CN109851602B - 14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯及其15位取代衍生物 - Google Patents

Abstract

本发明属于医药技术领域，公开了14‑脱氧‑11,12‑脱氢‑8,12‑环氧‑穿心莲内酯及其衍生物在制备预防和治疗各类具有纤维化病理过程疾病药物中的应用，涉及14‑脱氧‑11,12‑脱氢‑8,12‑环氧‑穿心莲内酯及其15‑位取代衍生物。经实验证明，该类化合物显著抑制肝星状细胞的迁移活化；显著抑制TGF‑β1诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549间充质转化；显著抑制TGF‑β1诱导的人肾皮质近曲小管上皮细胞HK‑2间充质转化；抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的原代人心肌成纤维细胞HCFB的迁移。在小鼠总胆管结扎模型、二氧化硅致小鼠肺纤维化模型和小鼠单侧输尿管结扎模型上，本研究化合物均表现出良好的体内抗纤维化活性。将该类化合物作为活性成份用于制备抗纤维化药物，高效低毒，具有开发成抗多种纤维化药物的良好前景。

Description

14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯及其15位取代衍生物

技术领域

本发明涉及14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯衍生物及其作为抗纤维化药物的应用，具体涉及14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯及其15位取代衍生物，属医药技术领域。

背景技术

组织纤维化是一种慢性疾病，多发于肝、肺、心脏、肾脏等部位。全球有1/3的人死于组织纤维化以及由此产生的器官衰竭。当组织受到损伤后，损伤部位发生一系列细胞反应，导致细胞外基质过度沉积，发生组织纤维化，进而最终可导致器官功能障碍，甚至死亡。心血管组织纤维化在高血压和心力衰竭引起的心血管组织重构中发挥了重要作用，同时也是引起动脉粥样硬化的主要原因。心肌纤维化的特征是细胞外基质蛋白在细胞间质中堆积，并引起心脏收缩和舒张功能障碍。心肌纤维化是失代偿性心肌肥厚和心力衰竭的重要标志，参与高血压、肥厚性心肌病、心力衰竭和心肌梗塞引起的心肌重构等。

肝脏纤维化是肝脏对慢性损伤的一种修复反应，是多种慢性肝病共有的病理改变。慢性肝病和肝硬化是一个重大的全球性健康问题，肝纤维化的发病率约为千分之一。临床上酒精肝、脂肪肝、病毒性肝炎、自身免疫性疾病和代谢紊乱等都可引发肝纤维化。肝脏纤维化会导致肝组织结构和功能发生改变，当细胞外基质发生长时间的持续性累积，纤维增生形成网状间隔阻碍了肝细胞与血液之间正常的物质与能量交换，大量肝细胞出现坏死，形成肝硬化(Liver cirrhosis，LC)。据世界卫生组织的定义，LC指弥漫性肝脏纤维化并伴有异常结节增生，最终引发肝衰竭和肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)。临床研究认为HF是一种可逆性的病变，而LC和HCC则是不可逆的高死亡率病变。

近年来肺纤维化发病率和致死率呈不断上升趋势。肺纤维化是许多肺部疾病发展、演变、疤痕化的最终结局，其病因多种多样。许多慢性肺疾病，包括哮喘、支气管扩张、慢阻肺、肺结核、肺癌、间质性肺病等，都伴有纤维化病理改变。其主要病理特点包括肺组织间充质细胞增殖、细胞外基质增生沉积及肺实质的重构等。对于特发性肺纤维化、呼吸窘迫综合征、嗜酸性肉芽肿等多种肺疾病而言，肺组织纤维增生和纤维化程度决定了该疾病的临床后果。这些疾病发展到晚期，严重影响病人正常工作和生活质量，甚至导致病人因呼吸衰竭或心力衰竭而死亡。在过去的20年间，特发性肺纤维化发病率总体呈现明显增长的趋势，诊断后平均存活时间约3年，5年生存率30％～50％，愈后极差。

肾纤维化表现为细胞外基质和不适当结缔组织在肾脏聚集，导致肾结构改变和功能受损的病理过程，也是几乎所有肾脏疾病进展到终末期肾衰的共同通路。许多急慢性肾脏疾病也都与组织纤维化发生发展密切相关，特别是糖尿病肾病和高血压引起的肾纤维化改变。多种免疫和自身免疫疾病例如关节炎、全身硬化症和系统性红斑狼疮也有组织纤维化的改变。

目前纤维化疾病的治疗药物非常少，大多仅起到辅助治疗作用，在肝纤维化方面，干扰素的治愈率不高，副作用较多，导致后期治疗效果不显著。采用核苷类药物长期抗病毒治疗易产生耐药性。使用抗炎、抗氧化的细胞保护类药物如水飞蓟素、马洛替酯等，不能从根本上解决问题。在肺纤维化方面糖皮质激素和免疫抑制药物等虽能改善肺纤维化的症状，延缓疾病发展，但具有强烈的副作用。美国FDA批准的药物只有Esbriet(pirfenidone,吡非尼酮)和尼达尼布(Nintedanib)，但这两种药物目前患者获益并不理想。

由于引起上述各种组织器官纤维增生性疾病的病因众多，发病机制复杂，病程迁延数年至几十年不等，因此目前组织纤维化的确切发病机制尚未完全阐明，也没有公认的真正能够逆转组织纤维化的药物。中草药和天然产物用于疾病治疗具有多靶点和综合作用机制的特点，因此，将其应用于抗纤维化药物的开发具有一定的优势与特色。

穿心莲内酯是穿心莲Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees中提取的二萜内酯类化合物，是中药穿心莲的主要有效成份之一。临床上主要用于治疗上呼吸道感染、细菌性痢疾等。近年来，穿心莲内酯在抗肿瘤、保肝利胆、抗病毒等方面的应用研究不断深入。宁光在专利CN201010266185.2中公开了一种穿心莲内酯作为制备治疗急性肝损伤药物的应用，穿心莲内酯可以显著抑制刀豆素A诱发的肝损伤，抑制刀豆素A引起的肝细胞的凋亡，抑制肝脏的炎症反应，可以用来治疗刀豆素A诱发的肝损伤。目前穿心莲内酯及其衍生物已经被成功合成了许多抗肿瘤(CN201410263842.6、CN201510718226.X、CN201310617805.6、CN201010516322.3)、抗病毒(CN201410010214.7、CN201010177952.2、CN201410034947.4、CN201310144902.8、CN200710029644.3)等应用潜力的药物。相关研究日益增多。万君等[The J Pract Med,2014：(14):2204-2207]证明穿心莲内酯可通过抑制脂质过氧化反应，降低组织中氧自由基的生成对四氯化碳急性肝损伤发挥保护作用，其机制可能与抑制TNF-α的表达，诱导HO-1表达有关。Tanaporn K.[Eur J Pharmacol,2016；789:64-254]等研究证明了穿心莲内酯对α-异硫氰酸萘酯(ANIT)诱导的急性肝内胆汁淤积症模型大鼠的保护作用，可能的机制是下调NF-κB和抑制肝星状细胞活化。穿心莲内酯可通过抑制肾氧化应激、炎症和纤维化来控制糖尿病肾病的发展。李旎等[Clin J Tradit Chin Med,2017；45(4):350-354]验证了穿心莲内酯经PI3K/AKT和ERK上调抗氧化蛋白GST、GPx和GR的表达而发挥对乙醇毒性的保护作用。黄成亮等[Lishizhen Med Mater Med Res,2012；23(4):904-907]研究穿心莲内酯减轻博来霉素致肺纤维化大鼠肺泡炎，降低肺组织羟脯氨酸含量和减少肺组织中血小板衍生因子(PDGF)的表达,从而减轻纤维化程度,且对肝肾无明显毒副作用；林海涵[Shandong Med J,2011；51(4):40-41]证明穿心莲内酯(AP)可以通过对糖尿病大鼠肾脏组织谷胱甘肽过氧化物酶(GSH；Px)的影响，降低糖尿病导致的肾脏高氧化应激状态，降低糖尿病引起的肾脏损害，可能提高长期存活率。钟富有等[Lishizhen Med Mater MedRes,2010：21(1):226-227]发现穿心莲内酯对异丙肾上腺素(ISO)所致大鼠心肌肥厚具有保护作用,其作用机制与提高大鼠的抗氧化能力有关。

本发明人在前期研究中(CN200510107247.4、CN200710053807.1、CN200710053806.7、CN200610017357.6)获得了大量结构新颖的穿心莲内酯衍生物，并对部分衍生物在抗肿瘤、抗炎、抗HBV、HCV及急性肝损伤保护作用等方面的应用申请了专利保护，在此基础上进一步合成了异穿心莲内酯及其15位取代衍生物并对其进行了活性试验研究，目前未见相关报道。

发明内容

本发明人在前期研究成果的基础上，通过对合成的化合物进行抗纤维化活性筛选，发现14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯和结构如通式1所示的14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯15位取代衍生物具有显著的预防和治疗纤维化相关疾病的作用，高效低毒，具有开发为抗纤维化药物的潜力。为此，本发明目的在于提供14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯及其15位取代衍生物；另一目的在于提供其在制备抗纤维化药物中的应用。

为实现本发明目的，所述14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯及其15位取代衍生物分子结构如下图所示：

其中：R₁、R₂分别为氢、甲基或苯基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基等芳香环、杂芳香环和它们的单取代、多取代物中的一种；R₁、R₂还可以分别为C3-6环烷基或C2-5烷基与氮原子组成的环胺基，比如环己基、环戊基；R₁、R₂可以同时是相同的取代基团或不同的取代基团。R₃、R₄分别为氢或CH₂CH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂COOH、CH₂CHCHCH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂COOH等中的一种或COR₅，R₅为取代或未取代的苯基，吡啶基、吡咯基、呋喃基等芳香杂环或环己基、环戊基、环丙基、吗啉基、哌啶基等碳环或杂环结构以及饱和或不饱和的C1-18长度的碳链等。R₃、R₄可以同时是相同的取代基团或者不同的取代基团。

优选如下化合物：R₁，R₂各自为氢、甲基或苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、3，4，5-三甲氧基苯基、2-羟基苯基、3-羟基苯基、4-羟基苯基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、3-氟苯基、3-氯苯基、3-溴苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、2-氟-3-甲氧基苯基、3-甲氧基-4-氯苯基、2，4-二氟苯基、2，4-二氯苯基、2，4-二溴苯基、2-氟-4-氯苯基、2-溴-4-氯苯基、3-氟-4-氯苯基、3-溴-4-氯苯基、3，4-二氟苯基、3，4-二氯苯基、3，4二溴苯基、2-氯-4-氟苯基、2-溴-4-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、3-溴-4-氟苯基、2-氟-4-溴苯基、2-氯-4-溴苯基、3-氟-4-溴苯基、3-氯-4-溴苯基、2，3，4-三氯苯基、2-甲氧基-4-氯苯基、2-羟基-4-氯苯基、2-羟基-4-甲氧基苯基、3-氟-4-(4-甲基哌嗪基)苯基、4-(N,N-二甲胺基)苯基、3-氟-4-(4-吗啉基)苯基；R₁，R₂同时相同或不同；R₃、R₄各自为氢；或R₃、R₄分别为CH₂CH₂COOH或CH₂CH₂CH₂CH₂COOH、CH₂CHCHCH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂COOH中的一种，或R₃、R₄各自为COR₅；R₅为3-吡啶基或CH₂CH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂COOH、CH₂CHCHCH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂COOH中的一种；R₃、R₄同时选相同或不同的取代基团。

更优选：R₁，R₂各自为氢或苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、3，4，5-三甲氧基苯基、2-羟基苯基、3-羟基苯基、4-羟基苯基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、3-氟苯基、3-氯苯基、3-溴苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、2-氟-3-甲氧基苯基、3-甲氧基-4-氯苯基、2，4-二氟苯基、2，4-二氯苯基、2，4-二溴苯基、2-氟-4-氯苯基、2-溴-4-氯苯基、3-氟-4-氯苯基、3-溴-4-氯苯基、3，4-二氟苯基、3，4-二氯苯基、3，4二溴苯基、2-氯-4-氟苯基、2-溴-4-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、3-溴-4-氟苯基、2-氟-4-溴苯基、2-氯-4-溴苯基、3-氟-4-溴苯基、3-氯-4-溴苯基、2，3，4-三氯苯基、2-甲氧基-4-氯苯基、2-羟基-4-氯苯基、2-羟基-4-甲氧基苯基、3-氟-4-(4-甲基哌嗪基)苯基、4-(N,N-二甲胺基)苯基、3-氟-4-(4-吗啉基)苯基；但R₁，R₂不同；R₃、R₄各自为氢；或R₃、R₄分别为CH₂CH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂COOH、CH₂CHCHCH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂COOH中的一种，或R₃、R₄各自为COR₅，R₅为3-吡啶基或CH₂CH₂COOH，R₃、R₄选相同取代基团。

更优选：当R₁，R₂其中之一为氢时，R₁，R₂其中之一选如下基团：苯基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、3-氟苯基、3-氯苯基、3-溴苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、2-氟-3-甲氧基苯基、3-甲氧基-4-氯苯基、2，4-二氟苯基、2，4-二氯苯基、2，4-二溴苯基、2-氟-4-氯苯基、2-溴-4-氯苯基、3-氟-4-氯苯基、3-溴-4-氯苯基、3，4-二氟苯基、3，4-二氯苯基、3，4二溴苯基、2-氯-4-氟苯基、2-溴-4-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、3-溴-4-氟苯基、2-氟-4-溴苯基、2-氯-4-溴苯基、3-氟-4-溴苯基、3-氯-4-溴苯基、2-甲氧基-4-氯苯基、4-羟基苯基、3，4，5-三甲氧基苯基、3-氟-4-(4-甲基哌嗪基)苯基、3-氟-4-(4-吗啉基)苯基；R₃、R₄各自为氢；或R₃、R₄分别为CH₂CH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂COOH、CH₂CHCHCH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂COOH中的一种，或R₃、R₄各自为COR₅，R₅为3-吡啶基或CH₂CH₂COOH，R₃、R₄选相同取代基团。

更优选化合物为：

ADY：14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯；

ADY-1：R₁＝H，R₂＝4-Cl-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-2：R₁＝H，R₂＝4-Br-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-3：R₁＝H，R₂＝4-F-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-4：R₁＝H，R₂＝2-Cl-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-5：R₁＝H，R₂＝C₆H₅，R₃＝R₄＝H；

ADY-6：R₁＝H，R₂＝3,4-二氟苯基，R₃＝R₄＝H；

ADY-7：R₁＝H，R₂＝3-CH₃O-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-8：R₁＝H，R₂＝4-OH-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-9：R₁＝H，R₂＝3,4,5-三甲氧基苯基，R₃＝R₄＝H；

ADY-10：R₁＝H，R₂＝3-Cl-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-11：R₁＝H，R₂＝3-F-4-[N,-甲基哌啶]-C₆H₃，R₃＝R₄＝H；

ADY-12：R₁＝H，R₂＝4-CH₃O-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-13：R₁＝H，R₂＝3-F-4-吗啉-C₆H₃，R₃＝R₄＝H。

ADY-14：R₁＝H，R₂＝4-[N-(CH₃)₂]-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-15:R₁＝H，R₂＝3,4-二氟苯基，R₃＝R₄＝COR₅，R₅＝3-吡啶基

ADY-16:R₁＝H，R₂＝C₆H₅,R₃＝R₄＝COR₅，R₅＝3-吡啶基；

ADY-17：R₁＝H，R₂＝4-Cl-C₆H₄，R₃＝R₄＝COR₅，R₅＝CH₂CH₂COOH

以上本发明化合物合成方法参见文献(异穿心莲内酯类似物及其制备方法.发明专利：ZL 200710053807.1)。

结构表征的数据如下：

ADY-1：mp 197-199℃；IR 3415,2931,1762,1650,1587,1491,1091,1041,1021,921cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.69(d,J＝8.6Hz,2H),7.36(d,J＝8.6Hz,2H),7.28(d,J＝1.7Hz,1H),5.93(s,1H),4.83(t,J＝8.4Hz,1H),4.28(d,J＝10.6Hz,1H),3.48(d,J＝11.3Hz,1H),3.43–3.34(m,1H),3.02(d,J＝8.0Hz,1H),2.85(d,J＝3.5Hz,1H),2.48(dd,J＝13.8,8.1Hz,1H),2.23(m,1H),2.15–2.05(m,1H),1.89–1.72(m,3H),1.58–1.43(m,4H),1.28(s,3H),1.13(s,3H),1.09–0.99(m,2H),0.97(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ168.75,147.62,137.25,137.14,134.85,131.61,131.57(2C),129.05(2C),111.76,82.93,80.89,72.85,64.22,57.92,52.75,42.56,38.99,36.26,35.66,33.26,31.45,27.48,22.78,18.18,16.45.

ADY-2：mp 189-190℃；IR 3343,2922,2872,1754,1644,1581,1486,1451,1039,1019,920cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.53(d,J＝8.6Hz,2H),7.42(d,J＝8.5Hz,2H),7.19(d,J＝1.6Hz,1H),5.83(s,1H),4.73(t,J＝8.5Hz,1H),4.19(d,J＝11.0Hz,1H),3.38(d,J＝10.4Hz,1H),3.34–3.25(m,1H),2.39(dd,J＝13.8,8.1Hz,1H),2.14(m,1H),2.06–1.99(m,1H),1.74–1.59(m,3H),1.50–1.32(m,4H),1.19(s,3H),1.04(s,3H),1.00–0.90(m,2H),0.88(s,3H)；¹³C NMR(100 MHz,CDCl₃)δ168.74,147.72,137.32,137.16,132.01(3C),131.78(2C),123.25,111.83,82.94,80.83,72.84,64.22,57.91,52.73,42.51,38.99,36.25,35.65,33.24,31.45,27.44,22.80,18.18,16.45.

ADY-3：mp 180-182℃；IR 3403,2931,1765,1654,1599,1508,1451,1365,1236,1041,1019,921cm^-1；¹H NMR(400 MHz,CDCl₃)δ7.66(dd,J＝7.5,5.6Hz,2H),7.20(s,1H),6.98(dd,J＝12.4,4.8Hz,2H),5.87(s,1H),4.74(t,J＝8.5Hz,1H),4.19(d,J＝8.6Hz,1H),3.44–3.33(m,2H),2.38(dd,J＝13.7,8.1Hz,1H),2.17–2.11(m,1H),2.04–2.00(m,1H),1.74–1.60(m,3H),1.53–1.40(m,4H),1.18(s,3H),1.05(s,3H),0.95(m,2H),0.88(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ168.92,162.85(d,J＝250Hz),146.99(d,J＝2Hz),137.23,136.79,132.38,132.29,129.39(d,J＝3Hz),116.07,115.85,111.91,82.90,80.90,72.84,64.21,57.94,52.76,42.57,39.00,36.26,35.66,33.27,31.45,27.48,22.77,18.18,16.45.ADY-4：mp 248-249℃；IR 3374,2967,2931,1764,1644,1611,1469,1363,1036,1015,922,755,693cm^-1；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ8.05(d,J＝7.8Hz,1H),7.78(s,1H),7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.44(t,J＝7.6Hz,1H),7.37(t,J＝7.6Hz,1H),6.60(s,1H),5.08(d,J＝4.7Hz,1H),4.68(t,J＝8.4Hz,1H),4.12(dd,J＝7.7,2.5Hz,1H),3.93(dd,J＝10.9,2.5Hz,1H),3.31–3.15(m,2H),2.31–2.21(m,1H),2.15–2.03(m,2H),1.71–1.59(m,2H),1.54(m,2H),1.49–1.35(m,3H),1.10(s,3H),1.08(s,3H),1.03–0.90(m,2H),0.89(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO)δ168.70,149.33,138.58,137.55,133.53,131.73,131.25,130.65,130.28,128.13,107.46,82.85,79.36,72.29,63.32,57.77,52.27,42.39,39.06,36.44,35.65,32.81,31.44,27.63,23.65,18.64,16.43.

ADY-5：mp 242-243℃；IR 3277,2968,2932,1747,1653,1610,1451,1365,1034,1017,922,774,691cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.68(d,J＝7.3Hz,2H),7.31(t,J＝7.4Hz,2H),7.25(dd,J＝6.0,3.8Hz,1H),7.21(d,J＝1.7Hz,1H),5.90(s,1H),4.76(t,J＝8.5Hz,1H),4.20(d,J＝11.1Hz,1H),3.40(d,J＝11.1Hz,1H),3.34–3.26(m,1H),2.83(d,J＝8.0Hz,1H),2.59(s,1H),2.40(dd,J＝13.8,8.1Hz,1H),2.16(m,1H),2.03(m,1H),1.73–1.59(m,3H),1.54–1.38(m,4H),1.20(s,3H),1.06(s,3H),1.01–0.91(m,2H),0.89(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ169.03,147.37,137.32,136.84,133.10,130.47(2C),129.00,128.81(2C),113.22,82.88,80.94,72.87,64.22,57.95,52.78,42.60,39.00,36.28,35.67,33.29,31.46,27.50,22.76,18.19,16.45.

ADY-6：mp 185-186℃；IR 3374,2927,1762,1654,1602,1517,1431,1302,1277,1039,1019,917cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.59(ddd,J＝11.3,7.8,1.8Hz,1H),7.37–7.30(m,1H),7.19(d,J＝1.5Hz,1H),7.08(dd,J＝18.3,8.5Hz,1H),5.81(s,1H),4.74(t,J＝8.5Hz,1H),4.19(d,J＝10.9Hz,1H),3.38(d,J＝9.8Hz,1H),3.33–3.25(m,1H),2.39(dd,J＝13.7,8.1Hz,1H),2.19–2.10(m,1H),2.06–1.96(m,1H),1.78–1.59(m,3H),1.51–1.30(m,4H),1.19(s,3H),1.05(s,3H),1.00–0.90(m,2H),0.89(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ168.56,151.66(t,J＝12Hz),149.16(dd,J＝8,13Hz),147.67(d,J＝3Hz),137.52,137.00,130.23(dd,J＝4,7Hz),126.90(dd,J＝3,6Hz),118.84(d,J＝18Hz),117.60(d,J＝17Hz),110.70,82.98,80.81,72.81,64.22,57.89,52.71,42.49,38.98,36.23,35.65,33.23,31.43,27.42,22.80,18.17,16.44.ADY-7：mp 214-215℃；IR 3353,2933,1759,1596,1573,1463,1266,1019,928cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.24(d,J＝3.3Hz,2H),7.22(s,1H),7.20(s,1H),6.84–6.78(m,1H),5.87(s,1H),4.75(t,J＝8.5Hz,1H),4.20(d,J＝11.1Hz,1H),3.77(s,3H),3.40(dd,J＝11.6,3.9Hz,1H),3.30(d,J＝11.0Hz,1H),2.84(s,1H),2.60(s,1H),2.40(dd,J＝13.8,8.1Hz,1H),2.15(dd,J＝11.2,3.6Hz,1H),2.08–1.99(m,1H),1.72–1.61(m,3H),1.51–1.36(m,4H),1.20(s,3H),1.05(s,3H),0.95(m,2H),0.89(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ168.89,159.75,147.51,137.30,136.96,134.33,129.73,123.20,115.26,115.07,113.09,82.88,80.94,72.87,64.22,57.94,55.35,52.77,42.59,39.00,36.28,35.67,33.28,31.46,27.49,22.76,18.19,16.45.

ADY-8：mp 224-226℃；IR 3380,2933,1727,1597,1458,1264,1021,921cm^-1；¹HNMR(400MHz,DMSO)δ10.16(s,1H),7.88(dd,J＝7.8,1.4Hz,1H),7.70(d,J＝1.3Hz,1H),7.17(m,1H),6.90(d,J＝3.2Hz,1H),6.88(d,J＝2.6Hz,1H),6.59(s,1H),5.10(d,J＝4.7Hz,1H),4.66(t,J＝8.2Hz,1H),4.13(dd,J＝7.7,2.6Hz,1H),3.94(dd,J＝10.9,2.5Hz,1H),3.28–3.20(m,2H),2.25(dd,J＝13.5,8.0Hz,1H),2.15–2.02(m,2H),1.65(dd,J＝14.8,6.5Hz,2H),1.53(d,J＝7.5Hz,2H),1.43(m,3H),1.10(s,3H),1.07(s,3H),0.93(m,2H),0.89(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO)δ169.20,156.47,147.14,139.03,135.35,130.83,120.56,120.00,116.01,110.32,107.45,82.74,79.37,72.19,63.32,57.86,52.25,42.38,39.08,36.43,35.65,32.89,31.40,27.63,23.64,18.64,16.46.

ADY-9：mp 225-226℃；IR 3416,2940,1762,1578,1504,1247,1126,1086,1018,921cm^-1；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ7.05(s,1H),6.81(s,1H),6.75(s,2H),5.08(d,J＝4.7Hz,1H),4.69(t,J＝8.4Hz,1H),4.12(dd,J＝7.6,2.7Hz,1H),3.93(dd,J＝11.0,2.6Hz,1H),3.81(s,9H),3.28–3.21(m,2H),2.25-2.16(m,2H),2.09–2.04(m,1H),1.69-1.63(m,2H),1.56-1.53(m,2H),1.50-1.43(m,3H),1.10(s,3H),1.08(s,3H),1.01-0.92(m,2H),0.90(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO)δ168.02,153.57(2C),153.40,148.48,139.88,133.26,128.86,115.25,107.06(2C),82.91,79.35,72.27,63.32,60.64,60.59,57.78,56.33,52.20,42.37,42.32,39.06,36.36,35.66,32.66,31.39,27.59,23.62,18.60,16.45.ADY-10：mp229-230℃；IR 3347,2908,1768,1476,1036,1017,924cm^-1；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ7.76(s,1H),7.65(d,J＝7.7Hz,1H),7.60(s,1H),7.47(t,J＝7.8Hz,1H),7.41(d,J＝8.1Hz,1H),6.32(s,1H),5.09(d,J＝4.7Hz,1H),4.67(t,J＝8.4Hz,1H),4.12(dd,J＝7.7,2.6Hz,1H),3.93(dd,J＝10.9,2.5Hz,1H),3.31–3.18(m,2H),2.26(dd,J＝13.5,8.1Hz,1H),2.17–2.03(m,2H),1.64(dd,J＝15.2,6.7Hz,2H),1.54(t,J＝7.4Hz,2H),1.44(dd,J＝12.0,5.8Hz,3H),1.10(s,3H),1.06(s,3H),0.95(dd,J＝17.4,6.6Hz,2H),0.89(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO)δ168.59,148.66,138.20,137.40,135.69,134.00,131.24,129.56,129.05,128.90,110.99,82.84,79.36,72.29,63.32,57.76,52.25,42.39,39.06,36.42,35.65,32.76,31.40,27.63,23.65,18.63,16.43.

ADY-11：mp 219-221℃；IR 3425,2933,1756,1599,1511,1252,1142,1022,923cm^-1；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ7.56(s,1H),7.49(dd,J＝14.9,1.4Hz,1H),7.41(d,J＝8.6Hz,1H),7.04(t,J＝9.0Hz,1H),6.24(s,1H),5.09(d,J＝4.7Hz,1H),4.65(t,J＝8.3Hz,1H),4.12(d,J＝5.7Hz,1H),3.98–3.89(m,1H),3.30–3.19(m,2H),3.12-3.06(m,4H),2.49-2.42(m,4H),2.29–2.23(m,1H),2.22(s,3H),2.14–2.02(m,2H),1.70–1.57(m,2H),1.54(dd,J＝11.3,5.8Hz,2H),1.49–1.35(m,3H),1.10(s,3H),1.05(s,3H),1.01–0.90(m,2H),0.88(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO)δ168.81,154.55(d,J＝242Hz),146.87,140.58(d,J＝8Hz),138.28,135.63,127.74,127.17(d,J＝9Hz),119.49(d,J＝4Hz),117.31(d,J＝22Hz),111.98,82.74,79.36,72.25,63.32,57.83,54.96,52.24,49.95,49.91,49.06,46.21,42.38,39.08,36.41,35.64,32.85,31.42,27.63,23.64,18.63,16.45.

ADY-12：mp 215-216℃；IR 3329,2939,1749,1598,1511,1463,1303,1255,1175,1020,921cm^-1；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ7.68(d,J＝8.8Hz,2H),7.57(s,1H),7.01(d,J＝8.8Hz,2H),6.27(s,1H),5.08(d,J＝4.7Hz,1H),4.66(t,J＝8.3Hz,1H),4.12(dd,J＝7.6,2.4Hz,1H),3.93(dd,J＝10.9,2.4Hz,1H),3.80(s,3H),3.24(ddd,J＝15.7,10.6,6.3Hz,2H),2.25(dd,J＝13.5,8.0Hz,1H),2.15–2.01(m,2H),1.64(dd,J＝14.4,6.2Hz,2H),1.55(dd,J＝16.5,9.0Hz,2H),1.41(dd,J＝29.2,5.2Hz,3H),1.10(s,3H),1.06(s,3H),1.02–0.90(m,2H),0.89(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,DMSO)δ169.05,160.23,146.24,138.53,135.16,132.25(2C),126.26,115.01(2C),112.99,82.72,79.36,72.24,63.31,57.85,55.73,52.23,42.38,39.09,36.42,35.65,32.89,31.44,27.63,23.64,18.64,16.46.

ADY-13：mp 213-214℃；IR 3372,2943,1750,1598,1513,1446,1252,1123,1020,923cm^-1；¹H NMR(400MHz,DMSO)δ7.56(d,J＝1.2Hz,1H),7.50(dd,J＝14.8,1.5Hz,1H),7.43(dd,J＝8.5,1.4Hz,1H),7.06(t,J＝9.0Hz,1H),6.25(s,1H),5.09(d,J＝4.7Hz,1H),4.65(t,J＝8.2Hz,1H),4.13(dd,J＝7.6,2.5Hz,1H),3.93(dd,J＝11.0,2.5Hz,1H),3.77–3.71(m,4H),3.30–3.19(m,2H),3.12–3.06(m,4H),2.24(dd,J＝13.4,8.0Hz,1H),2.14–2.01(m,2H),1.68–1.60(m,2H),1.56–1.50(m,2H),1.49–1.39(m,3H),1.10(s,3H),1.05(s,3H),0.99–0.90(m,2H),0.88(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ168.39,154.19(d,J＝243Hz),146.56,140.01(d,J＝8Hz),137.87,135.32,127.35,127.08(d,J＝9Hz),118.92(d,J＝3Hz),116.95(d,J＝22Hz),111.44,82.35,78.95,71.82,66.06(2C),62.90,57.41,51.81,50.04,50.00,41.96,38.66,35.97,35.22,32.42,30.99,27.19,23.21,18.20,16.02.。

为研究本发明所述化合物在制备抗纤维化药物中的应用效果，本发明利用人肝星状细胞LX-2，测定本发明化合物对细胞迁移和活化的抑制活性，评价化合物的体外抗肝纤维化活性；采用人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549评价本发明化合物对TGF-β1诱导的A549细胞间充质转化的抑制活性，评价化合物的体外抗肺纤维化活性；利用人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2评价本发明化合物对TGF-β1诱导的HK-2细胞间充质转化的抑制活性，评价化合物的体外抗肾纤维化活性；利用原代人心肌成纤维细胞HCFB评价本发明化合物对AngⅡ诱导的HCFB细胞迁移的抑制活性，评价化合物的体外抗心肌纤维化活性。进一步，分别采用小鼠总胆管结扎模型、二氧化硅致小鼠肺纤维化模型和小鼠单侧输尿管结扎模型研究本发明化合物的体内抗纤维化活性。

该类化合物的顺、反结构均具有抗人体器官(组织)纤维化活性，以该类化合物为有效药用成份，或该类化合物的各类前药形式，单独或与其它药物组合，按目前各种常规的制药方法和工艺要求，与制药中可以接受的辅助和/或添加成份混合后，制成用于抗纤维化的口服型制剂、注射型制剂等各类药物剂型。优选将其制备治疗或预防肝、肺、肾、心脏等各类器官或组织纤维化疾病的药物。口服型制剂为片剂、丸剂、胶囊、冲剂或糖浆等；注射型制剂包括注射液或冻干粉针剂型等。

本发明优点及创新点：通过活性筛选，确定上述化合物具有明确的抗器官和组织纤维化活性。经实验证明，与母体化合物穿心莲内酯(AD)相比，本发明化合物的活性显著提高。因此，将该类化合物作为活性成份用于制备抗各种纤维化药物，为纤维化相关疾病的治疗和预防提供了新的药物途径，从而扩大了临床用药的可选择范围，具有良好的应用开发前景。

附图说明

图1为AD和本发明代表的化合物(30.00μM)对人肝星状细胞LX-2活力的影响，图中：1.AD；2.ADY；3.ADY-1；4.ADY-2；5.ADY-3；6.ADY-4；7.ADY-5；8.ADY-6；9.ADY-7；10.ADY-8；11.ADY-9；12.ADY-10；13.ADY-11；14.ADY-12；15.ADY-13；16.ADY-14；17.ADY-15；18.ADY-16；19.ADY-17；

图2为AD和本发明代表的化合物抑制人肝星状细胞LX-2迁移的结果(统计结果)，化合物浓度为1.00μM和5.00μM，图中：1.AD；2.ADY；3.ADY-1；4.ADY-2；5.ADY-3；6.ADY-4；7.ADY-5；8.ADY-6；9.ADY-7；10.ADY-8；11.ADY-9；12.ADY-10；13.ADY-11；14.ADY-12；15.ADY-13；16.ADY-14；17.ADY-15；18.ADY-16；19.ADY-17；

图3为AD和本发明代表的化合物对人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549活力的影响，ADY-10和ADY-11度为3.00μM,其余为30.00μM，图中：1.AD；2.ADY；3.ADY-1；4.ADY-2；5.ADY-3；6.ADY-4；7.ADY-5；8.ADY-6；9.ADY-7；10.ADY-8；11.ADY-9；12.ADY-10；13.ADY-11；14.ADY-12；15.ADY-13；16.ADY-14；17.ADY-15；18.ADY-16；19.ADY-17；

图4为AD和本发明代表的化合物抑制TGF-β1诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549间充质转化作用(统计结果)，化合物AD的低、高浓度分别为

1.25μM和2.50μM，ADY-8的低、高浓度分别为0.63μM和1.25μM，其余化合

物的低、高浓度分别为0.31μM和0.63μM；图中：1.对照；2.TGF-β1(5ng/mL)；3.TGF-β1+AD；4.TGF-β1+ADY；5.TGF-β1+ADY-1；6.TGF-β1+ADY-2；7.TGF-β1+ADY-3；8.TGF-β1+ADY-4；9.TGF-β1+ADY-5；10.TGF-β1+ADY-6；11.TGF-β1+ADY-7；12.TGF-β1+ADY-8；13.TGF-β1+ADY-9；14.TGF-β1+ADY-10；15.TGF-β1+ADY-11；16.TGF-β1+ADY-12；17.TGF-β1+ADY-13；18.TGF-β1+ADY-14；19.TGF-β1+ADY-15；20.TGF-β1+ADY-16；21.TGF-β1+ADY-17；

图5为AD和本发明代表的化合物抑制TGF-β1诱导的人肺泡Ⅱ型上皮细胞A549迁移的结果，化合物AD的低、高浓度分别为0.31μM和0.63μM，ADY、ADY-1、ADY-2、ADY-4、ADY-6、ADY-7、ADY-8和ADY-13的低、高浓度分别为0.08μM和0.16μM，其余化合物的低、高浓度分别为0.16μM和0.31μM；图中：1.TGF-β1(5ng/mL)+AD；2.TGF-β1+ADY；3.TGF-β1+ADY-1；4.TGF-β1+ADY-2；5.TGF-β1+ADY-3；6.TGF-β1+ADY-4；7.TGF-β1+ADY-5；8.TGF-β1+ADY-6；9.TGF-β1+ADY-7；10.TGF-β1+ADY-8；11.TGF-β1+ADY-9；12.TGF-β1+ADY-10；13.TGF-β1+ADY-11；14TGF-β1+ADY-12；15.TGF-β1+ADY-13；16.TGF-β1+ADY-14；17.TGF-β1+ADY-15；18.TGF-β1+ADY-16；19.TGF-β1+ADY-17；

图6为AD和本发明代表的化合物对人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2活力的影响，当浓度为30.00μM时，ADY-2、ADY-5、ADY-6、ADY-8和ADY-11对细胞增殖的抑制作用比同样浓度的AD强；图中：1.AD；2.ADY；3.ADY-1；4.ADY-2；5.ADY-3；6.ADY-4；7.ADY-5；8.ADY-6；9.ADY-7；10.ADY-8；11.ADY-9；12.ADY-10；13.ADY-11；14.ADY-12；15.ADY-13；16.ADY-14；17.ADY-15；18.ADY-16；19.ADCY-17；图中：ADY-2、ADY-5、ADY-6和ADY-8浓度为15.00μM，ADY-11浓度为3.00μM，其余化合物浓度为30.00μM；

图7为AD和本发明代表的化合物抑制TGF-β1诱导的人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2间充质转化作用(部分显微图片；×100倍)，图中：1.正常；2.TGF-β1；3.TGF-β1+ADY-4(0.31μM)；4.TGF-β1+ADY-5(0.08μM)；5.TGF-β1+ADY-6(0.63μM)；6.TGF-β1+ADY-9(0.08μM)；7.TGF-β1+ADY-11(0.08μM)；8.TGF-β1+AD(1.25μM)。

图8为AD和本发明代表的化合物抑制TGF-β1诱导的人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2迁移作用的结果，化合物AD、ADY-11、ADY-13和ADY-15～ADY-17的低、高浓度分别为0.08μM和0.16μM，其余化合物的低、高浓度分别为0.04μM和0.08μM；图中：1.TGF-β1(5ng/mL)+AD；2.TGF-β1+ADY；3.TGF-β1+ADY-1；4.TGF-β1+ADY-2；5.TGF-β1+ADY-3；6.TGF-β1+ADY-4；7.TGF-β1+ADY-5；8.TGF-β1+ADY-6；9.TGF-β1+ADY-7；10.TGF-β1+ADY-8；11.TGF-β1+ADY-9；12.TGF-β1+ADY-10；13.TGF-β1+ADY-11；14TGF-β1+ADY-12；15.TGF-β1+ADY-13；16.TGF-β1+ADY-14；17.TGF-β1+ADY-15；18.TGF-β1+ADY-16；19.TGF-β1+ADY-17；

图9为AD和本发明代表的化合物(15.00μM)对原代人心肌成纤维细胞HCFB活力的影响，图中：1.AD；2.ADY；3.ADY-1；4.ADY-2；5.ADY-3；6.ADY-4；7.ADY-5；8.ADY-6；9.ADY-7；10.ADY-8；11.ADY-9；12.ADY-10；13.ADY-11；14.ADY-12；15.ADY-13；16.ADY-14；17.ADY-15；18.ADY-16；19.ADY-17；

图10为AD和本发明代表的化合物抑制管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的原代人心肌成纤维细胞HCFB迁移作用的结果，化合物AD、ADY的低、高浓度分别为0.31μM和0.63μM其余化合物的低、高浓度分别为0.16μM和0.31μM；图中：1.AngⅡ(10^-7mol/L)+AD；2.AngⅡ+ADY；3.AngⅡ+ADY-1；4.AngⅡ+ADY-2；5.AngⅡ+ADY-3；6.AngⅡ+ADY-4；7.AngⅡ+ADY-5；8.AngⅡ+ADY-6；9.AngⅡ+ADY-7；10.AngⅡ+ADY-8；11.AngⅡ+ADY-9；12.AngⅡ+ADY-10；13.AngⅡ+ADY-11；14.AngⅡ+ADY-12；15.AngⅡ+ADY-13；16.AngⅡ+ADY-14；

图11为AD和本发明代表的化合物显著降低肝组织胶原水平(天狼星红染色；统计结果)，图中：1.模型；2.AD(15mg/kg；ig)；3.AD(40mg/kg；ig)；4.ADY(15mg/kg；ig)；5.ADY-6(15mg/kg；ig)；6.ADY-8(15mg/kg；ig)；7.ADY-12(15mg/kg；ig)；8.ADY-7(15mg/kg；ig)；

图12为AD和本发明代表的化合物显著减轻总胆管结扎的KM小鼠肝纤维化程度(天狼星红染色；显微图片，×100倍)，图中：1.假手术；2.模型；3.AD(15mg/kg；ig)；4.ADY(15mg/kg；ig)；5.ADY-6(15mg/kg；ig)；6.ADY-8(15mg/kg；ig)；7.ADY-12(15mg/kg；ig)；8.ADY-7(15mg/kg；ig)；

图13为AD和本发明代表的化合物显著减轻二氧化硅诱导的KM小鼠肺纤维化程度(Masson染色；显微图片，×100倍)，图中：1.假手术；2.模型；3.AD(120mg/kg；ig)；4.ADY(40mg/kg；ig)；5.ADY-6(120mg/kg；ig)；6.ADY-8(120mg/kg；ig)；7.ADY-7(120mg/kg；ig)；8.ADY-4(40mg/kg；ig)；9.ADY-12(120mg/kg；ig)；

图14为AD和本发明代表的化合物显著减轻单侧输尿管结扎诱导的KM小鼠肾间质纤维化程度(HE染色；显微图片，×40倍)，图中：1、假手术；2.模型；3.AD(70mg/kg；ig)；4.ADY(70mg/kg；ig)；5.ADY-4(25mg/kg；ig)；6.ADY-6(25mg/kg；ig)；7.ADY-7(25mg/kg；ig)；8.ADY-8(25mg/kg；ig)；9.ADY-12(25mg/kg；ig)；

图15为AD和本发明代表的化合物显著减轻单侧输尿管结扎诱导的KM小鼠肾间质纤维化程度(HE染色；显微图片，×100倍)，图中：1、假手术；2.模型；3.AD(70mg/kg；ig)；4.ADY(70mg/kg；ig)；5.ADY-4(25mg/kg；ig)；6.ADY-6(25mg/kg；ig)；7.ADY-7(25mg/kg；ig)；8.ADY-8(25mg/kg；ig)；9.ADY-12(25mg/kg；ig)；

图16为AD和本发明代表的化合物显著减轻单侧输尿管结扎诱导的KM小鼠肾间质纤维化程度(Masson染色；显微图片，×100倍)，图中：1、假手术；2.模型；3.AD(70mg/kg；ig)；4.ADY(70mg/kg；ig)；5.ADY-4(25mg/kg；ig)；6.ADY-6(25mg/kg；ig)；7.ADY-7(25mg/kg；ig)；8.ADY-8(25mg/kg；ig)；9.ADY-12(25mg/kg；ig)。

具体实施方案

下面结合具体实施方案来阐述本发明。应理解这些实施方案仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。本发明涉及的化合物不限于实施例中使用的代表性结构，可以更换15位的不同取代基，获得具有抗纤维化活性的化合物；可以用各种导致纤维化的原因作为研究对象来得出本发明化合物具有抗纤维化作用；也可以利用其他各种体内外研究模型(方法)来得出本发明化合物具有抗纤维化作用。

实施例1本发明化合物抑制人肝星状细胞LX-2迁移作用

在各种炎症介质、生长因子等细胞因子的刺激下，肝星状细胞迁移到受损肝组织的炎症部位，进而增殖、活化，合成胶原等ECM成分是肝纤维化发生发展的关键。因此，与穿心莲内酯比较，利用人肝星状细胞LX-2(由北京北纳创联生物技术研究院提供)，采用划痕法研究本发明化合物的体外抗肝纤维化作用。1)细胞培养与供试化合物

将LX-2细胞培养在含10％(V/V)胎牛血清、100μg/mL链霉素、100IU/mL青霉素RPMI1640培养液中，置体积分数5％CO₂培养箱中于饱和湿度、37℃培养。穿心莲内酯由四川什邡市金鑫生物科技有限公司生产(批号：120822)，

度大于99％；本发明化合物由本发明人所在实验室合成，纯度大于99％，下同。

2)MTT法测定细胞毒

将生长对数期的LX-2细胞用0.25％(W/V)胰蛋白酶消化后，用含10％(V/V)胎牛血清的RPMI1640培养基稀释成3.5×10⁴/mL细胞悬液，铺于96孔板内，200μL/孔，于37℃，体积分数5％CO₂培养箱中培养24h，加入含不同浓度药物的培养基，药物终浓度最高为30.00μM,每个处理4孔重复。继续培养48h，加入MTT(5mg/mL)，20μL/孔，培养4h，弃上清，加入150μLDMSO，震荡l0min，用酶标仪测定吸光值。测定波长为570nm，参考波长为450nm。计算化合物作用后的细胞存活率，存活率(％)＝药物组OD_570-450值/对照组OD_570-450值×100％，结果取平均值，见附图1。

3)划痕(迁移)实验观察药物对LX-2细胞迁移的影响

将生长对数期的LX-2细胞用0.25％(W/V)胰蛋白酶消化后，用含10％(V/V)胎牛血清的RPMI1640培养基稀释成1.0×10⁵/mL细胞悬液，铺于96孔板内，每孔200μL。培养12h之后待细胞长成融合状态，弃去原培养基，加入含0.5％(V/V)血清的培养基再同步化培养12h之后划线，用PBS洗两遍，加入200μL含待测化合物的RPMI1640培养基后立即在显微镜下拍照。设3孔重复并且设置对照。培养24h后分别在显微镜下拍照测量。计算迁移抑制率，迁移抑制率＝[1－(给药组0h划痕距离－24h划痕距离)/(空白组0h划痕距离－24h划痕距离)]×100％，结果取平均值，见附图2。

4)实验结果

附图1结果表明：在30μM浓度下，与AD比，本发明化合物对LX-2增殖的抑制作用显著降低。

结合附图1、2，结果表明：在无毒浓度下，本发明化合物可显著抑制人肝星状细胞LX-2的迁移，且与AD比，抑制作用更强，安全指数更高。

实施例2本发明化合物抑制人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549间充质转化

存在于肺泡里的Ⅱ型肺泡上皮细胞受到炎症介质、生长因子等细胞因子的刺激，细胞形态由鹅卵石状变为梭状，完成上皮间充质转化过程(EMT)，具有了间质细胞的功能，进而合成胶原纤维，大量胶原纤维沉积可加剧肺间质纤维化的病程。因此，与穿心莲内酯比较，利用人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549，采用形态学观察法和细胞划痕(迁移)实验评价本发明化合物体外抗肺纤维化作用。

1)细胞培养

将A549细胞培养在含10％(V/V)胎牛血清、100μg/mL链霉素、100IU/mL青霉素的RPMI1640培养液中，置体积分数5％CO₂培养箱中于饱和湿度、37℃培养。

2)MTT法测定细胞毒

将生长对数期的A549细胞用0.25％(W/V)胰蛋白酶消化后，用含10％(V/V)胎牛血清的RPMI1640培养基稀释成5×10⁴/mL细胞悬液，铺于96孔板内，200μL/孔，于37℃，体积分数5％CO₂培养箱中培养24h，加入含药培养基，药物终浓度最高为30.00μmol/L，每个处理4孔重复，继续培养48h。其他同实施例1。结果取平均值，如附图3所示。

3)形态学观察法检测药物对A549细胞EMT的影响

将生长对数期的A549细胞用0.25％(W/V)胰蛋白酶消化后，用含10％(V/V)胎牛血清的RPMI1640培养基稀释成3×10⁴/mL细胞悬液，铺于96孔板内，每孔200μL。培养24h之后待贴壁细胞融合至80％～90％时，弃去原培养基，无血清培养基同步化培养24h，弃去培养基，用PBS洗两遍，同时加入200μL含有TGF-β1(5ng/mL)及不同浓度待测化合物的RPMI1640培养基后立即在显微镜下拍照(100×)。设3孔重复并且设置对照。培养48h后分别在显微镜下拍照。每种化合物相同浓度选取5个视野，测量大于100个细胞。利用photoshop CS6软件对图片进行处理，并计算其圆形度(公式e＝4π×S/C2，其中e代表圆形度，S代表面积，C代表周长)。结果取平均值，见附图4。

4)细胞划痕(迁移)实验观察药物对A549细胞迁移的影响

将生长对数期的A549细胞用0.25％(W/V)胰蛋白酶消化后，用含10％(V/V)胎牛血清的RPMI1640培养基稀释成1.0×10⁵/mL细胞悬液，铺于96孔板内，每孔200μL。培养24h之后待贴壁细胞融合至80％～90％时，弃去原培养基，无血清的培养基同步化培24h之后划痕，用PBS洗两遍，加入200μL含待测化合物的RPMI1640培养基后立即在显微镜下拍照。设3孔重复并且设置对照。培养24h后分别在显微镜下拍照测量。迁移距离＝边缘距离(0h)－边缘距离(24h)。迁移抑制率＝[1-(TGF-β1组迁移距离－药物组迁移距离)/(TGF-β1组迁移距离－空白组迁移距离)]×100％，见附图5。

5)实验结果

附图3结果表明，与AD比，本发明化合物对人A549细胞增殖的抑制活性显著降低。

附图3、4和5结果表明：本发明化合物在无毒浓度下，可显著抑制A549细胞上皮充间质转化，且与AD比，抑制作用更强，安全指数更高。

实施例3本发明化合物抑制TGF-β1诱导的人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2间充质转化作用

早期研究发现肾小管上皮细胞可以向成纤维细胞转分化并表达其标志蛋白成纤维特异性蛋白(FSP1，fibroblast-specific protein 1)，肾小管上皮细胞－间充质细胞转分化是肾脏间质纤维化的重要发病机制之一。因此，与穿心莲内酯AD比较，利用人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2(由中国典型培养物保藏中心提供)，采用TGF-β1刺激后形态学观察法和划痕实验研究本发明化合物体外抗肾纤维化作用。

1)细胞培养

将HK-2细胞培养在含10％胎牛血清(V/V)、100μg/mL链霉素、100IU/mL青霉素的DMEM/F12培养液中，置含体积分数5％CO₂培养箱中，于饱和湿度、37℃培养。

2)MTT法测定细胞毒

将生长对数期的HK-2细胞用0.25％(W/V)胰蛋白酶+0.02％EDTA(W/V)消化后，用含10％(V/V)胎牛血清的DMEM/F12培养基稀释成7.0×10⁴/mL细胞悬液，铺于96孔板内，200μL/孔，于37℃，体积分数5％CO₂培养箱中培养24h，更换为含不同浓度药物培养基，药物最高终浓度为30.00μM，每个处理4孔重复，继续培养48h。其他同实施例1。结果取平均值，如附图6所示。

3)TGF-β1刺激后观察药物对HK-2细胞形态的影响

将生长至对数期的HK-2细胞用0.25％(W/V)胰蛋白酶+0.02％EDTA消化后，用含10％(V/V)胎牛血清的DMEM/F12培养基稀释成5.0×10⁴/mL细胞悬液，铺于96孔板内，每孔200μL。培养24h之后细胞长成单层，弃去原培养基，用0.01M PBS清洗两遍，更换无血清培养基以同步化，再培养24h后，吸弃无血清培养基，加入200μL含不同浓度待测化合物与刺激因子TGF-β1(5ng/mL)的DMEM/F12培养基。设3孔重复并且设置对照。培养48h后分别在显微镜下拍照记录。部分本发明化合物作用细胞后的形态学变化见附图7。

4)细胞划痕(迁移)实验观察药物对HK-2细胞迁移的影响

将生长对数期的HK-2细胞用0.25％(W/V)胰蛋白酶+0.02％EDTA(W/V)消化后，用含10％(V/V)胎牛血清的DMEM-F12培养基稀释成2.0×10⁴/mL细胞悬液，铺于96孔板内，每孔200μL。培养24h之后待细胞长成融合状态，弃去原培养基，用0.01M PBS清洗两遍，加入无血清的培养基饥饿使其同步化24h，之后弃上清，使用200μL枪头划线，用PBS洗两遍，加入200μL含不同浓度待测化合物与刺激因子TGF-β1(5ng/mL)的DMEM-F12培养基(含2％胎牛血清)后立即在显微镜下拍照。设3孔重复并且设置对照。培养24h后分别在显微镜下拍照测量。迁移距离＝边缘距离(0h)－边缘距离(24h)。迁移抑制率＝[1－(TGF-β1组迁移距离－-药物组迁移距离)/(TGF-β1组迁移距离－空白组迁移距离)]×100％，结果取平均值，见附图8。

5)实验结果

附图6结果表明，与AD相比，除了化合物ADY-2、ADY-5、ADY-6、ADY-8和ADY-11以外，本发明化合物对人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2增殖的抑制作用均未显著提高。

附图6和附图7、8的结果表明：本发明化合物在无毒浓度下，可显著抑制HK-2细胞间充质转化，且与AD比，抑制作用更强，安全指数更高。

实施例4本发明化合物抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的原代人心肌成纤维细胞迁移作用

有研究表明，心肌成纤维细胞是心肌纤维化的主要效应细胞，在受到AngⅡ等活性物质刺激后会发生表型变化，迁移能力增强，转化为有分泌胞外基质功能的肌成纤维细胞。因此，与穿心莲内酯比较，采用MTT法检测本发明化合物对原代人心肌成纤维细胞HCFB增殖活力的影响；采用划痕损伤法评价本发明化合物对AngⅡ诱导的原代人肌成纤维细胞迁移的抑制作用。

1)细胞培养

将原代人心肌成纤维细胞HCFB(商城北纳创联生物科技有限公司提供)培养在含8％胎牛血清、100μg/mL链霉素、100IU/mL青霉素的H-DMEM培养液的培养瓶中，置于体积分数为5％CO2培养箱中于饱和湿度、37℃培养。

2)MTT法测定细胞毒

将对数生长期的HCFB细胞用0.25％胰蛋白酶消化后，用含8％胎牛血清的H-DMEM培养基稀释成5.0×10⁴/mL细胞悬液，铺于96孔板内，7000细胞/孔，于37℃，体积分数5％CO₂，饱和湿度的培养箱中培养24h，加入含不同浓度AD或本发明化合物的培养基，继续培养48h，其它同实施例1。结果取平均值，见附图9。

3)划痕(迁移)实验观察药物对AngⅡ刺激的HCFB迁移能力的抑制作用

生长对数期的HCFB细胞用0.25％(W/V)胰蛋白酶消化后，用含8％胎牛血清的H-DMEM培养基稀释成细胞悬液，铺于96孔板内，每孔20000细胞。培养24h待细胞长成融合状态，弃去原培养基，加入无血清的培养基同步化培养24h后，用200μL规格枪头划线，再用0.01M PBS清洗两遍，药物组加入200μL含不同浓度待测化合物与AngⅡ(10^-7mol/L)的H-DMEM(含0.5％DMSO)培养基，以含0.5％DMSO的H-DMEM培养基为空白组，含AngⅡ和0.5％DMSO的H-DMEM培养基为AngⅡ组，设3孔重复。分别于培养前(0h)和培养24h在显微镜下拍照测量。迁移距离＝边缘距离(0h)－边缘距离(24h)。抑制率＝[(AngⅡ组迁移距离-药物组迁移距离)/(AngⅡ组迁移距离-空白组迁移距离)]×100％，结果取平均值，见附图10。

4)实验结果

MTT实验结果表明：与相同浓度的AD处理相比，浓度为15μmol/L的本发明化合物处理HCFB细胞48h，细胞活力更高；在实验浓度范围内，本发明化合物对AngⅡ刺激的HCFB迁移能力的抑制作用比AD更强。

实施例5本发明化合物显著减轻总胆管结扎的KM小鼠肝纤维化程度

1)实验动物与方法

SPF级KM小鼠，雄性，体重20±2g，购于河南省实验动物中心[许可证号：SCXK(豫)2017-0001]。动物适应性喂养3d后，随机分组：假手术对照组、模型组、AD对照组、本发明化合物各组，每组6只。术前12h更换垫料，严格禁食不禁水，腹腔注射0.5％的戊巴比妥钠麻醉后，仰位固定小鼠四肢、剃毛、碘酒消毒皮肤、铺洞巾、沿腹中线开腹，沿胃向下找到并向上牵引十二指肠，游离胆总管，距近肝门部0.5cm处，以4/0号丝线双重结扎并离断胆总管，检查无出血及胆漏情况后，丝线连续缝针法逐层关腹，碘酒消毒伤口，术后保暖至清醒，假手术组只进行麻醉、开腹、游离胆总管，不结扎、不离断胆总管。每次灌胃均在早上空腹时进行。假手术组和模型组动物灌胃给予0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，其余各给药组给予0.5％CMC-Na混悬的相应药物，给药10d结束。采血后迅速完整地剖离肝脏。采集的血液在37℃孵育箱中静置45min后，4℃下3500rpm离心15min，取上层血清，分装备用。取小鼠肝脏左叶于10倍体积4％多聚甲醛固定液中固定，24h后更新固定液。固定充分后进行病理切片，HE和天狼星红染色观察肝脏病理改变和纤维化程度，并对肝组织进行肝纤维化病理评级，其标准为：0级无纤维化；1级有些PF±短纤维间隔；2级PF，纤维间隔形成；3级多数PF，偶有P-P；4级PF伴明显P-P和P-C；5级明显P-P/P-C,偶有结节；6级可能或肯定肝硬化。PF为汇管区纤维化；P-P为汇管-汇管桥接纤维化；P-C为汇管-中央桥接纤维化。利用天狼星红染色评价肝组织胶原沉积情况，使用Image-Pro Plus对阳性表达进行半定量分析。计算相对胶原面积：(给药组平均面积－假手术组平均面积)/(模型组平均面积－假手术组平均面积)×100％，结果见附图11、12。数据利用SPSS 17.0统计学软件进行处理和分析；P﹤0.05组间差异有显著性意义。

2)实验结果

结果表明：母体化合物AD处理组动物肝组织切片的纤维化病理评级由模型组的平均4.8降到了平均2.83(15mg/kg；ig)和2.10(40mg/kg；ig)。本发明化合物(15mg/kg；ig)ADY-8、ADY-6和ADY治疗组动物的肝组织切片的纤维化病理评级由模型组的平均4.8降到了平均0.6～1.4；本发明化合物(15mg/kg；ig)ADY-7、ADY-12治疗组动物的肝组织切片的纤维化病理评级由模型组的平均4.25分别降到了平均0.4和1.4.

结合附图11、12，在总胆管结扎致小鼠肝纤维化模型上，本发明化合物具有良好的抗肝纤维化作用，且效果均显著强于AD(P﹤0.05)。

实施例6本发明化合物显著减轻二氧化硅诱导的KM小鼠肺纤维化程度

肺纤维化是由多种原因引起的肺脏损伤，肺纤维化形成的病理机制复杂，不同致病条件导致的损伤包括血管内皮细胞、肺泡上皮细胞、成纤维细胞及巨噬细胞等多种细胞，以及多种细胞因子的相互作用。二氧化硅属无机粉尘类，大量吸入会导致严重矽肺，甚至危及人类生命安全，而在动物实验中已证实，二氧化硅所致肺纤维化病理组织学改变与人类尘肺纤维化非常相似，作为研究肺纤维化的经典模型。

1)材料与方法

SPF级KM小鼠，雄性，体重20±2g，购于河南省实验动物中心。许可证号：SCXK(豫)2017-0001。二氧化硅80％粒径范围1-5μm，由Sigma公司提供。使用前二氧化硅经马氏炉250℃处理1h，以消除内毒素，密封高压灭菌后于超净工作台生理盐水配制成终浓度75mg/ml悬液，4℃备用。注射前混匀超声震荡半小时。

2)实验方法

小鼠适应性喂养3d后，随机分组：假手术组、模型组和各给药组，每组8只。腹腔注射0.5％的戊巴比妥钠50mg/kg对小鼠进行麻醉，仰卧位固定小鼠，剃去颈部毛发，碘酒消毒脱碘后，沿颈部向下行1cm左右切口，游离支气管，根据体重吸取相应二氧化硅悬液及100ul空气(150mg/kg)，经软骨间隙注射到气管内，肌肉复位后，快速转动小鼠2min，使二氧化硅分布均匀，然后缝合、消毒后，无菌纱布包扎伤口。其中，假手术组注射等体积的生理盐水。造模结束24h后，每天灌胃给药1次，假手术组和模型组动物灌胃给予0.5％(w/v)羧甲基纤维素钠(CMC-Na)，其余各给药组给予0.5％(w/v)CMC-Na混悬的相应药物，连续给药21d后结束实验。小鼠在末次灌胃前12h更换垫料，严格禁食不禁水。给药后1h后集小鼠全血，采集完血液后颈椎脱臼法处死小鼠，采集肺脏，称重，观察并记录肺部病变。肺组织固定、石蜡切片制作同实施例5。通过HE染色和Masson染色观察分析本发明化合物对肺组织炎症和纤维化状态的改善情况，并根据Hubner等的方法评估肺纤维化程度。0分：无纤维化，肺泡结构正常；1分：轻度肺组织纤维化，肺泡间隔增厚≤3倍正常值，肺泡壁变薄，无成团的纤维化灶；2分：明显的纤维化改变，肺泡间隔厚度>3倍正常值，可见绳结样改变但彼此不相连；3分：视野内主要改变为连续的纤维化(肺泡间隔厚度>3倍正常值)，肺泡腔明显增大，肺泡结构异常，肺泡隔较正常组变薄，同样肺组织出现明显的纤维化改变；4分：肺组织纤维化以明显的单个病灶出现为评级标准(病变范围<10％视野)；5分：评分定级为肺组织严重受损，其典型病理特征为由单个病灶融合成团的纤维化结节形成(病变范围10-50％视野)；6分：大部分肺泡隔消失，大量连续肺纤维化(病变范围>50％视野)，大部分肺形态毁损；7分：肺泡隔消失，肺泡内几乎全是成团的纤维组织；8分：满视野均为成团的纤维组织。

3)实验结果

结果表明：本发明化合物的高(120mg/kg)、低(40mg/kg)剂量均使二氧化硅诱导的KM小鼠肺纤维化程度得到显著改善。其中ADY、ADY-6和ADY-8治疗组动物的肺组织纤维化评分由模型的平均6.75降低到1.5至2.7范围内波动；ADY-4、ADY-7和ADY-12治疗组动物的肺组织纤维化评分由模型的平均5.5降低到2.1至2.8范围内波动；并且本发明化合物的抗肺纤维化作用显著优于同等剂量的AD(3.8至4.9)。部分代表性化合物对肺组织纤维化的改善情况见附图13。

实施例7本发明化合物显著降低单侧输尿管结扎诱导的KM小鼠肾间质纤维化程度

单侧输尿管结扎(UUO)诱导小鼠肾纤维化模型是研究肾纤维化经典模型之一，该模型特征为肾小管间质中炎性细胞积聚、成纤维细胞分化/增殖、ECM沉积增加和肾小管萎缩等，与临床梗阻性肾脏疾病的发生发展过程相似，成模率100％，病变均一，有较好的重复性，能够在短期内造成纤维化。因此，UUO模型广泛应用于肾间质纤维化机制研究及改善肾纤维化的治疗效果评价。

1)实验动物

SPF级KM小鼠，雄性，体重20±2g，购于河南省实验动物中心。许可证号：SCXK(豫)2017-0001。

2)实验方法

小鼠适应性喂养3d后，随机分组：假手术对照组、模型组、各给药组，每组7只。术前准备及麻醉同实施例5，麻醉后，左侧卧位固定小鼠，剃去胸骨下缘至后肢毛发，铺手术布与剃去毛发的皮肤上，碘酒消毒皮肤后，沿胸骨下缘约0.5cm处向下行1cm左右切口，挤出肾脏，游离输尿管，在距离膀胱约1/3输尿管长度处，以5/0号丝线双重结扎并剪断输尿管，肾脏送回腹腔后，以5/0号丝线全层关腹，碘伏消毒后，无菌纱布包扎伤口，最后将术后小鼠送至温暖处直至苏醒，其中，假手术组只游离输尿管不结扎、不离断。造模结束24h后，开始定时定点定人灌胃给药，给药方法同实施例5，给药7d后结束实验。小鼠在末次灌胃前12h更换垫料，严格禁食不禁水。给药后1h摘取左侧眼球取血，采血后迅速完整地剖离左侧肾脏，称量肾重，测定肾大小，拍照后固定于4％(w/v)多聚甲醛固定液中。石蜡切片制作、血清制备及HE、Masson染色方法和统计处理同实施例5或6。通过观察解剖肾脏和病理切片HE染色分析本发明化合物对肾脏组织炎症状态的改善情况，MASSON染色分析本发明化合物对肾脏纤维化的改善情况。肾间质纤维化病理分级标准为：1级为间质基本正常，轻度小管变性扩张；2级为间质纤维化，小管萎缩<20％,散在炎性细胞浸润；3级为间质纤维化，小管萎缩占30％，散在和(或)弥漫性炎性细胞浸润；4级为间质纤维化，小管萎缩>50％，散在和(或)弥漫性炎性细胞浸润。

3)实验结果

结合附图14、15和16，结果表明：假手术组小鼠肾组织表面水润有光泽、肾小球结构完整，肾小管紧致密实，没有肉眼可见病变。模型组小鼠肾组织肿大膨胀，中间有大量积液且与周围组织有黏连，肾小球内有纤维增生样组织且大部分坏死脱落，肾间质纤维化物质包饶压迫肾小管致肾小管弥漫性萎缩，且部分区域肾小管内固有细胞全部脱落，形成蛋白管型，肾间质中大量炎性细胞浸润。与模型组相比，给药组动物肾组织损伤均得到不同程度的改善；给予本发明化合物的治疗组动物肾组织损伤得到大幅度改善，肾间质纤维化病理分级由模型的4级降到了1-2级，效果显著优于AD。

Claims (11)

1.14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯15位取代衍生物，其特征在于，具有如下所示结构：

通式1

其中，R₁，R₂各自为氢、甲基、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、3，4，5-三甲氧基苯基、2-羟基苯基、3-羟基苯基、4-羟基苯基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、3-氟苯基、3-氯苯基、3-溴苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、2-氟-3-甲氧基苯基、3-甲氧基-4-氯苯基、2，4-二氟苯基、2，4-二氯苯基、2，4-二溴苯基、2-氟-4-氯苯基、2-溴-4-氯苯基、3-氟-4-氯苯基、3-溴-4-氯苯基、3，4-二氟苯基、3，4-二氯苯基、3，4二溴苯基、2-氯-4-氟苯基、2-溴-4-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、3-溴-4-氟苯基、2-氟-4-溴苯基、2-氯-4-溴苯基、3-氟-4-溴苯基、3-氯-4-溴苯基、2，3，4-三氯苯基、2-甲氧基-4-氯苯基、2-羟基-4-氯苯基、2-羟基-4-甲氧基苯基、4-(N,N-二甲胺基)苯基、3-氟-4-(4-甲基哌嗪基)苯基或3-氟-4-(4-吗啉基)苯基；R₁，R₂同时相同或不同；R₃、R₄各自为氢；或R₃、R₄分别为CH₂CH₂COOH或CH₂CH₂CH₂CH₂COOH、CH₂CHCHCH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂COOH中的一种，或R₃、R₄各自为COR₅；R₅为3-吡啶基或CH₂CH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂COOH、CH₂CHCHCH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂COOH中的一种；R₃、R₄同时选相同或不同的取代基团。

2.如权利要求1所述的14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯15位取代衍生物，其特征在于，R₁，R₂各自为氢、2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、3，4，5-三甲氧基苯基、2-羟基苯基、3-羟基苯基、4-羟基苯基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、3-氟苯基、3-氯苯基、3-溴苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、2-氟-3-甲氧基苯基、3-甲氧基-4-氯苯基、2，4-二氟苯基、2，4-二氯苯基、2，4-二溴苯基、2-氟-4-氯苯基、2-溴-4-氯苯基、3-氟-4-氯苯基、3-溴-4-氯苯基、3，4-二氟苯基、3，4-二氯苯基、3，4二溴苯基、2-氯-4-氟苯基、2-溴-4-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、3-溴-4-氟苯基、2-氟-4-溴苯基、2-氯-4-溴苯基、3-氟-4-溴苯基、3-氯-4-溴苯基、2，3，4-三氯苯基、2-甲氧基-4-氯苯基、2-羟基-4-氯苯基、2-羟基-4-甲氧基苯基3-氟-4-(4-甲基哌嗪基)苯基、4-(N,N-二甲胺基)苯基或3-氟-4-(4-吗啉基)苯基；但R₁，R₂不同；R₃、R₄各自为氢；或R₃、R₄分别为CH₂CH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂COOH、CH₂CHCHCH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂COOH中的一种，或R₃、R₄各自为COR₅，R₅为3-吡啶基或CH₂CH₂COOH，R₃、R₄选相同取代基团。

3.如权利要求1所述的14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯15位取代衍生物，其特征在于，当R₁，R₂其中之一为氢时，R₁，R₂其中之一选如下基团：2-甲氧基苯基、3-甲氧基苯基、4-甲氧基苯基、2-氟苯基、2-氯苯基、2-溴苯基、3-氟苯基、3-氯苯基、3-溴苯基、4-氟苯基、4-氯苯基、4-溴苯基、2-氟-3-甲氧基苯基、3-甲氧基-4-氯苯基、2，4-二氟苯基、2，4-二氯苯基、2，4-二溴苯基、2-氟-4-氯苯基、2-溴-4-氯苯基、3-氟-4-氯苯基、3-溴-4-氯苯基、3，4-二氟苯基、3，4-二氯苯基、3，4二溴苯基、2-氯-4-氟苯基、2-溴-4-氟苯基、3-氯-4-氟苯基、3-溴-4-氟苯基、2-氟-4-溴苯基、2-氯-4-溴苯基、3-氟-4-溴苯基、3-氯-4-溴苯基、2-甲氧基-4-氯苯基、4-羟基苯基、3，4，5-三甲氧基苯基、3-氟-4-(4-甲基哌嗪基)苯基、4-(N,N-二甲胺基)苯基或3-氟-4-(4-吗啉基)苯基；R₃、R₄各自为氢；或R₃、R₄分别为CH₂CH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂COOH、CH₂CHCHCH₂COOH、CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂COOH中的一种，或R₃、R₄各自为COR₅，R₅为3-吡啶基或CH₂CH₂COOH，R₃、R₄选相同取代基团。

4.14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯15位取代衍生物，其特征在于，选如下化合物：

ADY-1：R₁＝H，R₂＝4-Cl-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-2：R₁＝H，R₂＝4-Br-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-3：R₁＝H，R₂＝4-F-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-4：R₁＝H，R₂＝2-Cl-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-6：R₁＝H，R₂＝3,4-二氟苯基，R₃＝R₄＝H；

ADY-7：R₁＝H，R₂＝3-CH₃O-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-8：R₁＝H，R₂＝4-OH-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-9：R₁＝H，R₂＝3,4,5-三甲氧基苯基，R₃＝R₄＝H；

ADY-10：R₁＝H，R₂＝3-Cl-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-11：R₁＝H，R₂＝3-F-4-[N-甲基哌啶]-C₆H₃，R₃＝R₄＝H；

ADY-12：R₁＝H，R₂＝4-CH₃O-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-13：R₁＝H，R₂＝3-F-4-吗啉-C₆H₃，R₃＝R₄＝H；

ADY-14：R₁＝H，R₂＝4-[N-(CH₃)₂]-C₆H₄，R₃＝R₄＝H；

ADY-15:R₁＝H，R₂＝3,4-二氟苯基，R₃＝R₄＝COR₅，R₅＝3-吡啶基；

ADY-16:R₁＝H，R₂＝C₆H₅,R₃＝R₄＝COR₅，R₅＝3-吡啶基；

ADY-17：R₁＝H，R₂＝4-Cl-C₆H₄，R₃＝R₄＝COR₅，R₅＝CH₂CH₂COOH。

5.如权利要求1-4其中之一所述的14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯15位取代衍生物在制备药物中的应用，其特征在于，将其作为活性成份用于制备治疗或预防人体组织或器官纤维化疾病药物。

6.如权利要求5所述的14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯15位取代衍生物在制备药物中的应用，其特征在于，将其作为活性成份用于制备治疗或预防肝纤维化药物。

7.如权利要求5所述的14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯15-位取代衍生物在制备药物中的应用，其特征在于，将其作为活性成份用于制备治疗或预防肺纤维化药物。

8.如权利要求5所述的14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯15位取代衍生物在制备药物中的应用，其特征在于，将其作为活性成份用于制备治疗或预防肾纤维化药物。

9.如权利要求5所述的14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯15位取代衍生物在制备药物中的应用，其特征在于，将其作为活性成份用于制备治疗或预防心脏纤维化药物。

10.如权利要求5-9所述的14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯15位取代衍生物在制备药物中的应用，其特征在于，将其作为活性成份或与其它药物组合，与制药中可以接受的辅助和/或添加成分混合后，按常规的制药方法和工艺要求，制成用于抗人体组织或器官纤维化的口服型制剂、注射型制剂药物。

11.如权利要求10所述的14-脱氧-11,12-脱氢-8,12-环氧-穿心莲内酯15位取代衍生物在制备药物中的应用，其特征在于，口服型制剂为片剂、丸剂、胶囊、冲剂或糖浆；注射型制剂为注射液或冻干粉针剂型。

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