/蛋白药物修饰方法的一种或一种以上。

13.根据权利要求5-9所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白是利用所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白或融合蛋白的氨基酸序列为基础进行的20种基本氨基酸以外的氨基酸进行的1-31个任意氨基酸位点替换的非天然氨基酸替代蛋白。

14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述的非天然氨基酸替代蛋白的氨基酸替换包括替换成羟脯氨酸、羟赖氨酸、硒代半胱氨酸、D-型氨基酸或者人工合成的非天然氨基酸及其衍生物。

15.根据权利要求5-14任一所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白是把所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白、融合蛋白、多肽/蛋白修饰物或非天然氨基酸替代蛋白与医药上可应用的药物载体形成的部分或全部复合体。

16.根据权利要求15所述的应用，其特征在于，所述复合体的药物载体包含肠溶衣制剂、胶囊、微球/囊、脂质体、微乳液、复乳液、纳米颗粒、磁颗粒、明胶和凝胶中的一种或一种以上。

17.根据权利要求5-16任一所述的应用，其特征在于，所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白、融合蛋白、多肽/蛋白修饰物或复合体发挥屏蔽毒性蛋白毒性的工作浓度为不小于20μg/mL。

18.根据权利要求5-16任一所述的应用，其特征在于，所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白、融合蛋白、多肽/蛋白修饰物或复合体发挥屏蔽毒性蛋白毒性的摩尔浓度比率为不小于0.010；所述摩尔浓度比率是指反应体系中蛋白、多肽/蛋白修饰物或复合体的摩尔浓度与毒性蛋白摩尔浓度的比率。

19.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白是以个体自身sDSS1蛋白为靶点，通过外源药物影响个体自身sDSS1蛋白的水平。

20.根据权利要求19所述的应用，其特征在于，所述的药物是以sDSS1蛋白、sDSS1蛋白的基因、sDSS1的基因的调控元件或sDSS1的基因的转录产物为药物作用靶点。

21.根据权利要求19所述的应用，其特征在于，所述的药物是通过影响血液或脑脊液中蛋白酶/肽酶活性从而调节sDSS1蛋白在血液或脑脊液中的含量。

22.根据权利要求19-21任一所述的应用，其特征在于，所述的药物是化学小分子药物、抗体、多肽/蛋白药物、核酸药物或纳米药物形成的第一种药物。

23.根据权利要求5-22任一所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白是以所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白、融合蛋白、多肽/蛋白修饰物、复合体、第一种药物中的任一一种成分的两种或多种的组合形成的第二种药物。

24.根据权利要求5-22任一所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白是以所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白、融合蛋白、多肽/蛋白修饰物、非天然氨基酸替代蛋白、复合体、第一种药物中的任一一种成分的一种、两种或多种与医药上可用的赋形剂的组合形成的第三种药物。

25.根据权利要求5-9任一所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白是通过表达体系把编码所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白或融合蛋白的核苷酸序列导入体内并表达获得的第四种蛋白。

26.根据权利要求25所述的应用，其特征在于，所述的表达体系是真核表达质粒载体、腺病毒、腺相关病毒、慢病毒、逆转录病毒、杆状病毒、疱疹病毒、伪狂犬病毒、ZFN基因编辑技术、TALEN基因编辑技术、CRISPR/Cas基因编辑技术或其他医疗上可用的基因编辑技术或病毒载体。

27.根据权利要求5-9任一所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白是通过移植细胞在个体体内获得的所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白或融合蛋白形成的第五种蛋白。

28.根据权利要求27所述的应用，其特征在于，所述的细胞是任意一种人的干细胞、前体细胞或成体细胞。

29.根据权利要求28所述的应用，其特征在于，所述的干细胞是胚胎干细胞、诱导多能干细胞、转分化得到的细胞，或者来源于原代培养的干细胞、由母细胞分化得到的多能或单能干细胞。

30.根据权利要求5-9任一所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白是通过移植组织或器官在个体体内获得的所述的基础蛋白、第一种蛋白、第二种蛋白、第三种蛋白或融合蛋白形成的第六种蛋白。

31.根据权利要求30所述的应用，其特征在于，所述的组织是脑、肝、肾、脾、胰岛的完整器官或部分组织块，或血液、脂肪、肌肉、骨髓、皮肤。

32.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的sDSS1蛋白是通过血清、脑脊液、组织间液输注引入个体体内的第七种蛋白。

33.根据权利要求1-32任一所述的应用，其特征在于，所述的预防药物是包含基础蛋白、第一种至第七种任一蛋白、融合蛋白、多肽/蛋白修饰物、非天然氨基酸替代蛋白、复合体、第一种药物、第二种药物、第三种药物、在表达体系、细胞、组织、器官、体液、组织液的蛋白药物、多肽药物、核酸药物、化学小分子药物、细胞产品、商业化移植组织、注射液、冻干粉、保健品、食品添加剂中的一种或多种。

34.根据权利要求1-32任一所述的应用，其特征在于，所述的治疗药物是包含基础蛋白、第一种至第七种任一蛋白、融合蛋白、多肽/蛋白修饰物、非天然氨基酸替代蛋白、复合体、第一种药物、第二种药物、第三种药物、在表达体系、细胞、组织、器官、体液、组织液的蛋白药物、多肽药物、核酸药物、化学小分子药物、细胞产品、商业化移植组织、注射液、冻干粉、保健品、食品添加剂中的一种或多种。