CN109929005B - 用于代谢性疾病治疗的化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

用于代谢性疾病治疗的化合物及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109929005B
CN109929005B CN201810930184.XA CN201810930184A CN109929005B CN 109929005 B CN109929005 B CN 109929005B CN 201810930184 A CN201810930184 A CN 201810930184A CN 109929005 B CN109929005 B CN 109929005B
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
group
reaction
pharmaceutically acceptable
independently selected
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201810930184.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN109929005A (zh
Inventor
付国琴
丁伟
尹博
杨超
王翠芹
豆勇
王瑞玲
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xi'an Aolitai Pharmaceutical Technology Co ltd
Original Assignee
Xi'an Aolitai Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xi'an Aolitai Pharmaceutical Technology Co ltd filed Critical Xi'an Aolitai Pharmaceutical Technology Co ltd
Publication of CN109929005A publication Critical patent/CN109929005A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109929005B publication Critical patent/CN109929005B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6564—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms
    • C07F9/6571—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07F9/6574—Esters of oxyacids of phosphorus
    • C07F9/65742—Esters of oxyacids of phosphorus non-condensed with carbocyclic rings or heterocyclic rings or ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/575—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids substituted in position 17 beta by a chain of three or more carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, ergosterol, sitosterol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/664—Amides of phosphorus acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/66—Phosphorus compounds
    • A61K31/683—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols
    • A61K31/685—Diesters of a phosphorus acid with two hydroxy compounds, e.g. phosphatidylinositols one of the hydroxy compounds having nitrogen atoms, e.g. phosphatidylserine, lecithin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/222—Amides of phosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/06—Phosphorus compounds without P—C bonds
    • C07F9/22—Amides of acids of phosphorus
    • C07F9/24—Esteramides
    • C07F9/2404—Esteramides the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic
    • C07F9/242—Esteramides the ester moiety containing a substituent or a structure which is considered as characteristic of hydroxyaryl compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07F—ACYCLIC, CARBOCYCLIC OR HETEROCYCLIC COMPOUNDS CONTAINING ELEMENTS OTHER THAN CARBON, HYDROGEN, HALOGEN, OXYGEN, NITROGEN, SULFUR, SELENIUM OR TELLURIUM
    • C07F9/00—Compounds containing elements of Groups 5 or 15 of the Periodic Table
    • C07F9/02—Phosphorus compounds
    • C07F9/547—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom
    • C07F9/6564—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms
    • C07F9/6571—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07F9/657163—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms the ring phosphorus atom being bound to at least one carbon atom
    • C07F9/657181—Heterocyclic compounds, e.g. containing phosphorus as a ring hetero atom having phosphorus atoms, with or without nitrogen, oxygen, sulfur, selenium or tellurium atoms, as ring hetero atoms having phosphorus and oxygen atoms as the only ring hetero atoms the ring phosphorus atom being bound to at least one carbon atom the ring phosphorus atom and, at least, one ring oxygen atom being part of a (thio)phosphonic acid derivative
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J41/00—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring
    • C07J41/0033—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005
    • C07J41/0094—Normal steroids containing one or more nitrogen atoms not belonging to a hetero ring not covered by C07J41/0005 containing nitrile radicals, including thiocyanide radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J51/00—Normal steroids with unmodified cyclopenta(a)hydrophenanthrene skeleton not provided for in groups C07J1/00 - C07J43/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07J—STEROIDS
    • C07J9/00—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane
    • C07J9/005—Normal steroids containing carbon, hydrogen, halogen or oxygen substituted in position 17 beta by a chain of more than two carbon atoms, e.g. cholane, cholestane, coprostane containing a carboxylic function directly attached or attached by a chain containing only carbon atoms to the cyclopenta[a]hydrophenanthrene skeleton

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Low-Molecular Organic Synthesis Reactions Using Catalysts (AREA)

Abstract

本发明提供了一种用于代谢性疾病治疗的化合物，具有式(I)或式(Ⅱ)所示结构，或其消旋体，立体异构体，几何异构体，互变异构体，溶剂化物，水合物，代谢产物，药学上可接受的盐或其前药。本发明提供的化合物为FXR和/或TGR5受体激活物，其具有激活FXR和/或TGR5受体活性，可用于制备治疗慢性肝病、代谢性疾病或门脉高压症的药物。

Description

用于代谢性疾病治疗的化合物及其制备方法和应用
本申请要求于2017年12月19日提交中国专利局、申请号为201711371702.0、发明名称为“一种用于代谢性疾病治疗的化合物及其制备方法和应用”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本发明涉及药物化学技术领域，尤其涉及一种用于代谢性疾病治疗的化合物及其制备方法和应用。
背景技术
胆汁酸具有多种生理功能，不仅在脂肪和脂溶性维生素的吸收、转运和分配中发挥重要的作用，而且可作为一种信号分子激活核受体继而调节胆汁酸和胆固醇的代谢。胆汁酸的肝肠循环是调节胆汁酸合成速率的重要调节机制。胆汁酸从肝脏合成进入胆囊，分泌入小肠，在回肠重吸收再通过门静脉循环运回肝脏。
胆汁淤积症主要发生于妊娠中晚期、肝纤维化、肝硬化以及胆道阻塞等患者，临床表现为瘙痒、黄疸(Choleplania)、血清碱性磷酸酶(ALP)升高等。针对胆汁淤积的药物，目前临床最常用的是熊去氧胆酸(Ursodesoxycholic acid,UDCA)，其为甾体化合物，系胆酸的类似物，有利胆作用，用于治疗胆固醇结石，预防药物性结石形成，但UDCA对胆汁酸核受体FXR激动作用较差，因而在治疗胆汁淤积的方面有局限性，部分胆汁淤积症的患者对UDCA不敏感。
经研究，FXR受体(法尼酯X受体)，属于激素核受体超家族的一员。具有典型的核受体结构，即包括氨基酸末端高度保守的DNA结合区、羧基末端配体结合区、氨基末端的配体非依赖性转录激活功能区和羧基端有一个配体依赖性激活功能区等。FXR在肝肠系统、肾脏、肾上腺高表达，另外在心、肺、脂肪和胃也有低水平表达。许多FXR的靶基因在肝、小肠和肾脏这些与胆汁酸合成代谢相关的组织中的表达已经被证实。FXR是胆汁酸感受器，多个研究小组报道生理状态下胆汁酸是FXR内源性配体，他们发现胆汁酸不仅与FXR可以直接结合，而且两者的相互作用可以导致协同活化因子和辅助抑制因子的募集，这说明胆汁酸的内源性FXR配体，因此FXR又被称为胆汁酸受体。FXR作为胆汁酸的受体可以通过调控参与胆汁酸代谢基因的表达来维持胆汁酸的内环境稳定。FXR是胆固醇动态平衡、甘油三酯合成以及脂肪生成的关键调节者(Crawley，Expert Opinion Ther.Patents(2010)，20(8)：1047-1057)。FXR相关的疾病包括治疗肝脏疾病、糖尿病、维生素D-相关疾病、药物导致的副作用以及肝炎。
TGR5受体(G蛋白偶联胆汁酸受体5)，是一类G-蛋白偶联受体，其被鉴定为是一种对胆汁酸作出应答的细胞表面受体。TGR5在表达和功能方面不同于胆汁酸核受体，TGR5基因普遍表达于人和动物中。它由993个碱基对编码一个包含330个氨基酸的蛋白，并形成7个具有G蛋白偶联受体结构域，其同源性在人和动物中高度保守。在人类，其基因位于染色体2q35并表达于多个组织中，其中以脾和胎盘水平最高，肺、肝、小肠和骨髓中表达丰富。在鼠肝脏，TGR5受体表达在肝血窦内皮细胞浆膜、胆管细胞顶膜和初级纤毛、胆管上皮细胞以及Kupffer细胞。
TGR5受体激动剂与胆汁酸代谢、糖和能量代谢、炎症、免疫和肿瘤均有密切关系，因此对于相关疾病的治疗具有巨大潜力。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种用于代谢性疾病治疗的化合物及其制备方法和应用，同时以FXR和/或TGR5受体为作用靶点。
本发明提供了一种化合物，具有式(I)所示结构，或其消旋体，立体异构体，几何异构体，互变异构体，溶剂化物，水合物，代谢产物，药学上可接受的盐或其前药：
Figure BDA0001766403100000021
其中，R1为氢，取代的或未被取代的烷基，或者卤素。在一些实施方案中，所述R1为氢、取代的或未被取代的C1-5烷基，或者卤素；在另一些实施方案中，所述R1为氢、氟、氯、溴、取代的或未被取代的甲基、取代的或未被取代的乙基、取代的或未被取代的丙基、取代的或未被取代的异丙基。在本发明的某些具体实施例中，所述R1为甲基、乙基、丙基或异丙基。在本发明的实施方案中，当R1为取代的烷基时，所述烷基可以为直链烷基或支链烷基，所述R1的取代基为D、F、Cl、Br、C1-3烷基、氰基、羟基、硝基、氨基或C1-3烷氧基。
各R2独立地选自取代的或未被取代的烷基、卤素、羟基、硝基、磺酸基、羧基中的任意一种或多种。在一些实施方案中，各所述R2独立地选自C1-5烷基、氟、氯、溴、羟基、硝基、羧基中的任意一种或多种。在一些实施方案中，各所述R2独立地选自氟、氯、溴、硝基、氰基、取代的或未被取代的甲基、取代的或未被取代的乙基、取代的或未被取代的异丙基中的任意一种或多种。在本发明的某些具体实施例中，各所述R2独立地选自氟、氯、硝基、取代的或未被取代的甲基、取代的或未被取代的乙基中的任意一种或多种。在本发明的实施方案中，当R2为取代的烷基时，所述烷基可以为直链烷基或支链烷基，所述R2的取代基为D、F、Cl、Br、C1-3烷基、氰基、羟基、硝基、氨基或C1-3烷氧基。
m为0～4的整数，即m为0、1、2、3或4。在本发明的某些具体实施例中，m为0或1。
各R3独立地选自取代的或未被取代的烷基、卤素、羟基、芳基中的一种或多种；在一些实施方案中，各所述R3独立地选自氟、氯、溴、C1-5烷基或C6-10的芳基；在一些实施方案中，各所述R3独立地选自氟、氯、溴、取代的或未被取代的甲基、取代的或未被取代的乙基中的一种或多种；在本发明的某些具体实施例中，各所述R3独立地选自氟、氯、溴、甲基、乙基、丙基或异丙基中的任意一种或多种。在本发明的实施方案中，当R3为取代的烷基时，所述烷基可以为直链烷基或支链烷基，所述R3的取代基为D、F、Cl、Br、C1-3烷基、氰基、羟基、硝基、氨基或C1-3烷氧基。
n为0～4的整数，即m为0、1、2、3或4。在本发明的某些具体实施例中，n为0或1。
在本发明的某些具体实施例中，所述式(I)结构具体如下：
Figure BDA0001766403100000031
本发明提供了一种用于代谢性疾病治疗的化合物，具有式(Ⅱ)所示结构，或其消旋体，立体异构体，几何异构体，互变异构体，溶剂化物，水合物，代谢产物，药学上可接受的盐或其前药：
Figure BDA0001766403100000032
其中R4为氢，取代的或未被取代的烷基，或者卤素；在一些实施方案中，所述R4为氢、取代的或未被取代的C1-6烷基，或者卤素；在另一些实施方案中，所述R4为氢、氟、氯、溴、取代的或未被取代的甲基、取代的或未被取代的乙基、取代的或未被取代的丙基、取代的或未被取代的异丙基。在本发明的某些具体实施例中，所述R4为甲基、乙基、丙基或异丙基。在本发明的实施方案中，当R4为取代的烷基时，所述烷基可以为直链烷基或支链烷基，所述R4的取代基为D、F、Cl、Br、C1-3烷基、氰基、羟基、硝基、氨基或C1-3烷氧基。
各R5独立地选自取代的或未被取代的烷基、卤素、羟基、氰基、硝基、磺酸基和羧基中的任意一种或多种；在一些实施方案中，各所述R5独立地选自C1-5烷基、氟、氯、溴、羟基、氰基、硝基、羧基中的任意一种或多种。在一些实施方案中，各所述R5独立地选自氟、氯、溴、硝基、氰基、取代的或未被取代的甲基、取代的或未被取代的乙基、取代的或未被取代的异丙基中的任意一种或多种。在本发明的某些具体实施例中，各所述R5独立地选自氟、氯、硝基、取代的或未被取代的甲基、取代的或未被取代的乙基中的任意一种或多种。在本发明的实施方案中，当R5为取代的烷基时，所述烷基可以为直链烷基或支链烷基，所述R5的取代基为D、F、Cl、Br、C1-3烷基、氰基、羟基、硝基、氨基或C1-3烷氧基。
R6为取代的或未被取代的C1-5的烷基，芳基，杂芳基或者环己基；在一些实施方案中，所述R6为取代的或未被取代的甲基、取代的或未被取代的乙基、取代的或未被取代的丙基、取代的或未被取代的异丙基，苯基，吡啶基或者环己基。在本发明的实施方案中，当R6为取代的烷基时，所述烷基可以为直链烷基或支链烷基，所述R6的取代基为D、F、Cl、Br、C1-3烷基、氰基、羟基、硝基、氨基或C1-3烷氧基。
x为0～4的整数，即x为0、1、2、3或4。在本发明的某些具体实施例中，x为0或1。
y为0或1。
在本发明的某些具体实施例中，所述式(Ⅱ)的结构具体如下：
Figure BDA0001766403100000041
Figure BDA0001766403100000051
本发明还提供了一种式(I)所示化合物的制备方法，包括以下步骤：
化合物(10)和化合物(16)进行反应，得到式(I)所示化合物；
Figure BDA0001766403100000052
其中，R1、R2、R3、m、n的范围同上，在此不再赘述。
在本发明的某些具体实施例中，所述反应在叔丁基氯化镁的催化作用下进行，所述反应的溶剂为1,4-二氧六环。
在本发明的某些具体实施例中，所述反应的温度为60～80℃，反应时间为1～3h。
在本发明的某些具体实施例中，所述化合物(10)的合成路线如下：
Figure BDA0001766403100000061
在本发明的某些具体实施例中，所述化合物(16)的合成路线如下：
Figure BDA0001766403100000062
本发明提供了一种药物组合物，包括上述用于代谢性疾病治疗的化合物或上述制备方法制备的化合物，以及药学上可接受的载体，赋形剂，稀释剂，辅剂，媒介物或它们的组合。
本发明的药物组合物可以是口服给药，注射给药，喷雾吸入法，局部给药，经直肠给药，经鼻给药，含服给药，或通过植入性药盒给药。
本发明的药物组合物的剂型可以是口服剂型，如胶囊，片剂，丸剂，粉剂，粒剂，水制悬浮液或溶液等。
本发明提供的口服剂型可以以压制片、研制片、可咀嚼锭剂、速溶片、复压片、或肠溶片、糖衣或薄膜衣片来提供。肠溶片是用能抗胃酸作用但在肠中溶解或崩解的物质包衣的压制片，从而防止了活性成分接触胃的酸性环境。肠包衣包括，但不限于，脂肪酸、脂肪、水杨酸苯酯、蜡、紫胶、氨化紫胶和邻苯二甲酸乙酸纤维素酯。糖衣片为糖衣包围的压制片，其可利于掩盖令人不愉快的味道或气味并且能防止片剂氧化。薄膜包衣片为用水溶性物质的薄层或薄膜覆盖的压制片。薄膜包衣包括，但不限于，羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇4000和邻苯二甲酸乙酸纤维素酯。薄膜包衣赋有和糖包衣相同的一般特性。复压片为经过超过一个压缩周期制备的压制片，包括多层片、和压制包衣或干包衣片。片剂剂型可以由呈粉末、结晶或颗粒状的活性成分单独的或与本发明描述的一种或多种载体或赋形剂组合来制备，所述载体和赋形剂包括粘合剂、崩解剂、控释聚合物、润滑剂、稀释剂和/或着色剂。本发明提供的药物组合物可以以软胶囊或硬胶囊来提供，其可以由明胶、甲基纤维素、淀粉或海藻酸钙来制备。口服给药的液体剂型包括，但并不限于，药学上可接受的乳剂，微乳剂，溶液，悬浮液，糖浆剂和酏剂。除活性化合物外，液体剂型可以包含公知的一般的惰性稀释剂，例如，水或其他溶剂，增溶剂和乳化剂，如乙醇，异丙醇，碳酸乙酯，乙酸乙酯，苯甲醇，苯甲酸苄酯，丙二醇，1,3-丁二醇，二甲基甲酰胺，油脂(特别是棉籽，落花生，玉米，微生物，橄榄，蓖麻和麻油)，甘油，2-四氢呋喃甲醇，聚乙二醇，去水山梨糖醇脂肪酸酯，以及它们的混合物。除惰性的稀释剂之外，口服组合物也可以包含辅剂如湿润剂，乳化剂或悬浮剂，甜味剂，调味剂和芳香剂。
本发明的药物组合物也可以以栓剂的形式，或者合适的灌肠剂直肠给药。或者注射剂型。
上述剂型的辅料可以根据本领域技术人员技术常识进行选择。
本发明上述化合物或上述制备方法制备的化合物或上述药物组合物应用于，但不限于，制备用于治疗或减轻FXR和/或TGR5介导的疾病的药物。
在本发明的某些具体实施例中，所述FXR和/或TGR5介导的疾病选自，但不限于，慢性肝病、代谢性疾病或门脉高压症等疾病。
在本发明的某些具体实施例中，所述慢性肝病包括原发性胆汁淤积性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、肝纤维化相关疾病、药物导致的胆汁淤积、进行性家族性肝内胆汁淤积、妊娠期胆汁淤积、酒精性肝病和非酒精性脂肪性肝病中的一种或多种；所述门脉高压症选自肝纤维化，肝硬化，脾肿大或其它原因引起的门静脉压力升高；所述代谢性疾病包括高胆固醇血症、血脂异常、胆固醇结石、和高甘油三酯血症。
本发明所述化合物或组合物也可以与其他药物或化合物联用，用于治疗或减轻上述慢性肝病、代谢性疾病或门脉高压症等疾病。本发明化合物可以作为单独的活性试剂给药，或者可以与其它治疗剂联合给药，包括具有相同或相似治疗活性并且对于此类联合给药确定为安全且有效的其它化合物。一方面，本发明提供治疗、预防或改善疾病或病症的方法，包括给予安全有效量的包含本发明公开化合物与一种或多种治疗活性剂的联合药物。在一些实施方案中，联合药物包含一种或两种其他治疗剂。
还在另一方面，本发明提供一种用于激活FXR和/或TGR5受体的方法，包括向有需要的个体或样本给予治疗有效量的本发明公开的化合物、本发明制备方法制备的化合物或本发明公开的化合物的药物组合物。本发明所述化合物的“治疗有效量”或“有效量”可以是2.5mg/kg～100mg/kg。在一些实施例中，本发明所述化合物的“治疗有效量”或“有效量”可以是0.4mg/kg～4mg/kg；在另一些实施例中，本发明所述化合物的“治疗有效量”可以是0.4mg/kg～25mg/kg。
还在另一方面，本发明提供一种用于预防、治疗或减轻FXR和/或TGR5受体介导的疾病的方法，包括向有需要的个体给予治疗有效量的本发明公开的化合物、本发明制备方法制备的化合物或本发明公开的化合物的药物组合物。
如本发明所使用的术语“治疗有效量”或“治疗有效剂量”是指能够引发个体的生物学或医学响应(例如降低或抑制酶或蛋白质活性，或激活受体，或拮抗受体，或改善症状、缓解病症、减缓或延迟疾病发展，或预防疾病等)的本发明化合物或组合物的量。
本发明公开化合物可含有不对称或手性中心，因此可以不同的立体异构体形式存在。本发明旨在使式(I)或(II)所示化合物的所有立体异构体形式，包括但不限于非对映异构体、对映异构体、阻转异构体和几何(或构象)异构体，以及它们的混合物如外消旋混合物，成为本发明的组成部分。
在本发明公开的结构中，当任意特定的手性原子的立体化学未指明时，则该结构的所有立体异构体都考虑在本发明之内，并且作为本发明公开化合物包括在本发明中。当立体化学被表示特定构型的实楔形线(solid wedge)或虚线指明时，则该结构的立体异构体就此明确和定义。
式(I)或(II)所示化合物可以以不同的互变异构体形式存在，并且所有这些互变异构体，如本发明所述的互变异构体，都包括在本发明范围内。
式(I)或(II)所示化合物可以以盐的形式存在。在一些实施方案中，所述盐是指药学上可接受的盐。在另一些实施方案中，所述盐还可以是用于制备和/或提纯式(I)或(II)所示化合物和/或用于分离本式(I)或(II)所示化合物的对映体的中间体。
除非另外说明，本发明所使用的所有科技术语具有与本发明所属领域技术人员的通常理解相同的含义。本发明涉及的所有专利和公开出版物通过引用方式整体并入本发明。术语“包含”，“包括”为开放式表达，即包括本发明所指明的内容，但并不排除其他方面的内容。
“立体异构体”是指具有相同化学构造，但原子或基团在空间上排列方式不同的化合物。立体异构体包括对映异构体、非对映异构体、构象异构体(旋转异构体)、几何异构体(顺/反)异构体、阻转异构体，等等。
“手性”是具有与其镜像不能重叠性质的分子；而“非手性”是指与其镜像可以重叠的分子。
“对映异构体”是指一个化合物的两个不能重叠但互成镜像关系的异构体。
“非对映异构体”是指有两个或多个手性中心并且其分子不互为镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，如熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映异构体混合物可通过高分辨分析操作如电泳和色谱，例如HPLC来分离。
本发明所使用的立体化学定义和规则一般遵循S.P.Parker，Ed.，McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company，New York；andEliel，E.and Wilen，S.，“Stereochemistry of Organic Compounds”，John Wiley&Sons，Inc.，New York，1994。
许多有机化合物以光学活性形式存在，即它们具有使平面偏振光的平面发生旋转的能力。在描述光学活性化合物时，使用前缀D和L或R和S来表示分子关于其一个或多个手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(–)是用于指定化合物所致平面偏振光旋转的符号，其中(–)或l表示化合物是左旋的。前缀为(+)或d的化合物是右旋的。一种具体的立体异构体是对映异构体，这种异构体的混合物称作对映异构体混合物。对映异构体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，当在化学反应或过程中没有立体选择性或立体特异性时，可出现这种情况。
本发明公开化合物的任何不对称原子(例如，碳等)都可以以外消旋或对映体富集的形式存在，例如(R)-、(S)-或(R,S)-构型形式存在。在某些实施方案中，各不对称原子在(R)-或(S)-构型方面具有至少50％对映体过量，至少60％对映体过量，至少70％对映体过量，至少80％对映体过量，至少90％对映体过量，至少95％对映体过量，或至少99％对映体过量。
术语“未取代的”，表示指定基团不带有取代基。术语“取代的”表示所给结构中的一个或多个可被取代的氢原子被具体取代基所取代。除非其他方面表明，一个取代的基团可以有一个取代基在基团各个可取代的位置进行取代。当所给出的结构式中不只一个位置能被选自具体基团的一个或多个取代基所取代，那么取代基可以相同或不同地在各个位置取代。本发明所述的取代基包括，但不限于D、-OH、-NH2、F、Cl、Br、C1-3烷基、氰基、羟基、硝基、C1-3烷氧基。
在本发明中所采用的描述方式“各……独立地为”与“……各自独立地为”和“……独立地为”可以互换，均应做广义理解，其既可以是指在不同基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响，也可以表示在相同的基团中，相同符号之间所表达的具体选项之间互相不影响。
术语“卤素”是指氟(F)、氯(Cl)、溴(Br)或碘(I)。
术语“烷氧基”表示烷基基团通过氧原子与分子其余部分相连，其中烷基基团具有如本发明所述的含义。除非另外详细说明，所述烷氧基基团含有1-12个碳原子。在一些实施方案中，烷氧基基团含有1-6个碳原子；在另一些实施方案中，烷氧基基团含有1-4个碳原子；在又一些实施方案中，烷氧基基团含有1-3个碳原子。所述烷氧基基团可以任选地被一个或多个本发明描述的取代基所取代。
像本发明所描述的，取代基画一个键连接到中心的环上形成的环体系(如式a所示)代表取代基在该环体系上所有可取代的位置择一取代。例如，式a代表取代基R可以择一取代吡啶环上所有可以被取代的位置，如式b～式d所示。
Figure BDA0001766403100000091
像本发明所描述的，取代基通过单键连接到中心的环上，并具有下脚标，形成的环体系(如式e所示)代表取代基在该环体系上所有可取代的位置取代。
Figure BDA0001766403100000092
其中，当n为0时，表示没有取代基，即未取代。
当n为1时，表示取代基在该环体系上所有可取代的位置择一取代。
当n大于1时，如2、3或4，表示取代基不止一个，如具有2个取代基、3个取代基或4个取代基，各取代基可以选择不同的取代位置或相同的取代位置，且各取代基可以相同或不同。
上述波浪线表示连接键。
术语“药学上可接受的”是指物质或组合物必须与包含制剂的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物化学上和/或毒理学上相容。
本发明的“药学上可接受的盐”可以用常规化学方法由母体化合物、碱性或酸性部分来合成。一般而言，该类盐可以通过使这些化合物的游离酸形式与化学计量量的适宜碱(如Na、Ca、Mg或K的氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等)反应，或者通过使这些化合物的游离碱形式与化学计量量的适宜酸反应来进行制备。该类反应通常在水或有机溶剂或二者的混合物中进行。一般地，在适当的情况中，需要使用非水性介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈。在例如“Remington′s Pharmaceutical Sciences”，第20版，Mack PublishingCompany，Easton，Pa.，(1985)；和“药用盐手册：性质、选择和应用(Handbook ofPharmaceutical Salts：Properties，Selection，and Use)”，Stahl and Wermuth(Wiley-VCH，Weinheim，Germany，2002)中可找到另外一些适宜盐的列表。
另外，本发明公开的化合物、包括它们的盐，也可以以它们的水合物形式或包含其溶剂(例如乙醇、DMSO，等等)的形式得到，用于它们的结晶。本发明公开化合物可以与药学上可接受的溶剂(包括水)固有地或通过设计形成溶剂化物；因此，本发明旨在包括溶剂化的和未溶剂化的形式。
此外，本发明公开的化合物可以以前药形式给药。在本发明中，本发明公开化合物的“前药”是对患者给药时，最终能在体内释放出本发明公开化合物的功能性衍生物。
本发明所使用的术语“前药”，代表一个化合物在体内转化为式(I)或式(II)所示的化合物。这样的转化受前体药物在血液中水解或在血液或组织中经酶转化为母体结构的影响。本发明前体药物类化合物可以是酯，在现有的发明中酯可以作为前体药物的有苯酯类，脂肪族(C1-C24)酯类，酰氧基甲基酯类，碳酸酯，氨基甲酸酯类和氨基酸酯类。例如本发明里的一个化合物包含羟基，即可以将其酰化得到前体药物形式的化合物。其他的前体药物形式包括磷酸酯，如这些磷酸酯类化合物是经母体上的羟基磷酸化得到的。
“代谢产物”是指具体的化合物或其盐在体内通过代谢作用所得到的产物。一个化合物的代谢产物可以通过所属领域公知的技术来进行鉴定，其活性可以通过如本发明所描述的那样采用实验的方法进行表征。这样的产物可以是通过给药化合物经过氧化，还原，水解，酰氨化，脱酰氨作用，酯化，脱脂作用，酶裂解等方法得到。相应地，本发明包括化合物的代谢产物，包括将本发明的化合物与哺乳动物充分接触一段时间所产生的代谢产物。
本发明的“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子与本发明的化合物所形成的缔合物。形成溶剂化物的溶剂包括，但并不限于，水，异丙醇，乙醇，甲醇，二甲亚砜，乙酸乙酯，乙酸和氨基乙醇。术语“水合物”是指溶剂分子是水所形成的缔合物。当所述溶剂为水时，可以使用术语“水合物”。在一些实施例中，一个本发明化合物分子可以与一个水分子相结合，比如一水合物；在另外一些实施例中，一个本发明化合物分子可以与多于一个的水分子相结合，比如二水合物，还有一些实施例中，一个本发明化合物分子可以与少于一个的水分子相结合，比如半水合物。应注意，本发明所述的水合物保留有非水合形式的所述化合物的生物有效性。
本发明所用“药学上可接受的辅料”意指与给药剂型或药物组合物一致性相关的药学上可接受的材料，混合物或溶媒。每种辅料在混合时必须与药物组合物的其它成分相容，以避免对患者给药时会大大降低本发明公开化合物的功效的相互作用和会导致不是药学上可接受的药物组合物的相互作用。此外，每种辅料必须是药学上可接受的，例如，具有足够高的纯度。合适的药学上可接受的辅料会依所选具体剂型而不同。此外，可根据它们在组合物中的特定功能来选择药学上可接受的辅料。例如，可选择能有助于生产均一剂型的某些药学上可接受的辅料。可选择能有助于生产稳定剂型的某些药学上可接受的辅料。可选择对患者给药时有助于携带或运输本发明公开化合物从身体的一个器官或部分到身体的另一个器官或部分的某些药学上可接受的辅料。可选择增强患者依从性的某些药学上可接受的辅料。合适的药学上可接受的辅料包括以下类型的辅料：稀释剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、造粒剂、包衣剂、润湿剂、溶剂、共溶剂、助悬剂、乳化剂、甜味剂、矫味剂、掩味剂、着色剂、防结块剂、保湿剂、螯合剂、塑化剂、增粘剂、抗氧化剂、防腐剂、稳定剂、表面活性剂和缓冲剂。技术人员可认识到，某些药学上可接受的辅料可提供不止一种功能，并提供可供选择的功能，这取决于制剂中存在多少该辅料和制剂中存在哪些其他辅料。
术语“芳基”表示含有6～14个环原子，或6～12个环原子，或6～10个环原子的单环、双环或三环的全碳环体系，其中，至少一个环是芳香族的，且有一个或多个附着点与分子的其余部分相连。芳基基团的实例可以包括苯基、萘基和蒽基。所述芳基基团可以独立任选地被一个或多个本发明所描述的取代基所取代。
术语“杂芳基”表示含有5-12个环原子，或5-10个环原子，或5-6个环原子的单环、双环或三环，其中至少一个环是芳香族的，且至少一个芳香环包含一个或多个杂原子，且有一个或多个附着点与分子其余部分相连。杂芳基基团的实例包括，但并不限于，呋喃基，吡啶基、嘧啶基，吡嗪基，哒嗪基或吲哚基等。
与现有技术相比，本发明提供了一种用于代谢性疾病治疗的化合物，具有式(I)或式(Ⅱ)所示结构，或其消旋体，立体异构体，几何异构体，互变异构体，溶剂化物，水合物，代谢产物，药学上可接受的盐或其前药。本发明提供的上述化合物以FXR和TGR5为靶点，可以调节体内胆汁酸、胆固醇动态平衡，甘油三酯合成以及脂肪生成，因此，可以用于胆汁酸、胆固醇、甘油三酯代谢所引起的各类疾病，并且本发明化合物为肝靶向化合物，效价高于同类化合物，且副作用低，克服了其他同类化合物临床用药的不良反应。
附图说明
图1为实施例1中化合物14的质谱图；
图2为实施例1中化合物16的质谱图；
图3为实施例1中化合物16的核磁共振氢谱图；
图4为实施例1中化合物1的质谱图；
图5为实施例1中化合物1的核磁共振氢谱图；
图6为不同组大鼠各时间点胆汁排出量；
图7为受试化合物1-H各剂量组大鼠门静脉压的影响；
图8为受试化合物1-H各剂量组大鼠门静脉压平均变化百分比；
图9为受试化合物1-H各剂量组大鼠肝与脾外观；
图10为受试化合物1-H各剂量组大鼠血清学指标；
图11为受试化合物1-H各剂量组大鼠肝脏病理切片Masson染色与HE染色。
具体实施方式
为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的用于代谢性疾病治疗的化合物及其制备方法和应用进行详细描述。以下实施例中溶剂的比例，如无特殊说明，均为体积比。例如，乙酸乙酯：石油醚＝1:5，表示乙酸乙酯：石油醚的体积比是1:5。
实施例1化合物1(即化合物1-H)的合成
1、化合物2的合成
Figure BDA0001766403100000121
在1000mL圆底烧瓶中加入300mL四氢呋喃，然后加入30g鹅去氧胆酸(式a所示)(76.42mmol)，以及加入3mL高氯酸，室温搅拌下加入100mL甲酸。温度控制在50℃下搅拌反应15小时，减压浓缩除去溶剂。剩余物加入4L水稀释，过滤收集固体，并加入2L二氯甲烷溶解固体。加入无水硫酸钠干燥溶液，过滤及减压浓缩。粗品加入4L石油醚打浆，过滤收集白色固体，得到32.8g的化合物2，收率98％。
2、化合物3的合成
Figure BDA0001766403100000122
氩气保护下，于5L圆底烧瓶中依次加入100g化合物2(222.92mmol)，3L四氯化碳溶解固体，199.1g醋酸铅(446.41mmol)，113.64g碘(447.40mmol)，所得反应液在钨灯(250瓦)照射下20℃搅拌反应24小时，加入3L饱和硫代硫酸钠淬灭反应，过滤除去固体，滤液加入二氯甲烷萃取两次，每次3L。合并有机相，分别加入2L饱和硫代硫酸钠，洗涤两次，2L水洗涤一次，2L饱和氯化钠水溶液洗涤一次。有机相加入无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。得到110g的淡黄色固体化合物3，收率93％。
3、化合物4的合成
Figure BDA0001766403100000123
于3L圆底烧瓶中，室温下依次加入化合物3(250g,471.27mmol)，150.9g苯甲酸钾(941.88mmol)，2L N,N-二甲基甲酰胺。反应液在80℃下搅拌反应15小时，减压浓缩。剩余物溶于3L二氯甲烷中。溶液依次用1.6L水洗涤两次，1.6L饱和硫代硫酸钠洗涤一次，1.6L饱和氯化钠洗涤一次。有机相加入无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。得到310g的棕色化合物4，不提纯直接进行下一步反应。
4、化合物5的合成
Figure BDA0001766403100000131
在2L的圆底烧瓶中加入1L的甲醇，将35g粗品化合物4溶于甲醇(1000mL)中，然后加入20mL的浓盐酸，反应液在20℃下搅拌反应24小时，减压浓缩。残余物溶解于3L的二氯甲烷中，溶液分别用800mL的饱和碳酸氢钠水溶液洗涤两次，800mL的饱和氯化钠水溶液洗涤一次。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残余物用硅胶柱层析提纯(二氯甲烷：甲醇＝80:1)。得到22.8g的化合物5(产率60％，黄色固体)。
5、化合物6的合成
Figure BDA0001766403100000132
在2L的圆底烧瓶中分别加入1L的氯仿，将35g(74.68mmol)化合物5溶于氯仿溶剂(1050mL)中，然后加入氯铬酸吡啶(17.687g,82.30mmol)和硅胶(140g)的混合物，再逐滴加入35mL的醋酸。反应液在20℃下搅拌反应24小时，反应液用4L的二氯甲烷和40mL的甲醇混合溶液稀释。过滤得到固体，滤液分别用1.2L的水洗涤两次和1.2L的饱和氯化钠溶液洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残余物用硅胶柱层析提纯(二氯甲烷：甲醇＝100:1)，得到23g的化合物6(产率66％，白色固体)。
6、化合物7的合成
Figure BDA0001766403100000133
在5L的三口烧瓶中加入1.2L的四氢呋喃，将二异丙胺(182g,1.80mol)溶于四氢呋喃中，在–78℃下逐滴加入正丁基锂(2.5M的四氢呋喃溶液,721mL)，滴加完后在–78℃下搅拌半小时，然后再在–78℃下逐滴加入三甲基氯硅烷(160.3g,1.50mol)，在–78℃下搅拌半小时。然后在–78℃下向上述溶液中逐滴加入化合物6(70g,0.15mol)和四氢呋喃(900mL)的混合溶液，在–78℃搅拌半小时。在–78℃逐滴加入三乙胺(272.3g,2.70mol)，然后升温至20℃，搅拌2小时。用2.1L的饱和碳酸氢钠水溶液淬灭。反应液用6L的乙酸乙酯萃取，合并有机相，分别用1.2L的水洗涤两次，1.2L的饱和氯化铵水溶液洗涤五次，1.2L的饱和氯化钠水溶液洗涤一次。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。得到145g化合物7粗品，直接用于下一步反应。
7、化合物8的合成
Figure BDA0001766403100000141
在氩气保护下，向三口烧瓶中加入化合物7(40g,69.07mmol)和二氯甲烷(600mL)的混合溶液，向溶液中加入乙醛(6.506g,147.86mmol)，然后在-60℃下逐滴加入三氟化硼乙醚合物(69.99g,492.89mmol)，反应液在20℃下搅拌24小时。用饱和碳酸氢钠水溶液将反应液pH值调至7～8，用100mL的水稀释反应液，然后用700mL的二氯甲烷萃取三次，合并有机相。有机相分别用1L的水洗涤两次，1L的饱和氯化钠水溶液洗涤一次，再用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残余物用硅胶柱层析提纯(二氯甲烷：甲醇＝100:1)，得到10g的化合物8(产率37％，白色固体)。
8、化合物9的合成
Figure BDA0001766403100000142
在氮气保护下，向250mL的三口瓶中分别加入四氢呋喃100mL，化合物8(5g,12.87mmol)，甲醇25mL，七水三氯化铈(19.17g,51.46mmol)，硼氢化钠(1.85g,51.39mmol)，溶液在20℃下反应24小时，然后用80mL的饱和氯化铵水溶液淬灭，反应液减压浓缩。残余物加入300mL的水稀释，用600mL的二氯甲烷萃取三次，合并有机相。有机相分别用300mL的饱和碳酸氢钠水溶液洗涤一次，300mL的饱和氯化钠水溶液洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。得到4.8g的化合物9(产率96％，黄色固体)。
9、化合物10的合成
Figure BDA0001766403100000143
向250mL的圆底烧瓶中加入80mL甲醇，化合物9(8g,20.48mmol)，10％Pd/C(4g,3.77mmol)，通入氢气，在40℃下反应24小时。反应液过滤，浓缩。残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝100:1)，得到5.6g化合物10(产率70％，白色固体)。
10、化合物11的合成
Figure BDA0001766403100000144
在氩气保护下，向5L的三口瓶中加入(2S)-2-氨基-3-苯基丙酸(250g,1.51mol)和3.5L水的混合溶液中，再加入甲酸(491.75g,6.04mol)。在20℃下加入4％Pd/C((250g,94.34mmol)。通入氢气，在20℃下反应48小时后，过滤，浓缩。粗品用甲醇重结晶，过滤收集固体，得到190g化合物11(产率65％，白色固体)。
1H-NMR:(CD3OD,400MHz,ppm):7.25-7.40(m,5H),3.86(t,J＝6.9Hz,1H),3.37-3.31(m,1H),3.24(dd,J＝14.6,6.8Hz,1H),2.85(s,6H).
11、化合物12的合成
Figure BDA0001766403100000151
在氮气保护下，向3L的三口瓶中加入700mL的四氢呋喃和二异丙胺(188.6g)的混合溶液，在–78℃下30分钟内逐滴加入正丁基锂(2.5M的四氢呋喃溶液,746mL)。反应升温至20℃，搅拌20分钟。然后在–78℃下30分钟内逐滴加入乙酸乙酯(164.4g,1.87mol)和四氢呋喃(200mL)的混合溶液，溶液在–78℃下搅拌1小时。溶液在–78℃下25分钟内逐滴加入4-吡啶基甲醛(100g,933.62mmol)和250mL四氢呋喃的混合溶液，反应升温至0℃搅拌1.5小时，反应用3.6L浓度为1N的盐酸淬灭。溶液用1L的乙酸乙酯萃取三次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩。残余物用硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯：石油醚＝1:1)，得到黄色油状化合物12(产率80％，146g)。
12、化合物13的合成
Figure BDA0001766403100000152
在氮气保护下，向1L的三口瓶中加入化合物12(29.7g,153.69mmol)和二氯甲烷(300mL)的混合溶液，再依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(36.9g,192.49mmol)，4,4-二甲基氨基吡啶(1.56g,12.77mmol)，化合物11(25g,128.06mmol)。溶液在20℃下搅拌5小时，反应结束后，用300mL二氯甲烷稀释液。反应混合物用500mL饱和碳酸钠水溶液洗涤两次，500mL水洗涤一次，500mL饱和氯化钠水溶液洗涤一次，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残余物用硅胶柱层析纯化(乙酸乙酯：石油醚＝1:5)，得到的粗品再次用Flash-Prep-HPLC纯化，石油醚(含0.1％三乙胺)/乙酸乙酯(含0.1％三乙胺)＝35：65，增加极性至乙酸乙酯(含0.1％三乙胺)，得到黄色固定化合物13(产率32％，15g)。
13、化合物14的合成
Figure BDA0001766403100000153
在氮气保护下，向2L的三口瓶中加入900mL乙醚，降温至–20℃，加入四氢铝锂(18.5g,487.48mmol)，然后在–20℃下逐滴加入化合物13(30g,80.98mmol)和乙醚(300mL)的混合溶液。反应液在–20℃下搅拌3小时，反应用400mL的乙酸乙酯淬灭，然后加入40mL的饱和硫酸钠水溶液、150mL的甲醇。在20℃下搅拌1小时，过滤，浓缩。残余物用硅胶柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝20:1)，粗品用乙酸乙酯重结晶，得到白色固体化合物14(PH-MKA-MT2002-8，7.74g，产率62％)。
LCMS:(ES,m/z):154[M+H]+。
其质谱图见附图1所示。
其液相数据如下表1所示：
表1化合物14液相数据
出峰位置 峰面积
0.64min 810059
14、化合物15的合成
Figure BDA0001766403100000161
在氩气保护下，向3L的三口瓶中加入400mL的四氢呋喃、250mL的乙醚，将三氯氧磷(77.2g,503.49mmol,1.00eq.)加入三口瓶中。在–78℃下将4-硝基苯酚(70g,503.20mmol)、三乙胺(50.96g,503.61mmol)、四氢呋喃(400mL)和乙醚(250mL)的混合溶液慢慢加入反应体系中，反应升温至20℃，反应24小时。过滤固体，浓缩滤液。粗产品减压蒸馏(5mmHg)提纯，收集180℃下馏分，得到亮黄色油状化合物15(38g，产率29％)。
P-NMR:(CDCl3,121.5MHz,ppm):3.35。
15、化合物16的合成
Figure BDA0001766403100000162
在氮气保护下，向1000mL的三口瓶中加入化合物14(27g,176.27mmol)、吡啶(210mL)和三乙胺(3.024g,29.88mmol)的混合溶液，在0℃～5℃下逐滴加入化合物15(45g,175.79mmol)和吡啶(360mL)的混合溶液，反应液在20℃下搅拌5小时。原料消失后，加入4-硝基苯酚钠(113.4g,704.35mmol,4.00equiv),加完后，40℃下搅拌4小时，移至20℃下再搅拌16小时。浓缩反应液，残余物被溶解在1.5L的盐酸(2mol/L)中，用1.5L的乙酸乙酯洗涤两次。分出的水相用碳酸氢钠调节pH值至7～8，然后用1.2L的二氯甲烷萃取3次，合并有机相。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残余物用Flash-Prep-HPLC纯化，得到类白色固体化合物16(35g，产率59％)。
LC-MS:(ES,m/z):337[M+H]+。
1H-NMR：(DMSO,400MHz,ppm)：8.62-8.62(m，2H)，8.35-8.31(m，2H)，7.59-7.57(m，2H)，7.44-7.42(m，2H)，5.91(dd,J＝10.1，3.7Hz，1H)，4.71-4.56(m，2H)，2.32-2.17(m，2H)。
P-NMR:(DMSO，162MHz，ppm):–14.08。
其质谱图见附图2所示。
其液相数据如下表2所示：
表2化合物16液相数据
出峰位置 峰面积
1.088 5970276
1.278 14725
氢谱图见附图3所示。
16、化合物1(即化合物1-H)的合成
Figure BDA0001766403100000171
在氩气保护下，在25mL的三口瓶中加入化合物10(500mg,1.27mmol)和1,4-二氧六环(6mL)的混合溶液，在20℃下逐滴加入叔丁基氯化镁(6.37mL，1mol/L)，在20℃搅拌四小时，然后在65℃下逐滴加入化合物16(855.8mg,2.55mmol)和1,4-二氧六环(15mL)的混合溶液，在65℃下搅拌2小时。反应用100mL的饱和氯化铵溶液淬灭，用100mL的二氯甲烷萃取两次，合并有机相。有机相用150mL的饱和氯化钠溶液洗涤一次，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残余物用柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝20:1)，粗品用Flash-Prep-HPLC纯化，得到类白色固体化合物1(即化合物1-H,30mg)，纯度96.8％。
LC-MS:(ES,m/z)：590.2[M+H]+。
1H-NMR：(CD3OD,400MHz,ppm)：8.60-8.58(m,2H),7.51-7.49(m,2H),5.76(m,1H),4.68(ddt,J＝15.0,7.2,4.4Hz,1H),4.58-4.44(m,1H),4.30-4.19(m,2H),3.45(tt,J＝10.6,4.5Hz,1H),3.12-3.02(m,1H),2.34-2.23(m,2H),2.08-1.77(m,6H),1.74-1.41(m,9H),1.41-1.02(m,10H),1.01(d,J＝6.4Hz,3H),0.95(s,3H),0.86(t,J＝7.4Hz,3H),0.70(s,3H)。
P-NMR：(CD3OD,162MHz,ppm):–4.998。
其质谱图见附图4所示。
其液相数据如下表3所示：
表3化合物1液相数据
出峰位置 峰面积
3.722 285
3.819 249727
氢谱图见附图5所示。
实施例2化合物2-0的合成
1.化合物2-1的合成
Figure BDA0001766403100000172
三口瓶中加入一定体积量的无水乙醚，然后加入苯酚(1000g，1.0eq)和三乙胺(1070g，1.0eq)，在0℃搅拌下滴加入三氯氧磷(1600g，1.0eq)，在氮气保护下反应3h。然后让其自然回温到室温，并过夜。反应结束后，三乙胺盐被迅速过滤掉，收集滤液并浓缩，干燥得到800g油状产品2-1，没有进一步纯化，直接用于下一步反应。
2.化合物PH-MIK-001-21的合成
Figure BDA0001766403100000181
三口瓶中加入一定体积量的无水二氯甲烷20L，之后加入三乙胺(770g，2.0eq.)，该反应体系置于–78℃环境下，开始滴加化合物2-1(800g,1.0eq)溶于无水二氯甲烷中的溶液和(S)-3-(氯胺基)-1-异丙氧基丁-2-酮(685g，1.0eq)，滴加完毕后反应2h，之后让其自然回温至室温并过夜。移除溶剂，残余物用乙酸乙酯洗涤，然后过滤，滤液浓缩干燥得到化合物PH-MIK-001-21(800g)直接用于下一步反应。
3.化合物2-3的合成
Figure BDA0001766403100000182
向四氢呋喃溶剂中加入化合物2-2(700g,1.73mol,1.00eq.)，置于–25℃环境氮气保护下开始滴加TMSCl(840g,7.79mol,4.5eq)，反应1h后，开始滴加LDA(5.2L,2.0M的THF溶液,1.00eq.),大约需要1h。滴加完毕后，在此温度下反应2h。反应结束后，用预冷却的柠檬酸水溶液淬灭反应。水相被丢弃，有机相被无水硫酸钠干燥并浓缩得820g化合物2-3黄色油状粗品，没有进一步纯化而直接进行下一步反应。
4.化合物2-4的合成
Figure BDA0001766403100000183
粗品化合物2-3(820g,1.49mol,1.00eq.)加入到4.5L无水二氯甲烷中，该体系搅拌的状态下置于–60℃开始滴加乙醛(120g,2.72mol,1.8eq.)，大约需要1h，之后开始滴加BF3.Et2O(695mL,3.6eq.)，大约需要1.5h。滴加完毕后，该体系在此温度下反应2h，然后于室温继续反应3h。然后冷却到0℃下用50％的氢氧化钠水溶液(320mL)淬灭反应并充分搅拌10min。最后水相弃掉，收集有机相，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到750g化合物2-4黄色油状粗品，没有进一步纯化直接用于下一步反应。
5.化合物2-5的合成
Figure BDA0001766403100000191
粗品2-4溶于甲醇/水(2.5/0.5L)混合溶液中，在室温搅拌的状态下加入氢氧化钠溶液中(50％氢氧化钠水溶液,180mL)。该反应体系与50℃下反应4h。反应结束后，浓缩甲醇溶液，并用柠檬酸酸化和乙酸乙酯萃取两次。收集有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥并浓缩。最后用乙酸乙酯重结晶得到440g黄色固体2-5，三步总产率60％。
LC-MS:(ES,m/z)：415[M-H]-
6.化合物2-6的合成
Figure BDA0001766403100000192
化合物2-5(100g,0.24mol,1.00eq.)溶于水(1000mL)中，搅拌的状态下加入氢氧化钠(18g,0.45mol,1.88eq.)，充分搅拌使其彻底溶解后，氮气保护下开始加入Pd/C(10％,10g,0.1eq.)，加完后，用氢气置换并保持氢气压力5atm反应，100℃下反应4h，反应结束后，固体被滤掉，滤液被盐酸酸化，并被乙酸乙酯萃取两次，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。最后用甲基叔丁基醚：正己烷＝1:2重结晶得75g(产率70％)白色固体2-6。
LC-MS:(ES,m/z)：417[M-H]-
7.化合物2-7的合成
Figure BDA0001766403100000193
化合物2-6(215g,0.514mol,1.0eq.)溶于甲酸(2L)中，搅拌状态下滴加15mL高氯酸。该反应于45℃下反应16h。反应结束后使其冷却置室温，乙酸酐1.5L被滴加下去，大约需要1.0h，滴加完毕后，充分搅拌30min。该混合物倾倒入冰水浴中，并用乙醚萃取两次。收集的有机相用水洗，无水硫酸钠干燥，浓缩得到220g黄色固体2-7，没有进一步纯化而直接用于下一步反应。
LC-MS:(ES,m/z)：445[M-H]-
8.化合物2-8的合成
Figure BDA0001766403100000201
粗品2-7(220g,0.49mol,1.0eq.)被溶于1.5L三氟乙酸中，搅拌得状态下开始滴加三氟乙酸酐(425mL,3.67mol,7.5eq.)。该体系于0～5℃反应1.5h，之后亚硝酸钠(103g,1.48mmol,3.0eq.)被分批加入，加入完之后，反应混合物于0～5℃反应1.5h，然后在40℃下过夜。反应结束后，反应体系加入2M的氢氧化钠水溶液中和反应，乙酸乙酯萃取两次，收集的有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，得到160g化合物2-8，黄色固体。
9.化合物2-9的合成
Figure BDA0001766403100000202
粗品2-8(160g,0.39mol,1.0eq.)溶于甲醇：水＝1:1溶液里，开始滴加40％氢氧化钾水溶液，滴加完后，该反应体系在90℃下反应72h，反应结束后，用6N的盐酸水溶液中和反应体系，减压浓缩除去甲醇，剩余物用乙酸乙酯萃取三次，收集的有机相用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到150g类白色粗品固体2-9，没有进一步纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ES,m/z)：403[M-H]-
10.化合物2-10的合成
Figure BDA0001766403100000203
粗品2-9(150g,0.38mol,1.0eq.)溶于四氢呋喃/水(2.5L，v/v＝4/1)中，在0℃下分批加入硼氢化钠(72g,1.90mol,5.0eq.)，加入完之后，该反应体系在室温下反应2h。反应结束后，在0℃下滴加水和甲醇淬灭体系，溶剂被浓缩，水洗涤，1N盐酸酸化，乙酸乙酯萃取三次，收集有机相。饱和氯化钠水溶液洗涤三次，无水硫酸钠干燥，浓缩得到135g黄色固体粗品2-10，没有进一步纯化直接用于下一步反应。
LC-MS:(ES,m/z)：405[M-H]-
11.化合物2-11的合成
Figure BDA0001766403100000211
粗品2-10(135g,0.33mol,1.0eq.)加入到干燥的甲醇(2.5L)中，对甲苯磺酸(227g,1.32mol,4.0eq.)被加入。该反应混合物充分搅拌过夜。反应结束后，加入碳酸氢钠水溶液中和反应。浓缩溶剂，剰余物被乙酸乙酯萃取两次，收集有机相，碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到120g黄色粗粘物2-11，没有进一步纯化，直接用于下一步反应。
LC-MS:(ES,m/z)：421[M+H]+
12.化合物2-12的合成
Figure BDA0001766403100000212
粗品2-11(120g,0.286mol,1.0eq.)溶于二氯甲烷(2L)中，在0℃下2,6-二甲基吡啶(160mL,1.43mol,5.0eq.)和叔丁基二甲基甲硅烷基三氟甲磺酸酯(190mL,0.86mol,3.0eq.)分别被滴加。该反应体系在室温下搅拌24h，反应结束后，用硫酸氢钠水溶液淬灭直到中性。水相被分离并萃取两次用二氯甲烷，有机相被硫酸氢钠水溶液，饱和碳酸氢钠水溶液和饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到135g黄色粗品粘状物2-12。13.化合物2-13的合成
Figure BDA0001766403100000221
粗品2-12(135g,0.2mol,1.0eq.)溶于干燥的四氢呋喃(1.2L)中，在0℃下氮气保护状态下干燥的甲醇(24mL)被加入，接着硼氢化锂(290mL,2M的THF溶液,0.6mol,3eq.)被分批加入。该混合反应物室温反应过夜。反应结束后，该反应体系里加入1M氢氧化钠水溶液淬灭反应并用乙酸乙酯萃取三次，收集有机相，饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得120g黄色粗品油状2-13。没有进一步纯化直接用于下一步反应。
14.化合物2-14的合成
Figure BDA0001766403100000222
粗品2-13(120g,193mmol,1.0eq.)和N-甲基咪唑(126g,8.0eq)被加入到无水四氢呋喃(1400mL)中，充分搅拌的状态下开始滴加无水四氢呋喃溶解的化合物PH-MIK-001-21(382.5g,6.5eq)溶液，滴加完毕后，该反应体系于室温下搅拌过夜。反应结束后，减压浓缩除去溶剂，用硅胶色谱柱纯化得到80g黄色油状物2-14。
16.化合物2-0的合成
Figure BDA0001766403100000223
化合物2-14(80g,88mmol,1.0eq.)溶于干燥的甲醇(1200mL)中，浓盐酸(242mL,2.9mol,20eq.)被滴加入到上述反应体系中，滴加完毕后，该反应于室温反应4天，反应结束后，减压浓缩除去甲醇，剩余体系用水和碳酸氢钠中和，二氯甲烷萃取三次，收集有机相，并用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。残余物用Flash-Prep-HPLC纯化，得到化合物2-0为类白色固体35g(纯度97.3％)。
实施例3
1.化合物PH-MIK-001-22的合成
Figure BDA0001766403100000231
三口瓶中加入一定体积量的无水二氯甲烷20L，之后加入三乙胺(770g，2.0eq.)，该反应体系置于–78℃环境下，开始滴加化合物2-1(按照实施例2中制备方法制得，800g,1.0eq.)溶于无水二氯甲烷中的溶液和(S)-3-(氯胺基)-1-异丙氧基丁-2-酮(631g，1.0eq.)，滴加完毕后反应2h，之后让其自然回温至室温并过夜。移除溶剂，残余物用乙酸乙酯洗涤，然后过滤，滤液浓缩干燥得到化合物PH-MIK-001-22(760g)直接用于下一步反应。
2.化合物3-1的合成
Figure BDA0001766403100000232
粗品2-13(120g，1.0eq.)和N-甲基咪唑(126g，8.0eq.)被加入到无水四氢呋喃中，充分搅拌的状态下开始滴加无水四氢呋喃溶解的化合物PH-MIK-001-22(401g，6.5eq.)溶液，滴加完毕后，该反应体系于室温下搅拌过夜。反应结束后，减压浓缩除去溶剂，用硅胶色谱柱纯化得到75g黄色油状物3-1。
3.化合物3-0的合成
Figure BDA0001766403100000233
化合物3-1(75g,88mmol,1.0eq.)溶于干燥的甲醇(1200mL)中，浓盐酸(242mL,2.9mol,20eq.)被滴加入到上述反应体系中，滴加完毕后，该反应于室温反应4天，反应结束后，减压浓缩除去甲醇，剩余体系用水和碳酸氢钠中和，二氯甲烷萃取三次，收集有机相，并用饱和氯化钠水溶液洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩。残余物用Flash-Prep-HPLC纯化，得到化合物3-0为类白色固体35g(纯度96.9％)。
LC-MS:(ES,m/z)：662.21[M+H]+。
除以上具体给出制备步骤的化合物之外，按照以上实施例1～3的制备方法还制备得到下表4中的实施例化合物，具体实验步骤省略，所需原料和试剂均可以在市场采购获得。
表4：
Figure BDA0001766403100000241
Figure BDA0001766403100000251
Figure BDA0001766403100000261
实施例4应用实施例
(一)本发明化合物对17α-乙炔基雌二醇(E2-17α)诱导大鼠胆汁淤积作用
1、供试品溶液和试剂的配制
1.0％CMC-Na溶液的制备：称取1p CMC-Na粉末，加入100mL(50℃)蒸馏水，搅拌器快速搅拌1h，使之充分溶胀，即制得1％CMC-Na溶液。
E2-17α丙二醇溶液的配制：称取54/0.98＝56mp E2-17α，溶于9mL1,2-丙二醇中，振荡混匀器震荡1h，即制得7mp/mL E2-17α悬浊液。
2、分组及给药方法
Sprague Dawley大鼠，体重范围250～350g，随机分为空白对照组，E2-17α组(模型组)和受试化合物组，包括E2-17α+化合物1-H(5mg/Kg)组、E2-17α+化合物1-IP(5.1mg/Kg)组、E2-17α+化合物1-Cl(5.3mg/Kg)组、E2-17α+化合物1-Me1(5.1mg/Kg)组、E2-17α+化合物2-0(5.1mg/Kg)组，E2-17α+化合物6-0(5.9mg/Kg)组，以及阳性对照E2-17α+UDCA(15mg/kg)组和奥贝胆酸(OCA,6mg/kg+10mg/kg)组。UDCA即熊去氧胆酸，是已上市的用于治疗胆结石、胆汁淤积性肝病、脂肪肝、各型肝炎的胆汁酸衍生物类药物。
17α-乙炔基雌二醇(E2-17α)颈部皮下注射给药，造模7d，受试化合物混悬于1％CMC-Na溶液中，灌胃给药7d，与给予E2-17α造模同步。分组如下表5所示
表5分组及给药方法
Figure BDA0001766403100000271
(注：s.c，皮下注射；i.g，灌胃)注：以上各给药组同时还给予17α-乙炔基雌二醇(E2-17α)
3、实验步骤：
大鼠连续7天给予E2-17α丙二醇造模，并灌胃给予不同供试品的CMC-Na溶液，第8天大鼠空腹采血1mL检测血清生化指标，继续给予E2-17α丙二醇造模，并灌胃给予不同供试品的CMC-Na溶液。第9天给药后0.5h，将大鼠称重，10％乌拉坦(10mL/kg)腹腔注射麻醉。麻醉后固定于鼠板上，自上腹部剑突部位向下作腹正中切口，切口2～3cm左右。实验中应保持室内温度，维持大鼠体温，促进胆汁流出。用眼科镊子柄把肝脏向上翻起，找出十二指肠和胃交界处。在交界处穿一线(0号线)备用。在十二指肠上离幽门2厘米左右，可找到一根和十二指肠垂直、稍带黄色透明的细管从胰腺中穿过，即胆总管。在胆总管和十二指肠交界处，用眼科弯镊子分离出胆总管，注意不要弄破胆管周围的小血管，并避免用手刺激胰腺组织。分离完毕穿两根线，靠近肠端的线结扎，作为牵引线，用眼科剪在管壁斜剪一小口，把制作好的胰液收集管插入小口内，插进后立即可见黄色胆汁和胰液的混合液流出。结扎并固定，此管供收集胆汁。插管完成后，缝合皮肤，胆管插管的另一端引出，流到固定好的0.5mL离心管中。连续收集8次胆汁，15min采集1次，至120min。
4、指标测定：
1)胆汁的收集
插管完成后，缝合皮肤，防止腹腔水分蒸发，胆管插管的另一端引出，流到固定好的0.5mL收集管中。连续收集8次胆汁，15min采集1次，共计采集120min，实验前分析天平精密称取并记录胆汁收集管重量，实验收集完胆汁后称取胆汁与收集管总重，相减计算出管内胆汁重量，按照1g/mL换算成体积。胆汁收集完毕，下腔静脉取血，测定血清生化指标。
2)血清以及肝脏样本中的指标检测
血样37℃水浴静置10min，离心3000rpm(1368g)×10min，常规分离血清，分装并放入-20℃冷冻保存。血清样本的检测指标包括ALT、AST、ALP，以上指标的检测方法均按照试剂盒的相关说明书来执行。
5、统计学处理
应用SPSS18.0统计软件对资料进行分析，计量资料两组间比较采用t检验，多组均数比较采用单因素方差分析(ANOVA)和组间多重比较；数据均数±标准误(Mean±SEM.)或均数±标准差(Mean±SD.)表示。
6、试验结果
各组大鼠不同时间点胆汁排泄速率如表6所示。
表6不同组大鼠各时间点胆汁排出量(
Figure BDA0001766403100000281
mg/kg/min)
Figure BDA0001766403100000282
注：以上各给药组同时还给予17α-乙炔基雌二醇(E2-17α)
图6中对比了受试化合物1-H不同剂量组大鼠各时间点胆汁排出量。由表6及图6可以看出，与对照组比较，模型组胆汁流速降低，与E2-17α组比较，化合物1-H、化合物1-IP，化合物1-Cl，化合物1-Me1，化合物2-0和化合物6-0组的胆汁流速有显著性升高(与E2-17α组比，*P＜0.05)。
根据表6中的数据，本发明化合物的促进胆汁排泄作用，与目前上市的熊去氧胆酸(UDCA)相比：本发明受试化合物在5mg/kg～5.6mg/kg剂量时与熊去氧胆酸在15mg/kg剂量下的胆汁排出量相当，在给药后105分钟之后，本发明受试化合物1-H组和化合物1-Cl组的胆汁排出量明显高于熊去氧胆酸组。本发明化合物的促进胆汁排泄作用，与目前上市的奥贝胆酸(OCA)相比：本发明受试化合物在5mg/kg～5.6mg/kg剂量时胆汁排出量高于奥贝胆酸在10mg/kg剂量下胆汁排出量，并且随着给药后时间的延长，奥贝胆酸的促胆汁排出作用逐渐减弱，而本发明化合物的胆汁排出量在给药后120分钟后，仍高于模型组(E2-17α组)。本发明化合物的促进胆汁排泄作用强度，即胆汁排泄量优于奥贝胆酸和熊去氧胆酸；本发明化合物的促进胆汁排泄作用时间也长于奥贝胆酸和熊去氧胆酸。
各组大鼠灌胃给药后的血清生化ALT、AST、ALP水平如表7所示。
表7各组大鼠灌胃给药后的血清生化水平(n＝12,
Figure BDA0001766403100000291
)
Figure BDA0001766403100000292
由表7可以看出，化合物1-H、化合物1-IP、化合物1-Cl、化合物1-Me1、化合物2-0分别可以降低ALT、AST、ALP的值。
7、结论：本发明实施例化合物1-H、化合物1-IP、化合物1-Cl、化合物1-Me1、化合物2-0和化合物6-0针对肝内胆汁淤积具有明显改善作用，可以促进胆汁排泄，因此对于胆汁排泄障碍相关疾病具有治疗作用；本发明实施例化合物同时还可相应的降低ALT、AST、ALP的值，证明本发明实施例化合物对于修复肝损伤也具有一定效果。
(二)本发明化合物对肝硬化门静脉高压的作用
1、供试品与溶液的配制
1)TAA的生理盐水溶液配制：称取硫代乙酰胺(TAA)10g，溶于100mL的生理盐水中，之后通过0.22μm除菌微孔滤膜过滤至无菌瓶中。
2)受试化合物的0.5％CMC-Na混悬液配制：称取400mg的化合物1-H，化合物1-IP，化合物1-Cl，化合物1-Me1和化合物2-0溶于100mL的0.5％CMC-Na溶液中，混匀器震荡30min,即制得20mg/Kg(高剂量)组所给药物。即4mg/mL化合物1-H，1-IP，1-Cl，1-Me1和2-0的CMC-Na悬浊液。中、低剂量组，所给药物配制方法相同。
2、分组及给药方法
1)造模方法
采用腹腔注射TAA的方法造大鼠肝硬化门静脉高压模型。除了空白对照组腹腔注射生理盐水之外，剩余动物采用10％硫代乙酰胺(TAA)的生理盐水溶液腹腔注射(i.p.)造模。剂量200mg/Kg，给予容积：2mL/Kg。所有实验动物每三天腹腔注射TAA或等体积生理盐水一次，每次给药前，大鼠刨花垫料应提前更换干净，每两次造模给药称一次体重，大鼠体重较上一次增加或减少10％，TAA注射剂量相应增加或减少原来的50％，个体化给药以严格控制每只体重变化，可以有效提高造模成功率和成模均一性。
2)动物分组
将造模成功的动物随机分组，每组12只，空白对照组20只大鼠，分组见下表。大鼠TAA诱导门静脉高压，13周后造成门静脉高压模型；受试化合物给药10天，每天给药一次，具体分组如下：
表8实验动物分组与用药剂量
Figure BDA0001766403100000301
(注：i.v.，静脉注射；i.g.，灌胃；N.S.，生理盐水)
3)给药方法
采用灌胃给药，具体操作同胆汁淤积实施例灌胃操作。
3、试验步骤
试验期间每天观察动物生命体征与行为活动，胃肠道反应等方面观察动物的一般状态有无异常，每天观察注射部位，是否有红斑、水肿、出血或块状物等症状出现。所有动物给药前称重1次，观察造模和用药期间大鼠体质的总体变化。
给药结束，大鼠眼眶采血，37℃水浴10min，3000r/min(1370g)离心10min，取上层血清，直接送检，或置于–80℃短暂保存，用于血清学指标测定。采血后给食给水3天，逐渐恢复血容量，以备后续压力测定。
1)门静脉压测定
大鼠实验前禁食12小时，使用10％的水合氯醛腹腔注射麻醉，麻醉剂剂量2.5mL/Kg。动物麻醉后，固定于手术台。腹部沿腹白线开约3cm左右切口。开腹后，翻转十二指肠，找到门静脉，使用4号静脉输液针连接压力换能器，开放换能器所有阀门，将针头刺入门静脉，待有血回流，继续插入1cm左右，压力稳定后，关闭所有阀门，测定稳定后的门静脉压力。压力换能器与生物机能试验系统(BL-420F)连接。
2)平均动脉压测定。
剪刀沿正中线剪开颈部皮肤，分离一侧颈总动脉，颈总动脉插管，测定平均动脉压，测量方法同门静脉。
4、检测指标
1)实验前眼眶采血1.5mL，步骤如前所述，测定血清ALT、AST、ALP、γ-GT和TBA含量。
2)大鼠肝脏相同部位，切取0.7cm左右小块，放入10％甲醛溶液中固定，用于组织切片病理学观察。剪取肝脏适宜大小，迅速用生理盐水将表面血冲洗干净，装入灭菌EP管，液氮冻存以备后续的实验使用。
5、试验结果
1)门静脉压：与空白对照组比较，TAA组(模型组)门静脉压升高(▽P＜0.01)，表明肝硬化门静脉高压症已经出现；与TAA组比较，各受试化合物的5mg/Kg组、10mg/Kg组、20mg/Kg组门静脉压降低明显(#P＜0.05,ΔP＜0.01)。
图7为受试化合物1-H各剂量组对不同组大鼠门静脉压的影响。
与TAA组门静脉压均值做差的百分比，得出给药组各组分的平均变化百分比(％)。其中门静脉压降低百分比≥10％，可认为具有临床治疗意义，且与门静脉高压的风险相关。由图看出，给予化合物1-H治疗，TAA+化合物1-H 5mg/Kg组、TAA+化合物1-H 10mg/Kg组、TAA+化合物1-H 20mg/Kg组门静脉压平均变化百分比均大于10％，因此可以认为，化合物1-H降低门静脉高压具有临床治疗意义(P＜0.01，P＜0.05)。图8为受试化合物1-H各剂量组大鼠门静脉压平均变化百分比。
2)肝脏外观：受试化合物1-H各剂量组大鼠肝与脾外观如图9所示。图9(A)为Control(空白对照)组，空白对照组大鼠肝脏鲜红，表面光滑亮泽，边界清晰，大小和肝湿重正常。图9(B)为TAA(模型)组，TAA组大鼠肝脏呈红褐色，边缘不清，肝表面粗造不平整，部分大鼠肝表面结节增生形成较多的球形突起，部分肝硬化大鼠肝叶大小异常，主要表现为：左外叶、中叶以及两个盘状乳头叶体积增大，而左中叶和尾状叶则出现不同程度的萎缩，但整体体积增大，且湿重增加；多数大鼠脾大小正常或轻微萎缩蜷曲。图9(E)为TAA+5mg/Kg化合物1-H组，给予化合物1-H后，与TAA组比，TAA+5mg/Kg化合物1-H组大鼠肝脏肝硬化结节增生较轻，凸起明显减少，肝叶的萎缩或增生变化较轻，但与空白对照组相比表面依然较为不平整。图9(F)为TAA+10mg/Kg化合物1-H；图9(G)为TAA+20mg/Kg化合物1-H组，肝脾外观与TAA+5mg/Kg化合物1-H组相似。
3)血生化指标：受试化合物1-H各剂量组大鼠血清学指标如图10所示。图10(A)为各组大鼠血清ALT水平(Mean±SEM,n＝12)，与空白对照组比较，TAA组ALT水平升高(*P＜0.05)；化合物1-H 5mg/Kg组、化合物1-H 10mg/Kg组、化合物1-20mg/Kg组ALT水平降低(#P＜0.05)。图10(B)为各组大鼠血清AST水平(Mean±SEM,n＝12)。与空白对照组比较，TAA组AST水平升高(*P＜0.05)；化合物1-H 5mg/Kg组、化合物1-H 10mg/Kg组、化合物1-H 20mg/Kg组AST水平降低(#P＜0.05)。图10(C)为各组大鼠血清ALP水平(Mean±SEM,n＝12)。与空白对照组比较，TAA组ALP水平升高(▽P＜0.01)；所有给药组分ALT水平降低(#P＜0.05,ΔP＜0.01)。图10(D)为各组大鼠血清ALB含量(Mean±SEM,n＝12)。图10(E)为各组大鼠血清γ-GT水平(Mean±SEM,n＝12)。与空白对照组比较，TAA组γ-GT水平升高(▽P＜0.01)；所有给药治疗组γ-GT水平都有降低(#P＜0.05,ΔP＜0.01)。图10(F)为各组大鼠血清TBA含量(Mean±SEM,n＝12)。与空白对照组比较，TAA组TBA水平升高(▽P＜0.01)；所有给药组TBA水平都有降低(ΔP＜0.01)。
4)肝组织切片：受试化合物1-H各剂量组大鼠肝脏病理切片Masson染色与HE染色图像如图11所示。从(1)-(3)分别为同一样本Masson染色(100×视野)，HE染色(100×视野)和HE染色(200×视野)。其中图11(A)为Control(空白对照)组镜下照片。空白对照组肝脏纤维组织无明显增生，门管区形态正常，胆管无增生。肝细胞形态结构正常，未见细胞坏死和炎症细胞浸润。图11(B)为TAA(模型)组镜下照片。与空白对照组相比，TAA组纤维组织增生形成假小叶，门管区胆管出现增生，伴有圆形的淋巴细胞浸润，表现出肝纤维化症状。图11(C)为TAA+5mg/Kg化合物1-H组镜下照片。该组主要表现在纤维组织间隙更薄，细胞形态结构基本正常，炎症细胞浸润较轻，门管区胆管未见大量增生，证明肝纤维化症状有所减轻。图11(D)为TAA+10mg/Kg化合物1-H组镜下照片。该组病理形态学结构与TAA+5mg/Kg化合物1-H组相似。图11(E)为TAA+20mg/Kg化合物1-H组镜下照片。该组病理形态学结构与TAA+5mg/Kg化合物1-H组相似。病理指标显示，化合物1-H对纤维组织增生和有假小叶形成具有一定改善的作用，主要表现为纤维间隔变薄。6、结论
通过腹腔注射TAA的方法成功诱导大鼠肝硬化门静脉高压，造模完成后给予本发明实施例所制备的受试化合物。实验结果表明受试化合物使用5mg/Kg、10mg/Kg和20mg/Kg三个剂量均能够(1)降低大鼠门静脉压，门静脉压降低百分比≥10％；(2)改善肝硬化结节增生，肝叶的萎缩或增生；(3)改善大鼠血液各项指标的水平，ALT、AST、ALP、ALB、γ-GT和TBA均降低；(4)组织形态改善，肝脏纤维化病变减轻。
上述结果可以解释为本发明受试化合物通过激动FXR和TGR5受体，在缓解肝内血管收缩等功能上改善了肝内高血流阻力的状况，同时对肝脏纤维化等器质性病变也有一定的改善作用，促进了肝内血流阻力的降低。同时由于其本身具有的增加胆汁分泌和排泄的作用使血清TBA、ALP与γ-GT水平降低，减轻了淤胆之后毒性物质对肝细胞的进一步损伤，降低了ALT与AST的水平。
综上所述，本发明化合物能较好的改善大鼠肝硬化门静脉高压，同时对肝脏纤维化等器质性病变也有一定的改善作用。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (16)

1.化合物，具有式(Ⅰ)所示结构，或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002671568510000011
其中，R1为氢，未被取代的C1-5烷基；
各R2独立地选自卤素；
m为0、1、2、3或4；
各R3独立地选自甲基；
n为0、1、2、3或4。
2.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述R1为氢、甲基、乙基、丙基、异丙基。
3.根据权利要求1所述的化合物，其特征在于，各所述R2独立地选自氟、氯、溴中的一种或多种；
所述m为0或1；
所述n为0或1。
4.根据权利要求1所述的化合物，其为以下其中之一的化合物，或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002671568510000012
Figure FDA0002671568510000021
5.化合物，具有式(Ⅱ)所示结构，或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002671568510000022
其中，R4为氢，或者乙基；
各R5独立地选自卤素；
R6选自C1-5的烷基；
x为0、1或2；
y为1。
6.根据权利要求5所述化合物，其特征在于，各所述R5独立地选自氟、氯、溴中的任意一种或多种；
所述R6选自甲基、乙基、丙基或者异丙基。
7.化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0002671568510000023
Figure FDA0002671568510000031
8.一种权利要求1所述的化合物的制备方法，包括以下步骤：
化合物(10)和化合物(16)进行反应，得到式(Ⅰ)所示化合物；
Figure FDA0002671568510000032
其中，R1为氢，未被取代的C1-5烷基；
各R2独立地选自卤素；
m为0、1、2、3或4；
各R3独立地选自甲基；
n为0、1、2、3或4。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述反应在叔丁基氯化镁的催化作用下进行，所述反应的溶剂为1,4-二氧六环。
10.一种药物组合物，包括权利要求1～7任一项所述的化合物或权利要求8～9任一项所述的制备方法制备的化合物，以及药学上可接受的载体，赋形剂或它们的组合。
11.根据权利要求10所述的药物组合物，其特征在于，所述赋形剂选自稀释剂，媒介物或它们的组合。
12.权利要求1～7任一项所述的化合物或权利要求8～9任一项所述的制备方法制备的化合物或权利要求10～11任一项所述的药物组合物在制备用于治疗或减轻FXR受体介导的疾病的药物中的应用。
13.根据权利要求12所述的应用，其特征在于，所述FXR受体介导的疾病为代谢性疾病。
14.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述代谢性疾病选自高胆固醇血症、血脂异常、胆固醇结石和高甘油三酯血症。
15.根据权利要求13所述的应用，其特征在于，所述代谢性疾病为慢性肝病或门脉高压症。
16.根据权利要求15所述的应用，其特征在于，所述慢性肝病选自原发性胆汁淤积性肝硬化、原发性硬化性胆管炎、肝纤维化相关疾病、药物导致的胆汁淤积、进行性家族性肝内胆汁淤积、妊娠期胆汁淤积、酒精性肝病和非酒精性脂肪性肝病中的一种或多种；所述门脉高压症选自肝纤维化、肝硬化、脾肿大或其它原因引起的门静脉压力升高。
CN201810930184.XA 2017-12-19 2018-08-15 用于代谢性疾病治疗的化合物及其制备方法和应用 Active CN109929005B (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2017113717020 2017-12-19
CN201711371702 2017-12-19

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109929005A CN109929005A (zh) 2019-06-25
CN109929005B true CN109929005B (zh) 2020-10-30

Family

ID=66984480

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810930184.XA Active CN109929005B (zh) 2017-12-19 2018-08-15 用于代谢性疾病治疗的化合物及其制备方法和应用

Country Status (5)

Country Link
US (1) US11028111B2 (zh)
EP (1) EP3730509A4 (zh)
JP (1) JP6948680B2 (zh)
CN (1) CN109929005B (zh)
WO (1) WO2019119832A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113493485A (zh) * 2020-04-08 2021-10-12 西安奥立泰医药科技有限公司 胆汁酸衍生物盐、其晶型结构及它们的制备方法和应用
IT202000008515A1 (it) * 2020-04-21 2021-10-21 Bar Pharmaceuticals Soc A Responsabilita Limitata Metodo per la sintesi di un derivato del colano
CN114181984B (zh) * 2020-09-15 2023-09-08 上海医药工业研究院 (s)-1-(4-吡啶基)-1,3-丙二醇(ⅰ)的生物制备方法

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101747404A (zh) * 2009-12-17 2010-06-23 中国海洋大学 甘草次酸环磷酸酯衍生物及其制备方法
CN104672290A (zh) * 2015-01-05 2015-06-03 北京普禄德医药科技有限公司 一种用于预防或治疗fxr-介导的疾病的药物及其制备方法和用途
CN105593237A (zh) * 2013-08-01 2016-05-18 美国卫生和人力服务部 法尼醇x受体的抑制剂和在医学中的用途
WO2016173524A1 (zh) * 2015-04-29 2016-11-03 正大天晴药业集团股份有限公司 鹅去氧胆酸衍生物
WO2017062763A1 (en) * 2015-10-07 2017-04-13 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Farnesoid x receptor modulators
WO2017147137A1 (en) * 2016-02-23 2017-08-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Benzoic acid derivatives of bile acid as fxr/tgr5 agonists and methods of use thereof
CN107231795A (zh) * 2014-11-26 2017-10-03 英安塔制药有限公司 作为fxr/tgr5激动剂的胆汁酸类似物及其使用方法

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5541348A (en) * 1994-03-10 1996-07-30 National Research Council Of Canada Bile acids for biological and chemical applications and processes for the production thereof
US10208081B2 (en) * 2014-11-26 2019-02-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Bile acid derivatives as FXR/TGR5 agonists and methods of use thereof

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101747404A (zh) * 2009-12-17 2010-06-23 中国海洋大学 甘草次酸环磷酸酯衍生物及其制备方法
CN105593237A (zh) * 2013-08-01 2016-05-18 美国卫生和人力服务部 法尼醇x受体的抑制剂和在医学中的用途
CN107231795A (zh) * 2014-11-26 2017-10-03 英安塔制药有限公司 作为fxr/tgr5激动剂的胆汁酸类似物及其使用方法
CN104672290A (zh) * 2015-01-05 2015-06-03 北京普禄德医药科技有限公司 一种用于预防或治疗fxr-介导的疾病的药物及其制备方法和用途
WO2016173524A1 (zh) * 2015-04-29 2016-11-03 正大天晴药业集团股份有限公司 鹅去氧胆酸衍生物
WO2017062763A1 (en) * 2015-10-07 2017-04-13 Intercept Pharmaceuticals, Inc. Farnesoid x receptor modulators
WO2017147137A1 (en) * 2016-02-23 2017-08-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Benzoic acid derivatives of bile acid as fxr/tgr5 agonists and methods of use thereof

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Pharmacokinetics in Vitro and in Vivo of Two Novel Prodrugs of Oleanolic Acid in Rats and Its Hepatoprotective Effects against Liver Injury Induced by CCl4;Zongjiang Yu et al.;《Molecular Pharmaceutics》;20160328;第13卷(第5期);第1699-1710页 *
Stereoselective synthesis of nucleoside monophosphate HepDirect prodrugs;K. Raja Reddy et al.;《Tetrahedron Letters》;20050513;第46卷(第25期);第4321-4324页 *
胆汁酸与代谢综合征的研究进展;张柳 等;《医学综述》;20160305;第22卷(第5期);第964-967页 *

Also Published As

Publication number Publication date
US20200131212A1 (en) 2020-04-30
EP3730509A4 (en) 2021-09-01
CN109929005A (zh) 2019-06-25
JP2020536119A (ja) 2020-12-10
JP6948680B2 (ja) 2021-10-13
US11028111B2 (en) 2021-06-08
EP3730509A1 (en) 2020-10-28
WO2019119832A1 (zh) 2019-06-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR102042112B1 (ko) 중수소화 케노데옥시콜산 유도체 및 이의 화합물을 포함하는 약물 조성물
CN109929005B (zh) 用于代谢性疾病治疗的化合物及其制备方法和应用
CN100430048C (zh) 治疗下泌尿道症状的α-2-δ配体
JP4316794B2 (ja) イソキノリン誘導体及び医薬
ES2344310T3 (es) Formas cristalinas de un derivado de imidazol.
US20040067914A1 (en) R-NSAID esters and their use
AU2014340182A1 (en) Cromolyn derivatives and related methods of imaging and treatment
EA009744B1 (ru) Способ лечения атеросклероза, дислипидемий и связанных с ними состояний и фармацевтические композиции
JP2007513889A (ja) 結晶性クロピドグレル臭酸塩及びその調製方法
TW200424153A (en) Pharmaceutical composition
JPH02268178A (ja) ３―ホルミルアミノ―７―メチルスルホニルアミノ―６―フェノキシ―４ｈ―１―ベンゾピラン―４―オンまたはその塩を含有する抗炎症製剤
JPH02270855A (ja) 抗炎症性アリール化合物
US20050234025A1 (en) Compositions comprising one or more policosanols and/or policosanoic acids combined with sterol and/or steroid based ascorbic acid derivatives, and uses thereof
JP2015520133A (ja) ４−（（置換フェニル）ジフルオロメチル）フェノキシカルボン酸誘導体およびその調製方法およびその使用
WO2011125930A1 (ja) 炎症性腸疾患又は自己免疫性の末梢神経障害の予防又は治療剤
JPS63152374A (ja) ヒドロキシブテノライド誘導体およびその製造法
CN106661060A (zh) 菲罗啉膦酸类衍生物及其制备方法和应用
TWI669121B (zh) Compound for the treatment of cancer
CA2543757A1 (en) Paroxetine cholate or cholic acid derivative salts, and composition comprising paroxetine and cholic acid or cholic acid derivatives
WO2024027521A1 (zh) 甲基麦冬黄酮a类衍生物及其制备和应用
WO1994023721A1 (en) Novel medicinal use of dihydropyridine derivative
RU2675237C1 (ru) Соединение (6-{ [(1S)-1(5-фтор-4-оксо-3-фенил-3,4-дигидрохиназолин-2-ил)пропил]амино} -9Н-пурин-9-ил)метилацетат как ингибитор p110δ - дельта-изоформы фосфоинозитид-3-киназы (PI3K), способы его получения (варианты) и применения
US20230242502A1 (en) Thiobenzopyrans and their use in preparation of drugs for treatment of rheumatoid arthritis
JP2005060311A (ja) Ｎ−（ベンゾイル）アミノ酸誘導体を有効成分とするニューロパシー性疼痛治療剤
JPH04159225A (ja) アセチルコリンエステラーゼ阻害剤

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant