CN109923129A - 巨噬细胞刺激蛋白受体（或RON-Recepteur d,Origine Nantais）抗体及其用途 - Google Patents

巨噬细胞刺激蛋白受体（或RON-Recepteur d,Origine Nantais）抗体及其用途 Download PDF

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Abstract

本文公开了与巨噬细胞刺激蛋白受体(或RON‑Recepteur d'Origine Nantais)特异性结合的单克隆抗体。本文还提供了嵌合抗原受体、双特异性抗体、二价抗体及其biTE，以及所述抗体用于治疗癌症和纤维化的药物组合物和用途，以及使用所述抗体评估癌症患者状态的离体方法。特别地，提供了两种单克隆抗体7G8和6D4，其在人异种移植小鼠模型中显示出良好的抑制肿瘤生长的治疗效力，并且在人异种移植小鼠肿瘤成像模型中具有良好灵敏度。

Description

巨噬细胞刺激蛋白受体(或RON-Recepteur d′Origine Nantais)抗体及其用途
相关申请的交叉引用
本申请要求于2016年8月26日提交的新加坡专利申请号10201607147P、2017年1月17日提交的新加坡专利申请号10201700393P、2017年1月20日提交的新加坡专利申请号10201700521V以及2017年5月19日提交的新加坡专利申请号10201703234U的优先权，其内容通过引用整体并入本文以用于所有目的。
技术领域
本发明涉及用于医学用途的制剂或制剂的特异性治疗活性。特别地，本发明涉及与RON(即巨噬细胞刺激蛋白受体或RON-Recepteur d′Original Nantais)结合的抗体和其他试剂，以及使用所述抗体或其他试剂治疗疾病的方法。
背景技术
近年来，癌症治疗取得了巨大进步，尤其随着例如等免疫治疗药物的推出。然而，有许多癌症并没有有效的治疗方法。此外，还有其他癌症虽然存在可用的治疗方法，但治疗期间会产生耐药性。在免疫治疗药物的背景下，一种提高功效的方法是制备抗体药物缀合物。在其他情况下，已经采用化学疗法的组合来试图解决肿瘤抗性。这些方法取得了有限的成功。
因此，目前对替代癌症疗法存在未满足的医学需求。
发明内容
在一个方面，提供了抗原特异性结合结构域，其包含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链CDR和/或CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链CDR，其中
(a)CDRH1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:45、SEQID NO:56、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:116和SEQ ID NO:135或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1序列；
(b)CDRH2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:46、SEQID NO:57、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:136；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH2序列；
(c)CDRH3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:47、SEQID NO:58、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:137；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH3序列；
(d)CDRL1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:65、SEQID NO:81、SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:144；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL1序列；
(e)CDRL2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:66、SEQID NO:82和SEQ ID NO:109；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL2序列；和
(f)CDRL3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:67、SEQID NO:83、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:123和SEQ ID NO:145；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL2序列。
在另一方面，提供抗原特异性结合结构域，其包含CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中：
(a)CDRH1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:45、SEQID NO:56、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:135和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换、缺失或添加的CDRH1；
(b)CDRH2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:46、SEQID NO:57、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:136和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换、缺失或添加的CDRH2；
(c)CDRH3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:47、SEQID NO:58、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:137和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换、缺失或添加的CDRH3；
(d)CDRL1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:65、SEQID NO:81、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:144和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换、缺失或添加的CDRL1；
(e)CDRL2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:66、SEQID NO:82、SEQ ID NO:109和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换、缺失或添加的CDRL2；和
(f)CDRL3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:67、SEQID NO:83、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:145和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换、缺失或添加的CDRL3。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可以具有CDRH1、CRDH2和CRDH3，CDRH1是SEQ ID NO:1，CRDH2是SEQ ID NO:2，并且CDRH3是SEQ ID NO:3或RON特异性结合结构域，其中使用一个或多个被修饰序列1、2和3，并且修饰独立地选自1或2个氨基酸的替换、缺失或添加。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有重链CDR，其选自由以下组成的组
(i)所述CDRH1是SEQ ID NO:1，所述CRDH2是SEQ ID NO:2，所述CRDH3是SEQ IDNO:3；
(ii)所述CDRH1是SEQ ID NO:27，所述CRDH2是SEQ ID NO:28，所述CRDH3是SEQ IDNO:29；
(iii)所述CDRH1是SEQ ID NO:45，所述CRDH2是SEQ ID NO:46，所述CRDH3是SEQID NO:47；
(iv)所述CDRH1是SEQ ID NO:56，所述CRDH2是SEQ ID NO:57，所述CRDH3是SEQ IDNO:58；
(v)所述CDRH1是SEQ ID NO:73，所述CRDH2是SEQ ID NO:74，所述CRDH3是SEQ IDNO:75；
(vi)所述CDRH1是SEQ ID NO:89，所述CRDH2是SEQ ID NO:90，所述CRDH3是SEQ IDNO:91；
(vii)所述CDRH1是SEQ ID NO:100，所述CRDH2是SEQ ID NO:101，所述CRDH3是SEQID NO:102；和
(viii)所述CDRH1是SEQ ID NO:135，所述CRDH2是SEQ ID NO:136，所述CRDH3是SEQ ID NO:137。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有轻链CDR，其选自由以下组成的组
(i)所述CDRL1是SEQ ID NO:18，所述CRDL2是SEQ ID NO:19，所述CRDL3是SEQ IDNO:20；
(ii)所述CDRL1是SEQ ID NO:36，所述CRDL2是SEQ ID NO:37，所述CRDL3是SEQ IDNO:38；
(iii)所述CDRL1是SEQ ID NO:18，所述CRDL2是SEQ ID NO:19，所述CRDL3是SEQID NO:20；
(iv)所述CDRL1是SEQ ID NO:65，所述CRDL2是SEQ ID NO:66，所述CRDL3是SEQ IDNO:67；
(v)所述CDRL1是SEQ ID NO:81，所述CRDL2是SEQ ID NO:82，所述CRDL3是SEQ IDNO:83；
(vi)所述CDRL1是SEQ ID NO:108，所述CRDL2是SEQ ID NO:109，所述CRDL3是SEQID NO:110；和
(vii)所述CDRL1是SEQ ID NO:144，所述CRDL2是SEQ ID NO:37，所述CRDL3是SEQID NO:145。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中可变重结构域具有选自由以下组成的组的序列：
(i)SEQ ID NO:8；
(ii)SEQ ID NO:34；
(iii)SEQ ID NO:51；
(iv)SEQ ID NO:63；
(v)SEQ ID NO:79；
(vi)SEQ ID NO:95；
(vii)SEQ ID NO:106；和
(viii)SEQ ID NO:142。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中可变轻结构域具有选自由以下组成的组的序列：
(i)SEQ ID NO:25；
(ii)SEQ ID NO:43；
(iii)SEQ ID NO:54；
(iv)SEQ ID NO:71；
(v)SEQ ID NO:87；
(vi)SEQ ID NO:98；
(vii)SEQ ID NO:114；和
(viii)SEQ ID NO:150。
另一方面，提供了嵌合抗原受体，其包含如本文所述的结合结构域。
在另一方面，提供了分离的抗体或抗体，其包含如本文所述的结合结构域。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体可选自由多特异性抗体、全长抗体和抗体结合片段组成的组。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中所述多特异性抗体是双特异性抗体。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中所述双特异性抗体是双特异性T细胞衔接器
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中所述双特异性抗体包含特异性结合第一RON表位的一个结合结构域，和特异性结合不同于所述第一RON表位的第二RON表位的第二结合结构域。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中第一RON结合结构域包含分别如SEQ ID NO:1、2、3中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和如SEQ ID NO:18、19和20中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体包含第二RON结合结构域，其包含分别如SEQ ID NO:27、28、29中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和如SEQ ID NO:36、37和38中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中所述抗体分子包含效应子功能。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中所述抗体缀合于有效荷载(payload)。在一些实例中，所述有效荷载选自，其中所述有效荷载选自由以下组成的组：毒素、聚合物、生物活性蛋白质、核酸及其片段、放射性核素螯合金属、纳米颗粒和报道基团。
在一些实例中，其中所述毒素选自由以下组成的组：澳瑞他汀(auristatin)、MMAF(单甲基澳瑞他汀F)、吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、多柔比星(doxorubicin)、多卡米新(duocarmycin)、美登木素生物碱(maytansinoid)、calocheamicin、多拉司他汀(dolastatin)、美登素(Maytansine)、α-鹅膏蕈碱(α-Amanitin)和微管溶素(Tubulysin)。
在另一方面，提供了药物组合物，其包含如本文所述的抗体和赋形剂、稀释剂和/或载体。
在一些实例中，如本文所述的药物组合物包含至少两种如本文所述的抗原特异性抗体。在一些实例中，所述至少两种抗原特异性抗体中的一种包含分别如SEQ ID NO:1、2、3中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和如SEQ ID NO:18、19和20中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3；任选地，其中所述至少两种抗体的第二抗体包含分别如SEQ ID NO:27、28、29中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和如SEQ ID NO:36、37和38中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3。
在另一个方面，提供了如本文所述的抗原结合结构域，或如本文所述的嵌合抗原受体，或如本文所述的抗体，或如本文所述的药物组合物，用于疗法或治疗中。
在另一个方面，提供了预防或治疗患者的癌症或纤维化的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的如本文所述的抗原结合结构域，或如本文所述的嵌合抗原受体，或如本文所述的抗体，或如本文所述的药物组合物。
在一些实例中，所述患者是患者群体，其特征在于构成所述群体的患者具有RON阳性肿瘤。在一些实例中，构成所述群体的患者具有RON阳性和C-MET阳性肿瘤。
在一些实例中，如本文所述的方法包括在治疗前鉴定所述患者具有RON阳性肿瘤的步骤。
在另一个方面，提供了如本文所述的抗原结合结构域或如本文所述的嵌合抗原受体或如本文所述的抗体或如本文所述的药物组合物在制造用于治疗癌症或纤维化的药物中的用途。
在另一个方面，提供了与包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:51、SEQ IDNO:63、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:130、SEQID NO:133或SEQ ID NO:142的可变重链区(VH)的抗体交叉阻断或结合相同表位的抗体。
在另一个方面，提供了与包含可变重链区/可变轻链区(VH/VL)对的抗体交叉阻断或结合相同表位的抗体，所述可变重链区/可变轻链区(VH/VL)对选自由以下组成的组：SEQID NO:8和25、SEQ ID NO:34和43、SEQ ID NO:51和54、SEQ ID NO:63和71、SEQ ID NO:79和87、SEQ ID NO:95和98、SEQ ID NO:106和114、SEQ ID NO:121和130、或SEQ ID NO:142和150。
在另一个方面，提供了评估癌症状态的离体方法，其中所述方法包括：a)扫描已知包括所述癌症的肿瘤的患者或所述患者的特定部位，其中所述患者在第一时间点已被施用标记形式的抗体，其中所述抗体如本文中所定义，b)在一个或多个其他时间点重复a)，和比较来自两个或更多个时间点的结果以评估所述癌症的状态。
附图说明
图1A显示条形图，其说明了针对涂覆的重组截短RON蛋白以及GST蛋白的示例性抗RON抗体(例如6D4和7G8克隆)的基于ELISA的结合测定的结果。蛋白质以0.1μg/ml涂覆。测试抗体上清液并在650nm观察吸光度。
图1B显示条形图，其说明了针对涂覆的重组截短RON蛋白(GST-RON1和GST-RON3)以及GST蛋白的示例性抗RON抗体的基于ELISA的结合测定的结果。蛋白质以0.1μg/ml涂覆。测试抗体上清液并在650nm观察吸光度。因此，图1显示如本文所述的抗RON抗体结合RON-GST，其中与GST蛋白的背景结合是最小的。
图2显示在PFA固定的HCT116细胞(人结肠直肠癌)上的示例性抗RON抗体(6D4和7G8抗体)的免疫荧光染色。细胞用DAPI染色以用于核可视化，并且抗小鼠缀合物488用作第二小鼠抗体。因此，图2显示如本文所述的抗RON抗体与截短的RON蛋白结合可以染色人结肠直肠细胞(例如HCT116细胞)。此外，染色对RON是特异性的，因为抗RON抗体不染色RON阴性细胞系，例如小鼠胚胎成纤维细胞(命名为TKO)。
图3显示使用示例性抗RON抗体(6D4和7G4抗体)的异种移植小鼠肿瘤组织的免疫组织化学染色。对来自小鼠的血清注射重组RON蛋白质，用作阳性对照。因此，图3显示如本文所述的抗RON抗体可用于免疫组织化学。
图4显示RON蛋白结构域的示意图。A显示6D4和7G8抗体结合的RON蛋白结构域；B显示RON蛋白的各种同种型。图4摘自Yao,Hang-Ping等人,“癌症中的MSP-RON信号传导：发病机制和治疗潜力。(MSP-RON signalling in cancer:pathogenesis and therapeuticpotential.)”自然评论(Nature reviews.)癌症(Cancer)13 7(2013):466-81。
图5显示三重敲除(TKO)细胞(左)和人乳腺癌细胞(T47D细胞)(右)上的示例性抗RON抗体(6D4和7G8抗体)的流式细胞术数据。图5显示如本文所述的示例性抗RON抗体不结合三重敲除细胞(即阴性对照)。相反，如本文所述的抗RON抗体结合人乳腺癌细胞。因此，图5显示如本文所述的抗RON抗体对癌细胞是特异性的。
图6显示说明小鼠杂交瘤细胞系(HT29细胞)在完全培养基中的体外细胞增殖的曲线，所述体外细胞增殖在对照IgG和本文所述的抗RON抗体(例如，6D4和7G8抗体)存在下，通过IncuCyte活细胞分析系统(Essen BioScience)历时7天监测。图6显示了如本文所述的抗体对细胞增殖的剂量依赖性(1.25μg/ml至12.5μg/ml)抑制。
图7显示在划痕伤口测定中，在对照IgG和如本文所述的抗RON抗体(6D4或7G8抗体)存在下，在0和90小时时的小鼠杂交瘤(HT29细胞)的划痕伤口抑制测定结果的清晰显微镜图像。图7显示7G8抗体提供HT29细胞迁移的显著抑制。抑制癌细胞的迁移是理想的质量，因为RON过表达导致肿瘤中不受控制的细胞迁移。
图8显示在划痕伤口测定中，在对照IgG和如本文所述的抗RON抗体(6D4或7G8抗体)存在下小鼠杂交瘤(HT29细胞)的伤口愈合抑制百分比的条形图。基于Image J软件估计的剩余伤口愈合面积计算百分比。图8显示7G8抗体提供HT29细胞迁移的显著抑制。
图9显示免疫印迹，其显示在存在和不存在10ng/ml MSP的情况下用示例性RON中和抗体(7G8或6D4)或对照IgG处理的HT29细胞的相对蛋白质水平。处理后48小时收获细胞。图9显示用抗RON抗体(6D4和7G8)处理导致检测到的RON量减少，并且RON信号传导下游的磷酸化靶标水平更低。因此，图9显示用抗RON抗体(6D4和7G8)处理可导致RON的降解和其下游信号传导通路的消除(Ras/Raf通路和PI3K/Akt通路)。
图10显示在抗体依赖性的细胞介导的细胞毒性(ADCC)测定(阳性对照IgG W6/32具有ADCC功能)中通过铕-TDA(TDA，即2,2′:6′,2"-三联吡啶-6,6"-二羧酸)测量的人乳腺癌细胞系(T47D细胞)中的特异性细胞裂解的百分比。将抗体与小鼠脾细胞(效应细胞)和T47D细胞(靶标)以150:1的效应物:靶标比率在37℃共孵育过夜之后，在铕-TDA释放测定中检测裂解百分比。因此，图10显示如本文所述的抗体在效应细胞存在下诱导乳腺癌细胞系中的细胞裂解。
图11显示了活的HCT116细胞上抗RON抗体(6D4和7G8)的示例性免疫荧光染色。在血清存在下将这两种抗体与人结肠癌细胞系(HCT116细胞)在37℃孵育1小时或在4℃孵育过夜。使用二级抗小鼠-FITC抗体检测抗体结合。因此，图11显示6D4和7G8都被内吞到活细胞中，从而允许有效靶向在表面上表达RON的活癌细胞。
图12显示IncuCyte图像，其显示在加入具有7G8抗体的抗小鼠IgG-DM1(2οADC)后2小时的细胞死亡。因此，图12显示7G8抗体可导致人结肠癌细胞系(HCT116细胞)中的细胞死亡。
图13A显示在通过测量细胞生长的IncuCyte的图像监测下，当与具有2οADC(抗体药物缀合物)的抗RON抗体组一起孵育72小时时，人结肠癌细胞系(HCT116细胞)和P53、P21和MDM2三重敲除小鼠胚胎成纤维细胞(TKO细胞)的细胞生长百分比的条形图。因此，图13A显示，当与抗体药物缀合物偶联时，如本文所述的抗体延迟RON阳性细胞中的癌细胞生长而不抑制RON阴性细胞系中的癌细胞生长。
图13B显示当与具有2οADC(抗体药物缀合物)的抗RON抗体组一起孵育72小时时的人结肠癌细胞系(HCT116细胞)的细胞生存力百分比的条形图，和使用Celltitre Glo发光细胞活力测定研究的细胞生存力。因此，图13B显示，当与抗体药物缀合物偶联时，如本文所述的抗体(5A5、5B9、6D4和7G8)降低癌细胞生存力，如从用5A5、5B9、6D4和7G8处理的HCT116细胞的发光读数的减少所观察到的。
图13C显示具有2οADC并用抗RON抗体组处理的人结肠癌细胞系(HCT116细胞)的细胞生存力百分比的条形图。图13C中将细胞生存力绘制为不可存活细胞的百分比。因此，图13C显示，当与抗体药物缀合物偶联时，本文所述的抗体(5A5、5B9、6D4和7G8)降低癌细胞生存力。
图13D显示在1μg/ml的2οADC(抗体药物缀合物)存在下，如本文所述的抗RON抗体(6D4和7G8)对RON阳性人结肠直肠癌细胞(HCT116细胞)以剂量依赖性方式的细胞毒性曲线。因此，可以看出6D4和7G8显示出对人结肠直肠癌细胞的有效细胞毒性，尽管HCT116细胞的杀死受抗体:抗体药物偶联物比率的限制。
图14显示7G8重链1氨基酸和核苷酸序列，以及7G8重链1框架和CDR序列。
图15显示7G8κ链(轻链)氨基酸和核苷酸序列，以及7G8κ链框架和CDR序列。
图16显示6D4重链氨基酸和核苷酸序列，以及6D4重链框架和CDR序列。
图17显示6D4κ链(轻链)氨基酸和核苷酸序列，以及6D4κ框架和CDR序列。
图18显示3E1重链氨基酸和核苷酸序列，以及3E1重链框架和CDR序列。
图19显示3E1κ链(轻链)氨基酸和核苷酸序列，以及3E1κ链框架和CDR序列。
图20显示3G4重链氨基酸和核苷酸序列，以及3G4重链框架和CDR序列。
图21显示3G4κ链(轻链)氨基酸和核苷酸序列，以及3G4κ链框架和CDR序列。
图22显示5B9重链氨基酸和核苷酸序列，以及5B9重链框架和CDR序列。
图23显示5B9κ链(轻链)氨基酸和核苷酸序列，以及5B9κ链框架和CDR序列。
图24显示6E6重链氨基酸和核苷酸序列，以及6E6重链框架和CDR序列。
图25显示6E6κ链(轻链)氨基酸和核苷酸序列，以及6E6κ链框架和CDR序列。
图26显示2F1重链氨基酸和核苷酸序列，以及2F1κ链框架和CDR序列。
图27显示2F1κ链(轻链)氨基酸和核苷酸序列，以及2F1κ链框架和CDR序列。
图28显示1D2重链氨基酸和核苷酸序列，以及1D2重链框架和CDR序列。
图29A显示2B3重链氨基酸和核苷酸序列，以及2B3重链框架和CDR序列。
图29B显示2B3轻链氨基酸和核苷酸序列，以及2B3轻链框架和CDR序列。
图30显示1B9重链氨基酸和核苷酸序列，以及1B9重链框架和CDR序列。
图31(A)显示了描述给药和成像方案的时间线，以及显示在用抗体6D4和7G8处理的小鼠中测量的来自单独肿瘤的生物发光的照片图像；(B)显示了在第35天来自小鼠异种移植模型的肿瘤重量的条形图；(C)显示照片图像，其显示在用抗体6D4处理的小鼠中测量的来自单独肿瘤的生物发光。因此，图31显示如本文所述的抗体抑制体内肿瘤生长。
图32显示了线图，其显示用抗体6D4处理的小鼠中肿瘤体积的体内数据。图32显示用本文所述的示例性抗体处理的小鼠具有减小的肿瘤体积。
图33显示了使用6D4和7G8抗体作为体内成像剂的实验的时间线。
图34显示了使用6D4和7G8抗体作为体内成像剂的实验结果的照片图像。
图35显示了在施用后6小时使用6D4和7G8抗体作为体内成像剂的实验结果的照片图像。
图36显示了在施用后24小时使用6D4和7G8抗体作为体内成像剂的实验结果的照片图像。
图37显示了在施用后48小时使用6D4和7G8抗体作为体内成像剂的实验结果的照片图像。
图38显示了在施用后72小时使用6D4和7G8抗体作为体内成像剂的实验结果的照片图像。
图39显示了在施用后5天使用6D4和7G8抗体作为体内成像剂的实验结果的照片图像。
图40显示了在施用后7天使用6D4和7G8抗体作为体内成像剂的实验结果的照片图像。
图41显示了在施用后14天使用6D4和7G8抗体作为体内成像剂的实验结果的照片图像，并测量了终点处肿瘤的重量。
图42显示了在施用后21天使用6D4和7G8抗体作为体内成像剂的实验结果的照片图像，并通过测量肿瘤细胞中荧光素酶基因表达所反映的光子来测量肿瘤体积。
图43显示蛋白质印迹结果，其证明抗体3G4和6E6识别表达RON的不同癌细胞系。测试的细胞系是人结肠直肠癌细胞系(例如HCT116)、人角化细胞细胞系(例如HaCat)、小鼠杂交瘤(例如HT29)、人淋巴母细胞伯基特淋巴瘤细胞系(例如Raji)、人胃癌细胞(例如MKN45)、人结肠结肠直肠腺癌细胞系(例如WiDr)、人乳腺癌细胞系(例如T47D)、非小细胞肺癌(例如H1299)和大鼠脑癌细胞系(例如C6)。
图44A显示免疫荧光染色图像，其显示本公开的抗体(3G4、6A5、6E6和6D4)识别RON转染的H1299细胞。
图44B显示免疫荧光染色图像，其显示本公开的抗体(3E1、5A5、5D8、5B9、6B5和8A8)识别RON转染的H1299细胞。
图45显示蛋白质印迹，其显示抗体1D2针对小鼠胚胎成纤维细胞系(例如3T3)、人结肠直肠癌细胞系(例如HCT116)和小鼠杂交瘤(例如HT29)细胞系的免疫沉淀结果。因此，图45显示RON(MW 180kDa)可以在RON阳性的HT29细胞和HCT116细胞中被1D2免疫沉淀，但在RON阴性3T3细胞中不能被1D2免疫沉淀。
图46显示蛋白质印迹，其显示抗体2F1、2B3和1B9针对3T3细胞系、HCT116细胞系和HT29细胞系的免疫沉淀结果。因此，图45显示RON(MW 180kDa)可以在RON阳性的HT29细胞和HCT116细胞中被2F1、2B3和1B9免疫沉淀，但在RON阴性3T3细胞中不能被2F1、2B3和1B9免疫沉淀。
图47A显示了表明Pepscan表位作图策略的示意图。
图47B显示了表明肽噬菌体展示表位作图策略的示意图。
图48A显示了通过Pepscan的表位作图的结果。
图48B显示了通过噬菌体展示的表位作图的结果。
图49A显示了免疫荧光图像，其显示抗RON抗体5A5和6B5的胞吞作用。因此，图49A显示5A5和6B5被内吞入活细胞中，从而允许用作治疗药物递送载体，其靶向表面上表达RON的活癌细胞。
图49B显示免疫荧光图像，其显示抗RON抗体6D4的胞吞作用。因此，图49B显示抗体6D4被内吞，从而允许该抗体用作治疗药物递送载体，其靶向表面上表达RON的活癌细胞。
图50A显示可变的5A5重链氨基酸和核苷酸序列，以及5A5重链框架和CDR序列。
图50B显示可变的5A5κ链(轻链)氨基酸和核苷酸序列，以及5A5κ链框架和CDR序列。
图51显示了线图，其显示了对于通过Proteon测量的如本文所述的抗体实例(即2B3)的结合亲和力的研究。图51表明抗体2B3对RON3具有强亲和力。
表1.与图58A相关的肽
具体实施方式
巨噬细胞刺激蛋白受体(或RON-Recepteur d′Origine Nantais)是一种c-MET相关的酪氨酸激酶受体，它在由配体MSP接合时将信号从细胞外基质转导到细胞质中。此信号传导刺激RON的细胞内结构域并提供用于接合下游信号传导分子例如PIK3R1、PLCG1或GAB1的活性位点。因此，RON是信号传导级联的一部分。人RON受体酪氨酸激酶具有UniProt编号Q04912，并且鼠蛋白具有UniProt编号Q62190。该受体在人体中被基因MST1R编码。
巨噬细胞刺激蛋白受体(RON)是一种c-MET相关的酪氨酸激酶受体，本发明的诸位发明人认为其可能是重要的治疗靶标，特别是用于治疗癌症。RON的过表达可能是诱导肿瘤发生的因素，并且它似乎是许多人类癌症的标志。与没有RON过表达的患者相比，具有所述过表达的癌症患者似乎预后更差。
具有RON阳性肿瘤的患者的10-年无病生存率显著低于具有RON阴性肿瘤的患者(分别是30.3％对58.6％，P＝0.009)。具有RON阳性和MET阳性肿瘤的患者的10-年无病生存率最低(11.8％)，而具有RON阴性和MET阴性肿瘤的患者的10-年无病生存率最高(79.3％；P＝0.008)。RON表达还可以用作一些癌症中疾病进展和患者存活的预后生物标志物。
鉴于将RON阳性与癌症患者的存活和进展相关联的统计数据，本公开的发明人着手提供识别RON和/或可结合RON的抗体。特别地，已经分离并表征了各种抗体以识别细胞表面表达的受体酪氨酸激酶RON。
因此，在一个方面，提供了RON特异性结合结构域，其包含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链CDR和/或CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链CDR，其中
(a)CDRH1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:45、SEQID NO:56、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:116和SEQ ID NO:135或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1序列；
(b)CDRH2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:46、SEQID NO:57、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:136；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH2序列；
(c)CDRH3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:47、SEQID NO:58、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:137；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH3序列；
(d)CDRL1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:65、SEQID NO:81、SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:144；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL1序列；
(e)CDRL2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:66、SEQID NO:82和SEQ ID NO:109；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL2序列；和
(f)CDRL3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:67、SEQID NO:83、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:123和SEQ ID NO:145；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL2序列。
还公开了抗原特异性结合结构域，其包含(或由以下组成)CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链CDR和/或CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链CDR，其中
(a)CDRH1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:45、SEQID NO:56、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:116和SEQ ID NO:135；
(b)CDRH2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:46、SEQID NO:57、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:136；
(c)CDRH3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:47、SEQID NO:58、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:137；
(d)CDRL1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:65、SEQID NO:81、SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:144；
(e)CDRL2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:66、SEQID NO:82和SEQ ID NO:109；和
(f)CDRL3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:67、SEQID NO:83、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:123和SEQ ID NO:145。
还提供了分离的抗体或其片段，其中所述抗体或其片段包含(或由以下组成)CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链CDR和/或CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链CDR，其中
(a)CDRH1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:27、SEQID NO:45、SEQ ID NO:56、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:116和SEQ ID NO:100；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1序列；
(b)CDRH2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:28、SEQID NO:46、SEQ ID NO:57、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:101；或SEQ ID NO:117或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH2序列；
(c)CDRH3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:29、SEQID NO:47、SEQ ID NO:58、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:102；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH3序列；
(d)CDRL1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:65、SEQID NO:81和SEQ ID NO:108；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL1序列；
(e)CDRL2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:66、SEQID NO:82和SEQ ID NO:109；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL2序列；和
(f)CDRL3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:67、SEQID NO:83和SEQ ID NO:123；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL2序列。
在一些实例中，如本文所述的抗体具有重链CDR，其选自由以下组成的组：
(a)具有序列SEQ ID NO:1的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:2的CDRH2和具有序列SEQID NO:3的CDRH3，和/或具有序列SEQ ID NO:10的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:11的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:12的CDRH3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1、CDRH2或CDRH3序列；
(b)具有序列SEQ ID NO:27的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:28的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:29的CDRH3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1、CDRH2或CDRH3序列；
(c)具有序列SEQ ID NO:45的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:46的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:47的CDRH3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1、CDRH2或CDRH3序列；
(d)具有序列SEQ ID NO:56的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:57的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:58的CDRH3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1、CDRH2或CDRH3序列；
(e)具有序列SEQ ID NO:73的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:74的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:75的CDRH3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1、CDRH2或CDRH3序列；
(f)具有序列SEQ ID NO:89的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:90的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:101的CDRH3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1、CDRH2或CDRH3序列；
(g)具有序列SEQ ID NO:116的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:117的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:102的CDRH3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1、CDRH2或CDRH3序列；
(h)具有序列SEQ ID NO:116的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:117的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:102的CDRH3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1、CDRH2或CDRH3序列；
(i)具有序列SEQ ID NO:116的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:101的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:102的CDRH3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1、CDRH2或CDRH3序列；和
(a)具有序列SEQ ID NO:100的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:101的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:102的CDRH3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1、CDRH2或CDRH3序列；和
(j)表1中列出的CDRH1、CDRH2和CDRH3，或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1或CDRH2或CDRH3。
在一些实例中，如本文所述的抗体具有轻链CDR，其选自由以下组成的组：
(b)具有序列SEQ ID NO:18的CDRL1、具有序列SEQ ID NO:19的CDRL2和具有序列SEQ ID NO:20的CDRL3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL1、CDRL2或CDRL3序列；
(c)具有序列SEQ ID NO:36的CDRL1、具有序列SEQ ID NO:37的CDRL2和具有序列SEQ ID NO:38的CDRL3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL1、CDRL2或CDRL3序列；
(d)具有序列SEQ ID NO:18的CDRL1、具有序列SEQ ID NO:19的CDRL2和具有序列SEQ ID NO:20的CDRL3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL1、CDRL2或CDRL3序列；
(e)具有序列SEQ ID NO:65的CDRL1、具有序列SEQ ID NO:66的CDRL2和具有序列SEQ ID NO:67的CDRL3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL1、CDRL2或CDRL3序列；
(f)具有序列SEQ ID NO:81的CDRL1、具有序列SEQ ID NO:82的CDRL2和具有序列SEQ ID NO:83的CDRL3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL1、CDRL2或CDRL3序列；
(g)具有序列SEQ ID NO:65的CDRL1、具有序列SEQ ID NO:66的CDRL2和具有序列SEQ ID NO:67的CDRL3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL1、CDRL2或CDRL3序列；
(h)具有序列SEQ ID NO:108的CDRL1、具有序列SEQ ID NO:109的CDRL2和具有序列SEQ ID NO:123的CDRL3；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL1、CDRL2或CDRL3序列；和
(i)表1中列出的CDRL1、CDRL2和CDRL3，或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL1或CDRL2或CDRL3。
在一些实例中，如本文所述的抗体具有重链CDR和轻链CDR，所述重链CDR和轻链CDR选自由以下组成的组：
(a)具有序列SEQ ID NO:1的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:2的CDRH2和具有序列SEQID NO:3的CDRH3，和/或具有序列SEQ ID NO:10的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:11的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:12的CDRH3，和具有序列SEQ ID NO:18的CDRL1、具有序列SEQ ID NO:19的CDRL2和具有序列SEQ ID NO:20的CDRL3；
(b)具有序列SEQ ID NO:27的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:28的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:29的CDRH3，和具有序列SEQ ID NO:36的CDRL1、具有序列SEQ ID NO:37的CDRL2和具有序列SEQ ID NO:38的CDRL3；
(c)具有序列SEQ ID NO:45的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:46的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:47的CDRH3，和具有序列SEQ ID NO:18的CDRL1、具有序列SEQ ID NO:19的CDRL2和具有序列SEQ ID NO:20的CDRL3；
(d)具有序列SEQ ID NO:56的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:57的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:58的CDRH3，和具有序列SEQ ID NO:65的CDRL1、具有序列SEQ ID NO:66的CDRL2和具有序列SEQ ID NO:67的CDRL3；
(e)具有序列SEQ ID NO:73的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:74的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:75的CDRH3，和具有序列SEQ ID NO:81的CDRL1、具有序列SEQ ID NO:82的CDRL2和具有序列SEQ ID NO:83的CDRL3；
(f)具有序列SEQ ID NO:89的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:90的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:91的CDRH3，和具有序列SEQ ID NO:65的CDRL1、具有序列SEQ ID NO:66的CDRL2和具有序列SEQ ID NO:67的CDRL3；
(g)具有序列SEQ ID NO:116的CDRH1、具有序列SEQ ID NO:117的CDRH2和具有序列SEQ ID NO:102的CDRH3，和具有序列SEQ ID NO:108的CDRL1、具有序列SEQ ID NO:109的CDRL2和具有序列SEQ ID NO:123的CDRL3；和
(h)具有如表1中列举的序列的CDRH1、CDRH2、CDRH3，和如表1中列举的CDRL1、CDRL2、CDRL3。
在一些实例中，如本文所述的抗体包含(或由以下组成)由核苷酸序列编码的重链可变区，所述核苷酸序列与表1中列举的或选自由SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:131、SEQ IDNO:134和SEQ ID NO:107组成的组的核苷酸序列中的一种具有至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％的序列同一性。
在一些实例中，如本文所述的抗体包含(或由以下组成)由核苷酸序列编码的轻链可变区，所述核苷酸序列与表1中列举的或选自由SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:44、SEQ IDNO:55、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:99和SEQ ID NO:128组成的组的核苷酸序列中的一种具有至少80％、或至少85％、或至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％的序列同一性。
在一些实例中，如本文所述的抗体包含重链可变区(或由重链可变区组成)，所述重链可变区由选自由以下组成的组中的一种核苷酸序列编码：SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:122、SEQ IDNO；131、SEQ ID NO:134、SEQ ID NO:107。
在一些实例中，如本文所述的抗体包含轻链可变区(或由轻链可变区组成)，所述轻链可变区由选自由以下组成的组中的一种核苷酸序列编码：SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:99和SEQ ID NO:128。
在一些实例中，如本文所述的抗体包含(或由以下组成)选自由以下组成的组的重链可变区：
(a)氨基酸序列SEQ ID NO:8；
(b)氨基酸序列SEQ ID NO:34；
(c)氨基酸序列SEQ ID NO:51；
(d)氨基酸序列SEQ ID NO:63；
(e)氨基酸序列SEQ ID NO:79；
(f)氨基酸序列SEQ ID NO:95；
(g)氨基酸序列SEQ ID NO:121；
(h)氨基酸序列SEQ ID NO:130；
(i)氨基酸序列SEQ ID NO:132；
(j)氨基酸序列SEQ ID NO:106；和
(k)(a)至(k)的具有至少85％，或至少90％，或至少95％，或至少96％，或至少97％，或至少98％，或至少99％，或至少99.95％或100％的序列同一性的氨基酸序列。
在一些实例中，如本文所述的抗体包含(或由以下组成)选自由以下组成的组的轻链可变区：
(a)氨基酸序列SEQ ID NO:25；
(b)氨基酸序列SEQ ID NO:43；
(c)氨基酸序列SEQ ID NO:54；
(d)氨基酸序列SEQ ID NO:71；
(e)氨基酸序列SEQ ID NO:87；
(f)氨基酸序列SEQ ID NO:98；
(g)氨基酸序列SEQ ID NO:127；和
(h)(a)至(h)的具有至少85％，或至少90％，或至少95％，或至少96％，或至少97％，或至少98％，或至少99％，或至少99.95％或100％的序列同一性的氨基酸序列。
在一些实例中，如本文所述的抗体可进一步包含(或由以下组成的)框架序列。
在一些实例中，如本文所述的抗体可包含重链框架序列，其包含(或由以下组成)与选自以下组成的组的框架具有至少90％，或至少95％，或至少96％，或至少97％，或至少98％，或至少99％或100％的序列同一性的序列：
(a)具有序列SEQ ID NO:4的FR1、具有序列SEQ ID NO:5的FR2和具有序列SEQ IDNO:6的FR3，和具有序列SEQ ID NO:7的FR4、具有序列SEQ ID NO:14的FR2和具有序列SEQID NO:15的FR3；
(b)具有序列SEQ ID NO:30的FR1、具有序列SEQ ID NO:31的FR2和具有序列SEQID NO:32的FR3，和具有序列SEQ ID NO:33的FR4；
(c)具有序列SEQ ID NO:48的FR1、具有序列SEQ ID NO:49的FR2和具有序列SEQID NO:50的FR3，和具有序列SEQ ID NO:7的FR4；
(d)具有序列SEQ ID NO:59的FR1、具有序列SEQ ID NO:60的FR2和具有序列SEQID NO:61的FR3，和具有序列SEQ ID NO:62的FR4；
(e)具有序列SEQ ID NO:76的FR1、具有序列SEQ ID NO:77的FR2和具有序列SEQID NO:86的FR3，和具有序列SEQ ID NO:7的FR4；
(f)具有序列SEQ ID NO:92的FR1、具有序列SEQ ID NO:93的FR2和具有序列SEQID NO:94的FR3，和具有序列SEQ ID NO:62的FR4；
(g)具有序列SEQ ID NO:118的FR1、具有序列SEQ ID NO:119的FR2和具有序列SEQID NO:120的FR3，和具有序列SEQ ID NO:7的FR4；
(h)具有序列SEQ ID NO:129的FR1、具有序列SEQ ID NO:119的FR2和具有序列SEQID NO:120的FR3，和具有序列SEQ ID NO:7的FR4；
(i)具有序列SEQ ID NO:129的FR1、具有序列SEQ ID NO:119的FR2和具有序列SEQID NO:120的FR3，和具有序列SEQ ID NO:132的FR4；
(j)具有序列SEQ ID NO:103的FR1、具有序列SEQ ID NO:104的FR2和具有序列SEQID NO:105的FR3；和
(k)表1中列出的FR。
在一些实例中，如本文所述的抗体可包含(或由以下组成)轻链框架序列，其与选自以下组成的组的框架包含至少90％，或至少95％，或至少96％，或至少97％，或至少98％，或至少99％或100％的序列同一性：
(a)具有序列SEQ ID NO:21的FR1、具有序列SEQ ID NO:22的FR2和具有序列SEQID NO:23的FR3，和具有序列SEQ ID NO:24的FR4；
(b)具有序列SEQ ID NO:39的FR1、具有序列SEQ ID NO:40的FR2和具有序列SEQID NO:41的FR3，和具有序列SEQ ID NO:42的FR4；
(c)具有序列SEQ ID NO:53的FR1、具有序列SEQ ID NO:22的FR2和具有序列SEQID NO:23的FR3，和具有序列SEQ ID NO:24的FR4；
(d)具有序列SEQ ID NO:68的FR1、具有序列SEQ ID NO:69的FR2和具有序列SEQID NO:41的FR3，和具有序列SEQ ID NO:70的FR4；
(e)具有序列SEQ ID NO:84的FR1、具有序列SEQ ID NO:85的FR2和具有序列SEQID NO:86的FR3，和具有序列SEQ ID NO:42的FR4；
(f)具有序列SEQ ID NO:97的FR1、具有序列SEQ ID NO:69的FR2和具有序列SEQID NO:41的FR3，和具有序列SEQ ID NO:70的FR4；和
(g)具有序列SEQ ID NO:124的FR1、具有序列SEQ ID NO:125的FR2和具有序列SEQID NO:126的FR3，(和任选地，具有序列SEQ ID NO:42的FR4)；和
(h)表1中列出的FR。
在一些实例中，如本文所述的抗体结合受体酪氨酸激酶RON(Recepteur d′Origine Nantais(RON)，或巨噬细胞刺激蛋白受体(MSP R，或MST1-R))。
在一些实例中，如本文所述的抗体特异性结合人和/或小鼠RON。
在一些实例中，如本文所述的抗体结合细胞表面表达的RON。
在一些实例中，如本文所述的抗体能够被靶细胞内吞(或被靶细胞内吞)。当抗体分子与有效荷载缀合时，这可能是特别有利的，因为有效荷载可以被递送到细胞中(而不仅仅是细胞的外部)。因此，设想使用由癌细胞内的酶活化的有效荷载。
在一些实例中，如本文所述的抗体可以是单克隆抗体。
在一些实例中，如本文所述的抗体可以是嵌合抗体和/或多特异性抗体。
在一些实例中，如本文所述的抗体可以是人源化抗体。
在一些实例中，如本文所述的抗体可以是片段，例如但不限于Fab片段、Fab′片段、F(ab′)2片段、Fv片段、双抗体(diabody)、单链抗体分子等。
在一些实例中，如本文所述的抗体可以是IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体或IgG4抗体。
在一些实例中，可将如本文所述的抗体转移至人IgG骨架。
在一些实例中，如本文所述的抗体可以与选自由治疗剂、免疫粘附分子和检测标记(例如成像标记)组成的组的化学部分缀合。
在一些实例中，检测标记可包括但不限于放射性标记、酶、荧光标记、发光标记、生物发光标记、磁性标记、生物素等。
在一些实例中，治疗剂可以是抗癌治疗。
在一些实例中，提供了包含如本文所述的抗体或其片段的药物组合物。
在一些实例中，其中药物组合物可进一步包含药学上可接受的载体、赋形剂和/或稳定剂。
在一些实例中，提供了试剂盒，其包含如本文所述的RON特异性结合结构域、嵌合抗原受体、抗体或组合物。
在一些实例中，提供了分离的核酸，其包含选自由以下组成的组的任一种：
(g)编码如本文所述的抗体或其片段的核苷酸序列；
(h)编码以下的核苷酸序列：
重链区，其具有表1中所述的一个重链区的至少80％、或至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％，或选自由以下组成的组的一个序列的至少80％、或至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％：SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:64、SEQ ID NO:80、SEQ ID NO:96、SEQ ID NO:122、SEQ ID NO:131、SEQ ID NO:134和SEQ ID NO:107；和/或
轻链区，其具有表1中所述的一个轻链区的至少80％、或至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％，或选自由以下组成的组的一个序列的至少80％、或至少90％、或至少95％、或至少96％、或至少97％、或至少98％、或至少99％、或100％：SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:44、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:99和SEQ ID NO:128。
(i)与(a)或(b)中的序列中的任一种互补的核酸；和
(j)能够在严格条件下与(a)、(b)或(c)杂交的核酸序列。
在一些实例中，提供了包含如本文所述的核酸的表达载体。
在一些实例中，提供了包含如本文所述的表达载体的宿主细胞。
在一些实例中，提供了产生包含免疫球蛋白重链可变区和/或免疫球蛋白轻链可变区的多肽的方法，所述方法包括：在条件下培养如本文所述的宿主细胞，使得宿主细胞表达包含免疫球蛋白重链可变区和/或免疫球蛋白重链可变区的多肽。
在一些实例中，产生如本文所述的多肽的方法还包括纯化包含免疫球蛋白重链可变区和/或免疫球蛋白轻链可变区的多肽的步骤。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或其片段，或如本文所述的药物组合物用于医学中。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或其片段至140，或如本文所述的药物组合物，用于治疗癌症。
在一些实例中，提供了治疗有此需要的受试者的癌症的方法，其包括向受试者施用如本文所述的分离的抗体或其片段。
在一些实例中，如本文所述的治疗癌症的方法还包括施用选自由抗癌剂(例如第二抗癌抗体)和化学治疗剂组成的组的治疗剂。
在一些实例中，治疗剂可以是抗癌剂，例如但不限于药物缀合物(例如mertansine或DM1(N2′-脱乙酰基-N2′-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素)。
在一些实例中，癌症可以是表达RON的癌症，例如但不限于结肠直肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、宫颈癌、肺癌、肾癌、膀胱癌、胃肠道肿瘤、肝癌、胰腺癌、胃癌、头颈癌等。
在一些实例中，分离的抗体或其片段可以以药学有效量施用。
在一些实例中，提供了检测受试者中肿瘤细胞的方法，其包括使用如本文所述的抗体检测从受试者获得的样品中RON的表达。
在一些实例中，肿瘤细胞可以是癌细胞。
在一些实例中，其中癌症是表达RON的癌症，例如但不限于结肠直肠癌、非小细胞肺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、宫颈癌、肺癌、肾癌、膀胱癌、胃肠道肿瘤、肝癌、胰腺癌、胃癌、头颈癌等。
RON被表达并且可能被许多癌症过表达，特别是许多上皮癌。
本公开的结合结构域可以靶向表面表达的RON。然而，本发明产生的数据表明，包含所述结合结构域的抗体分子通过涉及称为胞吞作用的主动转运的过程进入细胞(表达RON)。一旦进入细胞，抗体分子可定位于细胞质或细胞核中。这可能是非常有益的，因为与抗体分子缀合的毒素或生物分子可以内化到癌细胞中。因此，可以使全身毒性和脱靶效应最小化，例如通过使用仅在细胞内部活化的毒素。
特别地，其中结合结构域是抗体或其结合片段的一部分。本公开还延伸至包含结合结构域(或含有结合结构域的实体，例如抗体或结合片段)的药物组合物，编码结合结构域(或编码含有结合结构域的实体，诸如抗体或结合片段)的多核苷酸。在另一方面，提供了结合结构域或包含其的实体，或其中任一种的药物组合物，用于治疗，特别是癌症的治疗。在一个实例中，根据本公开的结合结构域与另外的治疗剂用于组合疗法中。诸如抗体及其结合片段的实体也可用作研究工具、试剂、诊断剂或其部分和/或预后剂或其部分。
如上所述，RON被表达并且可能被许多癌症过表达，特别是许多上皮癌。如从本公开的实验部分产生的图中所示，本公开的结合结构域可以靶向表面表达的RON。此外，由本发明产生的数据表明，包含所述结合结构域的抗体分子通过涉及称为胞吞作用的主动转运的过程进入细胞(表达RON)。一旦进入细胞，抗体分子可定位于细胞质或细胞核中。这可能是非常有益的，因为与抗体分子缀合的毒素或生物分子可以内化到癌细胞中。因此，可以使全身毒性和脱靶效应最小化，例如通过使用仅在细胞内部活化的毒素。
本公开的结合结构域(和抗体分子)对人RON具有特异性。然而，它们也识别至少一种非人RON蛋白(即与其交叉反应)，例如鼠RON。因此，抗体与小鼠和人蛋白质交叉反应。这是非常有用的意外特性，因为它允许在小鼠治疗模块中容易地临床前分析对正常组织和器官的潜在毒性，从而允许确定治疗指数。因此，交叉反应性是有益的，因为它允许进行初步毒理学和体内分析以在施用于人之前评估分子的安全性。
因此，在另一方面，提供一种抗原特异性结合结构域，其包含(或由以下组成)CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中：
(a)CDRH1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:45、SEQID NO:56、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:135和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的CDRH1；
(b)CDRH2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:46、SEQID NO:57、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:136和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的CDRH2；
(c)CDRH3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:47、SEQID NO:58、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:137和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的CDRH3；
(d)CDRL1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:65、SEQID NO:81、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:144和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的CDRL1；
(e)CDRL2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:66、SEQID NO:82、SEQ ID NO:109和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的CDRL2；和
(f)CDRL3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:67、SEQID NO:83、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:145和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的CDRL3。
在一些实例中，CDRH1是SEQ ID NO:1，CRDH2是SEQ ID NO:2，并且CDRH3是SEQ IDNO:3或抗原特异性结合结构域，其中使用一个或多个被修饰序列1、2和3，并且该修饰独立地选自1或2个氨基酸的替换、缺失或添加。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有重链CDR，其包括：
(a)CDRH1是SEQ ID NO:1，CRDH2是SEQ ID NO:2，CRDH3是SEQ ID NO:3；或
(b)CDRH1是SEQ ID NO:27，CRDH2是SEQ ID NO:28，CRDH3是SEQ ID NO:29；或
(c)CDRH1是SEQ ID NO:45，CRDH2是SEQ ID NO:46，CRDH3是SEQ ID NO:47；或
(d)CDRH1是SEQ ID NO:56，CRDH2是SEQ ID NO:57，CRDH3是SEQ ID NO:58；或
(e)CDRH1是SEQ ID NO:73，CRDH2是SEQ ID NO:74，CRDH3是SEQ ID NO:75；或
(f)CDRH1是SEQ ID NO:89，CRDH2是SEQ ID NO:90，CRDH3是SEQ ID NO:91；或
(g)CDRH1是SEQ ID NO:100，CRDH2是SEQ ID NO:101，CRDH3是SEQ ID NO:102；或
(h)CDRH1是SEQ ID NO:135，CRDH2是SEQ ID NO:136，CRDH3是SEQ ID NO:137。
在一些实例中，抗原特异性结合结构域可具有轻链CDR，其包括：
(a)CDRL1是SEQ ID NO:18，CRDL2是SEQ ID NO:19，CRDL3是SEQ ID NO:20；
(b)CDRL1是SEQ ID NO:36，CRDL2是SEQ ID NO:37，CRDL3是SEQ ID NO:38；
(c)CDRL1是SEQ ID NO:18，CRDL2是SEQ ID NO:19，CRDL3是SEQ ID NO:20；
(d)CDRL1是SEQ ID NO:65，CRDL2是SEQ ID NO:66，CRDL3是SEQ ID NO:67；
(e)CDRL1是SEQ ID NO:81，CRDL2是SEQ ID NO:82，CRDL3是SEQ ID NO:83；
(f)CDRL1是SEQ ID NO:108，CRDL2是SEQ ID NO:109，CRDL3是SEQ ID NO:110；和
(g)CDRL1是SEQ ID NO:144，CRDL2是SEQ ID NO:37，CRDL3是SEQ ID NO:145。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有可变重结构域，例如：
(i)SEQ ID NO:8；
(ii)SEQ ID NO:34；
(iii)SEQ ID NO:51；
(iv)SEQ ID NO:63；
(v)SEQ ID NO:79；
(vi)SEQ ID NO:95；
(vii)SEQ ID NO:106；和
(viii)SEQ ID NO:142。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有可变轻结构域，例如：
(i)SEQ ID NO:25；
(ii)SEQ ID NO:43；
(iii)SEQ ID NO:54；
(iv)SEQ ID NO:71；
(v)SEQ ID NO:87；
(vi)SEQ ID NO:98；
(vii)SEQ ID NO:114；和
(viii)SEQ ID NO:150。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有CDRH1，其为SEQ IDNO:1或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有CDRH2，其为SEQ IDNO:2或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有CDRH3，其为SEQ IDNO:3或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有CDRL1，其为SEQ IDNO:18或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有CDRL2，其为SEQ IDNO:19或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有CDRL3，其为SEQ IDNO:20或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有可变重结构域，其具有如SEQ ID NO:8所示的序列，或衍生自SEQ ID NO:8的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:8具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:8的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可包括可变轻结构域，其具有如SEQ ID NO:25所示的序列；衍生自SEQ ID NO:25的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:25具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:25的衍生物；
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有CDRH1，其为SEQ IDNO:27或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有CDRH2，其为SEQ IDNO:28或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有CDRH3，其为SEQ IDNO:29或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有CDRL1，其为SEQ IDNO:36或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有CDRL2，其为SEQ IDNO:37或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有CDRL3，其为SEQ IDNO:38或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域可具有重链可变结构域，其具有如SEQ ID NO:34所示的序列；或衍生自SEQ ID NO:34的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:34具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:34的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中轻链可变结构域具有如SEQ ID NO:43所示的序列；衍生自SEQ ID NO:43的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:43具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:43的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH1为SEQ ID NO:45或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH2为SEQ ID NO:46或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH3为SEQ ID NO:47或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL1为SEQ ID NO:18或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL2为SEQ ID NO:19或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL3为SEQ ID NO:20或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中重链可变结构域具有如SEQ ID NO:51所示的序列；衍生自SEQ ID NO:51的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:51具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:51的衍生物。
在一些实例中，如本文所述抗原特异性结合结构域，其中轻链可变结构域具有如SEQ ID NO:54所示的序列；或衍生自SEQ ID NO:54的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:54具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:54的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH1为SEQ ID NO:56或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH2为SEQ ID NO:57或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH3为SEQ ID NO:58或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL1为SEQ ID NO:65或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL2为SEQ ID NO:66或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL3为SEQ ID NO:67或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中重链可变结构域具有如SEQ ID NO:63所示的序列；或衍生自SEQ ID NO:63的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:63具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:63的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中轻链可变结构域具有如SEQ ID NO:71所示的序列；衍生自SEQ ID NO:71的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:71具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:71的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH1为SEQ ID NO:73或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH2为SEQ ID NO:74或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH3为SEQ ID NO:75或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL1为SEQ ID NO:81或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL2为SEQ ID NO:82或与其不同之处在于1或2个氨基酸地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL3为SEQ ID NO:83或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中重链可变结构域具有如SEQ ID NO:79示的序列；衍生自SEQ ID NO:79的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:79具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:79的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中轻链可变结构域具有如SEQ ID NO:87所示的序列；衍生自SEQ ID NO:87的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:87具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:87的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH1为SEQ ID NO:89或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH2为SEQ ID NO:90或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH3为SEQ ID NO:91或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL1为SEQ ID NO:65或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL2为SEQ ID NO:66或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL3为SEQ ID NO:67或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中重链可变结构域具有如SEQ ID NO:95所示的序列；衍生自SEQ ID NO:95的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:95具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:95的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中轻链可变结构域具有如SEQ ID NO:98所示的序列；衍生自SEQ ID NO:98的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:98具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:98的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH1为SEQ ID NO:100或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH2为SEQ ID NO:101或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH3为SEQ ID NO:102或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL1为SEQ ID NO:108或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL2为SEQ ID NO:109或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL3为SEQ ID NO:110或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中重链可变结构域具有如SEQ ID NO:106所示的序列；衍生自SEQ ID NO:106的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:106具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:106的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中轻链可变结构域具有如SEQ ID NO:114所示的序列；衍生自SEQ ID NO:114的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:114具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:114的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH1为SEQ ID NO:116或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH2为SEQ ID NO:117或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH3为SEQ ID NO:102或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL1为SEQ ID NO:108或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL2为SEQ ID NO:109或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL3为SEQ ID NO:123或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中重链可变结构域具有如SEQ ID NO:121所示的序列；衍生自SEQ ID NO:121的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:121具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:121的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中轻链可变结构域具有如SEQ ID NO:127所示的序列；衍生自SEQ ID NO:127的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:127具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:127的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH1为SEQ ID NO:116或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH2为SEQ ID NO:117或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH3为SEQ ID NO:102或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中重链可变结构域具有如SEQ ID NO:130所示的序列；或衍生自SEQ ID NO:130的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:130具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:130的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH1为SEQ ID NO:116或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH2为SEQ ID NO:101或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH3为SEQ ID NO:102或与其不同之处在于1或2个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中重链可变结构域具有如SEQ ID NO:133所示的序列；衍生自SEQ ID NO:133的序列，其中1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸独立地被替换(用替代性氨基酸)、缺失或添加，或在本公开的一个独立方面，提供了与SEQ ID NO:133具有至少95％的同一性的SEQ ID NO:133的衍生物。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH1是SEQ ID NO:135。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH2是SEQ ID NO:136。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH3是SEQ ID NO:137。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中重链可变结构域具有SEQ ID NO:142中所示的序列。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL1是SEQ ID NO:144。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL2是SEQ ID NO:37。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRL3是SEQ ID NO:145。
在一些实例中，如本文所述的抗原特异性结合结构域，其中重链可变结构域具有SEQ ID NO:150中所示的序列。
在另一个方面，提供了嵌合抗原受体，其包含如本文所述的结合结构域。
在一些实例中，如本文所述的嵌合抗原受体，其中嵌合抗原受体在细胞表面上表达。在一些实例中，如本文所述的嵌合抗原受体，其中细胞包括T细胞(例如细胞毒性T细胞)、NK细胞和NKT细胞。在一些实例中，如本文所述的嵌合抗原受体，其包含细胞内信号传导结构域。在一些实例中，如本文所述的嵌合抗原受体，其中细胞内信号传导结构域来自CD3-ζ，例如在WO2013/040557中所描述的，其通过引用并入本文。
在一些实例中，如本文所述的嵌合抗原受体还包含共刺激物结构域。在一些实例中，如本文所述的嵌合抗原受体，其中所述共刺激物结构域独立地选自由CD28、4-1BB或OX40及其组合组成的组，例如CD28和4-1BB或CD28和OX40。
在另一个方面，提供了分离的抗体或抗体，其包含如本文所述的结合结构域。在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中所述抗体可包括但不限于多特异性抗体(例如双特异性抗体)、全长抗体或抗体结合片段。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中多特异性抗体是双特异性抗体。在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中多特异性抗体是双特异性T细胞衔接器
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中多特异性抗体包含两个不同的RON结合结构域。在一些实例中，如本文所述的抗体，其中两个不同的RON结合结构域对不同的表位是特异性的。
在一些实例中，如图48A、图48B和表1中所述，如本文所述的分离的抗体或抗体能够结合(或结合)RON内的表位。在一些实例中，如本文所述的抗体能够结合(或结合)RON内的表位，所述RON具有包括但不限于SEQ ID NO:10、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO:12、SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:15和SEQ ID NO:16的序列。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中第一RON结合结构域包含分别如SEQ ID NO:1、2、3中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和分别如SEQ ID NO:18、19和20中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3(特别是在SEQ ID NO:8和25中所示的可变区中，或与所述序列具有至少95％的同一性的VH和/或VL结构域的变体中使用)。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体包含第二RON结合结构域，其包含分别如SEQ ID NO:27、28、29中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和分别如SEQ ID NO:36、37和38中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3(特别是在SEQ ID NO:34和43中所示的可变区中，或与其具有至少95％的同一性的VH和/或VL的变体中使用)。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中抗体结合片段可包括但不限于Fab、修饰的Fab、Fab′、修饰的Fab′、F(ab’)2、Fv、ds-FV、Fab-Fv、Fab-dsFv、单结构域抗体(例如VH或VL或VHH)、scFv和ds-scFv。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中抗体分子包含效应子功能。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中效应子功能由抗体恒定区(例如Fc区)提供。在一些实例中，如本文所述的抗体分子，其中效应子功能由抗体恒定区或其活性片段提供，例如全长IgG同种型，例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4(特别是IgG1或IgG4)。
在一些实例中，如本文所述的分离的抗体或抗体，其中抗体与有效荷载缀合。在一些实例中，如本文所述的抗体，其中有效荷载包括但不限于毒素、聚合物(例如合成聚合物或天然存在的聚合物)、生物活性蛋白质(例如酶、其他抗体或抗体片段)、核酸及其片段(例如DNA、RNA及其片段)、放射性核素(特别是放射性碘、放射性同位素)螯合金属、纳米颗粒和报道基团，例如荧光或发光标记或可通过NMR或ESR光谱检测的化合物。
在一些实例中，其中毒素选自澳瑞他汀(例如MMAE(单甲基澳瑞他汀E-CAS号：474645-27-7)、MMAF(单甲基澳瑞他汀F-CAS号：745017-94-1))、吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、多柔比星(CAS号：23214-92-8)、多卡米新、美登木素生物碱(例如N2′-脱乙酰基-N2′-(3-巯基-1-氧代丙基)-美登素(DM1；CAS号：139504-50-0)、N2′-脱乙酰基-N2′-(4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(DM3)和N2′-脱乙酰基-N2’(4-甲基-4-巯基-1-氧代戊基)-美登素(DM4；CAS号：796073-69-3))、calocheamicin(CAS号：108212-75-5)、多拉司他汀、美登素(CAS号：35846-53-8)、α-鹅膏蕈碱(CAS号：23109-05-9)和微管溶素(CAS号：205304-86-5)。在一些实例中，毒素可包括但不限于，其中毒素选自由以下组成的组：澳瑞他汀、MMAF(单甲基澳瑞他汀F)、吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、多柔比星、多卡米新、美登木素生物碱、calocheamicin、多拉司他汀、美登素、α-鹅膏蕈碱和微管溶素。
在另一个方面，提供了药物组合物，其包含如本文所述的抗体和赋形剂、稀释剂和/或载体。
在一些实例中，如本文所述的药物组合物包含至少两种以混合物形式的单克隆抗体，例如本文所述的两种抗原特异性抗体。
在一些实例中，药物组合物包含所述至少两种抗原特异性抗体中的一种，其包含分别如SEQ ID NO:1、2、3中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和如SEQ ID NO:18、19和20中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3；任选地，其中所述至少两种抗体的第二抗体包含分别如SEQ IDNO:27、28、29中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和如SEQ ID NO:36、37和38中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3。在一些实例中，药物组合物包含所述至少两种抗原特异性抗体中的一种，其包含分别如SEQ ID NO:27、28、29中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和如SEQ ID NO:36、37和38中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3；任选地，其中所述至少两种抗体的第二抗体包含分别如SEQ ID NO:1、2、3中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和如SEQ ID NO:18、19和20中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3。
在一些实例中，如本文所述的药物组合物，其中所述至少一种抗原特异性抗体包含分别如SEQ ID NO:1、2、3中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和分别如SEQ ID NO:18、19和20中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3(特别是在SEQ ID NO:8和25中所示的可变区中，或与其具有至少95％的同一性的VH和/或VL的变体中使用)。
在一些实例中，如本文所述的药物组合物，其中所述至少一种抗原包含第二RON结合结构域，其包含分别如SEQ ID NO:27、28、29中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和如SEQ IDNO:36、37和38中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3(特别是在SEQ ID NO:34和43中所示的可变区中，或与其具有至少95％的同一性的VH和/或VL的变体中使用)。
在一些实例中，如本文所述的药物组合物，其中所述制剂是肠胃外的。
在另一个方面，提供如本文所述的RON结合结构域，或如本文所述的嵌合抗原受体，或如本文所述的组合物，或如本文所述的抗体，或如本文所述的药物组合物，用于治疗(或疗法)中。
在另一个方面，提供了如本文所述的RON结合结构域，用于治疗(或疗法)中。
在另一个方面，提供了如本文所述的嵌合抗原受体或如本文所述的药物组合物，用于治疗(或疗法)中。
在另一个方面，提供了如本文所述的抗体分子或如本文所述的组合物，用于治疗(或疗法)中。
在另一个方面，提供了如本文所述的抗原结合结构域、或如本文所述的嵌合抗原受体、或如本文所述的抗体、或如本文所述的药物组合物在制造用于治疗癌症或纤维化(特别是癌症中)的药物中的用途。在一些实例中，癌症是RON阳性癌症。
在另一个方面，提供了如本文所述的抗原结合结构域在制造用于治疗癌症或纤维化(特别是癌症)的药物中的用途。
在另一个方面，提供了如本文所述的嵌合抗原受体或如本文所述的药物组合物在制造用于治疗癌症或纤维化(特别是癌症)的药物中的用途。
在另一个方面，提供了如本文所述的抗体或如本文所述的组合物在制造用于治疗肿瘤、癌症或纤维化(特别是癌症，例如实体癌块和/或转移性癌症)的药物中的用途。在一些实例中，癌症是表达RON的癌症。
在另一个方面，提供了预防或治疗患者的癌症或纤维化的方法，其包括对有需要的患者施用治疗有效量的如本文所述的抗原结合结构域，或如本文所述的嵌合抗原受体，或如本文所述的抗体，或如本文所述的药物组合物。
在一些实例中，患者是患者群体(或形成其一部分)，其特征在于构成所述群体的患者具有RON阳性肿瘤。在一些实例中，构成所述群体的患者具有RON阳性和C-MET阳性肿瘤。
在一些实例中，如本文所述的方法包括在治疗前鉴定所述患者具有RON阳性肿瘤的步骤。
在又一个实例中，提供了治疗患者的癌症或纤维化的方法，其包括施用治疗量的如本文所述的RON结合结构域，或如本文所述的嵌合抗原受体，或如本文所述的组合物，或如本文所述的抗体，或如本文所述的药物组合物。
在又一个实例中，提供了治疗患者的癌症或纤维化的方法，其包括施用治疗量的如本文所述的RON结合结构域。
在又一个实例中，提供了治疗患者的癌症或纤维化的方法，其包括施用治疗量的如本文所述的嵌合抗原受体或如本文所述的组合物。
在又一个实例中，提供了治疗患者的癌症或纤维化的方法，其包括施用治疗量的如本文所述的抗体或如本文所述的组合物。
在又一个实例中，提供了用如本文所述的RON结合结构域，或如本文所述的嵌合抗原受体，或如本文所述的组合物，或如本文所述的抗体治疗患者群体的方法，其中所述群体的特征在于构成所述群体的患者具有RON阳性肿瘤。在一些实例中，构成所述群体的患者具有RON阳性和C-MET阳性肿瘤。
在又一个实例中，提供了用如本文所述的嵌合抗原受体，如本文所述的包含其的组合物，如本文所述的抗体分子或如本文所述的包含其的组合物治疗患者群体的方法，其中所述群体的特征在于构成所述群体的患者具有RON阳性肿瘤。
在又一个实例中，提供了治疗如本文所述的患者群体的方法，其中构成所述群体的患者具有RON阳性和MET阳性肿瘤。
在又一个实例中，提供了治疗如本文所述的患者群体的方法，其包括在施用根据本公开的治疗之前在群体中鉴定患者的步骤。
在又一个实例中，提供了如本文所述的组合物或如本文所述的抗体用作诊断剂或预后剂的用途。在另一个方面，提供了如本文所述的抗体分子或如本文所述的组合物用作诊断剂或预后剂的用途，例如其中抗体分子与在体内可视化的成像剂缀合。
在一些实例中，提供了通过施用治疗有效量的根据本公开的结合结构域(特别是如本文公开的抗体分子)来下调患者中RON表达的方法。
在另一个方面，提供了与包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:51、SEQ IDNO:63、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:130或SEQ ID NO:132的VH的抗体交叉阻断或结合相同表位的抗体。
在另一个方面，提供了与包含VH/VL对的抗体交叉阻断或结合相同表位的抗体，所述VH/VL对选自SEQ ID NO:8和25、SEQ ID NO:34和43、SEQ ID NO:51和54、SEQ ID NO:63和71、SEQ ID NO:79和87、SEQ ID NO:95和98、SEQ ID NO:106和114、或SEQ ID NO:121和130。
在一些实例中，如本文所述的抗体交叉阻断或结合如图48A、图48B或表1中所定义的表位。
在另一个方面，提供了评估癌症状态的离体方法，其中所述方法包括：a)扫描已知包括所述癌症的肿瘤的患者或所述患者的特定部位，其中所述患者在第一时间点已被施用标记形式的抗体，其中所述抗体如本文中所定义，b)在一个或多个其他时间点重复a)，和比较来自两个或更多个时间点的结果以评估所述癌症的状态。
在又一个实例中，提供了使用如本文所定义的抗体分子监测癌症患者的方法，其中所述方法包括以下步骤：在第一时间点使用标记形式的抗体分子进入癌症，特别是肿瘤，在至少第二时间点使用标记形式的抗体分子进入癌症，特别是肿瘤，并比较来自两个或更多个时间点的结果以评估癌症的状态。在一些实例中，在监测如本文所述的癌症患者的方法中，肿瘤在第一时间点和随后时间点之间的RON表达降低与改善的预后相关。
在一个实例中，由本公开的抗体结合的表位结合构象表位。
在一个实例中，由本公开的抗体结合的表位结合线性表位。
在一个实例中，提供了一种抗体，其特异性结合肽序列中的至少5个氨基酸，例如6、7、8、9、10、11、12、13、14或15个氨基酸。
在一些实例中，由如本文所述的抗体或抗原结合结构域结合(识别)的表位包括如图48A、图48B和表1中所述的肽。
在一个实例中，提供了包含SEQ ID NO:8或与其至少95％相同的序列、和SEQ IDNO:25或与其至少95％相同的序列的结合结构域。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:34或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:43或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:51或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:54或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:63或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:71或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:79或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:97或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:95或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:98或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:106或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:114或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:121或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:130或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:8或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:43或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:8或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:54或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:8或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:71或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:8或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:87或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:8或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:98或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:8或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:114或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:8或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:127或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:34或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:71或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:34或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:87或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:34或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:98或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:34或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:114或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:34或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:127或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:51或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:70或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:51或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:86或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:51或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:102或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:51或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:118或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:62或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:54或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:62或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:86或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:62或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:102或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:62或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:118或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:78或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:54或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:78或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:70或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:78或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:102或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:78或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:118或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:96或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:54或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:96或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:70或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:96或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:86或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:96或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:118或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:110或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:54或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:110或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:70或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:110或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:86或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，本公开的结合结构域包含SEQ ID NO:110或与其至少95％相同的序列、和SEQ ID NO:102或与其至少95％相同的序列。
在一个实例中，根据本公开的结合结构域，例如抗体分子，其是人源化的。
在一个实例中，提供了编码根据本公开的结合结构域、嵌合受体或抗体分子的多核苷酸(例如DNA)，例如其中重链和轻链被编码在相同的多核苷酸(例如DNA)分子中或在不同的多核苷酸(例如DNA)分子上。
在一个实例中，提供了包含根据本公开的多核苷酸(例如DNA)的载体。
包含根据本公开的多核苷酸(例如DNA)或如本文定义的载体的细胞，例如哺乳动物细胞。在一个实例中，细胞是宿主细胞，仅被设计用于表达编码的蛋白质，例如CHO、HEK、PerC6、大肠杆菌或类似细胞。在一个实例中，细胞是治疗性哺乳动物细胞，其被工程化以表达根据本公开的结合结构域，例如T细胞(例如细胞毒性T细胞)、NK细胞或NKT细胞。
在一个实例中，提供了哺乳动物淋巴细胞(特别是NKT细胞或T细胞)，例如具有工程化T细胞受体的细胞毒性T细胞，其中所述受体包含来自本文公开的抗体的6个CDR。
因此，在一个实例中，提供了治疗人类癌症的方法，其包括施用结合RON蛋白质的单克隆抗体；具有列出的CDR序列的抗体。
在一个实例中，提供了根据本公开的细胞，其用于治疗，特别是用于治疗癌症。
在一个实例中，本公开的结合结构域例如抗体分子下调肿瘤细胞上的RON表达。这可以例如使癌症对癌症治疗更易感或更敏感，例如使患者对化学疗法敏感。
因此，在一个独立方面，提供了改变癌症患者预后的方法，其包括通过施用根据本公开的抗体分子治疗将患者从RON阳性患者群体转变为RON阴性患者群体。
有利地，本公开的抗体分子的脱靶效应似乎是最小的，这是因为RON在非癌细胞中具有有限的表达，同时在癌组织中被高度过表达。
在一个实例中，抗体分子是RON抑制剂(拮抗剂)。如本文使用的RON抑制剂是指降低或消除或阻断RON受体酪氨酸激酶(也称为MST1R)的相关生物学活性、特别是抑制人蛋白质的实体，例如抗体或结合片段。抑制剂对癌细胞的作用可包括以下一种或多种：抑制癌细胞增殖、抑制癌细胞迁移、降低RON的表达(其可导致改善的治疗应答和更好的预后)。
在一个实例中，抑制剂降低相关的生物活性，例如降低5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％，例如在相关的体外测定中测量时。
在一个实例中，根据本公开的抑制剂是直接抑制剂。直接抑制是抑制剂直接结合或物理阻断结合相互作用以抑制生物活性。
如本文所用的抗体分子是指具有全长重链和轻链的完整抗体分子或其片段(其可以是但不限于Fab、修饰的Fab、Fab’、修饰的Fab’、F(ab’)2、Fv、Fab-Fv、Fab-dsFv、单结构域抗体(例如VH或VL或VHH)、scFv和多特异性抗体形式，例如包含根据本公开的结合结构域(包括作为全长抗体的一部分或抗体片段)，例如二价、三价或四价抗体、双-scFv、双抗体、三链抗体(triabodies)、四链抗体(tetrabodies)和上述任何一种的表位结合片段。
在本文具体提及的抗体的上下文中，技术人员将清楚，本公开包括使用来自以任何抗体或片段形式(包括多特异性抗体)的所述抗体的可变结构域，特别是成对使用。在一个实例中，使用来自本文公开的抗体的6个CDR与替代框架(例如人框架)的组合。
如本文使用的抗体是指具有全长重链和轻链的完整抗体，或至少包含完整抗体的多价抗体，其可以包含多种特异性(例如双特异性的)或可以是单特异性的(参见例如WO92/22853和WO05/113605)。双特异性和多特异性抗体变体尤其与一个实例中本公开的治疗分子的作用相关，因为治疗目的是抑制两种独立的靶蛋白，即RON受体酪氨酸激酶和例如第二治疗靶标，例如在PD-1通路中(特别是PD-1或PD-L1)的蛋白质。
在一个实例中，本公开的抗体分子是多价的。
如本文所用的多价是指抗体分子，其不止一次地结合给定靶标(包括相同靶标)。多价抗体分子可以交联靶标，并且例如诱导补体途径等。
在一个实例中，本公开的抗体分子是单价的。如本文所用的单价是指经过设计或工程化以仅结合靶标一次的抗体分子。
在一个实例中，根据本公开的抗体分子是嵌合的。
在一个实例中，根据本公开的抗体分子、特别是其中的结合结构域是人源化的。
在一个实例中，根据本公开的抗体分子是单克隆的。
如本文所用的“多特异性分子”是指具有特异性结合至少两种不同抗原(例如不同抗原)的能力的分子。在一个实例中，多特异性分子是双特异性、三特异性或四特异性分子，特别是双特异性或三特异性分子。多价抗体可以包含多种特异性，例如双特异性，或可以是单特异性的(参见例如WO92/22853和WO05/113605)。
如本文所用的“抗体片段”是指抗体结合片段，包括但不限于Fab、修饰的Fab、Fab′、修饰的Fab′、F(ab’)2、Fv、单结构域抗体、scFv、Fv、二价抗体、三价抗体或四价抗体、双-scFv、双抗体、三链抗体、四链抗体和上述任何一项的表位结合片段(参见例如Holliger和Hudson,2005,Nature Biotech.23(9):1126-1136；Adair和Lawson,2005,Drug DesignReviews-Online 2(3),209-217)。
如本文所用的“表位”是指能够被特异性抗体结合的大分子的一部分或多个部分，其在本公开中是多肽的一部分，特别是RON的一部分。表位通常由化学活性表面基团组成，并具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。
术语“交叉阻断(cross-block)”、“交叉阻断(cross-blocked)”和“交叉阻断(cross-blocking)”在本文中可互换使用，意指氨基酸序列或其他结合剂(例如如本文所述的抗原结合结构域)干扰如本文所述的其他氨基酸序列或抗原结合结构域与给定靶标(例如本文所定义的表位)的结合的能力。使用本领域已知的竞争结合测定法，可以确定本文所述的氨基酸序列或抗原结合结构域能够干扰另一种与靶表位的结合的程度，并因此可以确定这是否可以被说成是根据本公开的交叉阻断。
一种特别合适的定量测定法使用Biacore机器，其可以使用表面等离子体共振技术测量相互作用的程度。另一种合适的定量交叉阻断测定法使用基于ELISA的方法来测量本文所述的氨基酸序列或抗原结合结构域在结合靶表位方面的竞争。
以下一般描述了用于确定如本文所述的氨基酸序列或抗原结合结构域是否交叉阻断或是否能够交叉阻断的合适的Biacore测定法。应理解，该测定可与本文所述的任何氨基酸序列或抗原结合结构域一起使用。Biacore机器(例如Biacore 3000)按照制造商的建议操作。因此，在一种交叉阻断测定中，使用标准胺偶联化学将靶蛋白偶联至CM5Biacore芯片以产生用靶标涂覆的表面。典型地，靶标的200-800个共振单位将与芯片偶联(该量提供易于测量的结合水平，但是可容易地由所使用的测试试剂的浓度饱和)。将待评估其彼此交叉阻断的能力的两个测试氨基酸序列(称为A*和B*)在合适的缓冲液中以一比一摩尔比的结合位点混合以产生测试混合物。当基于结合位点计算浓度时，氨基酸序列的分子量假定为氨基酸序列的总分子量除以该氨基酸序列上的靶结合位点的数目。测试混合物中每种氨基酸序列的浓度应足够高，以便容易地使针对Biacore芯片上捕获的靶分子上的氨基酸序列的结合位点饱和。混合物中的氨基酸序列具有相同的摩尔浓度(基于结合)，并且该浓度典型地在1.00和1.5微摩尔之间(基于结合位点)。还制备仅含有A*和仅含有B*的单独溶液。这些溶液中的A*和B*应当像测试混合物中那样处于相同缓冲液中并且浓度相同。使测试混合物通过用靶标涂覆的Biacore芯片并记录总结合量。然后处理芯片，从而除去结合的氨基酸序列而不损害芯片结合的靶标。典型地，这通过用30mM HCl处理芯片60秒来完成。然后将只有A*的溶液通过用靶标涂覆的表面并记录结合量。再次处理芯片以除去所有结合的氨基酸序列而不损害芯片结合的靶标。然后将只有B*的溶液通过用靶标涂覆的表面并记录结合量。接下来计算A*和B*的混合物的最大理论结合，它是当单独通过靶标表面时每个氨基酸序列的结合的总和。如果混合物的实际记录结合小于该理论最大值，则两个氨基酸序列彼此交叉阻断。因此，通常，如本文所述的交叉阻断氨基酸序列或抗原结合结构域是在上述Biacore交叉阻断测定中将与靶标结合的结构域，使得在测定期间和存在如本文所述的第二氨基酸序列或抗原结合结构域时，记录的结合是最大理论结合的80％至0.1％(例如80％至4％)，具体地是最大理论结合的75％至0.1％(例如75％至4％)，并且更具体地是组合形式的如本文所述的两个氨基酸序列或抗原结合结构域的最大理论结合(如上所定义)的70％至0.1％(例如70％至4％)。以上描述的Biacore测定法是用于确定本文所述的氨基酸序列或抗原结合结构域是否根据本公开彼此交叉阻断的主要测定法。
以下一般性地描述了ELISA测定法，其用于确定针对靶标的本文所述的氨基酸序列或抗原结合结构域是否进行如本文所定义的交叉阻断或能够进行如本文所定义的交叉阻断。应理解，该测定可与本文所述的任何氨基酸序列(或如本文所述的抗原结合结构域)一起使用。该测定的一般原理是具有针对涂覆在ELISA平板的孔上的靶表位的氨基酸序列或抗原结合结构域。以溶液形式加入过量的第二种可能交叉阻断的抗靶标氨基酸序列(即不与ELISA平板结合)。然后将有限量的靶标加入到孔中。涂覆的氨基酸序列和溶液中的氨基酸序列竞争结合有限数目的靶分子。洗涤平板以除去未被涂覆的氨基酸序列结合的过量靶标，并除去第二溶液相氨基酸序列以及在第二溶液相氨基酸序列和靶标之间形成的任何复合物。然后使用适于检测靶标的试剂测量结合的靶标的量。能够交叉阻断涂覆的氨基酸序列的溶液形式的氨基酸序列将能够导致，相对于涂覆的氨基酸在不存在第二溶液相氨基酸序列的情况下可以结合的靶分子数量，涂覆的氨基酸序列可以结合的靶分子数量有所减少。在第一氨基酸序列(例如Ab-X)被选择作为固定的氨基酸序列的情况下，将其涂覆在ELISA平板的孔上，然后用合适的封闭溶液封闭平板，以最小化随后加入的试剂的非特异性结合。然后将过量的第二氨基酸序列，即Ab-Y加入到ELISA平板中，使得每孔的Ab-Y[靶标]结合位点的摩尔数比在ELISA平板涂覆期间每孔使用的Ab-X[靶标]结合位点的摩尔数高至少10倍，然后加入[靶标]，使得每孔加入的[靶标]的摩尔数比用于涂覆每个孔的Ab-X[靶标]结合位点的摩尔数低至少25倍。在合适的孵育期之后，洗涤ELISA平板并加入用于检测靶标的试剂以测量被涂覆的抗[靶标]氨基酸序列(在这种情况下为Ab-X)特异性结合的靶标的量。关于测定的背景信号被定义为在具有涂覆的氨基酸序列(在这种情况下为Ab-X)、第二溶液相氨基酸序列(在这种情况下为Ab-Y)、仅[靶标]缓冲液(即没有靶标)和靶标检测试剂的孔中获得的信号。关于测定的阳性对照信号被定义为在具有涂覆的氨基酸序列(在这种情况下为Ab-X)、仅第二溶液相氨基酸序列缓冲液(即，没有第二溶液相氨基酸序列)、靶标和靶标检测试剂的孔中获得的信号。可以进行ELISA测定，以使阳性对照信号为背景信号的至少6倍。为了避免因为选择哪个氨基酸序列用作涂覆氨基酸序列和选择哪个用作第二(竞争剂)氨基酸序列而引起的任何假象(例如Ab-X和Ab-Y之间对[靶标]的显著不同的亲和力)，可以两种形式进行交叉阻断测定：1)格式1是Ab-X是涂覆在ELISA平板上的氨基酸序列，Ab-Y是溶液形式的竞争剂氨基酸序列，和2)形式2是Ab-Y是涂覆在ELISA平板上的氨基酸序列，Ab-X是溶液形式的竞争剂氨基酸序列。如果在形式1或形式2中，与在不存在溶液相抗靶标氨基酸序列(即阳性对照孔)的情况下获得的靶标检测信号相比，溶液相抗靶标氨基酸序列能够引起靶标检测信号(即，被涂覆的氨基酸序列结合的靶标的量)降低60％至100％，特别是70％至100％，更具体地是80％至100％，则Ab-X和Ab-Y被定义为交叉阻断。
术语“交叉阻断”与“结合”形成对比，“结合”在本文中使用时是指化学结合在一起的一对物种(species)之间的选择性亲和力。在本发明的情况下，结合是指如本文所述的抗原结合结构域对表位的特异性识别。因此，这与“交叉阻断”形成对比，“交叉阻断”干扰如本文所述的抗原结合结构域与如本文所述的RON表位的结合。
用于本发明的其他抗体片段包括国际专利申请WO2005/003169、WO2005/003170和WO2005/003171中描述的Fab和Fab′片段。
如本文所用的“结合片段”是指能够以足够的特异性结合靶肽或抗原，以将该片段表征为对肽或抗原具有特异性的抗体片段。
如本文所用的特异性是指仅识别其特异性抗原的抗体分子，或与对其非特异性抗原的结合亲和力相比，对其特异性抗原具有显著更高的结合亲和力(例如5、6、7、8、9、10或更多倍的结合亲和力)的抗体分子。
如本文所用的术语“Fab片段”是指抗体片段，其包含包括VL(可变轻)结构域和轻链的恒定结构域(CL)的轻链片段，和重链的VH(可变重)结构域和第一恒定结构域(CH1)。
Fv是指两个可变结构域，例如协同可变结构域，例如同源成对或亲和力成熟的可变结构域，例如VH和VL对。
如本文所用的协同可变结构域是彼此互补和/或两者都有助于抗原结合以使Fv(VH/VL对)对所讨论的抗原具有特异性的可变结构域。
如本文所用的结合结构域是指两个协同可变区，例如各自包含3个CDR的VH和VL，其中结合结构域对特定(靶)抗原是特异性的。
在一个实例中，本公开的抗体分子具有高亲和力，例如500nM或更高的亲和力，例如400、300、200、150、125、115、114、113、112、111、110、109、108、107、106、105、104、103、102、101、100、99、98、97、96、95、94、93、92、91、90、89、88、87、86、85、84、83、82、81、80、79、78、77、76、75、74、73、72、71、70、69、68、67、66、65、64、63、62、61、60、59、58、57、56、55、54、53、52、51、50、49、48、47、46、45、44、43、42、41、40、39、38、37、36、35、34、33、32、31、30、29、28、27、26、25、24、23、22、21、20、19、18、17、16、15、14、13、12、11、10、9、8、7、6、5、4、3、2、1nM或更高的亲和力。
如本文所用的更高结合亲和力是指更低的数值亲和力值，例如1nM亲和力是比10nM亲和力更高的亲和力(也称为增加的亲和力)。
结合亲和力(亲和力)可以通过许多标准测定，例如表面等离子体共振，例如BIAcore来测量。
可以通过使用亲和力成熟方案来增加原始抗体的亲和力，所述亲和力成熟方案包括使CDR成熟(Yang等人J.Mol.Biol,254,392-403,1995)、链改组(Marks等人,Bio/Technology,10,779-783,1992)、使用大肠杆菌的增变株(Low等人,J.Mol.Biol,250,359-368,1996)、DNA改组(Patten等人,Curr.Opin.Biotechnol,8,724-733,1997)、噬菌体展示(Thompson等人,J.Mol.Biol,256,77-88,1996)和有性PCR(Crameri等人Nature,391,288-291,1998)。Vaughan等人(同上)讨论了这些亲和力成熟方法。在本文中使用的增加的亲和力在上下文中是指相比起始分子的改进。
在一个实例中，本公开的抗体分子包含与本文公开的序列至少95％相同的氨基酸序列。此实施例还延伸至本文公开的给定序列的96％、97％、98％或99％的序列。
用于产生和制造这些抗体和抗体片段的方法是本领域熟知的。可以使用本领域已知的任何合适的方法获得用于本公开的抗体。包括融合蛋白(例如多肽-Fc融合蛋白)的多肽/蛋白质、或以重组方式或天然方式表达多肽的细胞(如活化的T细胞)可用于例如免疫宿主并产生特异性识别靶多肽/蛋白质的抗体。多肽可以是全长多肽或其生物活性片段或衍生物。
多肽可以通过本领域熟知的方法从包含表达系统的基因工程化宿主细胞制备，或者它们可以从天然生物来源中回收。在本申请中，术语“多肽”包括肽、多肽和蛋白质。除非另有说明，否则它们可互换使用。在一些情况下，抗原多肽可以是较大蛋白质(例如融合至亲和标签的融合蛋白)的一部分。
通过使用众所周知的常规方案将多肽施用于动物，优选非人动物，可以获得针对抗原多肽产生的抗体，其中动物免疫是必要的，参见例如《实验免疫学手册(Handbook ofExperimental Immunology)》,D.M.Weir(ed.),第4卷,Blackwell ScientificPublishers,Oxford,England,1986。许多温血动物，如兔、小鼠、大鼠、绵羊、牛、骆驼或猪可以被免疫。然而，小鼠、兔、猪和大鼠通常是最合适的。
单克隆抗体可通过本领域已知的任何方法制备，例如杂交瘤技术(Kohler&Milstein,1975,Nature,256:495-497)、三元杂交瘤技术、人B细胞杂交瘤技术(Kozbor等人,1983,Immunology Today,4:72)和EBV-杂交瘤技术(Cole等人Monoclonal Antibodiesand Cancer Therapy,第77-96页,Alan R Liss,Inc.,1985)。
用于本公开的抗体还可以使用单一淋巴细胞抗体方法通过克隆和表达从被选择用于产生特异性抗体的单个淋巴细胞产生的免疫球蛋白可变区cDNA来产生，例如通过Babcook,J.等人1996,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93(15):7843-7848l；WO92/02551；WO2004/051268和WO2004/106377所描述的方法。
人源化抗体(其包括CDR移植的抗体)是具有来自非人物种的一个或多个互补决定区(CDR)和来自人免疫球蛋白分子的框架区的抗体分子(参见例如US5,585,089；WO91/09967)。应当理解，可能仅需要转移CDR的特异性决定残基而不是整个CDR(参见例如Kashmiri等人,2005,Methods,36,25-34)。人源化抗体可任选地进一步包含一个或多个框架残基，其衍生自CDR所源自的非人物种。
如本文所用，术语“人源化抗体分子”是指抗体分子，其中重链和/或轻链含有移植到受体抗体(例如人抗体)的重链和/或轻链可变区框架中的来自供体抗体(例如鼠单克隆抗体)的一个或多个CDR(如果需要，则包括一个或多个修饰的CDR)。关于综述，参见Vaughan等人,Nature Biotechnology,16,535-539,1998。在一个实例中，替代转移整个CDR，仅将来自上文所述的任何一个CDR的一个或多个特异性决定残基转移至人抗体框架(参见例如Kashmiri等人,2005,Methods,36,25-34)。在一个实例中，仅将来自上文所述的一个或多个CDR的特异性决定残基转移至人抗体框架。在另一个实例中，仅将来自上文所述的每个CDR的特异性决定残基转移至人抗体框架。
当移植CDR或特异性决定残基时，考虑到CDR所来源的供体抗体的类别/类型，可以使用任何合适的受体可变区框架序列，包括小鼠、灵长类动物和人框架区。合适地，根据本发明的人源化抗体具有包含人受体框架区的可变结构域以及本文提供的一个或多个CDR。
本文中提到的CDR由VBASE2软件定义：Retter I,Althaus HH,Münch R,Müller W:VBASE2,一种整合V基因数据库.(VBASE2,an integrative V gene database.)NucleicAcids Res.2005年1月1日；33(Database issue):D671-4。
在一个替代性独立方面，提供了在本文公开的每个可变结构域中定义的CDR，其中CDR由如下文所定义的Kabat/Clothia编号定义。
根据Kabat编号系统，重链可变结构域的CDR位于残基31-35(CDR-H1)、残基50-65(CDR-H2)和残基95-102(CDR-H3)。然而，根据Chothia(Chothia,C.和Lesk,A.M.J.Mol.Biol.,196,901-917(1987))，相当于CDR-H1的环从残基26延伸至残基32。因此，除非另有说明，否则本文所用的‘CDR-H1’意指残基26至35，如Kabat编号系统和Chothia拓扑环定义的组合所述。
根据Kabat编号系统，轻链可变结构域的CDR位于残基24-34(CDR-L1)、残基50-56(CDR-L2)和残基89-97(CDR-L3)。
Kabat残基名称并不总是直接对应于氨基酸残基的线性编号。实际的线性氨基酸序列可含有比严格Kabat编号中更少或更多的氨基酸，对应于基础可变结构域结构的结构组分(框架或互补决定区(CDR))的缩短或其中的插入。通过将抗体序列中的同源残基与“标准”Kabat编号序列比对，可以确定给定抗体的残基的正确Kabat编号。
如本文所用的术语“抗体效应子功能”或“效应子功能”是指由抗体的恒定区(例如免疫球蛋白的Fc效应子结构域)贡献的功能。这种功能可以通过例如Fc效应子结构域与具有致病活性或裂解活性的免疫细胞上的Fc受体的结合或通过Fc效应子结构域与补体系统的组分的结合来实现。效应子功能的实例包括但不限于抗体依赖性的细胞介导的细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和补体依赖性细胞毒性(CDC)。
在一个实例中，根据本公开的抗体分子可以诱导(或增加)靶(癌)细胞的抗体依赖性的细胞介导的细胞毒性(ADCC)。ADCC是一种免疫机制，导致免疫效应细胞裂解抗体涂覆的靶细胞。靶细胞是包含Fc区的抗体或其片段特异性结合的细胞，通常通过Fc区的N末端的蛋白质部分结合。确定ADCC的示例性方法可以在本公开的实验部分中找到。
在一个实例中，根据本公开的抗体分子可以与至少一个有效荷载缀合。应当理解，有效荷载可以包含单个分子或两个或更多个这样的分子，所述分子相连接以形成可以连接到本发明的抗体上的单个部分。当需要获得与分子连接的抗体片段时，这可以通过标准化学或重组DNA程序制备，其中抗体片段直接或通过偶联剂与效应分子连接。用于将此类效应分子与抗体缀合的技术是本领域熟知的(参见Hellstrom等人Controlled Drug Delivery,第2版,Robinson等人编,1987,第623-53页；Thorpe等人,1982,Immunol.Rev.,62:119-58和Dubowchik等人1999,Pharmacology and Therapeutics,83,67-123)。特定化学方法包括例如WO 93/06231、WO 92/22583、WO 89/00195、WO89/01476和WO03031581中描述的那些。或者，在分子是蛋白质或多肽的情况下，可以使用重组DNA程序实现连接，例如如WO 86/01533和EP0392745中所述。
如本文所用的术语有效荷载包括例如生物活性蛋白质(例如酶)、其他抗体或抗体片段、合成聚合物或天然存在的聚合物、核酸及其片段(例如DNA、RNA及其片段)、放射性核素(特别是放射性碘、放射性同位素)、螯合金属、纳米颗粒和报道基团，例如荧光化合物或可通过NMR或ESR光谱检测的化合物。
其他有效荷载可包括螯合的放射性核素，例如111In和90Y、Lu177、铋213、锎252、铱192和钨188/铼188；或药物，例如但不限于烷基磷酸胆碱、拓扑异构酶I抑制剂、紫杉烷类(taxoids)和苏拉明(suramin)。
其他有效荷载包括蛋白质、肽和酶。目的酶包括但不限于蛋白水解酶、水解酶、裂解酶、异构酶、转移酶。目的蛋白质、多肽和肽包括但不限于免疫球蛋白、毒素(例如相思豆毒素(abrin)、蓖麻毒素A、假单胞菌外毒素或白喉毒素)、蛋白质(例如胰岛素、肿瘤坏死因子、α-干扰素、β-干扰素、神经生长因子、血小板衍生生长因子或组织纤溶酶原活化物)、血栓形成剂或抗血管生成剂(例如血管抑制素或内皮抑素)、或生物应答调节剂(例如淋巴因子、白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-2(IL-2)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、神经生长因子(NGF))或其他生长因子和免疫球蛋白。
其他有效荷载可包括可用于例如诊断的可检测物质。可检测物质的实例包括各种酶、辅基、荧光材料、发光材料、生物发光材料、放射性核素、正电子发射金属(用于正电子发射断层扫描)和非放射性顺磁金属离子。关于可与抗体缀合以用作诊断剂的金属离子，一般参见美国专利第4,741,900号。合适的酶包括辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、β-半乳糖苷酶或乙酰胆碱酯酶；合适的辅基包括链霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白和生物素；合适的荧光材料包括伞形酮、荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、二氯三嗪基胺荧光素、丹磺酰氯和藻红蛋白；合适的发光材料包括鲁米诺；合适的生物发光材料包括荧光素酶、荧光素和水母发光蛋白；合适的放射性核素包括125I、131I、111In和99Tc。
在另一个实例中，有效荷载可以增加抗体在体内的半衰期、和/或降低抗体的免疫原性、和/或增强抗体跨越上皮屏障递送至免疫系统。这种类型的合适的效应分子的实例包括聚合物、白蛋白、白蛋白结合蛋白或白蛋白结合化合物，例如WO05/117984中描述的那些。
在效应分子是聚合物的情况下，它通常可以是合成聚合物或天然存在的聚合物，例如任选取代的直链或支链聚亚烷基、聚亚烯基或聚氧亚烷基聚合物或支链或非支链多糖，例如同多糖或杂多糖。
可存在于上述合成聚合物中的具体任选取代基包括一个或多个羟基、甲基或甲氧基。
合成聚合物的具体实例包括任选取代的直链或支链聚(乙二醇)、聚(丙二醇)、聚(乙烯醇)或其衍生物，尤其是任选取代的聚(乙二醇)，例如甲氧基聚(乙二醇)或其衍生物。
具体的天然存在的聚合物包括乳糖、直链淀粉、葡聚糖、糖原或其衍生物。
如本文所用的“衍生物”旨在包括反应性衍生物，例如硫醇选择性反应性基团，例如马来酰亚胺等。反应性基团可以直接或通过连接基链段连接到聚合物。应当理解，这种基团的残基在某些情况下会形成产物的一部分，作为抗体片段和聚合物之间的连接基团。
聚合物的尺寸可以根据需要变化，但通常在500Da至50000Da的平均分子量范围内，例如5000至40000Da，例如20000至40000Da。特别地，聚合物的尺寸可以基于产物的预期用途来选择，例如定位于某些组织例如肿瘤或延长循环半衰期的能力(关于综述，参见Chapman,2002,Advanced Drug Delivery Reviews,54,531-545)。
因此，例如，当产物打算离开循环并穿透组织，例如用于治疗肿瘤时，使用小分子量聚合物(例如分子量约为5000Da)可能是有利的。对于产物保留在循环中的应用，使用较高分子量的聚合物(例如分子量在20000Da至40000Da的范围内)可能是有利的。
合适的聚合物包括聚亚烷基聚合物，例如聚(乙二醇)或尤其是甲氧基聚(乙二醇)或其衍生物，特别是具在约15000Da至约40000Da的范围内的分子量的。
在一个实例中，用于本发明的抗体与聚(乙二醇)(PEG)部分连接。在一个特定实例中，抗体是抗体片段，并且PEG分子可以通过位于抗体片段中的任何可用的氨基酸侧链或末端氨基酸官能团(例如任何游离氨基、亚氨基、硫醇基、羟基或羧基基团)连接。此类氨基酸可以天然存在于抗体片段中，或者可以使用重组DNA方法工程化到片段中(参见例如US 5,219,996；US 5,667,425；WO98/25971、WO2008/038024)。在一个实例中，本发明的抗体分子是经修饰的Fab片段，其中所述修饰是在其重链的C末端添加一个或多个氨基酸以允许效应分子的连接。合适地，另外的氨基酸形成含有一个或多个半胱氨酸残基的经修饰的铰链区，效应分子可以连接到所述半胱氨酸残基上。多个位点可用于连接两个或更多个PEG分子。
合适的PEG分子通过位于抗体片段中的至少一个半胱氨酸残基的硫醇基共价连接。与修饰的抗体片段连接的每个聚合物分子都可以与位于片段中的半胱氨酸残基的硫原子共价连接。共价键通常是二硫键，或特别是硫-碳键。当硫醇基用作连接点时，可以使用适当活化的效应分子，例如硫醇选择性衍生物如马来酰亚胺和半胱氨酸衍生物。活化聚合物可用作制备如上所述的聚合物修饰的抗体片段的起始材料。活化聚合物可以是含有硫醇反应性基团(例如α-卤代羧酸或酯(例如碘乙酰胺)、酰亚胺(例如马来酰亚胺)、乙烯基砜或二硫化物)的任何聚合物。这些起始材料可以是市售的(例如来自Nektar，以前的ShearwaterPolymers Inc.,Huntsville,AL,USA)，或者可以使用常规化学程序从市售起始材料制备。特定的PEG分子包括20K甲氧基-PEG-胺(可从Nektar，以前的Shearwater；Rapp Polymere和SunBio获得)和M-PEG-SPA(可从Nektar，以前的Shearwater获得)。
在一个实例中，抗体是经修饰的Fab片段或diFab，其例如根据EP 0948544或EP1090037中公开的方法被聚乙二醇化，即具有共价连接于其上的PEG(聚(乙二醇))[也参见“聚乙二醇化学、生物技术和生物医学应用(Poly(ethyleneglycol)Chemistry,Biotechnical and Biomedical Applications)”,1992,J.Milton Harris(编),PlenumPress,New York；“聚乙二醇化学和生物学应用(Poly(ethyleneglycol)Chemistry andBiological Applications)”,1997,J.Milton Harris和S.Zalipsky(编),AmericanChemical Society,Washington DC和“用于生物医学的生物缀合蛋白质偶联技术(Bioconjugation Protein Coupling Techniques for the Biomedical Sciences)”,1998,M.Aslam和A.Dent,Grove Publishers,New York；Chapman,A.2002,Advanced DrugDelivery Reviews 2002,54:531-545]。在一个实例中，PEG与铰链区中的半胱氨酸连接。在一个实例中，PEG修饰的Fab片段具有与修饰的铰链区中的单个硫醇基团共价连接的马来酰亚胺基团。赖氨酸残基可以与马来酰亚胺基团共价连接，并且赖氨酸残基上的每个胺基团可以连接分子量约为20,000Da的甲氧基聚(乙二醇)聚合物。因此，与Fab片段连接的PEG的总分子量可为约40,000Da。
特定的PEG分子包括被N,N′-双(甲氧基聚(乙二醇)(MW 20,000)修饰的赖氨酸的2-[3-(N-马来酰亚胺基)丙酰胺基]乙基酰胺，也称为PEG2MAL40K(可从Nektar，以前的Shearwater获得)。
PEG连接物的替代来源包括提供GL2-400MA2(其中下面结构中的m为5)和GL2-400MA(其中m为2)并且n约为450的NOF：
也就是说每个PEG约为20,000Da。
以下类型的其他替代PEG效应分子：
可以从Dr Reddy、NOF和Jenkem获得。
在一个实例中，提供了聚乙二醇化的抗体(例如具有本文所述的PEG)，其在链中的氨基酸226(例如重链的氨基酸226(通过顺序编号))处或附近通过半胱氨酸氨基酸残基连接。
T细胞受体和嵌合抗原受体
Dotti等人2009(Human Gene Therapy 20:1229-1239(2009年11月))提供了T细胞受体和嵌合抗原受体技术的比较和综述。
在一个实例中，根据本公开的嵌合抗原受体包含WO2013/040557(其通过引用并入本文)中公开的技术。简而言之，如本文所用，术语“嵌合抗原受体”是指这样的分子，其将针对具有细胞受体激活的细胞内结构域的抗原的基于抗体的特异性与特异性细胞免疫活性相组合。例如，嵌合抗原受体可以将如本文所述的抗原结合结构域与具有特异性抗肿瘤细胞免疫活性的细胞受体激活的细胞内结构域(例如，T细胞受体激活的细胞内结构域)组合。于是，嵌合抗原受体将允许T细胞通过与提供T细胞激活和共刺激信号的细胞内结构域融合的单链Fv(scFv)抗原特异性细胞外区域实现不依赖MHC的初级激活。
药物组合物
在一个方面，根据本发明的药物制剂或组合物包含根据本公开的抗体分子和药学上可接受的赋形剂、稀释剂和/或载体。
这些载体使药物组合物能够配制成片剂、丸剂、糖衣丸、胶囊、液体、凝胶、糖浆、浆液和悬浮液，以供患者摄取。
治疗组合物中的药学上可接受的载体可另外含有液体，例如水、盐水、甘油和乙醇。另外，在这些组合物中可以存在辅助物质，例如润湿剂或乳化剂或pH缓冲物质。
本发明的药物组合物可以通过许多途径施用，包括但不限于口服、静脉内、肌肉内、动脉内、髓内、鞘内、心室内、透皮、经皮(例如参见WO98/20734)、皮下、腹膜内、鼻内、肠内、局部、舌下、阴道内或直肠途径。无针注射器(Hyposprays)也可用于施用本发明的药物组合物。典型地，治疗组合物可以制备成注射剂，其可以是液体溶液或悬浮液的形式。也可以制备适于在注射前溶解或悬浮在液体载体中的固体形式。
适合于施用的形式包括适于胃肠外施用的形式，例如，通过注射或输注，例如通过推注或连续输注。当产品用于注射或输注时，其可以采取在油性或水性载体中的悬浮液、溶液或乳液的形式，并且其可以含有配制剂，例如悬浮剂、防腐剂、稳定剂和/或分散剂。或者，抗体分子可以是干燥形式(例如冻干的)，用于在使用前用适当的无菌液体(例如葡萄糖、盐水、注射用水或其中两种或更多种的组合)复原。
因此，在一个实施例中，提供了用于肠胃外施用，特别是用于静脉内或皮下注射的制剂。
一旦配制，本发明的组合物可以直接施用于受试者。要治疗的受试者可以是动物。然而，在一个或多个实例中，所述组合物适于对人类受试者施用。
适合地，在根据本公开的制剂中，最终制剂的pH与抗体或片段的等电点的值不相似，例如如果制剂的pH为7，则pI为8-9或以上可能是适当的。虽然不希望受理论束缚，但认为这可最终提供具有改善的稳定性的最终制剂，例如抗体或片段保留在溶液中。
在一个实例中，根据本公开的液体制剂的pH在pH 5.5至8的范围内，例如pH 6、6.5、7、7.1、7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8或7.9。
在一个实例中，提供的制剂是等渗的或在构成后是等渗的。
在一个实例中，本公开的组合物或制剂包含1-200mg/mL的根据本公开的抗体分子，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、159、160、161、162、163、164、165、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198或199mg/ml。
评估
如实验部分所示，本公开的抗体可用于体内追踪肿瘤的生长。因此，设想如本文所定义的抗体可用于评估患者中癌症的状态。
如本文所用的术语“状态”是指在给定时间点肿瘤或癌性肿块的状况或状态。因此，如本文所用，癌症患者的状态可以通过肿瘤的大小、肿瘤的位置(或位置的数量)和观察到的肿瘤的阶段来定义。因此，取决于癌症的类型，患者的状态可以与观察到的肿瘤阶段相同。在一些实例中，状态可以是“淋巴结状态”、“局部”、“远处”或“复发”。
治疗
因此，在一个实例中提供了根据本公开的抗体分子或组合物，其用于疗法中，特别是癌症或纤维化的治疗中。
如本文所用的术语“纤维化”是指例如在修复或反应过程中在器官或组织中形成过量的纤维结缔组织。这与作为器官或组织的正常成分的纤维组织的形成相反。因此，在本公开中，术语“纤维化”用于区分异常的愈合过程和正常的愈合过程。在一些实例中，术语“纤维化”限于与癌症(例如实体癌肿块或转移癌)有关的纤维化。
在一个实例中，本公开的治疗施用于上皮癌，所述上皮癌例如选自肝癌(例如肝细胞癌)、胆管癌、乳腺癌(例如非ER+乳腺癌)、前列腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、子宫内膜癌、宫颈癌、肺癌、胃癌、食道癌、胰腺癌、骨癌、膀胱癌、头颈癌、甲状腺癌、皮肤癌、肾癌和食管癌及其组合，例如胃癌。
在一个实例中，癌症选自包括肝细胞癌、胆管癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠直肠癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、胰腺癌和食管癌的组。
在一个实例中，胆管癌位于选自肝内胆管、左肝管、右肝管、肝总管、胆囊管、胆总管、乏特氏壶腹(Ampulla of Vater)及其组合的位置。
在一个实例中，胆管癌在肝内胆管中。在一个实例中，胆管癌在左肝管中。在一个实例中，胆管癌在右肝管中。在一个实例中，胆管癌在肝总管中。在一个实例中，胆管癌在胆囊管中。在一个实例中，胆管癌在胆总管中。在一个实例中，胆管癌在乏特氏壶腹中。
在一个实例中，上皮癌是癌。
在一个实例中，癌症是肿瘤，例如实体瘤、液体肿瘤或其组合。
在一个实例中，根据本公开的治疗是辅助治疗，例如在手术后的辅助治疗。
在一个实例中，根据本公开的治疗是新辅助治疗，例如用于在手术前收缩肿瘤。
在一个实例中，肿瘤是实体瘤。在一个实例中，癌症是原发性癌症、继发性癌症、转移瘤或其组合。在一个实例中，根据本公开的治疗适用于治疗继发性肿瘤。在一个实例中，癌症是转移性癌症。在一个实例中，根据本公开的治疗适用于治疗原发性癌症和转移瘤。在一个实例中，根据本发明的治疗适用于治疗继发性癌症和转移瘤。在一个实例中，根据本公开的治疗适用于治疗原发性癌症、继发性癌症和转移瘤。
在一个实例中，根据本公开的治疗适用于针对本公开的癌症治疗淋巴结中的癌细胞。
在一个实例中，肝癌是原发性肝癌。在一个实例中，肝癌是继发性肝癌。在一个实例中，肝癌是1、2、3A、3B、3C、4A或4B期。
在一个实例中，胃癌是0、I、II、III或IV期。
在一个实例中，癌症是RON阳性的。在一个实例中，癌症是Met阳性的。在一个实例中，癌症是RON阳性和Met阳性的。
在一个实例中，癌症是难治的或对一种或多种可用的癌症治疗具有抗性。
在一个实例中，本公开的疗法是一线疗法。在一个实例中，根据本公开的疗法是二线疗法或后续线疗法(subsequent line therapy)。
在一个实例中，根据本公开的抗体分子用于组合疗法中。
在一个实例中，组合疗法包括检查点抑制剂，例如CTLA4抑制剂、PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂，特别是抗体或其结合片段。
在一个实例中，本公开的组合疗法包括或进一步包括化学治疗剂。
在一个实例中，组合疗法包括HER抑制剂，例如赫赛汀或pan-HER抑制剂瓦力替尼(varlitinib)[(R)-N4-[3-氯-4-(噻唑-2-基甲氧基)-苯基]-N6-(4-甲基-4,5-二氢-恶唑-2-基)-喹唑啉-4,6-二胺(瓦力替尼，WO2005/016346中公开的实施例52)]，例如每天一次或每天两次以10mg至500mg，例如200mg、300mg或400mg的范围内的剂量施用。
除非上下文另有说明，否则化学治疗剂和化学疗法或细胞毒性剂在本文中可互换使用。
本文所用的化学疗法意指对恶性细胞和组织具有“选择性”破坏性的特异性抗肿瘤化学试剂或药物，例如烷化剂、包括胸苷酸合成酶抑制剂的抗代谢物、蒽环霉素、包括植物生物碱的抗微管剂、紫杉烷类、拓扑异构酶抑制剂、parp抑制剂和其他抗肿瘤药剂。在本文中“选择性地”的使用并不严格，因为许多这些药剂当然具有严重的副作用。
基于所治疗的癌症的性质，医师可以选择优选的剂量。
可以在本公开的方法中使用的烷化剂的实例包括烷化剂、氮芥、亚硝基脲、四嗪、氮丙啶、铂类药(platins)和衍生物和非经典的烷化剂。
含铂化学治疗剂(也称为铂类药)的实例包括顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、奥沙利铂(oxaliplatin)、沙铂(satraplatin)、吡铂(picoplatin)、奈达铂(nedaplatin)、三铂(triplatin)和脂铂(lipoplatin)(脂质体形式的顺铂)，特别是顺铂、卡铂和奥沙利铂。
取决于确切的癌症，顺铂的剂量范围为约20至约270mg/m2。剂量通常在约70至约100mg/m2的范围内。
氮芥包括二氯甲基二乙胺、环磷酰胺、美法仑、苯丁酸氮芥、异环磷酰胺和白消安。
亚硝基脲包括N-亚硝基-N-甲基脲(MNU)、卡莫司汀(carmustine)(BCNU)、洛莫司汀(lomustine)(CCNU)和司莫司汀(semustine)(MeCCNU)、福莫司汀(fotemustine)和链脲佐菌素(streptozotocin)。四嗪包括达卡巴嗪(dacarbazine)、米托唑胺(mitozolomide)和替莫唑胺(temozolomide)。
氮丙啶包括噻替派(thiotepa)、丝裂霉素和地吖醌(diaziquone)(AZQ)。
可以在本公开的方法中使用的抗代谢物的实例包括抗叶酸盐(例如甲氨蝶呤和培美曲塞(pemetrexed))、嘌呤类似物(例如硫嘌呤类，例如硫唑嘌呤(azathiopurine)、巯基嘌呤、硫嘌呤、氟达拉滨(fludarabine)(包括磷酸盐形式)、喷司他丁(pentostatin)和克拉屈滨(cladribine))、嘧啶类似物(例如氟嘧啶，如5-氟尿嘧啶(5-FU)及其前药如卡培他滨(capecitabine))、氟尿苷(floxuridine)、吉西他滨(gemcitabine)、阿糖胞苷(cytarabine)、地西他滨(decitabine)、盐酸雷替曲塞(拓优得(tomudex))、克拉屈滨(cladribine)和6-氮杂尿嘧啶。
可以在本公开的方法中使用的蒽环霉素的实例包括柔红霉素(daunorubicin)(道诺霉素(Daunomycin))、柔红霉素(脂质体)、多柔比星(阿霉素(Adriamycin))、多柔比星(脂质体)、表柔比星(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)、戊柔比星(valrubicin)(其目前仅用于治疗膀胱癌)和米托蒽醌(mitoxantrone)(其是一种蒽环类似物)，特别是多柔比星。
可以在本公开的方法中使用的抗微管剂的实例包括长春花生物碱和紫杉烷。
长春花生物碱包括完全天然的化学物质，例如长春新碱(vincristine)和长春花碱(vinblastine)，以及半合成的长春花生物碱，例如长春瑞滨(vinorelbine)、长春地辛(vindesine)和长春氟宁(vinflunine)。
紫杉烷包括太平洋紫杉醇(paclitaxel)、多西紫杉醇(docetaxel)、白蛋白结合型紫杉醇(abraxane)、卡巴他赛(carbazitaxel)及其衍生物。如本文使用的紫杉烷衍生物包括紫杉烷如紫杉醇的重新配制物(reformulations)，例如在胶束(micelluar)配方中，衍生物还包括化学衍生物，其中使用合成化学来改性起始材料紫杉烷。
可以在本公开的方法中使用的拓扑异构酶抑制剂包括I型拓扑异构酶抑制剂、II型拓扑异构酶抑制剂和II型拓扑异构酶毒物。I型抑制剂包括拓扑替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、因多替康(indotecan)和因米替康(indimitecan)。II型抑制剂包括染料木黄酮和具有以下结构的ICRF 193：
II型毒物包括安吖啶(amsacrine)、依托泊苷(etoposide)、磷酸依托泊苷(etoposide phosphate)、替尼泊苷(teniposide)和多柔比星和氟喹诺酮(fluoroquinolones)。
在一个实例中，化学治疗剂是PARP抑制剂。
在一个实例中，所用化学治疗剂的组合是例如铂和5-FU或其前药，例如顺铂或奥沙利铂和卡培他滨或吉西他滨，例如FOLFOX。
在一个实例中，化学疗法包括化学治疗剂的组合，特别是细胞毒性化学治疗剂的组合。
在一个实例中，化学疗法组合包括铂例如顺铂和氟尿嘧啶或卡培他滨。
在一个实例中，化学疗法组合是卡培他滨和奥沙利铂(XELOX)。
在一个实例中，化学疗法是亚叶酸和5-FU的组合，任选地与奥沙利铂组合(FOLFOX)。
在一个实例中，化学疗法是亚叶酸、5-FU和伊立替康的组合(FOLFIRI)，任选地与奥沙利铂组合(FOLFIRINOX)。该方案例如包括：伊立替康(180mg/m2，IV，历时90分钟)，同时使用亚叶酸(400mg/m2[或2×250mg/m2]，IV，历时120分钟)；接着使用氟尿嘧啶(400-500mg/m2，IV推注)，然后使用氟尿嘧啶(2400-3000mg/m2，静脉输注，历时46小时)。该循环典型地每两周重复一次。上面显示的剂量可能因循环而异。
在一个实例中，化学疗法组合使用微管抑制剂，例如硫酸长春新碱、埃坡霉素A(epothilone A)、N-[2-[(4-羟基苯基)氨基]-3-吡啶基]-4-甲氧基苯磺酰胺(ABT-751)、紫杉醇衍生的化学治疗剂(例如太平洋紫杉醇、白蛋白结合型紫杉醇或多西紫杉醇)或其组合。
在一个实例中，化学疗法组合使用mTor抑制剂。mTor抑制剂的实例包括：依维莫司(everolimus)(RAD001)、WYE-354、KU-0063794、帕帕霉素(papamycin)(西罗莫司(Sirolimus))、替西罗莫司(Temsirolimus)、雷帕霉素(Deforolimus)(MK-8669)、AZD8055和BEZ235(NVP-BEZ235)。
在一个实例中，化学疗法组合使用MEK抑制剂。MEK抑制剂的实例包括：AS703026、CI-1040(PD184352)、AZD6244(司美替尼(Selumetinib))、PD318088、PD0325901、AZD8330、PD98059、U0126-EtOH、BIX 02189或BIX 02188。
在一个实例中，化学疗法组合使用AKT抑制剂。AKT抑制剂的实例包括：MK-2206和AT7867。
在一个实例中，该组合使用aurora激酶抑制剂。aurora激酶抑制剂的实例包括：Aurora A抑制剂I、VX-680、AZD1152-HQPA(Barasertib)、SNS-314甲磺酸盐、PHA-680632、ZM-447439、CCT129202和Hesperadin。
在一个实例中，化学疗法组合使用例如WO2010/038086中公开的p38抑制剂，例如N-[4-({4-[3-(3-叔丁基-1-对甲苯基-1H-吡唑-5-基)脲基]萘-1-基氧基}甲基)吡啶-2-基]-2-甲氧基乙酰胺。
在一个实例中，该组合使用Bcl-2抑制剂。Bcl-2抑制剂的实例包括：奥巴克拉甲磺酸盐(obatoclax mesylate)、ABT-737、ABT-263(navitoclax)和TW-37。
在一个实例中，化疗组合包括抗代谢物，例如卡培他滨(希罗达(xeloda))、磷酸氟达拉滨(fludarabine phosphate)、氟达拉滨(fludarabine)(福达华(fludara))、地西他滨(decitabine)、雷替曲塞(raltitrexed)(拓优得(tomudex))、盐酸吉西他滨(gemcitabinehydrochloride)和/或克拉屈滨(cladribine)。
在一个实例中，化疗组合包括更昔洛韦(ganciclovir)，其可以帮助控制免疫应答和/或肿瘤血管形成。
如本文所用的“施用组合疗法”不需要该组合中使用的疗法被同时施用。如本文所用的组合疗法是指在同一个治疗期内采用两种或更多种治疗模式，即与顺序疗法相反的模式。如本文所用的两种或更多种治疗模式是指至少两种具有不同作用模式和/或不同活性和/或不同施用途径的疗法。
如本文所用的诸如“治疗(treating)”或“治疗(treatment)”或“治疗(to treat)”的术语是指治愈、减缓、改善所诊断的病理状况或病症的症状和/或停止其进展的治疗措施；或预防所靶向的病理状况或病症和/或减缓其发展的防治或预防措施。因此，需要治疗的人包括那些已患有病症的人；那些容易患上病症的人；和那些要预防病症的人，和那些需要预防病症复发的人(例如那些处于缓解期的人)。在某些方面，如果患者显示例如疾病或病症的总体缓解、部分缓解或暂时缓解，则受试者的疾病或病症例如癌症被成功地“治疗”。
本文所用的治疗有效量是指适于引发所需治疗效果的量。在本公开的组合疗法中，RON抑制剂可以以与所述抑制剂的单一疗法剂量相同或比其更低的剂量使用。在一个实例中，所用的PD-1通路抑制剂的剂量与所述抑制剂的单一疗法剂量相同或比其更低。在一个实例中，RON抑制剂的剂量与单一疗法中使用的剂量相同，并且PD-1通路抑制剂的剂量与单一疗法中使用的剂量相同。在一个实例中，RON抑制剂的剂量低于单一疗法中使用的剂量，并且PD-1通路抑制剂的剂量与单一疗法中使用的剂量相同。在一个实例中，RON抑制剂的剂量与单一疗法中使用的剂量相同，并且PD-1通路抑制剂的剂量低于单一疗法中使用的剂量。在一个实例中，RON抑制剂的剂量低于单一疗法中使用的剂量，并且PD-1通路抑制剂的剂量低于单一疗法中使用的剂量。本领域技术人员可以确定合适的剂量。
更详细的癌症类型
在一个实例中，胃癌选自包括胃腺癌、鳞状细胞癌、胃淋巴瘤、胃间质瘤和神经内分泌肿瘤的组。
在一个实例中，肝癌例如选自肝细胞癌、胆管癌、血管肉瘤和肝母细胞瘤的组，特别是肝细胞癌。在一个实例中，原发性肝癌是1期、2期、3期或4期。在一个实例中，肝癌是继发性或转移性肝癌。
根据组织学类型对肺癌进行分类，并根据组织病理学家在显微镜下观察到的恶性细胞的大小和外观对肺癌进行归类。出于治疗目的，区分两大类：非小细胞肺癌和小细胞肺癌。
在一个实例中，上皮癌是肺癌，例如小细胞肺癌(SCLC)和非小细胞肺癌(NSCLC)。
非小细胞肺癌-NSCLC的三个主要亚型是腺癌、鳞状细胞癌和大细胞癌。
近40％的肺癌是腺癌，通常起源于外周肺组织。腺癌的一种亚型，即细支气管肺泡癌，在女性不吸烟者中更常见，并且可能有更好的长期存活率。
鳞状细胞癌约占肺癌的30％。它们通常靠近大的气道。通常在肿瘤中心发现空腔和相关的细胞死亡。大约9％的肺癌是大细胞癌。这些之所以如此命名，是因为癌细胞很大，具有过多的细胞质、大的细胞核以及明显的核仁。
小细胞肺癌-在小细胞肺癌(SCLC)中，细胞含有致密的神经分泌颗粒(含有神经内分泌激素的囊泡)，这使得该肿瘤具有内分泌/副肿瘤综合征关联。大多数病例出现在较大的气道(初级和次级支气管)中。这些癌症迅速生长并在疾病过程的早期扩散。60％至70％的患者出现转移性疾病。
在一个实例中，癌症是非小细胞肺癌。
在一个实例中，癌症是肝癌，例如来自原发性癌(例如结肠癌)的肝转移，其已扩散至肝脏。在一个实例中，肝癌是HCC肝细胞癌。
在一个实例中，提供了例如肾细胞癌和/或尿路上皮细胞癌的肾癌的治疗。肾癌的其他实例包括鳞状细胞癌、近肾小球细胞瘤(肾素瘤)、血管肌脂瘤、肾嗜酸细胞瘤、贝利尼导管癌(Bellini duct carcinoma)、肾透明细胞肉瘤、中胚叶肾瘤、肾母细胞瘤、混合性上皮间质瘤、透明细胞腺癌、移行细胞癌、内翻性乳头状瘤、肾淋巴瘤、畸胎瘤、癌肉瘤和肾盂类癌。
在一个实例中，癌症是膀胱癌，例如是由膀胱的上皮衬里(即尿路上皮)引起的几种类型的恶性肿瘤中的任何一种。大约90％的膀胱癌是过渡性细胞癌。另外10％是鳞状细胞癌、腺癌、肉瘤、小细胞癌以及体内其他部位癌症的继发沉积物。分期如下所示。
T(原发肿瘤)
TX 原发肿瘤无法评估
T0 没有原发肿瘤的证据
Ta 非侵袭性乳头状癌
Tis 原位癌(‘扁平肿瘤′)
T1 肿瘤侵入上皮下结缔组织
T2a 肿瘤侵入浅表肌肉(内半部)
T2b 肿瘤侵入深部肌肉(外半部)
T3 肿瘤侵入膀胱周围组织：
T3a 在显微镜下观察
T3b 肉眼可见(膀胱外肿块)
T4a 肿瘤侵入前列腺、子宫或阴道
T4b 肿瘤侵入骨盆壁或腹壁
N(淋巴结)
NX 区域淋巴结无法评估
N0 无区域淋巴结转移
N1 在最大尺寸为2cm或更小的单个淋巴结中转移
N2 在最大尺寸超过2cm但不超过5cm的单个淋巴结中，或在最大尺寸均不超过
5cm的多个淋巴结中转移
N3 在最大尺寸超过5cm的淋巴结中转移
M(远处转移)
MX 远处转移无法评估
M0 无远处转移
M1 远处转移。
膀胱癌
本公开延伸至膀胱癌的任何阶段。
卵巢癌
有超过30种不同类型的卵巢癌，根据它们开始的细胞类型进行分类。癌性卵巢肿瘤可以从三种常见细胞类型开始：
表面上皮细胞-覆盖卵巢内层的细胞
生殖细胞-注定要形成卵子的细胞
基质细胞-释放激素并连接卵巢的不同结构的细胞。
本公开涉及治疗来自任何来源(例如如本文所述，特别是上皮细胞)的卵巢癌。上皮性卵巢癌(EOC)占所有卵巢癌的85％至90％。
常见的上皮肿瘤-上皮性卵巢肿瘤从覆盖卵巢外表面的细胞发展而来。大多数上皮性卵巢肿瘤是良性的(非癌性的)。有几种类型的良性上皮肿瘤，包括浆液性腺瘤、粘液腺瘤和布伦纳瘤(Brenner tumor)。癌性上皮肿瘤是癌-意味着它们始于作为卵巢内衬的组织。这些是所有类型的卵巢癌中最常见和最危险的。不幸的是，几乎70％患有常见上皮性卵巢癌的女性在疾病晚期才被诊断出来。
存在一些卵巢上皮肿瘤，其在显微镜下的外观不能将它们清楚地识别为癌性。这些被称为交界性肿瘤或低恶性潜能的肿瘤(LMP肿瘤)。本公开的方法包括后者的治疗。
生殖细胞肿瘤-卵巢生殖细胞肿瘤从产生卵细胞或卵子的细胞发展而来。大多数生殖细胞肿瘤是良性的(非癌性的)，尽管有些是癌性的并且可能危及生命。最常见的生殖细胞恶性肿瘤是成熟畸胎瘤、无性细胞瘤和内胚层窦瘤。生殖细胞恶性肿瘤最常发生在二十多岁的青少年和女性中。当前，90％的卵巢生殖细胞恶性肿瘤患者可以治愈并保持其生育能力。
间质瘤-卵巢间质瘤是一种罕见的肿瘤类型，由将卵巢保持在一起的结缔组织细胞和产生雌性激素、雌激素和黄体酮的细胞发展而来。最常见的类型是颗粒-卵泡膜肿瘤和Sertoli-Leydig细胞肿瘤。这些肿瘤非常罕见，并且通常被认为是低级癌症，其中约70％表现为I期疾病(癌症仅限于一个或两个卵巢)。
原发性腹膜癌-切除人的卵巢可以消除卵巢癌的风险，但不会消除称为原发性腹膜癌的不常见癌症的风险。原发性腹膜癌与上皮性卵巢癌(最常见的类型)密切相关。它在来自腹膜(腹部衬里)的细胞中发展，并且在显微镜下看起来相同。在症状、扩散和治疗方面相似。
卵巢癌的阶段
一旦被诊断出患有卵巢癌，可以在手术期间确定肿瘤的阶段，此时医生可以判断癌症是否已经扩散到卵巢外。卵巢癌有四个阶段-I期(早期疾病)到IV期(晚期疾病)。治疗计划和预后(您的疾病的可能病程和结果)将取决于您所患的癌症的阶段。
以下是卵巢癌各个阶段的描述：
I期-癌症的生长仅限于一个或两个卵巢。
IA期-生长仅限于一个卵巢，并且肿瘤局限于卵巢内部。卵巢外表面没有癌症。没有出现包含恶性细胞的腹水。卵巢囊完好无损。
IB期-生长仅限于两个卵巢，其外表面没有任何肿瘤。没有出现包含恶性细胞的腹水。卵巢囊完好无损。
IC期-肿瘤被分类为IA期或IB期，并且存在以下一种或多种：(1)肿瘤存在于一个或两个卵巢的外表面上；(2)卵巢囊破裂；和(3)存在包含恶性细胞的腹水或具有阳性腹膜洗液。
II期-癌症的生长涉及一个或两个卵巢的骨盆延长。
IIA期-癌症扩展到子宫或输卵管和/或涉及子宫或输卵管，或两者。
IIB期-癌症扩展到其他盆腔器官。
IIC期-肿瘤被分类为IIA期或IIB期，并且存在以下一种或多种：(1)肿瘤存在于一个或两个卵巢的外表面上；(2)卵巢囊破裂；和(3)存在包含恶性细胞或具有阳性腹膜洗液的腹水。
III期-癌症的生长涉及一个或两个卵巢，并且存在以下一种或两种：(1)癌症已经扩散到骨盆以外的腹部衬里和(2)癌症已扩散到淋巴结。肿瘤局限于真正的骨盆，但组织学证明恶性扩展至小肠或网膜。
IIIA期-在分期手术中，医生可以看到涉及一个或两个卵巢的癌症，但腹部没有癌症可见，并且癌症也没有扩散到淋巴结。然而，当在显微镜下检查活组织时，在腹部腹膜表面内发现非常小的癌症沉积物。
IIIB期-肿瘤位于一个或两个卵巢中，并且腹部存在癌症沉积物，其足以让外科医生看到但直径不超过2cm。癌症尚未扩散到淋巴结。
IIIC期-肿瘤位于一个或两个卵巢中，并且存在以下一种或两种：(1)癌症已扩散到淋巴结；和/或(2)癌症沉积物的直径超过2cm并且可在腹部发现。
IV期-这是卵巢癌的最晚期。癌症的生长涉及一个或两个卵巢，并且远处转移(癌症扩散到位于腹膜腔外的器官)已经发生。在胸膜液(来自围绕肺的腔体)中发现卵巢癌细胞也是IV期疾病的证据。
在一个实例中，卵巢癌是：I型，例如IA、IB或IC；II型，例如IIA、IIB或IIC；III型，例如IIIA、IIIB或IIIC；或IV型。
在一个实例中，乳腺癌选自包括以下的组：原位导管癌、原位小叶癌、浸润性乳腺癌、浸润性小叶乳腺癌、佩吉特病、乳腺血管肉瘤、髓质乳腺癌、粘液性乳腺癌、管状乳腺癌、乳腺腺样囊性癌、化生乳腺癌、乳腺淋巴瘤、基底型乳腺癌、叶状或叶状囊肉瘤和乳头状乳腺癌。
在一个实例中，前列腺癌选自包括以下的组：导管腺癌、移行细胞(尿路上皮)癌、鳞状细胞癌、类癌、小细胞癌、肉瘤和肉瘤样癌。
表2.RON抗体序列的总结
本文中说明性描述的本发明可以在缺少本文未具体公开的任何要素、限制的情况下适当地实施。因此，例如，术语“包含”、“包括”、“含有”等应当被广泛地阅读而不受限制。另外，本文中使用的术语和表达已被用作描述的术语而不构成限制，并且在这些术语和表达的使用中无意排除所示和所描述的特征的任何等同物或其部分，但应认识到在所要求保护的本发明的范围内可以进行各种修改。因此，应该理解，尽管已经通过优选实施例和任选特征具体公开了本发明，但是本领域技术人员可以采用本文公开的其中体现的本发明的修改和变化，并且这些修改和变化被认为是在本发明的范围内。
本发明已在本文中广泛且一般性地描述。落入所述一般性公开内容中的各种更窄的种类和亚属分组亦形成本发明的一部分。这包括具有从该属中去除任何主题的附带条件或负面限制的本发明的一般描述，无论是否在本文中具体记载了被移除的材料。
其他实施例处在以下权利要求书和非限制性实施例内。另外，在根据马库什群组(Markush group)描述本发明的特征或方面的情况下，本领域技术人员将认识到，本发明也因此以马库什群组的任何单个成员或成员子群的形式描述。
实施例
实施例1：重组RON抗原的设计、表达和纯化
用Lasergene Protean v8.1程序(DNASTAR Inc.，Madison，WI)中的Jameson-Wolf算法分析RON的翻译序列的抗原性，以预测RON的抗原指数。该算法综合了几个参数以基于其一级氨基酸链的特征计算序列的抗原性：亲水性(Hopp-Woods)、表面概率(Emini)、蛋白质骨架的灵活性(Karplus-Schulz)和二级结构预测(Chou-Fasman和Garnier)(Jameson&Wolf,1988)。
在pCMV6载体中含有全长人RON cDNA的进入载体(RC212786)是从Origene获得。基于细胞外区域中的大多数抗原序列选择RON的三个截短区域，并使用EcoRI和XhoI限制性位点将它们亚克隆到pGEX-4T1载体(GE Healthcare)中。将重组质粒转化到BL21大肠杆菌感受态细胞(Invitrogen)中，并铺在LB平板上，在37℃孵育过夜。挑取单菌落用于原核表达。使转化的细胞在1L培养物中生长直至OD 600达到0.6-0.8。通过加入IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)达到终浓度为300μM来诱导蛋白质表达。然后进一步使培养物在18℃生长过夜。通过以6000rpm离心15分钟回收细胞，并将细胞重悬于20ml裂解缓冲液(20mM Tris-HCl，pH 8.0，1M NaCl，10％甘油，0.1％Triton-X 100和1mM DTT)中。在超声处理前将细胞在裂解缓冲液中在恒定涡旋下于4℃孵育30分钟。使用超声波仪(Sonics，Vibracell，USA)在冰上通过超声处理裂解重悬的细胞3分钟。超声处理以38％振幅进行四个循环，其中1秒ON和0.1秒OFF。将得到的悬浮液以18,000rpm离心40分钟，并将获得的上清液(预纯化的上清液)用于蛋白质纯化。将细菌裂解物的上清液上样到谷胱甘肽柱上，用20mM Tris-HCl pH8.0、1M NaCl、10％甘油、0.1％Triton-X 100和1mM DTT洗涤。使用20mM Tris-HCl pH 9.6、100mM NaCl、1mM DTT和10mM谷胱甘肽的缓冲液洗脱GST标记的RON蛋白。收集洗脱的蛋白质级分用于SDS-PAGE分析。
实施例2：将截短的RON免疫接种到小鼠中
从生物资源中心(新加坡)获得5只8周龄Balb/c雌性小鼠，并用重组人蛋白质RON免疫原接种。用Sigma佐剂系统(Sigma)作为佐剂在腹膜内进行第一次免疫接种，然后以3周的间隔进行5次腹膜内和皮下注射。在第四次免疫接种后一周，使用刺血针(MEDIpointInternational Inc.)通过颊部出血从每只小鼠抽取血液。将大约10μl血液以1600rpm离心10分钟并吸出血清并在4℃储存。随后通过酶联免疫吸附测定(ELISA)测量抗体应答，其中用于免疫的RON蛋白固定在ELISA板上。选择具有最高血清抗体滴度的小鼠作为与骨髓瘤细胞系SP2/0融合的脾供体。
将小鼠脾脏与骨髓瘤细胞融合以获得杂交瘤细胞
通过静脉内注射不含佐剂的RON融合蛋白，小鼠接受最终加强免疫(finalboost)。小鼠骨髓瘤SP2/0细胞系用作融合配偶体。因此，在融合前一周，将细胞在RPMI(Gibco)和10％FBS中培养直至它们在对数期达到>70％汇合。在无菌条件下除去经过免疫的小鼠的脾细胞。使用ClonaCell-HY杂交瘤克隆试剂盒(STEMCELL Technologies)按照制造商的方案进行杂交瘤细胞的产生、选择和克隆。
实施例3：筛选用于RON抗体的杂交瘤细胞
ELISA
使用分别用重组RON和GST涂覆的96孔Maxisorp板(Nunc)，通过ELISA测定选择分泌靶向人RON的mAb的杂交瘤克隆。在ELISA板上测试从单个杂交瘤孔收集的上清液。使用10％胎牛血清(FBS)进行封闭和抗体稀释。将含有0.05％Tween 20的1XPBS(PBST)用于洗涤。洗涤后，使用在含有10％FBS的PBST中的1:5000与HRP缀合的山羊抗小鼠IgG(Biorad)检测IgG。洗涤后，用1×TMB ELISA底物溶液(Sigma)显色平板。用EnVision平板读出器(Perkin Elmer)在650nm测量吸光度。
实施例4：免疫荧光染色
将4％多聚甲醛固定的HCT116和TKO细胞用0.4％Triton X-100透化20分钟。用PBS冲洗后，用含5％BSA的PBSTritonX(PBSTX)封闭细胞20分钟，然后在4℃在杂交瘤上清液中孵育过夜。使用1:1000山羊Alexaflor 488驴抗小鼠IgG缀合物(Life technologies)在含有1％BSA的PBSTX中检测IgG。随后，用DAPI对细胞进行复染色，并用Incell Analyzer(GEHealthcare)观察。
实施例5：石蜡包埋切片的免疫组织化学染色
来自HT29异种移植小鼠模型的肿瘤组织由分子和细胞生物学研究所(Instituteof Molecular and Cell Biology)的高级分子病理学实验室(Advanced MolecularPathology Laboratory，AMPL)加工成石蜡块。然后将5μm的蜡切片收集在载玻片(LeicaBiosystems)上，并在50℃热板上干燥1小时。
将切片在二甲苯(ChemTech Trading)中脱石蜡，并通过降低乙醇(ChemTechTrading)的百分比直到变成水来再水化。在2100Antigen Retriever(Aptum Biologics)中用Target Retrieval Solution pH9(Dako)加热组织切片以暴露抗原，然后在PBS中冲洗三次。用含2％(v/v)过氧化氢(Merck)的PBS封闭内源性过氧化物酶30分钟，然后用水冲洗，然后用PBS冲洗。用含10％(v/v)山羊血清(Dako)的PBS封闭切片1小时，然后与第一抗体6D4或7G8在4℃孵育过夜。
将切片在流动的自来水中洗涤，然后在PBS中冲洗，然后与缀合至山羊抗小鼠或抗兔免疫球蛋白的由EnVision过氧化物酶标记的聚合物(Dako；纯浓度)或1:100稀释的过氧化物酶标记的山羊抗小鼠或抗小鼠IgG(Fcγ片段特异性的)(Jackson ImmunoResearch)一起孵育。然后使用3,3′-二氨基联苯胺作为底物显现抗原-抗体相互作用，并用苏木精轻轻复染切片，然后脱水并安装在Cytoseal 60合成树脂(Richard-Allan ScientificTM，FisherScientific)中。使用AxioImager(Zeiss)光学显微镜在明视场下对载玻片成像，并用AxioVision Rel 4.8软件(Carl Zeiss AG)分析。
实施例6：腹水产生
给BALB/c小鼠单次腹膜内(IP)注射0.25mL不完全弗氏佐剂(Sigma ChemicalCo.)。14天后，给小鼠单次IP注射体积为0.5mL的4×105个上述杂交瘤细胞，然后每天检查它们是否发生通过腹部胀大可辨别的腹水。
在注射杂交瘤细胞后7至10天，将小鼠麻醉并对所有组中的所有小鼠收集腹水。通过使用18-22号针头的腹部穿刺术从麻醉的小鼠无菌收集腹水，其通过重力流入无菌离心管。将手指压力轻轻地施加到腹部，并根据需要改变小鼠的位置以便于移除腹水。对每个分开的小鼠笼子汇集腹水。
实施例7：获得的抗体的表位图谱
Pepscan
覆盖细胞外人RON序列的重叠(5个氨基酸)25聚体肽是从Mimotopes订购，总共产生93个生物素化肽。将肽重悬于100％DMSO中以制备30mg/ml储备溶液，然后将其稀释至10μg/ml，然后在室温加入链霉抗生物素蛋白高结合容量涂覆的96孔板(Streptavidin HighBinding Capacity Coated 96-Well Plates)(Pierce)中维持1小时。根据制造商的方案进行ELISA。简言之，将1μg/ml纯化抗体加入平板中并在室温孵育30分钟。用PBST洗涤后，使用在含有10％FBS的PBST中的1:5000与HRP缀合的山羊抗小鼠IgG(Biorad)检测IgG。随后，将平板用1X TMB ELISA底物溶液(Sigma)染色，并用EnVision平板读出器(Perkin Elmer)在650nm测量吸光度。
肽噬菌体展示
使用在pIII外壳蛋白的NH2末端编码随机12聚体肽的M13噬菌体文库(Ph.D.-12，New England Biolabs)(2.7×109个序列)。将50nm纯化抗体涂覆在96孔Maxisorp板(Nunc)上。将孔与封闭缓冲液(1XPBS，0.5％Tween20，2％BSA)在室温一起孵育1小时，用洗涤缓冲液(1XPBS，1％Tween20，2％BSA)洗涤，并在室温在洗涤缓冲液中与4×1010个噬菌体一起孵育。用0.2M甘氨酸(pH 2.2)洗脱结合的噬菌体，并用1M Tris(pH 9.1)中和。按照制造商的指示扩增洗脱的噬菌体。选择过程重复三个循环。如制造商所述挑取来自最后一轮的噬菌体噬菌斑并测序。
实施例8：使用抗体的细胞增殖测定
将表达RON的HCT116细胞以每孔1000个细胞接种于96孔板(Nunc)中。在8小时血清饥饿期后，将特定浓度的过滤灭菌的纯化mAb加入孔中，并将细胞再孵育3天。
IncuCyte系统
将表达RON的HCT116细胞转移到96孔板中，并使用IncuCyte HD系统(EssenBioScience)成像。使用20倍物镜以2小时的间隔从每个孔的4个独立的950×760-μm2区域捕获图像。将接种的细胞血清饥饿8小时，并将过滤灭菌的纯化mAb加入每个处理孔中。在以10μg/ml加入抗RON mAb后30分钟，将IgG抗小鼠IgG Fc-DM1 2°ADC(Moradec)加入细胞中。将培养物在水套CO2培养室(Thermo Scientific)中保持在37℃，并一式三份运行72小时。通过IncuCyte软件计算细胞汇合数据。汇集每个孔的所有三个区域的值并在所有三个重复中平均。
实施例9：受体介导的内吞作用
用10μg/ml mAb将96孔板中每孔5×104个细胞的细胞在4℃处理过夜或37℃处理1小时，然后用与FITC偶联的山羊抗小鼠IgG处理。随后使用4％PFA进行固定20分钟。用4′6-二氨基-2-苯基吲哚(DAPI)染色核DNA。在奥林巴斯共聚焦显微镜FV1000下观察免疫荧光。
实施例10：蛋白质印迹分析
使用补充有蛋白酶抑制剂混合物(Roche)的RIPA缓冲液(Thermo Scientific)进行裂解。QuickStart Bradford蛋白质测定(BioRad)用于测定以BSA作为标准的蛋白质浓度。将等量的总蛋白质与NuPAGE十二烷基硫酸锂(LDS)和样品还原缓冲液(ThermoScientific)混合，在95℃加热5分钟并上样到NuPAGE10％或12％Bis-Tris凝胶(LifeTechnologies)中进行电泳。使用iBlot 2凝胶转移装置(Thermo Scientific)将分离的蛋白质转移到硝酸纤维素膜上。用补充有0.1％吐温(TBST)的tris缓冲盐水中的5％牛奶或牛血清白蛋白(BSA)进行封闭。AKT(4298S)、ERK1/2(4348S)、p-AKT(9271S)和p-ERK(8544S)抗体是来自Cell Signaling Technology。RON抗体是内部制备的，并且肌动蛋白-HRP(A3854)来自Sigma-Aldrich。抗兔(P0217)和抗小鼠(P0161)二级抗体来自Dako。使用的增强化学发光(ECL)试剂是SuperSignal West Dura Extended Duration Substrate(ThermoScientific，#34076)。使用Licor Odyssey Fc和Image Studio(3.1版)进行成像和采集。
实施例11：细胞生存力测定
进行细胞生存力测定以定量代谢活性细胞所产生的ATP。根据制造商的说明书，使用CellTiter-Glo发光细胞生存力测定法(Promega)进行测定。简而言之，在完全McCoy 5A培养基中在增加浓度的mAb(0至20μM)存在下，在无菌96孔板中培养5×103个细胞/ml。然后将平板孵育72小时，然后加入100μl CellTiter-Glo试剂以裂解细胞。在室温孵育10分钟后，在Envision读数器(PerkinElmer)上在发光计中记录发光，每个孔的积分时间为1秒。通过从二甲亚砜(DMSO)处理的细胞获得的发光信号标准化抗体处理的细胞的发光信号。
实施例12：补体依赖性细胞毒性(CDC)
根据制造商的说明书用DELFIA BATDA试剂(PerkinElmer)标记靶细胞。标记后，在37℃用抗体涂覆细胞60分钟。洗涤细胞，然后与兔补体(10％)在37℃共培养60分钟。然后使细胞上清液与DELFIA铕溶液反应，并使用EnVision平板读出器(Perkin Elmer)测量荧光。通过以下公式计算特异性裂解：(实验裂解计数减去自发裂解计数)除以(最大裂解计数[通过裂解缓冲液]减去自发裂解计数)乘以100％。
实施例13：抗体依赖性的由细胞介导的细胞毒性(ADCC)
根据制造商的说明书用DELFIA BATDA试剂(PerkinElmer)标记靶细胞。标记后，在37℃用抗体涂覆细胞60分钟。洗涤细胞，然后将其与效应细胞以150:1的比例(效应物与靶标)在37℃共培养过夜。然后使细胞上清液与DELFIA铕溶液反应，并使用EnVision平板读出器(Perkin Elmer)测量荧光。通过以下公式计算特异性裂解：(实验裂解计数减去自发裂解计数)除以(最大裂解计数[通过裂解缓冲液]减去自发裂解计数)乘以100％。
实施例14：体内实验结果和动物模型
抗体抑制HT29人异种移植小鼠模型中的肿瘤生长。
单克隆抗体在靶向癌症免疫疗法中发挥着巨大作用。RON被认为是靶向癌症治疗的理想候选者，因为它在癌细胞中过表达并且在正常细胞中最低限度地表达。靶向RON具有良好的安全性，因为RON不在成纤维细胞、内皮细胞和血液白细胞中表达。测试抗RON小鼠mAb 7G8和6D4在人异种移植小鼠模型中抑制体内肿瘤生长的能力。对于HT-29癌细胞异种移植实验，对雌性nu/nu裸小鼠(8周龄；生物资源中心)每只小鼠皮下接种5×106个HT-29-luc2细胞(Perkin Elmer)。将小鼠随机分成不同组(每组5只小鼠)。通过每3-4天用10mg/kg的抗体处理小鼠进行研究，总共进行8次静脉内注射。对照组静脉内注射PBS。在第21天使用Caliper IVIS图像系统(Perkin Elmer)测量来自单独肿瘤的生物发光。当肿瘤体积超过2,000mm3或肿瘤变得坏死或溃烂通过皮肤时，对动物实施安乐死。
研究了多剂量(15mg/kg)的mAb 6D4或7G8对人细胞系HT29-luc来源的肿瘤的治疗效果。根据图31A进行给药。在第21天，与对照相比，用mAb 7G8处理的裸小鼠显示出76.45％肿瘤大小的抑制，并且与PBS对照相比，用mAb 6D4处理的小鼠显示出50.19％肿瘤大小的抑制。抗体7G8和6D4都显示出抑制裸小鼠中HT29肿瘤异种移植物生长的治疗能力(图31A)。
实施例15：人类异种移植小鼠成像
单克隆抗体在靶向癌症免疫疗法中发挥着巨大作用。RON被认为是针对癌症治疗的靶标的理想候选者，因为它在癌细胞中过表达并且在正常细胞中最低限度地表达。靶向RON具有良好的安全性，因为RON不在成纤维细胞、内皮细胞和血液白细胞中表达。
测试抗RON小鼠mAb 7G8和6D4在人异种移植小鼠模型中抑制体内肿瘤生长的能力。对于HT-29癌细胞异种移植实验，对雌性nu/nu裸小鼠(8周龄；生物资源中心)每只小鼠皮下接种5×106个HT-29-luc2细胞(Perkin Elmer)。
将小鼠随机分成不同组(每组5只小鼠)。通过每3-4天用10mg/kg的抗体处理小鼠进行研究，总共进行8次静脉内注射。对照组静脉内注射PBS。
在第21天使用Caliper IVIS图像系统(Perkin Elmer)测量来自单独肿瘤的生物发光。当肿瘤体积超过2,000mm3或肿瘤变得坏死或溃烂通过皮肤时，对动物实施安乐死。
研究了多剂量(15mg/kg)的mAb 6D4或7G8对人细胞系HT29-luc来源的肿瘤的治疗效果。根据图31-42进行给药。在第21天，与对照相比，用mAb 7G8处理的裸小鼠显示出76.45％肿瘤大小的抑制，并且与PBS对照相比，用mAb 6D4处理的小鼠显示出50.19％肿瘤大小的抑制。抗体7G8和6D4都显示出抑制裸小鼠中HT29肿瘤异种移植物生长的治疗能力(图31-42)。
携带HT-29肿瘤的裸小鼠用于成像实验。进行研究以确定mAb 6D4和7G8是否可用作体内分子以检测癌症中表达RON的肿瘤。荧光染料(XenoLight CF750，Perkin Elmer)通过其反应基团与6D4和7G8缀合。使用Caliper IVIS图像系统(Perkin Elmer)非侵入地检测CF750的荧光信号，其中激发设定在波长710nm并且发射设定在780nm。
序列表
<110> 新加坡科技研究局
<120> 抗体
<130> 9869SG4717
<150> 10201607147P
<151> 2016-08-26
<150> 10201700393P
<151> 2017-01-17
<150> 10201700521V
<151> 2017-01-20
<150> 10201703234U
<151> 2017-05-19
<160> 150
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 1
Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr Thr
1 5
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<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 2
Ile Ser Asn Gly Gly Gly Ser Thr
1 5
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 3
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 4
Glu Val Gln Leu Glu Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
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Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 5
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 5
Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10 15
Tyr
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<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 6
Tyr Tyr Pro Asp Thr Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
1 5 10 15
Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp
20 25 30
Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
35
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 7
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 8
Glu Val Gln Leu Glu Gln Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Thr Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Tyr Ile Ser Asn Gly Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Thr Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Ser Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Arg Tyr Ala Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 9
gaggtgcagc tggagcagtc tgggggaggt ttagtgcagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcaat acctatacca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccagagaaga ggctggagtg ggtcgcatac attagtaatg gtggtggtag tacctactat 180
ccagacactg taaagggccg attcaccatc tccagagaca atgccaagaa caccctgtac 240
ctgcaaatga gcagtctgaa gtctgaggac acggccatgt attactgtgc aagaggctat 300
aggtacgctg ctatggacta ctggggtcaa ggaacctcag tcaccgtctc ctca 354
<210> 10
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位；肽编号：48
<400> 10
His Cys Pro Pro Lys Leu Thr Glu Phe His Pro His Ser Gly Pro
1 5 10 15
<210> 11
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位；肽编号：49
<400> 11
Pro His Ser Gly Pro Leu Arg Gly Ser Thr Arg Leu Thr Leu Cys
1 5 10 15
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<220>
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<400> 12
Ala Gln Val Pro Gly Ser Trp Thr Phe Gln Tyr Arg Glu Asp Pro
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位；肽编号：68
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Tyr Arg Glu Asp Pro Val Val Leu Ser Ile Ser Pro Asn Cys Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位；肽编号：69
<400> 14
Leu His Thr Arg Leu Ala Arg Leu Ser Ala Thr Glu Pro Glu Leu
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位；肽编号：29
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Asp Pro Ala Leu Pro Ala Leu Val Ser Cys Gly Ser Ser Leu Gln
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 表位；肽编号：31
<400> 16
His Asp Leu Glu Pro Gln Gly Thr Ala Val His Leu Ala Ala Pro
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<211> 337
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 17
gatattttga tgacccaaac tcctctctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagcattgta catagtaatg gaaacaccta tttggaatgg 120
tacctgcaga aaccaggcca gtctccaaag ctccttatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cactggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggaatt tattactgct ttcaaggttc acatgctccg 300
tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcagac 337
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
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1
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<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
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Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu Thr
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 21
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Thr Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
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Asp Gly Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser
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<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 22
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
1 5 10 15
Lys
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<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 23
Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr Glu Asp Phe Gly
20 25 30
Met Tyr Phe Cys
35
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 24
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 25
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 25
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Thr Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Gly Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Asn
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 26
<211> 322
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 26
gatattgtga tgacccagac tacagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tggcgtcagt 60
ctttcctgca gggccagcca aagtattaac aacaacctac actggtatca acaaaaatca 120
catgagtctc caagacttct catcaagttt gcttcccagt ccatctctgg gatcccctcc 180
aggttcagtg gcagtggatc agggacagat ttcactctca gtatcaacag tgtggagact 240
gaagattttg gaatgtattt ctgtcaacag agtaacagct ggcctctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa ac 322
<210> 27
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 27
Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr Ala
1 5
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 28
Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr
1 5
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<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 29
Ala Arg Glu Gly Pro Leu Tyr Tyr Gly Pro Ser Tyr Gly Gly Tyr Tyr
1 5 10 15
Phe Asp Tyr
<210> 30
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 30
Glu Val Gln Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser
20 25
<210> 31
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 31
Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Gly Ala
1 5 10 15
Ser
<210> 32
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 32
Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn
1 5 10 15
Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp
20 25 30
Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys
35
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 33
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 34
<211> 125
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 34
Glu Val Gln Leu Leu Glu Thr Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Gly
35 40 45
Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Gly Pro Leu Tyr Tyr Gly Pro Ser Tyr Gly Gly Tyr Tyr Phe
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 35
<211> 375
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 35
gaagtgcagc tgttggagac tgggggaggc ttagtgaagc ctggagggtc cctgaaactc 60
tcctgtgcag cctctggatt cactttcagt aactatgcca tgtcttgggt tcgccagact 120
ccagagaaga ggctggagtg gggcgcatcc attagtagtg gtggtagcac ctactatcca 180
gacagtgtga agggccgatt caccatctcc agagataatg ccaggaacat cctgtacctg 240
caaatgagca gtctgaggtc tgaggacacg gccctgtatt actgtgcaag agagggtccc 300
ctttactacg gtcctagcta cggagggtac tactttgact actggggcca aggcaccact 360
ctcacagtct cctca 375
<210> 36
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 36
Gln Arg Leu Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 37
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 37
Lys Val Ser
1
<210> 38
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 38
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr
1 5
<210> 39
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 39
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
20 25
<210> 40
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 40
Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 41
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 41
Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly
20 25 30
Val Tyr Phe Cys
35
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<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 42
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 43
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 43
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Arg Leu Val Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 44
<211> 337
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 44
gacattgtga tgacacagtc tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gaggcttgta tacagtaatg gaaacaccta tttacattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acaaagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaagtac acatgttccg 300
tggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaac 337
<210> 45
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 45
Gly Phe Ser Phe Ser Asp Tyr Trp
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
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Ile Arg Leu Lys Ser Ser Asn Tyr Ala Thr
1 5 10
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<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 47
Thr Arg Gly Asp Tyr
1 5
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 48
Asp Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser
20 25
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<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> FR2
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1 5 10 15
Glu
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 50
His Tyr Ala Glu Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp
1 5 10 15
Ser Glu Ser Ser Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Pro Glu Asp
20 25 30
Thr Gly Phe Tyr Tyr Cys
35
<210> 51
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 51
Asp Val Met Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Met Lys Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Asp Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Arg Gln Ser Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val
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Ala Glu Ile Arg Leu Lys Ser Ser Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu
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Val Tyr Leu Gln Met Asn Asn Leu Arg Pro Glu Asp Thr Gly Phe Tyr
85 90 95
Tyr Cys Thr Arg Gly Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
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<211> 342
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<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 52
gacgtgatgc tggtggagtc tggaggaggc ttggtgcaac ctggaggatc catgaaactc 60
tcctgtgttg cctctggatt cagtttcagt gactactgga tgaactgggt ccgccagtct 120
ccagagaagg ggcttgaatg ggttgctgag attagattga aatctagtaa ttatgcaaca 180
cattatgcgg agtctgtgaa agggaggttt accatctcaa gagatgattc cgaaagtagt 240
gtctacctgc aaatgaacaa cttaagacct gaagacactg gcttttatta ctgtaccagg 300
ggggactatt ggggtcaagg aacctcagtc accgtctctt ca 342
<210> 53
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 53
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Gly Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser
20 25
<210> 54
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 54
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Gly Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Asn Asn Asn
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Phe Ala Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Asn Ser Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 55
<211> 322
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 55
gatattgtga tgacccagtc tccagccacc ctgtctgtga ctccaggaga tggcgtcagt 60
ctttcctgca gggccagcca aagtattaac aacaacctac actggtatca acaaaaatca 120
catgagtctc caagacttct catcaagttt gcttcccagt ccatctctgg gatcccctcc 180
aggttcagtg gcagtggatc agggacagat ttcactctca gtatcaacag tgtggagact 240
gaagattttg gaatgtattt ctgtcaacag agtaacagct ggcctctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa ac 322
<210> 56
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 56
Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 57
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 57
Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr
1 5
<210> 58
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 58
Thr Arg Asp Gly Tyr Tyr Pro Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 59
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 59
Glu Val Gln Leu Glu Glu Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 60
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 60
Met His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10 15
Ala
<210> 61
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 61
Ser Thr Asn Gln Lys Phe Lys Asp Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr
1 5 10 15
Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Leu Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp
20 25 30
Ser Ala Val Phe Tyr Cys
35
<210> 62
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 62
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
1 5 10
<210> 63
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 63
Glu Val Gln Leu Glu Glu Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Thr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Phe Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Asp Gly Tyr Tyr Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 64
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 64
gaagtgcagc tggaggagtc agggactgtg ctggcaaggc ctggggcttc agtgaagatg 60
tcctgcaagg cttctggcta catttttacc agctactgga tgcactggat aaaacagagg 120
cctggacagg gtctggaatg gattggcgct atttatcctg gaaatagtga tactagtact 180
aatcagaagt tcaaggacaa ggccaaactg actgcagtca catccaccag cactgcctat 240
ttggaactca gcagcctgac aaatgaggac tcagcggtct tttactgtac aagagatggt 300
tactacccgt ttgcttactg gggccaaggg actctggtca ctgtctctgc a 351
<210> 65
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 65
Gln Ser Leu Val Tyr Ile Asn Gly Asp Thr Tyr
1 5 10
<210> 66
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 66
Arg Val Ser
1
<210> 67
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 67
Ser Gln Thr Lys His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 68
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 68
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
20 25
<210> 69
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 69
Phe His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 70
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 70
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys
1 5 10
<210> 71
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 71
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ile
20 25 30
Asn Gly Asp Thr Tyr Phe His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Thr
85 90 95
Lys His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys
100 105 110
<210> 72
<211> 338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 72
gacattgtgc tgacccaatc tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta tatattaatg gagacaccta ttttcattgg 120
tacttgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acagagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaactaa acatgttccg 300
tacacgttcg gaggggggac caagctggaa atgaaacg 338
<210> 73
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 73
Gly Tyr Glu Phe Ser Lys Tyr Trp
1 5
<210> 74
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 74
Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Ile
1 5
<210> 75
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 75
Ala Arg Trp Tyr Tyr Gly Ser Asn Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 76
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 76
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 77
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 77
Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10 15
Gln
<210> 78
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 78
Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys
1 5 10 15
Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Glu
20 25 30
Ser Ala Val Tyr Phe Cys
35
<210> 79
<211> 120
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 79
Glu Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Glu Phe Ser Lys Tyr
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gln Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Ile Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Glu Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Trp Tyr Tyr Gly Ser Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 80
<211> 360
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 80
gaggtccagc tgcagcagcc tggggctgag ctggtgaggc ctgggtcctc agtgaagatt 60
tcctgcaagg cttctggcta tgaattcagt aagtactgga tgaactgggt gaagcagagg 120
cctggacagg gtcttgagtg gattggacag atttttccag gagacggtga tattaattac 180
aatggaaaat tcaagggtaa agccacactg actgcagaca aatcctccag cacagcctac 240
atgcagctca gcagcctaac atctgaggaa tctgcggtct atttctgtgc aagatggtac 300
tacggtagta actatgctat ggactactgg ggtcaaggaa cctcagtcac cgtctcctca 360
<210> 81
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 81
Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Ser Asn Gln Lys Asn Tyr
1 5 10
<210> 82
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 82
Trp Ala Ser
1
<210> 83
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 83
Gln Gln Tyr Tyr Ala Tyr Arg Thr
1 5
<210> 84
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 84
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Ile Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser
20 25
<210> 85
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 85
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 86
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 86
Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala
20 25 30
Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 87
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 87
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Val Gly
1 5 10 15
Glu Lys Ile Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser
20 25 30
Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr
65 70 75 80
Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln
85 90 95
Tyr Tyr Ala Tyr Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 88
<211> 337
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 88
gacattgtga tgacccagac tccatcctcc ctagctgtgt cagttggaga gaagattact 60
atgagctgca agtccagtca gagcctttta tatagtagca atcaaaagaa ctacttggcc 120
tggtaccagc agaaaccagg gcagtctcct aaactgctga tttactgggc atccactagg 180
gaatctgggg tccctgatcg cttcacaggc agtggatctg ggacagattt cactctcacc 240
atcagcagtg tgaaggctga agacctggca gtttattact gtcagcaata ttatgcctat 300
cggacgttcg gtggaggcac caagctggaa atcaaac 337
<210> 89
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 89
Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 90
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 90
Ile Tyr Pro Gly Asn Asn Asp Thr
1 5
<210> 91
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 91
Thr Arg Asp Gly Phe Tyr Pro Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 92
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 92
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 93
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 93
Met His Trp Ile Lys Glu Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10 15
Ala
<210> 94
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 94
Ser Thr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr
1 5 10 15
Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Leu Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp
20 25 30
Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
35
<210> 95
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 95
Glu Val Lys Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Met His Trp Ile Lys Glu Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Asn Asp Thr Ser Thr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Lys Leu Thr Ala Val Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Glu Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Asp Gly Phe Tyr Pro Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 96
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 96
gaggttaagc tgcagcagtc tgggactgtg ctggcaaggc ctgggacttc agtgaagatg 60
tcttgcaagg cttctggcta catttttacc agctactgga tgcattggat aaaagagagg 120
cctggacagg gtctggaatg gattggcgct atttatcctg gaaataatga tactagtact 180
aatcagaagt tcaagggcaa ggccaaactg actgcagtca catccaccag cactgcctat 240
ttggaactca gcagcctgac aaatgaggac tcagcggtct attactgtac aagagatggt 300
ttttacccgt ttgcttactg gggccaaggg actctggtca ctgtctctgc a 351
<210> 97
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 97
Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
20 25
<210> 98
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 98
Asp Ile Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ile
20 25 30
Asn Gly Asp Thr Tyr Phe His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Thr
85 90 95
Lys His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys
100 105 110
<210> 99
<211> 338
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 99
gatattgtgc tgacccagac tccactctcc ctgcctgtca gtcttggaga tcaagcctcc 60
atctcttgca gatctagtca gagccttgta tatattaatg gagacaccta ttttcattgg 120
tacctgcaga agccaggcca gtctccaaag ctcctgatct acagagtttc caaccgattt 180
tctggggtcc cagacaggtt cagtggcagt ggatcaggga cagatttcac actcaagatc 240
agcagagtgg aggctgagga tctgggagtt tatttctgct ctcaaactaa acatgttccg 300
tacacgttcg gaggggggac caagctggaa atgaaacg 338
<210> 100
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 100
Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 101
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 101
Ile Asn Pro Ile Thr Gly Gly Thr
1 5
<210> 102
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 102
Ala Arg Met Gly Arg Asp Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 103
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 103
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ser Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 104
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 104
Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10 15
Gly
<210> 105
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 105
Asp Phe Asn Glu Lys Phe Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Leu Ala Ala
1 5 10 15
Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp
20 25 30
Ser Ala Val Tyr Phe Cys
35
<210> 106
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 106
Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Ser Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Ile Thr Gly Gly Thr Asp Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Leu Ala Ala Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Met Gly Arg Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 107
<211> 350
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 107
caggtgcagc tgaagcagtc agggtctgaa ctggtgaaac ctggggcttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta catcttcacc agctactata tgtactgggt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattgggggg attaatccta tcactggtgg tactgacttc 180
aatgagaagt tcaaggacaa ggccacactg actctggccg catcctccag cacagcctac 240
atacaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aagaatggga 300
cgggatgcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc 350
<210> 108
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 108
Lys Ser Val Ser Thr Ser Gly Tyr Ser Tyr
1 5 10
<210> 109
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 109
Leu Val Ser
1
<210> 110
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 110
Gln His Ile Arg Glu Leu Tyr Thr
1 5
<210> 111
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 111
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Tyr Arg Ala Ser
20 25
<210> 112
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 112
Met His Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 113
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 113
Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala
20 25 30
Thr Tyr Tyr Cys
35
<210> 114
<211> 110
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 114
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Tyr Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg
85 90 95
Glu Leu Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 115
<211> 332
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 115
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 60
atctcataca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct atagttatat gcactggaac 120
caacagaaac caggacagcc acccagactc ctcatctatc ttgtatccaa cctagaatct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acattaggga gctttacacg 300
ttcggagggg ggaccaagct ggaaataaaa cg 332
<210> 116
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 116
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 117
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 117
Ile Asn Pro Thr Thr Gly Gly Thr
1 5
<210> 118
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 118
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 119
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 119
Met Tyr Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10 15
Gly
<210> 120
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 120
Asp Phe Asn Glu Asn Phe Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Leu Ala Thr
1 5 10 15
Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp
20 25 30
Ser Ala Val Tyr Phe Cys
35
<210> 121
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 121
Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Thr Thr Gly Gly Thr Asp Phe Asn Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Leu Ala Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Met Gly Arg Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 122
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 122
caggtgcagc tgaaggagtc aggggctgaa ctggtgaaac ctgggacttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactata tgtactggtt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattgggggg attaatccta ccactggtgg tactgacttc 180
aatgagaact tcaagaacaa ggccacactg actttggcca catcctccag cacagcctac 240
atacaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aagaatggga 300
cgggatgcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc a 351
<210> 123
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 123
Gln His Ile Arg Glu Leu Thr Arg
1 5
<210> 124
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 124
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Tyr Arg Ala Ser
20 25
<210> 125
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 125
Met His Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Arg Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 126
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 126
Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala
20 25 30
Thr Tyr Tyr Cys
35
<210> 127
<211> 108
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 127
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Tyr Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Tyr Met His Trp Asn Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Asn Ile His
65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln His Ile Arg
85 90 95
Glu Leu Thr Arg Ser Glu Gly Gly Pro Ser Trp Lys
100 105
<210> 128
<211> 324
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 128
gacattgtgc tgacacagtc tcctgcttcc ttagctgtat ctctggggca gagggccacc 60
atctcataca gggccagcaa aagtgtcagt acatctggct atagttatat gcactggaac 120
caacagaaac caggacagcc acccagactc ctcatctatc ttgtatccaa cctagaatct 180
ggggtccctg ccaggttcag tggcagtggg tctgggacag acttcaccct caacatccat 240
cctgtggagg aggaggatgc tgcaacctat tactgtcagc acattaggga gcttacacgt 300
tcggaggggg gaccaagctg gaaa 324
<210> 129
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 129
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 130
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 130
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Thr
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Thr Thr Gly Gly Thr Asp Phe Asn Glu Asn Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Leu Ala Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Ile Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Met Gly Arg Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 131
<211> 351
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 131
gaggttcagc tgcagcagtc tggggctgaa ctggtgaaac ctgggacttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta caccttcacc agctactata tgtactggtt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattgggggg attaatccta ccactggtgg tactgacttc 180
aatgagaact tcaagaacaa ggccacactg actttggcca catcctccag cacagcctac 240
atacaactca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aagaatggga 300
cgggatgcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcctc a 351
<210> 132
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 132
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser
1 5 10
<210> 133
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 133
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ser Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Ile Asn Pro Ile Thr Gly Gly Thr Asp Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Asn Lys Ala Thr Leu Thr Leu Ala Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Ile His Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Ala Arg Met Gly Arg Asp Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser
115
<210> 134
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 134
gaggttcagc tgcagcagtc tgggtctgaa ctggtgaaac ctggggcttc agtgaagttg 60
tcctgcaagg cttctggcta catcttcacc agctactata tgtactgggt gaagcagagg 120
cctggacaag gccttgagtg gattgggggg attaatccta tcactggtgg tactgacttc 180
aatgagaagt tcaagaacaa ggccacactg actctggcca catcctccag cacagcctac 240
atacatctca gcagcctgac atctgaggac tctgcggtct atttctgtgc aagaatggga 300
cgggatgcta tggactactg gggtcaagga acctcagtca ccgtctcc 348
<210> 135
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 135
Asp Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala
1 5
<210> 136
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 136
Ile Leu Tyr Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 137
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 137
Ala Ser Leu Gly Arg Gly Gly Ser
1 5
<210> 138
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 138
Leu Glu Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
1 5 10 15
Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr
20 25
<210> 139
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 139
Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10 15
Tyr
<210> 140
<211> 38
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 140
Thr Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser Arg Val Ser Ile Thr Arg Asp Thr
1 5 10 15
Ser Lys Asn Gln Phe Phe Leu His Leu Asp Ser Val Thr Thr Glu Asp
20 25 30
Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
35
<210> 141
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 141
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Ala Val Ser Ser
1 5 10
<210> 142
<211> 116
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 142
Leu Glu Val Lys Leu Glu Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser
1 5 10 15
Gln Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Asp Tyr Ser Ile Thr Ser
20 25 30
Asp Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu
35 40 45
Trp Met Gly Tyr Ile Leu Tyr Ser Gly Ser Thr Thr Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Phe Leu His Leu Asp Ser Val Thr Thr Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Ser Leu Gly Arg Gly Gly Ser Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu
100 105 110
Ala Val Ser Ser
115
<210> 143
<211> 348
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链可变区
<400> 143
cttgaggtta agctggagca gtcaggacct ggcctggtga aaccttctca gtctctgtcc 60
ctcacctgca ctgtcactga ctactcaatc accagtgatt atgcctggaa ctggatccgg 120
caatttccag gaaacaaact ggagtggatg ggttacatac tctacagtgg ttccactacg 180
tacaatccgt ctctcaaaag tcgagtctct atcactcgag acacatccaa gaaccagttc 240
ttcctgcact tggattctgt gactactgag gacgctgcca catattactg tgcaagcctc 300
gggcgtgggg ggtcctgggg ccagggcacc actctcgcag tctcctca 348
<210> 144
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 144
Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 145
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 145
Phe Gln Gly Ser His Ala Pro Trp Thr
1 5
<210> 146
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR1
<400> 146
Asp Ile Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser
20 25
<210> 147
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR2
<400> 147
Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile
1 5 10 15
Tyr
<210> 148
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR3
<400> 148
Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly
20 25 30
Ile Tyr Tyr Cys
35
<210> 149
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> FR4
<400> 149
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Arg
1 5 10
<210> 150
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链可变区
<400> 150
Asp Ile Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Ile Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Ala Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Arg
100 105 110

Claims (31)

1.一种抗原结合结构域，其包含CDRH1、CDRH2和CDRH3的重链CDR和/或CDRL1、CDRL2和CDRL3的轻链CDR，其中
(a)CDRH1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:45、SEQ IDNO:56、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:89、SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:116和SEQ ID NO:135或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH1序列；
(b)CDRH2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:57、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:90、SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:117和SEQ ID NO:136；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH2序列；
(c)CDRH3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:47、SEQ IDNO:58、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:91、SEQ ID NO:102和SEQ ID NO:137；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRH3序列；
(d)CDRL1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:65、SEQ IDNO:81、SEQ ID NO:108和SEQ ID NO:144；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL1序列；
(e)CDRL2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:66、SEQ IDNO:82和SEQ ID NO:109；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL2序列；和
(f)CDRL3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:83、SEQ ID NO:220、SEQ ID NO:123和SEQ ID NO:145；或与其有1或2个氨基酸不同的CDRL2序列。
2.一种抗原特异性结合结构域，其包含CDRH1、CDRH2、CDRH3、CDRL1、CDRL2和CDRL3，其中：
(a)CDRH1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:27、SEQ ID NO:45、SEQ IDNO:56、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:89和SEQ ID NO:100、SEQ ID NO:116、SEQ ID NO:135和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换、缺失或添加的CDRH1；
(b)CDRH2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:28、SEQ ID NO:46、SEQ IDNO:57、SEQ ID NO:74、SEQ ID NO:90和SEQ ID NO:101、SEQ ID NO:117、SEQ ID NO:136和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换、缺失或添加的CDRH2；
(c)CDRH3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:29、SEQ ID NO:47、SEQ IDNO:58、SEQ ID NO:75、SEQ ID NO:91和SEQ ID NO:102、SEQ ID NO:137和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换、缺失或添加的CDRH3；
(d)CDRL1选自由以下组成的组：SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:65、SEQ IDNO:81、SEQ ID NO:108、SEQ ID NO:144和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换、缺失或添加的CDRL1；
(e)CDRL2选自由以下组成的组：SEQ ID NO:19、SEQ ID NO:37、SEQ ID NO:66、SEQ IDNO:82、SEQ ID NO:109和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换、缺失或添加的CDRL2；和
(f)CDRL3选自由以下组成的组：SEQ ID NO:20、SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:67、SEQ IDNO:83、SEQ ID NO:110、SEQ ID NO:123、SEQ ID NO:145和与其中任一者的不同之处在于1或2个氨基酸被替换、缺失或添加的CDRL3。
3.根据权利要求1或2所述的抗原特异性结合结构域，其中CDRH1是SEQ ID NO:1，CRDH2是SEQ ID NO:2，并且CDRH3是SEQ ID NO:3或抗原特异性结合结构域，其中使用一个或多个被修饰序列1、2和3，并且修饰独立地选自1或2个氨基酸的替换、缺失或添加。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗原特异性结合结构域，其中所述重链CDR选自由以下组成的组
(a)所述CDRH1是SEQ ID NO:1，所述CRDH2是SEQ ID NO:2，所述CRDH3是SEQ ID NO:3；
(b)所述CDRH1是SEQ ID NO:27，所述CRDH2是SEQ ID NO:28，所述CRDH3是SEQ ID NO:29；
(c)所述CDRH1是SEQ ID NO:45，所述CRDH2是SEQ ID NO:46，所述CRDH3是SEQ ID NO:47；
(d)所述CDRH1是SEQ ID NO:56，所述CRDH2是SEQ ID NO:57，所述CRDH3是SEQ ID NO:58；
(e)所述CDRH1是SEQ ID NO:73，所述CRDH2是SEQ ID NO:74，所述CRDH3是SEQ ID NO:75；
(f)所述CDRH1是SEQ ID NO:89，所述CRDH2是SEQ ID NO:90，所述CRDH3是SEQ ID NO:91；
(g)所述CDRH1是SEQ ID NO:100，所述CRDH2是SEQ ID NO:101，所述CRDH3是SEQ IDNO:102；和
(h)所述CDRH1是SEQ ID NO:135，所述CRDH2是SEQ ID NO:136，所述CRDH3是SEQ IDNO:137。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗原特异性结合结构域，其中所述轻链CDR选自由以下组成的组
(a)所述CDRL1是SEQ ID NO:18，所述CRDL2是SEQ ID NO:19，所述CRDL3是SEQ ID NO:20；
(b)所述CDRL1是SEQ ID NO:36，所述CRDL2是SEQ ID NO:37，所述CRDL3是SEQ ID NO:38；
(c)所述CDRL1是SEQ ID NO:18，所述CRDL2是SEQ ID NO:19，所述CRDL3是SEQ ID NO:20；
(d)所述CDRL1是SEQ ID NO:65，所述CRDL2是SEQ ID NO:66，所述CRDL3是SEQ ID NO:67；
(e)所述CDRL1是SEQ ID NO:81，所述CRDL2是SEQ ID NO:82，所述CRDL3是SEQ ID NO:83；
(f)所述CDRL1是SEQ ID NO:108，所述CRDL2是SEQ ID NO:109，所述CRDL3是SEQ IDNO:110；和
(g)所述CDRL1是SEQ ID NO:144，所述CRDL2是SEQ ID NO:37，所述CRDL3是SEQ ID NO:145。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗原特异性结合结构域，其中可变重结构域具有选自由以下组成的组的序列：
(i)SEQ ID NO:8；
(ii)SEQ ID NO:34；
(iii)SEQ ID NO:51；
(iv)SEQ ID NO:63；
(v)SEQ ID NO:79；
(vi)SEQ ID NO:95；
(vii)SEQ ID NO:106；和
(viii)SEQ ID NO:142。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗原特异性结合结构域，其中可变轻结构域具有选自由以下组成的组的序列：
(i)SEQ ID NO:25；
(ii)SEQ ID NO:43；
(iii)SEQ ID NO:54；
(iv)SEQ ID NO:71；
(v)SEQ ID NO:87；
(vi)SEQ ID NO:98；
(vii)SEQ ID NO:114；和
(viii)SEQ ID NO:150。
8.一种嵌合抗原受体，其包含根据权利要求1至7中任一项所述的抗原结合结构域。
9.一种分离的抗体，其包含根据权利要求1至7中任一项所述的抗原结合结构域。
10.根据权利要求9所述的抗体，其中抗体分子选自多特异性抗体、全长抗体或抗体结合片段。
11.根据权利要求10所述的抗体，其中所述多特异性抗体是双特异性抗体。
12.根据权利要求10或11所述的抗体，其中所述双特异性抗体是双特异性T细胞衔接器。
13.根据权利要求12所述的抗体，其中所述双特异性抗体包含特异性结合第一RON(巨噬细胞刺激蛋白受体或RON-Recepteur d'Original Nantais)表位的一个结合结构域，和特异性结合与所述第一RON表位不同的第二RON表位的第二结合结构域。
14.根据权利要求13所述的抗体，其中第一RON结合结构域包含分别如SEQ ID NO:1、2、3所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和如SEQ ID NO:18、19和20中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3。
15.根据权利要求9至14中任一项所述的抗体，其包含第二RON结合结构域，所述第二RON结合结构域包含分别如SEQ ID NO:27、28、29中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和如SEQID NO:36、37和38中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3。
16.根据权利要求9至15中任一项所述的抗体，其中所述抗体包含效应子功能。
17.根据权利要求9至16中任一项所述的抗体，其中所述抗体缀合于有效荷载。
18.根据权利要求17所述的抗体，其中所述有效荷载选自由以下组成的组：毒素、聚合物、生物活性蛋白质、核酸及其片段、放射性核素螯合金属、纳米颗粒和报道基团。
19.根据权利要求18所述的抗体，其中所述毒素选自由以下组成的组：澳瑞他汀、MMAF(单甲基澳瑞他汀F)、吡咯并苯并二氮杂卓(PBD)、多柔比星、多卡米新、美登木素生物碱、calocheamicin、多拉司他汀、美登素、α-鹅膏蕈碱和微管溶素。
20.一种药物组合物，其包含根据权利要求9至19中任一项所述的抗体和赋形剂、稀释剂和/或载体。
21.根据权利要求20所述的药物组合物，其包含至少两种根据权利要求9至19中任一项所述的抗原特异性抗体。
22.根据权利要求21所述的药物组合物，其中所述至少两种抗原特异性抗体中的一种包含分别如SEQ ID NO:1、2、3中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和如SEQ ID NO:18、19和20中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3；任选地，其中所述至少两种抗体的第二抗体包含分别如SEQID NO:27、28、29中所示的CDRH1、CDRH2和CDRH3，和如SEQ ID NO:36、37和38中所示的CDRL1、CDRL2和CDRL3。
23.根据权利要求1至7中任一项所述的抗原结合结构域，或根据权利要求8所述的嵌合抗原受体，或根据权利要求9至19中任一项所述的抗体，或根据权利要求20至22中任一项所述的药物组合物，其用于疗法中。
24.一种预防或治疗患者的癌症或纤维化的方法，其包括对有需要的所述患者施用治疗有效量的根据权利要求1至7中任一项所述的抗原结合结构域，或根据权利要求8所述的嵌合抗原受体，或根据权利要求9至19中任一项所述的抗体，或根据权利要求20至22中任一项所述的药物组合物。
25.根据权利要求24所述的方法，其中所述患者是患者群体，其特征在于构成所述群体的患者具有RON阳性肿瘤。
26.根据权利要求24或25所述的方法，其中所述患者患有RON阳性和C-MET阳性肿瘤。
27.根据权利要求24至26中任一项所述的方法，其包括在治疗前鉴定所述患者患有RON阳性肿瘤的步骤。
28.根据权利要求1至7中任一项所述的抗原结合结构域或根据权利要求8所述的嵌合抗原受体或根据权利要求9至19中任一项所述的抗体或根据权利要求20至22中任一项所述的药物组合物在制造用于治疗癌症或纤维化的药物中的用途。
29.一种与包含SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:51、SEQ IDNO:63、SEQ ID NO:79、SEQ ID NO:95、SEQ ID NO:106、SEQ ID NO:121、SEQ ID NO:130、SEQ ID NO:133或142的可变重链区(VH)的抗体交叉阻断或结合相同表位的抗体。
30.一种与包含可变重链区/可变轻链区(VH/VL)对的抗体交叉阻断或结合相同表位的抗体，所述可变重链区/可变轻链区(VH/VL)对选自SEQ ID NO:8和25、SEQ ID NO:34和43、SEQ ID NO:51和54、SEQ ID NO:63和71、SEQ ID NO:79和87、SEQ ID NO:95和98、SEQ IDNO:106和114、SEQ ID NO:121和130、或SEQ ID NO:142和150。
31.一种评估癌症状态的离体方法，其中所述方法包括：
a)扫描已知包括所述癌症的肿瘤的患者或所述患者的特定部位，其中所述患者在第一时间点已被施用标记形式的抗体，其中所述抗体如权利要求9至19中任一项中所定义，
b)在一个或多个其他时间点重复a)，和
比较来自两个或更多个时间点的结果以评估所述癌症的状态。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114317454A (zh) * 2022-03-01 2022-04-12 天津一瑞生物科技股份有限公司 一种鼠抗oxa-48型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20170151281A1 (en) 2015-02-19 2017-06-01 Batu Biologics, Inc. Chimeric antigen receptor dendritic cell (car-dc) for treatment of cancer
EP3876977A1 (en) 2018-11-06 2021-09-15 The Regents Of The University Of California Chimeric antigen receptors for phagocytosis
US11026973B2 (en) 2019-04-30 2021-06-08 Myeloid Therapeutics, Inc. Engineered phagocytic receptor compositions and methods of use thereof
AU2020341479A1 (en) 2019-09-03 2022-03-31 Myeloid Therapeutics, Inc. Methods and compositions for genomic integration
WO2021066751A1 (en) * 2019-10-02 2021-04-08 Aslan Pharmaceuticals Pte. Ltd. Antigen specific binding domains and antibody molecules
US10980836B1 (en) 2019-12-11 2021-04-20 Myeloid Therapeutics, Inc. Therapeutic cell compositions and methods of manufacturing and use thereof
WO2021202592A2 (en) * 2020-03-30 2021-10-07 Oregon Health & Science University Monoclonal antibodies for intracellular delivery of payloads
JP2023549140A (ja) 2020-11-04 2023-11-22 マイエロイド・セラピューティクス，インコーポレーテッド 操作されたキメラ融合タンパク質組成物およびその使用方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1753991A (zh) * 2003-02-28 2006-03-29 三菱制药株式会社 单克隆抗体及编码该单克隆抗体的基因、杂交瘤、药物组合物和诊断试剂
WO2015095002A1 (en) * 2013-12-16 2015-06-25 Texas Tech University System Anti-ron monoclonal antibodies as a cytotoxic drug delivery system for targeted cancer therapy

Family Cites Families (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4741900A (en) 1982-11-16 1988-05-03 Cytogen Corporation Antibody-metal ion complexes
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
DK336987D0 (da) 1987-07-01 1987-07-01 Novo Industri As Immobiliseringsmetode
GB8719042D0 (en) 1987-08-12 1987-09-16 Parker D Conjugate compounds
GB8720833D0 (en) 1987-09-04 1987-10-14 Celltech Ltd Recombinant dna product
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
GB8907617D0 (en) 1989-04-05 1989-05-17 Celltech Ltd Drug delivery system
GB8928874D0 (en) 1989-12-21 1990-02-28 Celltech Ltd Humanised antibodies
WO1992002551A1 (en) 1990-08-02 1992-02-20 B.R. Centre Limited Methods for the production of proteins with a desired function
GB9112536D0 (en) 1991-06-11 1991-07-31 Celltech Ltd Chemical compounds
GB9113120D0 (en) 1991-06-18 1991-08-07 Kodak Ltd Photographic processing apparatus
GB9120467D0 (en) 1991-09-26 1991-11-06 Celltech Ltd Anti-hmfg antibodies and process for their production
DE4137202A1 (de) 1991-11-12 1993-05-13 Industrieanlagen Betriebsges Korrosionsgeschuetzte laengenverstellung
FR2716640B1 (fr) 1994-02-28 1996-05-03 Procedes Machines Speciales Dispositif de centrage et de blocage d'une pièce en vue de son rodage à l'aide d'un rodoir à expansion.
US5980898A (en) 1996-11-14 1999-11-09 The United States Of America As Represented By The U.S. Army Medical Research & Material Command Adjuvant for transcutaneous immunization
GB9625640D0 (en) 1996-12-10 1997-01-29 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
GB9812545D0 (en) 1998-06-10 1998-08-05 Celltech Therapeutics Ltd Biological products
US6908963B2 (en) 2001-10-09 2005-06-21 Nektar Therapeutics Al, Corporation Thioester polymer derivatives and method of modifying the N-terminus of a polypeptide therewith
US7993864B2 (en) 2002-12-03 2011-08-09 Ucb Pharma S.A. Assay for identifying antibody producing cells
GB0312481D0 (en) 2003-05-30 2003-07-09 Celltech R&D Ltd Antibodies
GB0315450D0 (en) 2003-07-01 2003-08-06 Celltech R&D Ltd Biological products
GB0315457D0 (en) 2003-07-01 2003-08-06 Celltech R&D Ltd Biological products
PL1644412T5 (pl) 2003-07-01 2019-01-31 Ucb Biopharma Sprl Modyfikowane fragmenty Fab przeciwciała
CN103664802B (zh) 2003-08-14 2015-08-05 阿雷生物药品公司 作为受体酪氨酸激酶抑制剂的喹唑啉类似物
GB0411186D0 (en) 2004-05-19 2004-06-23 Celltech R&D Ltd Biological products
GB0412181D0 (en) 2004-06-01 2004-06-30 Celltech R&D Ltd Biological products
GB0619291D0 (en) 2006-09-29 2006-11-08 Ucb Sa Altered antibodies
UY31478A1 (es) * 2007-11-21 2009-07-17 Inhibicion del receptor para la proteina estimulante del macrofago (ron) y métodos para el tratamiento de lo mismo
AU2009299555B2 (en) 2008-10-02 2014-01-16 Respivert Limited p38 map kinase inhibitors
TWI480050B (zh) * 2009-02-10 2015-04-11 Daiichi Sankyo Co Ltd 抗－ｍｓｔ１ｒ抗體及其用途
WO2011090762A1 (en) 2009-12-29 2011-07-28 Emergent Product Development Seattle, Llc Heterodimer binding proteins and uses thereof
JP2013533746A (ja) * 2010-07-06 2013-08-29 アベオ ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド 抗ｒｏｎ抗体
UY33492A (es) 2010-07-09 2012-01-31 Abbott Lab Inmunoglobulinas con dominio variable dual y usos de las mismas
US10421960B2 (en) 2011-09-16 2019-09-24 The Trustees Of The University Of Pennsylvania RNA engineered T cells for the treatment of cancer

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1753991A (zh) * 2003-02-28 2006-03-29 三菱制药株式会社 单克隆抗体及编码该单克隆抗体的基因、杂交瘤、药物组合物和诊断试剂
WO2015095002A1 (en) * 2013-12-16 2015-06-25 Texas Tech University System Anti-ron monoclonal antibodies as a cytotoxic drug delivery system for targeted cancer therapy

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HANG-PING YAO: "Agonistic monoclonal antibodies potentiate tumorigenic and invasive activities of splicing variant of the RON receptor tyrosine kinase", 《CANCER BIOLOGY & THERAPY 》 *
张怡等: "RON蛋白在肝癌组织的表达及临床意义", 《浙江预防医学》 *
王涛 等: "巨噬细胞刺激蛋白及其受体酪氨酸激酶RON在慢性阻塞性肺疾病大鼠气道炎症中的作用", 《中国呼吸与危重监护杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114317454A (zh) * 2022-03-01 2022-04-12 天津一瑞生物科技股份有限公司 一种鼠抗oxa-48型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用
CN114317454B (zh) * 2022-03-01 2023-10-03 天津一瑞生物科技股份有限公司 一种鼠抗oxa-48型碳青霉烯酶杂交瘤细胞株，单克隆抗体及应用

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Publication number Publication date
US11225515B2 (en) 2022-01-18
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JP2020500834A (ja) 2020-01-16
SG11201901597UA (en) 2019-03-28
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WO2018038684A1 (en) 2018-03-01

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