CN109942710A - 一种联苯菊酯单克隆抗体及其制备方法与应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种联苯菊酯单克隆抗体，其特征在于：包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列为：QVKLQQSGPGLVAPSQLQVSACTVSGLRSLSGVSWVRQPPGKLESWLGVIWSGRTNYHSALISRLTISKDNSKSQVFLNLNSLQIDDSATYYCVQRARLRWGVYNMDYWSQGTTVTVSS；所述轻链可变区的氨基酸序列为：DIELTQSPSSMYASLGERVTLTCKASQGINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGGSFGQDFSLTISSLEYEDLGIYYCLQYDEFPWTFGGGTKLEIKR；与现有技术相比，本发明的优点是：1)半抗原新颖；2)抗体性能突出；3)试纸条特异、灵敏、简便、快速；4)结果显示形象、直观、准确；5)节省费用，适用范围广，便于推广。

Description

一种联苯菊酯单克隆抗体及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及农药残留免疫分析技术领域，具体涉及一种联苯菊酯单克隆抗体及其制备方法与应用。

背景技术

联苯菊酯(bifenthrin)又名天王星、虫螨灵、毕芬宁，是由FMC公司研制开发的一种拟除虫菊酯类杀虫、杀螨剂，用于防治棉铃虫、棉红蜘蛛、桃小食心虫、梨小食心虫、山楂叶螨、柑桔红蜘蛛、黄斑蝽、茶翅蝽、菜蚜、菜青虫、小菜蛾、茄子红蜘蛛、茶细蛾等20多种害虫。

目前，对农药残留的检测方法主要是仪器分析方法，包括高效液相色谱法(Highperformance liquid chromatography，HPLC)、气相色谱法(Gas chromatography，GC)、薄层色谱法(Thin layer chromatography，TLC)、液-质串联法(HPLC-MS)和气-质串联法(GC-MS)等。然而，这一类传统的检测方法通常需要贵重的仪器设备，并只能在实验室中进行。与仪器分析方法相比，免疫检测方法因其简便、经济、快速等优点而在农药残留检测领域中受到越来越多的关注。

ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent Assay)方法是常用的免疫检测方法，但是其却有操作步骤相对较多，检测时间较长，检测结果不够直观，不能在线进行检测等缺陷。因而ELISA在联苯菊酯的快速检测上的应用受到很大的限制。胶体金试纸条无需专业操作人员及任何辅助类仪器，根据反应所显现的条带几分钟即可判定结果，不仅操作简便、快速，且结果直观准确、成本低。但是，目前已报道的联苯菊酯抗体的敏感性均不高，基于该抗体制备的胶体金试纸条的灵敏度通常达不到实际检测的需要。

发明内容

本发明目的是：提供一种联苯菊酯单克隆抗体及其制备方法与应用。

本发明的技术方案是：一种联苯菊酯单克隆抗体，包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列为：QVKLQQSGPGLVAPSQLQVSACTVSGLRSLSGVSWVRQPPGKLESWLGVIWSGRTNYHSALISRLTISKDNSKSQVFLNLNSLQIDDSATYYCVQRARLRWGVYNMDYWSQGTTVTVSS；所述轻链可变区的氨基酸序列为：DIELTQSPSSMYASLGERVTLTCKASQGINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGGSFGQDFSLTISSLEYEDLGIYYCLQYDEFPWTFGGGTKLEIKR。

本发明还提供了一种联苯菊酯单克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

步骤1：将免疫半抗原偶联BSA制备得到免疫原；:

步骤2：用免疫原免疫BALB/c小鼠，以相同的免疫剂量免疫多次，免疫次数大于或等于5，首次免疫由等体积的免疫原和弗氏完全佐剂乳化，腹腔注射，之后用等体积免疫抗原和弗氏不完全佐剂乳化，且从第三次免疫开始，每次免疫后尾静脉采血，测定效价，选取效价最高的小鼠脾脏细胞；

步骤3：将骨髓瘤细胞SP2/0与步骤2中所得的效价最高的小鼠脾脏细胞进行细胞融合制备得到杂交瘤细胞；

步骤4：通过筛选和亚克隆得到能稳定分泌抗联苯菊酯单克隆抗体的杂交瘤细胞株；再将该杂交瘤细胞株注射小鼠腹内制得腹水；

步骤5：采用Protein A纯化小鼠腹水，得到联苯菊酯单克隆抗体。

进一步的：所述步骤1中的免疫半抗原偶联BSA的结构式为:

进一步的：所述步骤2中免疫剂量为100μg/只(200μL)。

进一步的：所述步骤3中效价最高的小树脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0的比例为10:1。

本发明的又一方面提供了一种联苯菊酯胶体金检测试纸条，包括衬板和依次排列在所述衬板上的样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫，所述金标结合垫内吸附有联苯菊酯金标单克隆抗体，所述纤维素膜上有隐形检测线和隐形对照线，所述隐形检测线用联苯菊酯半抗原偶联的载体蛋白溶液印制。

进一步的：所述隐形对照线由兔抗鼠IgG抗体印制，所述衬板由硬质塑胶条或不吸水硬纸条制成，所述吸水垫为吸水滤纸或滤油纸。

与现有技术相比，本发明的优点是：

1)半抗原新颖：本发明使用的联苯菊酯半抗原为国内外首次报道，偶联载体蛋白后具有很好的稳定性及免疫效果。

2)抗体性能突出：本发明提供的联苯菊酯单克隆抗体特异性识别联苯菊酯，与其他拟除虫菊酯类杀虫剂无交叉反应；利用本发明提供的抗联苯菊酯抗体实现的竞争ELISA的抑制中浓度(IC50)为20ng/mL，检测限(IC10，LOD)为0.5ng/mL，优于目前已报道的联苯菊酯抗体。

3)试纸条特异、灵敏、简便、快速：胶体金试纸条很好的保留了单克隆抗体的特性，具有较强的特异性和较高的敏感性，检出最低限量为10ng/mL；无需任何其他辅助仪器，可现场操作，只要将检测样加入样品垫，在5至10分钟内即可判定检测结果。

4)结果显示形象、直观、准确：胶体金试纸条的检测结果以纤维素膜上的显色情况来判断，结果判定形象、直观、准确、简单明了。

5)节省费用，适用范围广，便于推广：使用胶体金试纸条进行检测，比使用仪器和ELISA试剂盒检测进行检测的费用大幅降低；试纸条的使用范围广，可满足不同层次人员的需要，便于推广应用，具有广阔的市场前景和明显的经济和社会效益。

附图说明

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围：

图1为本发明中联苯菊酯胶体金检测试纸条俯瞰结构示意图；

图2为本发明中联苯菊酯胶体金测试纸条剖面结构示意图；

图3为本发明中联苯菊酯胶体金检测试纸条结果判定示意图；

其中：1、衬板；2、样品垫；3、金标结合垫；4、纤维素膜；5、隐形检测线；6、隐形对照线；7、吸水垫；8-1、样品浸入端保护膜；8-2、手柄端保护膜；9、标识线。

具体实施方式

实施例：一种联苯菊酯胶体金检测试纸条，包括衬板1和依次排列在所述衬板1上的样品垫2、金标结合垫3、纤维素膜4和吸水垫7，所述金标结合垫3内吸附有联苯菊酯金标单克隆抗体，所述纤维素膜4上有隐形检测线5和隐形对照线6，所述隐形检测线5用联苯菊酯半抗原偶联的载体蛋白溶液印制。所述隐形对照线6由兔抗鼠IgG抗体印制，所述衬板1由硬质塑胶条制成，所述吸水垫7为吸水滤纸。

联苯菊酯胶体金检测试纸条的制备方法包括以下步骤：

第一步：联苯菊酯半抗原与OVA偶联得到联苯菊酯半抗原偶联的载体蛋白溶液；

A、联苯菊酯半抗原的合成：

3-(4-硝基苯氧基)-苄基-(Z)-(1R,S)-顺式-2,2-二甲基-3-(2-氯-3,3,3-三氟-1-丙烯基)环丙烷羧酸酯的合成：称取0.97g(4mmol)Z-(1R,S)-顺式-2,2-二甲基-3-(2-氯-3,3,3-三氟-1-丙烯基)环丙烷羧酸至1mL三氯甲烷(含有1μL DMF)。加入0.52mL亚硫酰氯(7.12mmol)，N2保护下65℃搅拌反应2h。去除溶剂后加入2mL己烷，再去除溶剂。固体沉淀溶解在3mL三氯甲烷中，并一次性加入到冰预冷的3mL含有0.98g(0.4mmol)3-(4-硝基苯氧基)-苄醇和0.288mL吡啶的氯仿溶液中，室温反应3h。使用水、稀HCl、饱和NaHCO₃和水对反应溶液依次各洗一次。无水硫酸钠去水后去除有机溶剂，获得1.43g(76％)黄色油状物。

3-(4-氨基苯氧基)-苄基-(Z)-(1R,S)-顺式-2,2-二甲基-3-(2-氯-3,3,3-三氟-1-丙烯基)环丙烷羧酸酯的合成。将240mg(0.5mmol)产物溶解在2mL乙醇中，加入565mg(2.5mmol)氯化亚锡，70℃搅拌反应30min。冷却后，使用乙醚和水稀释，并加入0.45g硅藻土和0.42g NaHCO3。过滤后，使用乙醚对固体洗1次。合并有机相后旋转蒸发，获得油状物。经硅胶色谱纯化后获得156mg(71％)黄色油状物。

B、将联苯菊酯半抗原与载体蛋白偶联：将0.1mmol半抗原溶解在1mL1M HCl溶液中，冰浴搅拌下加入0.5mL NaNO₂水溶液(14mg/mL)。加入0.3mL DMF后搅拌10min。将溶液平均分成两份(0.9mL)，分别加入到20mL含有KLH(免疫原，131mg)和BSA(包被原，103mg)的冰浴遇冷的硼酸缓冲液(0.2M,pH8.9)中，冰浴条件下搅拌反应30min。反应结束后使用1M的NaOH将溶液(黄色)的pH值调至7.0。加入等体积(20.9mL)冰浴预冷的丙酮，3000g离心10min。使用5mL冰浴预冷的丙酮对沉淀物洗3次。沉淀物溶解在10mL水中，储存在-20℃。

第二步：联苯菊酯单克隆抗体与胶体金的标记；

联苯菊酯单克隆抗体的制备：以100μg每只的抗原量免疫7周龄健康的雌性BALB/c小鼠。每次间隔时间为3周，最后一次超强免疫后3天，无菌条件下取出小鼠脾细胞，将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0以10：1的细胞数量用PEG介导的方法融合。融合后置于37℃、5％CO₂培养箱中培养。培养至细胞长满培养孔1/3时，用间接竞争ELISA法选择强阳性、抑制率高、细胞生长旺盛的孔进行3次亚克隆，然后扩大培养，建立杂交瘤细胞株。使用特异性的细胞株制备腹水并用Protein A进行抗体纯化，之后用超滤离心管去盐，冷冻抽干获得干粉状抗体，并于-20℃冻存备用。

抗体可变区氨基酸序列的测定：

1.1提取mRNA：

(1)收集细胞瓶里的杂交瘤细胞，弃上清，加TRIZOL试剂1ml，立即吹打。(观察：液体变粘稠，细胞脱壁)。

(2)将各孔内消化好的细胞裂解液吸到一DEPC处理过的1.5ml EP管中，加新开的氯仿0.2ml，轻摇20秒。

(3)室温静置5分钟后，12000rpm，15min，4℃，离心。然后取上清无色水相到EP管(DEPC处理过)，加等体积新开的异丙醇，颠倒离心管数次，混匀后室温下静置10分钟。

(4)12000rpm，10分钟，4℃，离心。观察总RNA在管底的白色沉淀，弃去上清，75％乙醇1.0ml洗涤(用DEPC水新配制)后，7500rpm，5min，4℃离心，重复两次洗涤。

(5)去上清，点离，用小Tip吸干液体。气干沉淀5-10分钟，DEPC处理水23ul加入，中枪打匀，57℃水浴10分钟溶解总RNA，测OD值。

(6)1.2％琼脂糖电泳,155，30min。

1.2反转录：

用PrimeScriptTM RT reagent Kit with gDNA Eraser试剂盒(TaKaRa)反转录得到cDNA，-20℃冻存。

1.3DNA片段扩增及测序：

用Trans-Tap酶试剂盒(北京全式金生物有限公司)，以cDNA为模板，进行PCR扩增，得到目的DNA片段，进行测序(北京六合华大基因科技股份有限公司上海分公司)。

其中，PCR条件：

轻链：95℃，5min---94℃，30s---49℃，30s---72℃，30s---重复循环30次---72℃，8min---12℃，终止

重链：95℃，5min---94℃，30s---60℃，30s---72℃，30s---重复循环30次---72℃，8min---12℃，终止

1.4抗体可变区氨基酸序列的确定：

经过翻译序列为：

(1)抗体重链可变区氨基酸序列为：

QVKLQQSGPGLVAPSQLQVSACTVSGLRSLSGVSWVRQPPGKLESWLGVIWSGRTNYHSALISRLTISKDNSKSQVFLNLNSLQIDDSATYYCVQRARLRWGVYNMDYWSQGTTVTVSS；

(2)抗体轻链可变区氨基酸序列为：

DIELTQSPSSMYASLGERVTLTCKASQGINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGGSFGQDFSLTISSLEYEDLGIYYCLQYDEFPWTFGGGTKLEIKR。

第三步：金标抗体和金标结合垫3的制备：采用柠檬酸三钠还原氯金酸的方法，制备平均直径在40nm的胶体金悬浮液。在回流条件下，把100ml0.01％的氯金酸溶液加热至沸腾，不停的搅拌，迅速加入1.1ml 1％的柠檬酸三钠。当反应溶液颜色变成葡萄红色时继续加热搅拌5min。冷却至室温后，加入0.05％的叠氮化钠4℃保存。胶体金在与抗体标记前以0.2mol的K₂CO₃溶液调到pH为8.2，采用经典NaCl滴定法确定30μg抗体标记1mL胶体金溶液。然后按最佳标记量进行标记，标记1小时后，搅拌下加入10％BSA(使最终BSA浓度为1％)，孵育1小时后4℃、10000rpm离心25min，并去上清。加入胶体金溶液同体积的2％BSA溶液重悬，4℃10000rpm离心25min，重复两次。最后，用1/5胶体金溶液体积的TB溶液(含3％BSA、3％蔗糖、0.01mol/L硼酸钠和0.05％叠氮化钠)重悬，4℃保存。用XYZ-3000三维喷膜仪把4％的BSA溶液以8μL/cm的量喷在玻璃棉上，使用干燥箱42℃干燥50min，再把金标记抗体以6μL/cm的量喷在玻璃棉上，干燥箱42℃干燥50min，真空干燥保存。

第四步：联苯菊酯半抗原偶联的载体蛋白溶液和兔抗鼠IgG抗体包被纤维素膜4；

用XYZ-3000三维喷膜仪把浓度为1mg/mL的包被抗原以1.2μL/cm的量喷在纤维素膜4的偏下侧，绘制隐形检测线5。用XYZ-3000三维喷膜仪把浓度为120μg/L的兔抗鼠IgG以1.2μL/cm的量喷在纤维素膜4的偏上侧，绘制隐形对照线6，两线间隔5mm。

第五步：试纸条的组装及剪切：把纤维素膜4粘贴在衬板1中间部位上，吸水垫7粘贴在纤维素膜4上侧和纤维素膜4重叠1mm。金标结合物垫3粘贴在纤维素膜4下方重叠1mm。样品垫2粘贴在金标结合物垫3下方重叠2mm。组装好的试纸板用斩切机切成4.08mm宽的试纸条。

快速检测试纸条检测反应原理如下：当待测样品溶液加入试纸条或试纸卡测试端后，待测溶液通过虹吸作用带动待测物及金标结合物垫3中的金标抗体一起向纤维素膜4扩散，并最终渗入吸水垫7端。在扩散过程中，如果样品中有待测物时，待测物和金标抗体结合，进而占据了金标抗体上的抗原结合点，阻止金标抗体与纤维素膜4上隐形检测线5(半抗原与载体蛋白的结合物)的结合，使隐形检测线5不显色或者显色很弱即表示检测样品阳性或者弱阳性；如果样品中没有待测样品时，金标抗体在上移过程中，遇隐形检测线5显示一条清晰红线即表示检测样品阴性。同样，金标抗体也与纤维素膜4上的隐形对照线6(兔抗鼠IgG)结合，使隐形对照线6显红色。隐形对照线6颜色的有或无分别表示此试纸条的有效或无效。

检测样品液的制备：

蔬菜和水果样品溶液的预处理。称取10g样品，匀浆后移入50mL离心管中，加入20mL甲醇溶液，涡旋3min，超声提取10min，4000rpm离心5min，取1mL上清液用工作缓冲液(PBS)稀释一定倍数后测定溶液中联苯菊酯含量。

检测及结果判断

如图3所示：将胶体金检测试纸条样品端插入以上预处理的待检测样品中，插入深度不超过标识线9，待测溶液通过虹吸作用带动待测物及金标结合垫3中的金标抗体一起向纤维素膜4扩散，并最终渗入吸水垫7端。在扩散过程中，如果样品中有待测物浓度大于200ng/mL时，阻止金标抗体与纤维素膜4上隐形检测线5(半抗原与载体蛋白的结合物)的结合，使隐形检测线5不显色即表示检测样品为阳性(如图3C)；如果样品中待测物在10～200ng/mL时，阻止部分金标抗体与纤维素膜4上隐形检测线5的结合，使隐形检测线5显示很弱的红色即表示检测样品为弱阳性(如图3B)；如果样品中待测物浓度小于10ng/mL时，不能阻止金标抗体与纤维素膜4上隐形检测线5的结合，使隐形检测线5显示一条清晰红线即表示检测样品为阴性(如图3A)。同样，金标抗体也与纤维素膜4上的隐形对照线6(兔抗鼠IgG)结合，使隐形对照线6显红色，隐形对照线6颜色的有或无分别表示此试纸条的有效或无效(如图3A、B、C为有效D、E为无效)。10分钟判定检测结果。

特异性试验

将与联苯菊酯结构相似的八种农药(三氟氯氰菊酯、功夫菊酸、氯氰菊酯、溴氰菊酯、甲氰菊脂、氰戊菊酯、醚菊酯和胺菊酯)的标准品配成10000ng/mL，用本发明试纸条进行检测，纤维素膜4上隐形检测线5与隐形对照线6呈“||”排列，即联苯菊酯试纸条与三氟氯氰菊酯、功夫菊酸、氯氰菊酯、溴氰菊酯、甲氰菊脂、氰戊菊酯、醚菊酯和胺菊酯这八种农药没有交叉反应。从而可以断定此试纸条特异性很好，在进行检测时不会受到其他样品的干扰。

敏感性和均一性试验

用本发明试纸条进行检测400、200、100、50、20、10、5、2.5、0ng/mL的联苯菊酯溶液，重复10次，其中400和200ng/mL的联苯菊酯标准品检测的检测结果为纤维素膜4上的隐形对照线6呈一条红色线，即为阳性；50、20和10ng/mL的联苯菊酯标准品检测的检测结果为纤维素膜4上的隐形对照线6呈一条红色线，隐形检测线5呈一条很弱的红色线，即为弱阳性；5、2.5和0ng/mL的联苯菊酯标准品检测的检测结果为纤维素膜4上的隐形检测线5和隐形对照线6呈两条红色线。因此本发明检测试纸条的灵敏度为10ng/mL。检测显色深度均一，检测结果显示一致。

稳定性试验

将试纸条放入铝铂袋中真空包装，并且室温保存，3个月后各项指标均符合上1-2项指标，即检测其他相似农药无交叉反应，灵敏度达10ng/mL，检测显色深度均一，反应结果一致。

需要说明的是，在本文中，诸如术语“包括”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的步骤、方法或者物品不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种步骤、方法或者物品所固有的要素。

上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (7)

1.一种联苯菊酯单克隆抗体，其特征在于：包括重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区的氨基酸序列为：QVKLQQSGPGLVAPSQLQVSACTVSGLRSLSGVSWVRQPPGKLESWLGVIWSGRTNYHSALISRLTISKDNSKSQVFLNLNSLQIDDSATYYCVQRARLRWGVYNMDYWSQGTTVTVSS；所述轻链可变区的氨基酸序列为：DIELTQSPSSMYASLGERVTLTCKASQGINSYLSWFQQKPGKSPKTLIYRANRLVDGVPSRFSGGSFGQDFSLTISSLEYEDLGIYYCLQYDEFPWTFGGGTKLEIKR。

2.一种联苯菊酯单克隆抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：将免疫半抗原偶联BSA制备得到免疫原；:

步骤2：用免疫原免疫BALB/c小鼠，以相同的免疫剂量免疫多次，免疫次数大于或等于5，首次免疫由等体积的免疫原和弗氏完全佐剂乳化，腹腔注射，之后用等体积免疫抗原和弗氏不完全佐剂乳化，且从第三次免疫开始，每次免疫后尾静脉采血，测定效价，选取效价最高的小鼠脾脏细胞；

步骤3：将骨髓瘤细胞SP2/0与步骤2中所得的效价最高的小鼠脾脏细胞进行细胞融合制备得到杂交瘤细胞；

步骤4：通过筛选和亚克隆得到能稳定分泌抗联苯菊酯单克隆抗体的杂交瘤细胞株；再将该杂交瘤细胞株注射小鼠腹内制得腹水；

步骤5：采用Protein A纯化小鼠腹水，得到联苯菊酯单克隆抗体。

3.根据权利要求2所述的一种联苯菊酯单克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤1中的免疫半抗原偶联BSA的结构式为:

4.根据权利要求2所述的一种联苯菊酯单克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤2中免疫剂量为100μg/只(200μL)。

5.根据权利要求2所述的一种联苯菊酯单克隆抗体的制备方法，其特征在于：所述步骤3中效价最高的小树脾脏细胞与骨髓瘤细胞SP2/0的比例为10:1。

6.一种联苯菊酯胶体金检测试纸条，其特征在于：包括衬板和依次排列在所述衬板上的样品垫、金标结合垫、纤维素膜和吸水垫，所述金标结合垫内吸附有联苯菊酯金标单克隆抗体，所述纤维素膜上有隐形检测线和隐形对照线，所述隐形检测线用联苯菊酯半抗原偶联的载体蛋白溶液印制。

7.根据权利要求6所述的一种联苯菊酯胶体金检测试纸条，其特征在于：所述隐形对照线由兔抗鼠IgG抗体印制，所述衬板由硬质塑胶条或不吸水硬纸条制成，所述吸水垫为吸水滤纸或滤油纸。