CN109906089A - 皮肤纤维化处置剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及含有类视黄醇的皮肤中的细胞外基质产生细胞用的物质递送载体、利用了该载体的皮肤纤维化处置剂、该处置剂的制备试剂盒、该载体的制造方法以及该处置剂的制造方法。

Description

皮肤纤维化处置剂
技术领域
本发明涉及用于促进向皮肤中的细胞外基质产生细胞的物质递送的载体、以及利用了该载体的皮肤纤维化处置用组合物及皮肤纤维化的处置方法等。
背景技术
在系统性硬皮病、同种造血干细胞移植后发病的慢性移植物抗宿主病(cGVHD)中，经常发生高度的皮肤的纤维化(非专利文献1和2)。皮肤的纤维化不仅成为美容上的问题，而且若变为高度，则由于皮肤硬化，例如会带来关节的可动区域限制、开口障碍、假面样容貌、呼吸障碍等，使患者的生活质量(QOL)显著降低。现在，虽然作为其治疗方法进行了免疫抑制剂的给药，但其效果不可说一定充分，而且由于伴随着广泛的免疫抑制，因此还有可能导致感染病发病、肿瘤复发。为了安全且有效地对这样的患者进行治疗，尚待开发不伴随免疫抑制效果的纤维化抑制剂。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：Sticherling M.J Dtsch Dermatol Ges.2012,10(11)：783-91
非专利文献2：Martires KJ et al.Blood 2011,118(15)：4250-7
发明内容
发明所要解决的课题
本发明的部分方式是为了解决上述那样的课题而完成的，本发明的目的在于提供一种新的皮肤纤维化处置剂及皮肤纤维化的处置方法。
用于解决课题的手段
本发明的部分方式如下。
<1>一种向皮肤中的细胞外基质产生细胞递送物质的物质递送用载体，其含有类视黄醇作为促进向皮肤中的细胞外基质产生细胞的物质递送的成分。
<2>根据上述<1>所述的载体，其中，类视黄醇以类视黄醇结合物形式含有。
<3>根据上述<1>或<2>所述的载体，其还含有脂质。
<4>一种用于处置皮肤纤维化的医药组合物，其含有上述<1>～<3>中任一项所述的载体、和控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物。
<5>一种用于从纤维化皮肤组织再生正常皮肤组织的医药组合物，其含有上述<1>～<3>中任一项所述的载体、和控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物。
<6>根据上述<4>或<5>所述的医药组合物，其中，控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物选自抑制细胞外基质成分的产生、分泌的物质、细胞增殖抑制物质、凋亡诱导物质及TIMP抑制物质。
<7>根据上述<6>所述的医药组合物，其中，抑制细胞外基质成分的产生、分泌的物质为HSP47的抑制剂。
<8>根据上述<4>～<7>中任一项所述的医药组合物，其为用时制备形式。
<9>上述<4>～<8>中任一项所述的医药组合物的制备试剂盒，其包含1个或2个以上的容器，所述容器单独或组合地包含控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物、类视黄醇和/或类视黄醇结合物、以及根据需要的除类视黄醇以外的载体构成物质。
<10>一种用于向皮肤中的细胞外基质产生细胞递送物质的载体的制造方法，其包含将类视黄醇和/或类视黄醇结合物作为向皮肤中的细胞外基质产生细胞递送物质的物质递送促进成分进行配合的工序。
<11>一种用于处置皮肤纤维化的医药组合物或用于从纤维化皮肤组织再生正常皮肤组织的医药组合物的制造方法，其包含将类视黄醇作为向皮肤中的细胞外基质产生细胞递送物质的物质递送促进成分进行配合、将控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物作为有效成分进行配合的工序。
发明效果
通过本发明的载体，能够有效地将有效成分递送至作用部位(例如皮肤中的细胞外基质产生细胞)，因此能够治愈至今尚没有根本性的治疗方法的皮肤纤维化、抑制其发展或预防其发病，对人的医疗及兽的医疗的贡献极大。
另外，本发明的载体能够与任意的药剂(例如现有的皮肤纤维化治疗剂)组合而提高其作用效率，因此还具有制剂的应用范围广、能够简便地进行高效的处理剂的制造的优点。
附图说明
图1是表示皮肤肌成纤维细胞中的、由含HSP47siRNA的类视黄醇结合脂质体产生的HSP47的表达抑制的图表。
图2是表示用于对博来霉素(BLM)皮肤纤维化诱发小鼠模型给药的给药方案的图表。
图3是对从皮肤纤维化小鼠模型采集的皮肤切片进行MT染色的照片图。
图4是表示能够对从皮肤纤维化小鼠模型采集的真皮的增厚(A)和胶原的沉着进行图像评价的胶原点密度(collagen dot density)测定的结果(B)的图表。
图5是表示利用qPCR法的Col1a1和HSP47各自的mRNA的表达量(A和B)以及羟基脯氨酸分析的结果(C)的图表。
图6是表示用于制作由cGVHD引起的皮肤纤维化小鼠模型的给药方案的图。
图7是表示对从cGVHD小鼠模型采集的皮肤切片进行MT染色的组织图像及真皮的增厚的图表(A)以及胶原点密度测定的结果(B)的图。
图8是表示从cGVHD小鼠模型采集的皮肤切片的免疫荧光染色结果的照片图。
图9是表示用于对cGVHD小鼠模型给药的给药方案的图。
图10是表示采用含HSP47siRNA的类视黄醇结合脂质体的治疗组和对照组的存活率(A)和体重变化(B)的图表。由cGVHD引起的腹泻、死亡在两组中均可同程度地观察到，因此存活率、体重变化未见差异。未观察到治疗组中的有害现象的增加。
图11是表示对从cGVHD小鼠模型的采用含HSP47siRNA的类视黄醇结合脂质体的治疗组和对照组采集的皮肤切片进行MT染色的组织图像(A)、真皮的增厚的图表(B)和胶原点密度测定的结果(C)的图。
图12是表示利用qPCR法的Hsp47的mRNA表达量的结果的图表。
图13是表示胶原分析的结果的图表。
图14是表示cGVHD小鼠模型(Allo)和对照小鼠(Syn)的皮肤组织中的HSP47和α-SMA阳性细胞的局部分布的照片图。比例尺表示50μm。
图15是表示cGVHD小鼠模型的由含HSP47siRNA的类视黄醇结合脂质体引起的胶原量减少效果(A)和真皮肥增厚降低效果(B)的图表。
图16是表示cGVHD小鼠模型的由含HSP47siRNA的类视黄醇结合脂质体引起的HSP47的表达抑制的照片图。下一行是上一行的图像的放大图像。
图17是表示含HSP47siRNA的类视黄醇结合脂质体给药对cGVHD小鼠模型的胸腺中所含的CD4、CD8双阳性细胞数(A)、脾脏中所含的CD4阳性细胞数(B)或CD8阳性细胞数(C)的影响的图表。N.S表示未见显著性差异(Mann-Whitney U test，P>0.5)。
图18是表示含HSP47siRNA的类视黄醇结合脂质体给药对供体T细胞(左)和CD11b阳性供体骨髓细胞(右)的比例的影响的图表。
图19是表示博来霉素诱发皮肤纤维化小鼠模型的正常皮肤组织(左)或纤维化病变(右)中的、利用类视黄醇结合脂质体进行的标记的递送的照片图。下一行是上一行的图像的放大图像。比例尺表示50μm。
图20是表示含HSP47siRNA的类视黄醇结合脂质体给药对博来霉素诱发皮肤纤维化小鼠模型的正常皮肤组织或纤维化病变的真皮增厚的影响的图表。
图21是表示含HSP47siRNA的类视黄醇结合脂质体对由cGVHD建立的皮肤纤维化的真皮增厚减少效果(左)和胶原量减少效果(右)的图表。
具体实施方式
本发明的一个方面涉及一种向皮肤中的细胞外基质产生细胞递送物质的物质递送用载体，其含有类视黄醇作为促进向皮肤中的细胞外基质产生细胞(在本说明书中有时称为“靶细胞”)的物质递送的成分。在一个方式中，本发明的载体含有用于促进向皮肤中的细胞外基质产生细胞的物质递送的有效量的类视黄醇。另外，本发明的载体的一个方式还涉及利用类视黄醇促进向皮肤中的细胞外基质产生细胞的物质递送的载体。
在本发明中，皮肤中的细胞外基质产生细胞是存在于皮肤中的具有细胞外基质产生能力的细胞，例如包括存在于皮肤的成纤维细胞、周细胞、纤维细胞和肌成纤维细胞。存在于皮肤的细胞外基质产生细胞不仅包括皮肤中存在的细胞来源的细胞，还可包括循环血液中的纤维细胞来源的细胞。另外，皮肤中的细胞外基质产生细胞也可以是通过内皮间充质转化(EndoMT)从内皮细胞(例如血管内皮细胞等)转化而来的、或通过上皮间充质转化(EMT)从上皮细胞(例如角质形成细胞等)转化而来的细胞外基质产生细胞(例如成纤维细胞或肌成纤维细胞)。
皮肤中的细胞外基质产生细胞可以是存在于选自由表皮、真皮以及皮下组织组成的组中的1个或2个以上的部位的细胞。在一个方式中，皮肤中的细胞外基质产生细胞存在于真皮和/或皮下组织中。在一个方式中，皮肤中的细胞外基质产生细胞存在于皮肤的纤维化病变中。皮肤的纤维化病变可发生在选自由表皮、真皮以及皮下组织组成的组中的1个或2个以上的部位。在特定的方式中，皮肤中的细胞外基质产生细胞存在于真皮和/或皮下组织的纤维化病变中。
在一个方式中，皮肤中的细胞外基质产生细胞表达CRABP(cellular retinoicacid binding protein，胞内视黄酸结合蛋白)。CRABP包括CRABP1和CRABP2。因此，上述方式中的细胞外基质产生细胞表达CRABP1和/或CRABP2。在一个方式中，皮肤中的细胞外基质产生细胞表达α-SMA(alpha-smooth muscle actin，α-平滑肌肌动蛋白)。在一个方式中，皮肤中的细胞外基质产生细胞表达波形蛋白。在一个方式中，皮肤中的细胞外基质产生细胞表达HSP47(heat shock protein 47，热休克蛋白47)。在特定的方式中，皮肤中的细胞外基质产生细胞表达CRABP及HSP47。
细胞中的CRABP、α-SMA、波形蛋白、HSP47等标记物的表达例如可以通过检测该细胞中的各标记物的表达来确认。CRABP1、CRABP2、α-SMA、波形蛋白和HSP47的基因序列是已知的，由于还开发了抗它们的抗体，因此其表达可以通过已知的核酸或蛋白质检测方法，例如没有限定利用下述方法检测：使用了抗体的免疫沉降法、EIA(enzyme immunoassay，酶免疫分析法)(例如ELISA(emzyme-linked immunosorbent assay，酶联免疫吸附法)等)、RIA(radio immuno assay，放射免疫吸附法)(例如IRMA(immunoradiometric assay，免疫放射分析法)、RAST(radioallergosorbent test，放射过敏原吸附试验)、RIST(radioimmunosorbent test，放射免疫吸附试验)等)、免疫印迹法(Western Blottingmethod)、免疫组化法、免疫细胞化学法、流式细胞法、利用了与编码CRABP1、CRABP2、α-SMA、波形蛋白或HSP47的核酸或其独特的片段或该核酸的转录产物(例如mRNA)或剪切产物特异性杂交的核酸的各种杂交法、Northern blot法、Southern blot法、各种PCR法等。
在本发明中，“类视黄醇”是指包括第1代、第2代和第3代类视黄醇在内的天然和合成的类视黄醇。作为天然存在的类视黄醇的例子，没有限定，可以举出11-顺式-视黄醇、全反式视黄醇、棕榈酸视黄酯、全反式视黄酸、以及13-顺式-视黄酸等。此外，术语“类视黄醇”包括视黄酸、视黄醇、视黄醛、以及它们的衍生物和类似物。在一个方式中，类视黄醇具有4个类异戊二烯单元以头尾式连接而成的骨架。
作为类视黄醇的非限定例，可以举出例如视黄醇(包括全反式视黄醇)、视黄醛、视黄酸(包括维甲酸)、视黄醇与脂肪酸的酯、脂肪族醇与视黄酸的酯、依曲替酯、异维甲酸、阿达帕林、阿维a、他扎罗汀、棕榈酸视黄酯，视黄醇、视黄酸、视黄醛、依曲替酯、异维甲酸、阿维a等的饱和衍生物等类视黄醇衍生物，以及芬维A胺(4-HPR)、蓓萨罗丁等维生素A类似物。
在一个方式中，类视黄醇包括视黄酸及其类似物。在一个方式中，视黄酸类似物为CRABP结合性的。作为CRABP结合性的视黄酸类似物的非限定例，可以举出例如SRI 2965-38，Ro 13-7410、Ro31-3689、St 80、SRI 6409-40、TTNN、TTAB、Ch 80、Az 80、Am 580、Am555、Am 80、5,6-环氧-视黄酸、4-OH-视黄酸、4-氧代-视黄酸、视黄酸葡糖苷酸、9-顺式-视黄酸等(参照Trown et al.,Cancer Res.1980Feb；40(2)：212-20、Sani et al.,CancerRes.1984；44(1)：190-5、Lotan et al.,Cancer Res.1980；40(4)：1097-102、Keidel etal.,Eur J Biochem.1993；212(1)：13-26、Jetten et al.,Cancer Res.1987；47(13)：3523-7等)。某个化合物与CRABP的结合性例如可以通过使用了放射性标记的视黄酸的竞争结合测定法等来确定。
类视黄醇也可以以类视黄醇与其他化合物键合而成的类视黄醇结合物形式存在。其他化合物可以是与上述类视黄醇同种的类视黄醇，也可以是与上述类视黄醇不同的类视黄醇，也可以是非类视黄醇化合物(例如脂质等)。类视黄醇与其他化合物可以通过缩合反应等直接键合，也可以通过连接物键合。
在一个方式中，类视黄醇结合物是具有结构I的化合物。
X-Y-Z I
式中，
X为类视黄醇或脂质，
Z为类视黄醇，
Y为连接物。
结构I中，作为X和Z含有的类视黄醇或脂质，根据与连接物的键合方式，可以是游离的类视黄醇或脂质的一部分，也可以是为了提供与连接物键合的附着点而在游离的类视黄醇或脂质上加成有连接基团的类视黄醇或脂质。例如，在通过脱水缩合使视黄酯与末端具有氨基的连接物键合的情况下，由于视黄酸的15位的羧基中所含的OH基与在连接物的氨基中所含的H脱离，因此X和Z成为从视黄酸中除去了OH基的部分。
X和Z可以各自独立地含有1个或多个类视黄醇。X和Z可以各自独立地含有例如1、2、3、4或5个类视黄醇。X和/或Z含有多个类视黄醇时，各类视黄醇可以相同也可以不同。
作为在结构I中作为X含有的脂质，没有限定，可以举出例如含有1个以上的烷基链和含有酰胺的头基的脂质。在特定的方式中，结构I中作为X含有的脂质选自DODC、HEDODC、DSPE、DOPE以及DC-6-14。
在本发明中，“连接物”包括能够键合类视黄醇的任意的连接物。连接物可以是直链状，也可以是支链状。在一个方式中，连接物为化学键。化学键包括单键、双键和三键。在另一方式中，连接物包含聚乙二醇(PEG)。PEG的平均分子量没有特别限定，例如可以为200～5000、500～3000、550～2000等的范围。PEG可以含有1个以上的酰胺基和/或氨基。PEG可以含有赖氨酸残基等1个以上的连接基团。在一个方式中，PEG包含1个以上的酰胺基和1个以上的赖氨酸残基。在另一方式中，连接物选自由Glu、己酰基、Gly3或GluNH组成的组。
在部分方式中，PEG可以是双酰胺-PEG、三酰胺-PEG、四酰胺-PEG、Lys-双酰胺-PEG-Lys、Lys-三酰胺-PEG-Lys、Lys-四酰胺-PEG-Lys、Lys-PEG-Lys。在部分方式中，PEG具有5～50个、6～40个、7～30个、8～25个、9～20个、10～15个等重复单元-CH2CH2O-。
以下示出X和Z分别为2个视黄酸、连接物为Lys-双酰胺-PEG-Lys的化合物的非限定例。
[化学式编号1]
式中，q、r、s分别独立地为1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。
以下示出具有结构I的化合物的非限定例。
[表格1]
表1具有结构I(X为类视黄醇)的化合物的非限定例
[表格2]
[表格3]
表2具有结构I(X为脂质)的化合物的非限定例
[表格4]
类视黄醇或类视黄醇结合物包含立体异构体时，上述化合物包含其各立体异构体、或立体异构体的任意的混合物。类视黄醇或类视黄醇结合物还可以被1个或2个以上的取代基取代。类视黄醇或类视黄醇结合物当然包含分离状态的类视黄醇或类视黄醇结合物，也包括在能够溶解或保持其的介质中溶解或混合了的状态的类视黄醇或类视黄醇结合物。
本发明的载体可以由这些类视黄醇和/或类视黄醇结合物本身构成，还可通过使类视黄醇和/或类视黄醇结合物结合或包含于与其不同的其他的载体构成成分中而构成。因此，本发明的载体还可含有除类视黄醇或类视黄醇结合物以外的载体构成成分。作为该成分，并无特别限定，可以使用在医药和药学领域中已知的任意的成分，优选可包含类视黄醇和/或类视黄醇结合物、或者可与其相结合的成分。
在一个方式中，除类视黄醇和类视黄醇结合物以外的载体构成成分含有脂质。作为该脂质的非限定例，可以举出甘油磷脂等磷脂、鞘磷脂等鞘脂、胆固醇等甾醇、大豆油、罂粟油等植物油、矿物油、蛋黄卵磷脂等卵磷脂类等。作为脂质更具体的例子，可以举出二肉豆蔻磷脂酰胆碱(DMPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二月桂酰磷酯酰胆碱(DLPC)、胆固醇等甾醇、N-(α-三甲基铵基乙酰基)-二(十二烷基)-D-谷氨酸酯氯化物(TMAG)、N,N’,N”,N”’-四甲基-N,N’,N”,N”’-四棕榈酰基精胺(TMTPS)、2,3-二油酰氧基-N-[2(精胺羧酰胺基)乙基]-N,N-二甲基-1-丙烷铵三氟乙酸酯(DOSPA)、N-[1-(2,3-二油酰氧基)丙基]-N,N,N-三甲基氯化铵(DOTMA)、二(十八烷基)二甲基氯化铵(DODAC)、二(十二烷基)溴化铵(DDAB)、1,2-二油酰氧基-3-三甲基铵基丙烷(DOTAP)、3β-[N-(N’,N’-二甲基氨基乙烷)氨基甲酰基]胆固醇(DC-Chol)、1,2-二肉豆蔻酰氧基丙基-3-二甲基羟乙基铵(DMRIE)、O,O’-二(十四烷酰基-N-(α-三甲基铵基乙酰基)二乙醇胺氯化物(DC-6-14)等。
脂质可以是阳离子性脂质，也可以是非阳离子性脂质，例如阴离子性脂质或中性脂质。在一个方式中，载体含有阳离子性脂质。阳离子脂质对于将具有负电荷的核酸分子等导入细胞内特别有用。在另一方式中，载体含有可离子化阳离子性脂质。可离子化阳离子性脂质在PKa以上的pH下是非离子性的，但在低于PKa的pH下具有成为阳离子性的性质。在部分方式中，可离子化阳离子性脂质具有叔胺。在部分方式中，可离子化阳离子性脂质的PKa可以为7.0以上、7.5以上、7.6以上、7.8以上、8.0以上等。为了与可离子化阳离子性脂质区别，有时将始终带正电的阳离子性脂质称为恒常带电阳离子性脂质。
作为脂质的其他非限定例，可以举出WO2012/170952中记载的恒常带电阳离子性脂质和PEG结合脂质(PEG-脂质)、WO2013/185116中记载的可离子化阳离子性脂质等。
上述恒常带电阳离子性脂质是式I表示的化合物。
[化学式编号2]
式中，R1及R2独立地选自由C10～C18烷基、C12～C18烯基、及油基组成的组，R3及R4独立地选自由C1～C6烷基及C2～C6烷醇组成的组，X选自由-CH2-、S-和-O-组成的组或不存在，Y选自-(CH2)n、-S(CH2)n、-O(CH2)n-、噻吩、-SO2(CH2)n-和酯，n＝1～4，a＝1～4，b＝1～4，c＝1～4，Z为抗衡离子。
作为上述恒常带电阳离子性脂质的非限定例，可以举出例如以下物质。
[表格5]
表3恒常带电阳离子性脂质的非限定例
[表格6]
[表格7]
[表格8]
作为上述PEG-脂质的非限定例，可以举出例如1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-PEG(PEG-DMPE)、1,2-二棕榈酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-PEG(PEG-DPPE)、1,2-二硬脂酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-PEG(PEG-DSPE)、1,2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷酸乙醇胺-N-PEG(PEG-DOPE)、PEG神经酰胺等。PEG的分子量没有特别限定，例如可以为约200～约5000、约500～约3000、约550～约2000，更具体地为约550、约750、约1000、约1250、约2000等。作为PEG的非限定例，可以举出例如PEG550、PEG750、PEG1000、PEG1250、PEG2000等。
上述可离子化阳离子性脂质是式II表示的化合物或其药学上可容许的盐：
[化学式编号3]
式中，n及m独立地为1、2、3或4，R1及R2独立地为C10～C18烷基或C12～C18烯基，X为-CH2-、S、O、N或不存在，L为C1～4亚烷基、-S-C1～4亚烷基、-O-C1～4亚烷基、-O-C(O)-C1～4亚烷基、-S(O)2-C1～4亚烷基或
[化学式编号4]
或与
[化学式编号5]
一起为
[化学式编号6]
作为上述可离子化阳离子性脂质的非限定例，可以举出例如以下物质。
[表格9]
表4可离子化阳离子性脂质的非限定例
[表格10]
[表格11]
[表格12]
[表格13]
上述脂质的制法记载于WO2012/170952和WO2013/185116中，本领域技术人员可以根据这些文献的记载来制造上述脂质。
载体可以含有1种或2种以上的脂质。在部分方式中，载体含有恒常带电阳离子性脂质和可离子化阳离子性脂质。通过配合可离子化阳离子性脂质，能够降低由恒常带电阳离子性脂质引起的不良影响。在特定的方式中，载体除了恒常带电阳离子性脂质、可离子化阳离子性脂质以外，还含有选自由辅助-脂质、PEG-脂质以及甾醇组成的组中的脂质。作为载体中所含的脂质的组合的非限定例，可以举出例如脂质P2和脂质I8的组合，脂质P2、脂质I8、DOPE、胆固醇和PEG-DMPE的组合，DODC、DOPE、胆固醇和PEG-脂质的组合，脂质P9、DOPE、胆固醇和PEG-脂质的组合，DC-6-14、DOPE和胆固醇的组合等。作为载体中所含的脂质的组合的特定的非限定例，可以举出例如脂质P2：脂质I8(1：1的摩尔比)、脂质P2：脂质I8：DOPE：胆固醇：PEG-DMPE(4：4：6：5：1的摩尔比)、DODC：DOPE：胆固醇：PEG-脂质(25：5：19：1的摩尔比)、脂质P9：DOPE：胆固醇：PEG-脂质(25：5：19：1的摩尔比)、DC-6-14：DOPE：胆固醇(4：3：3的摩尔比)等。
在一个方式中，除类视黄醇或类视黄醇结合物以外的载体构成成分含有聚合物。作为该聚合物的非限定例，可以举出以聚乙二醇(PEG)、聚乙烯亚胺(PEI)或聚赖氨酸(例如聚-L-赖氨酸(PLL))等阳离子性聚合物(聚阳离子)、聚乳酸(PLA)、聚乙醇酸(PGA)、乳酸-乙醇酸共聚物(PLGA)等非阳离子性聚合物和/或它们的衍生物为基础的聚合物。
本发明中的载体可以具有特定的三维结构。作为该结构，没有限定，可以举出直链状或支链状的线状结构、膜状结构、球状结构等。因此，载体没有限定，可具有例如树形分子、dendron、胶束、脂质体、乳液、微球、纳米小球等任意的三维形态。该载体的非限定例可从Marcucci and Lefoulon，Drug Discov Today.2004Mar1；9(5)：219-28，Torchilin，EurJ Pharm Sci.2000Oct；11Suppl 2：S81-91等获知。
本发明的载体可以为阳离子性，也可以为非阳离子性(例如阴离子性、非离子性、电中性)。在一个方式中，载体为阳离子性。在另一方式中，载体在生理条件下为电中性(例如Zeta电位为-10mV～+10mV的范围)，但在胞饮体内等的酸性条件下成为阳离子性。本发明的载体可以具有与白蛋白和/或低密度脂蛋白(LDL)的结合性。另外，载体也可以是能够与担载的物质形成脂质复合物(lipoplex)或多复合物(polyplex)的载体。lipoplex例如可以在阳离子脂质与具有阴性电荷的物质(例如DNA、RNA等核酸)之间形成，polyplex例如可以在聚阳离子与具有阴性电荷的物质之间形成。
载体可以是脂质结构体。脂质结构体是指具有任意的三维结构，例如线状、膜状、球状等形状的含有脂质作为构成成分的结构体，没有限定，包含脂质体、胶束、脂质微球、脂质纳米小球、脂质乳液等。脂质结构体例如可以通过使用盐、蔗糖、葡萄糖、麦芽糖等糖类，甘油、丙二醇等多元醇等，优选蔗糖、葡萄糖等渗透压调整剂来调整渗透压，使其稳定化。另外，也可以通过添加适度的盐或缓冲液等pH调节剂来调整pH。因此，可以在含有这些物质的介质中进行脂质结构体的制造、保存等。在该情况下，优选将渗透压调整剂的浓度调整为与血液等渗。例如，在蔗糖的情况下，介质中的浓度没有限定，可以为3～15重量％、优选为5～12重量％、更优选为8～10重量％、特别优选为9重量％，在葡萄糖的情况下，介质中的浓度没有限定，可以为1～10重量％，优选为3～8重量％，更优选为4～6重量％，特别优选为5重量％。
本发明的类视黄醇和/或类视黄醇结合物对载体的结合或包含也可以通过化学和/或物理方法使类视黄醇和/或类视黄醇结合物结合或包含于载体的其他构成成分。或者，本发明的类视黄醇和/或类视黄醇结合物对载体的结合或包含还可以通过在该载体的制作时，将类视黄醇和/或类视黄醇结合物与除此以外的载体构成成分混合来进行。本发明的载体中的类视黄醇和/或类视黄醇结合物的量例如可以为0.01～1000nmol/μl，优选为0.1～100nmol/μl。另外，在含有类视黄醇和/或类视黄醇结合物、和除类视黄醇和类视黄醇结合物以外的载体构成成分的本发明的载体中，类视黄醇和/或类视黄醇结合物与除类视黄醇及类视黄醇结合物以外的载体构成成分的摩尔比没有限定，例如可以是8：1～1：4、或4：1～1：2。类视黄醇和/或类视黄醇结合物对载体的结合或包含可以在将递送物担载于该载体之前进行，也可以通过将载体、类视黄醇和/或类视黄醇结合物、以及递送物同时混合等来进行，或者也可以通过将已担载有递送物的状态的载体与类视黄醇和/或类视黄醇结合物混合等来进行。因此，本发明还涉及对皮肤中的细胞外基质产生细胞特异性的制剂的制造方法，其包含使类视黄醇和/或类视黄醇结合物与现有的任意的药物结合载体、药物封入载体、例如DaunoXome(R)、Doxil、Caelyx(R)、Myocet(R)等脂质体制剂结合的工序。
类视黄醇和/或类视黄醇结合物与本发明的载体的结合或包含也可以通过将类视黄醇和/或类视黄醇结合物利用化学和/或物理方法与载体的其他成分结合或包含来实现。取而代之，类视黄醇和/或类视黄醇结合物与本发明的载体的结合或包含也可以通过在载体的制备时在载体成分中混合具有形成亲和性的类视黄醇和/或类视黄醇结合物和载体的基本成分来进行。结合或包含于本发明的载体中的类视黄醇和/或类视黄醇结合物的量以相对于载体成分的重量比计，可以为0.01～100％，优选为0.2～20％，更优选为1～5％。
本发明的载体可以含有例如水性和非水性凝胶、乳霜(cream)、多重乳液和微乳液、脂质体、软膏、水性和非水性溶液、洗液(lotion)、气溶胶、烃基剂和粉末，另外还可以含有增溶剂、渗透促进剂(例如脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪醇及氨基酸)、以及亲水性聚合物(例如聚卡波非和聚乙烯吡咯烷酮)等赋形剂。在一个方式中，药学上可容许的载体为脂质体或经皮吸收促进剂。作为已知的脂质体的例子，可以举出以下的脂质体：
·CellFectin、即阳离子性脂质N,NI,NII,NIII-四甲基-N,NI,NII,NIII-四棕榈基-精胺与二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)的1：1.5(M/M)的脂质体制剂(GIBCO BRL)，
·Cytofectin GSV、即阳离子脂质与DOPE的2：1(M/M)的脂质体制剂(GlenResearch)，
·DOTAP(N-[1-(2,3-二油酰氧基)-N,N,N-三甲基-甲基硫酸铵)(BoehringerManheim)，
·Lipofectamine、即聚阳离子性脂质DOSPA、中性脂质DOPE和二烷基化氨基酸(DiLA2)的3：1(M/M)的脂质体制剂(GIBCO BRL)，
·Lipotrust、即O-O’-二(十四烷酰基)-N-(α-三甲基铵基乙酰基)二乙醇胺氯化物(DC-6-14、胆固醇和二油酰磷脂酰乙醇胺的4：3：3(M/M)的脂质体制剂(Hokkaido SystemScience)。
本发明还涉及一种向皮肤中的细胞外基质产生细胞递送物质的物质递送用载体的制造方法，其包含将类视黄醇作为向皮肤中的细胞外基质产生细胞递送物质的物质递送促进成分进行配合的工序。作为类视黄醇的配合方法，例如可以使用本说明书中记载的各种方法。因此，类视黄醇的配合可以通过下述方法进行：利用化学和/或物理方法使类视黄醇和/或类视黄醇结合物结合或包含于载体的其他构成成分，或在载体的制作时将类视黄醇和/或类视黄醇结合物与除此以外的载体构成成分混合等。类视黄醇和/或类视黄醇结合物的配合量等如关于本发明的载体所描述的。
本发明的载体的递送物没有特别限制，优选是能够在生物体内从给药部位向靶细胞存在的病变部位物理地移动的大小。因此，本发明的载体除可以搬送原子、分子、化合物、蛋白、核酸等物质外，还可搬送载体、病毒粒子、细胞、由1个以上要素构成的药物释放系统、微设备等物体。上述递送物优选具有对靶细胞产生某些影响的性质，例如包括对靶细胞进行标记的递送物、控制靶细胞的活性或增殖(例如使其增强或将其抑制)的递送物。
因此，在本发明的一个方式中，载体的递送物包含“控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物”。这里，皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性是指皮肤中的细胞外基质产生细胞所表现的分泌、摄入、游走等各种活性，但在本发明中典型地是指其中的特别是与皮肤纤维化的发病、发展和/或复发等有关的活性。作为该活性，例如没有限定可以举出胶原、蛋白多糖、细胞粘合素、纤连蛋白、血小板反应蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白、弹性蛋白等细胞外基质成分等的产生和分泌、以及这些细胞外基质成分的分解活性的抑制等。
因此，在本发明中，控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物可以是直接或间接地抑制与皮肤纤维化的发病、发展和/或复发相关的该细胞的物理、化学和/或生理作用等的任意药物，没有限定，包含抑制上述细胞外基质成分等的产生、分泌的物质、细胞增殖抑制物质、凋亡诱导物质、TIMP(Tissue inhibitor of metalloproteinase，金属蛋白酶组织抑制剂)抑制物质等。
作为抑制细胞外基质成分等的产生、分泌的物质，没有限定，可以举出例如抑制胶原、蛋白多糖、细胞粘合素、纤连蛋白、血小板反应蛋白、骨桥蛋白、骨粘连蛋白、弹性蛋白等细胞外基质成分的表达的干扰核酸、核酶、反义核酸等物质、或显性失活突变体等具有显性失活效果的物质，表达它们的载体、以及用它们转化得到的细胞等。上述细胞外基质成分中，作为抑制胶原的产生、分泌的药物，没有限定，进一步可以举出例如作为在各种类型的胶原的合成过程中共同的细胞内输送及分子成熟化所必须的胶原特异性分子伴侣的HSP47的抑制物质、例如针对HSP47的干扰核酸、核酶、反义核酸等的HSP47表达抑制物质、或HSP47的显性失活突变体等具有显性失活效果的物质、表达它们的载体、以及用它们转化得到的细胞等。
作为细胞增殖抑制物质，没有限定，可以举出例如异环磷酰胺、尼莫司汀(例如盐酸尼莫司汀)、环磷酰胺、达卡巴嗪、美法仑、雷莫司汀等烷化剂，吉西他滨(例如盐酸吉西他滨)、依诺他滨、阿糖胞苷·十八烷基磷酸钠、阿糖胞苷制剂、替加氟·尿嘧啶、替加氟·吉莫斯特·氧嗪酸钾配合剂(例如TS-1)、去氧氟尿苷、羟基脲、氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、巯嘌呤等代谢拮抗剂，依达比星(例如盐酸依达比星)、表柔比星(例如盐酸表柔比星)、柔红霉素(例如盐酸柔红霉素、柠檬酸柔红霉素)、阿霉素(例如盐酸阿霉素)、吡柔比星(例如盐酸吡柔比星)、博来霉素(例如盐酸博来霉素)、培洛霉素(例如硫酸培洛霉素)、米托蒽醌(例如盐酸米托蒽醌)、丝裂霉素C等抗肿瘤性抗生素，依托泊甙、伊立替康(例如盐酸伊立替康)、长春瑞滨(例如酒石酸长春瑞滨)、多西他赛(例如多西他赛水和物)、紫杉醇、长春新碱(例如硫酸长春新碱)、长春地辛(例如硫酸长春地辛)、长春碱(例如硫酸长春碱)等生物碱，阿那曲唑、他莫昔芬(例如柠檬酸他莫昔芬)、托瑞米芬(例如柠檬酸托瑞米芬)、比卡鲁胺、氟他胺、雌莫司汀(例如磷酸雌莫司汀)等激素治疗剂，铂尔定、顺铂(CDDP)、奈达铂等铂络合物，沙利度胺、新伐司他、贝伐单抗等新生血管抑制剂，L－门冬酰胺酶。
作为凋亡诱导物质，没有限定，可以举出例如compound 861、胶霉毒素、阿托伐他汀等。
作为TIMP(例如TIMP1、TIMP2、TIMP3等)的抑制物质，没有限定，可以举出例如抗TIMP的抗体等TIMP活性抑制物质、针对TIMP的干扰核酸、核酶、反义核酸等TIMP产生抑制物质、表达它们的载体，以及用它们转化得到的细胞等。
另外，本发明中的“控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物”可以是直接或间接地与皮肤纤维化的发病、发展和/或复发的抑制相关的直接或间接地促进皮肤中的细胞外基质产生细胞的物理、化学和/或生理的作用等的任意药物。
本发明的载体可以递送上述药物中的1种或2种以上。
本发明中的干扰核酸包括siRNA(small interfering RNA，小干扰RNA)、miRNA(micro RNA，微小RNA)、shRNA(short hairpin RNA，短发夹RNA)、piRNA(Piwi-interactingRNA，Piwi相互作用RNA)、rasiRNA(repeat associated siRNA，重复相关siRNA)等双链RNA以及它们的突变体。本发明中的核酸包括RNA、DNA、PNA或它们的复合物。
核酸可以具有已知的各种修饰。通过修饰，能够提供核酸的稳定性提高等有益的特性。修饰可以是核酸的各种部分、例如糖、核酸碱基、磷酸基及磷酸二酯骨架等的1个或2个以上的部分中的修饰。作为修饰糖部分的非限定例，可以举出2’-O-甲基、2’-甲氧基乙氧基、2’-脱氧、2’-氟、2’-烯丙基、2’-O-[2-(甲基氨基)-2-氧代乙基]、4’-硫基、4’-(CH2)2-O-2’交联、2’-锁核酸、以及2’-O-(N-甲基氨基甲酸酯)等。作为修饰核酸碱基的非限定例，可以举出黄嘌呤、次黄嘌呤、2-氨基腺嘌呤、腺嘌呤及鸟嘌呤的6-甲基及其他烷基衍生物、腺嘌呤及鸟嘌呤的2-丙基及其他烷基衍生物、5-卤代尿嘧啶及5-卤代胞嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶及5-丙炔基胞嘧啶、6-偶氮尿嘧啶、6-偶氮胞嘧啶及6-偶氮胸腺嘧啶、5-尿嘧啶(假尿嘧啶)、4-硫代尿嘧啶、8-卤代、氨基、硫醇、硫代烷基、羟基及其它8-取代腺嘌呤和鸟嘌呤、5-三氟甲基及其他5-取代尿嘧啶和胞嘧啶、7-甲基鸟嘌呤和环核苷酸(acyclo nucleotide)等。作为对磷酸二酯骨架的修饰的非限定例，可以举出磷酸二酯键的由硫代磷酸酯、3’-(或-5’)脱氧-3’-(或-5’)硫基-硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、硒代硫酸酯、3’-(或-5’)脱氧亚膦酸酯、硼烷磷酸酯(boranophosphate)、3’-(或-5’)脱氧-3’-(或5’-)氨基氨基磷酸酯(3’-(or 5’)deoxy-3’-(or 5’-)amino phosphoramidate)、氢化膦酸酯、硼烷磷酸酯(borano phosphoric ester)、氨基磷酸酯、烷基或芳基膦酸酯及磷酸三酯或磷键等进行的取代。
另外，作为本发明的载体的递送物，没有限定，除抑制皮肤纤维化的发病、发展和/或复发的上述以外的药物例如没有限定，可以举出TGF-β1抑制剂(包含抗TGF-β1抗体、TGF-β1疫苗等)、己酮可可碱及其代谢物、钙通道阻滞剂(硝苯地平等)、前列腺素受体激动剂(伊洛前列素等)、ACE抑制剂(卡托普利、依那普利等)、内皮素受体抑制剂(波生坦等)、PDE-5抑制剂(西地那非等)、干扰素γ、CD20抑制剂(抗CD20抗体，例如利妥昔单抗等)、抗TNFα抗体(英夫利西单抗等)、mTOR抑制剂(西罗莫司、依维莫司等)、沙利度胺、羟基氯喹、他克莫司、免疫抑制剂(类固醇、硫唑嘌呤、环磷酰胺、氨甲蝶呤、环孢菌素、D-青霉胺等)等。这些药物也可以与后述的本发明的组合物并用。这里，“并用”包括实质上同时给药本发明的组合物和上述药物，和在相同的处置期间内在时间上隔开间隔地进行给药。前者的情况下，本发明的组合物可以与上述药物混合而给药，也可以不混合而连续地给药。后者的情况下，本发明的组合物可以在上述药物之前给药，也可以在之后给药。
在本发明的一个方式中，作为控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物，可以举出HSP47的抑制剂，例如针对HSP47的干扰核酸等。针对HSP47的干扰核酸的非限定例记载于WO2011/072082等中。
在部分方式中，针对HSP47的干扰核酸是具有结构(A1)的双链核酸：
5’(N)x-Z 3’(反义链)
3’Z’-(N’)y-z” 5’(正义链)
这里，各个N和N’可以是非修饰、也可以是经修饰的核苷酸，或是非定型部分，
各个(N)x和(N’)y是各个连续的N或N’与下一个N或N’共价键连接的寡核苷酸，
各个Z和Z’独立地存在或不存在，存在的情况下，包含独立地在其所存在的链的3’末端共价键地附着的1～5个连续的核苷酸或非核苷酸部分或其组合，
z”可以存在，也可以不存在，存在的情况下，是在(N’)y的5’末端共价键地附着的帽(capping)部分，
x和y各自独立地为18～40之间的整数，
(N’)y的序列与(N)x的序列具有互补性，(N)x包含针对编码HSP47的mRNA的反义序列。
在特定的方式中，针对HSP47的干扰核酸是具有结构(A2)的双链核酸：
5’N1-(N)x-Z 3’(反义链)
3’Z’-N2-(N’)y-z” 5’(正义链)
这里，N2、N及N’分别为非修饰核糖核苷酸或修饰核糖核苷酸或非定型部分，
(N)x及(N’)y分别是通过共价键将各个连续的N或N’与邻接的N或N’连结而成的寡核苷酸，
x和y各自独立地为17～39之间的整数，
(N’)y的序列与(N)x的序列具有互补性，(N)x与编码HSP47的mRNA的连续序列具有互补性，
N1与(N)x共价键合，是针对编码HSP47的mRNA的错配，或是与靶RNA互补的DNA部分，
N1是选自由天然或修饰的鸟苷、脱氧核糖鸟苷、核糖胸苷、脱氧核糖胸苷、腺苷或脱氧腺苷组成的组中的部分，
z”可以存在，也可以不存在，存在的情况下，是在N2-(N’)y的5’末端共价键地附着的帽部分，
Z和Z’各自独立地存在或不存在，存在的情况下，是独立地在其所存在的链的3’末端共价键地附着的1～5个连续的核苷酸、连续的非核苷酸部分或其组合。
上述结构(A1)及(A2)中的非定型部分没有限定，包括例如选自由非核苷酸部分(例如无碱基部分、倒位无碱基部分(倒位无碱基脱氧核糖部分，倒位无碱基核糖部分等)、烃(烷基)部分(非核苷酸C3、C4或C5部分等)，它们的衍生物等)、脱氧核糖核苷酸、修饰脱氧核糖核苷酸、镜像核苷酸(L-DNA、L-RNA等)、非碱基对核苷酸类似物、通过2’5’核苷酸间磷酸键与邻接的核苷酸连接而成的核苷酸、交联核酸(LNA、乙烯交联核酸等)、结合修饰核苷酸(PACE等)和碱基修饰核苷酸组成的组中的部分。
上述结构(A1)及(A2)中的帽部分包含可与(N’)y的5’末端共价键地连接的部分，没有限定，可以举出例如无碱基核糖部分、无碱脱氧核糖部分、无碱基核糖和无碱基脱氧核糖部分的修饰体(包括2’O烷基修饰体)、倒位无碱基核糖和无碱基脱氧核糖部分及其修饰体、C6-亚氨基-Pi、C6-氨基-Pi、镜像核苷酸(L-DNA、L-RNA等)、5’OMe核苷酸、以及核苷酸类似物，例如4’,5’-亚甲基核苷酸、1-(β-D-赤式呋喃)核苷酸、4’硫代核苷酸、碳环式核苷酸、5’-氨基-烷基磷酸酯、1,3-二氨基-2-丙基磷酸酯、3-氨基丙基磷酸酯、6-氨基己基磷酸酯、12-氨基十二烷基磷酸酯、羟丙基磷酸酯、1,5-脱水己糖醇核苷酸、α-核苷酸、苏式-戊呋喃糖基核苷酸、非环式3’,4’-断核苷酸(3’,4’-seco-nucleotide)、3,4-二羟基丁基核苷酸、3,5-二羟基戊基核苷酸、5’5’-倒位无碱基部分、1,4-亚丁基乙二醇磷酸酯、5’-氨基及交联或非交联甲基磷酸酯及5’-巯基部分。
上述结构(A1)和(A2)中的非核苷酸部分没有限定，可以举出例如无碱基部分、例如脱氧核糖无碱基部分(本说明书中有时称为“dAb”)或核糖无碱基部分(本说明书中有时称为“rAb”)、2个共价键地(优选介由磷酸基键)连接的无碱基部分(例如dAb-dAb或rAb-rAb或dAb-rAb或rAb-dAb)、烷基部分(任意含有丙烷(CH2)3部分(C3)、或丙醇(C3OH)和丙二醇(“C3Pi”)的衍生物)。在几个方式中，磷酸基键包括硫代磷酸酯、膦酰基乙酸酯或磷酸二酯键。在几个方式中，非核苷酸部分可以为C2、C3、C4、C5或C6烷基部分、任意地包含C3[丙烷、-(CH2)3-部分、或丙醇(C3OH)、丙二醇和丙二醇的磷酸二酯衍生物(“C3Pi”)的衍生物。
在各种方式中，烷基部分包括含有末端羟基、末端氨基或末端磷酸基的C3烷基、C4烷基、C5烷基或C6烷基部分的烷基衍生物。在几个方式中，烷基部分为C3烷基或C3烷基衍生物部分。在几个方式中，C3烷基部分包含丙醇、丙基磷酸酯、丙基硫代磷酸酯或它们的组合。在几个方式中，非核苷酸部分选自丙基磷酸酯、丙基硫代磷酸酯、丙基磷酸丙醇、丙基磷酸-丙基硫代磷酸酯、丙基磷酸-丙基磷酸酯、(丙基磷酸酯)3、(丙基磷酸酯)2-丙醇、(丙基磷酸酯)2-丙基硫代磷酸酯。
在一个方式中，上述结构(A1)和(A2)中的编码HSP47的mRNA具有序列号1表示的核苷酸序列。
在表5中示出结构(A1)中的反义链与正义链的组合的非限定例。
[表格14]
表5结构(A1)中的反义链与正义链的组合的非限定例
在表6中示出结构(A2)中的反义链与正义链的组合的非限定例。
[表格15]
表6结构(A2)中的反义链与正义链的组合的非限定例
在更具体的方式中，在具有结构(A1)和/或(A2)的核酸(结构(A1)中，x＝y＝19；结构(A2)中，x＝y＝18)包括以下修饰的组合。
组合1：正义链包含3’末端的15、16、17、18及19位(5’>3’)的5个连续的2’5’核糖核苷酸、3’末端共价键地附着的C3Pi部分及5’末端共价键地附着的倒位无碱基部分，反义链包含1、3、5、9、11、13、15、17及19位(5’>3’)中的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、7位的2’5’核糖核苷酸、及3’末端共价键地附着的C3Pi-C3OH部分。
组合2：正义链包含2、14及18位(5’>3’)的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、3’末端共价键地附着的C3OH部分及5’末端共价键地附着的倒位无碱基脱氧核糖核苷酸部分，反义链包含1、3、5、9、12、13和17位(5’>3’)中的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、7位的2’5’核糖核苷酸和3’末端共价键地附着的C3Pi-C3OH部分。
组合3：正义链包含15、16、17、18及19位(5’>3’)的2’5’核糖核苷酸、3’末端共价键地附着的C3OH部分及5’末端共价键地附着的倒位无碱基脱氧核糖核苷酸部分，反义链包含2、4、6、8、11、13、15、17及19位(5’>3’)中的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、7位的2’5’核糖核苷酸和3’末端共价键地附着的C3Pi-C3OH部分。
组合4：正义链包含4、11、13及17位(5’>3’)的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、9位的2’5’核糖核苷酸、3’末端共价键地附着的C3OH部分及5’末端共价键地附着的倒位无碱基脱氧核糖核苷酸部分，反义链包含1、4、8、11及15位(5’>3’)中的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、6位的2’5’核糖核苷酸和3’末端共价键地附着的C3Pi-C3OH部分。
组合5：正义链包含7、13、16及18位(5’>3’)的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、9位的2’5’核糖核苷酸、3’末端共价键地附着的C3OH部分及5’末端共价键地附着的倒位无碱基部分，反义链包含1、3、5、9、11、13、15、17及19位(5’>3’)中的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、7位的2’5’核糖核苷酸、及3’末端共价键地附着的C3Pi-C3OH部分。
组合6：正义链包含15、16、17、18及19位(5’>3’)的5个连续的2’5’核糖核苷酸、3’末端共价键地附着的C3Pi部分及5’末端共价键地附着的倒位无碱基部分，反义链包含1、3、5、9、11、13、15、17及19位(5’>3’)中的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、7位的2’5’核糖核苷酸、及3’末端共价键地附着的C3Pi-C3OH部分。
组合7：正义链包含2、14及18位(5’>3’)的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、3’末端共价键地附着的C3OH部分及5’末端共价键地附着的倒位无碱基脱氧核糖核苷酸部分，反义链包含1、3、5、9、11、13及17位(5’>3’)中的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、7位的2’5’核糖核苷酸和3’末端共价键地附着的C3Pi-C3OH部分。
组合8：正义链包含4、11、13及17位(5’>3’)的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、3’末端共价键地附着的C3OH部分及5’末端共价键地附着的倒位无碱基脱氧核糖核苷酸部分，反义链包含1、4、8、13及15位(5’>3’)的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、6位的2’5’核糖核苷酸和3’末端共价键地附着的C3Pi-C3OH部分。
组合9：正义链包含2、4、11、13和17位(5’>3’)的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、3’末端共价键地附着的C3OH部分和5’末端共价键地附着的倒位相位无碱基脱氧核糖核苷酸部分，反义链包含1、4、8、11及15位(5’>3’)中的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、6位的2’5’核糖核苷酸和3’末端共价键地附着的C3Pi-C3OH部分。
在上述组合中，C3Pi部分表示丙基磷酸酯，C3OH部分表示丙醇、C3Pi-C3OH部分表示丙基磷酸丙醇。在特定的方式中，上述各部分具有以下的结构。左端的磷酸基表示键合于核酸的3’末端的磷酸基。另外，在本发明中，核酸的“3’末端”是指与5’末端相反侧的末端。因此，例如与5’末端相反侧的末端的核苷酸在不是3’位、而是2’位具有能够与进一步的化学部分键合的磷酸基的情况下，该化学部分实际上与核酸的2’末端键合，但在本发明中，即使在这样的情况下，也可以方便地表现为键合于3’末端。
[化学式编号7]
在特定的方式中，针对HSP47的干扰核酸具有以下的结构。
结构1：
[化学式编号8]
上述结构中，反义链(序列号17)包含1、3、5、9、11、15、17及19位(5’>3’)的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、7位的2’5’核糖核苷酸，Z为C3Pi-C3OH部分，正义链(序列号16)包含15、16、17、18及19位(5’>3’)的2’5’核糖核苷酸，Z’是C3Pi部分，z”是指倒位无碱基脱氧核糖核苷酸部分。
结构2：
[化学式编号9]
上述结构中，反义链(序列号25)包含2、4、6、8、11、13、15、17及19位(5’>3’)的2’OMe糖修饰核糖核苷酸，7位的2’5’核糖核苷酸，Z为C3Pi-C3OH，正义链(序列号24)包含15、16、17、18及19位(5’>3’)的2’5’核糖核苷酸，Z’为C3OH部分，z”是指倒位无碱基脱氧核糖核苷酸部分。
结构3：
[化学式编号10]
上述结构中，反义链(序列号27)包含1、4、8、11和15位(5’>3’)的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、6位的2’5’核糖核苷酸，Z为C3Pi-C3OH部分，正义链(序列号26)包含4、11、13及17位(5’>3’)中的2’OMe糖修饰核糖核苷酸、9位的2’5’核糖核苷酸，Z’为C3OH部分，z”是指倒位无碱基脱氧核糖核苷酸部分。
本发明的载体递送的物质或物体可以未被标记。通过标记化，可以监测向靶细胞的递送是否成功、靶细胞的增减等，特别是不仅在试验、研究水平是有用的，而且在临床水平也是有用的。标记可以从本领域技术人员公知的任意物质、例如任意的放射性同位素、磁性体、气体或在生理条件下产生气体的物质，发生核磁共振的元素(例如氢、磷、钠、氟等)、对发生核磁共振的元素的弛豫时间产生影响的物质(例如金属原子或含有该金属原子的化合物)、与标记化物质结合的物质(例如抗体等)、荧光物质、荧光团、化学发光物质、生物素或其衍生物、抗生物素蛋白或其衍生物、酶等中选择。
本发明中，“皮肤中的细胞外基质产生细胞用”或“皮肤中的细胞外基质产生细胞递送用”是指适于将皮肤中的细胞外基质产生细胞作为靶细胞使用，其包括例如与其他细胞、例如正常细胞相比能够将物质更为迅速、高效且/或大量地递送至皮肤中的细胞外基质产生细胞中。例如，本发明的载体能够将物质以相比较于其他细胞为1.1倍以上、1.2倍以上、1.3倍以上、1.5倍以上、2倍以上、进而3倍以上的速度和/或效率递送至皮肤中的细胞外基质产生细胞中。在本发明中，“递送”包含使递送物被靶细胞摄入的步骤、以及包含使被摄入到细胞中的递送物到达细胞的作用部位的步骤的一系列的过程，递送的促进是指这些步骤中的任一个以上的促进。使递送物被靶细胞摄入的步骤并无限定，包括通过递送物的内吞作用、胞饮等的摄入。使摄入到细胞的递送物到达细胞的作用部位的步骤并无限定，包括胞饮体脱离、向细胞内的特定部位(例如细胞核、细胞质、细胞膜、线粒体等)的转移等。
递送的促进可以通过将递送的各个步骤中的递送物的行为、作为递送的最终结果的递送物的作用与利用不含递送促进成分的同样的载体的情况进行比较等来进行评价。例如，向细胞内的摄入通过观察带有可检测的标记的递送物的经时位置的变化等来进行评价，胞饮体脱离通过观察对胞饮体进行了特异性染色的细胞中的带有可检测的标记的递送物与胞饮体的经时的位置关系的变化等来进行评价。另外，递送物的作用可以通过与递送物对应的方法来进行评价。例如，在递送物为针对特定基因的抑制性核酸的情况下，通过确定该基因的表达水平，能够评价其作用。促进的程度没有限定，可以是与不含递送促进成分的同样的载体相比，例如1.1倍以上、1.2倍以上、1.3倍以上、1.2倍以上、1.5倍以上、2倍以上或3倍以上的促进。
本发明还涉及用于控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的组合物、用于对皮肤纤维化或由GVDH引起的纤维化进行处置的组合物、或用于从纤维化皮肤组织再生正常皮肤组织的组合物、以及上述载体在这些组合物的制造中的用途，所述组合物包含所述载体、和控制所述皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物。本发明的组合物的一个方式包含用于促进向皮肤中的细胞外基质产生细胞的物质递送的有效量的类视黄醇。另外，本发明的组合物的一个方式通过类视黄醇，向皮肤中的细胞外基质产生细胞的物质递送得到促进。
本发明中的皮肤纤维化是指以皮肤中的细胞外基质(例如胶原等)的过量蓄积为特征的病症，不限定于此，包括例如伴随偶发性和医原性(手术)的所有可能种类的皮肤损伤(外伤、手术创伤、烫伤(化学烫伤、热引起的烫伤或放射线烫伤)、皮肤移植等)相关的异常的瘢痕形成(肥厚性瘢痕、瘢痕疙瘩)、硬皮病(系统性硬皮病、斑状硬皮病等)、皮肤GVHD、杜普伊特伦挛缩(Dupuytren's contracture)、大疱性表皮松解症、药物(例如紫衫烷、博来霉素等)诱导性皮肤纤维化、限制性皮肤障碍等皮肤疾病、或迟发性皮肤卟啉病、肾性全身性纤维化、嗜酸性粒细胞增多肌痛综合征、毒性油综合征等疾病的皮肤纤维化等。本发明中的由GVHD引起的纤维化不仅包括皮肤，还包括各种脏器(肺、肝脏等)中的纤维化。
皮肤GVHD是伴随GVHD的皮肤症状，多在具有cGVHD的对象中发病。GVHD在造血器官肿瘤(例如急性髓性白血病、急性早幼粒细胞性白血病、急性淋巴性白血病、慢性髓性白血病、慢性淋巴性白血病等白血病，何杰金氏淋巴瘤、非何杰金氏淋巴瘤等淋巴瘤，多发性骨髓瘤等)或固体肿瘤(特别是转移性的固体肿瘤)等肿瘤性疾病、骨髓增生异常综合征(MDS)，作为再生障碍性贫血等处置的一环而进行的同种造血干细胞移植后，由于供体的白细胞等攻击受体的组织(特别是正常组织)而发生的病症，如果严重化，则可能成为致死性的。另一方面，GVHD也有表示移植后的供体的细胞固着成功的现象。伴随造血干细胞移植的肿瘤的治疗中，移植前通常利用放射线和/或化疗剂等进行肿瘤的处置(移植前处置)。移植前处置虽说优选尽可能地根除作为对象的肿瘤，但对于高龄对象(例如55岁以上、60岁以上、65岁以上、70岁以上、75岁以上等的人对象)、或患有其他并发症(例如糖尿病、肾病、心脏病等)的对象等，由于骨髓破坏性前处理等强力的前处置的负担大，因此有时应用比骨髓非破坏性前处置(NMAC)或强度减弱型前处置(RIC)等强度低的前处置。
将这些低强度前处置应用于肿瘤性疾病时，由于肿瘤细胞未根除的可能性高，因此移植后的供体的细胞攻击残留的肿瘤细胞进行攻击，将其排除的移植物抗白血病(GVL)效果、或移植物抗肿瘤(GVT)效果变得重要。因此，尽可能不损害GVL/GVT效果地抑制GVHD的不良影响对于低强度前处置的成为适应对象而言特别有益。本发明的组合物显示对GVL/GVT效果来源的供体来源的免疫细胞不产生显著的影响，因此在低强度前处置后的GVHD(特别是皮肤GVHD)的处置、低强度前处置后的GVHD(特别是皮肤GVHD)发病的对象的处置等中特别有用。在本发明的一个方式中，皮肤纤维化是低强度前处置后的GVHD，特别是低强度前处置后的皮肤GVHD。在更特定的方式中，皮肤纤维化是针对肿瘤性疾病的低强度前处置后的GVHD，特别是针对肿瘤性疾病的低强度前处置后的皮肤GVHD。
在一个方式中，本发明涉及一种用于处置皮肤GVHD的组合物，其包含所述载体、和控制所述皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物。在部分方式中，所述组合物是用于处置通过低强度前处置后的同种造血干细胞移植而发生的皮肤GVHD的组合物。在特定方式中，所述组合物是用于对在高龄者或并发症患者中通过低强度前处置后的同种造血干细胞移植而发生的皮肤GVHD进行处置的组合物。在另一特定方式中，所述组合物是用于不对供体来源的免疫细胞产生显著影响地对因低强度前处置后的同种造血干细胞移植而发生的皮肤GVHD进行处置的组合物。在另一特定方式中，所述组合物是用于对因针对肿瘤性疾病的低强度前处置后的同种造血干细胞移植而发生的皮肤GVHD进行处置的组合物。在更特定的方式中，所述组合物是下述组合物：(i)用于不对供体来源的免疫细胞产生显著影响地对在高龄者或并发症患者中、因低强度前处理后的同种造血干细胞移植而发生的皮肤GVHD进行处置的组合物、(ii)用于在高龄者或并发症患者中、因针对肿瘤性疾病的低强度前处置后的同种造血干细胞移植而发生的皮肤GVHD进行处置的组合物、(iii)用于不对供体来源的免疫细胞产生显著影响地对针对肿瘤性疾病的低强度前处置后的同种造血干细胞移植而发生的皮肤GVHD进行处置的组合物、或(vi)用于不对供体来源的免疫细胞产生显著影响地对在高龄者或并发症患者中、因针对肿瘤性疾病的低强度前处置后的同种造血干细胞移植而发生的皮肤GVHD进行处置的组合物。
在另一方式中，本发明涉及一种用于处置伴随GVHD的纤维化的组合物，其含有上述载体、和控制上述皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物。在部分方式中，所述组合物是用于对伴随因低强度前处置后的同种造血干细胞移植而发生的GVHD的纤维化进行处置的组合物。在特定方式中，所述组合物是用于在高龄者或并发症患者中、伴随因低强度前处置后的同种造血干细胞移植而发生的GVHD的纤维化进行处置的组合物。在另一特定方式中，所述组合物是用于不对供体来源的免疫细胞产生显著影响地对伴随因低强度前处置后的同种造血干细胞移植而发生的GVHD的纤维化进行处置的组合物。在另一特定方式中，所述组合物是用于对伴随因针对肿瘤性疾病的低强度前处置后的同种造血干细胞移植而发生的GVHD的纤维化进行处置的组合物。在更特定的方式中，所述组合物是下述组合物：(i)用于不对供体来源的免疫细胞产生显著影响地对在高龄者或并发症患者中、伴随因低强度前处理后的同种造血干细胞移植而发生的皮肤GVHD的纤维化进行处置的组合物、(ii)用于在高龄者或并发症患者中、伴随因针对肿瘤性疾病的低强度前处置后的同种造血干细胞移植而发生的皮肤GVHD的纤维化进行处置的组合物、(iii)用于不对供体来源的免疫细胞产生显著影响地对伴随针对肿瘤性疾病的低强度前处置后的同种造血干细胞移植而发生的皮肤GVHD的纤维化进行处置的组合物、或(vi)用于不对供体来源的免疫细胞产生显著影响地对在高龄者或并发症患者中、伴随因针对肿瘤性疾病的低强度前处置后的同种造血干细胞移植而发生的皮肤GVHD的纤维化进行处置的组合物。在这些方式中，伴随GVHD的纤维化也会在皮肤以外的组织、例如肝脏、肺等中发生。另外，用于处置伴随GVHD的纤维化的组合物可以是全身给药制剂(例如静脉内给药制剂等)。
在本发明中，“从纤维化皮肤组织再生正常皮肤组织”是指将因纤维化而变质的皮肤组织至少回复到纤维化更为轻度的状态，更优选回复到纤维化发生之前的状态。即，随着皮肤纤维化的发展，皮肤组织被替换为以细胞外基质为代表的纤维组织，但使趋势逆转、使增生的纤维组织替换为原来的正常组织为本发明中的从纤维化皮肤组织到正常皮肤组织的再生。因此，本发明中的从纤维化皮肤组织到正常皮肤组织的再生不仅包括使纤维化皮肤组织完全回复到原来的状态，还包括使纤维化皮肤组织部分回复到原来的状态。正常皮肤组织的再生的程度可以通过活检试样等组织学检查，根据组织结构的正常化、纤维组织所占的区域的缩小、正常组织所占的区域的扩大等来进行评价，在利用本组合物进行处置前可见纤维化引起的生化指标等的异常的情况下，也可以通过该指标等的改善等来进行评价。
在本发明的组合物中，载体可以在其内部包含递送物，也可以附着于递送物的外部而存在，还可以与递送物混合。因此，也可以根据给药途径、药物释放方式等，可以用适当的材料例如肠溶性的涂层、定时崩解性的材料覆盖上述组合物，另外也可以将上述组合物纳入适当的药物释放系统中。此外，本发明的组合物也可以采取包含类视黄醇的脂质载体与递送物的复合物、即脂质复合物的形态。另外，在载体仅由类视黄醇和/或类视黄醇结合物构成的情况下，本发明的组合物可以采取控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物与类视黄醇和/或类视黄醇结合物的复合物的形态。
本发明的组合物可以以医药形式使用(即医药组合物)，可以通过包含经口和非经口这两者的各种路径给药，例如可没有限定地通过经口、静脉内、肌肉内、皮下、局部、肺内、气道内、气管内、支气管内、经鼻、经胃、经肠、直肠内、动脉内、门静脉内、心室内、骨髓内、淋巴结内、淋巴管内、脑内、髄腔内、脑室内、经粘膜、经皮、鼻内、腹腔内和子宮内等路径给药，还可以制成适于各给药路径的剂型。该剂型和制剂方法可以适当采用任意公知的剂型和方法。
例如作为适于经口给药的剂型，可没有限定地举出散剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、液剂、悬浮剂、乳剂、凝胶剂、糖浆剂等，另外作为适于非经口给药的剂型，可以举出溶液性注射剂、悬浮性注射剂、乳浊性注射剂、用时制备型注射剂等注射剂。非经口给药用制剂可以是水性或非水性的等渗性无菌溶液或悬浮液的形态。作为适于经皮给药的剂型，可以举出软膏、乳霜、贴剂、糊剂等。经皮给药制剂可以含有经皮吸收促进剂等对经皮给药有用的成分。
本发明还涉及一种用于处置皮肤纤维化或由GVHD引起的纤维化的组合物的制造方法，其包含将类视黄醇作为向皮肤中的细胞外基质产生细胞递送物质的物质递送促进成分进行配合，将控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物作为有效成分进行配合的工序。类视黄醇和/或类视黄醇结合物的配合方法只要在配合而成的组合物中类视黄醇和/或类视黄醇结合物能够作为向皮肤中的细胞外基质产生细胞递送物质的物质递送促进成分发挥功能就没有特别限定，例如可以使用本说明书中记载的各种方法。另外，有效成分的配合方法只要有效成分能够起到规定的效果则没有特别限定，可以使用任意的公知的方法。有效成分的配合可以与类视黄醇和/或类视黄醇结合物同时进行，也可以在配合类视黄醇之前或配合后进行。例如，在组合物含有除类视黄醇及类视黄醇结合物以外的载体构成成分的情况下，有效成分的配合可以通过将类视黄醇和/或类视黄醇结合物作为物质递送促进成分已经配合的载体与有效成分等混合来进行，也可以通过将类视黄醇和/或类视黄醇结合物、除类视黄醇和类视黄醇结合物以外的载体构成成分和有效成分同时混合等来进行，或者将有效成分配合在除类视黄醇和类视黄醇结合物以外的载体构成成分中后，将其与类视黄醇和/或类视黄醇结合物混合等来进行。
类视黄醇的配合量等与关于本发明的载体已经叙述的内容相同。另外，有效成分的配合量在以组合物形式给药的情况下，可以是可抑制皮肤纤维化或由GVHD引起纤维化的发病或复发、改善病症、减轻症状、或者延迟或停止发展的量，或者可预防皮肤纤维化或因GVHD引起的纤维化的发病和复发，或者可将其治愈的量，或者可从纤维化皮肤组织再生正常皮肤组织的量。另外，优选不会产生超过给药带来的好处的不良影响的量。上述量是公知的，或者可以通过使用了培养细胞等的体外(in vitro)试验、小鼠、大鼠、狗或猪等动物模型中的试验来适当确定，这样的试验方法是本领域技术人员所熟知的。作为皮肤纤维化的动物模型，可以举出例如作为硬皮病模型的Asano等,Curr Rheumatol Rep.(2013)15：382中记载的模型(例如ROS(活性氧)诱发SS(系统性硬皮病)模型、Topol(DNA拓扑异构酶I)和CFA(完全弗氏佐剂)诱发SS模型、AngII(血管紧张素II)诱发模型或Fra-2(Fos-相关抗原2)转基因小鼠、Fli1(Friend白血病病毒综合因子1)ΔCTA(c末端活化区)/ΔCTA模型等)。作为伴随皮肤GVHD的GVHD的动物模型没有限定，次要组织相容性抗原错配移植模型(从B10.D2小鼠向BALB/c小鼠的骨髓细胞、脾细胞等的移植)等。有效成分的配合量可以根据组合物的给药方式而变化。例如，在1次给药中使用多个单位的组合物的情况下，组合物1单位中配合的有效成分的量可以为1次给药所需的有效成分的量的几分之一。该配合量的调整可以由本领域技术人员适当进行。例如，每天每kg体重约0.1mg～约140mg左右的给药量水平对于上述状态的处置是有用的(每天每1个对象约为0.5mg～约7g)。为了生成单一的给药方式，能够与载体材料组合的活性成分的量根据所处置的宿主和具体的给药方法的不同而不同。给药单位形态通常包含约1mg～约500mg的活性成分。
可以理解用于任意特定的对象的具体的用量水平依赖于包括所使用的具体的化合物的活性、年龄、体重、一般健康状态、性别、饮食、给药、给药时间、给药途径、以及排出速度、并用药剂和接受治疗的特定疾病的严重度在内的各种因素。
本发明的医药组合物可以1天1次、qid、tid、bid或以医学上适当的任意间隔在任意的期间给药。但是，治疗剂另外也可以以在一天内以适当的间隔给药的、包含2、3、4、5、6或7个以上的次位用量的给药单位进行给药。在该情况下，各次位用量中所含的有效成分为了实现1天的总给药单位也可以相应地进一步减少。给药单位可以使用例如在几天内带来有效成分的持续的恒定释放的以往的缓释制剂，组合用于数日的单一用量。缓释制剂在该技术领域中是公知的。给药单位也可以包含对应的多个的一天量。组合物的有效成分的多个单位的合计可以组合以一起含有充分的用量。
本发明的载体或组合物可以以冷冻干燥的状态提供。在对本发明的载体或组合物进行冷冻干燥时，可以利用冷冻干燥保护剂。作为冷冻干燥保护剂的非限定例，可以举出蔗糖、乳果糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、纤维二糖、曲二糖、黑曲霉糖、异麦芽糖、槐糖、昆布二糖、龙胆二糖、松二糖、麦芽酮糖、帕拉金糖、龙胆二酮糖(gentiobiulose)、甘露二糖、蜜二糖、车前二糖(Melibiulose)、芸香糖、芦丁糖、木二糖等多糖类。
本发明的载体或组合物可以以可用时制备的形态、例如以在医疗现场或其附近可由医生和/或药剂师、护士或其他医学辅助人员等进行制备的形态提供。冷冻干燥形态是可用时制备的形态的一个例子。此时，本发明的载体或组合物以1个或2个以上的含有其所需的构成要素中的至少1个的容器的形式提供，在使用之前、例如24小时前以内、优选3小时前以内、进一步优选在马上要使用之前进行制备。在进行制备时，可以适当使用在进行制备的场所通常可获得的试剂、溶剂、调剂器具等。
因此，本发明还涉及一种载体或组合物的制备试剂盒，其包含单独或组合含有类视黄醇和/或类视黄醇结合物、和/或递送物、和/或除类视黄醇和类视黄醇结合物以外的载体构成物质的1个或2个以上的容器，另外，本发明还涉及以这种试剂盒形式提供的所述载体或所述组合物的必要构成要素。本发明的试剂盒除了上述之外，还可含有与本发明的载体和组合物的制备方法或给药方法、皮肤纤维化或由GVHD引起的纤维化的处置等有关的指示、例如说明书、或CD、DVD等电子记录介质等。另外，本发明的试剂盒还可含有用于完成本发明的载体或组合物的全部构成要素，也可并非含有全部的构成要素。因此，本发明的试剂盒也可含有在医疗现场或实验机构等处通常可获得的试剂或溶剂、例如无菌水、生理盐水、葡萄糖溶液等。
本发明还涉及用于控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的、或者用于处置皮肤纤维化或由GVHD引起的纤维化的、或用于从纤维化皮肤组织再生正常皮肤组织的方法，其包括将上述组合物的有效量给药给需要该组合物的对象。这里，有效量例如对于后者而言，是指抑制皮肤纤维化或由GVHD引起的纤维化的发病或复发、改善病症、减轻症状或者延缓或停止发展的量，优选是预防皮肤纤维化或由GVHD引起的纤维化的发病和复发或者将其治愈的量、或者可从纤维化皮肤组织再生正常皮肤组织的量。另外，优选为不会发生超过给药所带来的好处的不良影响的量。该量可以通过使用了培养细胞的体外(in vitro)试验、或者大鼠、小鼠、狗或猪等动物模型的试验来适当确定，这种试验方法为本领域技术人员所熟知。另外，载体中所含的类视黄醇和本发明的方法中所用的药物的用量是本领域技术人员公知的，或者可以通过上述试验等适当确定。皮肤纤维化或GVHD的动物模型如上文所述。
本发明的方法中所给药的组合物的具体用量可以考虑与需要处置的对象有关的各种条件、例如症状的严重程度、对象的一般健康状态、年龄、体重、对象的性別、饮食、给药途径、给药时期和频率、并用的药品、对治疗的反应性、以及对治疗的依从性等来确定。
作为给药途径，包括包含经口和非经口这两者的各种途径，例如包括经口、静脉内、肌肉内、皮下、局部、肺内、气道内、气管内、支气管内、经鼻、经胃、经肠、直肠内、动脉内、门静脉内、心室内、骨髄内、淋巴结内、淋巴管内、脑内、髄腔内、脑室内、经粘膜、经皮、鼻内、腹腔内和子宮内等途径。
给药频率根据所用组合物的性状、上述对象的条件的不同而不同，例如可以是1天多次(即1天2、3、4次或5次以上)、1天1次、数天1次(即每2、3、4、5、6、7日1次等)、1周数次(例如1周2、3、4次等)、1周1次、数周1次(即每2、3、4周1次等)。
本发明的方法中，用语“对象”是指任意的生物个体，优选为动物、更优选为哺乳动物、进一步优选为人的个体。本发明中，对象可以是健康的，也可以患有某种疾病，但在要进行皮肤纤维化的处置时，典型地是指患有皮肤纤维化、或者具有患病的危险的对象。例如，在希望预防皮肤纤维化时，没有限定，典型的例子是患有GVHD、迟发性皮肤卟啉病、肾性全身性纤维化、嗜酸性粒细胞增多肌痛综合征、毒性油综合征等的成为皮肤纤维化的原因的基本的对象。
用语“处置”包含以疾病的治愈、暂时的缓解或预防等为目的的医学上可容许的全部种类的预防和/或治疗性的介入。例如，“处置”的用语包括皮肤纤维化发展的发展的延迟或停止、病变的退缩或消失、皮肤纤维化发病的予防或复发的防止等在内的各种目的的医学上可容许的介入。
在一个方式中，本发明的方法中的对象是具有收到低强度前处置、和随之进行的同种骨髓干细胞移植的对象。在特定的方式中，所述对象为高龄对象(例如55岁以上、60岁以上、65岁以上、70岁以上、75岁以上等的人对象)、和/或患有其他并发症(例如糖尿病、肾病、心脏病等)的对象。在另一特定方式中，该对象患有肿瘤性疾病(例如造血器官肿瘤等)。在更特定的方式中，该对象是患有肿瘤性疾病的高龄对象和/或患有肿瘤性疾病和除此之外的并发症的对象。
在部分方式中，本发明的方法还包含鉴定具有皮肤纤维化或GVHD、或具有该发病的风险的对象的步骤。在一个方式中，本发明的方法还包含对对象进行同种造血干细胞移植的步骤。在特定的方式中，本发明的方法还包含对对象进行低强度前处置的步骤、以及对所述对象进行同种造血干细胞移植的步骤。
本发明还涉及利用了上述载体的向皮肤中的细胞外基质产生细胞递送物质的物质递送方法。该方法没有限定，包含例如下述工序：使递送物担载在上述载体上的工序；将担载了递送物的载体给药或添加至含有皮肤中的细胞外基质产生细胞的生物或介质、例如培养用培养基等中的工序。这些工序可以通过公知的任意的方法或者本说明书所记载的方法等来适当实现。上述递送方法还可与其他的递送方法、例如以皮肤为靶的其他递送方法等相组合。另外，上述方法既包括体外进行的方式，也包括以体内的皮肤中的细胞外基质产生细胞为靶的形态。关于可通过本发明的载体运送的物质如上文所述。
实施例
例1含siRNA的视黄醇结合脂质体的制备
如WO2012/170952中记载的那样，制备含有siRNA和类视黄醇结合物XR3的含siRNA的类视黄醇结合脂质体。首先，在无水乙醇中将脂质P2、脂质I8、DOPE、胆固醇、PEG-DMPE和XR3以20：20：30：25：5：2的摩尔比溶解，得到乙醇/脂质混合物。将siRNA溶解于50mM柠檬酸缓冲液中，将温度调整为35～40℃。接着，将乙醇/脂质混合物边搅拌边加入到含siRNA的缓冲液中，形成含siRNA的脂质体。乙醇/脂质混合物的添加持续到最终的总脂质：siRNA比率达到15：1(w：w)为止。接着，将所形成的含siRNA的脂质体相对于10倍体积的PBS(pH为7.2)进行透析过滤，除去乙醇。所得到的脂质体(有时简称为“XR3(+)脂质体”或“含siRNA的视黄醇结合脂质体”)显示平均粒径为50～100nm、PDI<0.2、及siRNA封入效率>85％。另外，测定Zeta电位，结果在中性区域的pH下为电中性。
所使用的siRNA的序列如下所示：
siRNA1
正义链：5'-GAGACACAUGGGUGCUAUA-3'(序列号16)
反义链：5'-UAUAGCACCCAUGUGUCUC-3'(序列号17)
siRNA2
正义链：5'-UCCUGAGACACAUGGGUGA-3'(序列号26)
反义链：5'-UCACCCAUGUGUCUCAGGA-3'(序列号27)
杂乱siRNA
正义链：5'-CGAUUCGCUAGACCGGCUUCAUUGCAG-3'(序列号32)
反义链：5'-GCAAUGAAGCCGGUCUAGCGAAUCGAU-3'(序列号33)
例2皮肤肌成纤维细胞中的HSP47的表达抑制
为了确认含siRNA的类视黄醇结合脂质体能够抑制认为与皮肤纤维化有关的皮肤肌成纤维细胞中的HSP47的表达，使例1中制作的含siRNA的类视黄醇结合脂质体作用于在体外制备的皮肤肌成纤维细胞，测定HSP47的表达。皮肤肌成纤维细胞是用TGF-β1诱导皮肤成纤维细胞而制备的。首先，用含有5mg/ml的IV型胶原酶(Sigma-Aldrich)的DMEM对未处置的BALB/c小鼠的皮肤片进行消化1小时，在加有10％FCS的DMEM中培养2～3天。将这样得到的原代皮肤成纤维细胞在加有10％FCS的DMEM中培养24小时后，在无FCS的培养基中放置12小时，在以siRNA的浓度计为50nM的含siRNA的类视黄醇结合脂质体的存在下或不存在下加入重组人TGF-β1(R&D Systems)。24小时后，将细胞回收到ISOGEN II(Nippon Gene)中，提取RNA。使用ReverTra Ace(R)qPCR RT Master Mix with gDNA Remover(Toyobo)制作cDNA文库。使用TaqMan(R)Fast Universal PCR Master Mix(Life Technologies)进行HSP47的定量PCR(荧光探针法)。所使用的荧光探针(P)、引物(F/R)的各序列如下所述。其中，荧光探针的5’末端用FAM标记。
serpinh1-P：5'-AGCCACACTGGGATGAGAAGTTTCACCA-3'(序列号34)
serpinh1-F：5'-CTGCTTGTGAACGCCATGTTC-3'(序列号35)
serpinh1-R：5'-TCACCATGAAGCCACGGTTG-3'(序列号36)
由图1所示的结果可知，siRNA 1和siRNA 2均显著性地抑制皮肤肌成纤维细胞中的HSP47的表达。
例3博来霉素诱发皮肤纤维化的处置
按照图2所示的给药方案，对C57BL/6小鼠的背部进行剃毛，在同一部位在21天内连日皮下注射博来霉素(BLM)2mg/kg。对于治疗组，从博来霉素给药开始的1天后，每周3次静脉注射4.5mg/kg·BW的含siRNA的类视黄醇结合脂质体(BLM+siRNA组)。作为siRNA，使用siRNA1。对于对照组，给药赋形剂(PBS)(BLM+PBS组)。
在从实验开始的第22天，按照以下的(1)～(6)评价皮肤纤维化的程度。
(1)由皮肤纤维化引起的真皮增厚的评价：
从小鼠的背部采集皮肤，用4％多聚甲醛固定过夜后，进行石蜡包埋和切片的制作。通过Masson’s-Trichrome(MT)染色评价纤维化的程度。对每一标本测定5处真皮厚度，取其平均，进行由纤维化引起的真皮增厚(skin thickness)的评价。
(2)胶原点密度：
将MT染色样本中长度为3mm的图像纳入图像分析软件Image Scope中。使用ImageScope的分析程序，计算纤维化部位的色彩矢量值的总和。
(3)胶原分析：
使用皮肤穿孔器(Derma punch 5mm、Maruho株式会社)以直径为5mm的圆形(面积：19.6mm2)挖出皮肤样品，对从每个个体2处采集的样品合并进行分析。将皮肤样品在2ml的0.5M乙酸+0.1mg/ml胃蛋白酶中使用TissueRuptor(Qiagen)进行匀浆，在4℃下使其反应48小时后，使用Sircol Collagen Assay Kit(Biocolor)和GloMax(R)-Multi LuminescenceSystem(Promega)对胶原量进行定量。
(4)羟基脯氨酸分析
将皮肤样品放入6N的HCl中，在110℃下使其反应24小时后，用6N的NaOH进行中和。使其与Chloramin T溶液反应20分钟，用Ehrlich溶液进行显色，测定吸光度。
(5)由mRNA提取的qPCR法
用液氮使皮肤样品急速冷冻。RNA的提取和qPCR与例1同样地进行。其中，除了HSP47之外，还研究了Col1a1的表达。针对Col1a1的荧光探针(P)、引物(F/R)的各序列如下所述。其中，荧光探针的5’末端用FAM标记。
col1a1-P：5'-CGGGGTCGGAGCCCTCGCTTCC-3'(序列号37)
col1a1-F：5'-ACCGATGGATTCCCGTTCGA-3'(序列号38)
col1a1-R：5'-CATTAGGCGCAGGAAGGTCAG-3'(序列号39)
(6)免疫荧光染色：
制作石蜡切片，使用抗HSP47抗体(abcam)和作为二次抗体的抗兔IgG抗体AlexaFluor 594进行染色。
对于博来霉素皮下注射了21天后的小鼠，在给药局部发生显著的纤维化(图3)，观察到真皮增厚和胶原沉积(通过胶原点密度测定)的增加(图4)。但是，如图4所示，在与BLM一起给药了含siRNA的类视黄醇结合脂质体的BLM+siRNA组中，与BLM+PBS组相比，有真皮增厚得到显著性抑制、胶原沉积也得到抑制的倾向(p＝0.057)。
另外，通过qPCR法观察到HSP47的表达，结果可知，HSP47的表达通过博来霉素给药而上升，在BLM+siRNA组中显著降低(图5B)。另一方面，Col1a1的表达未见显著性的变化(图5A)。
对皮肤的羟基脯氨酸量进行定量，结果可知其也在博来霉素给药时增加，但通过siRNA给药而正常化(图5C)。
根据这些结果可以清楚，在皮肤纤维化中，肌成纤维细胞HSP47依赖性地产生胶原。另外，含siRNA的类视黄醇结合脂质体对于皮肤纤维化是有效的纤维化抑制剂。
例4皮肤GVHD的处置1
如图6所示，对受体小鼠(BALB/c)进行全身放射线照射(6Gy)后，通过输注从主要组织相容性基因复合物(MHC)相符、仅次要组织相容性抗原不一致的供体小鼠(B10.D2)采集的骨髓细胞8×106个和脾细胞2.5×107个，作为同种移植组(Allo组)。作为对照，对同样地进行了全身放射线照射的BALB/c小鼠移植从相同的BALB/c小鼠采集的骨髓细胞和脾细胞，作为同系移植组(Syn组)。
根据图9所示的给药方案，对Allo组的受体(recipent)中的一半，从移植后第8天至第26天每周3次静脉注射4.5mg/kg·BW的含siRNA的类视黄醇结合脂质体，作为治疗组(Allo+siRNA组)。作为siRNA，使用siRNA1。对于剩余的Allo组的受体，作为对照仅给药PBS(Allo+PBS组)。
按照上述(1)～(6)评价第42天存活的小鼠的皮肤纤维化的重症度。
对作为受体小鼠的BALB/c进行放射线照射后，从作为供体的B10.D2小鼠进行骨髓细胞和脾细胞的移植(图6)。6周后(第42天)评价皮肤的纤维化，结果与作为对照进行了同系移植的Syn组相比，显著性地真皮增厚、胶原沉积增加(图7)。
另外，通过皮肤切片的免疫荧光染色，可以清楚与Syn组相对照地，在Allo组中HSP47阳性细胞显著增加(图8)。
从移植后第8天至第26天每周3次给药含siRNA的类视黄醇结合脂质体(图9)，结果对于第42天的皮肤而言，与作为对照的Allo+PBS组相比，真皮增厚和胶原沉积减少(图11)。在通过胶原分析进行的胶原的定量中，对于含siRNA的类视黄醇结合脂质体给药组(Allo+siRNA组)，与Allo+PBS组相比，皮肤的胶原量也显著性地减少(图13)。
进行HSP47的qPCR，但在含siRNA的类视黄醇结合脂质体给药组中HSP47的表达未得到抑制(图12)。考虑这是因为在分析前将含siRNA的类视黄醇结合脂质体停药了16天(图9)。
例5皮肤GVHD的处置2
作为siRNA使用siRNA 2，将含siRNA的类视黄醇结合脂质体或赋形剂(PBS)的给药从第1天持续到第41天，除此以外，进行与例4同样的实验。另外，除了皮肤纤维化的评价以外，用流式细胞仪对脾脏和胸腺中所含的细胞的种类、比率等进行分析。更具体而言，在第42天采集胸腺和脾脏、制备细胞悬浮液后，使用RBC lysis buffer(Biolegend)溶解红细胞，将活细胞数在台盼蓝染色后进行计数。来自胸腺的细胞悬浮液用抗CD4抗体和抗CD8抗体染色，通过流式细胞法对双阳性细胞进行定量。来自脾脏的细胞悬浮液通过流式细胞法，将CD11b-TCRb+CD4+细胞作为CD4+T细胞，将CD11b-TCRb+CD8+细胞作为CD8+T细胞进行定量。嵌合体分析如下进行：用抗Ly9.1抗体对来自脾脏的细胞悬浮液进行染色，通过流式细胞法确定受体细胞(Ly 9.1阳性)的比率。其中，关于免疫荧光染色，在第42天采集背部的皮肤，制作石蜡切片，用抗Hsp47抗体(Abcam)和/或抗α-SMA抗体(Abcam)进行免疫染色，用DAPI进行核染色。
在Allo组中，从第20天左右开始观察到cGVHD的发病。根据图14所示的结果可知，在第42天，Allo组的真皮与Syn组相比，α-SMA阳性的肌成纤维细胞的数量增加，主要聚集在真皮的非血管部分。其中，α-SMA阳性的周细胞始终与血管壁并存。另外，肌成纤维细胞也表达了HSP47。另外，根据图15所示的皮肤纤维化的评价结果可知，与例3同样地，在含siRNA的类视黄醇结合脂质体给药组(Allo+siRNA)中，与赋形剂给药组(Allo+PBS)相比，真皮增厚和胶原量均显著性地降低，从图16所示的结果可知，HSP47的表达与赋形剂给药组(Allo)相比也显著性地降低。此外，由图17～18所示的胸腺细胞或脾细胞的分析结果可知，利用含siRNA的类视黄醇结合脂质体的处置不会对胸腺中的CD4+CD8+细胞的数量(图17A)、脾脏中的T细胞的数量(图17B、C)、以及供体T细胞和造血细胞的固着率(图18)产生显著性的影响。
例6含siRNA的类视黄醇结合脂质体的体内分布
对在背部从第1天至第21天的21天内连日给药100μg的BLM而诱发的皮肤纤维化的C57BL/6小鼠，在第22天以4.5mg/kg·BW的用量每隔2小时静脉注射用荧光色素Dy647标记了的类视黄醇结合脂质体(含有用Dy647标记了的siRNA 1(40％)和未标记的siRNA 2(60％)的混合物)3次。从最后的注射起2小时后采集诱发了皮肤纤维化的部位和正常部位的皮肤样品，用4％多聚甲醛孵育过夜后，用30％蔗糖孵育24小时。制备冷冻切片，用DAPI染色后，用荧光显微镜观察。如图19所示，在诱发了皮肤纤维化的部位的皮肤组织(纤维化)中观察到由Dy647产生的荧光，确认通过脂质体向病变部位递送了标记，另一方面，在正常部位的皮肤组织(正常)中未见由Dy647产生的荧光。另外，如图20所示，含siRNA的类视黄醇结合脂质体与对照相比显著性地降低了纤维化诱发部位的真皮厚度(“纤维化”对“纤维化+siRNA ”)，对正常部位的真皮厚度没有显著性的影响(“正常”对“正常+siRNA”)。
例7建立的皮肤GVHD的改善
除了从皮肤GVHD建立后的第21天到第41天给药含siRNA的类视黄醇结合脂质体或赋形剂以外，进行与例5同样的处置。由图21所示的结果可知，通过含有siRNA的类视黄醇结合脂质体，即使是建立的皮肤GVHD也可改善。
如上述结果所示，考虑本发明的组合物抑制了博来霉素诱发皮肤纤维化以及皮肤GVHD这样的不同的机理下的皮肤纤维化，因此能够广泛用于各种疾病引起的皮肤纤维化、由皮肤的外伤性或手术导致的瘢痕的治疗、瘢痕疙瘩治疗等。
另外，由上述结果可知，本发明的组合物可通过全身给药而起效。在cGVHD等中，不限于皮肤，全身的脏器的纤维化变得显著，为了应对这样的大范围的脏器的纤维化，优选本发明的组合物那样的能够全身给药的药物。
此外，由上述结果可知，本发明的组合物不会对由同种骨髓干细胞移植带来的供体来源的免疫细胞的数量、组成产生显著性的影响。这启示本发明的组合物对GVL/GVT不产生显著性的影响，表示本发明的组合物对采用低强度前处置的肿瘤治疗等的利用了GVL/GVT的治疗的有用性。
另外，在利用cGVHD的模型的实验中，观察到因cGVHD导致的肠道炎症而发生腹泻、小鼠衰弱或死亡(图9)。这启示含有针对HSP47的siRNA的本发明的组合物对与这样的纤维化无关的症状没有影响。但是，考虑对除这样的纤维化以外的症状，可通过其他治疗法的并用来应对。另外，虽然对具有这种严重的致死性疾病的动物模型给药了上述组合物，但与作为对照的PBS给药组相比，并没有显示任何有害的作用，这启示本发明的组合物具有高安全性。
序 列 表
<110> 日东电工株式会社
<120> 皮肤纤维化处置剂
<130> PCT2839ND
<160> 39
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 2208
<212> RNA
<213> 人（Homo sapiens）
<400> 1
ucuuuggcuu uuuuuggcgg agcuggggcg cccuccggaa gcguuuccaa cuuuccagaa 60
guuucucggg acgggcagga gggggugggg acugccauau auagaucccg ggagcagggg 120
agcgggcuaa gaguagaauc gugucgcggc ucgagagcga gagucacguc ccggcgcuag 180
cccagcccga cccaggccca ccguggugca cgcaaaccac uuccuggcca ugcgcucccu 240
ccugcuucuc agcgccuucu gccuccugga ggcggcccug gccgccgagg ugaagaaacc 300
ugcagccgca gcagcuccug gcacugcgga gaaguugagc cccaaggcgg ccacgcuugc 360
cgagcgcagc gccggccugg ccuucagcuu guaccaggcc auggccaagg accaggcagu 420
ggagaacauc cuggugucac ccgugguggu ggccucgucg cuagggcucg ugucgcuggg 480
cggcaaggcg accacggcgu cgcaggccaa ggcagugcug agcgccgagc agcugcgcga 540
cgaggaggug cacgccggcc ugggcgagcu gcugcgcuca cucagcaacu ccacggcgcg 600
caacgugacc uggaagcugg gcagccgacu guacggaccc agcucaguga gcuucgcuga 660
ugacuucgug cgcagcagca agcagcacua caacugcgag cacuccaaga ucaacuuccg 720
cgacaagcgc agcgcgcugc aguccaucaa cgagugggcc gcgcagacca ccgacggcaa 780
gcugcccgag gucaccaagg acguggagcg cacggacggc gcccugcuag ucaacgccau 840
guucuucaag ccacacuggg augagaaauu ccaccacaag augguggaca accguggcuu 900
cauggugacu cgguccuaua ccgugggugu caugaugaug caccggacag gccucuacaa 960
cuacuacgac gacgagaagg aaaagcugca aaucguggag augccccugg cccacaagcu 1020
cuccagccuc aucauccuca ugccccauca cguggagccu cucgagcgcc uugaaaagcu 1080
gcuaaccaaa gagcagcuga agaucuggau ggggaagaug cagaagaagg cuguugccau 1140
cuccuugccc aagggugugg uggaggugac ccaugaccug cagaaacacc uggcugggcu 1200
gggccugacu gaggccauug acaagaacaa ggccgacuug ucacgcaugu caggcaagaa 1260
ggaccuguac cuggccagcg uguuccacgc caccgccuuu gaguuggaca cagauggcaa 1320
ccccuuugac caggacaucu acgggcgcga ggagcugcgc agccccaagc uguucuacgc 1380
cgaccacccc uucaucuucc uagugcggga cacccaaagc ggcucccugc uauucauugg 1440
gcgccugguc cggccuaagg gugacaagau gcgagacgag uuauagggcc ucagggugca 1500
cacaggaugg caggaggcau ccaaaggcuc cugagacaca ugggugcuau ugggguuggg 1560
ggggagguga gguaccagcc uuggauacuc cauggggugg ggguggaaaa acagaccggg 1620
guucccgugu gccugagcgg accuucccag cuagaauuca cuccacuugg acaugggccc 1680
cagauaccau gaugcugagc ccggaaacuc cacauccugu gggaccuggg ccauagucau 1740
ucugccugcc cugaaagucc cagaucaagc cugccucaau caguauucau auuuauagcc 1800
agguaccuuc ucaccuguga gaccaaauug agcuaggggg gucagccagc ccucuucuga 1860
cacuaaaaca ccucagcugc cuccccagcu cuaucccaac cucucccaac uauaaaacua 1920
ggugcugcag ccccugggac caggcacccc cagaaugacc uggccgcagu gaggcggauu 1980
gagaaggagc ucccaggagg ggcuucuggg cagacucugg ucaagaagca ucgugucugg 2040
cguugugggg augaacuuuu uguuuuguuu cuuccuuuuu uaguucuuca aagauaggga 2100
gggaaggggg aacaugagcc uuuguugcua ucaauccaag aacuuauuug uacauuuuuu 2160
uuuucaauaa aacuuuucca augacauuuu guuggagcgu ggaaaaaa 2208
<210> 2
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-1正义
<400> 2
gagacacaug ggugcuauu 19
<210> 3
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-1反义
<400> 3
aauagcaccc augugucuc 19
<210> 4
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-2正义
<400> 4
acaagaugcg agacgaguu 19
<210> 5
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-2反义
<400> 5
aacucgucuc gcaucuugu 19
<210> 6
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-3正义
<400> 6
ccuuugacca ggacaucua 19
<210> 7
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-3反义
<400> 7
uagauguccu ggucaaagg 19
<210> 8
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-4正义
<400> 8
cggacaggcc ucuacaacu 19
<210> 9
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-4反义
<400> 9
aguuguagag gccuguccg 19
<210> 10
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-5正义
<400> 10
acuccaagau caacuucca 19
<210> 11
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-5 反义
<400> 11
uggaaguuga ucuuggagu 19
<210> 12
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-6正义
<400> 12
gacaagaugc gagacgagu 19
<210> 13
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-6反义
<400> 13
acucgucucg caucuuguc 19
<210> 14
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-7正义
<400> 14
ccugagacac augggugcu 19
<210> 15
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A1-7反义
<400> 15
agcacccaug ugucucagg 19
<210> 16
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-1正义
<400> 16
gagacacaug ggugcuaua 19
<210> 17
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-1反义
<400> 17
uauagcaccc augugucuc 19
<210> 18
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-2正义
<400> 18
acaagaugcg agacgagua 19
<210> 19
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-2反义
<400> 19
uacucgucuc gcaucuugu 19
<210> 20
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-3正义
<400> 20
cggacaggcc ucuacaaca 19
<210> 21
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-3反义
<400> 21
uguuguagag gccuguccg 19
<210> 22
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-4正义
<400> 22
ugacaagaug cgagacgaa 19
<210> 23
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-4反义
<400> 23
uucgucucgc aucuuguca 19
<210> 24
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-5正义
<400> 24
acuccaagau caacuuccu 19
<210> 25
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-5反义
<400> 25
aggaaguuga ucuuggagu 19
<210> 26
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-6正义
<400> 26
uccugagaca cauggguga 19
<210> 27
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-6反义
<400> 27
ucacccaugu gucucagga 19
<210> 28
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-7正义
<400> 28
gacaagaugc gagacgaga 19
<210> 29
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-7反义
<400> 29
ucucgucucg caucuuguc 19
<210> 30
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-8正义
<400> 30
acaggccucu acaacuaca 19
<210> 31
<211> 19
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> A2-8反义
<400> 31
uguaguugua gaggccugu 19
<210> 32
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 杂乱siRNA正义
<400> 32
cgauucgcua gaccggcuuc auugcag 27
<210> 33
<211> 27
<212> RNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 杂乱siRNA反义
<400> 33
gcaaugaagc cggucuagcg aaucgau 27
<210> 34
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> serpinh1-P
<400> 34
agccacactg ggatgagaag tttcacca 28
<210> 35
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> serpinh1-F
<400> 35
ctgcttgtga acgccatgtt c 21
<210> 36
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> serpinh1-R
<400> 36
tcaccatgaa gccacggttg 20
<210> 37
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> col1a1-P
<400> 37
cggggtcgga gccctcgctt cc 22
<210> 38
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> col1a1-F
<400> 38
accgatggat tcccgttcga 20
<210> 39
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> col1a1-R
<400> 39
cattaggcgc aggaaggtca g 21

Claims (11)

1.一种向皮肤中的细胞外基质产生细胞递送物质的物质递送用载体，其含有类视黄醇作为促进向皮肤中的细胞外基质产生细胞的物质递送的成分。
2.根据权利要求1所述的载体，其中，类视黄醇以类视黄醇结合物形式含有。
3.根据权利要求1或2所述的载体，其还含有脂质。
4.一种用于处置皮肤纤维化的医药组合物，其含有权利要求1～3中任一项所述的载体、和控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物。
5.一种用于从纤维化皮肤组织再生正常皮肤组织的医药组合物，其含有权利要求1～3中任一项所述的载体、和控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物。
6.根据权利要求4或5所述的医药组合物，其中，控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物选自抑制细胞外基质成分的产生、分泌的物质、细胞增殖抑制物质、凋亡诱导物质及TIMP抑制物质。
7.根据权利要求6所述的医药组合物，其中，抑制细胞外基质成分的产生、分泌的物质为HSP47的抑制剂。
8.根据权利要求4～7中任一项所述的医药组合物，其为用时制备形式。
9.权利要求4～8中任一项所述的医药组合物的制备试剂盒，其包含1个或2个以上的容器，所述容器单独或组合地包含控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物、类视黄醇和/或类视黄醇结合物、以及根据需要的除类视黄醇以外的载体构成物质。
10.一种用于向皮肤中的细胞外基质产生细胞递送物质的载体的制造方法，其包含将类视黄醇和/或类视黄醇结合物作为向皮肤中的细胞外基质产生细胞递送物质的物质递送促进成分进行配合的工序。
11.一种用于处置皮肤纤维化的医药组合物或用于从纤维化皮肤组织再生正常皮肤组织的医药组合物的制造方法，其包含将类视黄醇作为向皮肤中的细胞外基质产生细胞递送物质的物质递送促进成分进行配合、将控制皮肤中的细胞外基质产生细胞的活性或增殖的药物作为有效成分进行配合的工序。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113207799A (zh) * 2021-03-19 2021-08-06 中山大学 一种二型糖尿病小鼠快速心衰模型的构建方法

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110964816A (zh) * 2019-11-20 2020-04-07 深圳市鲲鹏未来科技有限公司 包含血液稳定性纳米颗粒的溶液、其制备方法及miRNA标志物的检测方法
CN115916220A (zh) * 2020-06-24 2023-04-04 百时美施贵宝公司 用于合成靶向分子的方法
IT202100014177A1 (it) * 2021-05-31 2022-12-01 Sunnutrapharma S R L Utilizzo della istradefillina per ridurre la fibrosi d’organo

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8173170B2 (en) * 2004-12-22 2012-05-08 Nitto Denko Corporation Drug carrier and drug carrier kit for inhibiting fibrosis
US20140356413A1 (en) * 2011-06-08 2014-12-04 Nitto Denko Technical Corporation Retinoid-liposomes for treating fibrosis

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2653015B1 (fr) * 1989-10-12 1993-10-29 Oreal Composition cosmetique ou pharmaceutique pour application topique contenant au moins un derive retinouide et au moins un derive de pyrimidine, son utilisation comme medicament et procede de traitement correspondant.
WO1992007586A1 (en) * 1990-10-31 1992-05-14 Beecham Group Plc Topical composition with retinoid penetration enhancer
NZ516873A (en) * 2001-02-12 2003-11-28 Warner Lambert Co Compositions containing retinoids and erb inhibitors and their use in inhibiting retinoid skin damage
JP2009221164A (ja) * 2008-03-17 2009-10-01 Nitto Denko Corp 肺線維症処置剤
US20130171240A1 (en) * 2004-12-22 2013-07-04 Nitto Denko Corporation Drug carrier and drug carrier kit for inhibiting fibrosis
US20120269886A1 (en) * 2004-12-22 2012-10-25 Nitto Denko Corporation Therapeutic agent for pulmonary fibrosis
US9572886B2 (en) * 2005-12-22 2017-02-21 Nitto Denko Corporation Agent for treating myelofibrosis
JP5342834B2 (ja) * 2008-09-05 2013-11-13 日東電工株式会社 骨髄線維症処置剤
ES2562499T3 (es) 2009-12-09 2016-03-04 Nitto Denko Corporation Modulación de la expresión de HSP47
KR101967868B1 (ko) * 2010-06-17 2019-08-19 닛토덴코 가부시키가이샤 신장 섬유증 치료 물질
JP5950428B2 (ja) * 2010-08-05 2016-07-13 日東電工株式会社 線維化組織から正常組織を再生するための組成物
KR102029657B1 (ko) 2011-06-08 2019-10-08 닛토덴코 가부시키가이샤 표적 약물 전달체 및 ｓｉＲＮＡ 활성을 증가시키는 화합물
CA2856016C (en) * 2011-11-18 2020-09-22 Tokiyoshi AYABE Agent for treating fibrosis of the intestine
LT3489220T (lt) 2012-06-08 2021-09-27 Nitto Denko Corporation Lipidai, skirti terapinėms agento pristatymo vaisto formoms

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8173170B2 (en) * 2004-12-22 2012-05-08 Nitto Denko Corporation Drug carrier and drug carrier kit for inhibiting fibrosis
US20140356413A1 (en) * 2011-06-08 2014-12-04 Nitto Denko Technical Corporation Retinoid-liposomes for treating fibrosis

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
武艳 等: "骨髓间充质干细胞抑制皮肤瘢痕形成的机制研究", 《医学研究杂志》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113207799A (zh) * 2021-03-19 2021-08-06 中山大学 一种二型糖尿病小鼠快速心衰模型的构建方法
CN113207799B (zh) * 2021-03-19 2022-03-15 中山大学 一种二型糖尿病小鼠快速心衰模型的构建方法

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