CN109820821B - 一种有效抑菌的口腔用护理液 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种有效抑菌的口腔用护理液及其制备方法,所述口腔用护理液包含包括纳米抑菌因子和粘着增强剂;所述纳米抑菌因子为采用透析技术制备的D‑色氨酸和D‑组氨酸的纳米包封胶束粒子;所述粘着增强剂为羟丙基纤维素、透明质酸和甘油的组合物。采用两亲聚合物提高D‑色氨酸和D‑组氨酸的稳定性,促进D‑色氨酸和D‑组氨酸的黏膜渗透,减缓D‑色氨酸和D‑组氨酸的释放,释放时间长达48小时,延长了D‑色氨酸和D‑组氨酸的生物膜降解作用;选择最佳比例的羟丙基纤维素、透明质酸和甘油作为粘着增强剂,可延长口腔护理液中的抑菌因子在口腔粘膜表面的粘附时间,提高药物利用度,延长抑菌因子在口腔的作用时间,发挥更好的抑菌作用。
Description
技术领域
本申请涉及口腔用品领域,具体涉及一种增强和延长抑菌因子抑菌效果的口腔护理液。
背景技术
人类的口腔内的很多疾病均与细菌有关,如口腔菌群失调容易导致包括龋齿、牙周炎以及种植体周围炎等多种口腔疾病的发生。龋病是一种多因素的感染疾病,大量证据已表明细菌的存在是龋病发生的先决条件,而变异链球菌被认为是主要的致龋菌,并且变异链球菌形成生物膜的能力强于其它链球菌。多方面的研究也已经证实,龋病与牙菌斑生物膜关系密切,没有牙菌斑生物膜就不会产生龋齿。生物膜中细菌细胞的耐药性是浮游细菌细胞耐药性的1000倍,细菌耐药性的问题日益突出,迫使我们寻找其他方法来抑制口腔中的病原菌及其所形成的生物膜。目前已有大量的研究结果表明D-氨基酸通过作用于细菌的细胞壁、蛋白质及胞外基质抑制细菌生长及其生物膜的形成,参考文献“D-组氨酸抑制变异链球菌生物膜作用的研究,全旭等,《口腔医学研究》,2019年2月第35卷第2期”研究结果提示D-组氨酸可能是预防及治疗龋病的潜在有效成分。但该研究尚未完全模拟口腔内牙菌斑生物膜的复杂多样性,故D-氨基酸是否可以作为生物膜抑制剂还需要进一步研究。
由于人体口腔环境为开放性,受外界空气、饮食、腺体分泌物、肠胃环境以及全身疾病的影响,口腔给药后,药物有效果性成分在口腔内部的存留时间较短,特别是口腔护理液,药效时间非常短且不稳定。口腔黏膜粘附给药越来越受到研究者的重视。例如可延长在特定部位的停留时间,提高生物利用度;药物和活性成分可直接粘附于粘膜上,或将药物或活性成分直接放置于所需治疗部位,生物粘附在局部发挥更好的作用。但黏附给药的药剂剂型通常为凝胶类、涂敷类、粘膜类等,适用于治疗部位较小且集中时,口腔内部不同部位药物浓度不均一,且上药不便利。
CN104644478A公开了一种具有护理修复作用的杀菌型漱口液,漱口液成分如下:杀菌剂、护理修复成分、甜味剂、保湿剂、香精,余量为去离子水,由于漱口液采用葡萄糖酸氯己定、醋酸氯己定、聚六亚甲基双胍的一种或两种作为杀菌剂,长期使用容易导致牙渍沉积,从而限制了其应用。CN105726783A公开了一种具有抑菌作用的组合物及其制备方法,组合物的原料包括:壳聚糖、山梨醇、甘油、维生素C、山梨酸钾、白牙奇兰、纯净水。具有抑菌、止血和消炎作,它具有安全性更高的植物提取物成份,但是其抑菌效果并没有采用普通杀菌剂的效果好,且其生产成本高,不利于广泛生产使用。CN1415281A公开了一种防龋消炎漱口水,包括:IgY粗制剂,阿斯巴甜,香精等,以该IgY作为主要成分,可直接抑灭变链菌和口腔致病菌、无化学有害物质并可吞服的防龋消炎漱口水或含片。由于该抑菌因子与口腔粘膜接触时间较短,其杀菌抑菌效果有待提升。
因此,研究一种新型的高效抑菌、杀菌作用口腔护理液,能提高抑菌因子在口腔粘膜中的高药物渗透作用,又能提高抑菌因子在口腔粘膜上的附着时间,延长抑菌因子在口腔中抑菌作用,是目前亟需解决的技术问题。
发明内容
为解决上述技术问题,本发明提供一种有效抑菌的口腔用护理液,包括纳米抑菌因子和粘着增强剂:
所述纳米抑菌因子为采用透析技术制备的D-色氨酸和D-组氨酸的纳米包封胶束粒子,所述纳米抑菌因子以9%~15%重量存在于口腔护理液中。
所述粘着增强剂为羟丙基纤维素、透明质酸和甘油的组合物,所述粘着增强以5%~10%重量存在于口腔护理液中,其中羟丙基纤维素、透明质酸和甘油的重量份比例为3:5:2。
进一步的,所述口腔用护理液中所述纳米抑菌因子以10%重量存在于口腔护理液中;所述粘着增强剂以8%重量存在于口腔护理液中。
更进一步的,本发明还包括表面活性剂、着色剂、防腐剂、香精、溶剂;所述口腔用护理液:还包括0.1-0.2%表面活性剂、0.001-0.002%着色剂、0.1-0.15%防腐剂、0.2-0.4%香精、余量为溶剂;所述表面活性剂为聚甘油脂肪酸;所述着色剂选自胭脂红、柠檬黄、靛蓝;所述防腐剂选自苯甲酸钠、山梨酸钾;所述香精选自薄荷香精和茶香精,所述溶剂为纯净水。
本发明还提供一种上述有效抑菌的口腔用护理液制备方法:
步骤一:氨基酸纳米包封胶束粒子的制备:首先,按照重量比20:1:1获取两亲性聚合物PLGA-PEG、D-色氨酸和D-组氨酸;将称好的PLGA-PEG按照10mg/ml的比例溶解到N,N-二甲基甲酰胺中,搅拌过夜;将称好的D-色氨酸和D-组氨酸的,按照1mg/ml的比例溶解到0.5M(mol/L)HCL溶液中,充分搅拌使其溶解;将氨基酸溶液滴加到搅拌状态下的两亲性聚合物溶液中,然后继续搅拌45min,将混合溶液转移到透析袋中,放入Ph值=4的缓冲溶液中透析28h,透析过程中每7h更换一次缓冲液;透析结束后用0.34μm的滤膜过滤胶束溶液,最后真空冷冻干燥,得到氨基酸纳米胶束粒子粉。
步骤二:按用量比例称取将羟丙基纤维素、透明质酸和甘油,并将羟丙基纤维素、透明质酸和甘油先混悬分散在水中,搅拌溶胀,加入氨基酸纳米包封胶束粒子后搅拌使其充分均匀分散;
步骤三:将所述表面活性剂、着色剂、防腐剂、香精、溶剂,加入上述步骤二获得的混合溶液中;
步骤四:搅拌均匀,灌装,检验。
本发明的有益效果:
1、本发明采用透析技术制备了D-色氨酸和D-组氨酸的纳米粒子,采用两亲聚合物提高D-色氨酸和D-组氨酸的稳定性,促进D-色氨酸和D-组氨酸的黏膜渗透。体外释放试验结果表明,两亲聚合物可减缓D-色氨酸和D-组氨酸的释放,释放时间长达48小时,延长了D-色氨酸和D-组氨酸的生物膜降解作用。
2、本发明通过对透析制备法中透析液的pH值、溶剂的选择获得了最高9%的载药量和78%的包封率较高的氨酸的纳米粒子。
3、本发明选择最佳比例的羟丙基纤维素、透明质酸和甘油作为粘着增强剂,可延长口腔护理液中的抑菌因子在口腔粘膜表面的粘附时间,提高药物利用度;药物活性成分可直接粘附于口腔粘膜上,延长抑菌因子在口腔的作用时间,发挥更好的抑菌作用。
具体实施方式
在下文中更详细地描述了本发明以有助于对本发明的理解。
实施例1
步骤一:氨基酸纳米包封胶束粒子的制备:首先,按照重量比20:1:1获取两亲性聚合物PLGA-PEG、D-色氨酸和D-组氨酸;将称好的PLGA-PEG按照10mg/ml的比例溶解到N,N-二甲基甲酰胺中,搅拌过夜;将称好的D-色氨酸和D-组氨酸的,按照1mg/ml的比例溶解到0.5M(mol/L)HCL溶液中,充分搅拌使其溶解;将氨基酸溶液滴加到搅拌状态下的两亲性聚合物溶液中,然后继续搅拌45min,将混合溶液转移到透析袋中,放入Ph值=4的缓冲溶液中透析28h,透析过程中每7h更换一次缓冲液;透析结束后用0.34μm的滤膜过滤胶束溶液,最后真空冷冻干燥,得到氨基酸纳米胶束粒子粉。
步骤二:将2.4重量份的羟丙基纤维素、4.0重量份的透明质酸和1.6重量份甘油先混悬分散在水中,搅拌溶胀,加入10重量份氨基酸纳米包封胶束粒子后搅拌使其充分均匀分散。
步骤三:将0.1重量份表面活性剂、0.002重量份着色剂、0.15重量份防腐剂、0.3重量份香精、81.448重量份水,加入步骤二获得的混合溶液中。
步骤四:搅拌均匀,灌装,检验。
实施例2、
步骤一:采用实施例1的氨基酸纳米包封胶束粒子的制备方法,得到氨基酸纳米胶束粒子粉。
步骤二:将3重量份羟丙基纤维素、5重量份透明质酸和2重量份甘油先混悬分散在水中,搅拌溶胀,加入9重量份氨基酸纳米包封胶束粒子后搅拌使其充分均匀分散。
步骤三:将0.15重量份表面活性剂、0.002重量份着色剂、0.1重量份防腐剂、0.2香精、80.548重量份溶剂,加入步骤二获得的混合溶液中。
步骤四:搅拌均匀,灌装,检验。
实施例3
步骤一:采用实施例1的氨基酸纳米包封胶束粒子的制备方法,得到氨基酸纳米胶束粒子粉。
步骤二:将1.8重量份羟丙基纤维素、3.0重量份透明质酸和1.2重量份甘油先混悬分散在水中,搅拌溶胀,加入14重量份氨基酸纳米包封胶束粒子后搅拌使其充分均匀分散。
步骤三:将0.2重量份表面活性剂、0.001着色剂、0.12防腐剂、0.3香精、溶剂,加入步骤二获得的混合溶液中。
步骤四:搅拌均匀,灌装,检验。
实验一:
实验例1-4:步骤一与实施例1获得氨基酸纳米胶束粒子粉的方法基本相同,与实施例1的透析缓冲溶液的Ph值参数4不同,实验例1-4的透析缓冲溶液的Ph值参数设定为3,5,6,7;步骤二至四:与实施例1相同。分别对实施例1、实验例1-4进行粒径和Zeta电位值的测定。
实验结果:随着透析液pH值的升高,载氨基酸纳米胶束的粒径不断增大,在pH=4时,胶束内核比较紧实,粒径较小,粒径值为302nm;pH=5和pH=6时的粒径值变化不大,分别为433nm和415nm,当pH=7,粒径增大为553nm;而当pH=5-7时聚合物形成的胶束内核有点松散,胶束粒径较大。载氨基酸纳米胶束在pH=4时Zeta电位值较大,为++33mV;在pH=5、6、7时电位值较小,仅为+9mV、+15mV+2mV左右,也说明当pH=5-7时,胶束内核松散,胶束不够稳定。而在pH=3时粒径增大为517nm,电位值较小仅为+6mV,此时胶束内核较松散,胶束粒径较大。由此制备氨基酸纳米胶束粒子时透析液pH值的最佳选择为pH=4。
实验二
实验例5-6:步骤一与实施例1获得氨基酸纳米胶束粒子粉的方法基本相同,与实施例1的有机溶剂N,N-二甲基甲酰胺不同,实验例5-6选择乙酮和丙酮作为有机溶剂;步骤二至四:与实施例1相同。分别对实施例1、实验例5、实验例6采用RP-HPLC法测定包封率和载药量。
实验结果:当溶剂为乙酮时,载氨基酸纳米胶束的载药量和包封率较低,分别为3.94%和34.55%;当溶剂为丙酮时,载氨基酸纳米胶束的载药量和包封率稍有提升但仍旧较低,分别为4.83%和45.12%;当溶剂为N,N-二甲基甲酰胺时,载药量和包封率增大,其中,载药量为8.85%,包封率分别为68.08%。由此可知由于聚合物在不同溶剂中的溶解度不同,会影响两亲性聚合物和氨基酸初步形成胶束的速度以及均匀程度。溶剂N,N-二甲基甲酰胺为制备氨基酸纳米胶束粒子的最佳聚合物溶剂。
实验三 抑菌因子和粘着增强剂的协同抑菌试验
对比例2:抑菌因子采用实施例1的氨基酸纳米包封胶束粒子的制备方法,得到氨基酸纳米胶束粒子粉;选择粘着增强剂为羟丙基纤维素、透明质酸和甘油,比例为1:1:1;
对比例3:抑菌因子采用实施例1的氨基酸纳米包封胶束粒子的制备方法,得到氨基酸纳米胶束粒子粉;选择粘着增强剂为羟丙基纤维素、透明质酸和甘油,比例为3:2:1;其余步骤按照实施例1的方法制备获得口腔护理液;
对比例4:抑菌因子采用实施例1的氨基酸纳米包封胶束粒子的制备方法,得到氨基酸纳米胶束粒子粉;选择粘着增强剂为羟丙基纤维素、透明质酸和甘油,比例为1:2:3;其余步骤按照实施例1的方法制备获得口腔护理液;
对比例5:抑菌因子采用实施例1的氨基酸纳米包封胶束粒子的制备方法,得到氨基酸纳米胶束粒子粉;选择粘着增强剂为聚羧乙烯、透明质酸和甘油,比例为3:5:2;其余步骤按照实施例1的方法制备获得口腔护理液;
对比例6:抑菌因子采用实施例1的氨基酸纳米包封胶束粒子的制备方法,得到氨基酸纳米胶束粒子粉;选择粘着增强剂为羟丙基纤维素、聚羧乙烯和甘油,比例为3:5:2;其余步骤按照实施例1的方法制备获得口腔护理液;
对比例7:抑菌因子直接采用D-色氨酸和D-组氨酸的组合物,省略纳米胶束粒子的制备步骤,D-色氨酸和D-组氨酸用量与实施例1相同;选择粘着增强剂为羟丙基纤维素、透明质酸和甘油,比例为3:5:2;其余步骤按照实施例1的方法制备获得口腔护理液;
对比例8:抑菌因子采用实施例1的氨基酸纳米包封胶束粒子的制备方法,按照重量比20:2获取两亲性聚合物PLGA-PEG、D-色氨酸,得到氨基酸纳米胶束粒子粉;选择粘着增强剂为羟丙基纤维素、透明质酸和甘油,比例为3:5:2;其余步骤按照实施例1的方法制备获得口腔护理液;
对比例9:抑菌因子采用实施例1的氨基酸纳米包封胶束粒子的制备方法,按照重量比20:2获取两亲性聚合物PLGA-PEG、D-组氨酸,得到氨基酸纳米胶束粒子粉;选择粘着增强剂为羟丙基纤维素、透明质酸和甘油,比例为3:5:2;其余步骤按照实施例1的方法制备获得口腔护理液。
(一)口腔附着率以及释放量的试验方法:
口含上述实施例1、对比例2-6的口腔护理液和纯净水(空白对照)20ml,在口腔内保持10秒吐出,共口含3次,之后在1min、30min、1h分别使用100mL纯净水进行口含漱出,并收集所有的潄口液。将潄口液通过高效液相色谱检测各个时间段D-色氨酸和D-组氨酸的含量,最后计算得到含用口腔护理液后D-色氨酸和D-组氨酸在口腔内累积量总来对比各处理的附着率。
实验结果:对比例5-6在口腔的附着率非常低,分别是5.1%和10.9%;对比例2-4在口腔的附着率,稍有提高,分别为11.4%、17.1%和15.9%;而实施例1在口腔的附着率明显提高,至25.1%,说明粘着增强剂为羟丙基纤维素、透明质酸和甘油,比例为1:2:3,有利于提升口腔护理液中抑菌因子在口腔中的附着效果。
(二)抑菌因子对生物膜的抑菌试验方法:
在工作站中培养多种与龋病、牙龈炎、牙周炎及口臭病相关的口腔厌氧致病菌,形成口腔混合菌生物膜,并利用实施例1、对比例7-9的口腔护理液以及纯净水(空白对照)对生物膜进行抑菌实验。
实验结果:随着时间的延长细菌不断繁殖,导致活菌数不断增加。
使用对比例7作用生物膜3min后,在0和2h时,活菌数比较少,随着的时间的延长,活菌数不断增加。使用实施例1作用生物膜3min后,在0和2h时,活菌数要高于对比例7作用后的活菌数,但随着时间的延长,实施例1作用后的生物膜的活菌数增加缓慢,在第4和8h时,其活菌数都明显低对比例7作用后生物膜的活菌数。
而使用对比例8、9作用生物膜3min后,在0和2h时,活菌数要高于对比例7作用后的活菌数,随着的时间的延长,活菌数不断增加,在第4和8h时,对比例8、9的生物膜活菌数都稍低于对比例7明显但高于实施例1。
在0和2h时,对比例7的抑菌率分别为80.3%和71.5%,但到了第4,6和8h时,抑菌率下降为33.1%,23.2%和20.8%。在0和2h时,对比例8的抑菌率分别为40.5%和41.9%,但到了第4,6和8h时,抑菌率为30.1%,33.6%和30.8%。在0和2h时,对比例8的抑菌率分别为20.3%和35.9%,但到了第4,6和8h时,抑菌率为36.1%,30.6%和27.8%。而实施例1作用后的生物膜抑菌率在0和2h时分别为44.6%和57.2%,但随后抑菌率稳步提升,第4,6和8h时的抑菌率均明显高于对比例7-9作用后的抑菌率,第4,6,8h时的抑菌率达到了50.9%、47.7%、39.9%,说明实施例1相对于游离的D-色氨酸和D-组氨酸具有长效的抑菌效果,D-色氨酸和D-组氨酸配合使用且抑菌效果明显优于单独使用。
以上描述了本发明优选实施方式,然其并非用以限定本发明。本领域技术人员对在此公开的实施方案可进行并不偏离本发明范畴和精神的改进和变化。
Claims (5)
1.一种有效抑菌的口腔用护理液,其特征在于:所述口腔用护理液包含了纳米抑菌因子和粘着增强剂;所述纳米抑菌因子为采用透析技术制备的D-色氨酸和D-组氨酸的纳米包封胶束粒子,所述D-色氨酸和D-组氨酸的重量比为1:1,所述纳米抑菌因子以9%~15%重量存在于口腔护理液中;所述粘着增强剂为羟丙基纤维素、透明质酸和甘油的组合物,所述粘着增强剂以5%~10%重量存在于口腔护理液中;其中羟丙基纤维素、透明质酸和甘油的重量份比例为3:5:2;所述纳米抑菌因子的制备方法为:首先,按照重量比20:1:1获取两亲性聚合物聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇共聚物、D-色氨酸和D-组氨酸;将称好的聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇共聚物按照10mg/ml的比例溶解到N,N-二甲基甲酰胺中,搅拌过夜;将称好的D-色氨酸和D-组氨酸的,按照1mg/ml的比例溶解到0.5mol/L HCl溶液中,充分搅拌使其溶解;将氨基酸溶液滴加到搅拌状态下的两亲性聚合物溶液中,然后继续搅拌45min,将混合溶液转移到透析袋中,放入pH值=4的缓冲溶液中透析28h,透析过程中每7h更换一次缓冲液;透析结束后用0.34μm的滤膜过滤胶束溶液,最后真空冷冻干燥,得到氨基酸纳米胶束粒子粉。
2.如权利要求1所述的有效抑菌的口腔用护理液,其特征在于,口腔用护理液中所述纳米抑菌因子以10%重量存在于口腔护理液中;所述粘着增强剂以8%重量存在于口腔护理液中。
3.如权利要求1所述的有效抑菌的口腔用护理液,其特征在于所述口腔用护理液:还包括0.1-0.2%表面活性剂、0.001-0.002%着色剂、0.1-0.15%防腐剂、0.2-0.4%香精、余量为溶剂。
4.如权利要求3所述的有效抑菌的口腔用护理液,其特征在于:所述表面活性剂为聚甘油脂肪酸酯;所述着色剂选自胭脂红、柠檬黄、靛蓝;所述防腐剂选自苯甲酸钠、山梨酸钾;所述香精选自薄荷香精和茶香精,所述溶剂为纯净水。
5.如权利要求1-4任一项所述的有效抑菌的口腔用护理液的制备方法,其特征在于:
步骤一:氨基酸纳米包封胶束粒子的制备:首先,按照重量比20:1:1获取两亲性聚合物聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇共聚物、D-色氨酸和D-组氨酸;将称好的聚乳酸-羟基乙酸-聚乙二醇共聚物按照10mg/ml的比例溶解到N,N-二甲基甲酰胺中,搅拌过夜;将称好的D-色氨酸和D-组氨酸的,按照1mg/ml的比例溶解到0.5mol/L HCl溶液中,充分搅拌使其溶解;将氨基酸溶液滴加到搅拌状态下的两亲性聚合物溶液中,然后继续搅拌45min,将混合溶液转移到透析袋中,放入pH值=4的缓冲溶液中透析28h,透析过程中每7h更换一次缓冲液;透析结束后用0.34μm的滤膜过滤胶束溶液,最后真空冷冻干燥,得到氨基酸纳米胶束粒子粉;
步骤二:按用量比例称取将羟丙基纤维素、透明质酸和甘油,并将羟丙基纤维素、透明质酸和甘油先混悬分散在水中,搅拌溶胀,加入氨基酸纳米包封胶束粒子后搅拌使其充分均匀分散;
步骤三:将表面活性剂、着色剂、防腐剂、香精、溶剂,加入上述步骤二获得的混合溶液中;
步骤四:搅拌均匀,灌装,检验。
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PB01 | Publication | ||
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SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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GR01 | Patent grant | ||
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