CN109890354A - 口腔护理组合物和使用方法 - Google Patents

Abstract

本文公开口腔护理组合物，其包含具有2∶1柚皮苷与锌的摩尔比的柚皮苷∶锌复合物。还提供制备和使用所述组合物的方法。

Description

口腔护理组合物和使用方法

技术领域

本发明涉及包含柚皮苷∶锌复合物的口腔护理组合物以及使用和制备这些组合物的方法。

背景技术

柚皮苷是在葡萄柚和柑橘水果中常见的黄酮糖苷。已经记录了其对多种应用的健康益处，例如抗微生物活性(PereiraR.等人，《分子(Molecules)》，2007，12：1352-66；Abdulmahdi A-H.等人，Acta Chimica&Pharmaceutica Indica，2015，5(3)：129-42)、伤口愈合(Kandhare A.D.等人，《化学与生物的相互作用(Chemico-BiologicalInteractions)》，2014，219：101-12，Pereira R.等人，见上文，Abdulmahdi A-H.等人，见上文)、牙周病、糖尿病和风湿病(Tsui V.W.K.等人，《植物疗法研究(PhytotherapyResearch)》，2008，22(3)：401-406；Bharti S.等人，《药用植物(Planta Med)》，2014，80：437-51)。此外，证实了其抑制牙周病原体以及一些常见口腔微生物在活体外的生长(TsuiV.W.K.等人，见上文)。

牙齿脱矿化是一种化学过程，通过此过程从任何硬组织(即牙釉质、牙质和牙骨质)中去除矿物质(主要是钙)(X Li等人，《牙科杂志(J.of Dentistry)》，2014，42：S12-20)。如果有足够的时间允许发生再矿化以抵消口腔中的酸，那么可逆转脱矿化的影响。再矿化对于经历牙龈萎缩的老年群体以及患有严重牙周炎伴有明显牙根暴露的患者为有益。再矿化可进一步提供对空腔进展的防护。报道了类黄酮(包括柚皮苷)对人工根龋的再矿化效果；然而，类黄酮所展示的效果比氟化物低(Epasinghe D.J.等人，《澳大利亚牙科杂志(Australian Dental Journal)》，2016，61(2)：196-202)。

已表明基质金属蛋白酶(MMP)在由细菌酸脱矿化后在牙本质有机基质破坏中发挥重要作用。已显示提高锌浓度抑制牙本质-MMP依赖性胶原蛋白降解(Toledano M.等人，《龋齿研究(Caries Res.)》，2012，46(3)：201-207)。

先前已在牙膏配制物中组合柚皮苷和柠檬酸锌；参见CN102218021，2013年1月23日公布。用于杀虫剂组合物的柚皮苷-金属复合物已在2015年3月3日公布的WO2015027308中有所描述。此前已公开了柚皮苷-金属复合物(Al-Hassani R.A.等人，Acta Chimica&Pharmaceutica Indica，2015，5(3)：129-42)；然而，这类复合物的合成使用乙醇溶液，其作为用于消费品的成分并非最佳的。因此，需要合成方法以增强此类分子的生产。

目前的口腔护理市场产品没有解决牙龈萎缩益处。因此，需要口腔组合物治疗和/或预防牙龈萎缩的进展。

发明内容

已令人惊讶地发现，可以产生柚皮苷和锌的复合物，其具有两摩尔柚皮苷与一摩尔锌。这些复合物显示出出人意料的物理-化学属性，例如抗菌活性增加。这类活性可用于口腔护理组合物。

在一个实施例中，本发明为柚皮苷∶Zn复合物，其中柚皮苷∶Zn复合物具有2∶1柚皮苷与锌摩尔比。在另一实施例中，柚皮苷∶锌复合物具有高于230℃的熔点。在另外的实施例中，柚皮苷∶锌复合物具有在25℃下于DMSO溶液中在2.8e-11与3.2e-11m²/s之间的扩散系数。

在一特定的实施例中，本发明提供一种口腔护理组合物，其包含柚皮苷∶锌复合物。在某些实施例中，口腔护理组合物可选自由以下组成的群组：牙膏或洁齿剂、漱口水或漱口液、局部用口腔凝胶和义齿清洁剂。在某些实施例中，口腔护理组合物可选自牙带、珠粒、涂剂和牙粉。

在某些实施例中，本发明的组合物可进一步包含一种或多种选自以下的试剂：稀释剂、碳酸氢盐、pH调节剂、表面活性剂、泡沫调节剂、额外增稠剂、保湿剂、甜味剂、调味剂、颜料、抗菌剂、防龋剂、氟离子源、防牙结石或牙垢控配制物以及其混合物。

在一个实施例中，本发明提供一种改善口腔健康的方法，其包含将有效量的本文所描述的口腔组合物施用于有需要的受试者的口腔。在某些实施例中，口腔健康可选自以下中的一种或多种：减少或抑制龋齿形成；减少、修复或抑制早期牙釉质损伤；减少或抑制脱矿化并且促进牙齿的再矿化；减轻牙齿的过敏反应；减轻或抑制齿龈炎；促进嘴中溃疡或割口的愈合；降低产酸细菌的含量；提高分解精氨酸的细菌的相对含量；抑制口腔中的微生物生物膜形成；在糖挑战之后，将牙菌斑的pH值提高和/或维持在至少pH 5.5的水平；减少牙菌斑积聚；治疗、缓解或减轻口干；美白牙齿；增强全身健康，包括心血管健康；减少牙齿腐蚀；使牙齿对致龋细菌和其作用免疫；清洁牙齿和口腔；减少炎症；和提高抗氧化剂水平。

在另外的实施例中，本发明提供制备具有2∶1柚皮苷与锌摩尔比的柚皮苷∶锌复合物的方法。在某些实施例中，所述方法包括使用在7-10之间的pH值进行的复合物制备步骤。在某些实施例中，所述方法包括在65-85℃之间的温度下混合柚皮苷和锌。

在某些实施例中，制备2∶1柚皮苷∶锌复合物的方法包含以下步骤：于甲醇中混合柚皮苷；添加锌源；将溶液的pH值调节到10.0；温育反应；和任选地分离复合物。在其它实施例中，所述方法包含以下步骤：将柚皮苷混合于水中；将混合物加热到70℃；添加锌源；将溶液的pH值调节到10.0；温育反应；和任选地分离复合物。在其它实施例中，所述方法包含以下步骤：将柚皮苷混合于水中；将混合物加热到70℃；将溶液的pH值调节到10.0；添加锌源；和任选地分离复合物。在其它实施例中，所述方法包含以下步骤：将柚皮苷混合于水中；将混合物加热到70℃；添加锌源；将溶液的pH值调节到7.0；和任选地分离复合物。在某些实施例中，所述方法包含以下步骤：将柚皮苷和ZnO混合于水中；加热混合物；温育所述混合物；和任选地复合物。在某些实施例中，所述方法包含在70℃下将柚皮苷混合于丙二醇中；将溶液的pH值调节到9.0-10.0之间；在40-50℃下添加丙二醇中的锌源；和任选地分离复合物。

在某些实施例中，Zn源选自乙酸锌、氧化锌、氯化锌、乳酸锌、柠檬酸锌或硝酸锌。在某些实施例中，Zn源为乙酸锌。在某些实施例中，Zn源为ZnO。

在某些实施例中，本发明是通过组合如前述组合物和方法中的任一种中阐述的成分而获得或可获得的组合物。

附图说明

图1A为柚皮苷的分子结构。图1B为2∶1柚皮苷∶锌复合物的提议分子结构。

图2是与本发明的2∶1柚皮苷∶锌复合物产品1相比的柚皮苷的UV-VIS光谱。

图3是与本发明的各种2∶1柚皮苷∶锌复合物产品，产品1-6相比的柚皮苷的UV-VIS光谱。

图4是与本发明的各种2∶1柚皮苷∶锌复合物产品，产品4-6相比的柚皮苷的UV-VIS光谱。

图5是与2∶1柚皮苷∶锌复合物产品4相比的柚皮苷的红外光谱。为了清楚起见，使光谱偏移。虚线用于聚焦所述范围的差异。

图6为柚皮苷与产品2、产品4和产品5的复合物的红外振动频谱的比较。为了清楚起见，使光谱偏移。

图7A展示锌离子与柚皮苷的C5上的羟基配位的示意图。图7B为柚皮苷和2∶1柚皮苷∶Zn复合物(产品1-6)在DMSO-d5中的1H NMR光谱。所报告的化学位移值被称为为零的TMS。上部入口展示2∶1柚皮苷∶Zn复合物的所提议结构命名法。

图8为条形图，其展示在DMSO-d5中，柚皮苷和2∶1柚皮苷∶锌复合物(产品4和产品5)的实验导出的扩散系数。

图9为柚皮苷和2∶1柚皮苷∶锌复合物产品5在第0周和第6周的UV-Vis光谱比较。

图10为柚皮苷和2∶1柚皮苷∶锌复合物产品3在第0周和第8周的UV-Vis光谱比较。

图11为2∶1柚皮苷∶锌复合物(产品5)、柚皮苷+乙酸锌组合、单独的乙酸锌和单独的柚皮苷对表兄链球菌(Streptococcus sobrinus)的剂量反应曲线比较。

图12展示单独的柚皮苷、2∶1柚皮苷∶锌复合物(产品5)、柚皮苷+乙酸锌组合、和单独的乙酸锌对格氏链球菌(S.gordonii)(S.g)、表兄链球菌(S.s)的单一培养物或呈格氏链球菌与表兄链球菌的共同培养物形式的抗微生物活性。

图13展示单独的柚皮苷、2∶1柚皮苷∶锌复合物(产品5)、柚皮苷+乙酸锌组合、和单独的乙酸锌对格氏链球菌(S.g)、粘性放线菌(A.viscosus)(A.v)的单一培养物或呈格氏链球菌与粘性放线菌的共同培养物形式的抗微生物活性。

图14展示单独的柚皮苷、2∶1柚皮苷∶锌复合物(产品5)、柚皮苷+乙酸锌组合、和单独的乙酸锌对表兄链球菌(S.s)、粘性放线菌(A.v)的单一培养物或呈表兄链球菌与粘性放线菌的共同培养物形式的抗微生物活性。

图15展示单独的柚皮苷、2∶1柚皮苷∶锌复合物(产品5)、柚皮苷+乙酸锌组合、和单独的乙酸锌对伴放线凝聚杆菌(A.a)、粘性放线菌(A.v)的单一培养物或呈伴放线凝聚杆菌与粘性放线菌的共同培养物形式的抗微生物活性。

图16展示单独的柚皮苷、2∶1柚皮苷∶锌复合物(产品5)、柚皮苷+乙酸锌组合、和单独的乙酸锌对表兄链球菌(S.s)和伴放线凝聚杆菌(A.a)的单一培养物或呈表兄链球菌与伴放线凝聚杆菌的共同培养物形式的抗微生物活性。

图17展示单独的柚皮苷、2∶1柚皮苷∶锌复合物(产品5)、柚皮苷+乙酸锌组合、和单独的乙酸锌在37℃、5％CO₂、厌氧条件(OD₆₁₀0.1)下对混合细菌培养物的抗微生物活性。

图18展示单独的柚皮苷、2∶1柚皮苷∶锌复合物(产品5)、柚皮苷+乙酸锌组合、和单独的乙酸锌在37℃、好氧条件(OD₆₁₀0.1)下对混合细菌培养物的抗微生物活性。

图19是当用2∶1柚皮苷∶锌复合物(产品5)、柚皮苷+乙酸锌组合、单独的乙酸锌或单独的媒剂处理时锌更新到软组织中的比较。*-p＜0.005。

图20为在使用HaCat细胞的划痕分析中，各种处理对细胞迁移/增殖“伤口愈合”的效果的比较。

图21为展示在细胞单层中形成的十字形图像以模拟伤口的图。

图22为2∶1柚皮苷∶锌复合物(产品5)、柚皮苷+乙酸锌组合、单独的乙酸锌和单独的柚皮苷对在厌氧条件下生长的混合培养物的剂量反应曲线比较。

具体实施方式

以下本发明的实施例的描述在本质上仅是示例性的并且绝非意在限制本发明、本发明的应用或用途。

如本文所用，词语“优选的”和“优选地”指在某些情况下提供某些益处的本发明的实施例。然而，其它实施例在相同或其它情况下也可以是优选的。此外，一个或多个优选实施例的引述并不暗示其它实施例是不适用的，并且并不打算从本发明的范围中排除其它实施例。

如通篇所使用，范围用作描述所述范围内的每个值的简写。范围内的任何值都可以被选为范围端值。

除非另外说明，否则本说明书中给出的组合物组分的所有百分比均基于100％的总组合物或配制物重量按重量计。

本文所引用的所有参考文献都以全文引用的方式并入。如果本公开中的定义和所引用参考文献的定义发生冲突，那么以本公开为准。

如本文所用，术语“口腔组合物”是指递送到口腔表面的整个组合物。所述组合物还被定义为这样一种产品：在正常使用过程期间，所述产品不是为了特定治疗剂的全身施用，不是打算吞服，而是为了口腔活性的目的，在口腔中保持足以接触基本上所有的牙齿表面和/或口腔组织的时间。这类组合物的实例包括但不限于牙膏或洁齿剂、漱口水或漱口液、局部用口腔凝胶、义齿清洁剂、牙带、珠粒、涂剂、牙粉等等。

如本文所用，除非另外规定，否则术语“洁齿剂”是指糊剂、凝胶或液体配制物。洁齿剂组合物可以为任何所需的形式，例如深条纹形式、表面条纹形式、多层形式、具有围绕糊剂的凝胶的形式，或者其任何组合。或者，口腔组合物可为从隔开的腔室分配器分配的两相。

本发明中的术语“漱口液”是指在特性上为基本上液体的口腔组合物，如漱口水、喷雾或冲洗液。在这类制剂中，口腔可接受的载剂通常具有包含水或水与醇的混合物的水相。此外，在各种实施例中，口服载剂包括如下所述的保湿剂和表面活性剂。一般来说，水与醇的重量比在1∶1至20∶1、优选3∶1至10∶1以及更优选4∶1至6∶1的范围内。这种类型的制剂中的水-醇混合物的总量通常呈制剂的70至99.9％的量。在各种实施例中，醇通常为乙醇或异丙醇。

如本文所用，术语“有效量”意指本发明的组合物的量具有足够数量以实现预期目的，例如以诱导或引起受试者中的再矿化。

术语“2∶1柚皮苷∶Zn”、“2∶1柚皮苷∶Zn复合物”、“柚皮苷∶锌”和“柚皮苷∶锌复合物”可互换使用，并且除非另外指明，否则是指本发明的复合物。

除非另外说明，否则本说明书中给出的组合物组分的所有百分比均基于100％的总组合物或配制物重量按重量计。

除非另有明确指出，否则用于本发明的组合物和配制物中的成分优选是化妆品可接受的成分。“化妆品可接受的”意指适合用在用于局部施用到人体皮肤的配制物中。举例来说，化妆品可接受的赋形剂为适于以本发明配制物中涵盖的量和浓度外部施用的赋形剂，并包括例如美国食品和药物管理局(United States Food and Drug Administration)“公认安全”(GRAS)的赋形剂。

如所属领域中通常那样，本文提供的组合物和配制物参照其成分进行描述和要求保护。如对所属领域技术人员显而易见的，所属成分在一些情况下可能彼此反应，使得最终配制物的真实组成可能不与所列出的成分完全对应。因此，应理解，本发明延伸到所列成分的组合的产物。

本发明提供包含柚皮苷∶Zn复合物的组合物，其中柚皮苷∶Zn复合物具有2∶1柚皮苷与锌摩尔比。这类复合物提供了可用于口腔护理应用的独特特征，诸如增强的抗微生物活性。

在一些实施例中，本发明提供柚皮苷∶锌的复合物，其熔点为至少200℃、205℃、210℃、215℃、220℃、225℃、230℃、235℃、240℃、245℃或250℃。在一些实施例中，本发明提供柚皮苷∶锌的复合物，其熔点为约200℃、205℃、210℃、215℃、220℃、225℃、230℃、235℃、240℃、245℃或250℃。

本发明进一步提供制备具有2∶1柚皮苷与锌摩尔比的柚皮苷∶Zn复合物的方法。在某些优选的实施例中，柚皮苷和锌源在7-10之间的pH值下组合。在某些实施例中，柚皮苷和锌源在8-10之间的pH值下组合。在某些实施例中，柚皮苷和锌源在9-10之间的pH值下组合。在某些实施例中，柚皮苷和锌源在约7的pH值下组合。在某些实施例中，柚皮苷和锌源在约8的pH值下组合。在某些实施例中，柚皮苷和锌源在约9的pH值下组合。在某些实施例中，柚皮苷和锌源在约10的pH值下组合。

在某些实施例中，复合物在20℃与80℃之间的温度下合成。在某些实施例中，复合物在25℃与75℃之间的温度下合成。在某些实施例中，复合物在30℃与70℃之间的温度下合成。在某些实施例中，复合物在35℃与65℃之间的温度下合成。在某些实施例中，复合物在20℃与40℃之间的温度下合成。在某些实施例中，复合物在40℃与60℃之间的温度下合成。在某些实施例中，复合物在60℃与80℃之间的温度下合成。在某些实施例中，复合物在20℃与25℃之间的温度下合成。

在某些实施例中，复合物在20℃与80℃之间的温度及7-10之间的pH值下合成。在某些实施例中，复合物在25℃与75℃之间的温度及7-10之间的pH值下合成。在某些实施例中，复合物在30℃与70℃之间的温度及7-10之间的pH值下合成。

在某些实施例中，制备2∶1柚皮苷∶锌复合物的方法包含以下步骤：于甲醇中混合柚皮苷；添加锌源；将溶液的pH值调节到约10.0；温育反应；和任选地分离复合物。在其它实施例中，所述方法包含以下步骤：将柚皮苷混合于水中；将混合物加热至约70℃；添加锌源；将溶液的pH值调节到约10.0；温育反应；和任选地分离复合物。在其它实施例中，所述方法包含以下步骤：将柚皮苷混合于水中；将混合物加热至约70℃；将溶液的pH值调节到约10.0；添加锌源；和任选地分离复合物。在其它实施例中，所述方法包含以下步骤：将柚皮苷混合于水中；将混合物加热至约70℃；添加锌源；将溶液的pH值调节到约7.0；和任选地分离复合物。在某些实施例中，所述方法包含以下步骤：将柚皮苷和ZnO混合于水中；加热混合物；温育所述混合物；和任选地复合物。在某些实施例中，所述方法包含在约70℃下将柚皮苷混合于丙二醇中；将溶液的pH值调节到9.0-10.0之间；在约40-50℃下添加丙二醇中的锌源；和任选地分离复合物。

本发明进一步提供使用包含2∶1柚皮苷∶锌复合物的组合物以减少和/或抑制牙釉质的酸腐蚀、减轻或抑制牙龈萎缩、控制微生物生长、清洁牙齿、减少细菌产生的生物膜和牙菌斑、减轻齿龈炎、抑制蛀牙和蛀洞形成和/或减轻牙本质过敏反应。本发明提供包含2∶1柚皮苷∶锌复合物的组合物用于伤口愈合的用途。本发明进一步提供包含2∶1柚皮苷∶锌复合物的组合物用于改善和/或预防炎症的用途。本发明进一步提供包含2∶1柚皮苷∶锌复合物的组合物用于改善和/或预防出血的用途。

在某些实施例中，柚皮苷∶锌复合物包括在口腔护理组合物中。在一些实施例中，口腔护理组合物可选自选自以下的群组：牙膏或洁齿剂、漱口水或漱口液、局部用口腔凝胶和义齿清洁剂。在一些实施例中，口腔护理组合物可为牙膏或洁齿剂。在一些实施例中，口腔护理组合物可为漱口水或漱口液。在一些实施例中，口腔护理组合物可为局部用口腔凝胶和义齿清洁剂。

在另外的实施例中，本发明为一种改善口腔健康的方法，其包含将有效量的本文所描述的口腔组合物施用于有需要的受试者的口腔。在某些实施例中，所述方法包括使用2∶1柚皮苷∶锌复合物组合物，其选自由以下组成的群组：牙膏或洁齿剂、漱口水或漱口液、局部用口腔凝胶和义齿清洁剂。

本发明进一步提供减少和/或抑制牙釉质的酸腐蚀、减轻或抑制牙龈萎缩、控制微生物生长、清洁牙齿、减少细菌产生的生物膜和牙菌斑、减轻齿龈炎、抑制蛀牙和蛀洞形成和/或减轻牙本质过敏反应的方法，其包含向牙齿施用有效量的本发明的组合物，例如本文所描述的所述组合物中的任一种。

举例来说，本发明提供减少和/或抑制牙釉质的酸腐蚀、减轻或抑制牙龈萎缩、控制微生物生长、清洁牙齿、减少细菌产生的生物膜和牙菌斑、减轻齿龈炎、抑制蛀牙和蛀洞形成以及减轻牙本质过敏反应的方法，其包含向口腔施用有效量的本发明的组合物，例如本文所描述的所述组合物中的任一种，以及随后用足够水或水溶液冲洗。

在某些实施例中，复合物包括在漱口水中。在一些实施例中，漱口水包含0.002重量％至4重量％的锌。在一些实施例中，漱口水包含0.005重量％至0.01重量％的锌。在一些实施例中，漱口水包含0.01重量％至1重量％的锌。在一些实施例中，漱口水包含1重量％至4重量％的锌。在一些实施例中，前述任一种中的漱口水具有溶解在配制物中的锌，所述锌在使用并经唾液和/或冲洗稀释后，在与含有柚皮苷的溶液混合后提供锌源。在其它实施例中，锌离子源和柚皮苷源形成柚皮苷∶锌复合物。

在一些实施例中，漱口水的pH值为pH 4至pH 8。

一些实施例进一步在组合物内包含有效量的氟离子源。

在其它实施例中，本发明包含口腔可接受的基料，其包含选自以下中的一种或多种的成分：缓冲剂、保湿剂、表面活性剂、增稠剂、口气清新剂、调味剂、芳香剂、着色剂、抗菌剂、增白剂、干扰或防止细菌附着的试剂、钙源、磷酸盐源、口腔可接受的钾盐和阴离子聚合物。

一些实施例提供漱口水，其用于减少和/或抑制牙釉质的酸腐蚀、减轻或抑制牙龈萎缩、控制微生物生长、清洁牙齿、减少细菌产生的生物膜和牙菌斑、减轻齿龈炎、抑制蛀牙和蛀洞形成以及减轻牙本质过敏反应。

一些实施例提供2∶1柚皮苷∶锌复合物用于制造漱口水的用途。其它实施例提供治疗或减轻牙釉质腐蚀、清洁牙齿、减轻或抑制牙龈萎缩、减少细菌产生的生物膜和牙菌斑、减轻齿龈炎、抑制蛀牙和蛀洞形成以及减轻牙本质过敏反应的方法，其包含施用如本文所述的漱口水。其它实施例提供进一步包括用足够的水或水溶液冲洗的步骤。

本发明进一步提供一种制备口腔护理组合物的方法，其包含在水性介质中组合柚皮苷和锌源，任选地分离因此以固体形式形成的复合物，和组合柚皮苷∶锌复合物与口腔护理组合物。在某些实施例中，口腔护理组合物为牙膏。在某些实施例中，口腔护理基料为漱口水基料。

在各种实施例中，本发明提供(i)减少牙齿的过敏反应，(ii)减少牙斑积聚，(iii)减少或抑制脱矿化并且促进牙齿的再矿化，(iv)抑制口腔中的微生物生物膜形成，(v)减轻或抑制牙龈炎，(vi)促进嘴中溃疡或割口的愈合，(vii)减少产酸细菌的含量，(viii)提高非致龋和/或非牙菌斑形成细菌的相对水平，(ix)减少或抑制龋齿的形成，(x)减少、修复或抑制牙釉质的龋前损伤，例如如通过定量光诱导荧光(QLF)或电龋测量(ECM)所检测，(xii)治疗、缓解或减轻口干，(xii)清洁牙齿和口腔，(xiii)减少腐蚀，(xiv)美白牙齿；(xv)减少牙垢积聚，和/或(xvi)例如通过减少经由口腔组织的全身性感染的潜在可能而促进全身健康(包括心血管健康)的方法，所述方法包括(例如每天一次或多次)将本文所描述的所述组合物中的任一种施用于有需要的人的口腔。在另外的实施例中，本发明提供减轻或抑制牙龈萎缩的方法。在另外的实施例中，本发明提供控制微生物生长的方法。在另外的实施例中，本发明提供减少细菌产生的生物膜、恶臭和/或牙菌斑的方法。本发明进一步提供用于这些方法中的任一种的本文所述的任何组合物。

“活性物质”意指在施加于标靶组织时向标靶组织提供益处或改善的化合物。活性物质可以任何口腔护理配制物的形式递送，例如牙膏、透明糊剂、凝胶、漱口水、粉末、乳膏、条带、喷雾、胶状物或所属领域中已知的任何其它配制物。

如果复合物以漱口水的形式递送，那么期望益处的个人利用含有柚皮苷∶锌复合物的溶液冲洗。在某些实施例中，可以实施双腔室。在这类方面中，第一腔室含有处于碱性pH下的溶液中的柚皮苷。在某些实施例中，pH值在7-10之间。在某些实施例中，pH值在7-8之间。在某些实施例中，pH值在8-9之间。在某些实施例中，pH值在9-10之间。双腔室还将含有含有溶解锌源的第二腔室。在施加后，第一腔室和第二腔室的内容物混合在一起，从而产生柚皮苷∶锌复合物。

在另一实施例中，制备混合物并立即转移到保持托盘中，诸如用于容纳美白凝胶的那些，并且个人可以佩戴托盘持续有效时间段。将处理与混合物接触的牙齿。为了与保持托盘一起使用，混合物可以呈低粘度液体或凝胶的形式。在某些实施例中，复合物配制在包含 聚合物、甘油和水的组合物中。

在另一实施例中，将储备溶液或储备溶液与水的混合物以凝胶配制物形式施加于牙齿，例如其中凝胶可在牙齿上保持延长的时间段以实现有效治疗。

在另一实施例中，本发明的组合物为粘性液体，优选地为凝胶，其将在储存过程中保持其稠度，使得产品能够用软涂施笔或刷子涂刷到牙齿表面上。一些实施例提供利用施用器递送组合物的方法，其中所述施用器为笔并且所述笔存储在口腔护理器具内。在一些实施例中，在将组合物施用于牙齿之前，将笔从口腔护理器具取出。在一些实施例中，在刷牙之后将组合物施用于牙齿。在一些实施例中，在用口腔护理器具刷牙之后将组合物施用于牙齿。

用于复合物合成的锌离子源可以来自有效提供Zn²⁺离子的任何源，例如氧化锌、乙酸锌、氯化锌、乳酸锌、四碱式氯化锌、碳酸锌、硝酸锌、柠檬酸锌、双-赖氨酸锌和磷酸锌。氧化锌为不溶于水的白色粉末。四碱式氯化锌(TBZC)或氯化锌氢氧化物单水合物为具有式Zn₅(OH)₈Cl₂H₂O的锌羟基化合物，也称为碱式氯化锌、羟基氯化锌或氯氧化锌。它为不溶于水的无色结晶固体。这两种材料均可在存在柚皮苷和热量的情况下溶解于水中，从而提供锌离子源。在某些优选实施例中，Zn源选自乙酸锌、氧化锌、氯化锌、乳酸锌、柠檬酸锌或硝酸锌。

在某些实施例中，组合物中锌的总量为按组合物的重量计0.005至30％。在某些实施例中，前体(例如锌源和柚皮苷)以使得当组合到柚皮苷∶锌复合物中时，复合物将以按组合物的重量计0.005％至10％的量存在。在这些实施例中的任一个中，2∶1柚皮苷∶锌复合物的量可针对所需目的(如洁齿剂或漱口水)而改变。在其它实施例中，2∶1柚皮苷∶锌复合物的量为按组合物的重量计至少0.1、至少0.2、至少0.3、至少0.4、至少0.5、至少1、至少2、至少3或至少4直到10％。在其它实施例中，2∶1柚皮苷∶锌复合物的量为按组合物的重量计小于9、小于8、小于7、小于6、小于5、小于4、小于3、小于2、小于1、小于0.5至0.005％。在其它实施例中，所述量为按组合物的重量计0.05至5％、0.05至4％、0.05至3％、0.05至2％、0.1至5％、0.1至4％、0.1至3％、0.1至2％、0.5至5％、0.5至4％、0.5至3％或0.5至2％。

在某些实施例中，组合物是无水的。无水为少于5重量％的水，任选地小于4重量％、小于3重量％、小于2重量％、小于1重量％、小于0.5重量％、小于0.1重量％下至0重量％的水。

当以无水组合物形式提供时，前体(例如麻醉素和锌源)不会显著反应形成2∶1柚皮苷∶锌复合物。当在施加组合物期间或之后与足够量的水接触以呈用于冲洗嘴的唾液和/或水形式时，前体随后将反应形成2∶1的柚皮苷∶锌复合物。在优选实施例中，水和/或唾液具有在7-10之间的的pH值。在某些实施例中，pH值在7-9之间。在某些实施例中，pH值在7-8之间。

在某些实施例中，具有柚皮苷∶锌复合物的口腔护理组合物进一步包含一种或多种选自以下的试剂：稀释剂、碳酸氢盐、pH调节剂、表面活性剂、泡沫调节剂、额外增稠剂、保湿剂、甜味剂、调味剂、颜料、抗菌剂、防龋剂、氟离子源、防牙结石或牙垢控制剂以及其混合物。

根据本发明的口腔组合物可任选地包括其它材料，例如清洁剂、调味剂、甜味剂、粘附剂、表面活性剂、泡沫调节剂、磨料、pH调节剂、保湿剂、湿润剂、口感剂、着色剂、磨料、防腐剂、氟离子源、唾液刺激剂、润肤剂、粘度调节剂、稀释剂、乳化剂、营养物和其组合。可以添加到口腔组合物中的各种组分包括例如甜味剂，如糖精或糖精钠；醇，如乙醇；氟离子源(如氟化钠)以及甘油、山梨醇、聚乙二醇。泊洛沙姆(Poloxamer)聚合物，如407、F108(均可得自巴斯夫公司(BASF Corporation))、烷基多醣苷(APG)、聚山梨醇酯、PEG40、蓖麻油、薄荷醇等。应理解，虽然上述类别的材料中每一种的一般属性可能不同，但也可存在一些共同的属性，并且任何给定的材料可在这些类别的材料中的两种或更多种中用于多种目的。优选地，选择这类载剂材料，以与在木兰提取物或其合成类似物中发现的活性成分以及组合物的其它成分相容。

可用于本文中那些之间的调味剂包括可操作以增强组合物的味道的任何材料或材料混合物。可以使用任何口腔可接受的天然或合成的调味剂，如调味油、调味醛、酯、醇、类似材料及其组合。调味剂包括香草醛、鼠尾草、马郁兰、欧芹油、留兰香油、肉桂油、冬青油(水杨酸甲酯)、薄荷油、丁香油、月桂油、茴香油、桉树油、柑橘油、水果油和水果香精(包括源自柠檬、桔子、酸橙、葡萄柚、杏子、香蕉、葡萄、苹果、草莓、樱桃、菠萝等的那些)、源自豆类和坚果的调味剂(诸如咖啡、可可、可乐果、花生、杏仁等)、吸附的和包封的调味剂及其混合物。还涵盖在本文的调味剂之内的是在口中提供芳香和/或其它感官效果(包括凉爽或温热效果)的成分。这类成分包括薄荷醇、乙酸薄荷酯、乳酸薄荷酯、樟脑、桉树油、桉叶脑、茴香脑、丁香酚、肉桂、覆盆子酮(oxanone)、[α]-紫罗兰酮、丙烯基乙基愈创木酚(propenylguaiethol)、麝香草酚、里哪醇、苯甲醛、肉桂醛、N-乙基-对薄荷烷-3-甲酰胺、N，2，3-三甲基-2-异丙基丁酰胺、3-1-薄荷氧基丙烷-1，2-二醇、肉桂醛甘油缩醛(CGA)、甲烷甘油缩醛(methane glycerol acetal)(MGA)及其混合物。一种或多种调味剂任选地以0.01％至约5％，任选地在各种实施例中0.05至约2％、0.1％至约2.5％以及约0.1％至0.5％的总量存在。

可用于本文中那些之间的甜味剂包括右旋糖、聚右旋糖、蔗糖、麦芽糖、糊精、干的转化糖、甘露糖、木糖、核糖、果糖、左旋糖、半乳糖、玉米糖浆、部分水解的淀粉、氢化淀粉水解产物、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、麦芽糖醇、异麦芽酮糖醇、阿斯巴甜、纽甜、糖精和其盐、三氯蔗糖、基于二肽的强增甜剂、环己氨基磺酸盐(cyclamate)、二氢查耳酮及其混合物。

口感剂包括在本发明组合物的使用期间赋予所需的纹理或其它感觉的材料。

可用于本文中的那些之间的着色剂包括颜料、染料、色淀以及赋予特定光泽或反射率的试剂，诸如珠光剂。在各种实施例中，着色剂可操作以在牙齿表面上提供白色或浅色涂层、充当牙齿表面上已被组合物有效接触的位置的指示、和/或修改组合物的外观，特别是颜色和/或不透明度以增强对消费者的吸引力。可使用任何口腔可接受的着色剂，包括FD&C染料和颜料、滑石、云母、碳酸镁、碳酸钙、硅酸镁、硅酸镁铝、二氧化硅、二氧化钛、氧化锌、红色、黄色、棕色和黑色氧化铁、亚铁氰化铁铵、锰紫、群青、钛化云母、氯氧化铋及其混合物。一种或多种着色剂任选地以0.001％至20％，例如0.01％至10％或0.1％至5％的总量存在。

活性剂：

包括或除锌-氨基酸-卤化物复合物以外，本发明的组合物可包含各种活性试剂，其对保护和增强牙釉质和牙齿结构的强度和完整性和/或减少细菌和相关的蛀牙和/或牙龈疾病是有效的。本文中使用的活性成分的有效浓度将取决于所使用的特定试剂和递送系统。应了解，例如牙膏将通常在使用时用水稀释，而漱口液通常不会用水稀释。因此，在牙膏中活性剂的有效浓度将通常为漱口液所需的浓度的5-15倍。浓度也将取决于所选择的确切的盐或聚合物。举例来说，在以盐形式提供活性剂的情况下，抗衡离子将影响盐的重量，以使得如果抗衡离子较重，则将需要以重量计更多的盐来在最终产品中提供相同浓度的活性离子。当存在时，精氨酸可以例如约0.1至约20重量％(表示为游离碱的重量)，例如对于消费者牙膏约1至约10重量％，或者对于专业或处方治疗产品约7至约20重量％的水平存在。当存在时，氟化物可以例如约25至约25,000ppm，例如对于消费者牙膏约750至约2,000ppm，或者对于专业或处方治疗产品约2,000至约25,000ppm的水平存在。抗菌剂的水平将类似地改变，其中牙膏中使用的水平例如比漱口液中使用的高约5至约15倍。举例来说，三氯生牙膏可含有约0.3重量％的三氯生。

氟离子源：

口腔护理组合物可进一步包括一种或多种氟离子源，例如可溶性氟化物盐。可以使用多种产生氟离子的物质作为本发明的组合物中可溶性氟化物的来源。合适的产生氟离子的物质的实例见于颁予Briner等人的美国专利案第3,535,421号；颁予Parran，Jr等人的美国专利案第4,885,155号，和颁予Widder等人美国专利案第3,678,154号。代表性氟离子源包括(但不限于)氟化亚锡、氟化钠、氟化钾、单氟磷酸钠、氟硅酸钠、氟硅酸铵、氟化胺、氟化铵和其组合。在某些实施例中，氟离子源包括氟化亚锡、氟化钠、单氟磷酸钠以及其混合物。在某些实施例中，本发明的口腔护理组合物还可以足以提供约25ppm至约25,000ppm氟离子、通常至少约500ppm、例如约500至约2000ppm、例如约1000至约1600ppm、例如约1450ppm的量含有氟离子的源或提供氟的成分。氟化物的适当含量将取决于特定应用。供一般消费者使用的牙膏将通常具有约1000至约1500ppm，其中儿童牙膏略低。供专业应用的洁齿剂或涂布剂可以具有多达5,000ppm或甚至约25,000ppm的氟化物。可将氟离子源加入本发明的组合物中，其量按组合物的重量计在一个实施例中为约0.01重量％至约10重量％，或约0.03重量％至约5重量％，并且在另一实施例中约0.1重量％至约1重量％，在另一实施例中。用于提供合适的氟离子含量的氟化物盐的重量将显然视盐中抗衡离子的重量而变化。

发泡剂：

本发明的口腔护理组合物还可以包括当刷涂口腔时增加所产生的泡沫的量的试剂。增加泡沫量的试剂的说明性实例包括但不限于聚氧乙烯和某些聚合物，包括但不限于海藻酸盐聚合物。聚氧乙烯可增加由本发明的口腔护理载体组分所产生的泡沫的量和泡沫的浓密程度。聚氧乙烯还通常被称为聚乙二醇(“PEG”)或聚氧化乙烯。适合于本发明的聚氧乙烯将具有约200,000至约7,000,000的分子量。在一个实施例中，分子量将为约600,000至约2,000,000，以及在另一个实施例中约800,000至约1,000,000。是由联合碳化物公司(Union Carbide)生产的高分子量聚氧乙烯的商标名。按本发明的口腔护理组合物的口腔护理载体组分的重量计，聚氧乙烯可以约1％至约90％，在一个实施例中约5％至约50％，以及在另一个实施例中约10％至约20％的量存在。当存在时，口腔护理组合物中发泡剂的量(即单次剂量)为约0.01至约0.9重量％、约0.05至约0.5重量％，并且在另一个实施例中约0.1至约0.2重量％。

牙垢控制剂：

在本发明的各种实施例中，组合物包含防牙结石(牙垢控)试剂。合适的防牙结石剂包括但不限于磷酸盐和聚磷酸盐(例如焦磷酸盐)、聚氨基丙磺酸(AMPS)、六偏磷酸盐、柠檬酸锌三水合物、多肽、聚烯烃磺酸盐、聚烯烃磷酸盐、二膦酸盐。本发明因此可包含磷酸盐。在特定实施例中，这些盐是碱金属磷酸盐，即碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物的盐，例如钠盐、钾盐或钙盐。如本文使用的“磷酸盐”涵盖口腔可接受的单磷酸盐和多磷酸盐，例如P1-6磷酸盐，例如单体磷酸盐，如一元磷酸盐、二元磷酸盐或三元磷酸盐；二聚磷酸盐，如焦磷酸盐；和多聚磷酸盐，例如六偏磷酸钠。在特定的实例中，选定的磷酸盐选自碱金属二元磷酸盐和碱金属焦磷酸盐，例如选自磷酸氢二钠、磷酸氢二钾、磷酸二钙二水合物、焦磷酸钙、焦磷酸四钠、焦磷酸四钾、三聚磷酸钠以及这些中的任何两种或更多种的混合物。在一特定实施例中，例如组合物包含焦磷酸四钠(Na₄P₂O₇)、焦磷酸钙(Ca₂P₂O₇)和磷酸氢二钠(Na₂HPO₄)的混合物，例如，以约3-4％的磷酸氢二钠和约0.2-1％的每种焦磷酸盐的量。在另一实施例中，组合物包含焦磷酸四钠(TSPP)和三聚磷酸钠(STPP)(Na₅P₃O₁₀)的混合物，例如以约1-2％TSPP和约7％至约10％STPP的比例。这类磷酸盐以能够有效地减少牙釉质的腐蚀，以便有助于清洁牙齿，和/或减少牙垢积聚于牙齿上的量提供，例如以组合物的重量计，其量为2-20％，例如大约5-15％。

聚合物：

本发明的口腔护理组合物还可以包含另外的聚合物以调节配制物的粘度或增强其它成分的溶解性。这类额外的聚合物包括聚乙二醇、聚乙烯甲醚马来酸共聚物、多糖(例如纤维素衍生物，例如羧甲基纤维素；或多糖胶，例如黄原胶或角叉菜胶)。酸性聚合物(例如聚丙烯酸酯凝胶)可以其游离酸或部分或完全中和的水溶性碱金属(例如钾和钠)或铵盐的形式提供。某些实施例包括马来酸酐或酸与另一可聚合的烯属不饱和单体(例如甲基乙烯基醚(甲氧基乙烯))的分子量(M.W.)为约30,000至约1,000,000的1∶4至4∶1共聚物。这些共聚物可例如作为GAF化学品公司的Gantrez AN 139(M.W.500,000)、AN 119(M.W.250,000)以及S-97药物级(M.W.70,000)获得。

其它起作用的聚合物包括诸如马来酸酐与丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸羟乙酯、N-乙烯基-2-吡咯酮或乙烯的1∶1共聚物的那些，后者可例如以Monsanto EMA编号1103、M.W.10,000以及EMA等级61获得；以及丙烯酸与甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸羟乙酯、丙烯酸甲酯或丙烯酸乙酯、异丁基乙烯醚或N-乙烯基-2-吡咯烷酮的1∶1共聚物。

一般来讲，适合的是含有活性碳-碳烯属双键和至少一个羧基的聚合的烯属或烯系不饱和羧酸，即含有因为在相对于羧基的α-β位置中或作为未端亚甲基群组的一部分存在于单体分子中而容易在聚合中起作用的烯属双键的酸。这类酸的实例是丙烯酸、甲基丙烯酸、乙基丙烯酸、α-氯丙烯酸、巴豆酸、β-丙烯酰氧基丙酸、山梨酸、α-氯代山梨酸、肉桂酸、β-苯乙烯基丙烯酸、粘糠酸、衣康酸、柠康酸、甲基反丁烯二酸、戊烯二酸、乌头酸、α-苯基丙烯酸、2-苯甲基丙烯酸、2-环己基丙烯酸、当归酸、伞形酸(umbellic acid)、富马酸、马来酸以及酸酐。可与这类羧酸单体共聚的其它不同的烯属单体包括乙酸乙烯酯、氯乙烯、马来酸二甲酯等。共聚物含有对于水溶性来讲足够的羧酸盐基团。

另一类聚合剂包括含有取代丙烯酰胺的均聚物和/或不饱和磺酸及其盐的均聚物的组合物，特别地其中聚合物是分子量为约1,000至约2,000,000的基于选自丙烯酰胺基烷基磺酸(诸如2-丙烯酰胺2甲基丙烷磺酸)的不饱和磺酸，其在授予1989年6月27日授予Zahid的美国专利第4,842,847号中有述，所述专利以引用方式并入本文。

另一类适用的聚合剂包括聚氨基酸，尤其是含有成比例的阴离子表面活性氨基酸的那些，所述氨基酸诸如为天冬氨酸、谷氨酸和磷酸丝氨酸，如Sikes等人的美国专利第4,866,161号(以引用方式并入本文)中所公开的。

在水性介质中形成聚合物结构或凝胶的二氧化硅增稠剂可以存在。应注意，这些二氧化硅增稠剂在物理和功能上有别于也存在于组合物中的微粒二氧化硅磨料，因为二氧化硅增稠剂非常精细地分散并提供极少作用或无研磨作用。其它增稠剂为羧基乙烯基聚合物、角叉菜胶、羟乙基纤维素和纤维素醚的水溶性盐，诸如羧甲基纤维素钠和羧甲基羟乙基纤维素钠。也可将天然胶诸如刺梧桐胶、阿拉伯树胶和黄芪胶掺入。胶态硅酸镁铝也可用作增稠组合物的组分以便进一步改善组合物的质地。在某些实施例中，使用按总组合物的重量计约0.5％至约5.0％的量的增稠剂。

本发明的组合物可包括阴离子聚合物，例如其量为约0.05％至约5％。这类试剂通常已知用于洁齿剂中，虽然不是针对本具体应用，但可用于本发明中的这类试剂在美国专利号5,188,821和5,192,531中公开；并且包括合成的阴离子聚合多羧酸盐，例如马来酸酐或马来酸与另一种可聚合的烯属不饱和单体的1∶4至4∶1共聚物，优选分子量(M.W.)为约30,000至约1,000,000，最优选约300,000至约800,000的甲基乙烯基醚/马来酸酐。这些共聚物可例如作为Gantrez获得，例如可得自ISP技术公司(ISP Technologies，Inc.)，BoundBrook，新泽西州的AN 139(M.W.500,000)、AN 119(M.W.250,000)和优选的S-97药物级(M.W.700,000)。增强剂(当存在时)的存在量在约0.05至约3重量％范围内。其它起作用的聚合物包括例如马来酸酐与丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸羟乙酯、N-乙烯基-2-吡咯酮或乙烯的1∶1共聚物的那些，后者可例如以Monsanto EMA编号1103，M.W.10,000以及EMA等级61获得；以及丙烯酸与甲基丙烯酸甲酯或甲基丙烯酸羟乙酯、丙烯酸甲酯或丙烯酸乙酯、异丁基乙烯醚或N-乙烯基-2-吡咯烷酮的1∶1共聚物。一般来讲，适合的是含有活性碳-碳烯属双键和至少一个羧基的聚合的烯属或烯系不饱和羧酸，即含有因为在相对于羧基的α-β位置中或作为未端亚甲基群组的一部分存在于单体分子中而容易在聚合中起作用的烯属双键的酸。这类酸的实例是丙烯酸、甲基丙烯酸、乙基丙烯酸、α-氯丙烯酸、巴豆酸、β-丙烯酰氧基丙酸、山梨酸、α-氯代山梨酸、肉桂酸、β-苯乙烯基丙烯酸、粘糠酸、衣康酸、柠康酸、甲基反丁烯二酸、戊烯二酸、乌头酸、α-苯基丙烯酸、2-苯甲基丙烯酸、2-环己基丙烯酸、当归酸、伞形酸、富马酸、马来酸以及酸酐。可与这类羧酸单体共聚的其它不同的烯属单体包括乙酸乙烯酯、氯乙烯、马来酸二甲酯等。共聚物含有对于水溶性来讲足够的羧酸盐基团。另一类聚合剂包括含有取代丙烯酰胺的均聚物和/或不饱和磺酸及其盐的均聚物的组合物，特别地其中聚合物是分子量为约1,000至约2,000,000的基于选自丙烯酰胺基烷基磺酸(诸如2-丙烯酰胺2甲基丙烷磺酸)的不饱和磺酸，其在授予Zahid的1989年6月27日的美国专利第4,842,847号中有所描述。另一类适用的聚合剂包括含有成比例的阴离子表面活性氨基酸的聚氨基酸，所述氨基酸诸如天冬氨酸、谷氨酸和磷酸丝氨酸，例如，如颁发给Sikes等人的美国专利号4,866,161中所公开。

水：

口腔组合物可包含显著水平的水。用于制备商业口腔组合物的水应为去离子的并且不含有机杂质。组合物中所述量的水包括所添加的游离水加上与其它材料一起引入的量的水。

保湿剂：

在口腔组合物的某些实施例内，掺入保湿剂来防止组合物在暴露于空气之后硬化也是合乎需要的。某些保湿剂也可将合乎需要的甜味或风味赋予洁齿剂组合物。合适的保湿剂包括可食用的多元醇如甘油、山梨糖醇、木糖醇、丙二醇以及其它多元醇和这些保湿剂的混合物。在本发明的一个实施例中，主要的保湿剂为甘油，其可以大于25％的含量存在，例如25-35％、约30％，外加5％以下的其它保湿剂。

其它任选成分：

除上述组分之外，本发明的实施例可含有多种任选的洁齿剂成分，其中一些在下文描述。任选的成分包括例如但不限于粘合剂、起泡剂、调味剂、甜味剂、附加抗牙菌斑剂、磨料和着色剂。这些和其它任选的组分在授予Majeti的美国专利第5,004,597号、授予Agricola等人的美国专利第3,959,458号和授予Haefele的美国专利第3,937,807号中有进一步描述，所有这些专利均以引用方式并入本文。

组合物可以是任何类型的组合物。在某些实施例中，所述组合物为其中需要包含用于施用到皮肤的抗菌剂的任何组合物。这类组合物的实例包括但不限于个人护理组合物、止汗剂、除臭剂、沐浴露、胶状沐浴乳、条皂、护发素和化妆品。

碱性氨基酸：

可用于本发明的组合物和方法的碱性氨基酸不仅包括天然存在的碱性氨基酸诸如精氨酸、赖氨酸和组氨酸，而且还包括分子中具有羧基和氨基的任何碱性氨基酸，所述碱性氨基酸是水溶性的并提供pH值为7或更大的水溶液。

因此，碱性氨基酸包括但不限于精氨酸、赖氨酸、丝氨酸、瓜氨酸、鸟氨酸、肌氨酸、组氨酸、二氨基丁酸、二氨基丙酸、其盐和/或其组合。在一特定实施例中，碱性氨基酸选自精氨酸、瓜氨酸和鸟氨酸。

在某些实施例中，碱性氨基酸为精氨酸，例如L-精氨酸，或其盐。

适合的盐包括所属领域中已知为药学上可接受的盐的盐，医药学上可接受的盐通常被认为在所提供的量和浓度下是生理学上可接受的。生理学上可接受的盐包括来源于医药学上可接受的无机或有机酸或碱的盐，例如由形成生理学上可接受的阴离子的酸形成的酸加成盐，例如盐酸盐或溴化物盐，和由形成生理学上可接受的阳离子的碱形成的碱加成盐，例如来源于碱金属(如钾和钠)或碱土金属(如钙和镁)的碱加成盐。生理学上可接受的盐可以使用所属领域中已知的标准程序获得，例如通过使具有足够碱性的化合物(如胺)与提供生理学上可接受的阴离子的合适的酸反应。

在某些实施例中，碱性氨基酸以对应于总组合物重量的0.1％至15％，例如0.1重量％至10重量％、例如0.1至5重量％、例如0.5重量％至3重量％，约例如1％、1.5％、2％、3％、4％、5％或8％的量存在，其中碱性氨基酸的重量以游离形式计算。

表面活性剂：

本发明可以在一些实施例中含有阴离子表面活性剂，例如高级脂肪酸单甘油酯单硫酸盐的水溶性盐，诸如氢化椰子油脂肪酸的单硫酸化单甘油酸酯的钠盐，诸如N-甲基N-椰油基牛磺酸钠、椰油甘油酯硫酸钠；高级烷基硫酸盐，诸如月桂基硫酸钠；高级烷基醚硫酸盐，例如式CH₃(CH₂)_mCH₂(OCH₂CH₂)_nOSO₃X，其中m为6-16，例如10，n为1-6，例如2、3或4，并且X为Na或，例如月桂基聚氧乙醚-2硫酸钠(CH₃(CH₂)₁₀CH₂(OCH₂CH₂)₂OSO₃Na)；高级烷基芳基磺酸盐，诸如十二烷基苯磺酸钠(月桂基苯磺酸钠)；高级烷基磺基乙酸盐，诸如月桂基磺基乙酸钠(十二烷基磺基乙酸钠)、1，2-二羟基丙烷磺酸的高级脂肪酸酯、磺基月桂酸盐(sulfocolaurate)(N-2-乙基月桂酸钾磺基乙酰胺)和月桂基肌氨酸钠。“高级烷基”意指例如C_6-3o烷基。在特定实施例中，阴离子表面活性剂(当存在时)选自月桂基硫酸钠和月桂基醚硫酸钠。当存在时，阴离子表面活性剂以有效的(例如，大于配制物的0.001重量％)，但不处于将刺激口腔组织的浓度下(例如1％)的量存在，并且最佳浓度取决于特定配制物和特定表面活性剂。在一个实施例中，阴离子表面活性剂以0.03重量％至5重量％(例如1.5重量％)存在。

在另一实施例中，适用于本发明的阳离子表面活性剂可广义地定义为具有一条含有8至18个碳原子的长烷基链的脂肪族季铵化合物的衍生物，诸如氯化月桂基三甲基铵、氯化鲸蜡基吡啶、溴化鲸蜡基三甲基铵、氯化二异丁基苯氧基乙基二甲基苯甲基铵、亚硝酸椰子基烷基三甲基铵、氟化鲸蜡基吡啶及其混合物。说明性阳离子表面活性剂是在授予Briner等人的美国专利第3,535,421号中所述的季铵氟化物，所述专利以引用方式并入。某些阳离子表面活性剂还可以充当组合物中的杀菌剂。

可用于本发明组合物中的说明性非离子表面活性剂可广义地定义为通过使氧化烯基团(本质上亲水的)与本质上可为脂肪族或烷基芳烃的有机疏水化合物缩合产生的化合物。适合的非离子表面活性剂的实例包括但不限于Pluronics、烷基酚的聚环氧乙烷缩合物、衍生自环氧乙烷与环氧丙烷和乙二胺的反应产物的缩合的产物、脂肪族醇的环氧乙烷缩合物、长链叔胺氧化物、长链叔膦氧化物、长链二烷基亚砜以及这类物质的混合物。在一特定实施例中，本发明的组合物包含选自泊洛沙姆(例如泊洛沙姆407)、聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯20)、聚乙二醇氢化蓖麻油(例如聚乙二醇40氢化蓖麻油)及其混合物的非离子表面活性剂。

可用在本发明的组合物中的说明性两性表面活性剂包括：甜菜碱(诸如椰油酰胺丙基甜菜碱)；脂肪族仲胺和叔胺的衍生物，其中脂肪族基可为直链或支链的，并且其中脂肪族取代基中的一者含有约8至18个碳原子并且一者含有阴离子水增溶基团(诸如羧酸根、磺酸根、硫酸根、磷酸根或膦酸根)；以及这类材料的混合物。

表面活性剂或相容表面活性剂的混合物可以按总组合物的重量计以0.1％至5％，在另一个实施例中0.3％至3％以及在另一个实施例中0.5％至2％存在于本发明的组合物中。调味剂：

本发明的口腔护理组合物也可包括调味剂。用于本发明的实践中的调味剂包括但不限于精油以及各种调味醛、酯、醇和类似物质，以及甜味剂，诸如糖精钠。精油的实例包括留兰香、胡椒薄荷、冬青、檫木、丁香、鼠尾草、桉树、马郁兰、肉桂、柠檬、酸橙、葡萄柚和橙子的油。如薄荷醇、香芹胴和大茴香脑等化学物质也是适用的。某些实施例采用胡椒薄荷油和留兰香。

调味剂以0.01重量％至1.5重量％的浓度掺入口腔组合物中。

螯合剂和防牙结石剂：

本发明的口腔护理组合物还可包括能够络合存在于细菌细胞壁中的钙的一种或多种螯合剂。这种钙的结合使细菌细胞壁弱化并且使细菌溶解增强。

另一组适于在本发明中用作螯合剂和防牙结石剂的试剂是可溶性焦磷酸盐。用在本发明组合物中的焦磷酸盐可以是碱金属焦磷酸盐中的任一种。在某些实施例中，盐包括四碱金属焦磷酸盐、二碱金属焦磷酸二氢盐、三碱金属焦磷酸一氢盐及其混合物，其中所述碱金属为钠或钾。呈水合和未水合形式的盐均为适用的。可用于本发明组合物中的焦磷酸盐的有效量通常足以提供至少0.1重量％的焦磷酸根离子，例如0.1至3重量5、例如0.1至2重量％、例如0.1至1重量％、例如0.2至0.5重量％。焦磷酸盐还通过降低水的活性而有助于保存组合物。

在制备口腔护理组合物中，有时必须添加一些增稠材料来提供合乎需要的稠度或稳定或增强配制物的性能。在某些实施例中，增稠剂为羧基乙烯基聚合物、角叉菜胶、黄原胶、羟乙基纤维素和纤维素醚的水溶性盐，诸如羧甲基纤维素钠和羧甲基羟乙基纤维素钠。也可将天然胶诸如刺梧桐胶、阿拉伯树胶和黄芪胶掺入。二氧化硅也可作为增稠剂，例如合成无定形二氧化硅。胶态硅酸镁铝或细分二氧化硅可用作增稠组合物的组分以便进一步改善组合物的质地。在某些实施例中，使用按总组合物的重量计约0.5％至约5.0％的量的增稠剂。增稠剂的存在量可以为1重量％至15重量％、3重量％至10重量％、4重量％至9重量％、5重量％至8重量％，例如5重量％、6重量％、7重量％或8重量％。

磨料：

天然碳酸钙存在于诸如白垩、石灰岩、大理石和石灰华的岩石中。它还是蛋壳和软体动物壳的主要组分。本发明的天然碳酸钙磨料通常为磨细的石灰岩，其可任选地经提炼或部分地提炼以除去杂质。为了用于本发明，所述材料的平均粒度小于10微米，例如3-7微米，例如约5.5微米。举例来说，小颗粒二氧化硅可具有2.5-4.5微米的平均粒度(D50)。仅仅因为天然碳酸钙可含有高比例的未仔细控制的相对大的颗粒，这会不可接受地增大研磨性，所以优选地不超过0.01重量％，优选地不超过0.004重量％的颗粒将不会通过325目筛。所述材料具有强晶体结构，并因此比沉淀碳酸钙硬得多且研磨能力更强。天然碳酸钙的振实密度例如介于1与1.5g/cc之间，例如约1.2，例如约1.19g/cc。天然碳酸钙存在不同的多晶型物，例如方解石、霰石和球霰石，方解石出于本发明的目的是优选的。适用于本发明的市售产品的实例包括来自GMZ的25-11FG。

沉淀碳酸钙通常通过以下方式制备：煅烧石灰岩以制备氧化钙(石灰)，然后可通过在水中与二氧化碳反应而转化回碳酸钙。沉淀碳酸钙具有与天然碳酸钙不同的晶体结构。它通常更易碎且更多孔，因此具有较低的研磨性和较高的吸水性。为了用于本发明，颗粒较小，例如具有1-5微米的平均粒度，并且例如不超过0.1重量％，优选地不超过0.05重量％的颗粒将不通过325目筛。所述颗粒可例如具有3-6微米，例如3.8-4.9，例如约4.3的D50；1-4微米，例如2.2-2.6微米，例如约2.4微米的D50；和1-2微米，例如1.2-1.4，例如约1.3微米的D10。所述颗粒具有相对高的吸水性，例如至少25g/100g，例如30-70g/100g。适用于本发明的市售产品的实例包括例如来自Lagos Industria Quimica的15Plus。

在某些实施例中，本发明可包含另外的含钙磨料，例如磷酸钙磨料，例如磷酸三钙(Ca₃(PO₄)₂)、羟基磷灰石(Ca₁₀(PO₄)₆(OH)₂)或二水磷酸二钙(CaHPO₄·2H₂O，有时在本文也称为DiCal)或焦磷酸钙；和/或二氧化硅磨料、偏磷酸钠、偏磷酸钾、硅酸铝、煅烧氧化铝、膨润土或其它硅质材料，或其组合。

在某些实施例中，可以使用任何适用于口腔护理组合物的二氧化硅，诸如沉淀二氧化硅或硅胶。举例来说，二氧化硅也可以是小颗粒二氧化硅(例如得自PQ，英国沃灵顿的Sorbosil AC43)。组合物优选地含有5至20重量％的小颗粒二氧化硅，或例如10-15重量％，或例如5重量％、10重量％、15重量％或20重量％的小颗粒二氧化硅。

在另一个实施例中，所述磨料可以是在20％的载量下测试时，薄膜清洁比(PCR)大于85的高清洁力沉淀二氧化硅，其在所属领域中称为高清洁力二氧化硅。通常，高清洁力二氧化硅也具有5至15μm的平均粒度d₅₀和40至120cm³/100g二氧化硅的吸油量。沉淀二氧化硅的清洁功效使用薄膜清洁比(PCR)表示。这通常在20％二氧化硅载量下测定。高清洁力二氧化硅优选地具有大于85的PCR值。沉淀二氧化硅的功效也可参考其研磨特性使用放射性牙本质磨损(radioactive dentin abrasion；RDA)表示。理想地，口腔组合物的RDA值应低于约250，以保护牙釉质/牙本质。执行PCR和RDA的方法在例如美国专利第5,939,051号和第6,290,933号以及《利用洁齿剂活体外移除污迹(In Vitro Removal of Stain WithDentifrice)》，G.K.Stookey等人，《牙齿研究》，第61卷，第1236-9页，1982年11月中有所描述。通常，沉淀二氧化硅具有5至15μm的平均粒度d₅₀和40至120cm³/100g二氧化硅的吸油量。平均粒度d₅₀为5至15μm并且吸油量为40至120cm³/100g二氧化硅的沉淀二氧化硅的实例包括市售的二氧化硅，诸如103和105(Huber Silica Americas)。

组合物优选地含有3至20重量％的高清洁力沉淀二氧化硅，或例如10-15重量％，或例如5重量％、10重量％、15重量％或20重量％的高清洁力沉淀二氧化硅。

组合物还可以包含磨料二氧化硅，其在组合物中具有酸性pH值。举例来说，可使用以Sylodent^TM从Grace获得的预防性二氧化硅(prophy silica)。酸性二氧化硅磨料以约2至约35重量％、约3至约20重量％、约3至约15重量％、约10至约15重量％的浓度包括于洁齿剂组分中。在某些实施例中，酸性二氧化硅磨料可以在2-7％之间的量存在。在其它实施例中，其可以在7-15重量％之间的量存在。仍然在其它实施例中，其可以在15-30重量％之间的量存在。举例来说，酸性二氧化硅磨料可以选自以下的量存在：2重量％、3重量％、4％重量％、5重量％、6重量％、7重量％、8重量％、9重量％、10重量％、11重量％、12重量％、13重量％、14重量％、15重量％、16重量％、17重量％、18重量％、19重量％、20重量％。

市售的酸性二氧化硅磨料为可获自格雷斯公司(W.R.Grace&Company)(马里兰州巴尔的摩)的Sylodent 783。当作为5重量％的水浆液测量时，Sylodent783具有3.4-4.2的pH值。为了用于本发明，二氧化硅材料的平均粒度小于10微米，例如3-7微米，例如约5.5微米。

在一些实施例中，本公开的组合物含有缓冲剂。缓冲剂的实例包括无水碳酸盐诸如碳酸钠、倍半碳酸盐、碳酸氢盐诸如碳酸氢钠、硅酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐(例如磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸三钠、三聚磷酸钠、磷酸)、柠檬酸盐(例如柠檬酸、脱水柠檬酸三钠)、焦磷酸盐(钠盐和钾盐)以及其组合。当组合物溶解于水、漱口液基料或牙膏基料时，缓冲剂的量足以提供约5到约9、优选地约6到约8、更优选地约7的pH值。以组合物的总重量计，缓冲剂的典型量为约5％到约35％，在一个实施例中约10％到约30％，在另一实施例中约15％到约25％。

各种其它材料可掺入本发明的口腔制剂中，诸如增白剂、防腐剂、有机硅、叶绿素化合物和/或氨化材料，诸如脲、磷酸二氢铵以及其混合物。这些佐剂在存在时以不实质上不利地影响所需性质和特征的量并入制剂中。

还可采用任何合适的调味物质或甜味物质。合适的调味组分的实例包括调味油，例如留兰香、胡椒薄荷、冬青、檫木、丁香、鼠尾草、桉树、马郁兰、肉桂、柠檬和橙子的油以及水杨酸甲酯。合适的甜味剂包括蔗糖、乳糖、麦芽糖、木糖醇、环己基氨基磺酸钠、紫苏糖(perillartine)、AMP(天冬氨酰基苯基丙氨酸甲酯)、糖精等。适当地，调味剂和甜味剂可各自或共同占制剂的约0.1％至5％以上。此外，据信，连同或甚至在不存在表面活性剂的情况下，调味油有助于溶解抗菌剂。

本发明在其方法方面中涉及向口腔施加安全并且有效量的本文所述的组合物。

以下实施例进一步描述和证实本发明范围内的说明性实施例。实例仅仅为说明而给出，而不应被视为限制本发明，因为可以进行许多变化而不会背离其精神和范围。对本发明的除本文所显示和描述的那些之外的各种修改对所属领域技术人员来说将是显而易见的并且旨在落在随附权利要求书范围内。

方法和材料：

柚皮苷获自Perfect Health，LLC(批次CYPD-A-01468，99％HPLC纯度，新泽西州萨默塞特)或西格玛-奥德里奇公司(Sigma-Aldrich)(密苏里州圣路易斯)目录号71162或N1376。乙酸锌(II)盐从西格玛-奥德里奇公司(密苏里州圣路易斯)目录号383317获得。

实例1-合成方法1

简单来说，在10ml甲醇(美国贝克，目录号9093-03)中制备1.25e-4摩尔的柚皮苷(配体)溶液。接下来，在恒定搅拌下缓慢添加蒸馏水中的2ml乙酸锌(II)溶液(1.25e-4摩尔)。使用氢氧化钠(50％的溶液)(美国贝克，宾夕法尼亚州中心谷，目录号9721-02)将溶液的pH值调节至约10.0。在室温下使反应持续约4小时。将沉淀物在真空系统中过滤，用水洗涤，且然后风干。获得了观测为微黄色有色沉淀物的柚皮苷∶锌复合物，使用UV-VIS、FTIR和¹H NMR表征并标记为产品1。

实例2-合成方法2

首先，在10ml双蒸馏H₂O中制备1.25e-4摩尔的柚皮苷(配体)溶液并加热至约70℃，以增强柚皮苷的溶解度。然后过滤所得溶液。接下来，在恒定搅拌下缓慢添加双蒸馏水中的2ml乙酸锌(II)(1.25e-4摩尔)。然后使用氢氧化钠(50％溶液)将溶液的pH值调节至约10.0。使反应物温育约2小时。收集形成的沉淀物，首先用DdH₂O洗涤，之后用200标准酒精度乙醇洗涤。观测为微黄色有色沉淀物随后经真空干燥，收集，使用UV-Vis光谱分析、FTIR和¹H NMR表征并标记为产品2。

实例3-合成方法3

简单来说，在10ml双蒸馏H₂O中制备1.25e-4摩尔的柚皮苷(配体)溶液并加热至约70℃，以增强柚皮苷的溶解度。使用氢氧化钠(50％溶液)将溶液的pH值调节至约10.0。接下来，在恒定搅拌下缓慢添加双蒸馏水中的2ml乙酸锌(II)(1.25e-4摩尔)。观测为微黄色有色的所形成沉淀物经收集，最初用dDH₂O洗涤，之后用200标准酒精度乙醇洗涤，真空干燥，使用UV-Vis光谱分析、FTIR和¹H-NMR表征且标记为产品3。

实例4-合成方法4

在10ml双蒸馏H₂O中制备1.25e-4摩尔或2.50e-4摩尔的柚皮苷(配体)溶液并加热至约70℃，以增强柚皮苷的溶解度。过滤所得溶液。接下来，在恒定搅拌下缓慢添加双蒸馏水中的2ml乙酸锌(II)溶液(1.25e-4摩尔)。然后使用氢氧化钠(50％溶液)将溶液的pH值调节至约7.0。收集沉淀物，首先用DdH₂O洗涤，之后用200标准酒精度乙醇洗涤。观测为微黄色有色的所得沉淀物经真空干燥，使用UV-Vis光谱分析、FTIR和¹H-NMR表征且标记为产品4(1.25e-4摩尔柚皮苷)和5(2.50e-4摩尔柚皮苷)。

实例5-合成方法5

为制备产品6，在预升温到约70℃的10ml 7％丙二醇溶液中制备2.50e-4摩尔的柚皮苷(配体)溶液。在不受理论束缚下，据相信，此温度提高柚皮苷的溶解度。在保持在45℃下的加热的搅拌板上不断搅拌混合物(轻微浑浊和黄色)。在某些实施例中，温度范围可为40-50℃。使用氢氧化钠调节溶液的pH值，直到获得澄清的橙色溶液(pH9-10)。接着，在恒定搅拌下缓慢加入在7％丙二醇溶液中的2ml乙酸锌(II)(1.25e-4摩尔)，其预热至约70℃。将反应物温育约2小时。收集沉淀物，首先用DdH₂O洗涤，然后使用200标准酒精度乙醇洗涤。

实例6-使用UV-Vis进行表征

柚皮苷∶锌复合物的UV-Vis光谱使用SpectraMax M5板读取器生成。简单来说，在100％DMSO(BDH，目录号BDH 1115-1LP)中制备2.0％柚皮苷∶锌复合物或柚皮苷起始物质的样品。然后在96孔透明底板中使样品经受1∶1的连续稀释，使得在100ul的DMSO中最高浓度为1.0％并且最低浓度为0.0078％。样品经历从200nm波长到500nm波长的光谱扫描。测定所有连续稀释液的光密度(OD)对波长的曲线图，但结果部分中仅呈现0.03125％稀释液的结果。

如图2-4中所示，游离的柚皮苷在290nm处表现出对应于A环吸收(苯甲酰基系统)的于水溶液中的吸收最大峰值，以及在325nm处对应于B环吸收(苯丙烯酰基系统)的较弱谱带，参见Malesev等人，《塞尔维亚化学会杂志(J.Serb.Chem.Soc.)》.，2007，72(10)：921-39。在与乙酸锌结合以形成复合物时，针对产品1注意到较弱吸收带从325nm到365nm的移位。如图3所示，产品2产生最大峰值从290nm至295nm的的细微偏移。也观测到较弱谱带从325nm到370nm的更显著的移位。产品3提供类似的轮廓。如图4所示，产品4和5两者均展现出类似的轮廓。观察到最大峰值(290nm至295nm)和较弱谱带(325nm至370nm)的移位，表明锌(II)离子与黄酮的稠环的相互作用。移位先前归因于在金属络合时由新环形成产生的增加的共轭效应(Malesev等人，见上文)。此结果与来自FTIR和¹H-NMR研究的发现一致(参见图5-图7B)。在大多数情况下发现了各种测试产品的最大峰值移位，但不是在每次测试期间看到。在表1中参见例如产品1与产品2的比较。

表1：概述：展示游离柚皮苷和在各种条件下合成的柚皮苷∶锌复合物的A环吸收和B环吸收的峰值位置.

样品	最大峰值	较弱谱带
			柚皮苷(游离)	290nm	325nm
产品1	290nm	365nm
			产品2	295nm	370nm
产品3	295nm	370nm
			产品4	295nm	370nm
产品5	295nm	370nm

实例7-使用FTIR进行表征

使用配有GladiATR diamond ATR附件(Pike技术，威斯康星州麦迪逊)的BrukerVertex 70 FTIR光谱仪收集红外光谱。光谱范围为80-4000cm^-1并使用4cm^-1的分辨率。在室温下对粉末状样品进行所有测量。

图5显示游离柚皮苷和产品4复合物的红外光谱。光谱数据的比较揭露在与锌相互作用时柚皮苷的振动响应的明显差异。作为实例，柚皮苷的红外光谱显示出1645cm^-1附近的强带，其归因于羰基υ(C＝O)的拉伸振动(Pereira等人，《分子(Molecular)》，2007，12：1352-66；Li等人，《光谱化学学报，A辑(Spectrochimica Acta Part A)》，2007，67：395-401；Yousuf等人，《国际光谱学杂志(International Journal of Spectroscopy)》2014，Article ID 562160)。在存在锌的情况下，此带红移至1615cm^-1，表明经由羰基氧柚皮苷与锌的配位。此前针对其它金属-类黄酮复合物观察到类似的行为(Pereira等人，Lisuf等人，Yousuf等人，见上文)。除羰基部分外，发现5-OH基团为5-羟基黄酮衍生物中金属螯合物的另一重要位点。对于产品4复合物，与酚醛基的υ(C-O(H))(或C-C-O)伸缩振动相关联的谱带结合δ(OH)变形模式，并且在1230-1370cm^-1范围中出现。从图5可以看出，这些谱带显示出与游离柚皮苷相比较显著的频率偏移和相对强度变化。这种行为连同在1645cm^-1下的υ(C＝O)谱带的能量移位表明锌与柚皮苷的络合可能经由羰基和5-羟基的氧发生。产品4的芳香族和二糖单元的谱带的额外峰值移位和强度变化可能由分别由于新环形成和葡糖苷的构象变化而产生的电子在环上的重新分配引起。最后，在复合物产品4中观察到的在460cm^-1附近的额外谱带可以源自υ(Zn-O)拉伸振动(Yousuf等人，见上文)进一步支持柚皮苷∶锌络合作用。

图6比较柚皮苷和在不同pH值和摩尔比条件下制备的产品2、产品4和产品5的柚皮苷∶锌复合物的红外反应。除了其相对强度的差异外，所有化合物均显示总体类似的光谱轮廓和峰值偏移，从而表明其类似的结构特征。

实例8-使用¹H NMR表征

对10重量％柚皮苷或柚皮苷∶锌样品在DMSO-d5溶液中进行NMR测量。所有¹H NMR光谱均在Bruker Avance 500光谱仪上采集，所述光谱仪在室温下针对¹H以500Mhz工作。在25℃下通过¹H脉冲-场梯度NMR光谱分析测量柚皮苷和柚皮苷∶Zn复合物在DMSO-d5中的扩散系数。使用TMS作为内标以δd(ppm)报道所有化学位移。

柚皮苷和柚皮苷∶锌复合物的¹H化学位移在图7B和表2中呈现。值得注意的是，对应于5-OH酚醛基的在12ppm处的峰值在柚皮苷∶锌复合物形成时不存在，表明此位点与锌结合。在形成复合物时指定为A环的H6和H8的峰值移位到较低频率。不受理论束缚，这可能是因为配位增加类黄酮分子的平面度和/或因为配位诱导二糖的较大构象变化，从而增加环A上的电子密度以屏蔽质子H6和H8。

表2：柚皮苷和柚皮苷∶锌复合物的¹H NMR化学位移(ppm)

样品	柚皮苷	产品4	产品5
				柚皮苷∶Zn		1∶1	2∶1
5-OH	12.07
				4′-OH	9.62	9.56	9.57
H2′，H6′	7.34(d，J＝8Hz)	7.31(d，J＝8Hz)	7.31(d，J＝8Hz)
				H3′，H5′	6.80(d，J＝8Hz)	6.79(d，J＝8Hz)	6.78(d，J＝8Hz)
H8	6.18	5.63	5.63
				H6	6.22	5.78	5.79
H3	3.17	3.20	3.18

令人惊讶的是，¹H NMR光谱以及FTIR谱显示由不同比率的柚皮苷和锌(2∶1或1∶1)制备的柚皮苷∶锌复合物样品是类似的。

实例9-使用扩散测量表征

使用配备有观察到的宽频带探针的Bruker Avance 500光谱仪进行扩散测量，其中z轴梯度线圈具有72G/cm的最大梯度强度。使用具有双极梯度脉冲和两个破坏梯度的双重刺激回波脉冲序列。扩散时间为0.1秒。将场梯度脉冲的持续时间调整为4毫秒。脉冲梯度以线性斜变从最大梯度强度的5递增到95％，总实验时间为45分钟。

进行柚皮苷∶锌复合物的分子扩散，以检测由2∶1与1∶1柚皮苷∶锌摩尔比制备的样品之间的差异。在不受理论束缚下，据推测，2∶1的分子扩散应慢于1∶1复合物。产品4和产品5的柚皮苷和柚皮苷∶锌复合物的观察到的扩散系数概述于图8中。复合物的扩散系数比柚皮苷的扩散系数慢约25％。还观察到，所有两种柚皮苷∶锌复合物的扩散系数是相似的，不管它们是由1∶1还是由2∶1柚皮苷∶锌摩尔比的初始混合制备的。这些发现暗示两种柚皮苷∶锌复合物均具有与柚皮苷和锌相同的化学计量比。

所计算的扩散系数用于使用斯托克斯-爱因斯坦(Stokes-Einstein)关系阐明分子物种的大小：

其中r为在温度T下在粘度η的连续流体中移动的硬球的流体动力半径并且k_B为玻尔兹曼常数。假设扩散物种为球形，那么D与分子量MW的关系可描述为

其中ρ为所述分子的有效分子密度且N_A为阿伏伽德罗数。假定本文研究的柚皮苷和柚皮苷∶锌复合物具有相同的紧束效应和几何结构，那么柚皮苷∶锌复合物的分子量可以根据已知的柚皮苷的分子量和扩散系数D根据以下关系进行估计：

MW ∝1/D³

表3.基于扩散NMR测量值的估计分子量和柚皮苷与锌的化学计量比的概述.

从表3，发现基于估计分子量的柚皮苷和锌的估计化学计量比为约2∶1(柚皮苷∶锌)。

实例10-熔点的表征

在电热MEL-TEMP 3.0(巴恩斯特德国际公司(Barnstead International)，爱荷华州迪比克)熔点设备上记录熔点。将少量的样品引入毛细管中。将管插入到保持器中，并且从观察窗口监测样品的物理变化。在发生变化时记录温度。样品的熔点概述于表4中。所有样品均显示在230-254.3℃范围内的崩解。

表4.柚皮苷和由本文所述的方法合成的柚皮苷∶锌复合物的熔点的概述.

实例11-稳定性表征

为了起始复合物的稳定性测试，将选择性样品溶解于2％储备溶液下的DMSO中以获得UV-Visual光谱且使其在室温下静置6-8周。使样品在DMSO中经受1∶1连续稀释，并使用SpectrAmax M5板读取器读取。结果概述于图9和图10中。先前观测到的最大峰值(290nm到295nm)和较弱谱带(325nm到370nm)的移位在样品制备后维持6-8周。

实例12-抗微生物活性的表征：抑制区

使用抑制类型分析区结合生长抑制/毒性测试确定抗微生物活性。对于抑制测定区，在37℃和5％CO₂下在补充有0.5％酵母提取物(BD，目录号210941)的大约30ml BHI肉汤(BD，目录号237500)中培养单一伴放线凝聚杆菌(A.a)菌落过夜。制备在(OD₆₁₀0.5)下的过夜培养物的1∶10稀释液并且将100μl培养物无菌转移到室温平衡TSAII(具有5％绵羊血的胰蛋白酶大豆琼脂)板(BD，目录号221239)上，并使用无菌扩散器轻轻地扩散。使用无菌镊子将无菌6mm直径滤盘置于培养板顶部上并将5μl DMSO中的100mM测试化合物连同合适的对照物1％氯己定(CHX)、3％三氯生、仅培养基和DMSO施加到滤盘的中心。在37℃、5％CO₂下在测量抑制区的观察结果和直径之前，将经处理的板培育48小时。表5概述柚皮苷∶锌复合物对口腔病原体伴放线凝聚杆菌的活性。

表5.由过滤盘周围的抑制区形成表示的游离柚皮苷对比柚皮苷∶锌复合物的抗微生物效果.

抑制区方法产生关于复合物的抗微生物活性的定性结果。圆盘周围的抑制区的外观指示点样于滤盘上的测试化合物的抗微生物活性。本文选择口腔病原体伴放线凝聚杆菌，因为它被视为与年轻成年人中的侵袭性牙周炎相关的关键细菌剂，并且与成人形式的破坏性牙周病有关(Darby等人，《牙周病学2000(Periodontology 2000)》，2001，26：33-53)。来自抑制区研究的数据表明，在500纳摩尔下，柚皮苷∶锌复合物相比于单独的柚皮苷展示提高的杀灭伴放线凝聚杆菌的效能。单独的DMSO未展示任何杀灭而1％氯己定展示杀灭。

实例13-抗微生物活性的表征：生长抑制/IC₅₀测定

分析单一物种的格氏链球菌(S.gordonii，S.g)菌株V288(ATCC#35105)、表兄链球菌(S.sobrinus，S.s)菌株SL1[CCM 6070、CNCTC 9/89](ATCC#33478)，或伴放线凝聚杆菌。另外，还分析混合培养物的生长抑制/毒性活性，所述混合培养物含有粘性放线菌(A.viscosus，A.v)菌株(ATCC，#43146)、干酪乳杆菌(L.casei，L.c)菌株(ATCC#334)、口腔链球菌(S.oralis，S.o)菌株(ATCC#35037)、具核梭杆菌(F.nucleatum，F.n)菌株(ATCC#10953)和极小韦永氏球菌(V.parvula，V.p)菌株(ATCC#17745)。将细菌在约20ml BHI肉汤(BD，目录号237500)中培养过夜，或分别地维持在37℃下的连续培养基恒化器中的专用复合改性的BHI II培养基中。第二天，测定OD₆₁₀并分别将溶液稀释到0.2或0.1的OD₆₁₀以进行分析。

将测试样品(柚皮苷、柚皮苷∶锌复合物和柚皮苷+乙酸锌组合)制备为200mM储备溶液，然后在100％DMSO中连续稀释2倍。在100％EtOH中将三氯生(阳性对照)制备为10％储备液且在100％EtOH中进行3倍连续稀释。然后将适量的稀释样品转移到96孔透明板中，使得测试样品在100μl培养基/孔中在2％DMSO中的所得最终浓度在2mM或4mM(最高浓度)至0.0078mM或0.0156mM(分别为最低浓度)范围内。三氯生(TCN)在1％EtOH中在0.01％至1.67e-6％范围内。对于乙酸锌，为了模仿柚皮苷∶锌复合物中的2∶1摩尔比(配体∶锌)，在2％DMSO中以2mM为最高浓度的样品的最终浓度范围为0.7mM至0.0027mM且以4mM为最高浓度的样品的最终浓度范围为1.33mM到0.052mM。接着，将OD₆₁₀0.2下的100μl细菌培养物引入具有测试样品的孔中。将孔充分混合并在37℃下培育过夜。使用Envision板读取器(珀金埃尔默，马萨诸塞州沃尔瑟姆)在610nm下读取板。代表性结果概述于图11中。

测定复合物、产品5对格氏链球菌(S.gordonii)、表兄链球菌(S.sobrinus)、伴放线凝聚杆菌(A.actinomycetemcomitans)以及混合细菌培养物的IC₅₀。使用GraphPad Prism6绘制剂量反应曲线，并且代表性曲线图示于图11和22中。测定的IC₅₀值概述于表6中。IC₅₀值显示复合物比单独的乙酸锌以及柚皮苷+醋酸锌组合在一起的组合更加强效。包括三氯生(TCN)作为细菌抑制的阳性对照。

表6.单一和混合培养物的IC₅₀值的概述.

所述复合物展现对致龋病原体表兄链球菌、共生病原体格氏链球菌和病原性晚期定植菌口腔微生物菌群伴放线凝聚杆菌的抗微生物作用。这些结果也扩展至混合的恒化器细菌培养物。抑制50％细菌生长的浓度在0.1-0.37mM(对应于122.6-453.5ppm)的范围内。柚皮苷与乙酸锌的组合产生在0.65-2.10mM(对应于496.5-1604.2ppm)范围内的IC₅₀值。所有测试浓度下单独的柚皮苷均未显示对测试细菌物种的可检测抗微生物作用。单独的乙酸锌展现在0.25-1.73mM(对应于45.9-317.5ppm)范围内的IC₅₀。阳性对照三氯生抑制在0.00061-0.0076mM(对应0.18-2.2ppm)范围内的50％的两种细菌物种

对以下浮游口腔微生物进行进一步表征：表兄链球菌(致龋-菌株-SL1[CCM 6070、CNCTC 9/89])(ATCC目录号33478)、格氏链球菌(溶解精氨酸的菌株V288(ATCC目录号35105)、粘性放线菌)以及晚期定殖菌(革兰氏-)、病原性伴放线凝聚杆菌。所有微生物在其各自的培养基中生长：在BHI肉汤(BD，目录号237500)中的表兄链球菌和格氏链球菌，在补充有0.5％酵母提取物(BD，目录号210941)的BHI肉汤中的伴放线凝聚杆菌和补充有0.5％酵母提取物(BD，目录号210941)的胰蛋白酶解酪蛋白大豆肉汤(BD，目录号211768)中的粘性放线菌。将细菌在37℃、5％CO₂下在约20ml的适当培养液中培养隔夜。第二天，测定OD₆₁₀并将溶液稀释到0.2以进行分析。

将测试样品(柚皮苷、柚皮苷∶锌复合物和柚皮苷+乙酸锌(组合))制备为100mM储备溶液，然后在100％DMSO中连续稀释2倍。在100％EtOH中将三氯生(阳性对照)制备为10％储备液且在100％EtOH中进行3倍连续稀释。将适量的稀释样品转移到96孔透明板中，使得在100ul培养基/孔中所得到的单独的柚皮苷、柚皮苷∶锌复合物、柚皮苷+乙酸锌(组合)的最终浓度在2mM至0.0078mM(2％DMSO)的范围内，并且三氯生在0.01％至1.7e-6％(1％EtOH)的范围内。对于柚皮苷+锌组合，虽然最高总体浓度为2mM，但是由于组合物2∶1摩尔比，精确浓度为柚皮苷(1.3mM)和乙酸锌(0.7mM)。对于乙酸锌，为了模仿如在复合物中的2∶1比率(配体∶锌)组合物，在2％DMSO中的最终浓度在0.7mM至0.0027mM的范围内。

将OD₆₁₀ 0.2下的100μl细菌培养物的等分试样引入具有测试样品的孔中。将孔充分混合，并且根据细菌物种将板在具有或不具有5％CO₂的37℃培养箱中培育过夜。另外，还进行各种细菌物种的共同培养物(S.s+A.a；A.a+A.v；S.s+A.v；S.g+A.v；S.g+S.s)。在此情况下，每种细菌培养物使用50μl，每孔总体积为100μl。

在处理大约12-13小时后，使用Envision板读取器(珀金埃尔默，马萨诸塞州沃尔瑟姆)在610nm下读取板。如下测定相对于对照的抑制％：

柚皮苷∶锌复合物对单独培养或与另一种细菌物种共同培养的革兰氏+和革兰氏-浮游口腔细菌物种均表现出协同抗微生物作用。参见图11-18和表6-12。

表7.处理对格氏链球菌和表兄链球菌的抑制％的影响.选择样品处理浓度以模拟2∶1(柚皮苷比锌)的化学计量比。

当添加到单一或共同培养的细菌中时，柚皮苷-锌复合物导致对细菌的单一物种和共同培养物的协同抑制。单独的柚皮苷、与乙酸锌的组合或单独的乙酸锌显示极少至无可检测的抑制。另外，复合物似乎表现出对不同细菌物种的差异影响。在这种情况下，在0.5mM下的复合物作为抗微生物剂对表兄链球菌(84.30％)的有效性高于对格氏链球菌(66.35％)的有效性且两者的共同培养物导致74.8％抑制。

表8.处理对格氏链球菌和表兄链球菌的抑制％的影响.选择样品处理浓度以模拟2∶1(柚皮苷比锌)的化学计量比。

当添加到单一或共同培养的细菌中时，柚皮苷∶锌复合物导致对细菌的单一物种和共同培养物的协同抑制。单独的柚皮苷、与乙酸锌的组合或单独的乙酸锌显示极少至无可检测的抑制。另外，复合物似乎表现出对不同细菌物种的差异影响。在这种情况下，在0.5mM下的复合物作为抗微生物剂对格氏链球菌(66.35％)的有效性高于对粘性放线菌(34.13％)的有效性且两者的共同培养物导致29.9％抑制。

表9.各种处理对表兄链球菌和粘性放线菌的抑制％的影响.

当添加到单一或共同培养的细菌中时，柚皮苷∶锌复合物导致对细菌的单一物种和共同培养物的协同抑制。单独的柚皮苷、与乙酸锌的组合或单独的乙酸锌显示极少至无可检测的抑制。另外，复合物似乎表现出对不同细菌物种的差异影响。在这种情况下，在0.5mM下的复合物作为抗微生物剂对表兄链球菌(84.30％)的有效性高于对粘性放线菌(27.07％)的有效性且两者的共同培养物导致29.9％抑制。

表10.各种处理对伴放线凝聚杆菌和粘性放线菌的抑制％的影响.选择样品处理浓度以模拟2∶1(柚皮苷比锌)的化学计量比。

当添加到单一或共同培养的细菌中时，柚皮苷∶锌复合物导致对细菌的单一物种和共同培养物的协同抑制。单独的柚皮苷、与乙酸锌的组合或单独的乙酸锌显示极少至无可检测的抑制。另外，复合物似乎表现出对不同细菌物种的差异影响。在这种情况下，在0.5mM下的复合物作为抗微生物剂对伴放线凝聚杆菌(56.47％)的有效性高于对粘性放线菌(27.07％)的有效性而两者的共同培养物导致37.52％抑制。

表11.各种处理对表兄链球菌和伴放线凝聚杆菌的抑制％的影响.选择样品处理浓度以模拟2∶1(柚皮苷比锌)的化学计量比。

当添加到单一或共同培养的细菌中时，柚皮苷∶锌复合物导致对细菌的单一物种和共同培养物的协同抑制。单独的柚皮苷或与乙酸锌的组合或单独的乙酸锌显示极少至无可检测的抑制。另外，复合物似乎表现出对不同细菌物种的差异影响。在这种情况下，在0.5mM下的复合物作为抗微生物剂对表兄链球菌(84.30％)的有效性高于对伴放线凝聚杆菌(56.47％)的有效性而共同培养物展现79.1％抑制。

作为用于抗微生物分析的阳性对照，用在0.01％-1.7e-6％范围内的三氯生以1％EtOH最终浓度处理相同的细菌培养物物种。使用GraphPad Prism版本6软件测定IC₅₀在0.00010-0.00027％(1-2.7ppm)的范围内。

此处的结果显示，可以在呈柚皮苷∶锌复合物形式或呈锌和柚皮苷的组合形式的金属锌存在下增强柚皮苷的抗微生物功效。令人惊讶的是，用本发明的柚皮苷∶锌复合物增强抗微生物功效，所述本发明的柚皮苷∶锌复合物至少部分地通过具有2∶1化学计量比的柚皮苷与锌来表征。

还对具有至少五种微生物物种存在的混合培养溶液进行抗微生物表征。将混合培养物维持在37℃下的连续培养恒化器中的专用复合培养基(改性的BHI II培养基)中，所述混合培养物含有粘性放线菌(A.viscosus，A.v)(ATCC，#43146)、干酪乳杆菌(L.casei，L.c)(ATCC#334)、口腔链球菌(S.oralis，S.o)(ATCC#35037)、具核梭杆菌(F.nucleatum，F.n)(ATCC#10953)和极小韦永氏球菌(V.parvula，V.p)(ATCC#17745)。移出大约10ml培养物且测定OD₆₁₀。使用在OD₆₁₀下的两种浓度下的培养物进行分析：0.03，0.1。将测试样品(柚皮苷、柚皮苷∶锌复合物和柚皮苷+乙酸锌(组合))制备为100mM储备溶液，然后在100％DMSO中连续稀释2倍。在100％EtOH中将三氯生(阳性对照)制备为10％储备液且在100％EtOH中进行3倍连续稀释。将适量的稀释样品转移到96孔透明板中，使得在100ul BH II培养基(AlvarezG.等人；《AMB快报(AMB Express)》；2013，3(1)，doi：10.1186/2191-0855-3-1)/孔中所得到的单独的柚皮苷、柚皮苷∶锌复合物、柚皮苷+乙酸锌(组合)的最终浓度在2mM至0.0078mM(2％DMSO)的范围内，并且三氯生在0.01％至1.7e-6％(1％EtOH)的范围内。对于柚皮苷+乙酸锌组合，虽然最高总体浓度为2mM，但是由于组合物2∶1摩尔比，精确浓度为柚皮苷(1.3mM)和乙酸锌(0.7mM)。对于乙酸锌，为了模仿如在复合物中的2∶1比率(配体∶锌)组合物，实际上使用在2％DMSO中在0.7mM至0.0027mM范围内的最终浓度。

将在选定的OD₆₁₀(0.03或0.1)下的100μl细菌培养物引入具有测试样品的孔中。将孔充分混合，并且在具有或不具有5％CO₂的37℃培养箱中培育过夜。在处理大约12-13小时之后，使用Envision板读取器(序列号1040984)在610nm的吸光度下读取板。如针对先前描述的抗微生物方案所描述测定相对于对照的抑制％，见上文。

使用混合物种培养物，我们观察到，与柚皮苷+锌组合和单独的乙酸锌相比，柚皮苷∶锌复合物导致协同抑制，无论培养物是否与5％CO₂一起温育(参见图17、图18和表12)。复合物的抗微生物功效对于在不存在5％CO₂的情况下培育的培养物更有效(参见表12)。

表12.各种处理对混合培养物溶液的影响的概述.

我们观察到，在混合物种培养物中，不管好氧还是厌氧培育培养物，总体结果在复合物(而不是其单独的部分或组合形式)存在下是协同抗微生物作用。然而，在好氧条件下，对于相同的测试浓度，复合物的抗微生物功效几乎是培养物在厌氧条件下的抗微生物功效的两倍(81.7％对比48.2％)。

对于阳性对照，用在1％EtOH中在0.01％-1.7e-6％范围内的三氯生处理混合物种培养物。使用GraphPad Prism版本6软件测定IC₅₀在0.00014-0.00022％(1.4-2.2ppm)范围内(数据未示出)。

实例14-组织锌摄取分析

用于锌摄取研究的EpIgingival^TM组织模型购自MatTek公司(马萨诸塞州亚什兰，目录号Gin-606)。制备所有样品，其在7％丙二醇(PG)中的最终浓度为1％DMSO。举例来说，以1％DMSO和7％PG的最终浓度制备1mM的柚皮苷∶锌复合物；制备柚皮苷和乙酸锌组合，使得总浓度为1mM，但由在1％DMSO和7％PG中0.67mM的柚皮苷和0.33mM乙酸锌组成。制备在0.33mM下的乙酸锌以模拟以1mM的柚皮苷∶锌复合物存在的锌的量。对于仅媒剂对照，使用7％PG中的1％DMSO。在测试之前将所有样品平衡到37℃。

使用来自MatTek公司的EpiGingival^TM组织模型进行锌摄取研究。简单来说，将EpiGingival^TM组织插入物在1ml EpiGingival^TM分析培养基(由MatTek公司提供)中平衡过夜。为了测试，每次用一种插入物处理，将插入物移除且放置在干净的6孔板内部。然后，将1ml测试样品小心地移出并引入插入物内部，并且使其培育2分钟。接下来，使用抽吸器移除样品，并且用1ml温水(37℃)冲洗组织。将此再重复2次。总计3次洗涤。在用以确保去除尽可能多的水的最后一次洗涤结束时，用无菌镊子的尖端从插入物脱离组织并且转移到干净的15ml Falcon试管中。重复所述过程，直到所有组织均得到处理。进行三次实验，每个测试样品一式两份地分析。

组织消化：简单来说，将0.5ml 7∶3 HCl/HNO₃的混合物引入含有所处理组织样品中的一种的15ml Falcon试管中且使其消化过夜。第二天，向每个消化的组织样品中添加4.5ml水，彻底混合并在室温下以4,000RPM离心10分钟。将澄清的上清液(4.5ml)转移到干净的标记的Falcon试管中，并提交用于分析性锌分析。

使用Microsoft Excel 2010计算平均锌摄取(ppm)和样品的标准偏差。完成单因素方差分析以确定p值。产生平均锌(ppm)对各种处理的的曲线图(参见图19)。

在相同的摩尔浓度下，与柚皮苷+乙酸锌组合相比，柚皮苷∶锌复合物(产品5)表现出显著的锌摄取。相比之下，确定在相同摩尔浓度下，产品5的锌摄取与单独的乙酸锌的锌摄取无显著差异。在不受理论束缚下，综合考虑的锌摄取和抗微生物特征表明观察到的协同抗微生物作用可以反映作为整体的复合物而非单独的乙酸锌。

表13.在用柚皮苷∶锌复合物(产品5)、柚皮苷和乙酸锌的组合以及单独的乙酸锌处理2分钟之后从EpiGingival^TM组织模型的锌摄取的概述.制剂1、2和3是指产品5的三种不同合成批次。一式两份地执行每个实验(N1和N2)；Zn是指以百万分率(ppm)为单位的锌。

实例15-合成方法6

在100m1H₂O中混合两摩尔柚皮苷(1.21g.)和一摩尔ZnO(0.081g.)。在剧烈搅拌下将溶液加热到80℃持续4小时。形成微黄色粉末(1.102g.，90％产率)。用热水(3×100ml)洗涤粉末。将21.4mg粉末混合在10％HNO₃中产生澄清溶液。使用FTIR、¹H-NMR和扩散序谱表征标记为产品7的产品。

实例16-伤口愈合

细胞培养：使用完全DMEM培养基(生命技术(Life Technologies)，纽约州格兰德岛，目录号11965-092)在25cm²通风、Falcon倾斜组织培养瓶(VWR，宾夕法尼亚州拉德诺，目录号353108)中培养自发性永生化人类角质细胞系HAcAt细胞(AddexBio，加利福尼亚州圣地亚哥，目录号T0020001)，所述DMEM培养基补充有10％特性化Hyclone FBS(VWR，宾夕法尼亚州拉德诺，目录号1677-014)和1X青霉素-链霉素(生命技术，纽约州格兰德岛，目录号15140122)。将培养物在37℃和5％CO₂下培育直到所述细胞达到约70-80％的融合度。然后用胰蛋白酶-EDTA溶液(西格玛，密苏里州圣路易斯，目录号T3924)分离细胞，并用于繁殖或实验。

分析样品制备：以在完全培养基中为1％DMSO的最终浓度制备样品。制备以下各者-在0.1mM下的柚皮苷、在0.15mM下的柚皮苷∶锌复合物、在0.05mM下的乙酸锌和最终浓度为0.15mM的柚皮苷+乙酸锌组合。完全培养基中的1％DMSO用作媒剂对照且单独的培养基作为阳性对照。每次处理一式四份地进行并获取平均值。在0.15mM下测试产品5的两个不同批次，并测定相对于第0天(d0)的平均增长％并呈现于图20中。

制造伤口：大约在70-80％融合度的HaCaT细胞经1ml胰蛋白酶-EDTA溶液处理并在37℃，5％CO₂下培育直到从烧瓶分离细胞。添加5ml完全培养基以终止细胞的进一步胰蛋白酶消化。将细胞悬浮液转移到干净的50ml Falcon离心管中，并在1500RPM下离心5分钟以使细胞粒化。将粒化的细胞再悬浮于50ml新鲜完全培养基中，并将1ml细胞悬浮液转移到Falcon 353047 24孔板(VWR，宾夕法尼亚州拉德诺)的每个孔中。将板在37℃、5％CO2下培育，直到细胞达到约90％的融合度。

在分析当天，使用无菌p1000移液管尖端将“十字形图像”无菌地形成到每个24孔板细胞单层的底部，以模拟“伤口”(参见图21)。将细胞用1ml普通培养基洗涤两次，轻缓摇动一分钟，并然后用1ml适当的测试培养基刷新。

量化细胞迁移/伤口愈合：为了探索各种活性物质对细胞迁移/伤口愈合的影响，使用倒置显微镜(Olympus 1X71，Olympus Scientific Solutions Americas，马萨诸塞州沃尔瑟姆)和Cellsens Dimensions 1.11(奥林巴斯公司(Olympus Corporation)，马萨诸塞州沃尔瑟姆)软件测定在处理后新生成的伤口的大小，并监测到间隙完全闭合。对每组“十字”伤口图像进行三次不同的测量。对24孔中的每一个进行总计12次测量(顶部3次读数，底部3次读数，右侧3次读数和剩余的左侧3次读数)(参见图21)。在研究的每一天测定每个组的平均值，直到伤口愈合并且没有间隙存在。每次处理的相对于d0(第0天)的细胞生长百分比计算如下：

结果：如图20所示，当与单独的柚皮苷处理、单独的乙酸锌以及柚皮苷和乙酸锌的组合相比时，用产品5处理导致增强的“伤口愈合”。单独的柚皮苷处理与乙酸锌处理、柚皮苷和乙酸锌的组合处理、单独的媒剂处理以及培养基处理没有显著不同。比较培养基与单独的媒剂显示在媒剂处理孔中生长受到抑制(可能由于存在DMSO)。令人惊讶的是，用产品5处理的细胞能够比单独或组合的个体组分恢复得多。用0.20mM产品5观察到类似的结果(数据未示出)。

虽然本发明已参照实施例进行描述，但所属领域的技术人员应理解，可在不脱离本发明范围的情况下在其中进行各种修改和变化。

Claims (20)

1.一种柚皮苷：Zn复合物，其中所述柚皮苷：Zn复合物具有2∶1柚皮苷与锌的摩尔比。

2.根据权利要求1所述的柚皮苷：Zn复合物，其中所述复合物具有高于230℃的熔点。

3.根据权利要求1或2所述的柚皮苷：Zn复合物，其中所述柚皮苷：Zn复合物具有在25℃下于DMSO溶液中在2.8e-11与3.2e-11m2/s之间的扩散系数。

4.一种口腔护理组合物，其包含根据权利要求1、2或3所述的柚皮苷：锌复合物。

5.根据权利要求4所述的口腔护理组合物，其中所述口腔护理组合物可为选自由以下组成的群组的以下各者中的任一种：牙膏或洁齿剂、漱口水或漱口液、局部用口腔凝胶和义齿清洁剂。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中所述组合物进一步包含一种或多种选自以下的试剂：稀释剂、碳酸氢盐、pH调节剂、表面活性剂、泡沫调节剂、额外增稠剂、保湿剂、甜味剂、调味剂、颜料、抗菌剂、防龋剂、氟离子源、防牙结石或牙垢控制剂以及其混合物。

7.一种改善口腔健康的方法，其包含将有效量的上文所阐述的根据前述权利要求中任一项所述的口腔组合物施用于有需要的受试者的口腔。

8.根据权利要求7所述的方法，其中改善口腔健康可选自以下中的一种或多种：

a.减少或抑制龋齿形成；

b.减少、修复或抑制早期牙釉质损伤；

c.减少或抑制脱矿化并且促进牙齿的再矿化；

d.减轻所述牙齿的过敏反应；

e.减轻或抑制齿龈炎；

f.促进嘴中溃疡或割口的愈合；

g.降低产酸细菌的含量；

h.提高分解精氨酸的细菌的相对含量；

i.抑制所述口腔中的微生物生物膜形成；

j.在糖挑战之后，将牙菌斑的pH值升高和/或维持在至少pH5.5的水平；

k.减少牙菌斑积聚；

l.治疗、缓解或减轻口干；

m.美白牙齿；

n.增强全身健康，包括心血管健康；

o.减少所述牙齿的腐蚀；

p.使所述牙齿对致龋细菌及其作用免疫；

q.清洁所述牙齿和口腔；

r.减少炎症；和

s.提高抗氧化剂水平。

9.一种制备具有2∶1柚皮苷与锌的摩尔比的柚皮苷∶Zn复合物的方法。

10.根据权利要求9所述的方法，其中所述复合物使用在7-10之间的pH值制备。

11.根据权利要求9或10所述的方法，其中在65-85℃之间的温度下进行柚皮苷与锌的混合。

12.根据权利要求9所述的方法，其中所述复合物的制备包含以下步骤：

a.将柚皮苷混合于甲醇中；

b.添加锌源；

c.将溶液的pH值调节到10.0；

d.温育反应；和

e.任选地分离所述复合物。

13.根据权利要求9所述的方法，其中所述复合物的制备包含以下步骤：

a.将柚皮苷混合于水中；

b.将混合物加热到70℃；

c.添加锌源；

d.将溶液的pH值调节到10.0；

e.温育反应；和

f.任选地分离所述复合物。

14.根据权利要求9所述的方法，其中所述复合物的制备包含以下步骤：

a.将柚皮苷混合于水中；

b.将混合物加热到70℃；

c.将溶液的pH值调节到10.0；

d.添加锌源；和

e.任选地分离所述复合物。

15.根据权利要求9所述的方法，其中所述复合物的制备包含以下步骤：

a.将柚皮苷混合于水中；

b.将混合物加热到70℃；

c.添加锌源；

d.将溶液的pH值调节到7.0；和

e.任选地分离所述复合物。

16.根据权利要求9所述的方法，其中所述复合物的制备包含以下步骤：

a.在70℃下将柚皮苷混合于丙二醇中；

b.将溶液的pH值调节到9.0-10.0之间；

c.在70℃下添加于丙二醇中的锌源；和

d.任选地分离所述复合物。

17.根据权利要求12至16中任一项所述的方法，其中所述Zn源选自乙酸锌、氧化锌、氯化锌、乳酸锌、柠檬酸锌或硝酸锌。

18.根据权利要求17所述的方法，其中所述Zn源为乙酸锌。

19.根据权利要求9所述的方法，其中ZnO用作所述反应的Zn源。

20.根据权利要求19所述的方法，所述方法包含以下步骤：

a.将柚皮苷和ZnO混合于水中；

b.加热混合物；

c.温育所述混合物；和

d.任选地分离所述复合物。