CN109971649A - 一种用于培养雨生红球藻的培养基及智能检测系统 - Google Patents
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Abstract
本发明属于培养雨生红球藻技术领域，公开了一种用于培养雨生红球藻的培养基及智能检测系统，所述用于培养雨生红球藻的培养基的智能检测系统包括：选料模块、温度检测模块、PH检测模块、细菌检测模块、主控模块、溶解模块、灭菌模块、纯化模块、分析模块、检测显示模块。本发明通过纯化模块利用雨生红球藻细胞在不利条件下迅速形成红孢囊细胞，细胞密度和体积增大，除掉或部分除掉样品中的杂藻或杂菌可在1‑2周左右的时间内得到纯度较高的藻种；同时，通过分析模块实现了基于拉曼光谱技术的微藻色素分布的化学成像，缩短了检测时间，也避免了由于操作人员操作不熟练或者主观因素带来的测量结果不准确等后果。
Description
技术领域
本发明属于培养雨生红球藻技术领域，尤其涉及一种用于培养雨生红球藻的培养基及智能检测系统。
背景技术
红球藻是一种淡水单胞绿藻，隶属绿藻门、团藻目、红球藻科、红球藻属。该藻能大量累积虾青素而呈现红色，故名红球藻，又称雨生红球藻。红球藻是目前科学界发现的继螺旋藻、小球藻之后，富含营养价值和药用价值的藻类食品。红球藻是目前科学界发现的继螺旋藻、小球藻之后，富含营养价值和药用价值的藻类食品。红球藻是一种淡水单胞绿藻，隶属绿藻门、团藻目、红球藻科、红球藻属。该藻能大量累积虾青素而呈现红色，故名红球藻，又称雨生红球藻。上世纪九十年代末期，由于红球藻孢子富含虾青素而一度成为继螺旋藻、小球藻之后的另一种高价值的经济微藻。然而，现有红球藻培养纯度低；同时，对雨生红球藻类胡萝卜素及虾青素浓度测量分析不准确。
综上所述，现有技术存在的问题是：现有红球藻培养纯度低；同时，对雨生红球藻类胡萝卜素及虾青素浓度测量分析不准确。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种用于培养雨生红球藻的培养基及智能检测系统。
本发明是这样实现的，一种用于培养雨生红球藻的培养基，所述用于培养雨生红球藻的培养基按照质量份数由醋酸钠1份、琼脂粉10份、生物素0.5份、维生素B12份、硝酸钠1.5份、碳酸钠0.3份、硫酸镁0.2份、磷酸氢二钾0.1份、无水氯化钙15份、乙二胺四乙酸二钠5份、六水合三氯化铁2份、氯化锌0.5份、硼酸0.2份、六水合氯化钴0.5份、五水合硫酸铜0.6份、六水合氯化锰0.4份、四水合钼酸铵0.3份和超纯水10份组成。
本发明的另一目的在于提供一种所述用于培养雨生红球藻的培养基的制备方法，所述用于培养雨生红球藻的培养基的制备方法包括：
步骤一，通过选料模块利用称量器选取醋酸钠1份、琼脂粉10份、生物素0.5份、维生素B12份、硝酸钠1.5份、碳酸钠0.3份、硫酸镁0.2份、磷酸氢二钾0.1份、无水氯化钙15份、乙二胺四乙酸二钠5份、六水合三氯化铁2份、氯化锌0.5份、硼酸0.2份、六水合氯化钴0.5份、五水合硫酸铜0.6份、六水合氯化锰0.4份、四水合钼酸铵0.3份、超纯水10份；
步骤二，通过温度检测模块利用温度传感器检测培养基制备过程中温度数据；通过PH检测模块利用PH检测仪检测培养基制备过程中PH数据；通过细菌检测模块利用细菌检测仪检测培养基制备过程中细菌数据；
步骤三，主控模块通过溶解模块将选取的原料加入到超纯水中，并使各组分溶解，调节pH7.0±0.1；
步骤四，通过灭菌模块利用高压灭菌锅将溶解液在115-125℃的条件下灭菌20min，保存温度为40℃；
步骤五，通过纯化模块将雨生红球藻藻种进行分离纯化操作；通过分析模块利用拉曼光谱仪分析种雨生红球藻类胡萝卜素及虾青素在细胞内不同时间的成分浓度；
步骤六，通过检测显示模块利用触控显示屏显示智能检测系统界面及检测的温度、PH、细菌数据信息。
进一步，纯化模块的纯化方法包括：
(1)通过生物检测抽样设备，选取含有雨生红球藻细胞的水样或含有杂菌的单种藻液，加入配好的培养基，经诱导培养后，静置，去掉上层液体，收集培养容器底部的藻细胞，其中，培养基包括醋酸钠、琼脂粉、生物素、维生素、硝酸钠、碳酸钠、硫酸镁、磷酸氢二钾、无水氯化钙、乙二胺四乙酸二钠、六水合三氯化铁、氯化锌、硼酸、六水合氯化钴、五水合硫酸铜、六水合氯化锰、四水合钼酸铵、超纯水，诱导培养时间为25h，采用4000lx的光强；
(2)将收集得到的藻细胞复溶解于经配置的浓度为20‰的无菌氯化钠溶液中处理1h，随后经静置后去掉上清液，收集底部细胞；
(3)将底部细胞溶解于含有抗生素的培养基中，其中，抗生素使用浓度为通常除菌浓度的3倍，其中含有使用浓度100μg/mL的制霉菌素，其余成分的使用浓度为150μg/mL，使用抗生素处理2次，处理时间1h，随后静置、沉降；
(4)将经沉降的液体去掉上清液，然后用无菌培养基稀释，无菌培养基包括醋酸钠、琼脂粉、生物素、维生素、硝酸钠、碳酸钠、硫酸镁、磷酸氢二钾、无水氯化钙、乙二胺四乙酸二钠、六水合三氯化铁、氯化锌、硼酸、六水合氯化钴、五水合硫酸铜、六水合氯化锰、四水合钼酸铵、超纯水；
(5)将得到的稀释液接入培养孔板中培养，其中，取样体积为60μL，光强为400lx；
(6)将培养孔板在光强1000lx、温度23±2℃、光暗比L:D＝12h:12h的条件下培养5d，然后通过镜检和菌类检测，选出纯化的藻株。
进一步，分析模块的分析方法如下：
1)采用拉曼光谱仪，获取虾青素标准品的谱线信号；
2)增强拉曼光谱信号；拉曼光谱仪主控制器接收用户设定的积分时间T、激光功率W；拉曼光谱仪主控制器控制CCD清理残留光生电荷；进行拉曼信号强度预扫描，确定欠饱和曝光次数n和CCD每次曝光时间t，包括：开启激光器0.5S后，关闭激光器，采集CCD数据，判断CCD采集到的最大信号幅度a，并以CCD饱和电压的70％除以信号幅度a，得到k；分别进行n次欠饱和曝光，并分别收集CCD信号数据，保存在寄存器组中，前n-1次曝光时间为0.5×k秒，最后一次曝光时间为T-0.5×k秒；将n次欠饱和曝光的CCD信号数据进行累加，从而得到了整个拉曼光谱信号。
3)采用步骤1)相同的拉曼光谱仪，相同的操作获取雨生红球藻类待测样本的拉曼光谱原始信息；
4)将步骤3)中获得的拉曼光谱原始信息进行预处理得到谱图信息，在拉曼峰对应的键位C＝C拉伸振动处作为类胡萝卜素化学结构的主要敏感标记；
5)利用多元曲线分辨MCR方法并结合交替最小二乘ALS经过50次迭代后解析出几种主要成分，将解析出的主要成分光谱与步骤1)得到的虾青素标准品的拉曼光谱进行对比分析，确定出待测样本内虾青素的成分；
6)结合MCR-ALS算法计算出步骤5)中确定的待测样本内虾青素成分的浓度，通过计算出的比例再结合步骤4)预处理后待测样本拉曼光谱在对应C＝C伸缩键处的拉曼峰值强度，计算出待测样本中虾青素应占的强度值，利用得到的强度值进行虾青素成分在细胞内的空间可视化分析；
7)不同时间段，重复步骤1)～6)得到虾青素在细胞内不同时间的成分浓度和空间可视化分析。
本发明的优点及积极效果为：本发明通过纯化模块利用雨生红球藻细胞在不利条件下迅速形成红孢囊细胞，细胞密度和体积增大，对外界不利条件抵抗力大大增强等特性，采用高光、高盐等不利条件，除掉或部分除掉样品中的杂藻或杂菌，挑选出密度和颜色都与其余藻有明显差异的雨生红球藻细胞；然后，利用短时间的抗生素处理、结合稀释等综合措施，可在1-2周左右的时间内得到纯度较高的藻种；同时，通过分析模块实现了基于拉曼光谱技术的微藻色素分布的化学成像，不需要配制任何溶液以及化学测定，大大简化了操作步骤，缩短了检测时间，也避免了由于操作人员操作不熟练或者主观因素带来的测量结果不准确等后果。温度检测模块通过构建补偿模型函数对测量值进行补偿，有效提高了温度检测的精确度，主控模块利用基于网络编码的数据采集算法，有利于快速、有效的进行数据的采集，保证数据采集的准确性，保证系统计算及调用的准确、稳定进行。
附图说明
图1是本发明实施例提供的用于培养雨生红球藻的培养基制备方法流程图。
图2是本发明实施例提供的用于培养雨生红球藻的培养基及智能检测系统结构框图。
图2中：1、选料模块；2、温度检测模块；3、PH检测模块；4、细菌检测模块；5、主控模块；6、溶解模块；7、灭菌模块；8、纯化模块；9、分析模块；10、检测显示模块。
具体实施方式
为能进一步了解本发明的发明内容、特点及功效，兹例举以下实施例，并配合附图详细说明如下。
下面结合附图对本发明的结构作详细的描述。
如图1所示，本发明提供的用于培养雨生红球藻的培养基制备方法包括以下步骤：
步骤S101，通过选料模块利用称量器选取醋酸钠1份、琼脂粉10份、生物素0.5份、维生素B12份、硝酸钠1.5份、碳酸钠0.3份、硫酸镁0.2份、磷酸氢二钾0.1份、无水氯化钙15份、乙二胺四乙酸二钠5份、六水合三氯化铁2份、氯化锌0.5份、硼酸0.2份、六水合氯化钴0.5份、五水合硫酸铜0.6份、六水合氯化锰0.4份、四水合钼酸铵0.3份、超纯水10份；
步骤S102，通过温度检测模块利用温度传感器检测培养基制备过程中温度数据；通过PH检测模块利用PH检测仪检测培养基制备过程中PH数据；通过细菌检测模块利用细菌检测仪检测培养基制备过程中细菌数据；
步骤S103，主控模块通过溶解模块将选取的原料加入到超纯水中，并使各组分溶解，调节pH7.0±0.1；
步骤S104，通过灭菌模块利用高压灭菌锅将溶解液在115-125℃的条件下灭菌20min，保存温度为40℃；
步骤S105，通过纯化模块将雨生红球藻藻种进行分离纯化操作；通过分析模块利用拉曼光谱仪分析种雨生红球藻类胡萝卜素及虾青素在细胞内不同时间的成分浓度；
步骤S106，通过检测显示模块利用触控显示屏显示智能检测系统界面及检测的温度、PH、细菌数据信息。
如图2所示，本发明提供的用于培养雨生红球藻的培养基及智能检测系统包括：选料模块1、温度检测模块2、PH检测模块3、细菌检测模块4、主控模块5、溶解模块6、灭菌模块7、纯化模块8、分析模块9、检测显示模块10。
选料模块1，与主控模块5连接，用于通过称量器选取醋酸钠1份、琼脂粉10份、生物素0.5份、维生素B12份、硝酸钠1.5份、碳酸钠0.3份、硫酸镁0.2份、磷酸氢二钾0.1份、无水氯化钙15份、乙二胺四乙酸二钠5份、六水合三氯化铁2份、氯化锌0.5份、硼酸0.2份、六水合氯化钴0.5份、五水合硫酸铜0.6份、六水合氯化锰0.4份、四水合钼酸铵0.3份、超纯水10份；
温度检测模块2，与主控模块5连接，用于通过温度传感器检测培养基制备过程中温度数据；
PH检测模块3，与主控模块5连接，用于通过PH检测仪检测培养基制备过程中PH数据；
细菌检测模块4，与主控模块5连接，用于通过细菌检测仪检测培养基制备过程中细菌数据；
主控模块5，与选料模块1、温度检测模块2、PH检测模块3、细菌检测模块4、溶解模块6、灭菌模块7、纯化模块8、分析模块9、检测显示模块10连接，用于通过单片机控制各个模块正常工作；
溶解模块6，与主控模块5连接，用于将选取的原料加入到超纯水中，并使各组分溶解，调节pH7.0±0.1；
灭菌模块7，与主控模块5连接，用于通过高压灭菌锅将溶解液在115-125℃的条件下灭菌20min，保存温度为40℃；
纯化模块8，与主控模块5连接，用于将雨生红球藻藻种进行分离纯化操作；
分析模块9，与主控模块5连接，用于通过拉曼光谱仪分析种雨生红球藻类胡萝卜素及虾青素在细胞内不同时间的成分浓度；
检测显示模块10，与主控模块5连接，用于通过触控显示屏显示智能检测系统界面及检测的温度、PH、细菌数据信息。
本发明提供的纯化模块8纯化方法如下：
A、通过生物检测抽样设备，选取含有雨生红球藻细胞的水样或含有杂菌的单种藻液，加入配好的培养基，经诱导培养后，静置，去掉上层液体，收集培养容器底部的藻细胞，其中，培养基包括醋酸钠、琼脂粉、生物素、维生素、硝酸钠、碳酸钠、硫酸镁、磷酸氢二钾、无水氯化钙、乙二胺四乙酸二钠、六水合三氯化铁、氯化锌、硼酸、六水合氯化钴、五水合硫酸铜、六水合氯化锰、四水合钼酸铵、超纯水，诱导培养时间为25h，采用4000lx的光强；
B、将收集得到的藻细胞复溶解于经配置的浓度为20‰的无菌氯化钠溶液中处理1h，随后经静置后去掉上清液，收集底部细胞；
C、将底部细胞溶解于含有抗生素的培养基中，其中，抗生素使用浓度为通常除菌浓度的3倍，其中含有使用浓度100μg/mL的制霉菌素，其余成分的使用浓度为150μg/mL，使用抗生素处理2次，处理时间1h，随后静置、沉降；
D、将经沉降的液体去掉上清液，然后用无菌培养基稀释，无菌培养基包括醋酸钠、琼脂粉、生物素、维生素、硝酸钠、碳酸钠、硫酸镁、磷酸氢二钾、无水氯化钙、乙二胺四乙酸二钠、六水合三氯化铁、氯化锌、硼酸、六水合氯化钴、五水合硫酸铜、六水合氯化锰、四水合钼酸铵、超纯水；
E、将得到的稀释液接入培养孔板中培养，其中，取样体积为60μL，光强为400lx；
F、将培养孔板在光强1000lx、温度23±2℃、光暗比L:D＝12h:12h的条件下培养5d，然后通过镜检和菌类检测，选出纯化的藻株。
本发明提供的分析模块9分析方法如下：
1)采用拉曼光谱仪，获取虾青素标准品的谱线信号；
2)增强拉曼光谱信号；拉曼光谱仪主控制器接收用户设定的积分时间T、激光功率W；拉曼光谱仪主控制器控制CCD清理残留光生电荷；进行拉曼信号强度预扫描，确定欠饱和曝光次数n和CCD每次曝光时间t，包括：开启激光器0.5S后，关闭激光器，采集CCD数据，判断CCD采集到的最大信号幅度a，并以CCD饱和电压的70％除以信号幅度a，得到k；分别进行n次欠饱和曝光，并分别收集CCD信号数据，保存在寄存器组中，前n-1次曝光时间为0.5×k秒，最后一次曝光时间为T-0.5×k秒；将n次欠饱和曝光的CCD信号数据进行累加，从而得到了整个拉曼光谱信号。
3)采用步骤1)相同的拉曼光谱仪，相同的操作获取雨生红球藻类待测样本的拉曼光谱原始信息；
4)将步骤3)中获得的拉曼光谱原始信息进行预处理得到谱图信息，在拉曼峰对应的键位C＝C拉伸振动处作为类胡萝卜素化学结构的主要敏感标记；
5)利用多元曲线分辨MCR方法并结合交替最小二乘ALS经过50次迭代后解析出几种主要成分，将解析出的主要成分光谱与步骤1)得到的虾青素标准品的拉曼光谱进行对比分析，确定出待测样本内虾青素的成分；
6)结合MCR-ALS算法计算出步骤5)中确定的待测样本内虾青素成分的浓度，通过计算出的比例再结合步骤4)预处理后待测样本拉曼光谱在对应C＝C伸缩键处的拉曼峰值强度，计算出待测样本中虾青素应占的强度值，利用得到的强度值进行虾青素成分在细胞内的空间可视化分析；
7)不同时间段，重复步骤1)～6)得到虾青素在细胞内不同时间的成分浓度和空间可视化分析。
本发明提供的步骤1)中拉曼光谱仪采用雷尼绍显微共焦拉曼光谱仪，将制好的待测样本切片固定在显微拉曼光谱仪物镜下方载物台上，激光束通过50X的物镜聚焦到样本的表面，其中曝光时间设置为1s，激光强度为1mv，累计次数一次，采样在恒温25℃条件下进行的。
进一步，温度检测模块2中为了提高温度检测的精确度，对测量值进行补偿，设输出的温度为Tm，外界的环节温度Te，而温度漂移即每个测量点的测量误差E可看作Tm、Te的二元函数，即：
E＝F(Tm，Te)
将2个自变量Tm、Te作为训练集输入值的2个分量，因变量E作为训练集的目标值，利用IAGA-LSSVM进行拟合建模，对正则化参数γ和径向基参数σ进行寻优，利用所得的最优参数求解式：
可得到函数模型最优参数α和b，从而得到建立的温度漂移曲面最优模型函数为：
利用此方法建立的模型函数值对温度传感器的测量值进行补偿，即：
进一步，主控模块5在对传感器数据进行采集过程中，利用基于网络编码的数据采集算法，有利于快速、有效的进行数据的采集，保证数据采集的准确性，保证系统计算及调用的准确、稳定进行；具体的基于网络编码的数据采集算法为：
给每个传感器节点v分配一个全局编码向量c(v)＝[α1(v)α2(v)…αk(v)]T(αi(v)∈Fq)；由于传感器节点存储空间有限，将采集到的环境信息向量X＝[x1x2…xk]∈Fk q与全局编码向量进行线性网络编，生成码字存储于传感器节点；则传感器节点v中存储的码字满足
式中，向量c(v)＝[α1(v)α2(v)…αk(v)]T(αi(v)∈Fq)是有限域Fq中的一个k维向量；
设k个传感器节点对应的全局编码向量分别为[α11α12…α1k]T，[α21α22…α2k]T，…，[αk1αk2…αkk]T，则采集到的码字可以表示为：
即为：
式中，
式中，yi表示PCC采集到的第i个节点上的码字；矩阵H为PCC采集的k个传感器节点上的全局编码向量为列向量构成的矩阵；为了确保PCC能够恢复出环境信息X，网络中任意k个传感器节点上的全局编码向量必须线性无关，从而使矩阵H满秩。
以上所述仅是对本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。
Claims (4)
1.一种用于培养雨生红球藻的培养基，其特征在于，所述用于培养雨生红球藻的培养基按照质量份数由醋酸钠1份、琼脂粉10份、生物素0.5份、维生素B12份、硝酸钠1.5份、碳酸钠0.3份、硫酸镁0.2份、磷酸氢二钾0.1份、无水氯化钙15份、乙二胺四乙酸二钠5份、六水合三氯化铁2份、氯化锌0.5份、硼酸0.2份、六水合氯化钴0.5份、五水合硫酸铜0.6份、六水合氯化锰0.4份、四水合钼酸铵0.3份和超纯水10份组成。
2.一种如权利要求1所述用于培养雨生红球藻的培养基的制备方法，其特征在于，所述用于培养雨生红球藻的培养基的制备方法包括：
步骤一，通过选料模块利用称量器选取醋酸钠1份、琼脂粉10份、生物素0.5份、维生素B12份、硝酸钠1.5份、碳酸钠0.3份、硫酸镁0.2份、磷酸氢二钾0.1份、无水氯化钙15份、乙二胺四乙酸二钠5份、六水合三氯化铁2份、氯化锌0.5份、硼酸0.2份、六水合氯化钴0.5份、五水合硫酸铜0.6份、六水合氯化锰0.4份、四水合钼酸铵0.3份、超纯水10份；
步骤二，通过温度检测模块利用温度传感器检测培养基制备过程中温度数据；通过PH检测模块利用PH检测仪检测培养基制备过程中PH数据；通过细菌检测模块利用细菌检测仪检测培养基制备过程中细菌数据；
步骤三，主控模块通过溶解模块将选取的原料加入到超纯水中，并使各组分溶解，调节pH7.0±0.1；
步骤四，通过灭菌模块利用高压灭菌锅将溶解液在115-125℃的条件下灭菌20min，保存温度为40℃；
步骤五，通过纯化模块将雨生红球藻藻种进行分离纯化操作；通过分析模块利用拉曼光谱仪分析种雨生红球藻类胡萝卜素及虾青素在细胞内不同时间的成分浓度；
步骤六，通过检测显示模块利用触控显示屏显示智能检测系统界面及检测的温度、PH、细菌数据信息。
3.如权利要求2所述的用于培养雨生红球藻的培养基的制备方法，其特征在于，纯化模块的纯化方法包括：
(1)通过生物检测抽样设备，选取含有雨生红球藻细胞的水样或含有杂菌的单种藻液，加入配好的培养基，经诱导培养后，静置，去掉上层液体，收集培养容器底部的藻细胞，其中，培养基包括醋酸钠、琼脂粉、生物素、维生素、硝酸钠、碳酸钠、硫酸镁、磷酸氢二钾、无水氯化钙、乙二胺四乙酸二钠、六水合三氯化铁、氯化锌、硼酸、六水合氯化钴、五水合硫酸铜、六水合氯化锰、四水合钼酸铵、超纯水，诱导培养时间为25h，采用4000lx的光强；
(2)将收集得到的藻细胞复溶解于经配置的浓度为20‰的无菌氯化钠溶液中处理1h，随后经静置后去掉上清液，收集底部细胞；
(3)将底部细胞溶解于含有抗生素的培养基中，其中，抗生素使用浓度为通常除菌浓度的3倍，其中含有使用浓度100μg/mL的制霉菌素，其余成分的使用浓度为150μg/mL，使用抗生素处理2次，处理时间1h，随后静置、沉降；
(4)将经沉降的液体去掉上清液，然后用无菌培养基稀释，无菌培养基包括醋酸钠、琼脂粉、生物素、维生素、硝酸钠、碳酸钠、硫酸镁、磷酸氢二钾、无水氯化钙、乙二胺四乙酸二钠、六水合三氯化铁、氯化锌、硼酸、六水合氯化钴、五水合硫酸铜、六水合氯化锰、四水合钼酸铵、超纯水；
(5)将得到的稀释液接入培养孔板中培养，其中，取样体积为60μL，光强为400lx；
(6)将培养孔板在光强1000lx、温度23±2℃、光暗比L:D＝12h:12h的条件下培养5d，然后通过镜检和菌类检测，选出纯化的藻株。
4.如权利要求2所述的用于培养雨生红球藻的培养基的制备方法，其特征在于，分析模块的分析方法如下：
1)采用拉曼光谱仪，获取虾青素标准品的谱线信号；
2)增强拉曼光谱信号；拉曼光谱仪主控制器接收用户设定的积分时间T、激光功率W；拉曼光谱仪主控制器控制CCD清理残留光生电荷；进行拉曼信号强度预扫描，确定欠饱和曝光次数n和CCD每次曝光时间t，包括：开启激光器0.5S后，关闭激光器，采集CCD数据，判断CCD采集到的最大信号幅度a，并以CCD饱和电压的70％除以信号幅度a，得到k；分别进行n次欠饱和曝光，并分别收集CCD信号数据，保存在寄存器组中，前n-1次曝光时间为0.5×k秒，最后一次曝光时间为T-0.5×k秒；将n次欠饱和曝光的CCD信号数据进行累加，从而得到了整个拉曼光谱信号；
3)采用步骤1)相同的拉曼光谱仪，相同的操作获取雨生红球藻类待测样本的拉曼光谱原始信息；
4)将步骤3)中获得的拉曼光谱原始信息进行预处理得到谱图信息，在拉曼峰对应的键位C＝C拉伸振动处作为类胡萝卜素化学结构的主要敏感标记；
5)利用多元曲线分辨MCR方法并结合交替最小二乘ALS经过50次迭代后解析出几种主要成分，将解析出的主要成分光谱与步骤1)得到的虾青素标准品的拉曼光谱进行对比分析，确定出待测样本内虾青素的成分；
6)结合MCR-ALS算法计算出步骤5)中确定的待测样本内虾青素成分的浓度，通过计算出的比例再结合步骤4)预处理后待测样本拉曼光谱在对应C＝C伸缩键处的拉曼峰值强度，计算出待测样本中虾青素应占的强度值，利用得到的强度值进行虾青素成分在细胞内的空间可视化分析；
7)不同时间段，重复步骤1)～6)得到虾青素在细胞内不同时间的成分浓度和空间可视化分析。
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