CN109799309A

CN109799309A - 一种保泰松中残留溶剂的测定方法

Info

Publication number: CN109799309A
Application number: CN201910148073.8A
Authority: CN
Inventors: 孙婷; 张菁; 姜建国; 徐艳梅; 张西如; 王柳
Original assignee: Hebei Institute Of Pharmaceutical Inspection (hebei Cosmetics Inspection Research Center)
Current assignee: Sun Ting
Priority date: 2019-02-28
Filing date: 2019-02-28
Publication date: 2019-05-24

Abstract

一种保泰松中残留溶剂的测定方法，其采用气相色谱法进行分离，顶空进样，进样量1mL，采用火焰离子化检测器进行检测，分流比为5:1，载气为氮气，流速2.0mL/min，色谱柱采用以5%‑二苯基‑95%‑二甲基聚硅氧烷为固定相，柱长度30m，内径0.32mm，固定相涂膜厚度0.25μm的毛细管柱。本发明技术方案适合同时测定保泰松原料药中甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、N，N‑二甲基甲酰胺的含量，通过对原料中残留溶剂的控制，能够较好地控制该制剂的药用质量，提高制剂安全保证。

Description

一种保泰松中残留溶剂的测定方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种药物中残留溶剂的测定方法，更具体的涉及一种保泰松中多种残留溶剂的测定方法。

背景技术

国外早在第二次世界大战之后便开始使用非甾体抗炎药保泰松。目前不同厂家市售保泰松原料药共涉及三种工艺，经过调研，这些生产工艺涉及到的残留溶剂包括甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和N，N-二甲基甲酰胺6种溶剂，其中，甲醇残留可导致失明、肝病、甚至死亡；乙醇残留可导致急性中毒；异丙醇残留可导致中枢神经系统衰弱；乙酸乙酯残留可导致患者恶心、呕吐、腹痛、腹泻、倦睡、昏迷甚至死亡等；N，N-二甲基甲酰胺残留可导致急性毒性；二氯甲烷属于二类残留溶剂且具有一定的毒性。而保泰松原料的质量标准多年未提高，至今现行质量标准仍收载于卫生部药品标准二部第五册（中国药典中无此品种），且该标准中未对甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和N，N-二甲基甲酰胺的残留量作具体要求。不仅在国家颁布的成册标准及药典中没有可用的方法，且在其他文献中，也尚未见到测定保泰松原料中甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和N，N-二甲基甲酰胺残留量的报道，而原料的质量对制剂有直接影响，把控生产源头质量至关重要。因此，现有技术需要一种可以测定尤其是同时测定以上多种残留溶剂量的方法，不仅可以对保泰松原料中上述6种杂质加以控制，以降低保泰松制剂产品的使用风险，还能给检测工作带来方便。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能够快速、准确且方便地同时测定保泰松原料中6种残留溶剂的方法。

本发明所提供的技术方案为：

一种保泰松中残留溶剂的测定方法，其采用气相色谱法进行分离，顶空进样，进样量1mL，采用火焰离子化检测器进行检测，分流比为5:1，载气为氮气，流速2.0mL/min，色谱柱采用以5%-二苯基-95%-二甲基聚硅氧烷为固定相，柱长度30m，内径0.32mm，固定相涂膜厚度0.25μm的毛细管柱。

进一步地，本发明所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其中，所述残留溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯或N，N-二甲基甲酰胺中的一种或多种。

进一步地，本发明所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其中，所述色谱柱型号选自HP-5和DB-5。

进一步地，本发明所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其中，所述顶空进样的平衡温度为60℃，平衡时间为25~35min。

进一步优选地，本发明所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其中，所述平衡时间为30min。

进一步地，本发明所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其中，所述色谱柱的柱温按照如下方式控制：初始温度40℃，保持5min；以5℃/min速率升温至150℃；再以30℃/min速率升温至250℃。

上述柱温控制方式中的40℃、150℃以及250℃，在实际操作中可以在±2℃范围内波动，均可以达到本发明目的。

进一步地，本发明所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其中，进样口温度200℃。

进一步地，本发明所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其中，检测器温度为250℃。

进一步地，本发明所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其采用外标法，以对照品溶液和供试品溶液分别进样后计算保泰松原料中的残留溶剂量。

进一步地，本发明所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其中，所述供试品溶液或对照品溶液以体积比为30：70~70：30的DMSO-水作为溶剂溶解供试品或对照品制成。

优选地，本发明所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其中，所述供试品溶液或对照品溶液以体积比为50：50的DMSO-水作为溶剂溶解供试品或对照品制成。

本发明技术方案可取得的技术效果为：

1、发明人调查了现有市售保泰松原料的合成工艺，主要有三条工艺路线，分别涉及不同的溶媒残留，本发明技术方案检测的残留溶剂包含了所有路线中涉及到的可能出现的残留溶剂，本发明通过顶空条件、升温程序、色谱柱选择、溶剂选择等条件地优化，开发出了适合保泰松原料地溶剂残留检测方法，填补了本品原料药溶媒残留检测方法方面的空白。

2、甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺均为中、低沸点的有机挥发性溶剂，可以采用更为简便的直接进样法，发明人最初尝试直接进样法，但发现干扰较为严重，因此，本发明选择准确度灵敏度更高的顶空气相色谱法进行保泰松原料药中6种残留溶剂的测定。

3、本发明对顶空进样的温度和时间考察时发现，顶空平衡温度为60℃，顶空平衡时间为25~35min时，各溶剂均有良好的响应。在平衡温度30min条件下，平衡时间为50℃时各溶剂峰面积均不足平衡时间为60℃时的50%，60℃~70℃之间，平衡相同时间，各溶剂峰面积不再有明显增长；确定平衡温度为60℃，峰面积在25~35min左右时，色谱峰面积达到了最大，以后随着平衡温度的增加峰面积增加不明显，因此选择25~35min作为平衡时间。

4、为使方法更简便，发明人曾尝试只用水或有机溶剂溶解进样，但在实际操作过程中发现，只用水作为溶剂，无法将所要检的6种残留溶剂全部检出，且方法精密度较差，而采用有机溶剂，检出溶剂情况和精密度方面虽有提高，但方法灵敏度大大降低，无法满足国家对药物中残留溶剂的控制要求，因此，发明人尝试采用水-DMSO作为溶剂，当水比例在30%~70%（V/V）时，6种溶剂均可以全部检出，且精密度和方法灵敏度均较好，能满足国家对药品残留溶剂的控制要求，最终，在尝试用DMSO-水的比例为50：50（V/V）时，甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和N，N-二甲基甲酰胺峰面积的RSD分别为1.49%、0.15%、0.14%、1.55%、0.20%、1.87%（n=6），方法灵敏度良好，甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和N，N-二甲基甲酰胺的检测限分别达到1.5、2.5、2.5、0.3、2.5、0.44μg/mL，定量限分别达到5、8.3、8.3、1、8.3、1.5μg/mL，满足国家对药物中残留溶剂的控制要求。本发明条件下，采用比例为50：50（V/V）的DMSO-水作为溶剂，与采用比例为20：80（V/V）的DMSO-水相比，前者的检测限为后者的1/10，前者灵敏度明显提高。

5、发明人通过优化柱温升温程序同时尝试使用不同色谱柱改善分离条件，由于被分离的溶剂种类较多，色谱柱的选择还要结合升温程序确定，最终，本发明的发明人意外地发现，采用5%-二苯基-95%-二甲基聚硅氧烷为固定相，柱长度30m，内径0.32mm，固定相涂膜厚度0.25μm的毛细管柱结合本发明的升温程序，能够使甲醇等6种溶剂在较短的时间，大约30min左右实现分离，并且分离良好。在方法的优化过程中，每个样品分离时间由最初达到分离的方案的时间55min缩短至本发明的约30min，提高工作效率近一倍，方便药品日常检测。

6、经方法学验证，在该色谱条件下，各被测成分均能达到基线分离，分离度大于1.5，其他成分对待测成分的测定无干扰，理论板数以甲醇峰计为8976，可证明该气相色谱条件具有良好的系统适用性，适合测定保泰松原料药中甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺的含量，通过对原料中残留溶剂的控制，能够较好地控制该制剂的药用质量。

附图说明

附图1混合对照品图谱；

附图2供试品图谱；

附图3空白对照图谱；

其中，1.乙醇，2.甲醇，3.异丙醇，4.二氯甲烷，5.乙酸乙酯，6.N，N-二甲基甲酰胺。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐述本发明，在以下各实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法，所用试剂未标明来源和规格的均为市售分析纯或色谱纯。

实施例1 方法学验证

（1）仪器

GC-2010 plus气相色谱仪,包括氢火焰离子化检测器（日本岛津公司）；MCM36百万分之一电子分析天平（德国Sartorius公司）；XS205十万分之一电子分析天平（瑞士Mettler-Toledo公司）。

（2）药品与试剂

保泰松原料药（A公司，批号：20170101A；B公司，批号：20170102B；C公司，批号：20170103C）；甲醇对照品（批号：10914207741，纯度：≥99.9%）、乙醇对照品（批号：130106-200901，纯度：≥99.0%）、异丙醇对照品（批号：GZDD-2477，纯度：≥96.64%）、二氯甲烷对照品（批号：130107-200901，纯度：≥99.6%）、乙酸乙酯对照品（批号：141-78-6，纯度：≥99.0%）、N，N-二甲基甲酰胺对照品（批号：68-12-2，纯度：≥99.0%）均购于美国Merck公司；二甲基亚砜（DMSO）为色谱纯，水为纯化水。

（3）色谱条件

色谱柱：HP-5（30m×0.32mm×0.25μm）；检测器：火焰离子化检测器(FID)；分流比：5：1；载气：氮气（N₂）；流速（mL/min）：2.0；顶空进样，进样量：1mL。色谱条件与系统适用性试验用HP-5型毛细管柱（（5%）-二苯基（95%）-二甲基聚硅氧烷为固定相的毛细管柱）；柱温：初始温度40℃，保持5min；以5℃/min速率升温至150℃；再以30℃/min速率升温至250℃。进样口温度200℃，检测器温度为250℃。

（4）溶液的制备

对照品贮备液：分别精密量取甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺对照品溶液适量，用DMSO-水（50：50，V/V）溶解并配制成1.5、2.5、2.5、0.3、2.5、0.44mg/mL，作为对照品贮备液。

混合对照品溶液：分别精密量取上述对照品贮备液各1mL，置于同一10mL量瓶中，用DMSO-水（50：50，V/V）溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品溶液。

供试品溶液：取保泰松原料药适量，精密称定，加DMSO-水（50：50，V/V）溶解并定量稀释制成每1mL中含1mg的溶液，作为供试品溶液。

空白对照溶液：取DMSO-水（50：50，V/V）适量作为空白对照溶液。

（5）系统适用性试验

精密量取上述混合对照品溶液、供试品溶液和空白对照溶液各适量，按（3）中色谱条件进样测定，记录色谱。结果，在该色谱条件下，各成分均能达到基线分离，分离度大于1.5，其他成分对待测成分的测定无干扰，理论板数以甲醇峰计为8976，甲醇的保留时间约为6.0min，详见附图1~3。

（6）线性关系考察

分别精密量取混合对照品溶液0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、3.0mL，置于10mL量瓶中，用DMSO-水（50：50，V/V）溶解并稀释至刻度，摇匀。按（3）中色谱条件分别精密进样1mL，记录色谱图，以待测成分质量浓度为横坐标（x）、峰面积为纵坐标（y）进行线性回归，得甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和N，N-二甲基甲酰胺的回归方程分别为y=0.8325x+0.0006（r=0.9999，n=6)、y=0.5925x+0.0253（r=0.9997，n=6)、y=0.6165x+0.0195（r=0.9997，n=6)、y=0.8922x-0.0013（r=0.9993，n=6)、y=0.5950x+0.0239（r=0.9993，n=6)、y=1.0264x-0.0027（r=0.9993，n=6)。结果表明，甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和N，N-二甲基甲酰胺检测质量浓度线性范围分别为15～450、25～750、25～750、3～90、25～750、4.5～132μg/mL。

（7）检测限与定量限考察

精密量取混合对照品溶液适量，等倍逐步稀释，按（3）色谱条件精密进样1mL，记录峰面积。当信噪比为3:1时，得检测限；当信噪比为10:1时，得定量限。结果，甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和N，N-二甲基甲酰胺的检测限分别为1.5、2.5、2.5、0.3、2.5、0.44μg/mL，定量限分别为5、8.3、8.3、1、8.3、1.5μg/mL。

（8）精密度试验

精密量取混合对照品溶液适量，按（3）色谱条件连续进样测定6次，记录峰面积。结果，甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和N，N-二甲基甲酰胺峰面积的RSD分别为1.49%、0.15%、0.14%、1.55%、0.20%、1.87%（n=6），表明仪器精密度良好。

（9）稳定性试验

精密量取供试品溶液（批号：20170101A）适量，分别于室温下放置0、1、2、4、6、8h时按（3）项下色谱条件精密量取1mL，注入气相色谱仪，记录色谱图。结果，计算甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺峰面积的RSD分别为1.5%、1.6%、1.4%、1.7%、1.8%、1.3%（n=6），表明供试品溶液在室温下放置8h内稳定性良好。

（10）重复性试验

取同一批样品（批号：20170101A）适量，共6份，制备供试品溶液，再（3）色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺峰面积的RSD分别为0.48%、0.09%、0.11%、1.78%、0.11%、1.00%（n=6），表明本方法重复性良好。

（11）加样回收率试验

精密称取样品（批号：20170101A）适量，共9份，每份约100mg，各置于10mL量瓶中，分别加入低、中、高质量的甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和N，N-二甲基甲酰胺对照品，制备供试品溶液，再（3）色谱条件进样测定，记录峰面积并计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果(n=9)

通过方法学验证考察，可以看出，本发明技术方案，方法精密、准确、专属性强，该方法稳定可靠，重复性好，操作方便，材料易得。

实施例2 样品中残留溶剂测定

中国药典2015年版第四部0861残留溶剂测定法中，规定了药品中残留溶剂应不超过以下限度要求：甲醇0.3%、乙醇0.5%、异丙醇0.5%、二氯甲烷0.06%、乙酸乙酯0.5%、N，N-二甲基甲酰胺0.088%。

取实施例1中的3批样品各适量，分别按实施例1中方法制备供试品溶液，再按实施例1中色谱条件进样测定，记录峰面积并按外标法计算甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、N，N-二甲基甲酰胺的残留量，测定结果见表2。

表2 残留量测定结果（n=3）

从检测结果可知，本发明方法可作为保泰松原料日常检验方法。对溶媒残留水平监控、原料工艺变化参数监控具有重要意义，对保泰松制剂安全性带来有效保证。

Claims

1.一种保泰松中残留溶剂的测定方法，其特征在于：采用气相色谱法进行分离，顶空进样，进样量1mL，采用火焰离子化检测器进行检测，分流比为5:1，载气为氮气，流速2.0mL/min，色谱柱采用以5%-二苯基-95%-二甲基聚硅氧烷为固定相，柱长度30m，内径0.32mm，固定相涂膜厚度0.25μm的毛细管柱。

2.如权利要求1所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其特征在于：所述残留溶剂选自甲醇、乙醇、异丙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯和N，N-二甲基甲酰胺中的一种或多种。

3.如权利要求1或2所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其特征在于：所述色谱柱型号为HP-5。

4.如权利要求1或2所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其特征在于：所述顶空进样的平衡温度为60℃，平衡时间为25~35min。

5.如权利要求1或2所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其特征在于：所述色谱柱的柱温按照如下方式控制：初始温度40℃，保持5min；以5℃/min速率升温至150℃；再以30℃/min速率升温至250℃。

6.如权利要求1或2所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其特征在于：进样口温度200℃。

7.如权利要求1或2所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其特征在于：检测器温度为250℃。

8.如权利要求1或2所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其特征在于：其采用外标法，以对照品溶液和供试品溶液分别进样后计算保泰松原料中的残留溶剂量。

9.如权利要求1或2所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其特征在于：所述供试品溶液或对照品溶液以体积比为30：70~70：30的DMSO-水作为溶剂溶解供试品或对照品制成。

10.如权利要求1或2所述的保泰松中残留溶剂的测定方法，其特征在于：所述供试品溶液或对照品溶液以体积比为50：50的DMSO-水作为溶剂溶解供试品或对照品制成。