CN109929864A - 核苷酸序列tWPRE及其基因表达载体和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于基因工程领域，更具体地说本发明涉及一种含有WPRE‑polyA元件的核苷酸序列tWPRE及其基因表达载体和应用。所述含有WPRE‑polyA元件的核苷酸序列tWPRE的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。所述基因表达载体包括上述的核苷酸序列tWPRE。本发明进一步改进了WPRE‑polyA元件，得到了优化元件tWPRE，同时在质粒转染和病毒感染两方面验证了tWPRE元件的有效性，在扩大载体容量的同时保证了高效的转基因表达效率和病毒感染效率，有助于AAV载体携带更多的特异性启动子和基因，扩大了AAV病毒的作用范围，为基础科研和临床研究提供了一种新的更特异且更高效的表达工具。
Description
技术领域
本发明属于基因工程领域，更具体地说本发明涉及一种核苷酸序列tWPRE及其基因表达载体和应用。
背景技术
腺相关病毒载体系统(AAV)具有低免疫原性，能感染分裂和非分裂细胞，以及在宿主细胞中维持长程表达，与慢病毒载体系统相比，在实现基因治疗人类疾病中表现出绝对的优势。目前，腺相关病毒载体系统(AAV)在国外已被用于多种基因疗法并进入临床试验，且取得良好效果，如失明、心脏病、肌营养不良、听觉丧失，肺癌、帕金森患者脑部等疾病。同时目前还没有发现任何一例以腺相关病毒载体为基因导入系统的临床试验出现副作用或严重死亡事件等，证明了腺相关病毒载体系统(AAV)的安全可靠性。除了临床应用，AAV载体也在基础研究领域中得到了广泛的应用。
虽然AAV载体具有很多其它病毒载体无法比拟的优势,但是AAV载体包装的常规承载量只有4.2-4.7kbp，不足以携带较大片段的组织特异性启动子或者特定的大片段基因表达，这在一定程度上局限了AAV载体的使用范围。因此，改进AAV载体元件，增加载体容量，有助于AAV病毒载体携带更多的外源核酸物质，为基础科研和临床研究提供更特异，更高效的表达工具。
WPRE(woodchuck hepatitis virus posttranscriptional regulatoryelement)即土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件，长度大约600bp，属于顺式作用元件(DNA序列)，由gamma，alpha，beta等三部分构成。WPRE的主要功能如下：1)参与AAV病毒的包装；2)帮助检测AAV病毒的滴度；3)同时有效帮助mRNA的polyA加尾效率，增强转基因的表达和稳定。poly(A)可以终止转录，将poly(A)补加到转录体的3’端，增强RNA的稳定性，提高翻译效率；部分长度的poly(A)对目的基因终止可能没有太大影响，但对蛋白表达可能会有一定影响。
因此，WPRE和poly(A)这两个元件对AAV病毒的包装和基因表达具有重要的作用。有研究报道，保留gamma和alpha部分的WPRE元件可以与SV40poly(A)融合成为只有399bp长度的片段，可以维持AAV病毒的包装和转基因的表达，然而忽略了病毒滴度的检测。因此，如何在不影响病毒包装、滴度检测和表达的前提下，尽可能增大载体容量，扩大AAV病毒的作用范围，仍然有待于进一步研究和改进。
发明内容
本发明公开了一种含有WPRE-polyA元件的核苷酸序列tWPRE，包括所述tWPRE序列的基因表达载体可在不影响病毒包装、滴度检测和表达的前提下，尽可能的增大载体容量，扩大了AAV病毒的作用范围，为基础科研和临床研究提供了一种新的更特异且更高效的表达工具。
本发明的具体方案如下：
本发明一方面公开了一种含有WPRE-polyA元件的核苷酸序列tWPRE，所述tWPRE的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
应该理解，在保持功能不变的情况下，与上述序列(及本发明中的其他序列)具有至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％序列同一性的序列也在本发明的保护范围之内。所述的序列的差异由碱基的取代、缺失或添加所致，本领域技术人员有能力，例如通过非保守碱基的替换，获得功能相似的序列，这样的序列在本发明的保护范围之内。
本发明第二个方面公开了一种基因表达载体，包括上述的核苷酸序列tWPRE。
优选的，所述载体包括骨架质粒。
更优选的，所述骨架质粒为pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLA-WPRE-hGH polyA。
应当理解，发明并不限于骨架质粒pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLA-WPRE-hGH polyA，本领域技术人员根据需要能够选择任何合适载体来完成本发明，并且在本发明的保护范围之内。
优选的，所述基因表达载体为pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-tWPRE，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
本发明第三个方面公开了一种构建上述的基因表达载体的方法，包括以下步骤：
S1：合成核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列tWPRE；
S2：将骨架质粒双酶切后回收纯化；
S3：将S2中回收纯化的产物与S1中的核苷酸序列tWPRE连接；
S4：将连接后的质粒进行转化涂板；
S5：挑取单菌落并进行测序鉴定。
将测序正确的阳性克隆子进行保存备用。
在本发明的一优选实施例中，在S2中，将pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLA-WPRE-hGHpolyA用Agel和BstE II进行双酶切。50μL酶切反应体系含pLenti-CMV-SaCas9-P2A-Puro-linker-EGFP-S11 10ug、10×Cutsmart(NEB)5μL、Age I和BstE II各2μL，用水补足至50μL，37℃酶切4h后进行1％琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下用刀片将大片段切下并进行回收纯化。
应当理解，发明并不限于限制性内切酶Agel和BstE II，本领域技术人员根据需要能够选择任何合适限制性内切酶来完成本发明，并且在本发明的保护范围之内。
在本发明的一优选实施例中，在S3中，将S2中回收纯化的产物与S1中的核苷酸序列tWPRE进行无缝克隆。50μL反应体系分别含S2中酶切产物102.2ng，S1合成序列14.3ng，1ul酶，25ul buffer，用水补足至50μL，50℃反应15min后置于冰上进行转化涂板。
本发明第四个方面公开了上述的核苷酸序列tWPRE或者上述的基因表达载体在细胞转染中的应用。
本发明第五个方面公开了上述的基因表达载体进行细胞转染的方法，包括以下步骤：
(1)接种细胞；
(2)待细胞汇合度至50％-80％时，将权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体转染细胞。
在本发明的一个实施例中，所述细胞为哺乳动物细胞，具体的，所述细胞为293T细胞(购买于美国ATCC细胞库)。应当理解，在本发明的教导之下，本领域技术人员能够选择任何其他合适的细胞种类，并且本发明的保护范围之内。
优选的，待细胞汇合度为70％-80％时进行转染。
在本发明的一具体实施例中，待细胞融合度达到70％～8 0％时，弃去细胞上清液，加入Opti-MEM培养基，1小时后将pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-tWPRE质粒0.5μg经Lipo2000试剂，转染到293T细胞中，转染48小时后拍荧光照片。
本发明第六个方面公开了一种试剂盒，所述试剂盒包括上述的核苷酸序列tWPRE或上述的基因表达载体。
本发明第七个方面公开了上述的核苷酸序列tWPRE、上述的基因表达载体或者上述的试剂盒在扩大AVV病毒载体容量中的应用。
本发明第八个方面公开了一种AVV病毒，其包括上述的核苷酸序列tWPRE或上述的基因表达载体。
在本发明的一个实施例里面，将骨架质粒和pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-tWPRE包装成AAV病毒。
本发明第九个方面公开了如下a)或b)的应用：
a)上述的核苷酸序列tWPRE或上述的基因表达载体在制备上述的试剂盒中的应用；
b)上述的核苷酸序列tWPRE或上述的基因表达载体在制备上述的AVV病毒中的应用。
本发明第十个方面公开了上述的AVV病毒在细胞感染中的应用。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，而不超出本发明的构思与保护范围。
本发明相对于现有技术具有如下的显著优点及效果：
本发明进一步改进了WPRE-polyA元件，得到了优化元件tWPRE，同时在质粒转染和病毒感染两方面验证了tWPRE元件的有效性，在扩大载体容量的同时保证了高效的转基因表达效率和病毒感染效率，有助于AAV载体携带更多的特异性启动子和基因，扩大了AAV病毒的作用范围，为基础科研和临床研究提供了一种新的更特异且更高效的表达工具。
附图说明
图1为本发明实施例提供的pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-tWPRE载体结构示意图。
图2为本发明实施例提供的质粒转染细胞荧光示意图。
图3为本发明实施例提供的包装病毒转染细胞荧光图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明的技术方案进行详细描述，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。
下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。本发明所用试剂和原料均市售可得。
术语解释：
MOI值(感染复数)通常有两种含义：1)指平均每个细胞感染病毒的活性单位数；2)以病毒颗粒或基因组数表示病毒数量，如v.p.或v.g.，这时MOI的含义是指平均每个细胞感染病毒的病毒颗粒或基因组数。
实施例1
本实施例公开了一种含有tWPRE核苷酸序列的pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-tWPRE载体的构建方法，包括以下步骤：
1)合成带有酶切位点及上下游同源臂的如SEQ ID NO：1所示的tWPRE核苷酸序列；
2)将质粒pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLA-WPRE-hGH polyA用AgeI和PmlI进行双酶切。50μL酶切反应体系含pLenti-CMV-SaCas9-P2A-Puro-linker-EGFP-S11 10ug、10×Cutsmart(NEB)5μL、Age I和BstE II各2μL，用水补足至50μL，37℃酶切4h后进行1％琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下用刀片将大片段切下并进行回收纯化。
3)将2)步得到的纯化的酶切产物和1)步的SEQ ID NO：1合成序列进行无缝克隆。50μL反应体系分别含2)酶切产物102.2ng，1)合成序列14.3ng，1ul酶，25ul buffer，用水补足至50μL，50℃反应15min后置于冰上进行转化涂板。
4)挑取单菌落，并通过基因测序鉴定其质粒构建的正确性，将正确的阳性克隆子保存、备用。
本实施例得到的pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-tWPRE载体结构示意图如图1所示。
实施例2
本实施例公开了含有tWPRE核苷酸序列的pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-tWPRE载体进行细胞转染的方法，具体步骤如下：
(1)将293T细胞(购买于美国ATCC细胞库)铺24孔板；
(2)待细胞汇合度达到70％～8 0％时弃去细胞上清液，加入Opti-MEM培养基，1小时后将骨架质粒(作为对照组)或者实施例1得到的pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-tWPRE质粒(作为实验组)各0.5μg经Lipo2000试剂，转染到293T细胞中，转染48小时后拍荧光照片，比较荧光信号检测转染效率，试验结果如图2所示，从图中可以看出，pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-tWPRE质粒转染的荧光信号比对照组更强，说明转染效率更高。
实施例3
本实施例公开了一种AVV病毒进行细胞感染的方法，包括以下步骤：
(1)将骨架质粒(作为对照组)或者实施例1中得到的pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-tWPRE(作为实验组)包装成AAV病毒；
(2)培养293T细胞(购买于美国ATCC细胞库)，铺24孔板3孔，第二天细胞汇合度达到50-70％左右时安排感染；感染时按照(细胞数×MOI值/病毒原液滴度(MOI＝5和病毒原液滴度＝4.76E+12v.g./ml))×103＝病毒加量(μl)，在每孔中加入对应的病毒体积；感染12-20h后弃去培养基，加入新鲜的细胞培养基；感染48h之后进行拍照，比较荧光信号检测感染效率，从图3可以看出，两种病毒的感染效率无显著性差异，说明tWPRE序列并不影响AAV病毒的感染效率。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 和元生物技术（上海）股份有限公司
<120> 核苷酸序列tWPRE及其基因表达载体和应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
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cggctcgggg ggtgcgtgcg tgtgtgtgtg cgtggggagc gccgcgtgcg gcccgcgctg 1080
cccggcggct gtgagcgctg cgggcgcggc gcggggcttt gtgcgctccg cgtgtgcgcg 1140
aggggagcgc ggccgggggc ggtgccccgc ggtgcggggg ggctgcgagg ggaacaaagg 1200
ctgcgtgcgg ggtgtgtgcg tgggggggtg agcagggggt gtgggcgcgg cggtcgggct 1260
gtaacccccc cctgcacccc cctccccgag ttgctgagca cggcccggct tcgggtgcgg 1320
ggctccgtac ggggcgtggc gcggggctcg ccgtgccggg cggggggtgg cggcaggtgg 1380
gggtgccggg cggggcgggg ccgcctcggg ccggggaggg ctcgggggag gggcgcggcg 1440
gcccccggag cgccggcggc tgtcgaggcg cggcgagccg cagccattgc cttttatggt 1500
aatcgtgcga gagggcgcag ggacttcctt tgtcccaaat ctgtgcggag ccgaaatctg 1560
ggaggcgccg ccgcaccccc tctagcgggc gcggggcgaa gcggtgcggc gccggcagga 1620
aggaaatggg cggggagggc cttcgtgcgt cgccgcgccg ccgtcccctt ctccctctcc 1680
agcctcgggg ctgtccgcgg ggggacggct gccttcgggg gggacggggc agggcggggt 1740
tcggcttctg gcgtgtgacc ggcggctcta gagcctctgc taaccatgtt catgccttct 1800
tctttttcct acagctcctg ggcaacgtgc tggttattgt gctgtctcat cattttggca 1860
aagaattcgt acccgggtcg ggtaccgaaa accccggtcc ggctagcgcc accggatccg 1920
gcggatctgg catggtgagc aagggcgagg agctgttcac cggggtggtg cccatcctgg 1980
tcgagctgga cggcgacgta aacggccaca agttcagcgt gtccggcgag ggcgagggcg 2040
atgccaccta cggcaagctg accctgaagt tcatctgcac caccggcaag ctgcccgtgc 2100
cctggcccac cctcgtgacc accctgacct acggcgtgca gtgcttcagc cgctaccccg 2160
accacatgaa gcagcacgac ttcttcaagt ccgccatgcc cgaaggctac gtccaggagc 2220
gcaccatctt cttcaaggac gacggcaact acaagacccg cgccgaggtg aagttcgagg 2280
gcgacaccct ggtgaaccgc atcgagctga agggcatcga cttcaaggag gacggcaaca 2340
tcctggggca caagctggag tacaactaca acagccacaa cgtctatatc atggccgaca 2400
agcagaagaa cggcatcaag gtgaacttca agatccgcca caacatcgag gacggcagcg 2460
tgcagctcgc cgaccactac cagcagaaca cccccatcgg cgacggcccc gtgctgctgc 2520
ccgacaacca ctacctgagc acccagtccg ccctgagcaa agaccccaac gagaagcgcg 2580
atcacatggt cctgctggag ttcgtgaccg ccgccgggat cactctcggc atggacgagc 2640
tgtacaaggg ctccggagac tacaaggatg acgatgacaa ggattacaaa gacgacgatg 2700
ataaggacta taaggatgat gacgacaaat aaaagcttag ctctagatta aacctcaacc 2760
tctggattac aaaatttgtg aaagattgac tggtattctt aactatgttg ctccttttac 2820
gctatgtgga tacgctgctt taatgccttt gtatcatgct attgcttccc gtatggcttt 2880
cattttctcc tccttgtata aatcctggtt gctgtctcta gttcttgcca cggcggaact 2940
catcgccgcc tgccttgccc gctgctggac aggggctcgg ctgttgggca ctgacaattc 3000
cgtggtgttt atttgtgaaa tttgtgatgc tattgcttta tttgtaacca tctagcttta 3060
tttgtgaaat ttgtgatgct attgctttat ttgtaaccat tataagctgc aataaacaag 3120
ttaacaacaa caattgcatt cattttatgt ttcaggttca gggggagatg tgggaggttt 3180
tttaaagcct gattttgtag gtaaccacgt gcggaccgag cggccgcagg aacccctagt 3240
gatggagttg gccactccct ctctgcgcgc tcgctcgctc actgaggccg ggcgaccaaa 3300
ggtcgcccga cgcccgggct ttgcccgggc ggcctcagtg agcgagcgag cgcgcagctg 3360
cctgcagggg cgcctgatgc ggtattttct ccttacgcat ctgtgcggta tttcacaccg 3420
catacgtcaa agcaaccata gtacgcgccc tgtagcggcg cattaagcgc ggcgggtgtg 3480
gtggttacgc gcagcgtgac cgctacactt gccagcgccc tagcgcccgc tcctttcgct 3540
ttcttccctt cctttctcgc cacgttcgcc ggctttcccc gtcaagctct aaatcggggg 3600
ctccctttag ggttccgatt tagtgcttta cggcacctcg accccaaaaa acttgatttg 3660
ggtgatggtt cacgtagtgg gccatcgccc tgatagacgg tttttcgccc tttgacgttg 3720
gagtccacgt tctttaatag tggactcttg ttccaaactg gaacaacact caaccctatc 3780
tcgggctatt cttttgattt ataagggatt ttgccgattt cggcctattg gttaaaaaat 3840
gagctgattt aacaaaaatt taacgcgaat tttaacaaaa tattaacgtt tacaatttta 3900
tggtgcactc tcagtacaat ctgctctgat gccgcatagt taagccagcc ccgacacccg 3960
ccaacacccg ctgacgcgcc ctgacgggct tgtctgctcc cggcatccgc ttacagacaa 4020
gctgtgaccg tctccgggag ctgcatgtgt cagaggtttt caccgtcatc accgaaacgc 4080
gcgagacgaa agggcctcgt gatacgccta tttttatagg ttaatgtcat gataataatg 4140
gtttcttaga cgtcaggtgg cacttttcgg ggaaatgtgc gcggaacccc tatttgttta 4200
tttttctaaa tacattcaaa tatgtatccg ctcatgagac aataaccctg ataaatgctt 4260
caataatatt gaaaaaggaa gagtatgagt attcaacatt tccgtgtcgc ccttattccc 4320
ttttttgcgg cattttgcct tcctgttttt gctcacccag aaacgctggt gaaagtaaaa 4380
gatgctgaag atcagttggg tgcacgagtg ggttacatcg aactggatct caacagcggt 4440
aagatccttg agagttttcg ccccgaagaa cgttttccaa tgatgagcac ttttaaagtt 4500
ctgctatgtg gcgcggtatt atcccgtatt gacgccgggc aagagcaact cggtcgccgc 4560
atacactatt ctcagaatga cttggttgag tactcaccag tcacagaaaa gcatcttacg 4620
gatggcatga cagtaagaga attatgcagt gctgccataa ccatgagtga taacactgcg 4680
gccaacttac ttctgacaac gatcggagga ccgaaggagc taaccgcttt tttgcacaac 4740
atgggggatc atgtaactcg ccttgatcgt tgggaaccgg agctgaatga agccatacca 4800
aacgacgagc gtgacaccac gatgcctgta gcaatggcaa caacgttgcg caaactatta 4860
actggcgaac tacttactct agcttcccgg caacaattaa tagactggat ggaggcggat 4920
aaagttgcag gaccacttct gcgctcggcc cttccggctg gctggtttat tgctgataaa 4980
tctggagccg gtgagcgtgg gtctcgcggt atcattgcag cactggggcc agatggtaag 5040
ccctcccgta tcgtagttat ctacacgacg gggagtcagg caactatgga tgaacgaaat 5100
agacagatcg ctgagatagg tgcctcactg attaagcatt ggtaactgtc agaccaagtt 5160
tactcatata tactttagat tgatttaaaa cttcattttt aatttaaaag gatctaggtg 5220
aagatccttt ttgataatct catgaccaaa atcccttaac gtgagttttc gttccactga 5280
gcgtcagacc ccgtagaaaa gatcaaagga tcttcttgag atcctttttt tctgcgcgta 5340
atctgctgct tgcaaacaaa aaaaccaccg ctaccagcgg tggtttgttt gccggatcaa 5400
gagctaccaa ctctttttcc gaaggtaact ggcttcagca gagcgcagat accaaatact 5460
gtccttctag tgtagccgta gttaggccac cacttcaaga actctgtagc accgcctaca 5520
tacctcgctc tgctaatcct gttaccagtg gctgctgcca gtggcgataa gtcgtgtctt 5580
accgggttgg actcaagacg atagttaccg gataaggcgc agcggtcggg ctgaacgggg 5640
ggttcgtgca cacagcccag cttggagcga acgacctaca ccgaactgag atacctacag 5700
cgtgagctat gagaaagcgc cacgcttccc gaagggagaa aggcggacag gtatccggta 5760
agcggcaggg tcggaacagg agagcgcacg agggagcttc cagggggaaa cgcctggtat 5820
ctttatagtc ctgtcgggtt tcgccacctc tgacttgagc gtcgattttt gtgatgctcg 5880
tcaggggggc ggagcctatg gaaaaacgcc agcaacgcgg cctttttacg gttcctggcc 5940
ttttgctggc cttttgctca catgt 5965
Claims (13)
1.一种含有WPRE-polyA元件的核苷酸序列tWPRE，其特征在于，所述tWPRE的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.一种基因表达载体，其特征在于，包括权利要求1所述的核苷酸序列tWPRE。
3.根据权利要求2所述的基因表达载体，其特征在于，所述载体包括骨架质粒。
4.根据权利要求3所述的基因表达载体，其特征在于，所述骨架质粒为pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLA-WPRE-hGH polyA。
5.根据权利要求2所述的基因表达载体，其特征在于，所述基因表达载体为pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-tWPRE，其核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。
6.一种构建权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体的方法，其特性在于，包括以下步骤：
S1：合成核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列tWPRE；
S2：将骨架质粒双酶切后回收纯化；
S3：将S2中回收纯化的产物与S1中的核苷酸序列tWPRE连接；
S4：将连接后的质粒进行转化涂板；
S5：挑取单菌落并进行测序鉴定。
7.根据权利要求1所述的核苷酸序列tWPRE或者权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体在细胞转染中的应用。
8.根据权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体进行细胞转染的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)接种细胞；
(2)待细胞汇合度至50％-80％时，将权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体转染细胞。
9.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述的核苷酸序列tWPRE或权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体。
10.根据权利要求1所述的核苷酸序列tWPRE、权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体或者权利要求7所述的试剂盒在扩大AVV病毒载体容量中的应用。
11.一种AVV病毒，其特征在于，包括权利1所述的核苷酸序列tWPRE或者权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体。
12.如下a)或b)的应用：
a)根据权利要求1所述的核苷酸序列tWPRE或权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体在制备权利要求9所述的试剂盒中的应用；
b)根据权利要求1所述的核苷酸序列tWPRE或权利要求2-5中任意一项所述的基因表达载体在制备权利要求11所述的AVV病毒中的应用。
13.根据权利要求9所述的AVV病毒在细胞感染中的应用。
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|---|---|---|---|
| CN201910201832.2A CN109929864A (zh) | 2019-03-18 | 2019-03-18 | 核苷酸序列tWPRE及其基因表达载体和应用 |
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Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
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ID=66987481
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| CN201910201832.2A Pending CN109929864A (zh) | 2019-03-18 | 2019-03-18 | 核苷酸序列tWPRE及其基因表达载体和应用 |
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|---|---|
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Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20050031593A1 (en) * | 2003-06-03 | 2005-02-10 | Thomas Harding | Method for treating cancer by vector-mediated delivery of one or more anti-angiogenic or pro-apoptotic genes |
| CN107630009A (zh) * | 2016-07-19 | 2018-01-26 | 中国科学院武汉物理与数学研究所 | 一种减毒增亮、复制可控的hsv重组病毒及制备方法和应用 |
| CN111733187A (zh) * | 2020-08-26 | 2020-10-02 | 和元生物技术（上海）股份有限公司 | 一种wpre突变体病毒载体及其应用 |
-
2019
- 2019-03-18 CN CN201910201832.2A patent/CN109929864A/zh active Pending
Patent Citations (3)
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