CN109906940A - 一种铁皮石斛种子无菌播种方法 - Google Patents
一种铁皮石斛种子无菌播种方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109906940A CN109906940A CN201910323038.5A CN201910323038A CN109906940A CN 109906940 A CN109906940 A CN 109906940A CN 201910323038 A CN201910323038 A CN 201910323038A CN 109906940 A CN109906940 A CN 109906940A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bud
- seeds
- weeks
- dendrobium candidum
- seeding method
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Cultivation Of Plants (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明属于快速繁殖技术领域，公开了一种铁皮石斛种子无菌播种方法；所述铁皮石斛种子无菌播种方法包括以下步骤：原种诱导，首先进行种子无菌播种，再将原种转代与原球茎诱导2‑5代；增殖扩繁，扩繁途径为芽增殖和原球茎途径；库存小，采用两种方式同时进行；库存大，采用芽增殖途径；生根，采用分芽方式进行切割，培养8周；炼苗，生根材料培养到3cm或在移栽之前，将材料移到温室炼苗，光照强度5000‑7000lux，炼苗时间为4周；将3cm以上主芽，粗度3mm以的根系2‑5条，植株老生，茎秆呈淡铁红色的生根苗进行移栽。
Description
技术领域
本发明属于快速繁殖技术领域，尤其涉及一种铁皮石斛种子无菌播种方法。
背景技术
目前，业内常用的现有技术是这样的：
铁皮石斛是兰科石斛属多年生草本植物，被誉为“九大仙草之首”。铁皮石斛于2018年1月11日拟定为药食同源中药材，是我国优秀的中药材种质资源。
铁皮石斛传统繁殖方式为分株扦插、组织培养方式，分株扦插方式对环境要求高，扩繁系数低，限制了铁皮石斛大规模产业化和商品化的发展。现阶段大多采用种子无菌播种技术，以未成熟果荚内种子作为外植体，诱导获得原球茎，通过原球茎大量增殖，获得再生植株。
综上所述，现有技术存在的问题是：
(1)铁皮石斛增殖培养采用了原球茎增殖，该方式增殖系数高，但稳定性较差。
(2)大量激素的使用，导致移栽炼苗后植株内激素含量超标。
(3)原球茎继代增殖代数多，增加了优质种苗的变异率。
解决上述技术问题的难度和意义：
(1)减少原球茎继代培养次数，根据材料长势2-5代原球茎增殖后转入分芽增殖方式，降低组培苗变异率。
(2)不使用激素，保证苗子安全性，但降低了增殖效率。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种铁皮石斛种子无菌播种方法。
本发明是这样实现的，一种铁皮石斛种子无菌播种方法，具体包括以下步骤：
步骤一：原种诱导，首先进行种子无菌播种，再将原种转代与原球茎诱导2-5代；
步骤二：增殖扩繁，扩繁途径为芽增殖和原球茎途径；库存小，两种方式同时进行；库存大，采用芽增殖途径；
步骤三：生根，采用分芽方式进行切割，培养8周；
步骤四：炼苗，生根材料培养到3cm或在移栽之前，将材料移到温室炼苗，光照强度5000-7000lux，炼苗时间为4周；
步骤五：将3cm以上主芽，粗度3mm以的根系2-5条，植株老生，茎秆呈淡铁红色的生根苗进行移栽。
进一步，步骤一中，种子无菌播种，具体为：
(1)采种：采用未开裂的成熟种子；
(2)消毒：0.1％升汞消毒15-20min；
(3)清洗：无菌水清洗5次，3-4min/次；
(4)接种：将剥开的种子散落在培养基上(培养基代码D01),每个种子分成15-20瓶，此为第一代；
(5)培养：温度26-28℃，弱光下培养，培养周期8周。
进一步，步骤一中，原种转代与原球茎诱导(2-5代)具体为：
(1)转代：将培养的材料转入D01培养基，根据原种材料的量，每瓶分成10-30瓶；
(2)培养：温度26-28℃，光照1500lux，培养周期8周；
(3)重复(1)(2)步骤，直到材料高度2cm以上，可进入增殖阶段。
进一步，步骤二中，芽增殖途径具体为：
(1)切割2-3芽/团，芽粗壮，插直，培养基D02；
(2)培养：温度26-28℃，光照3000lux，培养周期8周；
(3)注意事项：培养温度不易过高，否则苗弱、易玻璃化，接种过程种淘汰弱苗，保留壮苗。
进一步，步骤二中，原球茎增殖：
(1)切割：挑选粗壮的原球茎，团块0.5-0.8cm/团，每瓶10-15团，培养基D01；
(2)培养：培养温度：26-28℃，光照1500lux，培养周期8周。
进一步，步骤三中，生根的切割和培养具体为：
(3)切割：采用分芽方式，挑选高度≥2cm的芽，2-3芽/团，培养基D03，每瓶6团；
(4)培养：培养温度26-28℃，光照3000lux，培养时间约8周。
进一步，步骤五中，生根苗移栽标准为：
(1)3cm以上为主芽(有效芽)，主芽粗度3mm以上；
(2)主芽3-5芽/丛；
(3)植株老生，茎秆呈淡铁红色；
(4)有根，根系2-5条。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：
铁皮石斛增殖培养现有技术采用了原球茎增殖，该方式增殖系数高，但稳定性较差。
本发明在保持增殖系数高的前提下，提高了稳定性。本发明中没有激素的使用，避免了移栽炼苗后植株内激素含量超标；本发明中继代增殖代数减小，降低了优质种苗的变异率；减少原球茎继代培养次数，根据材料长势2-5代原球茎增殖后转入分芽增殖方式，降低组培苗变异率。不使用激素，保证苗子安全性，但降低了增殖效率。
附图说明
图1是本发明实施例提供的铁皮石斛种子无菌播种方法流程图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合附图对本发明的应用原理作详细描述；
如图1所示，本发明实施例提供的铁皮石斛种子无菌播种方法，具体包括以下步骤：
S101：原种诱导，首先进行种子无菌播种，再将原种转代与原球茎诱导2-5代；
S102：增殖扩繁，扩繁途径为芽增殖和原球茎途径；库存小，两种方式同时进行；库存大，采用芽增殖途径；
S103：生根，采用分芽方式进行切割，培养8周；
S104：炼苗，生根材料培养到3cm或在移栽之前，将材料移到温室炼苗，光照强度5000-7000lux，炼苗时间为4周；
S105：将3cm以上主芽，粗度3mm以的根系2-5条，植株老生，茎秆呈淡铁红色的生根苗进行移栽。
步骤S101中，本发明实施例提供的种子无菌播种，具体为：
(1)采种：采用未开裂的成熟种子；
(2)消毒：0.1％升汞消毒15-20min；
(3)清洗：无菌水清洗5次，3-4min/次；
(4)接种：将剥开的种子散落在培养基上(培养基代码D01),每个种子分成15-20瓶，此为第一代；
(5)培养：温度26-28℃，弱光下培养，培养周期8周。
步骤S101中，本发明实施例提供的原种转代与原球茎诱导(2-5代)具体为：
(1)转代：将培养的材料转入D01培养基，根据原种材料的量，每瓶分成10-30瓶；
(2)培养：温度26-28℃，光照1500lux，培养周期8周；
(3)重复(1)(2)步骤，直到材料高度2cm以上，可进入增殖阶段。
步骤S102中，本发明实施例提供的芽增殖途径具体为：
(1)切割2-3芽/团，芽粗壮，插直，培养基D02；
(2)培养：温度26-28℃，光照3000lux，培养周期8周；
(3)注意事项：培养温度不易过高，否则苗弱、易玻璃化，接种过程种淘汰弱苗，保留壮苗。
步骤S102中，本发明实施例提供的原球茎增殖：
(1)切割：挑选粗壮的原球茎，团块0.5-0.8cm/团，每瓶10-15团，培养基D01；
(2)培养：培养温度：26-28℃，光照1500lux，培养周期8周。
步骤S103中，本发明实施例提供的生根的切割和培养具体为：
(5)切割：采用分芽方式，挑选高度≥2cm的芽，2-3芽/团，培养基D03，每瓶6团；
(6)培养：培养温度26-28℃，光照3000lux，培养时间约8周。
步骤S105中，本发明实施例提供的生根苗移栽标准为：
(1)3cm以上为主芽(有效芽)，主芽粗度3mm以上；
(2)主芽3-5芽/丛；
(3)植株老生，茎秆呈淡铁红色；
(4)有根，根系2-5条。
下面结合具体实施例对本发明的应用原理进行进一步说明；
实施例1；
铁皮石斛种子无菌播种方法，具体为：
(一)原种诱导：分为种子无菌播种和茎段诱导，一般以种子无菌播种为主。
1、种子无菌播种：
(1)采种：采用未开裂的成熟种子；
(2)消毒：0.1％升汞消毒15-20min；
(3)清洗：无菌水清洗5次，3-4min/次；
(4)接种：将剥开的种子散落在培养基上(培养基代码D01),每个种子分成15-20瓶，此为第一代；
(5)培养：温度26-28℃，弱光下培养，培养周期8周。
2、原种转代与原球茎诱导(2-5代)
(1)转代：将培养的材料转入D01培养基，根据原种材料的量，每瓶分成10-30瓶；
(2)培养：温度26-28℃，光照1500lux，培养周期8周；
(3)重复(1)(2)步骤，直到材料高度2cm以上，可进入增殖阶段。
(二)增殖扩繁：扩繁途径为芽增殖和原球茎途径，使用何种方法，根据库存而定，库存小，两种方式同时进行；库存大，采用芽增殖途径。
1、芽增殖途径：
(1)切割2-3芽/团，芽粗壮，插直，培养基D02；
(2)培养：温度26-28℃，光照3000lux，培养周期8周；
(3)注意事项：培养温度不易过高，否则苗弱、易玻璃化，接种过程种淘汰弱苗，保留壮苗。
2、原球茎增殖：
(1)切割：挑选粗壮的原球茎，团块0.5-0.8cm/团，每瓶10-15团，培养基D01；
(2)培养：培养温度：26-28℃，光照1500lux，培养周期8周。
(三)生根：
(1)切割：采用分芽方式，挑选高度≥2cm的芽，2-3芽/团，培养基D03，每瓶6团；
(2)培养：培养温度26-28℃，光照3000lux，培养时间约8周。
(四)炼苗：
生根材料培养到3cm或在移栽之前，需将材料移到温室炼苗，光照强度5000-7000lux，炼苗时间4周。
(五)生根苗移栽标准：
1、3cm以上为主芽(有效芽)，主芽粗度3mm以上；
2、主芽3-5芽/丛；
3、植株老生，茎秆呈淡铁红色；
4、有根，根系2-5条。
(六)培养基基本元素用量：改良MS培养基，单位(mg/L)
KNO3:950 NH4NO3:750 MgSO4.7H2O:370 KH2PO4:170
NaH2PO4:70 CaCl2:120
FeSO4·7H2O:27.8 Na2-EDTA:37.3
MnSO4·H2O:16.9 ZnSO4·7H2O:8.6 H3BO3:6.2 KI:0.83
CuSO4·5H2O:0.025 CoCl2·6H2O:0.025 Na2MoO4·2H2O:0.25
甘氨酸：1 盐酸硫胺素：0.1 盐酸吡哆素：0.5
烟酸：0.5 肌醇：100
(七)配方列表：
D01：改良MS+土豆40g/L+糖30g/L+琼脂6g/L；
D02：改良MS+香蕉25g/L+糖20g/L+琼脂6g/L；
D03：改良MS+香蕉35g/L+糖20g/L+琼脂6g/L+活性炭0.5g/L；
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (7)
1.一种铁皮石斛种子无菌播种方法，其特征在于，所述的铁皮石斛种子无菌播种方法包括以下步骤：
步骤一：进行种子无菌播种，再将原种转代与原球茎诱导2-5代；
步骤二：芽增殖和原球茎扩繁；
步骤三：采用分芽方式进行切割，培养8周；
步骤四：生根材料培养到3cm或在移栽之前，将材料移到温室炼苗，光照强度5000-7000lux，炼苗时间为4周；
步骤五：将3cm以上主芽，粗度3mm以的根系2-5条，植株老生，茎秆呈淡铁红色的生根苗进行移栽。
2.如权利要求1所述的铁皮石斛种子无菌播种方法，其特征在于，所述步骤一中种子无菌播种具体为：
(1)采种：采用未开裂的成熟种子；
(2)消毒：0.1％升汞消毒15-20min；
(3)清洗：无菌水清洗5次，3-4min/次；
(4)接种：将剥开的种子散落在培养基上，每个种子分成15-20瓶，此为第一代；
(5)培养：温度26-28℃，弱光下培养，培养周期8周。
3.如权利要求1所述的铁皮石斛种子无菌播种方法，其特征在于，所述步骤一中，原种转代与原球茎诱导2-5代具体为：
(1)转代：将培养的材料转入D01培养基，根据原种材料的量，每瓶分成10-30瓶；
(2)培养：温度26-28℃，光照1500lux，培养周期8周；
(3)重复(1)(2)步骤，直到材料高度2cm以上，进入增殖阶段。
4.如权利要求1所述的铁皮石斛种子无菌播种方法，其特征在于，所述步骤二中，芽增殖途径具体为：
(1)切割2-3芽/团，芽粗壮，插直，培养基D02；
(2)培养：温度26-28℃，光照3000lux，培养周期8周；
(3)接种过程种淘汰弱苗，保留壮苗。
5.如权利要求1所述的铁皮石斛种子无菌播种方法，其特征在于，所述步骤二中，原球茎增殖：
(1)切割：挑选粗壮的原球茎，团块0.5-0.8cm/团，每瓶10-15团，培养基D01；
(2)培养：培养温度：26-28℃，光照1500lux，培养周期8周。
6.如权利要求1所述的铁皮石斛种子无菌播种方法，其特征在于，所述步骤三中，生根的切割和培养具体为：
(1)切割：采用分芽方式，挑选高度≥2cm的芽，2-3芽/团，培养基D03，每瓶6团；
(2)培养：培养温度26-28℃，光照3000lux，培养时间8周。
7.如权利要求1所述的铁皮石斛种子无菌播种方法，其特征在于，所述步骤五中，生根苗移栽标准为：
(1)3cm以上为主芽，主芽粗度3mm以上；
(2)主芽3-5芽/丛；
(3)植株老生，茎秆呈淡铁红色；
(4)有根，根系2-5条。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910323038.5A CN109906940A (zh) | 2019-04-22 | 2019-04-22 | 一种铁皮石斛种子无菌播种方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910323038.5A CN109906940A (zh) | 2019-04-22 | 2019-04-22 | 一种铁皮石斛种子无菌播种方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109906940A true CN109906940A (zh) | 2019-06-21 |
Family
ID=66978047
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910323038.5A Pending CN109906940A (zh) | 2019-04-22 | 2019-04-22 | 一种铁皮石斛种子无菌播种方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109906940A (zh) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102422811A (zh) * | 2011-10-06 | 2012-04-25 | 红河州巨丰生物科技有限公司 | 铁皮石斛的组培繁殖方法 |
| CN102613086A (zh) * | 2012-03-31 | 2012-08-01 | 南京农业大学 | 一种铁皮石斛无激素组织培养的方法 |
| US8383881B2 (en) * | 2008-01-08 | 2013-02-26 | National University Of Kaohsiung | Method for producing polyploid plants of orchids |
| KR20130052194A (ko) * | 2011-11-11 | 2013-05-22 | 경상남도 | 난초류의 종자 형질전환 방법 |
| CN104322371A (zh) * | 2014-10-29 | 2015-02-04 | 安徽牧龙山生态旅游开发股份有限公司 | 一种铁皮石斛组织培养培养基及其铁皮石斛组织培养方法 |
-
2019
- 2019-04-22 CN CN201910323038.5A patent/CN109906940A/zh active Pending
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8383881B2 (en) * | 2008-01-08 | 2013-02-26 | National University Of Kaohsiung | Method for producing polyploid plants of orchids |
| CN102422811A (zh) * | 2011-10-06 | 2012-04-25 | 红河州巨丰生物科技有限公司 | 铁皮石斛的组培繁殖方法 |
| KR20130052194A (ko) * | 2011-11-11 | 2013-05-22 | 경상남도 | 난초류의 종자 형질전환 방법 |
| CN102613086A (zh) * | 2012-03-31 | 2012-08-01 | 南京农业大学 | 一种铁皮石斛无激素组织培养的方法 |
| CN104322371A (zh) * | 2014-10-29 | 2015-02-04 | 安徽牧龙山生态旅游开发股份有限公司 | 一种铁皮石斛组织培养培养基及其铁皮石斛组织培养方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 刘国安等: "卡特丽亚兰试管苗工厂化生产过程中幼苗增殖与生长特性的研究", 《四川大学学报（自然科学版）》 * |
| 斯进平等: "铁皮石斛人工栽培技术研究与应用进展", 《浙江林业科技》 * |
| 胡佳丽等: "铁皮石斛种子组织培养条件的优化", 《浙江农业学报》 * |
| 苏江等: "2 种不同附加物对铁皮石斛增殖和生长的影响", 《河池学院学报》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102422811B (zh) | 铁皮石斛的组培繁殖方法 | |
| CN106942051B (zh) | 一种矾根叶片的组织培养快速繁殖的培养基及繁殖方法 | |
| CN105494103A (zh) | 一种摩帝类兜兰优质种苗组织培养快速繁殖方法 | |
| CN107155898B (zh) | 一种铁皮石斛利用茎段薄片进行扩繁的方法 | |
| CN102257963A (zh) | 姜荷花的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN105706900A (zh) | 杂交兰与西藏虎头兰杂交种子无菌播种育苗的方法 | |
| CN105746230A (zh) | 育苗容器及移动式育苗方法 | |
| CN104429962A (zh) | 一种金钗石斛组培苗的培育方法 | |
| CN103270946B (zh) | 一种铁皮石斛种苗生产与炼苗同步方法 | |
| CN105613234A (zh) | 一种黄花白及原球茎直播的方法 | |
| CN104885948A (zh) | 一种油茶子叶节直接再生植株的方法 | |
| CN102388801B (zh) | 一种花生组培苗的无菌嫁接方法 | |
| CN103314862B (zh) | 一种高效获得春兰脱毒幼苗的方法 | |
| CN103385173A (zh) | 一种高效获得黄精灵百合纯合二倍体幼苗的方法 | |
| CN105475129A (zh) | 一种竹叶兰组培快繁的方法 | |
| CN100394845C (zh) | 东方百合脱毒小籽球的瓶内生成方法 | |
| CN105532467A (zh) | 一种濒危羊踯躅离体组织培养繁殖与保存的方法 | |
| CN105191803A (zh) | 一种铁皮石斛组培袋苗生产方法 | |
| CN103609444B (zh) | 常绿萱草的组织培养法 | |
| CN104026011B (zh) | 银叶薜荔的组织培养快速繁殖的培养基及繁殖方法 | |
| CN107581068B (zh) | 一种去除单轴类兰花内生菌的方法及在香荚兰组织培养快速繁殖中的应用 | |
| CN109906940A (zh) | 一种铁皮石斛种子无菌播种方法 | |
| CN103975853B (zh) | 一种彩色粗肋草吉祥组织培养方法 | |
| CN101015279B (zh) | 海仙报春的组培快繁方法 | |
| CN109169285B (zh) | 一种辣椒未成熟种子培养和种苗快速扩繁的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |