CN109912613B - 苯基双内酯类化合物及其在制备抗补体药物中的用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于中药制药技术领域，具体涉及苯基双内酯类化合物及其在制备抗补体药物中的用途。本发明采用活性导向分离方法从蓼科(Polygonaceae)植物火炭母(Polygonum chinensis Linn)的全草中分离提取到苯基内酯类化合物maysedilactone C和maysedilactone D，经抗补体活性评价试验，结果表明，所述化合物对补体系统的经典及旁路途径均有较强的抑制作用，其中，对经典途径的抑制作用(CH50)为0.72～0.94mM，对旁路途径的抑制作用(AP50)为0.98～1.20mM。本发明的化合物可制备抗补体药物和进一步制备治疗与补体相关疾病的药物。
Description
技术领域
本发明属中药制药技术领域，涉及中药火炭母中分离鉴定的苯基双内酯类化合物，具体涉及分离鉴定的苯基双内酯类化合物及其在制备抗补体药物中的用途
背景技术
现有技术公开了火炭母为蓼科蓼属植物火炭母Polygonum chinensis Linn.的干燥地上部分，是我国南方传统的清热解毒中药，也是王老吉凉茶等的主要组成药物。味辛、苦，性凉。具有清热利湿、凉血解毒、平肝明目、活血舒筋等功效。现代药理研究表明本品具有抗病原微生物作用，抗炎镇痛作用，对平滑肌和骨骼肌的作用，抗氧化及清除自由基作用等。
研究显示，上述与火炭母治疗相关的疾病及其药理活性，多与补体系统相关，而补体系统在维持机体免疫平衡，消灭外来微生物方面起着非常重要的作用，研究显示，若干病原微生物会引起人体内的自身免疫系统过度激活，进而导致严重后果，例如非典、流感、类风湿性关节炎等，因此，从治疗相关疾病的传统中药中寻找低毒、高效的补体抑制剂已引起本领域技术人员的关注。
本申请的发明人拟提供中药火炭母中分离鉴定的苯基双内酯类化合物及其在制药中的新的用途，尤其是在制备补体抑制剂中的用途。
发明内容
本发明的目的是提供火炭母苯基双内酯类的新的药物用途，尤其涉及火炭母中苯基双内酯类化合物及其在制备抗补体药物中的用途。
本发明应用现代药理筛选方法，对传统清热解毒中药通过体外溶血实验对其活性物质进行研究，从蓼属植物火炭母的干燥地上部分中活性导向分离得到苯基双内酯类化合物并证明其具有较强的抗补体活性。
本发明采用活性导向分离方法从蓼科(Polygonaceae)植物火炭母(Polygonumchinensis Linn)的全草中分离提取到苯基内酯类化合物maysedilactone C和maysedilactone D，经抗补体活性评价试验，结果表明，所述化合物对补体系统的经典及旁路途径均有较强的抑制作用，其中，对经典途径的抑制作用(CH50)为0.72～0.94mM，对旁路途径的抑制作用(AP50)为0.98～1.20mM。本发明的化合物可制备抗补体药物和进一步制备治疗与补体相关疾病的药物。
本发明涉及的火炭母为我国岭南地区传统常用的清热解毒中药；本发明从火炭母全草中活性导向分离得到苯基双内酯类化合物1和化合物2，并经体外经典旁路实验证实所述化合物其具有较好的抗补体活性。
本发明涉及的苯基内酯类化合物包括：
化合物maysedilactone C(1)和化合物maysedilactone D(2)。
本发明所述的苯基双内酯类化合物具有如下结构通式：
当R＝CHOHCH2OH时，所述化合物为maysedilactone C(1)；
当
时，所述化合物为maysedilactone D(2)。
本发明所述的化合物通过下述方法制备：
取火炭母全草95％乙醇加热回流提取3次，提取物浓缩后用水混悬，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到活性部位正丁醇，取浸膏湿法上大孔树脂D101用H2O/EtOH(30,60,95％,v/v)获得三个流分Fr.B1-Fr.B3。活性流分在经过ODS C18中压快速制备柱以CH3OH-H2O(25:75to 100:0)洗脱获得7个流分Fr.B2fractions(A-G).所有流分经半制备柱纯化，从Fr.B2fraction A获得化合物maysedilactone C(1)和化合物maysedilactone D(2)(CH3CN-H2O-CH3COOH 25:75:0.05)。
经过进一步鉴定，所述化合物1和2的1H(400MHz)和13C(100MHz)NMR数据如表1所示：
化合物maysedilactone C(1)为淡棕色不定型粉末；ESI-MS m/z 324.9[M+H]+(C15H16O8)；[α]D 20＝-6.5(C＝0.2,MeOH).UV(MeOH):λmax 226.0和276.0nm；IR(KBr)νmax3427,2924,1765,1716,1237cm-1；1H和13C NMR(CD3OD)数据见表1。
化合物maysedilactone D(2)为淡棕色不定型粉末；ESI-MS m/z 365.13[M+H]+；(C18H20O8)；[α]D 20＝-10(C＝0.2,MeOH).UV(MeOH):λmax 225.0和277.0nm；IR(KBr)νmax 3437,2928,1755,1716,1237cm-1；1H and 13C NMR(DMSO-d6)数据如表1所示。
表1 化合物1(CD3OD)和化合物2(DMSO-d6)的1H(400MHz)和13C NMR(100MHz)数据(δin ppm)
本发明进行了体外抗补体活性测试，结果表明，所述苯基双内酯类化合物对补体系统的经典途径和旁路途径均有较强的抑制作用(如表2所示)；
表2 化合物1和2对补体系统经典途径和旁路途径的抑制作用(mean±SD,n＝3)
本发明的苯基双内酯类化合物可用于制备抗补体药物。本发明的苯基双内酯类化合物可进一步制备治疗与补体相关疾病的药物，如由病原微生物引起人体的自身免疫系统过度激活进而导致严重的后果等疾患，如非典、流感、类风湿性关节炎等疾患。
附图说明
图1，化合物1和2的制备流程图。
具体实施方式
实施例1.制备苯基双内酯类化合物
取火炭母(Polygonum chinense Linn.)药材10kg，粉碎，以95％乙醇冷浸提取3次，提取物浓缩后水混悬，分别用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到活性部位正丁醇300g，取浸膏250g湿法上大孔树脂D101用H2O/EtOH(30,60,95％,v/v)获得三个流分Fr.B1-Fr.B3。活性流分在经过ODS C18中压快速制备柱以CH3OH-H2O(25:75 to 100:0)洗脱获得7个Fr.B2fractions(A-G).所有流分经半制备柱纯化，从Fr.B2fraction A获得化合物maysedilactone C(1)和化合物maysedilactone D(2)(CH3CN-H2O-CH3COOH 25:75:0.05)；
经进一步鉴定，所得化合物1和2的核磁数据如表1所示。
实施例2.体外抗补体经典途径实验
取补体(豚鼠血清)0.1mL，加入巴比妥缓冲液(BBS)配制成1:10的溶液，用BBS对倍稀释成1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640和1：1280的溶液。取1:1000的溶血素、各浓度补体及2％羊红细胞(SRBC)各0.1mL溶于0.3mL BBS中，混匀，37℃水浴30min后放入低温高速离心机，5000rpm、4℃条件下离心10min。分别取每管上清0.2mL于96孔板，在405nm测定其吸光度。实验同时设置全溶血组(0.1mL 2％SRBC溶于0.5mL三蒸水)。以三蒸水溶血管的吸光度作为全溶血标准，计算溶血率。以补体稀释度为x轴，溶血百分率为y轴作图。选择达到相似高溶血率的最低补体浓度作为确保体系能正常溶血所需的临界补体浓度。取临界浓度的补体与供试品混匀，加入适量BBS、溶血素和2％SBRC，37℃水浴30min后放入低温高速离心机，5000rpm、4℃条件下离心10min，分别取每管上清0.2mL于96孔板，在405nm测定其吸光度。实验同时设置供试品对照组，补体组和全溶血组，将供试品吸光度值扣除相应供试品对照组吸光度值后计算溶血率，以供试品浓度作为x轴，溶血抑制率作为y轴作图，计算50％抑制溶血所需供试品的浓度(CH50)；结果表明，所述化合物对补体系统经典途径的抑制作用(CH50)为0.72～0.94mM(如表2所示)，所述化合物可用于制备抗补体药物。
实施例3.体外抗补体旁路途径实验
取补体(人血清)0.2mL，加入AP稀释液(巴比妥缓冲液，pH 7.4，含5mM Mg2+，8mMEGTA)将其对倍稀释成8个浓度梯度(1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256)后，加入溶血反应体系中，各浓度补体0.15mL及0.5％RRBC 0.2mL溶于0.35mL AP稀释液中，混匀，37℃水浴30min后放置入低温高速离心机，5000rpm，4℃，离心10min。分别取每管上清0.2mL于96孔板，在405nm测定吸光度。实验同时设置全溶血组(0.5％RRBC 0.2mL溶于0.5mL三蒸水中)。以三蒸水溶血管的吸光度作为全溶血标准，计算溶血率。以补体稀释倍数为x轴，各稀释浓度补体造成的溶血百分率为y轴作图；选择达到相似高溶血率的最低补体浓度作为确保体系能正常溶血所需的临界补体浓度；取确定的临界浓度的补体与供试品混匀，于37℃预水浴10min后，加入AP缓冲液和0.5％RRBC，将每管37℃水浴30min后放入低温高速离心机，5000rpm、4℃条件下离心10min后分别取每管上清0.2mL于96孔板，用酶标仪在405nm下测定吸光度；实验同时设置供试品对照组，补体组和全溶血组。将供试品吸光度值扣除相应供试品对照组吸光度值后计算溶血率。以供试品浓度作为x轴，溶血抑制率作为y轴作图，计算50％抑制溶血所需供试品的浓度(AP50)，结果表明，所述化合物对补体系统旁路途径的抑制作用(AP50)为0.98～1.20mM(如表2所示)，所述化合物可用于制备抗补体药物。
Claims (3)
1.如下结构通式的苯基双内酯类化合物在制备抗补体药物中的用途，
当R = CHOHCH2OH时，所述化合物为maysedilactone C；
当R =
时，所述化合物为maysedilactone D。
2.按权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的抗补体药物用于治疗与补体相关的疾病。
3.按权利要求2所述的用途，其特征在于，所述的与补体相关疾病是由病原微生物引起人体的自身免疫系统过度激活导致的疾患，选自非典、流感或类风湿性关节炎。
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| CN102464664A (zh) * | 2010-11-14 | 2012-05-23 | 中国科学院海洋研究所 | 一种双内酯类衍生物及其制备方法和应用 |
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Non-Patent Citations (3)
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