CN109846856B - 一种生物酶催化产气抗肿瘤仿生纳米粒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种仿生生物酶催化产气抗肿瘤仿生纳米粒及其制备方法，首先将锰羰基化合物负载于聚乳酸‑羟基乙酸溶液，再将葡萄糖氧化酶包埋于上述体系，通过乳化溶剂挥发法制得包埋有葡萄糖氧化酶的锰羰基化合物‑聚乳酸‑羟基乙酸纳米溶液，最后将葡萄糖氧化酶‑锰羰基化合物‑聚乳酸‑羟基乙酸挤压进红细胞膜衍生的囊泡中，即可得到生物酶催化产气抗肿瘤仿生纳米粒。所制得的纳米粒提供了一种新的肿瘤治疗策略，协同应用气体疗法和饥饿疗法，并以红细胞膜作为纳米粒衣壳，使得其能够在肿瘤靶组织中能够内源性原位控制一氧化碳气体生成，起到了较好的抗肿瘤效果。
Description
技术领域
本发明涉及药物制剂领域，特别涉及一种生物酶催化产气抗肿瘤仿生纳米粒及其制备方法。
背景技术
癌症是全球最严重的公共卫生问题之一。目前治疗癌症的方法包括放疗、化疗，光动力疗法，光热治疗等治疗措施。然而，这些方法对癌细胞的杀伤作用是很有限的，对正常细胞的不良毒性是这些治疗措施的共同问题，这些问题阻碍了其在癌症治疗中的有效应用。大多数抗肿瘤药物的溶解性差，容易产生多药耐药现象，还可对人体正常组织造成不可逆损伤，影响癌症的治疗效果和病人的生活质量。因此急需开发一种高效低毒的抗肿瘤方法，以满足对癌症的临床治疗需求，气体疗法、饥饿疗法等与纳米递药系统均成为当今抗肿瘤研究的热门领域。
作为化疗的替代品，新兴的气体疗法已被公认为“绿色”治疗范例，其副作用可忽略不计。其中一氧化碳（CO）可以通过细胞内血红素氧化过程内源性产生，并作为一个重要的信号分子来抵消炎症，保护细胞，激活血管，参与细胞内的氧化还原反应。CO还可引起线粒体功能障碍，产生活性氧（ROS），从而直接抑制肿瘤细胞增殖。同时它还可以改善肿瘤微环境，使癌细胞对化疗敏感，从而增强化疗效果。但CO本身毒性较强，其对血红蛋白的氧化能力是氧气的200倍，高剂量的CO气体会对人体造成永久性的伤害。因此，CO不适合外源性给药，在靶向组织中内源性原位控制CO生成是CO气体治疗的最佳选择。
近年来，国内外专家发现一些锰羰基化合物（MnCO）可以通过特定肿瘤微环境的过氧化氢（H2O2）触发原位控制释放CO[1]。然而，肿瘤中内源性H2O2的量有限（10~50μM），并且在不同类型的实体瘤之间可能存在差异，导致CO生成不足。因此，亟待开发一种新的策略以增加肿瘤中H2O2的浓度，有效地控制CO的生成量，从而提高气体治疗的功效。
与正常组织细胞相比，由于代谢途径紊乱，肿瘤细胞需要大量的营养和能量来维持其生存和生长。其中超过50％的细胞能量来自无氧糖酵解（Warburg效应），导致它们比正常组织细胞摄取更多的葡萄糖。一旦关闭葡萄糖供应，肿瘤的生长将被优先抑制，因此与葡萄糖代谢相关的癌症饥饿疗法成为一种很有前途的临床治疗手段。葡萄糖氧化酶（GOX）可在氧气存在的条件下，将葡萄糖催化成H2O2和葡萄糖酸，从而减少肿瘤细胞的葡萄糖供应，抑制其生长，因此成为实现癌症饥饿疗法的一种有效方法。而H2O2的释放又进一步增加了CO的生成，从而提高了气体治疗的功效。
传统的纳米粒可以通过增强的渗透性和保留（EPR）效应在肿瘤中累积。然而，先天和适应性免疫系统可以识别这些非自身纳米粒子，并从血液循环中清除它们，从而导致纳米粒积聚减少，降低了其治疗效果。近几年，仿生伪装纳米药物输送系统逐渐引起人们关注。其中最常用的策略是采用细胞膜包裹药物，现已被广泛用于药物输送，该方法不仅能够提高纳米粒生物相容性，延长其血液循环时间，还使纳米粒具备了靶向性，能够有效提高药物纳米输送系统在癌组织的聚集。并且红细胞膜表面的膜蛋白CD47，可以通过与巨噬细胞表面CD47受体-信号调节蛋白发挥作用，从而避免巨噬细胞的摄取。因此，选择红细胞膜作为理想的体内药物运载体可以实现其体内的长效循环。而且，通过调控载药体系的粒径，利用EPR效应聚集在肿瘤部位，可以实现其对癌细胞的靶向作用。
CN108721321A、CN108434462A等公开了应用锰羰基化合物（MnCO）对肿瘤部位进行气体治疗，但是都必须借用近红外光去激发释放CO。文献 “Intratumoral H2O2-TriggeredRelease of CO from Metal Carbonyl-Based Nanomedicine for Efficient COTherapy” [2]中利用了肿瘤中内源性有限的H2O2（10~50μM）去触发锰羰基化合物（MnCO）产生CO进行气体治疗。而本发明提供了一种新的策略，在靶向组织中内源性原位控制CO气体生成，从而增强癌症治疗。CN109078176A公开了负载葡萄糖氧化酶（GOX）的纳米粒来实现肿瘤部位的饥饿治疗。文献“Erythrocyte Membrane Cloaked Metal-Organic FrameworkNanoparticle as Biomimetic Nanoreactor for Starvation-Activated Colon CancerTherapy” [3]中考察了利用GOX可以在氧气条件下有效催化内源性葡萄糖转换成葡萄糖酸，从而关闭能量供应以使肿瘤细胞饥饿，达到杀伤肿瘤的疗效。
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发明内容
本发明的目的在于提供一种生物酶催化产气抗肿瘤仿生纳米粒及其制备方法，将CO气体疗法和饥饿疗法联合应用，并将红细胞膜作为衣壳包覆于纳米粒表面，成功构建了一种生物酶催化产气抗肿瘤仿生纳米载药系统；该纳米粒利用了GOX的饥饿治疗原理，并利用GOX反应伴随产生的H2O2有效地诱导CO释放，从而导致癌细胞凋亡，进一步提高了仿生纳米载药系统的治疗效果和安全性。
本发明制备的PLGA纳米载体，以聚合物聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）为材料，同时包载了葡萄糖氧化酶（GOX）和锰羰基化合物（MnCO），并将红细胞膜作为衣壳包覆于纳米粒表面，制成了生物酶催化产气杀伤肿瘤的仿生纳米粒系统。
纳米粒粒径在150-160nm左右，平均Zeta在-5至-10mV左右。纳米粒包载的葡萄糖氧化酶的用量在5-10mg左右，锰羰基化合物的用量在2-4mg左右。
本发明的生物酶催化产气抗肿瘤仿生纳米粒的制备方法，包括：
(1)将葡萄糖氧化酶溶于水中，配制得到葡萄糖氧化酶溶液；将锰羰基化合物与聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于有机溶液中，配制成锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸溶液；将所有溶液置于1-5℃的环境中预冷，备用。
(2)在步骤(1)中，将所有溶液置于冰箱中预冷，作用在于减少在乳化过程中温度升高对制备过程的影响。
(3)取500~600μL葡萄糖氧化酶溶液加入到锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸溶液中，超声乳化20~40s，制得W/O初乳，备用。
(4)在步骤(3)中，成功将葡糖糖氧化酶负载到锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸上。
(5)将W/O初乳立即转移到5~ 10 mL 2%聚乙烯醇（PVA）溶液中，超声乳化1~ 2min，制得W/O/W复乳液，备用。
(6)将W/O/W复乳液逐滴加入到30~40mL 0.6%聚乙烯醇（PVA）溶液中，挥化5~6h，待有机溶剂挥发完全后，将得到的纳米粒溶液以2000-3000 r/min离心去除大颗粒，14000r /min离心并用PBS洗涤三次，得到葡萄糖氧化酶-锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸纳米粒MGP，备用。
(7)血液离心后，PBS洗涤，将得到的红细胞重悬于低渗PBS溶液中，再次离心，重复重悬和离心直到上清液没有红色，将得到的红细胞膜衍生的囊泡储存于PBS中，备用；
(8)采用挤压法，将步骤(6)中的葡萄糖氧化酶-锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸纳米粒MGP与步骤(7)中红细胞膜衍生的囊泡混合(体积比1：1)，通过数次孔径尺寸为200纳米的碳酸脂膜，即可得到仿生型纳米粒MGP@RBC。
所述锰羰基化合物为Mn2（CO）10，其中，锰为零价，两个锥体Mn（CO）5通过Mn-Mn键连接且相互错开，以便减少分子内的静电排斥作用，属于D4d点群，其中Mn-Mn键的键长为239pm，红外振动光谱中有3个峰，分别是2044cm-1（中强）、2013cm-1（强）、1983cm-1 （中强）。
将所有溶液置于1-5℃的环境中预冷，以减少在乳化过程中温度升高对制备过程的影响。
作为优选，上述方法中，所述超声波处理可在冰浴中进行。
步骤（1）中葡萄糖氧化酶溶液浓度为5-10mg/mL。
步骤1）中配制成锰羰基化合物（0.4-1mg/L）-聚乳酸-羟基乙酸（20-25mg/mL）溶液
步骤（3）中葡萄糖氧化酶溶液与锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸溶液的体积比为1：10。
作为优选，所述步骤(3) 、 (5)中超声乳化功率为200 ~300 W。
作为优选，所述步骤(6)中，挥发时搅拌温度为室温，搅拌速度为500~600 r/min。
作为优选，所述步骤(6)再次离心时间为10~15min，温度为4℃。
作为优选，所述步骤(8)中挤压次数为11～13次。
本发明中，所述聚合物构建的纳米粒内核和细胞膜囊泡通过疏水作用以及静电作用相结合，形成核壳结构的纳米级仿生粒子。
本发明中，所述细胞膜囊泡平均粒径为180-200nm左右，聚合物纳米内核平均粒径为140-150nm左右，包被细胞膜囊泡之后最终粒径在150-160nm左右。
本发明中，所述细胞膜囊泡平均Zeta为-5至-10mV左右，聚合物纳米内核平均Zeta为-15至-20mV左右，包被细胞膜囊泡之后平均Zeta在-5至-10mV左右。
本发明中，生物酶催化产气抗肿瘤仿生纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用，包括应用于抗癌药物的递送。
有益效果：
(1)本发明基于葡萄糖氧化酶（GOX）可在氧气存在的条件下，将葡萄糖催化成H2O2反应原理，开发了一种新的治疗模式，将CO气体疗法和饥饿疗法联合应用，并将红细胞膜作为衣壳包覆于纳米粒表面，成功构建了一种生物酶催化产气抗肿瘤仿生纳米载药系统。与单独的饥饿疗法组及气体疗法组比较，本纳米粒可以显著提高抗肿瘤效果，在乳腺癌荷瘤小鼠体内的抑瘤率提高了近40%。
(2)同时本纳米粒具有较高的安全性与生物兼容性。以仿生红细胞膜囊泡包载纳米粒，因其不含遗传物质及细胞器，因此其免疫原性极低，生物兼容性好；纳米粒的内核PLGA为FDA所认可的生物可降解材料，因此整个纳米药物递送系统在有效提高疗效的同时，还可以减小对正常组织的毒副作用。本专利还成功解决了纳米递送系统的稳定性问题，所制得的纳米粒在PBS溶液中，在常温条件下的放置稳定性超过72h。
(3)本发明方法操作简单，反应条件温和，制备的PLGA纳米载体载药能力强，葡萄糖氧化酶的载药量可以达到30%-35%，锰羰基化合物的载药量可以达到15%-20%。
附图说明
图1是纳米递药系统的粒径表征图。
图2是纳米递药系统的电位表征图。
图3是纳米递药系统的透射电镜图。
图4是纳米递药系统各处理组在不同浓度下对4T1细胞毒性比较图。
图5是纳米递药系统各处理组及对照组生理盐水经尾静脉注射入乳腺癌荷瘤鼠后的治疗情况。
具体实施方式
下面结合具体实施方式，是对本发明进一步阐述。因此这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施方式所用的原料、设备等，若无特殊说明，均可从商业途径得到。
聚乳酸-羟基乙酸共聚物（丙交酯：乙交酯50：50，Mw 24000-38000）购自赢创工业。葡萄糖氧化酶从中国上海源叶公司获得。锰羰基化合物（Mn2（CO）10）购自于中国上海麦克林生化科技有限公司。
实施例1
(1)将5mg葡萄糖氧化酶溶于0.5ml水中，配制得到浓度为10mg/mL的葡萄糖氧化酶溶液；将2mg锰羰基化合物与100mg聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于5mL有机溶液中，配制成锰羰基化合物（0.4mg/mL）-聚乳酸-羟基乙酸（20mg/mL）溶液；将所有溶液置于1-5℃的环境中预冷，备用。
(2)取500μL葡萄糖氧化酶溶液加入到步骤(1)中锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸溶液中，超声乳化30s，超声乳化功率为300 W，制得W/O初乳，备用。
(3)将步骤(2)中得到的初乳立即转移到5mL的2%聚乙烯醇（PVA）溶液中，超声乳化2min，超声乳化功率为200 W，制得W/O/W复乳液，备用。
(4)将步骤(3)中得到的复乳液逐滴加入到30mL 0.6%聚乙烯醇（PVA）溶液中，挥化5h，挥发时搅拌温度为室温，搅拌速度为；600 r/min；待有机溶剂挥发完全后，将得到的纳米粒溶液以2000 r/min离心5min去除大颗粒，14000 r/min离心10min并用PBS洗涤三次，得到葡萄糖氧化酶-锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸纳米粒MGP，备用。
(5)将动物眼眶取血后离心，PBS洗涤，将得到的红细胞重悬于低渗PBS溶液中，再次离心，重复重悬和离心直到上清液没有红色，将得到的红细胞膜衍生的囊泡储存于PBS中，备用；
(6)将步骤(4)中得到的纳米粒溶液MGP与步骤（5）中得到的红细胞膜衍生的囊泡溶液RBC以1:1的体积比混合均匀，再利用挤出仪通过200nm的聚碳酸酯多孔膜挤出11次，得到仿生型纳米粒MGP@RBC。
实施例2
按照实施例1中的方法制备PLGA纳米载体（MGP）和红细胞膜包裹的PLGA纳米载体（MGP@RBC），将PLGA纳米载体（MGP），红细胞膜包裹的PLGA纳米载体（MGP@RBC）和红细胞膜（RBC）分别用去离子水配成浓度为500μg/mL的溶液，然后在37℃下测其粒径大小。
两种纳米载体和红细胞膜的粒径结果如图1所示，红细胞膜（RBC）的粒径为180±4nm；PLGA纳米载体（MGP）的粒径为145±2nm；红细胞膜包裹的PLGA纳米载体（MGP@RBC）的粒径为155.0±4nm。结果表明红细胞膜包裹的PLGA纳米载体（MGP@RBC）粒径变大，证明红细胞膜的成功包裹。
实施例3
按照实施例1中的方法制备PLGA纳米载体（MGP）和红细胞膜包裹的PLGA纳米载体(MGP@RBC)，将PLGA纳米载体（MGP），红细胞膜包裹的PLGA纳米载体（MGP@RBC）和红细胞膜（RBC）分别用去离子水配成浓度为500μg/mL的溶液，然后在37℃下测其电位。
两种纳米载体和红细胞膜电位的结果如图2所示，红细胞膜（RBC）的电位为-7.8±2mV； PLGA纳米载体（MGP）的电位为-17.4±2mV；红细胞膜包裹的PLGA纳米载体（MGP@RBC）的电位为-8.2±2nm。结果表明红细胞膜包裹的PLGA纳米载体（MGP@RBC）的电位呈现红细胞膜（RBC）的电位，证明红细胞膜的成功包裹。
实施例4
按照实施例1中的方法制备PLGA纳米载体（MGP）和红细胞膜包裹的PLGA纳米载体（MGP@RBC），再分别用去离子水配成浓度为400μg/mL的溶液，然后在透射电镜下测其形貌。
两种纳米载体透射电镜结果如图3所示，红细胞膜包裹的PLGA纳米载体（MGP@RBC）的表面有一层深色的物质包裹，进一步证明红细胞膜的包裹。
实施例5
(1)将4T1细胞接种到96孔板中，密度为每孔8000个细胞，在37℃，5％CO 2 的条件下于培养箱中培养24h使细胞贴壁。
(2)弃去培养液，设置空白组(无细胞，完全培养基，不加药)、对照组(有细胞，完全培养基，不加药)、①组：葡萄糖氧化酶-锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸-红细胞膜纳米粒组（MGP@RBC）(有细胞，完全培养基，加药)、葡萄糖氧化酶-聚乳酸-羟基乙酸-细胞膜纳米粒组（GP@RBC）(有细胞，完全培养基，加药)、锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸-细胞膜纳米粒组（MP@RBC）(有细胞，完全培养基，加药) ；②组：葡萄糖氧化酶-锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸-细胞膜纳米粒组（MGP@RBC）(有细胞，无糖培养基，加药)、葡萄糖氧化酶-聚乳酸-羟基乙酸-细胞膜纳米粒组（GP@RBC）(有细胞，无糖培养基，加药)、锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙-细胞膜酸纳米粒组（MP@RBC）(有细胞，无糖培养基，加药)，与4T1细胞一起在37℃、5％CO 2 的培养箱中温育3小时。
(3)完全培养基为含有10％胎牛血清，1％青霉素-链霉素双抗的RPMI培养基；无糖培养基为含有10％胎牛血清，1％青霉素-链霉素双抗的无糖RPMI培养基。
(4)除去不同的处理，并用完全培养基连续培养4T1细胞3小时。最后，每孔加入10μL CCK-8试剂溶液和100μL的完全培养基，在37℃、5％CO 2 的培养箱中温育2小时，最后用酶标仪测定450nm处的吸光度。
(5)数据处理。细胞存活率＝(OD 实验组 -OD 空白组 )/(OD 对照组 -OD 空白组 )*100％。
(6)结果如图4所示，通过不同的处理，在加入葡萄糖后与没有葡萄糖的培养基情况相比，①②两组中4T1细胞的增殖被显着抑制。此外，由于一氧化碳气体的产生可以显著地抑制肿瘤，用葡萄糖氧化酶-聚乳酸-羟基乙酸-细胞膜纳米粒组（GP@RBC）处理的4T1细胞的细胞存活率低于用葡萄糖氧化酶-锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸-细胞膜纳米粒组（MGP@RBC）处理的细胞存活率。所有这些结果表明，用红细胞膜包裹的载药PLGA纳米载体系统对癌细胞有较强的抑制作用，说明仿生生物酶催化产气杀伤肿瘤纳米粒具有很好的抗癌效果。
实施例6
(1)将4T1荷瘤小鼠（30-40 mm3）随机分为5组，分别静脉注射葡萄糖氧化酶-锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸-细胞膜纳米粒组（MGP@RBC），葡萄糖氧化酶-聚乳酸-羟基乙酸-细胞膜纳米粒组（GP@RBC），锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸-细胞膜纳米粒组（MP@RBC），葡萄糖氧化酶-锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸纳米粒组（MGP）（GOX 300μg/ mL，MnCO 120μg/ mL，200μl）和生理盐水。2周内重复注射4次。
(2)每天记录肿瘤大小和体重，并根据下式计算肿瘤体积：宽度2×长度/ 2，2周后处死小鼠。
(3)结果如图5所示，通过不同的处理，在乳腺癌荷瘤小鼠中评估抗肿瘤治疗的功效。与对照组相比，所有这些治疗都可以抑制肿瘤生长。MGP，GP @ RBC和MP @ RBC中的治疗抑制率约为29％，并且它们显示出相似的抗癌功效。而MGP @ RBC的抑制率达到77.4％，远高于其他三种疗法，该结果证明，肿瘤饥饿疗法和基于CO的气体疗法的组合应用有较好的抗肿瘤效果。
Claims (9)
1.一种生物酶催化产气抗肿瘤仿生纳米粒，其特征在于，以聚合物聚乳酸-羟基乙酸为材料制备纳米粒作为内核并包载葡萄糖氧化酶和锰羰基化合物，将红细胞膜作为衣壳包覆于纳米粒表面，制成生物酶催化产气抗肿瘤仿生纳米粒；其中，包被细胞膜囊膜之后最终粒径在150-160nm，平均Zeta在-5至-10mV，红细胞膜囊泡平均粒径为180-200nm，聚合物纳米内核平均粒径为140-150nm。
2.根据权利要求1所述的生物酶催化产气抗肿瘤仿生纳米粒，其特征在于，纳米粒包载的葡萄糖氧化酶的用量在5-10mg，锰羰基化合物的用量在2-4mg。
3.生物酶催化产气抗肿瘤仿生纳米粒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1) 将葡萄糖氧化酶溶于水中，配制成葡萄糖氧化酶溶液；将锰羰基化合物与聚乳酸-羟基乙酸溶于有机溶液中，配制成锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸溶液；将所有溶液置于1-5℃的环境中预冷，备用；
(2)将葡萄糖氧化酶溶液加入到锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸溶液中，超声乳化20~40s，制得W/O初乳，备用；
(3) 将W/O初乳立即转移到2%聚乙烯醇（PVA）溶液中，超声乳化1~2min，制得W/O/W复乳液，备用；
(4) 将W/O/W复乳液逐滴加入到0.6%聚乙烯醇（PVA）溶液中，挥化5~6h，待有机溶剂挥发完全后，将得到的纳米粒溶液以2000-3000 r/min离心去除大颗粒 ，14000 r/min离心并用PBS洗涤三次，得到葡萄糖氧化酶-锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸纳米粒MGP，备用；
(5) 将血液离心，PBS洗涤，将得到的红细胞重悬于低渗PBS溶液中，再次离心，重复重悬和离心直到上清液没有红色，将得到的红细胞膜衍生的囊泡储存于PBS中，备用；
(6) 采用挤压法，将步骤(4)中的葡萄糖氧化酶-锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸纳米粒MGP与步骤(5)中红细胞膜衍生的囊泡混合，通过数次孔径尺寸为200纳米的碳酸脂膜，即可得到仿生型纳米粒MGP@RBC。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，锰羰基化合物中的锰为零价，两个锥体Mn(CO)5通过Mn-Mn键连接且相互错开，属于D4d点群；其中Mn-Mn键的键长为239pm，红外振动光谱中有3个峰，分别是2044cm-1，中强峰；2013cm-1，强峰；1983cm-1，中强峰。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤1）中所述有机溶液为二氯甲烷与丙酮溶液按体积比为1：1混合而成。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，葡萄糖氧化酶溶液与锰羰基化合物-聚乳酸-羟基乙酸溶液的比例为1：10。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2) 、 (3)中超声乳化功率为200 ~300W。
8.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中，挥发时搅拌温度为室温，搅拌速度为500~600r/min。
9.权利要求1所述生物酶催化产气抗肿瘤仿生纳米粒在制备抗肿瘤药物中的应用。
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| Glucose-Responsive Sequential Generation of Hydrogen Peroxide and Nitric Oxide for Synergistic Cancer Starving-Like/Gas Therapy;Wenpei Fan et al;《Angew. Chem. Int. Ed.》;20161209;第56卷;第1229-1233页 * |
| Intratumoral H2O2-triggered release of CO from a metal carbonyl-based nanomedicine for efficient CO therapy;Zhaokui Jin et al;《ChemComm》;20171231;第53卷;第5557-5560页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN109846856A (zh) | 2019-06-07 |
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