CN105163726A

CN105163726A - 治疗萎缩症或增加细胞生长的药物

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Publication number: CN105163726A
Application number: CN201380072269.4A
Authority: CN
Inventors: R·贝格尔
Original assignee: SIMU TRADE CONSULTING & CO LEASING KG GmbH
Current assignee: SIMU TRADE CONSULTING & CO LEASING KG GmbH
Priority date: 2012-12-14
Filing date: 2013-12-13
Publication date: 2015-12-16
Also published as: JP2016508123A; AU2013357283A1; EP2742935A1; US9637529B2; WO2014090991A1; US20150307568A1; CA2895131A1; US20170253641A1; EP2931264A1

Abstract

本发明提供作为药物使用的SERF2、编码所述SERF2的核酸或表达SERF2的细胞，特别是用于治疗或预防萎缩病或萎缩症或用于增加肌少症、恶病质、营养不良、发育不全、张力减退或肌肉损失患者的细胞生长，以及提供适合细胞培养增殖的体外方法和药物组合物。

Description

治疗萎缩症或增加细胞生长的药物

技术领域

本发明涉及再生治疗药物领域，尤其是涉及肌细胞再生及减缓人体各种来源细胞程序性死亡的药物领域。

背景技术

以缺少细胞再生或细胞凋亡失调为特征的主要疾病有肌少症和恶病质。肌少症有多个发病因素，但是，人们对其了解仍然很少，而肌少症的后果，即失去自主感和出现代谢并发症，是比较严重的公众健康问题。老年人肌肉减少最明显的代谢解释是蛋白质合成速率和降解速率之间不平衡，但是，也涉及其它原因，如不按比例增加的程序性细胞死亡(细胞凋亡)率、神经退行性过程、同化激素分泌减少或敏感性(如胰岛素、生长激素和性激素)、细胞因子分泌调节异常、炎症事件响应改变、营养摄入不充分及缺少运动。治疗方案可以采用结合营养、锻炼、激素、特异性同化药物的多模方法，限制因年纪变大而患上肌少症。但是，所有治疗方法都存在严重的缺点，例如，激素和同化药物通常具有严重的副作用。vonHaehlingetal.,JCachexiaSarcopeniaMuscle(2010)1:129-133公开了肌少症的共识定义。

肌少症与缺乏体育锻炼有关系。但是，仅仅通过体育锻炼无法完全预防肌少症。肌少症治疗方法的效果并不令人满意。最常用的治疗方法是施用与肌肉生长相互作用的激素，如睾丸素。遗憾的是，睾丸素可能引发心血管疾病或癌症等副作用。

与痴呆症一样，肌少症在老年人中比较常见，但是，年轻人中也有这种病症。60-70岁人群肌少症的患病率是5-11％，而80岁以上人群肌少症的患病率是11-50％。据估计，未来30年内患这种病的人数将达到2亿人(Cruz-JentoftA.,AgeandAgeing2010,39)。

肌少症不仅与年龄有关，而且卧床不起的患者、肿瘤患者或不进行体育锻炼的人都存在显著的肌肉组织减少。这些患者庞大的医保费用、老年人口的快速增长以及年龄相关肌少症的增加都要求找到一种有效治疗肌少症的方法。

恶病质被定义为疾病引起的肌肉质量和重量损失的身体消瘦。患病老年人出现恶病质比较常见。此外，肌肉质量损失是衰弱症和肌少症的特点。衰弱症是由于强度减弱、步速减慢、体育活动减少、重量损失和衰竭引起的一种症状。因为其与肌肉质量损失有关，因此，肌少症和衰弱症可以被归为恶病质的症状。

细胞凋亡描述了所谓的程序性细胞死亡，程序性细胞死亡是一种细胞被破坏的活动过程。这种破坏经历了某些具有特点的形态变化，如染色质凝聚、细胞皱缩、膜起泡及凋亡小体形成。众所周知的是，成年人体内的细胞在细胞分裂和受控细胞死亡之间呈现完美平衡。细胞凋亡发生部位存在各种不同情况，例如，人体胚胎发育中手指和脚趾形成时，或细胞退化时，失去功能时与/或可能对动物有危险。细胞凋亡的特征在于受控的事件顺序。首先的标志是染色质凝聚、DNA-断裂、蛋白水解酶表达及最终出现细胞破坏。可以采用不同的方法测定这些生化变化和形态变化，其中非常重要的一点是选择能够区分细胞凋亡和坏死的检测方法，因为其中有些方法只能检测通常的细胞死亡。

有证据表明，靶向肌核细胞凋亡提供了一种有效治疗肌少症的新手段(MarzettiE.etal.(2012)Gerontology58/2:99-106)。由于肌肉细胞质量损失是老年人面临的严重问题，提供一种使这些患者重新获得肌肉强度的治疗方法非常重要。肌细胞损失亦称为肌少症。这种病目前没有令人满意的治疗方法，诱导肌细胞生长可能是一种治疗肌少症的新方法。肌细胞损失是由于细胞分裂和受控细胞死亡(细胞凋亡)之间不平衡引起的。

本发明的目的是找到刺激细胞生长与/或减少细胞凋亡，治疗各种消耗病的合适的药物制剂和方法。

发明内容

本发明提供新型药物SERF2用于此类治疗。第一方面，本发明提供作为药物使用的SERF2、编码所述SERF2的核酸或表达SERF2的细胞。在相关方面，本发明提供治疗或预防萎缩病或萎缩症状或细胞再生性治疗或增加患者细胞生长的SERF2、编码所述SERF2的核酸或表达SERF2的细胞。

本发明还提供一种增加干细胞或祖细胞增殖或降低所述细胞凋亡率的体内或体外方法，包括对所述细胞施用SERF2或编码所述SERF2的核酸。

第四方面，本发明提供一种包含SERF2或编码SERF2的核酸的药物组合物。所述组合物包括药学上可以接受的载体或稳定剂。

显然，所有这些方面都彼此相关，是相当的，所有的优选实施例与这些方面都等同相关。本发明的主题在权利要求书中进一步定义。

发明详细说明

SERF2(小EDRK-丰富因子2)是一种具有已知序列的蛋白质，参见例如，Swiss-Prot数据库P84101(人)、P84102(小鼠)或NCBI数据库NP_001018118(人蛋白)、NP_035484(鼠蛋白)、NM_001018108(人核苷酸)、NM_011354(小鼠核苷酸)。各亚型以保藏号NP_001018118.1、NP_001186804.1、NP_001186805.1、NP_001186806.1和NP_001186807.1在数据库中保藏。过去，SERF2亦称为H4F5rel(H4F5相关-SERF2与H4F5有69％的序列是一致的，Scharfetal.naturegenetics20,1998:83-86)。SERF2在US2007/042392A1(SEQIDNO:1143，EBI数据库保藏号AGI32189)及WO2000/55351Al(SEQIDNO:1054，EBI数据库保藏号AAB53514)进行了进一步的披露，这两篇专利均通过引用而并入本专利中。SERF2在VanHamTjakkoJetal.,Cell,Vol.142,No.4(2010),601-612中，NCBI数据库保藏号AAC63516进行了进一步披露)。

过去，对于SERF同源蛋白质的功能能力存在不同的结果。有些文献报道SERF通过淀粉样蛋白质聚集而存在有毒作用(例如，vanHametal.Cell142,2010:601-612)，而其它文献报道描述了其通过在包涵体内有毒蛋白质沉积而起到保护作用。vanHam等描述的易聚集蛋白质的纤维状聚集体仅仅是神经退行性疾病的标志，认识到这一点是非常重要的。

几种神经退行性疾病都与基因中的扩展三核苷酸序列CAG有关。由于CAG为氨基酸谷氨酰胺编码，这些疾病统称为多聚谷氨酰胺疾病。虽然不同多聚谷氨酰胺疾病涉及的基因(和蛋白质)几乎没有什么共同之处，但是，它们导致的疾病遵循的进程惊人的类似：如果扩展长度超过临界值35-40，蛋白质中谷氨酰胺重复数越大，疾病发病就越早，症状就越严重。这一事实表明，长度异常的谷氨酰胺束使其宿主蛋白质毒害神经细胞，而且，人们假设所有多聚谷氨酰胺疾病均通过共同的分子机制发展。细胞死亡的一个可能机制是谷氨酰胺长度异常的序列具有一种形状，这种形状阻止宿主蛋白质折叠形成其正常形状。多聚谷氨酰胺(polyQ)疾病被归为构象神经退行性疾病，与阿尔茨海默病和帕金森病一样，它们是由于异常扩展的polyQ延伸引起的。

利用多聚谷氨酰胺的计算机模型，结果表明，如果，以及只有如果，疾病中发现的多聚谷氨酰胺重复数的长度比临界值长时，它才会获得称为β-螺旋的特别形状。谷氨酰胺束的长度越长，形成β-螺旋的倾向性就越高。蛋白质中多聚谷氨酰胺(polyQ)的扩展导致蛋白质聚集且与神经退行性疾病中的细胞死亡有关。疾病的发病年龄与polyQ超出35-40个谷氨酰胺临界值的插入长度有关。体外分离polyQ肽的聚集动力学亦表明存在类似的临界-长度依赖性。利用分离polyQ肽的计算机模拟，结果表明，聚集机制是单一polyQ肽链从无规卷曲构象转变为平行β-螺旋的构象转变。这种转变在长度超过37个谷氨酰胺的肽中选择性发生。明显有毒的物质–可溶低聚物-的产生–及其导致神经元损害的能力取决于膜内蛋白质酶切的精确度。有些低聚物很小，溶解度足够大，容易通过脑实质扩散，影响突触结构和功能，从而最终影响神经元的存活。

在系列实验中，vanHam等(上文)试图识别聚集体的修饰剂(MOAG-4/SERF作为秀丽隐杆线虫中年龄-相关蛋白质毒性的调控剂)。作者发现，根据谷氨酰胺残基的数量(<40个残基)，可以检测蛋白质聚集，当其在MOAG-4中引入点突变时，聚集减少。SERF蛋白质家族成员似乎具有类似MOAG-4的功能。此外，SERF1/2过表达增加了鼠成纤维细胞中突变Huntington蛋白质的聚集和细胞死亡。但是，尽管有这些有趣的发现，这篇文章的结果发现了许多问题：

1.秀丽隐杆线虫的功能研究通常并不能反映人类或哺乳动物的情况，例如，最近的研究表明，TCF蛋白质的共活化剂相互作用比辅阻遏物相互作用具有更高程度的物种特异性，并且发现秀丽隐杆线虫和人TCF4稳态核水平之间存在根本区别。另一个实例是一方面秀丽隐杆线虫和果蝇导致神经系统严重缺陷的unc-76突变体之间存在显著差异，另一方面小鼠FEZ1-/-敲除小鼠，并没有显示任何形态和任何强大的行为表型。

2.有文献报道了SERF蛋白质家族具有保护作用而不是毒性作用。

3.MOAG4和SERF蛋白质之间的AA-序列存在显著差别(-50％)，因此，由于蛋白质序列不同，功能也会不同。

4.最重要的是，采用了一种高度人工系统。仅仅在采用74个polyQ重复数转染的细胞中(这是自然界中永远无法实现的状况)发生了聚集。此外，仅在采用淀粉样蛋白质时才看到聚集。因此，仍然有待了解在缺乏外源蛋白质的情况下，是否存在MOAG4/SERF的任何天然功能。

尽管如此，在本发明的某些实施例中，需治疗的疾病或症状并非选自阿尔茨海默病、帕金森病、亨廷顿氏舞蹈病，或任何多聚谷氨酰胺疾病或淀粉样纤维或淀粉样蛋白质引起的任何疾病或症状中的一种或多种疾病或症状。在具体实施例中，疾病或症状并非神经系统的疾病或症状。

此处的结果明显表明了SERF2在各类哺乳动物细胞中的保护和生长-支持作用。几项实验的结果已经表明，SERF2在各种人细胞系中诱导增殖。除间充质来源的细胞外，它还对造血系的细胞和肌细胞有影响。

本发明所述SERF2涉及任何SERF2亚型或变体。在优选的实施例中，SERF2包括SEQIDNO:1中提出的氨基酸序列或由SEQIDNO:1中提出的氨基酸序列组成，或包括与SEQIDNO:1提出的序列具有至少70％序列一致性的氨基酸序列或由与SEQIDNO:1提出的序列具有至少70％序列一致性的氨基酸序列组成。

词语“序列一致性”指的是两个序列，通常是氨基酸序列之间的一致性，序列一致性可以采用序列比对程序，如BLAST、PSI-BLAST(www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/)或ClustalW(www.ebi.ac.uk/clustalw/)进行测定。这些算法计算选定序列的最佳匹配度，并将其排列，从而可以看出一致性、相似性和区别。与SEQIDNO:l的序列一致性根据SEQIDNO:1的整个序列计算。

在本发明优选的实施例中，SERF2包括与SEQIDNO:1提出序列具有至少70％、优选至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少98％或甚至100％序列一致性的序列或由这样的序列组成。

SERF2可以是重组SERF2。进一步优选的是其来源与患者相同，但是，也可以使用来自其它动物的SERF2变体。优选患者是哺乳动物，特别是人或非人类动物，特别是家畜(如猪)、啮齿动物或灵长类动物。优选SERF2是人SERF2或来自非人类动物，特别是家畜(如猪)、啮齿动物或灵长类动物的SERF2。

本发明所述“包括”采用的是开放式意义，即本发明的SERF2可以进一步包括其它氨基酸或蛋白质组分。它可以是一种融合蛋白。在优选实施例中，所述扩展SERF2蛋白具有有限的大小，例如，不超过2000个氨基酸，不超过1800个氨基酸，不超过1600个氨基酸，不超过1400个氨基酸，不超过1200个氨基酸，不超过1000个氨基酸，不超过800个氨基酸，不超过600个氨基酸，不超过400个氨基酸，不超过300个氨基酸，不超过200个氨基酸，或不超过160个氨基酸。当然，本发明还涉及由上述实施例中包括的任何一个所述序列组成的SERF2蛋白。“由……组成”是封闭式意义，是限制序列意义。

还可以使用编码上述SERF2蛋白和其变体的氨基酸替代SERF2蛋白(或与SERF2蛋白一起使用)。这种序列是，例如，SEQIDNO:2中提出的序列，该序列编码SEQIDNO:1。

可采用核酸来诱导在细胞中产生SERF2。核酸导入的优选配方是，例如，控释脂质体、微乳剂、微粒或小囊。然后，细胞可以产生和分泌SERF2，连续产生治疗剂。

还提供一种用于本发明用途的表达SERF2的细胞。这种细胞优选连续分泌SERF2，提供治疗效果。这种细胞可以是任何细胞。在优选的实施例中，细胞是对患者为非免疫原性的细胞，例如，是来自患者、经基因工程处理而重组表达SERF2的细胞。细胞的修饰可以体外或体内执行。

特别是，由于核酸或细胞的直接活性治疗剂也是表达的SERF2，因此，前面及进一步详细的描述同等涉及SERF2蛋白、核酸及细胞。在本发明中，这三者都称为“SERF2”，其中优选SERF2蛋白，因为它是直接作用剂。

本发明特别提供SERF2用于治疗或预防萎缩病或萎缩症状或用于细胞再生治疗。

本发明所述“预防”并不要求指的是患者永远不患这些疾病的绝对预防，而是降低患病风险。它是一种预防性治疗。在疾病或症状开始后，例如，已经识别出需要治疗的患者时，需要其它形式的治疗。“治疗”并非指的是完全治愈疾病或症状。它也可以指改善或改良症状。

萎缩症是组织再吸收和降解的普通生理过程，涉及细胞水平的细胞凋亡。它亦称为部分身体部分损失。这可以是由于疾病引起的或是身体正常发育的一部分，如变老期间的一部分。在特殊的实施例中，萎缩症是肌肉萎缩症，但是其它组织可能受到影响和也可以按照本发明进行治疗。SERF2实现了单核细胞凋亡的减量调节，在保持老年肌肉质量及生活功能方面有效，此外还可以刺激细胞增殖和发育。

它本质上改变细胞凋亡和增殖之间的平衡，使其朝向增殖再生。SERF2减少细胞凋亡和提高增殖。因此，它可以用于治疗细胞凋亡增加与/或细胞增殖或再生减少的细胞或疾病。因此，在优选的实施例中，本发明治疗的萎缩症与细胞凋亡增加或细胞再生减少有关。萎缩症可以是某些组织的质量减少。所述组织可以是肌肉(例如，在肌少症中)、皮肤(例如，在药物-或年老-导致的皮肤变薄中)、骨骼或内脏器官(如肝)、造血系统组织，如骨髓、脾、扁桃腺、淋巴结。

除治疗萎缩症外，本发明可用于增加细胞质量，甚至当并不缺乏特定的细胞类型时。它可用作增加某一组织的质量的时限治疗或延长治疗。所述组织可以是肌肉(例如，用于健身)、皮肤、骨骼或内脏器官(如肝)和造血系统组织，如前文所述。

在优选的实施例中，治疗的萎缩症是细胞减少，细胞选自肌细胞，特别是心肌细胞或骨骼肌细胞或平滑肌细胞，结缔组织细胞，特别是肌肉或骨骼细胞周围的结缔组织细胞，上皮细胞，特别是血管细胞，及卫星细胞，或骨细胞(如成骨细胞或破骨细胞)。

治疗或预防的疾病或症状可以是特别的实施例，选自肌少症、恶病质、营养不良(特别是肌营养不良)、发育不全、张力减退(特别是手术后张力减退)，多肌炎、纤维肌痛、肌管性肌病、肌肉系统代谢病、帕金森病、重症肌无力、心肌病、心肌细胞收缩障碍、皮肤老化。本发明治疗方法可用于预防外科手术铸型或任何其它固定不动或它们的组合实施一段时间后的肌肉损失或肌肉萎缩。治疗的疾病或症状可以与血管生成不足有关。与血管生成不足有关的疾病的特征是特定组织血液循环损失和供氧不足(特别是上文提到的优选实施例中需治疗的组织之一)。血管生成不足引起的疾病有，例如，抗血管生成治疗引起的局部缺血性心脏疾病和症状，例如，采用减少或预防血管生成的抗体进行的治疗，例如，黄斑变性治疗或癌症治疗。其它按照本发明，通过增加造血系统细胞增殖或减少细胞凋亡可以治疗的疾病或症状有嗜中性白细胞减少症，特别是化学疗法诱发的嗜中性白细胞减少症。优选造血干细胞直接体内或间接体内扩增，用于改善癌症治疗引起的血细胞减少症状。当然，采用本发明的SERF2还可以扩增，例如，上文所述任一组织的其它干细胞。

体细胞具有有限的寿命和再生能力，在变老时尤其明显。肌少症定义为老年人骨骼肌和肌肉强度的退行性损失。肌肉损失导致老年人日常生活大部分不能自理，显著提高了保健费用。摔倒和骨折风险提高，明显丧失独立性和生活质量。除其它因素以外，肌肉损失的原因是蛋白质水解、缺乏蛋白质合成和肌肉脂肪含量。肌细胞质量损失的机制是骨骼肌内卫星细胞减少。卫星细胞是肌肉基膜内的特化细胞，对于肌肉再生和肌肉组织生长来说非常重要。卫星细胞的数量在年纪大时减少，这是肌少症的一个原因。

基于背景技术部分提到的原因，人们非常需要新的治疗方法来预防肌细胞凋亡和诱导新的肌肉组织形成，治疗肌少症和与细胞损失有关的其它疾病。

除SERF2用于肌肉和卫星细胞的有益效果之外，它还可用于其它各种类型的细胞。SERF2对造血细胞(HC)的影响非常重要。它确实防止这些类型的细胞发生GF-缺少的细胞死亡和延长生存期限。这一点对于仅留下少数绝对必要细胞的疾病(例如，在化学疗法期间)或如果细胞类型稀少时，如需要扩增干细胞时，尤其重要。关于这些效果，SERF2可以体内或体外使用，用于增加患者造血或血细胞数量，例如，血细胞浓度。这可以是治疗用途或非治疗用途。因此，本发明还涉及治疗血细胞缺乏或需要增加血细胞的患者的治疗方法。血细胞选自红细胞(红血细胞)、PBMC、白细胞、T细胞、粒细胞和巨噬细胞或单核细胞。

考虑到此处提出的新结果，SERF2对上皮细胞具有增殖和延长寿命的作用，SERF2非常适合作为防止皮肤老化的药物。由于其分子量相对较低，它可以包装到脂质体内，作为医疗保健化妆品的有效添加剂。因此，SERF2还可用于皮肤美容或治疗用途，用于预防或减少老化影响。

在血管生成期间，上皮细胞的作用尤其明显。正如本发明所述，可以通过施用SERF2体内或体外刺激血管生成。因此，本发明还提供SERF2作为刺激血管生成的用途。可以治疗组织动脉供应不足的患者。本发明可以治疗具有缺氧组织的患者。动脉供应不足组织也可以是急性或慢性的，例如，处于这种状态至少14天，优选至少18天，特别优选至少22天，甚至更优选至少28天，至少34天，至少40天，至少50天或甚至至少60天。因此，本发明涉及治疗需要采用SERF2诱导血管生成的患者，特别是在组织中需要这种治疗的患者。优选所述治疗是局部的。

SERF2可以施用给患者，例如，通过合适的手段向患者系统或特定组织直接施用SERF2蛋白或核酸。

或者，采用SERF2间接体内处理患者的细胞和向所述患者施用所述细胞。SERF2处理的细胞经活化用于增殖，可以在体内执行必要的再生功能。重新施用的给药优选是局部的，特别是针对细胞来源组织时(例如，重新施用肌细胞/肌肉干细胞或祖细胞，如肌肉的卫星细胞)。间接体内处理和重新施用的优选细胞是任何类型的干细胞或祖细胞，通常具有增强的增殖和组织再生潜力。

本发明治疗的疾病或症状可以是慢性的或急性的。优选实施例中“慢性的”涉及存在至少14天，优选至少18天，特别优选至少22天，甚至更优选至少28天，至少34天以内，至少40天，至少50天或甚至至少60天的疾病或症状。

本发明进一步涉及一种提高干细胞、祖细胞、上皮细胞(特别是表皮细胞)、间充质细胞(特别是心肌细胞)、卫星细胞、骨骼肌细胞、造血细胞(特别是造血干细胞或祖细胞)增殖的体外或体内方法，或降低所述细胞凋亡率的体外或体内方法，包括向所述细胞施用SERF2或编码SERF2的核酸。造血细胞可以是，例如，骨髓、脾、扁桃腺或淋巴结的细胞或干细胞或祖细胞。所述体内方法适合上文所述的其中一种治疗方法。体外方法可用于增殖细胞培养或在间接体内步骤中，用于增殖细胞，然后，在治疗过程中，这些细胞可以重新插入到患者体内。

所述细胞优选选自肌细胞，特别是心肌细胞或骨骼肌细胞或平滑肌细胞，结缔组织细胞，尤其是肌肉周围的结缔组织细胞，及干细胞、祖细胞，特别是卫星细胞，造血细胞，骨骼肌细胞，上皮细胞，特别是表皮细胞。本发明的SERF2可用于增加任何组织中这些细胞的质量，例如，增加心脏质量或体积。这种增加可用于治疗这些细胞不足引起的疾病，例如，肌无力，特别是听力肌无力，或用于治疗代谢病。特别优选的实施例涉及用于人造皮肤的皮肤细胞体外制剂，这些细胞或皮肤可用于皮肤修复。

SERF2(总是包括蛋白质、核酸或细胞)可以本领域熟悉的任何方式施用。特别优选的施用形式是局部施用。优选的局部施用方式是通过透皮贴剂或微型泵施用，它们可以在需要部位或组织连续提供SERF2。当然，也可以全身施用，总体提高增殖活性。全身施用时–及局部施用形式时-SERF2可以连接到(例如，融合到)对选定类型的组织具有特异性的组织归巢分子上，如表面受体的配体上。所述组织可以选自上述说明，例如，肌(心肌、骨骼肌或平滑肌)细胞、内皮细胞等。采用任何施用类型，这种归巢分子使组织对SERF2的作用具有特异性。

在优选的实施例中，SERF2的施用浓度是0.5ug/ml至1000ug/ml，优选1ug/ml至800ug/ml，特别优选2.5ug/ml至500ug/ml，甚至更优选4ug/ml至300ug/ml，最优选5ug/ml至100ug/ml。已经证明这些范围在本发明的治疗中特别有效。

正如实例中所示，SERF2可以提高细胞增殖与/或减少应激下，例如，氧化应激下细胞的凋亡。因此，在优选的实施例中，按照本发明所述处理细胞承受应激，特别是氧化应激，如反应性氧种(包括·OH)引起的应激。

本发明进一步涉及包括SERF2蛋白或编码SERF2的核酸或SERF2表达细胞(这三者均称为“SERF2”，优选SERF2蛋白)的药物组合物。用于治疗用途的药物组合物或制剂可以包括药学上可以接受的稀释剂、载体、增溶剂、乳化剂、防腐剂、稳定剂与/或佐剂。本发明还提供包含治疗有效剂量SERF2的药物组合物。词语“治疗有效剂量”指的是为规定状况和施用途径提供治疗效果的剂量。所述组合物可以是液体形式或冻干形式，包括具有不同pH值和离子强度的稀释剂(Tris、醋酸盐或磷酸盐缓冲溶液、NaCl)、增溶剂(如Tween或聚山梨醇酯)、载体(如人血清白蛋白或明胶)、防腐剂(如硫柳汞或苄醇)。具体组合物的选择将取决于多种因素，包括治疗条件、施用途径和要求的药代动力学参数。

优选的制剂是局部施用制剂。特别优选的是水凝胶、贴剂，特别是透皮贴剂和手术插入传输装置，如微型泵。还包括含以水溶聚合物改性而提高溶解度、稳定性、血浆半衰期和生物利用率的SERF2的组合物。组合物还可以包括将SERF2加入到脂质体、微乳液、微粒、微型颗粒或小囊中，用于长时间控释。

在特殊实施例中，SERF2与载体一起提供。载体优选选自凝胶，优选是水凝胶，或创伤敷料或药签，任选浸渍含SERF2的溶液。此外，载体包括缓释载体，缓释载体释放活性制剂组合，延长有效施用时间或减慢施用速度。所述包含相应载体的制剂特别适合局部和快速施用。

特别是，本发明提供作为药物使用的药物组合物，或用于上文所述的SERF2的任何用途之一。

本发明将通过下述各图及实例进一步说明，这些图和实例并不限制本发明的具体方面。

附图说明

图1：第2次提纯步骤后SERF2的分析(HIC柱)。将相同数量的组分1-9负载到SDS凝胶上并开展蛋白质印迹分析。SERF2(箭头)在大约13kDa出现，并且并未在HIC柱上被阻止，而杂质被保留下来。表观分子量较高是由于大量正电荷(19个残基)，改变了SERF2的洗脱行为。

图2：SERF2对大鼠骨骼肌细胞(L6)增殖的影响。在每个含l00ul生长培养基的孔中接种l×10⁴个L6细胞。细胞在+37℃、5％v/vCO²和增湿环境中培养一个晚上。在开展分析之前，在显微镜下检查细胞的活力。每个孔用100ulDPBS洗涤细胞三次。将SERF2在DMEM中稀释(ug/ml)，按100ul/孔加入到细胞中。最后，将细胞在+37℃培养不同的时间点。然后，按10ul/孔加入AlamarBlue^TM试剂(Invitrogen)。将培养板在+37℃培养1小时。采用VarioskanFlash多-板读数仪(ThermoScientific)测定荧光(Ex.570nm，Em.585nm)。采用MicrosoftExcel和GraphPadPrismV4对得到的数据进行评估。

图3：SERF2对H9c2细胞增殖的影响与剂量有关。增殖实验基本上如图2所示。培养时间是24小时，SERF2加入浓度是20至1.25ug/ml。

图4：SERF2对小鼠卫星细胞(MuMa23/P13)增殖的影响。增殖实验基本上如图2所示。培养时间是24小时，SERF2加入浓度分别是20和4ug/ml。

图5：SERF2对大鼠心肌细胞(H9c2)增殖影响的动力学。采用SERF2(绿线)刺激的细胞出现增殖响应，6天后达到最大增殖率。增殖实验基本上如图2所示。培养时间是24、48、72和144小时，SERF2加入浓度是5ug/ml。

图6：SERF2对大鼠骨骼肌细胞(L6)增殖影响的动力学。采用SERF2(绿线)刺激的细胞出现增殖响应，6天后达到最大增殖率。增殖实验基本上如图2所示。培养时间是24、48、72和144小时，SERF2加入浓度是5ug/ml。

图7：SERF2防止人上皮细胞系(A431)出现H₂O₂-诱导的细胞凋亡。实验在每孔含5ml细胞培养基(不含血清)的6-孔板中进行，并按1×10⁶个细胞/孔的细胞密度接种，培养一个晚上。第二天，向培养基中加入200mMH₂O₂或200mMH₂O₂和SERF2(5ug/ml)。培养6小时后，收获粘附细胞，并在PBS中洗涤3次，用台盼蓝染色，采用光学显微镜检测死细胞。图中所示是死细胞的百分数。

图8：SERF2防止人上皮细胞系(MCF-7)出现H₂O₂-诱导的细胞凋亡。实验在每孔含5ml细胞培养基(不含血清)的6-孔板中进行，并按1×10⁶个细胞/孔的细胞密度接种，培养一个晚上。第二天，向培养基中加入200mMH₂O₂或200mMH₂O₂和SERF2(5ug/ml)。培养6小时后，收获粘附细胞，并在PBS中洗涤3次，用台盼蓝染色，采用光学显微镜检测死细胞。图中所示是死细胞的百分数。

图9：SERF2防止人T-细胞系(Jurkat)出现H₂O₂-诱导的细胞凋亡。实验在每孔含5ml细胞培养基(不含血清)的6-孔板中进行，并按1×10⁶个细胞/孔的细胞密度接种，培养一个晚上。第二天，向培养基中加入200mMH₂O₂(红柱)或200mMH₂O₂和SERF2(绿柱；5ug/ml)。培养6小时后，收获粘附细胞，并在PBS中洗涤3次，用台盼蓝染色，采用光学显微镜检测死细胞。图中所示是死细胞的百分数。

图10：SERF2补偿FCS和减少生长因子-相关人骨髓细胞的凋亡。在不同培养条件下培养TF-1细胞：FCS+GM-CSF(深蓝)、无血清介质+GM-CSF(5ug/ml；淡蓝)、无血清介质+GM-CSF+SERF2(5ug/ml；酸橙色)、无血清介质+SERF2(绿色)和仅无血清介质(红色)。在培养9.5小时后，采用ELISA-方法分析上清液，检测caspa-se-3表达水平。结果以pNA表示，单位是pmol/ul。

图11：SERF2减少人B细胞系的细胞凋亡。在不同培养条件下培养711-3细胞：无血清介质(深蓝)、无血清介质+SERF2(5ug/ml；酸橙色)、无血清介质+SERF2+H₂0₂(绿色)和无血清介质+H₂0₂(红色)。在培养9.5小时后，采用ELISA-方法分析上清液，检测caspa-se-3表达水平。结果以pNA表示，单位是pmol/ul。

图12：CAM实验中SERF2的促血管生成影响。为了对SERF2的促血管生成性质进行评估，对每个CAM施用3ugA:PBS和C:SERF2。B:VEGF-A(0.5ug/CAM)作为阳性对照，PBS作为阴性对照。在VEGF和SERF2-处理的CAM中识别到形成了新血管。在胎龄6天和7天执行处理。用显微镜评估血管生成响应。所示图于第6天拍摄用于记录目的。

图13：a:采用不同剂量SERF2培养的7dpf斑马鱼的心脏尺寸变化。b:采用不同浓度SERF2和促红细胞生成素(EPO)培养的7dpf斑马鱼的心脏体积变化。与对照动物存在明显区别用星号表示。

图14：不同剂量SERF2培养的斑马鱼血细胞浓度的变化。图中所示是平均值(血细胞/nl)和SEM。星号表示与对照动物存在显著差别。

图15：不同剂量SERF2或EPO诱发7dpf或15dpf斑马鱼尾鳍内皮细胞的增殖变化。星号表示与对照动物存在显著差别。

图16：7dpf斑马鱼尾部脉管系统的图像(顶部图像＝对照，底部图像＝SERF2-处理)。红色箭头表示背动脉，蓝色箭头表示节间血管。

图17：7dpf斑马鱼血细胞(绿色箭头)的检测(顶部图像＝对照，底部图像＝SERF2-处理)。为了确定血细胞浓度，将检测的细胞数除以血管容量。

图18：采用TUNEL方法测定的鳃、骨骼肌和尾部的凋亡细胞。从这些实验中可以明显看出，SERF2-处理动物中不同区域的特异性污染细胞数低于未处理动物。

具体实施方式

实例1：材料&方法：

1.1SERF2–克隆、表达和提纯

SERF2利用AB4cDNA文库采用菌落杂交方法鉴定。SERF2的编码序列是180bp，成熟蛋白质的长度是59个氨基酸，分子量是6899，pi10.44。

SEQIDNO2:atgacccgcggtaaccagcgtgagctcgcccgccagaagaatatgaaaaag

SEQIDNO1:MTRGNQRELARQKNMKK

cagagcgactcggttaagggaaagcgccgagatgacgggctttctgctgccgcccgcaagcag

QSDSVKGKRRDDGLSAAARKQ

agggactcggagatcatgcagcagaagcagaaaaaggcaaacgagaagaaggaggaacccaag

RDSEIMQQKQKKANEKKEEPK

标记

-

SERF2在5'NcoI和3'XhoI位点经密码子优化克隆到pET28载体(推断具有卡那霉素抗性)，不带标记。SERF2在BL21大肠杆菌中表达。

利用甘油储备液在选择性M9ZB培养基中制备隔夜预-培养基，并在37℃、220rpm摇动条件下培养。第二天，将隔夜预培养基稀释到OD₆₀₀＝0.1，并在37℃、220rpm摇动条件下培养，直到OD₆₀₀＝0.5。然后，采用终浓度ImM的IPTG诱导蛋白质表达。然后，将培养基在30℃培养4小时，然后在室温、220rpm摇动条件下培养一个晚上。在2500g离心分离2小时收获细菌。

1.2SERF2的提纯

为了裂解，将细胞在裂解缓冲液[75ml/1培养体积；50mMNa-磷酸pH8,300mMNaCl,0,2％TritonX-100]中重新悬浮，并在-80℃经历三次冻/融周期。第三次融化后，加入30ug/lDNAseI，将裂解的细胞在37℃培养30分钟。在2500g离心分离2小时收集上清液。

为了进行提纯，将过滤的溶解产物(0.22um)置于20mMTrispH8.0中，负载到SP-Sepharose柱上(70mlCV)，流速为14ml/min。采用20mMTris/IMNaClpH8.0，通过线性梯度洗脱组分，在214nm记录蛋白质。在通过银染色SDSPAGE凝胶和蛋白质印迹法分别分离相关组分后，向最终30％的饱和溶液中缓慢加入硫酸铵，搅拌一个晚上。然后，将富盐SERF2超滤(0.22um)，并通过HiTrapOctyl-SepharoseFF柱(25mlCV)，流速采用7ml/min进行第二次提纯。通过银染色SDSPAGE凝胶和蛋白质印迹法鉴定相关组分(图1)，汇合和相对20mMNa-磷酸pH7.4进行渗析。

1.3细胞培养

将大鼠胚胎心肌细胞H9c2(ATTCCRL-1446)和胚胎骨骼肌细胞L6(ATTCCRL-1458)在含10％v/v胎牛血清(FCS,PAA)和1％v/v盘尼西林/链霉素(Gibco)的Dulbecco'sModifiedEagleMedium高葡萄糖(DMEM,SigmaAldrich)中培养。采用15ml生长培养基，将细胞在80cm2细胞培养瓶(NUNC)中生长。两种细胞系均在+37℃和5％v/vCO²的增湿环境中培养。当融合度达到大约90％时，细胞分裂。通常采用的分裂比是1:5或1:10。为此，除去上清液，采用10mlDulbecco's磷酸盐缓冲盐水(DPBS,Gibco)洗涤细胞。加入3mlTryp-sin/EDTA(Gibco)，然后在+37℃培养5-10分钟，收获细胞。加入7ml生长培养基，在显微镜(IMT-2,Olympus)下检查细胞的成功分离情况。采用自动细胞分析仪(CEDEX,Innova-tis)，通过台盼蓝拒染法，测定细胞的数量和活力。为此，将950ulDPBS和50ul细胞悬浮液混合和用于分析。

原小鼠卫星细胞的分离：从雄性ICR小鼠采取肌肉组织，并用剪刀和小刀将其弄碎。在37℃在蛋白酶溶液(Sigma,St.Lois)中培养1小时后，通过移取和负载到Percoll(Pharmacia)梯度(75％、50％、30％)，分离剩下的组织块。在1250xg离心分离20分钟后，从第2分裂间期收集细胞(99％卫星细胞)，洗涤，并在6-孔板中按1×10⁵个细胞/ml的细胞密度培养。亦参见Danovizewtal.MethodsMolBiol.2012；798:21-52。

哺乳动物细胞的培养：

粘附细胞：A431是表皮样癌细胞，MCF-7细胞是上皮细胞，ECV-304源于膀胱癌。

悬浮细胞：TF-1细胞源于严重全血细胞减少症患者的骨髓。这些细胞需要以5ng/mlGM-CSF补充的培养基，并分化为巨噬细胞类细胞。Jurkat细胞系源于一名患急性T-细胞白血病(ATCC)的14岁男孩的血液。711-3是人类淋巴母细胞B-细胞系。

1.4AlamarBlue^TM实验

按照生产商协议，利用AlamarBlue^TM实验测定增殖。简单地说，在每个含l00ul生长培养基的孔内接种l×10⁴个细胞。将细胞在+37℃、5％v/vCO²和增湿环境中培养一个晚上。在开展分析之前，在显微镜下检查细胞的活力。通常细胞达到60％融合度。每个孔用100ulDPBS洗涤细胞三次。根据要求在DMEM中稀释肽(50ng/ml-20ug/ml)，将其按100ul/孔加入到细胞中。最后，根据实验类型，将细胞在+37℃培养不同的时间点。然后，按10ul/孔加入AlamarBlue^TM试剂(Invitrogen)。将培养板在+37℃培养1小时。采用VarioskanFlash多-板读数仪(ThermoScientific)测定荧光(Ex.570nm，Em.585nm)。采用MicrosoftExcel和GraphPadPrismV4对得到的数据进行评估。

1.5鸡胚–绒毛尿囊膜实验(HET-CAM)

受精特异性-无病原体蛋是由BAXTERBiosciences(奥地利维也纳)提供的胎龄5天的蛋(白来航鸡)。采用浸泡Microzid(奥地利Schiilke)的毛巾对鸡蛋表面进行消毒。钻一个小孔，利用带18G针头的注射器抽取3ml蛋白。然后，用石蜡将孔封住。在顶部另外钻一个孔用于打开鸡蛋。用镊子除去此部分的蛋壳。除去下面的膜，从而可以接近绒毛尿囊膜(CAM)。最后，用消毒铝箔封住这个操作窗口。将鸡蛋在+37℃、5％v/vCO²和增湿环境中培养。在胎龄6天(E6)时，用70％v/v乙醇洗涤塑料片三次(外径12mm，内径3mm)，用消毒Locke(0,15MNaCl,5mMKC1,2mMCaC12,2mMNaHCO³)缓冲液洗涤三次。最后，将塑料片盖在CAM上。将选择的肽稀释，移取到塑料片的中间，施用到E6CAM上。将蛋在+37℃培养，直到E8或E11，这取决于实验类型。利用配备数码相机(日本尼康Coolpix990)的立体显微镜(德国Zeiss的StemiSVll)在规定时间点给CAM拍照。在实验结束后，采用显微镜对试验肽的血管生成潜力进行评估。

1.6染色方法

台盼蓝染色是利用光学显微镜确定细胞活力的最常用的方法之一。台盼蓝只会使膜破损的细胞染色。活的细胞不吸收染料。

1.7Caspase3–特异性ELISA

Caspase-3是半胱氨酸天冬氨酸–特异性蛋白酶家族的成员，是细胞凋亡早期事件的标志物。采用商业试剂盒测定Caspase-3表达。简单地说，收获采用不同处理方法后经历凋亡的细胞的培养上清液，并用以p-硝基苯胺(pNA)标记的底物培养，当p-硝基苯胺被caspase-3裂解时，产生黄色。产生黄色的数量与caspase-3活性成比例，活性可通过ELISA读数仪在405nm测定(Promega)。该实验基本上按照生产商(CaspACE^TMAssaySystem使用说明书，Promega)所述开展。

实例2：结果

对重组SERF2蛋白质进行克隆并采用与浆细胞样树突状细胞类似的人细胞系表达。结果表明，SERF2刺激大鼠肌细胞增殖和促进血管形成。因此，显然，SERF2影响各种人细胞。第一个实验用于探索SERF2是否能够刺激肌细胞和卫星细胞增殖。

2.1SERF2支持骨骼肌细胞、心肌细胞和原卫星细胞增殖

这些实验的目的是测定SERF2对大鼠胚胎心肌细胞系H9c2的增殖影响。按照方法部分所述处理24小时和开展AlamarBlue^TM实验。得到的结果如图3所示。采用小鼠卫星细胞MuMa23/Pl开展一组类似的实验。得到的结果如图4所示。在这两组实验中，采用人SERF2进行的处理得到剂量-依赖的增殖效果。这一结果与采用L6大鼠骨骼肌细胞实验的结果类似(图2)。在这些实验中，这两个细胞系(L6和H9c29)均采用SERF2处理一次。每天开展一次AlamarBlue^TM实验，直到培养的第6天。实验的结果分别如图5和图6所示。

SERF2对L6大鼠骨骼肌细胞具有剂量-依赖和时间-依赖的增殖效果。在培养3至6天后观察到最大效果。采用SERF2处理心肌细胞(H9c2)得到了类似的结果。在5ug/mlSERF2时观察到增殖效果峰值。

2.2鸡胚绒毛尿囊膜实验中SERF2的血管生成影响

HET-CAM实验可以评估底物或细胞的血管生成潜力。确定合适的VEGF浓度，VEGF可用于阳性对照。为此，将VEGF-A向两个鸡蛋的CAM上施用一次(100ng/CAMabs.)。两个鸡蛋不进行处理，用作阴性对照。处理在胎龄第6天(E6)进行。采用光学显微镜在E11测定血管生成响应。此实验的照片如图12所示。

为了对SERF2的促血管生成性质进行评估，对蛋白质开展Het-CAM实验。每个CAM施用3ugPBS和SERF2肽。采用VEGF-A(0.5ug/CAM)作为阳性对照，PBS作为阴性对照。在胎龄第6天和第7天开展处理。期间所有稀释溶液均在+4℃储存，并在施用前允许在室温平衡。采用显微镜在E7和E8对血管生成响应进行评估。每次处理均平行开展三次。这两天所拍照片用于记录(参见图12)。正如手动计数新形成血管数量测定的那样，在Het-CAM实验中，SERF2具有促-血管生成响应。

2.3SERF2预防人细胞凋亡

需要了解的是SERF2对生长因子剥夺–或应激诱导细胞凋亡是否有影响。实验协议包括加入过氧化氢(H₂O₂)，已知在200uM以下剂量时，过氧化氢会造成细胞应激，最终造成细胞凋亡(CoxA.,Carcinogenesis.2007,Vol.28,10)。此外，通过剥夺TF-1细胞培养基中粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，诱导细胞凋亡。这些细胞依赖于是否存在对于TF-1细胞生长和分化来说绝对必要的生长因子。

结果如图7(A431细胞-H₂O₂实验)、图8(MCF-7细胞-H₂O₂实验)、图9(Jurkat细胞-H₂O₂实验)、图10(TF-1细胞–生长因子实验)和图11(711-3细胞-H₂O₂实验)所示。

在所有实验设计中，细胞培养基中SERF2的存在显著减少了细胞凋亡。值得指出的是，各种来源的细胞，如上皮细胞或骨髓细胞或淋巴系细胞都可以看到这种效果。

2.4.SERF2对斑马鱼的体内影响

斑马鱼是研究脊椎动物发育、生理学和人类疾病的重要模型。与哺乳动物相比，关于循环系统，斑马鱼不仅具有控制血细胞生成、血管生成和血管发生的高度保守的路径，而且，其所有主要血细胞类型与它们相同。因此，斑马鱼是非常好的研究脊椎动物心血管发育的模型有机体。大型正向遗传学筛选已经鉴定了许多斑马突变体，这些突变体用于建立遗传血液病、恶性血液疾病、发育血液学，以及心脏发育和心脏功能改变的模型。斑马鱼模型的另一个优点是其在发育的第一个10天期间向胚胎简单扩散供氧。因此，在此期间，胚胎能够存活和发育，没有心跳或循环血液，从而方便对循环系统进行发育研究。

鉴于其幼体尺寸小，过去十年内建立了几种方法来计算心血管表现、血管生成过程、肌肉功能和运动神经元完整性。我们采用两种施用路径，将斑马鱼用于SERF2的体内表征：1)将天然蛋白质注射到受精3天后(dpf)的动物的卵黄囊内或2)采用扩散供应的天然蛋白质慢性孵化。这两种施用路径的蛋白质有效吸收，允许研究其对心肌生长、血管形成和细胞凋亡的影响。

方法。SERF2通过以下方法施用：a)将不同浓度的天然蛋白质注射到受精3天后(dpf)的动物的卵黄囊内和刚受精的卵(2-8个细胞阶段)内，或采用扩散供应的天然蛋白质慢性孵化。为了对血管生成影响进行深度分析，采用内皮用gfp(绿色荧光蛋白)标记的flk-1转基因动物。对于其它所有实验，采用野生型(wdt)动物。

正如Schwerteetal(Schwerteetal.TheJournalofExperimentalBiology.2003；206(Pt8):1299-1307)所述，通过测量舒张末期尺寸和计算舒张末期容积来确定心脏尺寸。

血管形成指数。如前文所述(Schwerte等，上文)，通过积累后面多张区别图片移动红细胞的移动载体，得到血管床的铸型。与此同时，给显示绿色荧光内皮的flk-1转基因动物拍照。

凋亡细胞原位染色TUNEL实验。采用原位细胞死亡检测试剂盒、荧光素(德国曼海姆RocheAppliedScience)，按照生产商说明，用TUNEL方法检测凋亡细胞。统计分析。采用双尾学生t-试验(MicrosoftExcel)对得到的数据进行统计学分析，当P<0.05时，显著性可以接受。数据以平均值±S.E.M表示。

结论。采用SERF2处理斑马鱼，导致该动物的心脏容积显著增加(参见图13a&13b)。其中一个最重要的发现是血细胞浓度高，与对照相比，显著增加50至100％(图14)。应该谨记的是，从前面的研究中可以知道，这一参数对需要提高氧输送的生理状况更敏感，与已经显示的相比，它可能指示了斑马鱼发育后期血管生长增加(Schwerte等，上文)。在脊椎动物中，血管和血细胞具有共同的干细胞，即成血管细胞。从文献中可以了解到(Schwerte等，上文)，在新的血管形成之前，对缺氧的第一响应是血细胞浓度增加。从生理学观点来看，因为总携氧能力增加，与新发育的血管相比，响应更快，反过来填充新的血液和血细胞。血细胞浓度是调节携氧能力的中心参数。以前的研究表明，与血管生长相比，这一参数对要求输氧增加的生理学状态更敏感。在7dpf时，除一个处理组之外，其它组均显示血细胞浓度显著增加。在所有药物输送路径中都发现存在这种增加，证明了SERF2可以通过皮肤培养和吸收输送及通过肠道注射和吸收输送(图15-17)。SERF2处理的动物凋亡细胞数减少，表明了SERF2明显的体内抗凋亡影响(图18)。

<110>组织医学生物科学研究和开发公司（TissueMedBiosciencesForschungs-und

EntwicklungsgesellschaftmbH）

<120>治疗萎缩症或增加细胞生长的药物

<130>R65002

<150>EP12197192.3

<151>2012-12-14

<160>2

<170>PatentInversion3.3

<210>1

<211>59

<212>PRT

<213>人类

<400>1

MetThrArgGlyAsnGlnArgGluLeuAlaArgGlnLysAsnMetLys

151015

LysGlnSerAspSerValLysGlyLysArgArgAspAspGlyLeuSer

202530

AlaAlaAlaArgLysGlnArgAspSerGluIleMetGlnGlnLysGln

354045

LysLysAlaAsnGluLysLysGluGluProLys

5055

<210>2

<211>180

<212>DNA

<213>人类

<400>2

atgacccgcggtaaccagcgtgagctcgcccgccagaagaatatgaaaaagcagagcgac60

tcggttaagggaaagcgccgagatgacgggctttctgctgccgcccgcaagcagagggac120

tcggagatcatgcagcagaagcagaaaaaggcaaacgagaagaaggaggaacccaagtag180

Claims

1.作为药物使用的SERF2、编码所述SERF2的核酸或表达SERF2的细胞。

2.用于治疗或预防萎缩病或萎缩症或用于细胞再生治疗的SERF2、编码所述SERF2的核酸或表达SERF2的细胞。

3.根据权利要求2所述的供使用的SERF2、核酸或细胞，其中所述萎缩与细胞凋亡增加或细胞再生减少有关。

4.根据权利要求2或3所述的供使用的SERF2、核酸或细胞，其中所述萎缩是细胞减少，细胞选自肌细胞，特别是心肌细胞或骨骼肌细胞或平滑肌细胞，结缔组织细胞，特别是肌肉周围的结缔组织细胞，上皮细胞，特别是血管细胞，及卫星细胞，或骨细胞。

5.根据权利要求2-4中任意一项所述的供使用的SERF2、核酸或细胞，其中所述疾病或症状选自肌少症、恶病质、营养不良(特别是肌营养不良)、发育不全、张力减退(特别是手术后张力减退)、多肌炎、纤维肌痛、肌管性肌病、肌肉系统代谢病、帕金森病、重症肌无力、心肌病、心肌细胞收缩障碍、皮肤老化或者本发明的治疗方法是用于预防外科手术铸型或任何其它固定不动或它们的组合实施一段时间后的肌肉损失或肌肉萎缩。

6.根据权利要求1至5任一项所述的供使用的SERF2、核酸或细胞，其中向患者施用SERF2。

7.根据权利要求1至6任一项所述的供使用的SERF2、核酸或细胞，其中用SERF2间接体内处理患者的细胞，向所述患者施用所述细胞。

8.根据权利要求7所述的供使用的SERF2、核酸或细胞，其中向所述患者施用干细胞或祖细胞。

9.根据权利要求2至8任一项所述的供使用的SERF2、核酸或细胞，其中所述疾病或症状是慢性或急性疾病或症状。

10.一种提高干细胞、祖细胞、上皮细胞(特别是表皮细胞)、间充质细胞(特别是心肌细胞)、卫星细胞、骨骼肌细胞、造血细胞(特别是造血干细胞或祖细胞)增殖的体外方法，或降低所述细胞凋亡率的体外方法，包括向所述细胞施用SERF2或编码SERF2的核酸。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述细胞选自肌细胞，特别是心肌细胞或骨骼肌细胞或平滑肌细胞，结缔组织细胞，特别是肌肉周围的结缔组织细胞，及干细胞，祖细胞，特别是卫星细胞，造血细胞，骨骼肌细胞，上皮细胞，特别是表皮细胞或骨细胞。

12.根据权利要求1至11任一项所述的供使用的SERF2、核酸或细胞或方法，其中SERF2包括SEQIDNO:1中提出的氨基酸序列或由SEQIDNO:1中提出的氨基酸序列组成，或包括与SEQIDNO:1提出的序列具有至少70％序列一致性的氨基酸序列或由与SEQIDNO:1提出的序列具有至少70％序列一致性的氨基酸序列组成。

13.根据权利要求1至12任一项所述的供使用的SERF2、核酸或细胞或方法，其中SERF2的施用浓度是0.5ug/ml至1000ug/ml，优选1ug/ml至800ug/ml，特别优选2.5ug/ml至500ug/ml，甚至更优选4ug/ml至300ug/ml，最优选5ug/ml至100ug/ml。

14.根据权利要求1至13任一项所述的供使用的SERF2、核酸或细胞或方法，其中处理经历氧化应激的细胞。

15.包括SERF2或编码SERF2的核酸和药学上可以接受的稀释剂、载体、增溶剂、乳化剂、防腐剂、稳定剂与/或佐剂的药物组合物。