CN109906080A - 包含2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈的用于提高黑色素的组合物 - Google Patents

Abstract

在本发明的一个方面，涉及一种用于毛发变黑、防止毛发变白、预防和改善黑色素减退性疾病的组合物，该组合物包含作为有效成分的2,4‑二氯‑a‑(3,4‑二氢‑4‑氧代‑2(1H)‑喹唑啉亚基)‑β‑氧代‑苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物，通过本发明的一个方面，可向消费者提供2,4‑二氯‑a‑(3,4‑二氢‑4‑氧代‑2(1H)‑喹唑啉亚基)‑β‑氧代‑苯基丙腈的新的用途与效果，同时也可促进相关产业的发展。

Description

包含2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β- 氧代-苯基丙腈的用于提高黑色素的组合物

技术领域

本发明涉及用于毛发变黑、预防黑色素减退性疾病或治疗黑色素减退性疾病的组合物，其包含2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈。

背景技术

黑色素(melanin)是具有黑色色素和蛋白质的复合体形态的苯酚类的生物聚合物，可从苹果、土豆、香蕉的被切断的表面暴露于空气中时所产生的褐变，或在动物的表皮羽毛、皮肤、头部、眼睛等部位观察到。当黑色素过量产生时，会沉积在皮肤上形成斑点和雀斑，因此，与皮肤美白等直接相关，并且，黑色素会加速皮肤老化，并会诱发皮肤癌。

因紫外线，炎症和激素等分泌出黑素细胞刺激素(melanocyte stimulatinghormone,MSH)，MSH与受体反应，使黑素细胞中的cAMP增加，从而合成黑色素，并且合成的黑色素被分泌到黑素细胞的外部以保护皮肤免受紫外线等的伤害。已知黑色素合成主要受α-MSH调节，且参与黑色素合成的蛋白质有MITF、TYR、TRP1和TRP2等。

毛发中的黑色素是决定毛发颜色的重要因素，在毛囊中存在的黑素细胞内产生的黑色素被转移到毛发皮质细胞角质形成细胞后，随着毛发生长向上迁移。被认为是生理衰老现象的毛发变白是由于黑色素细胞的数量减少和黑色素细胞功能降低而导致的黑色素产生减少所引起的。目前，染色是解决毛发变白所使用的解决方案，但染色仅是暂时性的方法，且随着白发的生长需要进行再次染色，并且在毛发染色剂中包含的刺激性成分会导致发生接触性皮炎和皮肤过敏等问题。

此外，如果黑色素生物合成出现异常，将会导致因着色异常而出现皮肤的非正常性变白，并由此引起变白病(白色症，albinism)和白癜风等疾病。

发明内容

技术问题

根据本发明的一个方面，提供一种用于毛发变黑、预防毛发变白、预防黑色素减退性疾病、或改善黑色素减退性疾病的组合物，其包含作为有效成分的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物，在于促进白发护理领域和黑色素减退性疾病相关领域的发展，并为相关消费者和患者谋求福利。

技术方案

为了解决所述问题，在本发明的在一个方面，提供一种用于毛发变黑、预防毛发变白、预防黑色素减退性疾病、治疗黑色素减退性疾病、或改善黑色素减退性疾病的组合物，其包含作为有效成分的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物。

在本发明的另一个方面，提供用于使毛发变黑的方法、预防毛发变白的方法、黑色素减退性疾病的预防方法、黑色素减退性疾病的改善方法、或黑色素减退性疾病的治疗方法，所述方法包括向受试者施用包含作为有效成分的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物。

根据本发明的又一个方面，提供用于毛发变黑的用途、预防毛发变白的用途、预防黑色素减退性疾病的用途、治疗黑色素减退性疾病的用途、或改善黑色素减退性疾病的用途的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物。

根据本发明的又一个方面，提供一种作为用于毛发变黑、预防毛发变白、预防黑色素减退性疾病、治疗黑色素减退性疾病、或改善黑色素减退性疾病的有效成分的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物的非治疗性美容中的用途。

在本发明另一个方面，提供2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物在制备用于毛发变黑、预防毛发变白、预防黑色素减退性疾病、治疗黑色素减退性疾病、或改善黑色素减退性疾病的组合物中的用途。

在本发明另一个方面，所述组合物可以为药物组合物或化妆品组合物。

有益效果

根据本发明的一个方面，当使用包含作为有效成分的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物的组合物时，可以有效地促进毛发变黑、预防毛发变白、黑色素减退性疾病的预防、或黑色素减退性疾病的治疗或改善。

附图说明

图1示出了确认2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈对细胞内黑色素的影响。

图2示出了通过蛋白质印迹法的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈对酪氨酸酶和TRP1蛋白质表达的影响。

图3示出了在B16F1黑素瘤细胞株中2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈对细胞内黑色素含量的影响。

图4示出了在B16F1黑素瘤细胞株中通过蛋白质印迹法的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈对酪氨酸酶和TRP1蛋白质表达的影响。

具体实施方式

以下，对本发明进行详细地说明。

在本说明书中，术语“毛发”是指由角质化的上皮细胞组成并出现在皮肤表面的线状结构，具体地，是指身体的毛发，包括头发和体毛在内的最广义的概念。

在本说明书中，术语“皮肤”是指覆盖动物体表的组织，并且不仅是覆盖在脸部或身体等体表的组织，还包括头皮和头发在内的最广义的概念。

在本说明书中，术语“变黑”是指，皮肤或毛发的有色色素的增加，尤其是指由于黑色素量的增加而使皮肤或毛发的颜色变深的现象。例如，毛发变黑包括使头发变黑的现象，也包括预防和防止毛发变白或白发。

在本说明书中，术语“变白”是指，皮肤或毛发的有色色素的减少，尤其是由于黑色素的含量减少导致皮肤或毛发的颜色变浅的现象。例如，毛发变白或白发包括头发变白的现象。

在本说明书中，术语“毛发变黑功效物质”或“防止毛发变白功效物质”可以为使头发亮度变暗或阻止头发进一步变白的物质的总称。此外，也可为对有色色素，尤其是用于黑色素沉积的诱导、改善和提高等的物质的总称，可以包括单一化合物、聚合物、DNA、RNA、肽、蛋白质等，但不限于此。

在本说明书中，术语“黑色素减退性疾病”包括，由于黑色素的合成或分解的异常所引起的黑色素沉积抑制异常或黑色素生成减少的疾病，或黑色素被过度去除的疾病。例如，包括变白病(白色症,Albinism)、白斑病(leukoderma)、局部斑驳病、花斑癣、白癜风(vitiligo)、四色白癜风(quadrichrome vitiligo)、斑状白癜风(vitiligo ponctue)，特发性滴状色素减少症(Idiopathic guttate hypomelanosis)、点状白斑病(Leukodermapunctata)、变白综合症(syndromic Albinism)(例如，眼-皮肤-耳综合征(Alezzandrini综合征)、Hermansky-Pudlak综合征(Hermansky-Pudlak syndrome)、Chediak-Higashi综合征(Chediak-Higashi syndrome)、Griselie综合征、Griscelli综合征(Griscelli syndrome)(Elejalde综合征(Elejalde syndrome)、Griscelli综合征2型(Griscelli syndrome type2)和Griscelli综合征3型(Griscelli syndrome type 3))、Waardenburg综合征(Waardenburg syndrome)、Tiez综合征(Tietz syndrome)、Cross-MuKusick-Breen综合征(Cross-MuKusick-Breen syndrome)、ABCD综合征(ABCD syndrome)、白化病-耳聋综合征(Albinism-deafness syndrome)和Vogt-Koyanagi-Harada综合征(Vogt-Koyanagi-Haradasyndrome))、眼皮肤白化病(oculocutaneous albinism)、黑色素过少症(hypomelanosis)(特发性滴状色素减少症(idiopathic guttate hypomelanosis)、叶状色素减退症(phylloid hypomelanosis)、进行性斑样色素减退症(progressive macularhypomelanosis))、斑状硬皮病、斑驳病(Vogt-Koyanagi-Harada syndrome)、贫血痣(nevusdepigmentosus)、炎症后色素沉着不足(炎症后色素减退症(postinflammatoryhypopigmentation)、白色糠疹(pityriasis alba)、vagabond's白斑黑皮症(Vagabond'sleukomelanoderma)、也门聋盲性色素减退综合征(Yemenite deaf-blindhypopigmentation syndrome)、Wende-Bauckus综合征(Wende-Bauckus syndrome)、淡红色晕(Woronoff's ring)、黑化症(amelanism)、和白毛症(Leucism)。

在本说明书中，术语“预防、改善和治疗黑色素减性退疾病的功效物质”包括预先防止或抑制罹患黑色素减退性疾病的物质，减轻或缓解所罹患的黑色素减退性疾病的症状的物质、消除黑色素减退性疾病的病因的物质，促进黑色素合成的物质，防止黑色素合成被抑制的物质，抑制黑色素降解的物质，对所有皮肤，所有毛发，特定毛发或特定皮肤区域的亮度变暗或色素沉积起到诱导、改善和提高等作用的物质的总称，可包括单一化合物、聚合物、DNA、RNA、肽、蛋白质等，但不限于此。

在本说明书中，术语“异构体”具体不仅包括光学异构体(optical isomers)(例如，基本上纯的对映异构体(essentially pure enantiomers)，基本上纯的立体异构体或其混合物，基本上纯的非对映异构体(essentially pure diastereomers))，还包括立体异构体，构象异构体(conformation isomers)(即，异构体仅在一个或多个化学键的角度上不同)，结构异构体，位置异构体(position isomers)(尤其是互变异构体(tautomers))或几何异构体(geometric isomers)(例如，顺-反式异构体)。

在本说明书中，“基本上纯的(essentially pure)”是指，例如当使用相关的对映异构体，立体异构体或非对映异构体时，以对映异构体，立体异构体或非对映异构体为例的具体化合物所占的量约为90％(w/w)或以上，优选约为95％(w/w)或以上，较优选约为97％(w/w)或以上，或98％(w/w)或以上，更优选约为99％(w/w)或以上，甚至更优选约为99.5％(w/w)或以上。

在本说明书中，“可接受的”是指在使用常规或医药学剂量(dosage)时，通过避免显着的毒性作用，从而可以获得或获得政府或同等级监管机构的可用于动物，更具体地，可用于人类的批准，或被认定为被列举在食品法典(Food code)、保健功能食品法典、或一般药典中，或被记载于其他一般文献中。

在本说明书中，“可接受的盐”是指根据本发明的一个方面的盐，其为常规或药学上可接受的，并具有母体化合物(parent compound)的理想活性的盐。所述盐包括(1)由盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸形成的；或由乙酸、丙酸、己酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙烷-二磺酸、2-羟基乙磺酸、苯磺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基双环[2，2，2]-辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔乙酸丁酯、十二烷基硫酸盐、葡萄糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、粘康酸等有机酸形成的酸加成盐(acid addition salt)；或(2)母体化合物中存在的酸性质子被取代而形成的盐。

在本说明书中，术语“水合物(hydrate)”是指与水结合的化合物，且为包括在水和化合物之间不具有化学键合力的包合化合物的广义概念。

在本说明书中，术语“溶剂化物”是指在溶质的分子或离子与溶剂的分子或离子之间形成的高级化合物。

在本发明的一个方面，提供一种用于毛发变黑或防止毛发变白的组合物，该组合物包含作为有效成分的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物。

根据本发明的另一个方面，提供一种用于预防和治疗黑色素减退性疾病的组合物，该组合物包含作为有效成分的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物。

在本说明书中，所述2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈(2,4-Dichloro-a-(3,4-dihydro-4-oxo-2(1H)-quinazolinylidene)-β-oxo-benzenepropanenitrile)可表示为“A物质”，可包含以下化学式1所示的化合物。

[化学式1]

根据本发明的另一个方面，所述化合物可通过合成获得，也可通过加工其他物质获得，或也可衍生自生物体或微生物。

根据一个实施例，所述2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈可提高黑色素的生成或沉积。

根据另一个实施例，所述2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈可提高酪氨酸酶(tyrosinase)和TRP1(酪氨酸酶相关蛋白1)的表达。酪氨酸酶是一种参与黑色素形成的酶，当酪氨酸酶的表达提高时，黑色素的生成或沉积会有增加。此外，TRP1是一种参与黑色素合成的蛋白质，与酪氨酸酶类似，当TRP1的表达在增加时，黑色素的生成或沉积会有增加。

经所述化合物处理后，黑色素的产生或沉积得到提高，并且酪氨酸酶和TRP1的表达高于经所述化合物处理前的表达，由此可知，所述化合物可用作毛发变黑或预防毛发变白的组合物的有效成分。此外，当用所述化合物处理时，会使能表达酪氨酸酶或TRP1的细胞数有增加，由此可知，所述化合物可用作组合物的有效成分。毛发中的黑色素是决定头发颜色的重要因素，由毛囊中黑素细胞所产生的黑色素转移到毛发皮质细胞角质形成细胞后，随着毛发生长向上转移，因此头发变白是由于黑素细胞的数量减少和黑素细胞功能降低所导致的黑色素生成减少所引起的。所述2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈提高作为黑素细胞的Melan-a细胞和B16F1细胞中的酪氨酸酶和TRP1的表达，并使黑色素的生成和沉积增加，因此可在组合物中用于毛发变黑和防止毛发变白。

根据另一个实施例，所述黑色素减退性疾病选自白化病、白癜风、贫血痣、白色糠疹、花斑癣、炎症后脱色症、斑状硬皮病、局部斑驳病、特发性滴状色素减少症以及点状白斑病中的一种或多种疾病，但不限于此。黑色素(melanin)可在动物表皮羽毛、毛、皮肤、头部、眼睛等部位中观察到，如果黑色素生成不足，或沉积被抑制、或降解过度时，将会导致黑色素减退性疾病。由于本发明在一个方面能提高黑素生成或沉积，也能提高酪氨酸酶和TRP1的表达，因此可用于预防，改善和治疗黑色素减退性病症。

根据本发明的一个方面已确认，所述2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈能提高黑素细胞中黑色素的生成，以及提高酪氨酸酶和TFP1的表达。通过利用2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈的所述功效，可对有关黑色素减退的所述疾病或症状进行预防、改善和治疗。

根据本发明的另一个方面，在所述组合物中的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物的含量可占所述组合物总重量的0.0001重量％-20重量％。此外，所述2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物的含量可占所述组合物总重量的0.0001重量％或以上、0.0005重量％或以上、0.001重量％或以上、0.005重量％或以上、0.01重量％或以上、0.05重量％或以上、至少0.1重量％或以上、0.3重量％或以上、0.5重量％或以上、0.8重量％或以上、1重量％或以上、3重量％或以上、5重量％或以上、8重量％或以上、10重量％或以上、12重量％或以上、15重量％或以上、或18％或以上。此外，所述2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物的含量可占所述组合物总重量的20重量％或以下、18重量％或以下、15重量％或以下、12重量％或以下、10重量％或以下、8重量％或以下、5重量％或以下、3重量％或以下、1重量％或以下、0.8重量％或以下、0.5重量％或以下、0.3重量％或以下、0.1重量％或以下、0.05重量％或以下、0.01重量％或以下、0.005重量％或以下、0.001重量％或以下、或0.0005重量％或以下。

根据本发明的又一个方面，所述2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物的给药剂量可为0.0001mg/kg/日-20mg/kg/日。此外，所述2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物的给药剂量可为0.0001mg/kg/日或以上、0.0005mg/kg/日或以上、0.001mg/kg/日或以上、0.005mg/kg/日或以上、0.01mg/kg/日或以上、0.05mg/kg/日或以上、0.1mg/kg/日或以上、0.5mg/kg/日或以上、0.8mg/kg/日或以上、1mg/kg/日或以上、2mg/kg/日或以上、3mg/kg/日或以上、5mg/kg/日或以上、8mg/kg/日或以上、10mg/kg/日或以上、12mg/kg/日或以上、15mg/kg/日或以上、或18mg/kg/日或以上。此外，所述2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物的给药剂量可为20mg/kg/日或以下、18mg/kg/日或以下、15mg/kg/日或以下、12mg/kg/日或以下、10mg/kg/日或以下、8mg/kg/日或以下、5mg/kg/日或以下、3mg/kg/日或以下、2mg/kg/日或以下、1mg/kg/日或以下、0.8mg/kg/日或以下、0.5mg/kg/日或以下、0.1mg/kg/日或以下、0.05mg/kg/日或以下、0.01mg/kg/日或以下、0.005mg/kg/日或以下、0.001mg/kg/日或以下、或0.0005mg/kg/日。

根据本发明的一个实施例，所述组合物可为药物组合物。

所述药物组合物可进一步包含保存剂、防腐剂、稳定剂、湿性粉剂或乳化剂、用于控制渗透压的盐和/或缓冲剂等的药物辅助剂、以及其它对治疗有用的物质，并可根据常规方法配制成各种口服剂型或肠胃外剂型。

所述口服剂型，例如可为片剂、丸剂、硬和软胶囊、液体、悬浮液、乳化剂、糖浆、粉剂、散剂、细粒剂、颗粒剂和微丸剂等，而这些剂型除了包含有效成分以外，还可以包含界面活性剂、稀释剂(例如：乳糖、右旋糖、蔗糖、甘露醇、山梨糖醇、纤维素和甘氨酸)、润滑剂(例如：二氧化硅、滑石、硬脂酸及其镁盐或钙盐、以及聚乙二醇)。此外，片剂还可包含，如硅酸镁铝、淀粉糊、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和聚乙烯吡咯烷酮的粘合剂，并根据情况可包含，如淀粉、琼脂、海藻酸或其钠盐的崩解剂、吸收剂、着色剂、香味剂和甜味剂等的药物添加剂。所述片剂可通过常规的混合、制粒或包衣方法进行制备而成。

此外，所述肠胃外给药剂型可为经皮给药剂型，例如注射剂、滴剂、软膏剂、洗剂、凝胶剂、霜剂、喷雾剂、混悬剂、乳剂、栓剂、贴剂等剂型，但不限于此。

所述药物组合物可以通过肠胃外、直肠、局部、经皮、皮下等途径进行给药。

所述有效成分的给药剂量在本领域普通技术人员的水平内，并且药物的日剂量可以根据待施用的受试者的进展程度、发病时间、年龄、健康状况和并发症等的各种因素而变化。

所述药物组合物可为皮肤外用制剂，所述皮肤外用制剂为包括任何可涂抹在皮肤外的任何制剂在内的总称，可以包括各种剂型的医药品或医药外用品。

根据本发明的另一个方面，所述组合物可为用于毛发变黑、预防毛发变白、预防或改善黑色素减退性疾病的化妆品组合物。

所述化妆品组合物可以进一步含有功能性添加剂和常用于化妆品组合物的成分。所述功能性添加剂可包括选自水溶性维生素、油溶性维生素、聚合肽、聚合多糖、鞘脂和海藻提取物的成分。除此之外，还可以包含的组成成分有保湿剂、润肤剂、界面活性剂、有机和无机颜料、有机粉末、紫外线吸收剂、防腐剂、杀菌剂、抗氧代化剂、植物提取物、pH调节剂、乙醇、色素、香料、血液循环促进剂、冷却剂、止汗剂、纯净水等。

所述化妆品组合物的剂型不受特别限制，可根据目的适当进行选择。例如，可以制备成选自润肤水、柔肤水、爽肤水、收敛水、乳液、滋润乳液、保湿乳液、营养乳液、按摩霜、营养霜、保湿霜、护手霜、粉底、精华、营养精华、面膜、香皂、洁面泡沫、洁面乳、洁面霜、身体乳和沐浴露中的任何一种或多种剂型，但不限于此。

当根据本发明的一个方面的剂型为糊剂、霜剂或凝胶时，可使用动物纤维、植物纤维、蜡、石蜡、淀粉、黄蓍胶、纤维素衍生物、聚乙二醇、硅、膨润土、二氧化硅、滑石或氧代化锌等作为在载体成分。

当根据本发明的一个方面的剂型为粉末或喷雾时，可使用乳糖、滑石、二氧化硅、氢氧代化铝、硅酸钙或聚酰胺粉末作为载体成分，尤其当剂型为喷雾时，可进一步包含如氯氟烃、丙烷/丁烷或二甲醚的推进剂。

当根据本发明的一个方面的剂型为溶液或乳胶时，可使用溶剂、溶剂化剂或破乳化剂作为载体成分，例如水、乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇油、甘油脂肪酸酯、聚乙二醇或脱水山梨糖醇的脂肪酸酯。

当根据本发明的一个方面的剂型为悬浮液时，可使用如水、乙醇或丙二醇的液体稀释剂、如乙氧代基化异硬脂醇、聚氧代乙烯山梨糖醇酯和聚氧代乙烯脱水山梨糖醇酯等的悬浮剂、微晶纤维素、偏氢氧代化铝、膨润土、琼脂或黄蓍胶等作为载体成分。

当根据本发明的一个方面的剂型为含有界面活性剂的清洁剂时，可使用脂肪醇硫酸钠、脂肪醇醚硫酸钠、磺基琥珀酸单酯、羟乙基磺酸钠、咪唑烷衍生物、甲基牛磺酸钠、肌氨酸钠、脂肪酸酰胺醚硫酸钠、烷基酰胺甜菜碱、脂肪醇、脂肪酸甘油酯、脂肪酸二乙醇酰胺、植物油、亚麻酸衍生物或乙氧代基化甘油脂肪酸酯作为载体成分。

根据本发明的另一个方面，所述组合物可为食品或保健食品组合物。

所述食品或保健食品组合物可以为液体或固体形态的制剂，例如，可以为各种食品、饮料、口香糖、茶、维生素复合剂、健康功能食品、健康辅助食品等，并可作为粉末、颗粒、片剂、胶囊或饮料的形式使用。各种剂型的组合物除了包含有效成分之外，本领域技术人员可以根据剂型或使用目的，毫无困难地选择本领域常用的成分进行配制，并且当与其它成分同时施用时可以获得协同效应。

除了包含本说明书中公开的有效成分之外，对可以包含的液体组分没有特别限制，并且可以包含如普通饮料的各种香味剂或天然碳水化合物作为附加成分。所述天然碳水化合物，例如可为二糖(例如二糖、葡萄糖和果糖等)、多糖(例如麦芽糖和蔗糖等)、普通的糖(例如糊精和环糊精等)、以及糖醇(例如木糖醇、山梨糖醇和赤藓糖醇等)等。所述香味剂可有利地使用天然香味剂(索马甜，甜叶菊提取物(例如，莱鲍迪甙A、甘草甜素等)和合成香味剂(例如，糖精、阿斯巴甜等)。在每100ml本说明书所公开的组合物中，天然碳水化合物的比例通常为约1至20g，在一个方面中约为5-12g。

所述食物组合物在一个方面，可包含例如各种营养素、维生素、矿物质(电解质)、合成增味剂和天然增味剂等增味剂、着色剂和风味剂(奶酪、巧克力等)，果胶酸及其盐，海藻酸及其盐，有机酸，保护性胶体增稠剂，pH调节剂，稳定剂，防腐剂，甘油，乙醇，碳酸饮料中使用的碳酸化剂等。另一个方面，可以包含用于生产天然果汁和蔬菜饮料的果肉。所述组分可以单独使用或组合使用。所述添加剂的比例可以变化，但通常情况下，选择范围为占每100重量份本说明书所公开的组合物中的约0.001-20重量份。

以下，将参考实施例和实验实施例，更详细地描述本发明的一个方面的技术方案和效果。然而，以下实施例的目的仅是为了帮助理解本发明，本发明的范畴和范围并不受此限制。

【实施例1】

准备细胞和皮肤模型

获取人表皮黑素细胞(Normal human epidermal melanocytes,NHEMs,CascadeBiologics,Portland,OR,USA)，以及从Dorothy C.Bennett博士(圣乔治医院医学院,伦敦，英国)获取源自C57BL/6J(black,a/a)小鼠的黑素细胞，即Melan-A细胞株。B16F1小鼠黑素瘤(melanoma)细胞株获取自ATCC(马纳萨斯,VA,USA)。

在M-254培养基中，将人表皮黑素细胞维持在人黑素细胞生长补充剂(HumanMelanocyte Growth Supplements,HMGS)(Cascade Biologics公司,Mansfield,UK)中。在RPMI 1640培养基中，将Melan-A细胞维持在10％(v/v)胎牛血清、1％(v/v)青霉素-链霉菌和0.2μM佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯中。在添加有10％(v/v)胎牛血清和1％(v/v)青霉素-链霉菌的DMEM中培养B16F1小鼠黑素瘤细胞株。

试剂

2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、α-MSH、熊果苷(arbutin)和曲酸(kojic acid)获取自Sigma-Aldrich公司(圣路易斯，MO，USA)。

黑色素试验

通过用胰蛋白酶/EDTA处理细胞后，在1000×g下离心分离5分钟，并用PBS洗涤两次。拍摄试管中的最终细胞沉淀的照片，并将细胞沉淀溶解于1N NaOH内。将经均质化的细胞提取物转移到96孔板中，通过使用ELISA板读数器，在405nm吸光度下测量相对黑色素量。

蛋白质印迹分析

通过使用2×Laemmli样品缓冲液(2×Laemmli sample buffer，62.5mM Tris-HCl、pH 6.8、25％[v/v]甘油、2％w/v SDS、5％[v/v]β-巯基乙醇、和0.01％[w/v]溴酚蓝)(Bio-Rad，Hercules公司，CA，USA)，制备所有溶解物。通过使用Bradford溶液(Bio-Rad)，测量所有细胞蛋白质。然后，通过SDS-PAGE分离所述样品，并转移到PVDF膜(Bio-Rad)上。通过用TBST(25mM Tris，140mM NaCl和0.05％[v/v]20)中的4％(w/v)脱脂乳(skim milk)进行封闭后，将膜与特定的一抗进行过夜培养。

抗-肌动蛋白抗体(anti-actin antibody,MAB1501,1:10,000)获取自Millipore公司(Temecula，CA，USA)，且抗-αPEP7(酪氨酸酶)抗体(anti-αPEP7(tyrosinase)antibody,1:1000)和抗-αPEP1(TRP1)抗体(anti-αPEP1(TRP1)antibody,1:1000)获取自VJHearing公司(NIH，Bethesda，MD)。为了检测蛋白质，通过利用HRP缀合的二抗，培养所述膜，并通过使用West Dura HR检测试剂盒(Pierce，Rockford，IL，USA)测量信号。

统计分析

每项数据是通过至少3次独立实验进行获得的，并表示为平均值±SE(标准误差)。通过使用单向方差分析法(1-way ANOVA)，对结果进行统计评估(*p<0.05，**p<0.01)。

【实验实施例1】黑色素生成、相关酶以及蛋白质调节的确认

2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈为以下化学式1所示的物质。

[化学式1]

分别用A物质(10μM，30μM)处理Melan-a细胞，待48小时后，用蛋白质印迹分析细胞黑色素含量，以及酪氨酸酶和TRP1蛋白质表达水平。结果证实，血清饥饿使得Melan-a细胞内黑色素含量、酪氨酸酶和TRP1蛋白质表达略微下降，待用A物质处理后，黑色素合成有增加，酪氨酸酶和TRP1蛋白表达有提高(在图1和2中，“物质A 10”表示加入10μM的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈的组；“物质A 30”表示加入30μM的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈的组)。

此外，确认在B16F1小鼠黑素瘤(melanoma)细胞株中是否也出现这种现象。具体地，在用血清饥饿培养基中，通过用物质A(10μM，30μM)分别处理B16F1细胞后，培养48小时。然后，测量细胞黑色素含量(图3)，并通过蛋白质印迹法分析酪氨酸酶和TRP1(图4)。

其结果证实，在B16F1细胞株中，A物质也诱导了黑色素合成和黑素生成酶得表达(图3-图4)。

综上所述，当通过A物质诱导黑色素合成和黑素生成酶的表达时，可以提高皮肤和毛囊中黑素细胞内的黑色素生成，并且通过这种方式可以实现毛发变黑和防止头发变白，因此根据本发明的一个方面可用于头发变黑和白发护理。此外，通过利用本发明的这一特征，可以提高皮肤的特定部位或整个皮肤的黑色素生成，因此通过利用本发明可以促进黑色素减退性疾病或症状的预防、治疗和改善。

以下，虽然描述了根据本发明一个方面的组合物的制剂实施例，但也适用其他的各种剂型，其并不旨在限制本发明，而是为了对本发明进行更详细地说明。

【制剂实施例1】软胶囊剂

将20mg 2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、80-140mg L-肉碱、180mg大豆油、2mg棕榈油、8mg氢化植物油、4mg黄蜡和6mg卵磷脂混合，并按照常规方法填充于一个胶囊中，制备成软胶囊剂。

【制剂实施例2】片剂

将20mg 2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、200mg低聚半乳糖、60mg乳糖和140mg麦芽糖混合，通过使用流化床干燥器制成颗粒后，向其中加入6mg糖酯(sugar ester)，再通过压片机压片成片剂。

【制剂实施例3】颗粒剂

将20mg 2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、250mg无水结晶葡萄糖和550mg淀粉混合，并使用流化床造粒机制成颗粒后，填充到包衣中制备成颗粒剂。

【制剂实施例4】饮剂

将20mg 2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、10g葡萄糖、0.6g柠檬酸和25g液体低聚糖混合后，加入300ml纯净水，每瓶中注入200毫升。注入瓶中后，130℃下进行4-5秒灭菌，制备饮剂。

【制剂实施例5】注射剂

根据常规方法，通过使用50mg 2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、适量的注射用灭菌蒸馏水、适量的pH调节剂，制备注射剂。

【制剂实施例6】润肤化妆水(润肤水)

通过用3.0重量％的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、1.00重量％的L-抗坏血酸-2-磷酸镁盐、1.00重量％的水溶性胶原蛋白(1％水溶液)、0.10重量％的柠檬酸钠、0.05重量％的柠檬酸、0.20重量％的甘草提取物、3.00％重量的1,3-丁二醇，剩余量的纯净水，来制备润肤化妆水(润肤水)。

【制剂实施例7】霜剂

通过用3.00重量％的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、2.00％重量的聚乙二醇单硬脂酸酯、5.00％重量的自乳化单硬脂酸甘油、4.00％重量的丙二醇、6.00％重量的角鲨烷、6.00％重量的三(2-乙基己烷)甘油、1.00％重量的神经鞘糖脂、7.00重量％的1,3-丁二醇、5.00重量％的蜂蜡和剩余量的纯净水，制备出霜型制剂。

【制剂实施例8】面膜

通过用3.00重量％的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、13.00％重量的聚乙烯醇、1.00％重量的L-抗坏血酸-2-磷酸镁盐、1.00％重量的月桂酰羟基脯氨酸、2.00％重量的水溶性胶原蛋白(1％水溶液)、3.00重量％的1,3-丁二醇、5.00重量％的乙醇、剩余量的纯净水，制备面膜。

【制剂实施例9】保健食品

根据常规方法，按照下表中所述示的折成制备保健食品。

【表1】

虽然所述维生素和矿物混合物的组成比是根据适合于保健食品的成分为例混合而成，但维生素和矿物混合物的配比可以任意变化，按照常规保健食品的制备方法，将所述成分混合后，可根据常规方法用于保健食品组合物的制备。

【制剂实施例10】保健饮料

【表2】

成分	含量
		2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈	15㎎
柠檬酸	1000㎎
		低聚糖	100g
梅子浓缩物	2g
		牛磺酸	1g
纯净水	余量
		总体积	900ml

如上述表2所示，加入剩余量的纯净水至总体积达到900ml，按照常规的保健饮料制备方法将上述组分混合后，在85℃下搅拌加热约1小时后，通过过滤得到的溶液，用已灭菌的2升容器密封灭菌后储存于冰箱中，以此制备保健饮料。

以上，已对本发明的特定部分进行了详细地说明，对本领域技术人员来说显而易见的是，这些具体说明仅仅是本发明的优选实施例，本发明的范围不限于此。因此，本发明的实际范围将由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (9)

1.用于毛发变黑或防止毛发变白的组合物，其包含作为有效成分的2,4-二氯-α-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物。

2.用于预防和治疗黑色素减退性疾病的组合物，其包含作为有效成分的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物。

3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈促进黑色素的生成或沉积。

4.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈提高酪氨酸酶和TRP1(酪氨酸酶相关蛋白1)的表达。

5.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述组合物中的2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物可占所述组合物总重量的0.0001重量％-20重量％。

6.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述2,4-二氯-a-(3,4-二氢-4-氧代-2(1H)-喹唑啉亚基)-β-氧代-苯基丙腈、其光学或立体异构体、其可接受的盐、其水合物、或其溶剂化物的给药剂量为0.0001mg/kg/日-20mg/kg/日。

7.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述黑色素减退性疾病为选自白化病、白癜风、贫血痣、白色糠疹、花斑癣、炎症后脱色症、斑状硬皮病、局部斑驳病、特发性滴状色素减少症以及点状白斑病中的一种或多种疾病。

8.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述组合物为药物组合物。

9.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，所述组合物为用于毛发变黑、预防毛发变白、预防和改善黑色素减退性疾病的化妆品组合物。