CN109789210A - 用于治疗癌症的胰高血糖素受体拮抗剂和pi3k途径抑制剂的组合 - Google Patents

用于治疗癌症的胰高血糖素受体拮抗剂和pi3k途径抑制剂的组合 Download PDF

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Abstract

本公开内容涉及治疗患有癌症的受试者的组合治疗方法，所述方法包括向受试者施用a)有效量的包含磷脂酰肌醇3‑激酶(PI3K)途径抑制剂或其药学上可接受的盐的药物组合物，和b)有效量的包含胰高血糖素受体拮抗剂的药物组合物。

Description

用于治疗癌症的胰高血糖素受体拮抗剂和PI3K途径抑制剂的 组合
相关专利申请
本申请要求于2016年8月3日提交的美国临时申请第62/370,642号的权益，该申请通过引用以其整体并入本文。
技术领域
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)是脂质激酶，在细胞代谢、细胞周期、凋亡、DNA修复、衰老、血管生成和运动的调节中发挥核心作用(Cantley LC，Science，296(5573)：1655-1657，2002)。PI3K信号传导调节广泛的细胞过程，包括蛋白合成、细胞存活、增殖、分化、衰老、运动、血管生成和代谢。在产生第二信使(PIP3，PI 3，4-二磷酸)后，PI3K信号传导影响多种包含普列克底物蛋白(pleckstrin)同源(PH)结构域的细胞内信号传导蛋白，并间接触发事件级联，该事件级联最终激活多种效应激酶途径，包括AKT、mTOR、ERK1/2、p38MAPK、NFκB和JNK/SAPK途径，并最终导致正常细胞的存活和生长(同上)。尽管PI3K的活性在正常细胞中受到诸如PTEN(从10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白的同源物)等内部信号的严格调节，但已经认识到PI3K信号传导途径的失调(deregulation)与三分之一的人类癌症的发展相关(Arteaga CL，Curr Top Microbiol Immunol.，347：189-208，2010；Liu P，Nat Rev DrugDiscov.，8(8)：627-644，2009)。驱动癌症中PI3K途径的遗传畸变包括PI3K的基因扩增、PTEN调节活性的丧失、以及受体酪氨酸激酶(RTK)诸如EGFR和HER2的激活突变(EngelmanJA，Nat Rev Cancer.，9(8)：550-562，2009)。
两种PI3K同种型(PIK3α和PI3Kβ)对于介导控制包括葡萄糖稳态和脂肪生成的全身代谢的胰岛素的作用至关重要(Wei等人，Vaccine 33，7401-7407，2015)。在肝中，胰岛素受体(IR)被胰岛素激活刺激葡萄糖的利用和储存为糖原和脂质，同时抑制糖异生。胰岛素信号传导还调节外周组织诸如肌肉和脂肪组织中的葡萄糖的摄取和利用。有缺陷的胰岛素信号传导与1型糖尿病(T1D)、2型糖尿病(T2D)和其他代谢综合征相关(Moller和Kaufman，Annual review of medicine 56，45-62，2005)。除胰岛素外，外周细胞代谢还受胰岛素样生长因子(IGF1、IGF2)通过与胰岛素样生长因子受体1结合的作用控制(LeRoith和Yakar，Nat Clin Pract End Met 3，302-310，2007)。
在外周组织中，PI3K途径抑制剂(PI3Ki)已经成为新型抗癌疗法的可行靶。成功的药物设计已经产生了三类强效且选择性的小分子抑制剂，它们已经从后期临床前测试发展到临床开发的不同阶段。在过去的几年中，已经开发了几类强效且选择性的小分子PI3K途径抑制剂，并且至少十五种化合物已经作为新的抗癌药物发展进入临床试验(Akinleye等人，Journal of Hematology&Oncology，6：88，2013)。不幸的是，由于靶覆盖率低，迄今为止的临床益处令人失望，并且许多PI3K途径抑制剂在动物研究中显示出相当大的毒性，并且由于这种药物限制尚未进展到临床评价。
高血糖症、高胰岛素血症、胰岛素耐受性和体重减轻是在用PI3Ki治疗的受试者中观察到的剂量限制性毒性(dose limiting toxicity)(Smith，G.C.等人，Biochem J，442(1)：161-9，2012)。例如，1)高血糖症通过增加葡萄糖利用和有氧糖酵解来压倒(override)肿瘤中PI3Ki的代谢作用，从而促进肿瘤葡萄糖摄取，这驱动细胞生长和复制，而与PI3K抑制无关(Ward等人，Cancer Cell.21(3)：297-308，2012)，2)高胰岛素血症通过刺激肿瘤IR和IGF1R混合受体信号传导来拮抗PI3Ki；以及3)由PI3Ki诱发的T1D样症状是剂量限制性的，并且严重地限制了肿瘤靶覆盖率(Fritsch，C，等人，Mol Cancer Ther，2014.13(5)：1117-29，2014)。用PI3K抑制剂观察到的毒理学未被用于控制糖尿病的药物正常化(例如，用GSK690693治疗CD-17 scid小鼠强效地诱发了高血糖症。该作用未被用于治疗临床糖尿病的几种药物阻止或降低，所述药物包括马来酸罗格列酮、维格列汀、二甲双胍和激动肽(Exendin)-4；参见Crouthamel等人，Clin Cancer Res，15：217-225，2009)。在啮齿动物中由AKT抑制剂(PI3K的直接靶)诱发的高血糖症能够通过禁食被部分地解决，但是高胰岛素血症并未被降低。因此，高PI3K覆盖率在肿瘤学中似乎将是无法实现的，因为假设在没有胰岛素信号传导的情况下葡萄糖就不能够被调节。
循环葡萄糖和代谢稳态受同样重要的胰岛素和胰高血糖素的相反作用的调节(Unger和Cherrington，J Clin Invest.，122：4-12，2012)。肝胰高血糖素受体(GCGR)的激活直接负责对减少的肝葡萄糖摄取、增加的肝糖原分解、增加的肝糖异生、增加的生酮和减少的糖原合成，所有这些都会增加循环葡萄糖(Unger和Orci，Lancet，1：14-16，1975)。胰高血糖素的主要靶器官是肝，在那里GCGR以独特的高水平被表达。在肝细胞中GCGR的激活刺激用于糖原分解和肝糖异生的关键酶的合成和生化活性，导致肝葡萄糖输出增加。GCGR以低得多的水平在其他重要器官(例如小肠、心脏、脑等)中被表达。然而，这些器官中的受体活性在循环葡萄糖的调节中不太重要。已经证明，在T2D模型中，使用与人类GCGR特异性结合并拮抗的分离的拮抗性抗原结合蛋白靶向胰高血糖素的产生或功能能够控制和降低血糖，并且提高葡萄糖耐量(glucose tolerance)(参见，例如，美国专利第7,947,809号(Yan等人))；并且在1型糖尿病(T1D)模型中，能够在完全不存在胰岛素治疗的情况下使血糖和血红蛋白A1c水平正常化(参见，例如PCT WO 2015/189698(Hai和Shi))。鉴于T2D和T1D的几个突出特征(包括高血糖症、高胰岛素血症、体重减轻、增加的胰岛素耐受性和减少的胰岛素产生)与使用PI3K途径抑制剂治疗癌症相关，致力于开发新的用于癌症，例如卵巢癌和乳腺癌的治疗的研究(research)，能够从评价这样的拮抗性抗原结合蛋白有效治疗患有癌症或已经被诊断为患有癌症的受试者的作用的研究(study)中受益。
本文提及的所有出版物、专利、专利申请和公布的专利申请的公开内容在此通过引用以其整体并入本文。
本发明的公开内容
本公开内容部分地基于发明人的独特见解，即PI3K途径抑制剂的临床益处令人失望，这不仅是由于低靶覆盖率，而是且由于用PI3K途径抑制剂治疗患者诱发的明显的代谢重编程(metabolic reprogramming)。本发明人提出(propose)，为了防止这样的代谢重编程的目的，在糖尿病的和非糖尿病的癌症受试者中GCGR抑制应以下列一种或更多种方式加强PI3K途径抑制剂的功效：1)过量葡萄糖对肿瘤的生长促进作用将会减少；2)PI3K诱发的高血糖症和高胰岛素血症的降低将降低对PI3K途径抑制剂的拮抗作用；3)葡萄糖正常化应延长MTD，能够增加PI3K靶覆盖率；和4)GCGR阻断可以通过增加PTEN活性加强肝中的胰岛素信号传导的PI3K抑制。
因此，在一个方面，本公开内容提供了治疗患有癌症的受试者的组合治疗方法，所述方法包括向受试者施用a)有效量的包含磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)途径抑制剂或其药学上可接受的盐的药物组合物，和b)有效量的包含胰高血糖素受体拮抗剂的药物组合物。在多个实施方案中，组合治疗方法包括施用有效量的包含PI3K途径抑制剂或其药学上可接受的盐、以及胰高血糖素受体拮抗剂抗体的药物组合物。
在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂是选自由以下组成的组的PI3K抑制剂：PI3Kα抑制剂、PI3Kβ抑制剂、PI3Kγ抑制剂、PI3Kδ抑制剂和泛PI3K同种型抑制剂。在多个实施方案中，PI3K抑制剂选自由以下组成的组：GDC-0941(Genentech)、BKM120(NVP-BKM120)(Novartis)、XL147(Sanofi)、PX-866(Oncothyreon)、BAY806946(Bayer)、CH5132799(Chugai)、BYL719(NVP-BYL719)(Novartis)、MLN1117(Millennium)、AZD8186(Astra-Zeneca)、SAR260301(Sanofi)、GSK2636771(Glaxo Smith Kline)、GS-1101(Gilead)、AMG319(Amgen)、GS-9820(Gilead)、IPI-145(Infinity)、GDC-0032(Genentech)和GDC-0084(Genentech)。在多个实施方案中，PI3K抑制剂是BYL719。
在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂是胰岛素样生长因子受体1(IGFR1)小分子酪氨酸激酶抑制剂或胰岛素样生长因子受体1(IGFR1)单克隆抗体。在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂是选自由以下组成的组的IGFR1酪氨酸激酶抑制剂：BMS 754807(BMS)、INSM-18(Insmed/UCSF)、OSI-906(linsitinib)(Osi Pharmaceuticals)、XL-228(Exelixis)、GSK1904529A(GSK)、ABDP(AZ)、A-928605(Abbott)、AXL1717(PPP)(Alexar)、KW-2450(KyowaKirin)、NVP-ADW742(Novartis)、NVP-AEW541(Novartis)、AG-1024(Merck)、BMS-536924(BMS)、BMS-554417(BMS)和BVP-51004(Biovitrum)。在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂是选自由以下组成的组的IGFR1单克隆抗体：MK 0646(dalotuzumab)(Merck)、AMG 479(ganitumumab)(Amgen)、A12(西妥木单抗(cixutumumab))(ImClone)、CP 751,871(figitumumab)(Pfizer)、AVE1642(Sanofi-Aventis)、Sch717454(罗妥木单抗(robatumumab))(Schering-Merck)、R 1507(Roche)、BIIB022(Biogen Idec)、h10H5(Genentech)、MEDI-573(Medimmune)和BI836845(Boehringer-Ingleheim)。
在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂是选自由以下组成的组的AKT激酶抑制剂：米替福新(miltefosine)、哌立福辛(perifosine)、PF-04691502、CCT128930、A-674563、MK-2206(Merck)、RX-0201、PBI-05204、AZD5363(Astra-Zeneca)、AKTi-1/2、AT7867、AT13148、GDC-0068(Ipatasertib)(Genentech)、TIC10、SC79、GSK690693、GSK2110183和GSK2141795(Glaxo Smith Kline)。
在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂是选自由以下组成的组的mTOR抑制剂：西罗莫司(sirolimus)、RAD001(依维莫司(everolimus))(Novartis)、CCI-779(坦罗莫司(temsirolimus))(Wyeth-Pfizer)、ABT578、SAR543、子囊霉素、地磷莫司(ridaforolimus)、AP23573(deforolimus)(Ariad/Merck)、AP23841、KU-0063794、INK-128、EX2044、EX3855、EX7518、MK-8669、AZD08055、MLN0128、AZD2014、CC-223和OSI027。
在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂是选自由以下组成的组的泛PI3K/mTOR抑制剂：NVP-BEZ235(Novartis)、NVP-BGT226(Novartis)、XL765(Sanofi)、GSK1059615(GlaxoSmith Kline)和GDC-0980(Genentech)。
在多个实施方案中，胰高血糖素受体拮抗剂是与人类胰高血糖素受体特异性结合的分离的拮抗性抗原结合蛋白。在多个实施方案中，分离的拮抗性抗原结合蛋白包括选自由以下组成的组的抗体：完全人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、抗原结合性抗体片段、Fab、Fab’、Fab2、Fab’2、IgG、IgM、IgA、IgE、scFv、dsFv、dAb、纳米抗体、单抗体和双抗体。在多个实施方案中，抗体是完全人类单克隆抗体。
在多个实施方案中，分离的抗体或抗原结合性抗体片段以至少约1×10-7M、至少约1×10-8M、至少约1×10-9M、至少约1×10-10M、至少约1×10-11M或至少约1×10-12M的解离常数(KD)与人类胰高血糖素受体特异性结合。
在多个实施方案中，分离的拮抗性抗原结合蛋白包括包含SEQ ID NO：2的编码重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO：3的编码轻链可变区的氨基酸序列的抗体。在多个实施方案中，分离的拮抗性抗原结合蛋白包括包含SEQ ID NO：4的编码重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO：5的编码轻链可变区的氨基酸序列的抗体。在多个实施方案中，分离的拮抗性抗原结合蛋白包括包含SEQ ID NO：6的编码重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO：7的编码轻链可变区的氨基酸序列的抗体。在多个实施方案中，分离的拮抗性抗原结合蛋白包括包含SEQ ID NO：8的编码重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO：9的编码轻链可变区的氨基酸序列的抗体。
在多个实施方案中，癌症选自由以下组成的组：B细胞淋巴瘤；肺癌(小细胞肺癌和非小细胞肺癌)；支气管癌；结肠直肠癌；前列腺癌；乳腺癌；胰腺癌；胃癌；卵巢癌；膀胱癌；脑或中枢神经系统癌；周围神经系统癌；食管癌；宫颈癌；黑素瘤；子宫癌或子宫内膜癌；口腔或咽癌症；肝癌；肾癌；胆道癌；小肠或阑尾癌；唾液腺癌；甲状腺癌；肾上腺癌；骨肉瘤；软骨肉瘤；脂肪肉瘤；睾丸癌；和恶性纤维组织细胞瘤；皮肤癌；头颈癌；淋巴瘤；肉瘤；多发性骨髓瘤；和白血病。在多个实施方案中，受试者先前对用抗癌疗法的治疗响应，但是在治疗停止后，遭受复发(下文称为“复发性癌症”)。在多个实施方案中，受试者患有对使用单独的PI3K途径抑制剂、使用单独的另一种抗癌剂或使用与另一种抗癌剂组合的PI3K途径抑制剂的治疗是耐受性或难治性的癌症。
在多个实施方案中，组合治疗方法包括以同一药物组合物或以分开的药物组合物同时地施用PI3K途径抑制剂和胰高血糖素受体拮抗剂。在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂组合物和胰高血糖素受体拮抗剂组合物被依次地施用，即，在施用胰高血糖素受体拮抗剂组合物之前或之后施用PI3K途径抑制剂组合物。在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂组合物和胰高血糖素受体拮抗剂组合物的施用是并行地进行的，即，PI3K途径抑制剂组合物的施用时间段和胰高血糖素受体拮抗剂组合物的施用时间段彼此重叠。在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂组合物和胰高血糖素受体拮抗剂组合物的施用是非并行地进行的，例如，在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂组合物的施用在胰高血糖素受体拮抗剂组合物被施用之前终止，并且在多个实施方案中，胰高血糖素受体拮抗剂组合物的施用在PI3K途径抑制剂组合物被施用之前终止。
在多个实施方案中，该方法还可以包括一种或更多种选自由以下组成的组的另外疗法：施用抗肥胖剂(包括食欲阻抑剂)、抗糖尿病剂、抗高血糖剂、降脂剂、抗高血压剂、免疫疗法、化学疗法、小分子激酶抑制剂靶向疗法、手术、放射疗法和干细胞移植。
在另一个方面，本公开内容涉及一种药物组合物，所述药物组合物包含PI3K途径抑制剂和/或胰高血糖素受体拮抗剂，与一种或更多种药学上可接受的运载体(carrier)。在多个实施方案中，药物组合物被配制成通过选自由以下组成的组的途径被施用：皮下注射、腹膜内注射、肌内注射、胸骨内注射、静脉内注射、动脉内注射、鞘内注射、脑室内注射、尿道内注射、颅内注射、滑膜内注射和通过输注。
附图简述
图1是用于确定REMD2.59c预治疗对喂养的C57BL/6小鼠中PI3K/Akt途径抑制剂诱导高血糖的作用的给药和取样方案的示意图。
图2A是描绘了在用50mg/kg BYL719给药并用REMD2.59c或ASN媒介物(vehicle)预治疗24小时的小鼠中，在给药前-0.5小时、给药后2小时和给药后4小时的血糖水平的直方图。图2B是描绘了在用50mg/kg BKM120给药并用REMD2.59c或ASN媒介物预治疗24小时的小鼠中，在给药前-0.5小时、给药后2小时和给药后4小时的血糖水平的直方图。图2C是描绘了在用150mg/kg MK2206给药并用REMD2.59c或ASN媒介物预治疗24小时的小鼠中，在给药前-0.5小时、给药后2小时和给药后4小时的血糖水平的直方图。黑色条代表ASN治疗的小鼠。灰色条代表用REMD2.59c预治疗的小鼠。
图3A是描绘了在用100mg/kg OSI-906给药并用REMD2.59c或ASN媒介物预治疗24小时的小鼠中，在给药前-0.5小时、给药后2小时和给药后4小时的血糖水平的直方图。图3B是描绘了在用100mg/kg GDC-0068给药并用REMD2.59c或ASN媒介物预治疗24小时的小鼠中，在给药前-0.5小时、给药后2小时和给药后4小时的血糖水平的直方图。图3C是描绘了在用10mg/kg GDC-0980给药并用REMD2.59c或ASN媒介物预治疗24小时的小鼠中，在给药前-0.5小时、给药后2小时和给药后4小时的血糖水平的直方图。图3D是描绘了在用30mg/kgGSK690693给药并用REMD2.59c或ASN媒介物预治疗24小时的小鼠中，在给药前-0.5小时、给药后2小时和给药后4小时的血糖水平的直方图。黑色条代表ASN治疗的小鼠。灰色条代表用REMD2.59c预治疗的小鼠。
图4A是描绘了在用150mg/kg MK2206口服地给药并用REMD2.59c或ASN媒介物预治疗24小时的Balb/c无胸腺裸小鼠(athymic nude mice)中，在给药前-0.5小时、给药后2小时和给药后4小时的血糖水平的直方图。图4B是描绘了在用150mg/kg MK2206给药并用REMD2.59c或ASN媒介物预治疗24小时的小鼠中，在给药前-0.5小时、给药后2小时和给药后4小时的胰岛素水平的直方图。黑色条代表ASN治疗的小鼠。灰色条代表用REMD2.59c预治疗的小鼠。
用于进行本发明的模式
除非本文中另有定义，与本公开内容关联使用的科技术语将具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外，除非上下文另有要求，否则单数术语应包括复数形式，并且复数术语应包括单数形式。通常，本文描述的与细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传学以及蛋白与核酸化学和杂交关联使用的命名和技术是本领域常用且公知的那些。除非另有指示，否则本公开内容的方法和技术通常根据本领域公知的常规方法和如多种一般和更具体的参考文献中描述地进行，所述参考文献贯穿在本说明书中引用和讨论。参见，例如，Green和Sambrook，Molecular Cloning：A Laboratory Manual，第4版，ColdSpring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y(2012)，其通过引用并入本文。酶促反应和纯化技术根据生产商的说明进行，如本领域通常完成的或如本文描述的。本文描述的与分析化学、合成有机化学和药学和制药化学关联使用的命名以及实验操作和技术是本领域通常使用且公知的那些。对于化学合成、化学分析、药物制备、制剂和递送以及受试者的治疗使用标准技术。
定义
如本文使用的，“治疗(treatment)”是用于获得有益的或期望的临床结果的方法。为了本发明的目的，有益的或期望的临床结果包括但不限于以下任何一种或更多种：缓解一种或更多种症状、减降(diminishment)疾病程度、预防或延迟疾病的传播(例如，转移，例如，转移至肺或淋巴结)、预防或延迟疾病的复发、延迟或减缓疾病进展、改善疾病状态和减退(无论是部分还是全部)。“治疗”还包括降低增生性疾病的病理后果。本发明的方法预期了治疗的这些方面中的任何一个或更多个。
如本文使用的，术语“有效量”或“治疗有效量”指足以治疗指定病症(disorder)、状况(condition)或疾病，诸如改善、减轻(palliate)、减少(lessen)和/或延迟其症状中的一种或更多种的化合物或组合物的量。关于癌症或其他不需要的细胞增殖，有效量包括足以：(i)降低癌细胞的数目；(ii)降低肿瘤尺寸；(iii)在一定程度上抑制、延缓(retard)、减缓(slow)并优选地停止癌细胞浸润到外周器官中；(iv)抑制(即，在一定程度上减缓并优选地停止)肿瘤转移；(v)抑制肿瘤生长；(vi)预防或延迟肿瘤的发生和/或复发；和/或(vii)在一定程度上减轻一种或更多种与癌症相关的症状的量。有效量可以以一个或更多个施用被施用。
“辅助背景(adjuvant setting)”指一种临床背景，其中个体已经具有癌症史，并且通常(但不一定)对疗法(包括但不限于手术(诸如手术切除)、放射疗法和化学疗法)响应。然而，由于他们的癌症史，这些个体被认为处于发展疾病的风险中。“辅助背景”中的治疗或施用指随后的治疗模式。风险程度(即，当辅助背景中的个体被认为是“高风险”或“低风险”时)取决于几个因素，最常见的是首次治疗时的疾病的程度。
术语“患者”、“个体”和“受试者”可以互换地使用，并且指哺乳动物，优选地人类或非人类灵长类动物，但也指家养哺乳动物(例如犬科动物或猫科动物)、实验室哺乳动物(例如小鼠、大鼠、兔、仓鼠、豚鼠)和农业哺乳动物(例如马科动物、牛科动物、猪(ovine)、羊(ovine))。在多个实施方案中，患者可以是在医院、精神病护理机构如门诊或其他临床环境中的医生或其他卫生工作者的护理下的人类(例如，成年男性、成年女性、青春期男性、青春期女性、男性儿童、女性儿童)。
“药物组合物”指适于在人类中药物使用的组合物。药物组合物包含药理学有效量的活性剂和药学上可接受的运载体。“药理学有效量”指有效产生预期药理学结果的剂的量。“药学上可接受的运载体”指任何标准的药物运载体、媒介物、缓冲液和赋形剂，诸如磷酸盐缓冲盐水溶液、5％右旋糖水性溶液，以及乳液，诸如油/水或水/油乳液，以及各种类型的湿润剂和/或佐剂。合适的药学运载体和制剂在Remington’s PharmaceuticalSciences，第21版.2005，Mack Publishing Co，Easton中描述。“药学上可接受的盐”指可以被配制成用于药物使用的化合物的盐，包括例如金属盐(钠、钾、镁、钙等)和氨的盐或有机胺的盐。
短语“施用”或“引起施用(cause to be administered)”指由医学专业人员(例如医生)或控制患者医疗护理的人采取的控制和/或允许对患者施用所讨论的剂/化合物的行动。引起施用可以包括诊断和/或确定合适的治疗方案，和/或为患者开处特定的剂/化合物。这样的开处可以包括例如起草处方形式、注释医疗记录等。在本文描述施用的情况下，还预期了“引起施用”。
如本文使用的，提及本公开内容的分离的胰高血糖素受体拮抗剂和PI3K途径抑制剂时，术语“共施用(co-administration)”、“共施用(co-administered)”和“与...组合(incombination with)”意图意指，并且的确指并包括以下：当本公开内容的分离的胰高血糖素受体拮抗剂和PI3K途径抑制剂被一起配制成单一剂型时，向需要治疗的受试者同时施用这样的组分的组合，所述单一剂型向所述受试者基本上同时释放所述组分；当本公开内容的分离的胰高血糖素受体拮抗剂和PI3K途径抑制剂彼此分离地被配制成单独的剂型时，向需要治疗的受试者基本上同时施用这样的组分的组合，所述单独的剂型由所述受试者基本上同时服用，于是所述组分基本上同时释放至所述受试者；当本公开内容的分离的胰高血糖素受体拮抗剂和PI3K途径抑制剂彼此分离地被配制呈单独的剂型时，向需要治疗的受试者依次施用这样的组分的组合，所述单独的剂型由所述受试者以每次施用之间的显著的时间间隔连续服用，于是所述组分基本上不同时释放至所述受试者；以及当本公开内容的分离的胰高血糖素受体拮抗剂和PI3K途径抑制剂被一起配制成单一剂型时，向需要治疗的受试者依次施用这样的组分的组合，所述单一剂型以受控的方式释放所述组分，于是它们并行地、连续地和/或重叠地以相同和/或不同时间释放至所述受试者，其中每个部分可以由相同或不同途径施用。
如本文使用的，术语“固定剂量”和“单一制剂”指被配制成将对治疗癌症联合治疗有效的量的两种治疗剂递送至患者的单一药物组合物。单一媒介物被设计成递送一定量的每种剂以及任何药学上可接受的运载体或赋形剂。在多个实施方案中，媒介物是片剂、胶囊、丸剂或贴剂。在多个实施方案中，媒介物是溶液或悬浮液。
如本文使用的，术语“非固定组合”意指活性成分均(both)作为独立的实体同时地(simultaneously)、并行地(concurrently)或以非特定的时间限制依次地施用至患者，其中这样的施用向患者提供了治疗有效水平的活性成分。后者也适于鸡尾酒(cocktail)疗法，例如施用三种或更多种活性成分。
“耐受性或难治性癌症”指对先前的抗癌疗法(包括例如PI3K抑制剂疗法、化学疗法、手术、放射疗法、干细胞移植和免疫疗法)不响应的肿瘤细胞或癌症。肿瘤细胞在治疗开始时可以是耐受性的或难治性的，或者在治疗期间它们可能变得耐受性的或难治性的。难治性肿瘤细胞包括在治疗开始时不响应或对治疗最初短时间响应但未能够对治疗响应的肿瘤。难治性肿瘤细胞还包括对用抗癌疗法的治疗响应但未能够对随后几轮疗法响应的肿瘤。为了本发明的目的，难治性肿瘤细胞还包括似乎被用抗癌疗法的治疗抑制，但在治疗停止后长达5年，有时长达10年或更长时间复发的肿瘤。抗癌疗法可以采用单独的化学治疗剂、单独的放射疗法、单独的靶向疗法、单独的手术或其组合。为了便于描述而非限制，应该理解，难治性肿瘤细胞可与耐受性肿瘤互换。
如本文使用的，术语“免疫疗法”指，包括但不限于以下的癌症治疗：使用针对特定肿瘤抗原的消耗性抗体的治疗；使用抗体-药物缀合物的治疗；使用针对共刺激性或共抑制性分子(免疫检查点(immune checkpoints))，诸如CTLA-4、PD-1、OX-40、CD137、GITR、LAG3、TIM-3和VISTA的激动性抗体、拮抗性抗体或阻断性抗体的治疗；使用双特异性T细胞接合抗体诸如blinatumomab的治疗：涉及诸如IL-2、IL-12、IL-15、IL-21、GM-CSF、IFN-α、IFN-β和IFN-γ的生物响应调节剂的施用的治疗；使用治疗性疫苗诸如sipuleucel-T的治疗；使用树突细胞疫苗或肿瘤抗原肽疫苗的治疗；使用嵌合抗原受体(CAR)-T细胞的治疗；使用CAR-NK细胞的治疗；使用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的治疗；使用过继转移的抗肿瘤T细胞(离体扩增和/或TCR转基因)的治疗；使用TALL-104细胞的治疗；和使用免疫刺激性剂诸如Toll-样受体(TLR)激动剂CpG和咪喹莫特(imiquimod)的治疗。
术语“肽”、“多肽”和“蛋白”各自指包含通过肽键彼此连接的两个或更多个氨基酸残基的分子。这些术语包括，例如，天然和人工蛋白、蛋白片段和蛋白序列的多肽类似物(诸如突变蛋白、变体和融合蛋白)，以及翻译后、或以其他方式共价或非共价地修饰的蛋白。肽、多肽或蛋白可以是单体或多聚体。在某些实施方案中，“肽”、“多肽”和“蛋白”是其α碳通过肽键连接的氨基酸链。因此在链的一个末尾(氨基末端)的末端氨基酸具有游离氨基基团，而在链的另一个末尾(羧基末端)的末端氨基酸具有游离羧基基团。如本文使用的，术语“氨基末端”(被缩写为N-末端)指在肽的氨基末端的氨基酸上的游离α-氨基基团，或在该肽中任何其他位置的氨基酸的α-氨基基团(当参与肽键时为亚氨基基团)。类似地，术语“羧基末端”指在肽的羧基末端上的游离羧基基团，或在该肽中任何其他位置的氨基酸的羧基基团。肽还包括基本上任何聚氨基酸(polyamino acid)，包括但不限于肽模拟物(peptidemimetic)诸如通过醚键而非酰胺键连接的氨基酸。
术语“治疗性蛋白”是指具有一种或更多种治疗活性和/或生物活性的蛋白、多肽、抗体、肽或其片段或变体。本发明包括的治疗性蛋白包括但不限于蛋白、多肽、肽、抗体和生物制剂(biologics)。(术语肽、蛋白和多肽在本文中可互换地使用。)特别预期了，术语“治疗性蛋白”包括抗体及其片段和变体。
使用标准单字母缩写或三字母缩写表示多核苷酸和多肽序列。除非另有指示，多肽序列在左侧具有它们的氨基末端并在右侧具有它们的羧基末端，并且单链核酸序列和双链核酸序列的上方的链在左侧具有它们的5’末端并且在右侧具有它们的3’末端。多肽的特定部分可以由氨基酸残基编号诸如氨基酸80至119表示，或由该位点的实际的残基诸如Ser80至Ser119表示。特定多肽或多核苷酸序列也可以通过解释它与参考序列的区别来描述。
本公开内容的多肽包括以任何方式和为任何原因被修饰的多肽，例如，以：(1)降低对蛋白水解作用的敏感性，(2)降低对氧化作用的敏感性，(3)改变用于形成蛋白复合物的结合亲和力，(4)改变结合亲和力，以及(5)赋予或改变其他物理化学或功能特性。例如，单氨基酸置换或多氨基酸置换(例如，保守氨基酸置换)可以在天然存在的序列中进行(例如，在形成分子间接触的结构域以外的多肽部分中)。“保守氨基酸置换”指多肽中氨基酸被功能上相似的氨基酸置换。以下六组各自包含互相为保守置换的氨基酸：
丙氨酸(A)、丝氨酸(S)和苏氨酸(T)
天冬氨酸(D)和谷氨酸(E)
天冬酰胺(N)和谷氨酰胺(Q)
精氨酸(R)和赖氨酸(K)
异亮氨酸(I)、亮氨酸(L)、甲硫氨酸(M)和缬氨酸(V)
苯丙氨酸(F)、酪氨酸(Y)和色氨酸(W)
“非保守氨基酸置换”指这些类别中的一个的成员置换为来自另一个类别的成员。在进行这样的改变时，根据某些实施方案，可以考虑氨基酸的亲水指数(hydropathicindex)。基于氨基酸的疏水性和荷电特征，每个氨基酸被指定亲水指数。它们是：异亮氨酸(+4.5)；缬氨酸(+4.2)；亮氨酸(+3.8)；苯丙氨酸(+2.8)；半胱氨酸/胱氨酸(+2.5)；甲硫氨酸(+1.9)；丙氨酸(+1.8)；甘氨酸(-0.4)；苏氨酸(-0.7)；丝氨酸(-0.8)；色氨酸(-0.9)；酪氨酸(-1.3)；脯氨酸(-1.6)；组氨酸(-3.2)；谷氨酸(-3.5)；谷氨酰胺(-3.5)；天冬氨酸(-3.5)；天冬酰胺(-3.5)；赖氨酸(-3.9)和精氨酸(-4.5)。
本领域理解亲水氨基酸指数在赋予蛋白相互作用的生物功能中的重要性(参见例如，Kyte等人，1982，J.Mol.Biol.157：105-131)。已知，某些氨基酸可以被具有相似亲水指数或分数的其他氨基酸置换，并且仍保持相似的生物活性。在基于亲水指数进行改变时，在某些实施方案中，包括亲水指数在±2以内的氨基酸的置换。在某些实施方案中，包括在±1以内的那些，并且在某些实施方案中，包括在±0.5以内的那些。
本领域还理解，可以基于亲水性有效地进行相似氨基酸的置换，特别是当从而产生的生物功能蛋白或肽被意图用于在如本文公开的免疫学实施方案中使用时。在某些实施方案中，如被其相邻氨基酸的亲水性控制的，蛋白的最大局部平均亲水性与其免疫原性和抗原性相关，即与该蛋白的生物学特性相关。
以下亲水性值被指定至这些氨基酸残基：精氨酸(+3.0)；赖氨酸(+3.0)；天冬氨酸(+3.0.+-.1)；谷氨酸(+3.0.+-.1)；丝氨酸(+0.3)；天冬酰胺(+0.2)；谷氨酰胺(+0.2)；甘氨酸(0)；苏氨酸(-0.4)；脯氨酸(-0.5.+-.1)；丙氨酸(-0.5)；组氨酸(-0.5)；半胱氨酸(-1.0)；甲硫氨酸(-1.3)；缬氨酸(-1.5)；亮氨酸(-1.8)；异亮氨酸(-1.8)；酪氨酸(-2.3)；苯丙氨酸(-2.5)和色氨酸(-3.4)。在基于相似亲水性值进行改变时，在某些实施方案中，包括亲水性值在±2以内的氨基酸置换，在某些实施方案中，包括在±1以内的那些，并且在某些实施方案中，包括在±0.5以内的那些。示例性氨基酸置换在表1中列出。
表1
技术人员将能够使用公知技术确定如本文列出的合适的多肽的变体。在某些实施方案中，本领域技术人员可以通过靶向被认为对于活性不重要的区域鉴定可以被改变而不破坏活性的分子的合适区域。在其他实施方案中，技术人员可以鉴定在相似多肽间保守的分子的残基和部分。在另外的实施方案中，即使可能对生物活性或对结构重要的区域也可以经历保守氨基酸置换，而不破坏生物活性或不会不利地影响多肽结构。
另外，本领域技术人员可以回顾鉴定相似多肽中对活性或结构重要的残基的结构-功能研究。鉴于这样的比较，技术人员可以预测对应于相似多肽中对活性或结构重要的氨基酸残基的多肽中氨基酸残基的重要性。本领域技术人员可以选择对这样的被预测的重要氨基酸残基进行化学上相似的氨基酸置换。
本领域技术人员还可以在相似多肽中分析与该结构相关的三维结构和氨基酸序列。鉴于这样的信息，本领域技术人员可以对于多肽的三维结构预测其氨基酸残基的排列。在某些实施方案中，本领域技术人员可以选择不对被预测处于多肽表面的氨基酸残基进行基团改变，因为这样的残基可以参与与其他分子的重要相互作用。此外，本领域技术人员可以产生在每个期望的氨基酸残基处包含单氨基酸置换的测试变体。然后该变体可使用本领域技术人员公知的活性测定进行筛选。这样的变体可以被用于收集关于合适的变体的信息。例如，如果人们发现，特定氨基酸残基的改变导致受损的、不期望地降低的或不适合的活性，则可以避免具有这样的改变的变体。换句话说，基于从这样的常规试验收集的信息，本领域技术人员可以容易地确定应避免在该处单独的或与其他突变组合的进一步置换的氨基酸。
如本文使用的术语“多肽片段”和“截短的多肽”指与对应的全长蛋白相比具有氨基末端缺失和/或羧基末端缺失的多肽。在某些实施方案中，片段可以是，例如至少5个、至少10个、至少25个、至少50个、至少100个、至少150个、至少200个、至少250个、至少300个、至少350个、至少400个、至少450个、至少500个、至少600个、至少700个、至少800个、至少900个或至少1000个氨基酸的长度。在某些实施方案中，片段还可以是，例如最多1000个、最多900个、最多800个、最多700个、最多600个、最多500个、最多450个、最多400个、最多350个、最多300个、最多250个、最多200个、最多150个、最多100个、最多50个、最多25个、最多10个或最多5个氨基酸的长度。片段还可以在其任一个或两个末端包含一个或更多个另外的氨基酸，例如，来自不同天然存在的蛋白的氨基酸序列(例如，Fc或亮氨酸拉链结构域)或人工氨基酸序列(例如，人工接头序列)。
如本文使用的术语“多肽变体”和“多肽突变体”指包含以下氨基酸序列的多肽，其中相对于另一个多肽序列，一个或更多个氨基酸残基被插入到该氨基酸序列、从其中缺失和/或被置换到该氨基酸序列中。在某些实施方案中，待被插入、缺失或置换的氨基酸残基的数目可以是例如，至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个、至少10个、至少25个、至少50个、至少75个、至少100个、至少125个、至少150个、至少175个、至少200个、至少225个、至少250个、至少275个、至少300个、至少350个、至少400个、至少450个或至少500个氨基酸的长度。本公开的变体包括融合蛋白。
多肽的“衍生物”是被化学修饰的多肽，所述化学修饰例如缀合至另一个化学部分诸如例如聚乙二醇、白蛋白(例如人类血清白蛋白)，磷酸化和糖基化。
本文中术语“％序列同一性”与术语“％同一性”可互换地使用并且指当使用序列比对程序比对时，两个或更多个肽序列之间的氨基酸序列同一性的水平或两个或更多个核苷酸序列之间的核苷酸序列同一性的水平。例如，如本文使用的，80％同一性与由定义的算法确定的80％序列同一性意指相同的事物，并且意指的是，给定序列与另一长度的另一个序列至少80％相同。在某些实施方案中，％同一性选自例如，与给定序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％或更大的序列同一性。在某些实施方案中，％同一性在例如约60％至约70％、约70％至约80％、约80％至约85％、约85％至约90％、约90％至约95％或约95％至约99％的范围内。
本文中术语“％序列同源性”与术语“％同源性”可互换地使用并且指当使用序列比对程序比对时，两个或更多个肽序列之间的氨基酸序列同源性的水平或两个或更多个核苷酸序列之间的核苷酸序列同源性的水平。例如，如本文使用的，80％同源性与由定义的算法确定的80％序列同源性意指相同的事物，并且相应地，给定序列的同系物相对于一定长度的给定序列具有大于80％的序列同源性。在某些实施方案中，％同源性选自例如，与给定序列至少60％、至少65％、至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或至少99％或更大的序列同源性。在某些实施方案中，％同源性在例如约60％至约70％、约70％至约80％、约80％至约85％、约85％至约90％、约90％至约95％或约95％至约99％的范围内。
可以被用于确定两个序列之间的同一性的示例性计算机程序包括但不限于，BLAST程序的套件，例如BLASTN、BLASTX和TBLASTX、BLASTP以及TBLASTN，其在互联网在NCBI网站上可公开获得。还参见Altschul等人，1990，J.Mol.Biol.215：403-10(特别参考公开的默认设置，即参数w＝4、t＝17)和Altschul等人，1997，Nucleic Acids Res.，25：3389-3402。当相对于GenBank蛋白序列和其他公共数据库中的氨基酸序列评价给定氨基酸序列时，通常使用BLASTP程序进行序列检索。BLASTX程序优选用于针对(against)GenBank蛋白序列和其他公共数据库中的氨基酸序列检索在所有阅读框已经被翻译的核酸序列。使用开放缺口罚分11.0和延伸缺口罚分1.0的默认参数并使用BLOSUM-62矩阵运行BLASTP和BLASTX。(同上(ld))。
除了计算序列同一性百分比以外，BLAST算法还进行两个序列之间相似性的统计分析(参见，例如，Karlin&Altschul，Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA，90：5873-5787(1993))。由BLAST算法提供的相似性的一个测量是最小总概率(P(N))，所述最小总概率提供两个核苷酸序列或氨基酸序列之间的匹配偶然发生的概率的指示。例如，如果在测试核酸与参考核酸的比较中，最小总概率是，例如小于约0.1、小于约0.01或小于约0.001，该核酸被认为与参考序列相似。
术语“分离的分子”(其中分子是例如多肽、多核苷酸或抗体)是以下的分子，该分子由于其起源或衍生来源：(1)与在其天然状态下伴随其的天然缔合的组分不缔合，(2)基本上不含来自相同物种的其他分子；(3)由来自不同物种的细胞表达，或(4)在自然中不存在。因此，化学合成的、或在与其原始起源的细胞不同的细胞系统中表达的分子，将是与其天然缔合的组分“分离”的。还可以使用本领域公知的纯化技术通过分离使分子基本上不含天然缔合的组分。分子纯度或均一性可以通过本领域公知的多种手段来测定。例如，多肽样品的纯度可以使用本领域公知的技术使用聚丙烯酰胺凝胶电泳和使多肽可视化的凝胶染色测定。为了某些目的，可以通过使用HPLC或本领域公知的用于纯化的其他手段提供更高的分辨率。
当样品的至少约60％至75％表现为单一种类的多肽时，蛋白或多肽是“基本纯”、“基本均一”或“基本纯化”的。基本纯的多肽或蛋白将通常构成蛋白样品的约50％、60％、70％、80％或90％W/W，更通常约95％，并且例如，将超过99％纯。蛋白纯度或均一性可以通过本领域公知的许多手段来指示，所述手段诸如蛋白样品的聚丙烯酰胺凝胶电泳，随后在用本领域公知的染色剂染色凝胶之后可视化单一多肽条带。为了某些目的，可以通过使用HPLC或本领域公知的用于纯化的其他手段提供更高的分辨率。
“抗原结合和拮抗性蛋白”是包含结合至抗原的部分并且任选地包含支架或框架部分的蛋白，所述支架或框架部分允许抗原结合部分采取促进所分离的拮抗性抗原结合蛋白结合至该抗原的构象。抗原结合和拮抗性蛋白的实例包括抗体、抗体片段(例如，抗体的抗原结合部分)、抗体衍生物和抗体类似物。分离的拮抗性抗原结合蛋白可以包含，例如，替代的蛋白支架或具有接枝的CDR或CDR衍生物的人工支架。这样的支架包括但不限于，包含突变的衍生自抗体的支架以及全合成支架，所述突变被引入以，例如，稳定所分离的拮抗性抗原结合蛋白的三维结构，所述全合成支架包括，例如，生物相容的聚合物。参见，例如，Korndorfer等人，2003，Proteins：Structure，Function，and Bioinformatics，第53卷，第1期：121-129(2003)；Roque等人，Biotechnol.Prog.20：639-654(2004)。另外，可以使用肽抗体模拟物(“PAM”)以及基于利用纤连蛋白组分的抗体模拟物的支架作为支架。
分离的拮抗性抗原结合蛋白可以具有，例如，天然存在的免疫球蛋白的结构。“免疫球蛋白”是四聚体分子。在天然存在的免疫球蛋白中，每个四聚体由相同的两对多肽链组成，每对具有一条“轻链”(约25kDa)和一条“重链”(约50-70kDa)。每条链的氨基末端部分包括主要负责抗原识别的约100至110或更多个氨基酸的可变区。每条链的羧基末端部分限定了主要负责效应物功能的恒定区。人类轻链被分类为κ和λ轻链。重链被分类为μ、δ、γ、α或ε，并且将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链中，可变区和恒定区由约12个或更多个氨基酸的“J”区连接，重链还包括约10个或更多个氨基酸的“D”区。大体上参见Fundamental Immunology第7章(Paul，W.，编著，第2版.Raven Press，N.Y(1989))(为所有目的通过引用以其整体并入本文)。每个轻链/重链对的可变区形成抗原结合位点，使得完整的免疫球蛋白具有两个结合位点。
“抗体”指包含基本上或部分地由免疫球蛋白基因或免疫球蛋白基因的片段编码的一个或更多个多肽并且具有对肿瘤抗原的特异性或具有对在病理状态过表达的分子的特异性的蛋白。公认的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α、γ、δ、ε和μ恒定区基因，以及这些基因的亚型和大量的免疫球蛋白可变区基因。轻链(LC)被分类为κ或λ。重链(HC)被分类为γ、μ、α、δ或ε，其继而分别定义免疫球蛋白类型IgG、IgM、IgA、IgD和IgE。典型的免疫球蛋白(例如抗体)结构单元包含四聚体。每个四聚体包含相同的两对多肽链，每对具有一条“轻链”(约25kDa)和一条“重链”(约50-70kDa)。每条链的N-末端定义主要负责抗原识别的约100个至110个或更多个氨基酸的可变区。
在全长抗体中，每条重链包含重链可变区(在本文中被缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含3个结构域，CH1、CH2和CH3(并且在一些情况下，CH4)。每条轻链包含轻链可变区(在本文中被缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。轻链恒定区包含一个结构域，CL。VH和VL区可以被进一步细分为被称为互补决定区(CDR)的高变区，其散布着被称为框架区(FR)的更保守的区域。每个VH和VL包含3个CDR和4个FR，按以下顺序从氨基末端向羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。已经定义了框架区和CDR的范围。不同轻链或重链的框架区的序列在物种，诸如人类内是相对保守的。抗体的框架区，即组成型轻链和重链的组合的框架区，起在三维空间定位和排列CDR的作用。免疫球蛋白分子可以是任何类型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)、类别(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)或亚类。
抗体以完整的免疫球蛋白或以大量良好表征的片段存在。这样的片段包括结合至靶抗原的Fab片段、Fab’片段、Fab2、F(ab)’2片段、单链Fv蛋白(“scFv”)和由二硫键稳定的Fv蛋白(“dsFv”)。scFv蛋白是融合蛋白，其中免疫球蛋白的轻链可变区和免疫球蛋白的重链可变区由接头结合，而在dsFv中，链已经被突变以引入二硫键来稳定所述链的缔合。尽管已经关于完整抗体的消化定义了多种抗体片段，技术人员将理解，这样的片段可以化学地或通过利用重组DNA方法被从头合成。因此，如本文使用的，术语抗体包括，例如单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体、由至少2个完整抗体形成的多特异性抗体(例如双特异性抗体)、人类抗体、人源化抗体、骆驼源化抗体(camelised antibodies)、嵌合抗体、单链Fv(scFv)、单链抗体、单结构域抗体、结构域抗体、Fab片段、F(ab’)2片段、表现出期望的生物学活性的抗体片段、二硫键连接的Fv(sdFv)、细胞内抗体(intrabody)和表位结合片段或以上任一个的抗原结合片段。
Fab片段是具有VL、VH、CL和CH1结构域的单价片段；F(ab’)2片段是具有在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；Fd片段具有VH和C亚H1结构域；Fv片段具有抗体单臂的VL和VH结构域；并且dAb片段具有VH结构域、VL结构域或VH或VL结构域的抗原结合片段(美国专利第6,846,634号、第6,696,245号，美国申请公布第05/0202512号、第04/0202995号、第04/0038291号、第04/0009507号、第03/0039958号，Ward等人，Nature 341：544-546(1989))。
单链抗体(scFv)是其中VL和VH区通过接头(例如，氨基酸残基的合成序列)连接以形成连续蛋白链的抗体，其中接头足够长以允许蛋白链自身折叠并形成单价抗原结合位点(参见，例如Bird等人，Science 242：423-26(1988)和Huston等人，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85：5879-83(1988))。双抗体是包含两条多肽链的二价抗体，其中每个多肽链包含由接头连接的VH和VL结构域，所述接头太短以至于不允许同一链上的两个结构域之间配对，从而允许每个结构域与另一条多肽链上的互补结构域配对(参见，例如Holliger等人，1993，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：6444-48(1993)，和Poljak等人，Structure 2：1121-23(1994))。如果双抗体的两条多肽链是相同的，那么由它们的配对产生的双抗体将具有两个相同的抗原结合位点。具有不同序列的多肽链可以被使用以产生具有两个不同抗原结合位点的双抗体。类似地，三抗体和四抗体分别是包含三条和四条多肽链并且分别形成三个和四个抗原结合位点的抗体，所述抗原结合位点可以是相同的或不同的。
分离的拮抗性抗原结合蛋白可以具有一个或更多个结合位点。如果存在多于一个结合位点，则结合位点可以彼此相同或可以不同。例如，天然存在的人类免疫球蛋白通常具有两个相同的结合位点，而“双特异性”或“双功能”抗体具有两个不同的结合位点。
术语“人类抗体”包括具有衍生自人类免疫球蛋白序列的一个或更多个可变区和恒定区的所有抗体。在一个实施方案中，所有可变结构域和恒定结构域衍生自人类免疫球蛋白序列(完全人类抗体(fully human antibody))。这些抗体可以以多种方法制备，所述方法的实例在以下描述，包括通过用感兴趣的抗原免疫接种被遗传修饰以表达衍生自人类重链编码基因和/或轻链编码基因的小鼠。
“人源化抗体”具有与衍生自非人类物种的抗体的序列相差一个或更多个氨基酸置换、缺失和/或添加的序列，使得当被施用至人类受试者时，人源化抗体与非人类物种的抗体相比不太可能诱发免疫应答和/或诱发不太严重的免疫应答。在一个实施方案中，非人类物种的抗体的重链和/或轻链的框架结构域和恒定结构域中的某些氨基酸被突变以产生人源化抗体。在另一个实施方案中，来自人类抗体的恒定结构域被融合至非人类物种的可变结构域。在另一个实施方案中，非人类抗体的一个或更多个CDR序列中的一个或更多个氨基酸残基被改变以降低当该非人类抗体被施用至人类受试者时其可能的免疫原性，其中被改变的氨基酸残基对该抗体与其抗原的免疫特异性结合不重要，或对氨基酸序列所做的改变是保守改变，使得人源化抗体与抗原的结合不显著差于非人类抗体与该抗原的结合。如何产生人源化抗体的实例可见于美国专利第6,054,297号、第5,886,152号和第5,877,293号中。
如果本公开内容的分离的拮抗性抗原结合蛋白(包括抗体)以如由10-7M或更低的解离常数(Kd或对应的Kb，如以下定义的)值确定的高结合亲和力结合至抗原(诸如人胰高血糖素受体)，则本公开内容的分离的拮抗性抗原结合蛋白(包括抗体)“特异性结合至”该抗原。特异性结合至人类胰高血糖素受体的分离的拮抗性抗原结合蛋白可能能够以相同或不同亲和力结合至来自其他物种的胰高血糖素受体。
“表位”是被分离的拮抗性抗原结合蛋白(例如，被抗体)结合的分子的部分。表位可以包含分子的不连续部分(例如，在多肽中，在该多肽的一级序列中不连续的氨基酸残基，但在多肽的三级和四级结构中，所述氨基酸残基彼此足够靠近以被抗原结合和拮抗性蛋白结合)。
术语“血糖水平”或“血糖的水平”应意指血糖浓度。在某些实施方案中，血糖水平是血浆葡萄糖水平。血浆葡萄糖可以根据例如Etgen等人，Metabolism，49(5)：684-688，2000)确定，或者根据D′Orazio等人的Clin.Chem.Lab.Med.，44(12)：1486-1490，2006根据全血葡萄糖浓度的转换来计算。
术语“正常葡萄糖水平”指小于约100mg/dL的空腹水平的人类平均血浆葡萄糖值和小于约145mg/dL的餐后2小时水平的人类平均血浆葡萄糖值或小于125mg/dL的随机葡萄糖的人类平均血浆葡萄糖值。术语“升高的血糖水平(elevated blood glucose level)”或“升高的血糖的水平(elevated levels of blood glucose)”应意指升高的血糖水平，诸如在临床上显示出不合适的基础和餐后高血糖症的受试者中发现的升高的血糖水平，或者诸如在口服葡萄糖耐量试验(oGTT)中在受试者中发现的升高的血糖水平，“升高的血糖的水平”为当在空腹条件下测试时高于约100mg/dL，并且在1小时测试时高于约200mg/dL。
术语“胰高血糖素抑制剂(glucagon inhibitor)”、“胰高血糖素阻抑剂(glucagonsuppressor)”和“胰高血糖素拮抗剂”可互换地使用。每一种均是可检测地抑制胰高血糖素信号传导的分子。由抑制剂(inhibitor)引起的抑制不需要是完全的，只要所述抑制是由使用被公认的测定可检测的并在本领域被理解为确定胰高血糖素信号传导抑制。
除非上下文另外明确规定，如本文和所附的权利要求中使用的，单数形式“一种(a)”、“或(or)”和“该(the)”包含复数指代物。应当理解，本文描述的公开内容的方面和变化包括“由方面和变化组成”和/或“主要由方面和/或变化组成”。
本文中，提及“约”值或参数包括(并描述)针对该值或参数本身的变化。例如，提及“约X”的描述包括对“X”的描述。
PI3K途径抑制剂
磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂
PI3K是脂质激酶家族，位于复杂(complex)、错综(intricate)、相互连接的细胞内信号传导网络的上游，并且通过磷酸化脂质的产生，将信号从跨膜受体诸如RTK和G蛋白偶联受体(GPCR)转导至细胞质，以调节包括增殖、分化、衰老、运动和存活在内的关键细胞过程(Liu P，Nat Rev Drug Discov.，8(8)：627-644，2009)。PI3K是分子量为约200-300kDa的酶。在人类中，已鉴定出三种不同类别的PI3K(I-III)，并且它们基于其结构特征、底物特异性和脂质终产物的性质而不同。I类酶由具有调节结构域(p85)和催化亚基(p110)的异二聚体组成，该催化亚基(p110)存在四种同种型：p110α、p110β、p110Δ和p110γ。α同种型和β同种型被普遍地表达；α在上游主要与受体酪氨酸激酶连接，而β可以介导来自G蛋白偶联受体和受体酪氨酸激酶两者的信号。Δ同种型和γ同种型主要在淋巴细胞中表达，并且在免疫应答的调节中发挥重要作用。I类PI3K是异二聚体，并且进一步分为两个亚家族，IA和IB。IA类PI3K是研究最多且频繁地牵涉在癌症中(Courtney K，J Clin Oncol.，28(6)：1075-1083，2010)。PI3K抑制剂基于药代动力学特性和针对PI3K的ATP结合位点的同种型的选择性分为三类，pan-I类PI3K抑制剂、同种型选择性PI3K抑制剂和双PI3K/mTOR抑制剂(VadasO，等人，Sci Signal.，4(195)，2011)。
预期用于在本公开内容的药物组合物和组合疗法中使用的PI3K抑制剂可以是本领域描述为能够抑制PI3K的任何的一种或更多种化合物(compound)or compounds)。在多个实施方案中，本公开内容的药物组合物包括选自由以下组成的组的PI3K抑制剂：PI3Kα抑制剂、PI3Kβ抑制剂、PI3Kγ抑制剂、PI3Kδ抑制剂和泛PI3K同种型抑制剂，或其药学上可接受的盐。
预期用于使用的PI3K抑制剂的非限制性实例包括：LY-294002、Wortmannin、BEZ235(NVP-BEZ235)、GDC-0941(Genentech)、PI-103、BKM120(NVP-BKM120)(Novartis)、CAL-101(GS-1101)、IC-87114、GSK2636771、TG 100713、BYL719(NVP-BYL719)(Novartis)、PI3K/HDAC抑制剂1，3-甲基腺嘌呤、YM201636、NVP-BGT226、BAY80-6946、PF-04691502、PKI-402、CH5132799(Chugai)、GDC-0980(RG7422)、NU 7026、NU 7441(KU-57788)、AS-252424、AS-604850、AS-041164、CAY10505、GSK2126458、A66、PF-05212384(PKI-587)、PIK-294、PIK-293、XL765、PIK-93、AZD6482、AS-605240、GSK1059615、TG100-115、PIK-75、PIK-90、TGX-115，TGX-221、XL147(Sanofi)、ZSTK474、槲皮素、柠檬酸河豚毒素、硫丙咪胺马来酸(thioperamide maleate)、PI103、(-)-degiielin、OSUO3012、坦度替尼(tandutinib)、GSK690693、KU-55933、MK-2206、哌立福辛(perifosine)、曲西立滨(triciribine)、PI 828、WII-P 154、化合物15e、17-P-羟基渥曼青霉素、Pp 121、PX-478、PX-866、PX-867、WAY-266176、WAY-266175、SF1126、07412、LC-486068和LME00084。在多个实施方案中，PI3K抑制剂选自由以下组成的组：GDC-0941(Genentech)、BKM120(NVP-BKM120)(Novartis)、XL147(Sanofi)、PX-866(Oncothyreon)、BAY806946(Bayer)、CH5132799(Chugai)、BYL719(NVP-BYL719)(Novartis)、MLN1117(Millennium)、AZD8186(Astra-Zeneca)、SAR260301(Sanofi)、GSK2636771(Glaxo Smith Kline)、GS-1101(Gilead)、AMG 319(Amgen)、GS-9820(Gilead)、IPI-145(Infinity)、GDC-0032(Genentech)和GDC-0084(Genentech)。
BYL719(NVP-BYL719)(Novartis)是抑制野生型和突变体酶两者的同种型选择性PIK3激酶抑制剂(Furet，P.，等人，Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters，23(13)：3741-3748，2013)。循环NVP-BYL719浓度、PI3KCA覆盖率、高血糖症、高胰岛素血症、体重减轻和肿瘤生长抑制之间的定量关系已经在综合药理学研究中定义(Fritsch，C.，等人，MolCancer Ther，13(5)：1117-29，2014)。
在本公开内容的多个实施方案中，PI3K抑制剂是BYL719(PubChem CID56649450)。在本公开内容的多个实施方案中，PI3K抑制剂是BKM120(PubChem CID16654980)。在本公开内容的多个实施方案中，PI3K抑制剂是MK2206(PubChem CID24964624)。
PI3K抑制剂或其药学上可接受的盐的另外的实例描述于以下中：例如US 9,150,579；US 9,335,320；US 8,980,259；US 7,173,029；US 7,037,915；US 6,608,056；US 6,608,053；US 6,838,457；US 6,770,641；US 6,653,320；US 6,403,588；US 7,750,002；US7,872,003；US 2014/0235630；US 2015/0141426；US 2016/0039793；US 2015/0342951；US2015/0265616；US 2004/0092561；US 2003/0149074；US 2011/0230476、US 2009/0312319、US 2011/0281866、US 2011/0269779、US 2010/0249099、US 2011/0009405；WO 2006/046035；WO 2007/042806；WO 2007/042810；WO 2004/017950；WO 2004/007491；WO 2004/006916；WO 2003/037886；WO2012146667，WO2012135009，WO2012140419；WO 2007/044729和WO 2010/029082中，其各自通过引用以其整体并入本文。
IR/IGFR1酪氨酸激酶抑制剂-IGFR1单克隆抗体
IGF信号传导在启动和促进肿瘤进展中的关键作用导致其成为用于癌症疗法的有吸引力的靶。已经使用多种策略在体外和体内两者靶向该系统的组分，其中一些策略已经进展到临床使用。这些方法的总目标是通过包括小干扰RNA、反义寡核苷酸、反义RNA、三螺旋形成寡脱氧核苷酸、特异性激酶抑制剂、单链抗体和完全人源化的抗IGF1R单克隆抗体的方法干扰IGF系统组分的功能(Heidegger等人，Cancer Biol Ther，11(8)，701-707，2011)。两种最彻底的研究的IGF1R抑制策略是小分子酪氨酸激酶抑制剂和单克隆抗体，两者都具有不同的优势，并展示出不同的活性谱。研究集中在通过靶向IGF1R酪氨酸激酶的胞内激酶结构域来调节IGF1R酪氨酸激酶的活性。
本领域已知多种IGF1R小分子酪氨酸激酶抑制剂和单克隆抗体。预期用于使用的这样的IGF1R抑制剂的非限制性实例包括：BMS 754807；OSI-906(linsitinib)；Figitumumab(CP-751871)；NT52；INSM-18；NVP-AEW541；NVP-ADW742；aIR3；IGF1R scFv-Fc；486/STOP；950/STOP；N-(2-甲氧基-5-氯苯基)-N’-(2-甲基喹啉-4-基)-脲；BMS-754807；IGF-IRi；AG1024；R1507；AXL-1717；苦鬼臼毒素；PQ401；dalotuzumab；A-928605；KW-2450；BMS-536924；IMC-Al2；CP-751871；n-(5-氯-2-甲氧基苯基)-N’-(2-甲氧基喹啉-4-基)-脲；TAE226；BMS-554417；MK-0646；BMS-536924；MAE87；XL 228；AGL 2263；I-OMe-AG538；AG538；OSI-868；BMS-754807；ADW742；NVP-ADW642；R1507；MK-0646；A928605；MAB391；BMS-536942；IMC-Al2；rhIGFBP3、ANT-429、ATL-1101、BVP-51004、JV-1-38、培维索孟(pegvisomant)、A-928605和鬼臼苦素(PPP)(CAS 477-47-4)。
在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂是选自由以下组成的组的IGFR1酪氨酸激酶抑制剂：BMS 754807(BMS)、INSM-18(Insmed/UCSF)、OSI-906(linsitinib)(OsiPharmaceuticals)、XL-228(Exelixis)、GSK 1904529A(GSK)、ABDP(AZ)、A-928605(Abbott)、AXL1717(PPP)(Alexar)、KW-2450(Kyowa Kirin)、NVP-ADW742(Novartis)、NVP-AEW541(Novartis)、AG-1024(Merck)、BMS-536924(BMS)、BMS-554417(BMS)和BVP-51004(Biovitrum)。
在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂是选自由以下组成的组的IGFR1单克隆抗体：MK 0646(dalotuzumab)(Merck)、AMG 479(ganitumumab)(Amgen)、A12(西妥木单抗)(ImClone)、CP 751,871(Figitumumab)(Pfizer)、AVE1642(Sanofi-Aventis)、Sch717454(罗妥木单抗)(Schering-Merck)、R1507(Roche)、BIIB022(Biogen Idec)、h10H5(Genentech)、MEDI-573(Medimmune)和BI836845(Boehringer-Ingleheim)。
IGF1R抑制剂的另外的实例描述于以下中：美国专利第8,895,008号；第8,580,254号；第8,318,159号；第8,168,409号；第7,985,842号；第7,638,621号；第7,638,605号；第7,605,272号；第7,538,195号；第7,521,453号；第7,432,244号；和第6,071,891号(其各自通过引用并入本文)；和美国专利申请公布第2015/0274829号；第20150259422号；第2015/0183860号；第2013/0287763号；第20130236457号；第2012/0208721号；第2010/0047243号；第2010/0028342号；第2009/0099229号；第2009/0099133号；第2009/0054508号；第2008/0025990号；第2008/0161278号；第2008/0152649号；第2007/0185319号；第2007/0275922号；第2007/0129399号；第2007/0123491号；第2005/0054638号；和第2004/0213792号，其各自通过引用以其整体并入本文。
AKT激酶抑制剂
AKT/蛋白激酶B(PKB)已被证明是一种广泛表达的Ser/Thr蛋白激酶，其的持续激活导致人类肿瘤发生。AKT被认为通过阻抑凋亡和增强血管生成和增殖两者来维护(assert)其对癌症的作用(Toker等人，(2006)Cancer Res，66(8)：3963-3966)。AKT在许多形式的人类癌症中被过表达，所述癌症包括但不限于结肠癌(Zinda等人(2001)Clin.Cancer Res.7：2475)、卵巢癌(Cheng等人(1992)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：9267)、脑癌(Haas Kogan等人(1998)Curr. Biol.8：1195)、肺癌(Brognard等人(2001)Cancer Res.61：3986)、胰腺癌(Bellacosa等人(1995)Int.J.Cancer 64：280-285；Cheng等人(1996年)Proc.Natl.Acad.Sci.93：3636-3641)、前列腺癌(Graff等人(2000)Biol.Chem.275：24500)和胃癌(Staal等人(1987)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84：5034-5037)。
AKT因其结构特性和功能特性以及其在癌症疗法领域的意义而受到广泛关注。AKT家族由三个成员，AKT1(PKBα)、AKT2(PKBβ)和AKT 3(PKBγ)组成；在结构上非常相似(＞85％序列同源性)。每种同种型由N末端普列克底物蛋白同源(PH)结构域、中心催化结构域和C末端调节尾部组成。AKT活性的抑制已被证明阻抑细胞生长并诱导源自具有组成型激活的AKT的多种器官的肿瘤细胞系中的凋亡。某些AKT激酶抑制剂因其与ATP竞争结合AKT活性位点的能力被称为ATP竞争性抑制剂。被称为变构抑制剂的某些AKT激酶抑制剂不与AKT的活性位点结合。此外，AKT激酶抑制剂可以是泛-AKT抑制剂，其中抑制剂可以抑制AKT1、AKT2和AKT3中的两种或更多种的活性。AKT激酶抑制剂可以是选择性AKT抑制剂，其中抑制剂可以抑制AKT1、AKT2和AKT3中的一种的活性，而不抑制另外两种的活性。
在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂是选自由以下组成的组的AKT激酶抑制剂：米替福新、哌立福辛、PF-04691502、CCT128930、A-674563、MK-2206(Merck)、RX-0201、PBI-05204、AZD5363(Astra-Zeneca)、AKTi-1/2、AT7867、AT13148、GDC-0068(Ipatasertib)(Genentech)、TIC10、SC79、GSK690693、GSK2110183和GSK2141795(Glaxo Smith Kline)。
AKT抑制剂的另外的实例描述于以下中：美国专利第9,156,853号；第9,150,549号；和第8,481,503号；美国专利申请公布第2016/0153049号；第20150064171号；第2014/0275106号；和第2013/0287763和WO 2011/055115、WO 2008/070134、WO 2008/070016和WO2008/070041中，其各自通过引用以其整体并入本文。
mTOR抑制剂
雷帕霉素(Rapamycin)的哺乳动物靶mTOR是细胞信号传导蛋白，调节肿瘤细胞对营养物质和生长因子的响应以及通过对血管内皮生长因子(Vascular EndothelialGrowth Factor)VEGF作用来控制肿瘤血液供应。mTOR作为用于两种不同的分子复合物，mTOR复合物1(mTORC1)和mTOR复合物2(mTORC2)的催化亚基起作用。mTOR的抑制剂通过抑制mTOR的作用，使癌细胞饥饿并使肿瘤缩小。当mTOR抑制剂与mTOR激酶结合时存在两种重要作用。首先，mTOR是PI3K/AKT途径的下游介质(mediator)。PI3K/AKT途径被认为在许多癌症中被过度激活，并且可能负责多种癌症对mTOR抑制剂的广泛响应。已经表明mTOR抑制可以诱发上游胰岛素样生长因子1受体(IGF1R)信号传导，导致癌细胞中的AKT激活。上游途径的过度激活通常也会引起mTOR激酶被过度激活。然而，在mTOR抑制剂的存在下，该过程被阻断。阻断作用阻止mTOR向控制细胞生长的下游途径信号传导。mTOR抑制的第二个主要作用是通过降低VEGF水平的抗血管生成。
存在两大类可用的mTOR抑制剂：变构抑制剂，其是雷帕霉素的衍生物并且通常被称为“雷帕霉素类似物(rapalog)”(mTORC1抑制剂)，和新型小分子mTOR抑制剂。在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂是选自由以下组成的组的mTOR抑制剂：西罗莫司、RAD001(依维莫司)(Novartis)、CCI-779(坦罗莫司)(Wyeth-Pfizer)、ABT578、SAR543、子囊霉素、地磷莫司、AP23573(deforolimus)(Ariad/Merck)、AP23841、KU-0063794、INK-128、EX2044、EX3855、EX7518、MK-8669、AZD8055、MLN0128、AZD2014、CC-223和OSI-027。
在多个实施方案中，PI3K途径抑制剂是选自由以下组成的组的泛PI3K/mTOR抑制剂：NVP-BEZ235(Novartis)、NVP-BGT226(Novartis)、XL765(Sanofi)、GSK1059615(GlaxoSmith Kline)和GDC-0980(Genentech)。
胰高血糖素受体和抗原结合和拮抗性蛋白
胰高血糖素是29个氨基酸的激素，在胰腺α细胞中由激素原转化酶2(PC2)的细胞特异性表达从其前-原形式(pre-pro-form)加工而成，激素原转化酶2是一种参与激素原和神经肽原的细胞内成熟的神经内分泌特异性蛋白酶(Furuta等人，J.Biol.Chem.276：27197-27202(2001))。在体内，胰高血糖素是用于胰岛素作用的主要反调节激素。在禁食期间，响应于降低的葡萄糖水平，胰高血糖素分泌增加。增加的胰高血糖素分泌通过促进肝糖原分解和糖异生刺激葡萄糖产生(Dunning和Gerich，Endocrine Reviews，28：253-283(2007))。因此，胰高血糖素在维持动物的正常葡萄糖水平方面平衡胰岛素的作用。
胰高血糖素的生物作用通过结合和随后激活特异性细胞表面受体-胰高血糖素受体-介导。胰高血糖素受体(GCGR)是G蛋白偶联受体的促胰液素亚家族(家族B)的成员。人类GCGR是477个氨基酸序列GPCR，并且GCGR的氨基酸序列在物种之间高度保守(Mayo等人，Pharmacological Rev.，55：167-194，(2003))。胰高血糖素受体主要在肝中表达，在肝中它调节肝葡萄糖输出；在肾和胰岛β细胞上表达，反映其在糖异生中的作用。肝中的胰高血糖素受体的激活刺激腺苷酸环化酶的活性和磷脂酰肌醇转换，磷脂酰肌醇转换随后导致糖异生酶的表达增加，所述糖异生酶包括磷酸烯醇丙酮酸羧化激酶(PEPCK)、果糖-1，6-二磷酸酶(FBPase-1)和葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)。另外，胰高血糖素信号传导激活糖原磷酸化酶并抑制糖原合酶。研究已经表明，较高的基底胰高血糖素水平和缺乏餐后胰高血糖素分泌的阻抑促成人类的糖尿病状况(Muller等人，N Eng J Med，283：109-115(1970))。因此，探索了使用GCGR拮抗剂通过靶向胰高血糖素产生或功能控制和降低血糖的方法。
在多个实施方案中，本公开内容的抗原结合和拮抗性蛋白可以被选择以结合至在如细胞上表达的膜结合的胰高血糖素受体，并抑制或阻断通过胰高血糖素受体的信号传导。在多个实施方案中，本公开内容的抗原结合和拮抗性蛋白特异性结合至人类胰高血糖素受体。在多个实施方案中，结合至人类胰高血糖素受体的抗原结合和拮抗性蛋白还可以结合至其他物种的胰高血糖素受体。几个物种的胰高血糖素受体的多核苷酸和多肽序列是已知的(参见，例如，美国专利第7,947,809号，关于其对人类、大鼠、小鼠和食蟹猴(cynomolgus)胰高血糖素受体的多核苷酸序列和多肽序列的具体教导，通过引用以其整体并入本文)。在本公开内容的多个实施方案中，抗原结合和拮抗性蛋白特异性结合具有SEQID NO：1列出的氨基酸序列的人类胰高血糖素受体：
人类(智人)胰高血糖素受体氨基酸序列
(登录号AAI04855)
在多个实施方案中，本公开内容的抗原结合和拮抗性蛋白特异性结合与引用的参考文献中描述的胰高血糖素受体具有至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、或者至少99％同一性(如使用本领域已知的和本文描述的方法计算的)的胰高血糖素受体，也包括在本公开内容中(are also included inthe present disclosure)。
本公开内容的抗原结合和拮抗性蛋白用于阻断胰高血糖素与其受体之间的相互作用，从而抑制胰高血糖素的葡萄糖升高作用。因此，本公开内容的抗原结合和拮抗性蛋白的使用是实现葡萄糖正常水平，从而改善或预防由糖尿病引起的一种或更多种症状或长期并发症，包括但不限于高血糖症(hyperglycemia)、高葡聚糖血症(hyperglucanemia)和高胰岛素血症的有效手段。
产生结合至抗原诸如人类胰高血糖素受体的抗体的方法是本领域技术人员已知的。例如，用于产生特异性结合至靶抗原多肽的单克隆抗体的方法可以包括：向小鼠施用一定量的免疫原性组合物，所述免疫原性组合物包含有效刺激可检测的免疫应答的靶抗原多肽；从小鼠获得产生抗体的细胞(例如，来自脾的细胞)并使产生抗体的细胞与骨髓瘤细胞融合以获得产生抗体的杂交瘤；以及测试产生抗体的杂交瘤以鉴定产生特异性结合至靶抗原多肽的单克隆抗体的杂交瘤。在获得后，可以在细胞培养中繁殖杂交瘤，任选地在其中杂交瘤衍生的细胞产生特异性结合至靶抗原多肽的单克隆抗体的培养条件下繁殖。单克隆抗体可以从细胞培养物纯化。然后，用于测试抗原/抗体相互作用以鉴定特定期望的抗体的多种不同的技术是可获得的。
可以使用产生或分离具有必需的特异性的抗体的其他合适的方法，包括例如，从文库选择重组抗体的方法，或依赖于对能够产生人类抗体的完整库(repertoire)的转基因动物(例如小鼠)进行免疫的方法。参见例如，Jakobovits等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)，90：2551-2555，1993；Jakobovits等人，Nature，362：255-258，1993；Lonberg等人，美国专利第5,545,806号；和Surani等人，美国专利第5,545,807号。
抗体可以以多种方法被工程化。它们可以作为单链抗体(包括小模块免疫药物(small modular immunopharmaceutical)或SMIPsTM)、Fab和F(ab’)2片段等被制备。抗体可以是人源化的、嵌合的、去免疫的(deimmunized)或完全人类抗体。许多出版物列出了许多类型的抗体和工程化这样的抗体的方法。例如，参见美国专利第6,355,245号；第6,180,370号；第5,693,762号；第6,407,213号；第6,548,640号；第5,565,332号；第5,225,539号；第6,103,889号；和第5,260,203号。
通过本领域已知的重组DNA技术可以产生嵌合抗体。例如，用限制性酶消化编码鼠(murine)(或其他物种)单克隆抗体分子的Fc恒定区的基因，以去除编码鼠Fc的区域，并置换编码人类Fc恒定区的基因的等同部分(参见Robinson等人，国际专利公布PCT/US86/02269；Akira等人，欧洲专利申请184,187；Taniguchi，M.，欧洲专利申请171,496；Morrison等人，欧洲专利申请173,494；Neuberger等人，国际申请WO 86/01533 Cabilly等人，美国专利第4,816,567号；Cabilly等人，欧洲专利申请125,023；Better等人，Science，240：1041-1043，1988；Liu等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)，84：3439-3443，1987；Liu等人，J.Immunol.，139：3521-3526，1987；Sun等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)，84：214-218，1987；Nishimura等人，Canc.Res.，47：999-1005，1987；Wood等人，Nature，314：446-449，1985；和Shaw等人，J.Natl Cancer Inst.，80：1553-1559，1988)。
本领域已经描述了用于使抗体人源化的方法。在一些实施方案中，人源化抗体除了具有非人类CDR以外，还具有从非人类来源引入的一个或更多个氨基酸残基。人源化可以基本上按照Winter和同事的方法进行(Jones等人，Nature，321：522-525，1986；Riechmann等人，Nature，332：323-327，1988；Verhoeyen等人，Science，239：1534-1536，1988)，通过用人类抗体的对应序列置换高变区序列。因此，这样的“人源化”抗体是嵌合抗体(美国专利第4,816,567号)，其中大体上少于一个完整人类可变区已被来自非人类物种的对应序列置换。在实践中，人源化抗体通常是其中一些高变区残基和可能地一些框架区残基被来自啮齿动物抗体的类似位点的残基置换的人类抗体。
Queen等人的美国专利第5,693,761号公开了对Winter等人对于使抗体人源化的改进，并且基于这样的前提：将亲和力损失归因于人源化框架内的结构基序的问题，其由于空间或其他化学不相容性，影响CDR折叠成在小鼠抗体中发现的能够结合的构象。为了解决此问题，Queen教导了使用在线性肽序列上与待被人源化的小鼠抗体的框架序列密切同源的人类框架序列。因此，Queen的方法关注比较物种之间的框架序列。通常，比较所有可获得的人类可变区序列和特定小鼠序列，并计算对应框架残基之间的同一性百分比。选择具有最高百分比的人类可变区以为人源化项目提供框架序列。Queen还教导了，在人源化框架中保留对支持能够结合的构象中的CDR至关重要的来自小鼠框架的某些氨基酸残基是重要的。从分子模型评价潜在的重要性。保留的候选残基通常是在线性序列中邻近CDR或物理上在任何CDR残基的以内的那些。
在其他方法中，在获得低亲合力人源化构建体后，特定框架氨基酸残基的重要性由实验确定，如Riechmann等人，1988所描述的，通过恢复单个残基至小鼠序列并测定抗原结合。用于鉴定框架序列中重要氨基酸的另一个示例性方法由Carter等人的美国专利第5,821,337号和Adair等人的美国专利第5,859,205号公开。这些参考文献公开了框架中具体Kabat残基位置，其在人源化抗体中可能需要被对应的小鼠氨基酸置换以保持亲合力。
使抗体人源化的另一个方法，被称为“框架改组(framework shuffling)”，依赖于产生组合文库，所述组合文库具有符合读框地(in frame)融合至单个人类种系框架的池的非人类CDR可变区(Dall’Acqua等人，Methods，36：43，2005)。然后，筛选文库以鉴定编码保持良好结合的人源化抗体的克隆。
在制备人源化抗体中待被使用的人类可变区(轻链和重链两者)的选择对降低抗原性是非常重要的。根据所谓的“最佳拟合”法，针对已知的人类可变结构域序列的整个文库筛选啮齿动物抗体的可变区的序列。然后，接受最接近啮齿动物的序列的人类序列作为人源化抗体的人框架区(框架区)(Sims等人，J.Immunol.，151：2296，1993；Chothia等人，J.Mol.Biol.，196：901，1987)。另一个方法使用源自全部为人类抗体的特定亚组的轻链可变区或重链可变区的共有序列的特定框架区。相同的框架可以被用于几种不同的人源化抗体(Carter等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)，89：4285，1992；Presta等人，J.Immunol.，151：2623，1993)。
置换到人类可变区内的非人类残基的选择可以被多种因素影响。这些因素包括例如，氨基酸在特定位置的稀有性、与CDR或抗原相互作用的可能性以及参与轻链可变结构域界面和重链可变结构域界面之间的界面的可能性。(参见，例如美国专利第5,693,761号、第6,632,927号和第6,639,055号)。分析这些因素的一个方法是通过使用非人类序列和人源化序列的三维模型。三维免疫球蛋白模型是本领域技术人员通常可获得并且熟悉的。说明并展示所选择的候选免疫球蛋白序列的可能的三维构象结构的计算机程序是可得的。对这些展示的检查允许分析残基在候选免疫球蛋白序列的功能中可能的作用，例如，分析影响候选免疫球蛋白结合其抗原的能力的残基。以此方式，非人类残基可以被选择并置换人类可变区残基以获得期望的抗体特征，诸如对靶抗原的增加的亲和力。
本领域已经描述了用于产生完全人类抗体的方法。以举例的方式，用于产生抗-GCGR抗体或其抗原结合性抗体片段的方法包括以下步骤：在噬菌体上合成人类抗体文库，用GCGR或其抗体结合部分筛选文库，分离结合GCGR的噬菌体和从噬菌体收获抗体。以另一个实例的方式，用于制备用于在噬菌体展示技术中使用的抗体文库的一种方法包括以下步骤：用GCGR或其抗原性部分免疫接种包括人类免疫球蛋白基因座的非人类动物以产生免疫应答，从经免疫接种的动物提取产生抗体的细胞，从所提取的细胞分离编码本公开内容的抗体的重链和轻链的RNA，逆转录该RNA以产生cDNA，使用引物扩增该cDNA并将该cDNA插入到噬菌体展示载体，使得抗体在噬菌体上表达。本公开内容的重组抗-GCGR抗体可以以此方式获得。
同样，以举例的方式，本公开内容的重组人类抗-GCGR抗体也可以通过筛选重组组合抗体文库分离。优选地，文库是使用从B细胞分离的mRNA制备的人类VL和VH cDNA产生的scFv噬菌体展示文库。用于制备和筛选这样的文库的方法是本领域已知的。用于产生噬菌体展示文库的试剂盒是商购可得的(例如，Pharmacia重组噬菌体抗体系统(PharmaciaRecombinant Phage Antibody System)，目录号27-9400-01；和Stratagene Surf ZAPTM噬菌体展示试剂盒，目录号240612)。还存在可以用于产生和筛选抗体展示文库的其他方法和试剂(参见，例如，美国专利第5,223,409号；PCT公布第WO 92/18619号、第WO 91/17271号、第WO 92/20791号、第WO 92/15679号、第WO 93/01288号、第WO 92/01047号、第WO 92/09690号；Fuchs等人，Bio/Technology，9：1370-1372(1991)；Hay等人，Hum.Antibod.Hybridomas，3：81-85，1992；Huse等人，Science，246：1275-1281，1989；McCafferty等人，Nature，348：552-554，1990；Griffiths等人，EMBO J.，12：725-734，1993；Hawkins等人，J.Mol.Biol.，226：889-896，1992；Clackson等人，Nature，352：624-628，1991；Gram等人，Proc.Natl.Acad.Sci.(U.S.A.)，89：3576-3580，1992；Garrad等人，Bio/Technology，9：1373-1377，1991；Hoogenboom等人，Nuc.Acid Res.，19：4133-4137，1991；和Barbas等人，Proc.Proc.Acad.Sci.(U.S.A.)，88：7978-7982，1991)，全部通过引用并入本文。
人类抗体还通过用人类IgE抗原免疫接种在其基因组内包含一些或所有的人类免疫球蛋白重链和轻链基因座的非人类、转基因动物，例如XenoMouseTM动物(Abgenix，Inc./Amgen，Inc.-Fremont，Calif.)来产生。XenoMouseTM小鼠是工程化的小鼠品系，该小鼠品系包含人类免疫球蛋白重链和轻链基因座的大的片段，并且缺乏小鼠抗体产生。参见例如Green等人，Nature Genetics，7：13-21，1994和美国专利第5,916,771号、第5,939,598号、第5,985,615号、第5,998,209号、第6,075,181号、第6,091,001号、第6,114,598号、第6,130,364号、第6,162,963号和第6,150,584号。XenoMouseTM小鼠产生完全人类抗体的成人样人库(adult-like human repertoire)，并且产生抗原特异性人类抗体。在一些实施方案中，通过在酵母人工染色体(YAC)中引入人类重链基因座和κ轻链基因座的兆碱基尺寸的、种系配置片段，XenoMouseTM小鼠包含人类抗体V基因库的大约80％。在其他实施方案中，XenoMouseTM小鼠还包含大约所有的人类λ轻链基因座。参见Mendez等人，Nature Genetics，15：146-156，1997；Green和Jakobovits，J.Exp.Med.，188：483-495，1998；以及WO 98/24893。
在多个实施方案中，本公开内容的分离的拮抗性抗原结合蛋白利用是以下的抗体或其抗原结合性抗体片段：多克隆抗体、单克隆抗体或其抗原结合片段、重组抗体、双抗体、嵌合化的或嵌合抗体或其抗原结合片段、人源化抗体或其抗原结合片段、完全人类抗体或其抗原结合片段、CDR-接枝抗体或其抗原结合片段、单链抗体、Fv、Fd、Fab、Fab’或F(ab’)2以及合成或半合成抗体。
在多个实施方案中，本公开内容的分离的拮抗性抗原结合蛋白利用以如下的解离常数(KD)与免疫检查点蛋白抗原结合的抗体或抗原结合片段：例如至少约1×10-7M、至少约1×10-8M、至少约1×10-9M、至少约1×10-10M、至少约1×10-11M或至少约1×10-12M。在多个实施方案中，本公开内容的分离的拮抗性抗原结合蛋白利用以在如下范围内的解离常数(KD)与免疫检查点蛋白抗原结合的抗体或抗原结合片段：例如至少约1×10-7M至至少约1×10- 8M、至少约1×10-8M至至少约1×10-9M、至少约1×10-9M至至少约1×10-10M、至少约1×10-10M至至少约1×10-11M、或至少约1×10-11M至至少约1×10-12M。
胰高血糖素受体的抗体已被描述以下中：例如美国专利第5,770,445号、第7,947,809号、第7,968,686号、第8,545,847号、第8,771,696号和第9,657,099号；欧洲专利申请EP2074149A2；EP专利EP0658200B1；美国专利公布2009/0041784；2009/0252727；2013/0344538和2014/0335091；以及PCT公布WO2008/036341。在本发明的多个实施方案中，分离的拮抗性抗原结合蛋白是包含在以下中列出的多核苷酸序列和多肽序列的抗GCGR(“拮抗性的”)抗体或抗原结合片段：例如美国专利第7,947,809号和第8,158,759号，关于其对多种抗-GCGR抗体或抗原结合片段的多核苷酸序列和多肽序列的具体教导，各自通过引用以其整体并入本文。
在本公开内容的多个实施方案中，抗体可以是具有与包含如SEQ ID NO：2中列出的重链可变区序列的抗体的抗原-结合亲和力相同或更高的抗原-结合亲和力的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是结合至与包含如SEQ ID NO：2中列出的重链可变区序列的抗体相同表位的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体是与包含如SEQ ID NO：2中列出的重链可变区序列的抗体竞争的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQID NO：2中列出的重链可变区序列的至少一个(诸如2个或3个)CDR的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQ ID NO：2中列出的重链可变区序列的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如以下SEQ ID NO：2中列出的重链可变区序列的抗-GCGR抗体：
在本公开内容的多个实施方案中，抗体可以是具有与包含如SEQ ID NO：3中列出的轻链可变区序列的抗体的抗原-结合亲和力相同或更高的抗原-结合亲和力的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是结合至与包含如SEQ ID NO：3中列出的轻链可变区序列的抗体相同表位的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体是与包含如SEO ID NO：3中列出的轻链可变区序列的抗体竞争的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQID NO：3中列出的轻链可变区序列的至少一个(诸如2个或3个)CDR的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQ ID NO：3中列出的轻链可变区序列的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如以下SEQ ID NO：3中列出的轻链可变区序列的抗-GCGR抗体：
在多个实施方案中，抗体包含与SEQ ID NO：2或3的序列共有例如，至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％观察到的同源性(observed homology)的氨基酸序列。
在本公开内容的多个实施方案中，抗体可以是具有与包含如SEQ ID NO：4中列出的重链可变区序列的抗体的抗原-结合亲和力相同或更高的抗原-结合亲和力的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是结合至与包含如SEQ ID NO：4中列出的重链可变区序列的抗体相同表位的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体是与包含如SEQ ID NO：4中列出的重链可变区序列的抗体竞争的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQID NO：4中列出的重链可变区序列的至少一个(诸如2个或3个)CDR的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQ ID NO：4中列出的重链可变区序列的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如以下SEQ ID NO：4中列出的重链可变区序列的抗-GCGR抗体：
在本公开内容的多个实施方案中，抗体可以是具有与包含如SEQ ID NO：5中列出的轻链可变区序列的抗体的抗原-结合亲和力相同或更高的抗原-结合亲和力的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是结合至与包含如SEQ ID NO：5中列出的轻链可变区序列的抗体相同表位的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体是与包含如SEQ ID NO：5中列出的轻链可变区序列的抗体竞争的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQID NO：5中列出的轻链可变区序列的至少一个(诸如2个或3个)CDR的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQ ID NO：5中列出的轻链可变区序列的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如以下SEQ ID NO：5中列出的轻链可变区序列的抗-GCGR抗体：
在多个实施方案中，抗体包含与SEQ ID NO：4或5的序列共有例如，至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％观察到的同源性的氨基酸序列。
在本公开内容的多个实施方案中，抗体可以是具有与包含如SEQ ID NO：6中列出的重链可变区序列的抗体的抗原-结合亲和力相同或更高的抗原-结合亲和力的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是结合至与包含如SEQ ID NO：6中列出的重链可变区序列的抗体相同表位的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体是与包含如SEQ ID NO：6中列出的重链可变区序列的抗体竞争的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQID NO：6中列出的重链可变区序列的至少一个(诸如2个或3个)CDR的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQ ID NO：6中列出的重链可变区序列的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如以下SEQ ID NO：6中列出的重链可变区序列的抗-GCGR抗体：
在本公开内容的多个实施方案中，抗体可以是具有与包含如SEQ ID NO：7中列出的轻链可变区序列的抗体的抗原-结合亲和力相同或更高的抗原-结合亲和力的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是结合至与包含如SEQ ID NO：7中列出的轻链可变区序列的抗体相同表位的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体是与包含如SEQ ID NO：7中列出的轻链可变区序列的抗体竞争的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQID NO：7列出的轻链可变区序列的至少一个(诸如2个或3个)CDR的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQ ID NO：7中列出的轻链可变区序列的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如以下SEQ ID NO：7中列出的轻链可变区序列的抗-GCGR抗体：
在多个实施方案中，抗体包含与SEQ ID NO：6或7的序列共有例如，至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％观察到的同源性的氨基酸序列。
在本公开内容的多个实施方案中，抗体可以是具有与包含如SEQ ID NO：8中列出的重链序列的嵌合抗体的抗原-结合亲和力相同或更高的抗原-结合亲和力的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是结合至与包含如SEQ ID NO：8中列出的重链序列的抗体相同表位的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体是与包含如SEQ ID NO：8中列出的重链序列的抗体竞争的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQ ID NO：8中列出的重链序列的至少一个(诸如2个或3个)CDR的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQ ID NO：8中列出的重链序列的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如以下SEQ ID NO：8中列出的重链序列的抗-GCGR抗体：
在本公开内容的多个实施方案中，抗体可以是具有与包含如SEQ ID NO：9中列出的轻链序列的嵌合抗体的抗原-结合亲和力相同或更高的抗原-结合亲和力的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是结合至与包含如SEQ ID NO：9中列出的轻链序列的抗体相同表位的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体是与包含如SEQ ID NO：9中列出的轻链序列的抗体竞争的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQ ID NO：9中列出的轻链序列的至少一个(诸如2个或3个)CDR的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如SEQ ID NO：9中列出的轻链序列的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体可以是包含如以下SEQ ID NO：9中列出的轻链序列的抗-GCGR抗体：
在多个实施方案中，抗体包含与SEQ ID NO：8或9的序列共有例如，至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％观察到的同源性的氨基酸序列。在多个实施方案中，抗体是包含SEQ ID NO：8中列出的重链序列和SEQ ID NO：9中列出的轻链序列的嵌合抗-GCGR抗体(下文的“REMD2.59C”)。
在本公开内容的多个实施方案中，抗体可以是包含选自SEQ ID NO：10、SEQ IDNO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16、SEQ IDNO：17、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22、SEQ IDNO：23、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：25、SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27的重链可变区序列，以及选自SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32、SEQ IDNO：33、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：38、SEQ IDNO：39、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：41、SEQ ID NO：42、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：44、SEQ IDNO：45的轻链可变区序列的抗-GCGR抗体。在多个实施方案中，抗体包含与SEQ ID NO：10-27或SEQ ID NO：28-45的序列共有例如，至少70％、至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％观察到的同源性的氨基酸序列。
抗GCGR抗体的实例
HCVR LCVR
SEQ ID NO：2 SEQ ID NO：3
SEQ ID NO：4 SEQ ID NO：5
SEQ ID NO：6 SEQ ID NO：7
SEQ ID NO：10 SEQ ID NO：28
SEQ ID NO：11 SEQ ID NO：29
SEQ ID NO：12 SEQ ID NO：30
SEQ ID NO：13 SEQ ID NO：31
SEQ ID NO：14 SEQ ID NO：32
SEQ ID NO：15 SEQ ID NO：33
SEQ ID NO：16 SEQ ID NO：34
SEQ ID NO：17 SEQ ID NO：35
SEQ ID NO：18 SEQ ID NO：36
SEQ ID NO：19 SEQ ID NO：37
SEQ ID NO：20 SEQ ID NO：38
SEQ ID NO：21 SEQ ID NO：39
SEQ ID NO：22 SEQ ID NO：40
SEQ ID NO：23 SEQ ID NO：41
SEQ ID NO：24 SEQ ID NO：42
SEQ ID NO：25 SEQ ID NO：43
SEQ ID NO：26 SEQ ID NO：44
SEQ ID NO：27 SEQ ID NO：45
本公开内容的分离的抗-GCGR抗体、抗体片段或抗体衍生物可以包含本领域已知的任何恒定区。轻链恒定区可以是，例如κ或λ型轻链恒定区，例如人类κ或λ型轻链恒定区。重链恒定区可以是，例如α、δ、ε、γ或μ型重链恒定区，例如人类α、δ、ε、γ或μ型重链恒定区。在多个实施方案中，轻链恒定区或重链恒定区是天然存在的恒定区的片段、衍生物、变体或突变蛋白。
用于从目标抗体衍生不同亚类或亚型的抗体，即亚类转换(subclass switching)的技术是已知的。因此，IgG抗体可以衍生自例如IgM抗体，反之亦然。这样的技术允许制备具有给定抗体(亲代抗体)的抗原结合特性，并还表现出来自与该亲代抗体不同的抗体亚型或亚类相关的生物学特性的新抗体。可以采用重组DNA技术。可以在这样的程序中采用编码特定抗体多肽的克隆DNA，例如，编码期望的亚型的抗体的恒定结构域的DNA。参见Lanitto等人，Methods Mol.Biol.178：303-16(2002)。
在多个实施方案中，本公开内容的分离的抗原结合蛋白包含如SEQ ID NO：46中列出的恒定轻链κ区或其片段。在多个实施方案中，本公开内容的分离的抗原结合蛋白包含如SEQ ID NO：47中列出的恒定轻链λ区或其片段。在多个实施方案中，本公开内容的分离的抗原结合蛋白包含SEQ ID NO：48中列出的IgG2重链恒定区或其片段。
在多个实施方案中，本公开内容的分离的拮抗性抗原结合蛋白是包含如SEQ IDNO：49中列出的重链序列和如SEQ ID NO：50中列出的轻链的完全抗-GCGR抗体(下文的“REMD-477”)。
在本公开内容的多个实施方案中，分离的拮抗性抗原结合蛋白是hemibody。“hemibody”是一种免疫功能性免疫球蛋白构建体，其包含完整重链、完整轻链和与该完整重链的Fc区配对的第二重链Fc区。可以但不必须采用接头以连接重链Fc区和第二重链Fc区。在多个实施方案中，hemibody是包含以下的单价抗原结合蛋白：(i)完整轻链，和(ii)融合至Fc区(例如IgG2 Fc区)的重链。用于制备hemibody的方法在例如美国专利申请2012/0195879中描述，该文献以教导制备这样的hemibody的目的通过引用以其整体并入本文。
在多个实施方案中，胰高血糖素受体拮抗剂或调节剂是小分子。在多个实施方案中，方法包括胰高血糖素受体拮抗剂或调节剂的使用，如在以下中描述的：美国专利第8907103号、第8445538号、第8,361,959号、第9045389号、第8623818号、第7138529号、第8748624号、第8232413号、第8470773号、第8324384号、第8809579号、第8318667号、第8735604号、第789472号、第7935713号、第7803951号、第7687534号和第8436015号，美国专利申请第20140135400号、第20110281795号、第20130012493号和20130012434号，以及PCT申请第WO2010019828号、第WO2003051357号、第WO2015066252号、第WO2003053938号、第WO2004/069158号、第WO2005/121097号和第WO2007/015999号。在多个实施方案中，方法包括在以下中中描述的胰高血糖素受体调节剂的使用：美国专利第8084489号、第7816557号、第7807702号、第8691856号、第7863329号、第8076374号、第7696248号、第7989457号、第8809342号、第8507533号和第8927577号。在多个实施方案中，方法包括选自以下的胰高血糖素受体拮抗剂的使用：LY2409021、MK-0893、GRA1、LGD-6972、PF-06291874和Bat 27-9955。
在多个实施方案中，胰高血糖素受体拮抗剂是抗-GCGR抗体，并且PI3K途径抑制剂是BYL719(PI3Kα选择性的)。在多个实施方案中，胰高血糖素受体拮抗剂是抗-GCGR抗体，并且PI3K途径抑制剂是GSK2636771(PI3Kβ选择性的)。在多个实施方案中，胰高血糖素受体拮抗剂是抗-GCGR抗体，并且PI3K途径抑制剂是BYL719和GSK2636771的组合。在多个实施方案中，胰高血糖素受体拮抗剂是抗-GCGR抗体，并且PI3K途径抑制剂是NVP-BKM120(泛(pan)-特异性的)。在多个实施方案中，胰高血糖素受体拮抗剂是抗-GCGR抗体，并且PI3K途径抑制剂是选自GSK690693和MK-2206的泛AKT抑制剂。在多个实施方案中，胰高血糖素受体拮抗剂是抗-GCGR抗体，并且PI3K途径抑制剂是RAD001(mTORC1抑制剂)。在多个实施方案中，胰高血糖素受体拮抗剂是抗-GCGR抗体，并且PI3K途径抑制剂是Ganitumab(IGF1R单克隆抗体)。在多个实施方案中，胰高血糖素受体拮抗剂是抗-GCGR抗体，并且PI3K途径抑制剂是linsitinib(IGF1R+IR激酶抑制剂)。在多个实施方案中，胰高血糖素受体拮抗剂是抗-GCGR抗体，并且PI3K途径抑制剂是MEDI 573(IGF1+IGF2单克隆Ab)。
癌症
癌症是一组涉及具有扩散或侵入到身体其他部分的潜能的异常细胞生长的疾病。形成离散肿瘤块，即不含囊肿或液体区域的异常生长，被定义为实体肿瘤。实体肿瘤可以是良性的(非癌症)，或恶性的(癌症)。不同类型的实体肿瘤以形成它们的细胞类型命名。实体肿瘤的实例是肉瘤、癌和淋巴瘤。衍生自两种血细胞系，骨髓和淋巴中的任一种的癌症被定义为血液恶性肿瘤。这样的恶性肿瘤也被称为血癌或液体肿瘤。液体肿瘤的实例包括多发性骨髓瘤、急性白血病(例如11q23阳性急性白血病、急性淋巴细胞白血病、急性髓细胞白血病(acute myelocytic leukemia)、急性骨髓性白血病(acute myelogenous leukemia)和成髓细胞性白血病、早幼粒细胞白血病、粒单核细胞白血病(myelomonocytic leukemia)、单核细胞白血病和红白血病)、慢性白血病(例如慢性髓细胞(粒细胞)白血病(chronicmyelocytic(granulocytic)leukemia)、慢性骨髓性白血病(chronic myelogenousleukemia)和慢性淋巴细胞白血病)、真性红细胞增多症、淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(无痛性(indolent)和高级形式(high grade forms))、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症、重链疾病、骨髓增生异常综合征、毛细胞白血病和骨髓发育不良。
在一个方面，本公开内容提供了治疗患有癌症的受试者的组合治疗方法，所述方法包括给受试者施用a)有效量的包含磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂的药物组合物，和b)有效量的包含胰高血糖素受体拮抗剂的药物组合物。在多个实施方案中，癌症选自由以下组成的组：a)乳腺癌，其包括但不限于侵袭性导管癌、侵袭性小叶癌、原位导管癌、原位小叶癌和转移性乳腺癌；b)淋巴细胞癌，其包括但不限于多种T细胞和B细胞淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、皮肤T细胞淋巴瘤、霍奇金病和中枢神经系统淋巴瘤；(c)多发性骨髓瘤、慢性中性粒细胞白血病、慢性嗜酸性粒细胞白血病/高嗜酸性粒细胞综合征、慢性特发性骨髓纤维化、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、慢性粒单核细胞白血病，非典型慢性骨髓性白血病、幼年型粒单核细胞白血病、难治性贫血伴环形铁粒幼细胞和难治性贫血不伴环形铁粒幼细胞、难治性细胞减少症(骨髓增生异常综合征)伴多系发育不良、难治性贫血(骨髓增生异常综合征)伴原始细胞过多、5q-综合征、骨髓增生异常综合征伴t(9；12)(q22；p12)、和骨髓性白血病(例如，费城染色体阳性(t(9；22)(qq34；q11))；d)皮肤癌，其包括但不限于基底细胞癌、鳞状细胞癌、恶性黑素瘤和卡波西肉瘤；e)白血病，其包括但不限于急性髓细胞性白血病(acute myeloid leukemia)、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、慢性骨髓性白血病和毛细胞白血病，f)消化道癌症，其包括但不限于肛门癌、结肠癌、结肠直肠癌、食道癌、胆囊癌、胃(stomach)(胃的(gastric))癌、胰腺癌、胰腺癌-胰岛细胞癌、直肠癌、小肠癌和唾液腺癌；g)肝癌，其包括但不限于肝细胞癌、胆管癌、混合型肝细胞胆管癌、原发性肝癌和转移性肝癌；h)男性生殖器官癌症，其包括但不限于前列腺癌、睾丸癌和阴茎癌；i)女性生殖器官癌症，其包括但不限于子宫癌(子宫内膜癌)、宫颈癌、卵巢癌、阴道癌、外阴癌、子宫肉瘤和卵巢生殖细胞肿瘤；j)呼吸道癌症，其包括但不限于小细胞肺癌和非小细胞肺癌、支气管腺瘤、胸膜肺母细胞瘤和恶性间皮瘤；k)脑癌，其包括但不限于脑干和丘脑胶质瘤、小脑和脑星形细胞瘤、髓母细胞瘤(medullablastoma)、室管膜肿瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤以及神经外胚层肿瘤和松果体肿瘤；l)眼癌，其包括但不限于眼内黑素瘤、视网膜母细胞瘤和横纹肌肉瘤；m)头颈癌，其包括但不限于喉癌、下咽癌、鼻咽癌、口咽癌、唇癌和口腔癌、鳞状颈部癌、转移性副鼻旁窦癌(metastatic paranasal sinus cance)；n)甲状腺癌，其包括但不限于甲状腺癌、胸腺瘤、恶性胸腺瘤、甲状腺髓样癌、甲状腺乳头状癌、多发性内分泌肿瘤2A型(MEN2A)、嗜铬细胞瘤、甲状旁腺腺瘤、多发性内分泌肿瘤2B型(MEN2B)、家族性甲状腺髓样癌(FMTC)和类癌；o)泌尿道癌症，其包括但不限于膀胱癌；p)肉瘤，其包括但不限于软组织肉瘤、骨肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、淋巴肉瘤和横纹肌肉瘤；q)肾癌，其包括但不限于肾细胞癌、肾透明细胞癌；和肾细胞腺癌；r)前体B淋巴细胞白血病/淋巴瘤(前体B细胞急性淋巴细胞白血病)、B细胞慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤、B细胞幼淋巴细胞白血病(B-cell prolymphocytic leukemia)、淋巴浆细胞淋巴瘤(lymphoplasmacytic lymphoma)、脾边缘区B细胞淋巴瘤、毛细胞白血病、浆细胞骨髓瘤/浆细胞瘤、MALT型结外边缘区B细胞淋巴瘤、结边缘区B细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、套细胞淋巴瘤、弥漫性大B细胞淋巴瘤，纵隔大B细胞淋巴瘤、原发性渗出性淋巴瘤和伯基特淋巴瘤/伯基特细胞白血病；(s)前体T淋巴母细胞淋巴瘤/白血病(前体T细胞急性淋巴母细胞白血病)、T细胞幼淋巴细胞白血病、T细胞粒淋巴细胞白血病(T-cell granular lymphocyticleukemia)、侵袭性NK细胞白血病、成人T细胞淋巴瘤/白血病(HTLV-1)、结外NK/T细胞淋巴瘤(鼻型)(extranodal NK/T-cell lymphoma，nasal type)、肠病型T细胞淋巴瘤、肝脾y-δT细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样T细胞淋巴瘤、蕈样肉芽肿瘤/Sezary综合征、间变性大细胞淋巴瘤T/裸(null)细胞型原发性皮肤型(anaplastic large-cell lymphoma，T/nullcellprimary cutaneous type)、、外周T细胞淋巴瘤(无其他特征)、血管免疫母细胞性T细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤T/裸细胞型和原发性全身型；(t)结节性淋巴细胞为主型霍奇金淋巴瘤、结节硬化型霍奇金淋巴瘤(1级和2级)、富于淋巴细胞的经典型霍奇金淋巴瘤、混合细胞型霍奇金淋巴瘤和淋巴细胞耗竭型霍奇金淋巴瘤；和(u)AML伴t(8；21)(q22；q22)、AML1(CBF-α)/ETO、急性早幼粒细胞白血病(AML伴t(15；17)(q22；q11-12)和变体PML/RAR-α)、AML伴异常骨髓嗜酸性粒细胞(AML with abnormal bone marrow eosinophils)(inv(16)(p13q22)或t(16；16)(p13；q11)、CBFb/MYH11倍)和AML伴11q23(MLL)异常、微小分化型AML(AML minimally differentiated)、未成熟型AML(AML without maturation)、成熟型AML、急性髓单核细胞白血病、急性单核细胞白血病、急性红细胞白血病、急性巨核细胞白血病、急性嗜碱性粒细胞白血病和急性骨髓增生伴骨髓纤维化(acute panmyelosiswith myelofibrosis)。在多个实施方案中，癌症是乳腺癌。在多个实施方案中，癌症是卵巢癌。
药物组合物
在另一个方面，本公开内容提供了包含如本文描述的分离的胰高血糖素受体拮抗剂与一种或更多种药学上可接受的运载体的药物组合物；包含如本文描述的PI3K抑制剂与一种或更多种药学上可接受的运载体的药物组合物；或包含如本文描述的分离的胰高血糖素受体拮抗剂和PI3K抑制剂、与一种或更多种药学上可接受的运载体的药物组合物。本文描述的药物组合物和使用方法还包括与其他活性剂组合(共施用)的实施方案，如以下详述的。
本文提供的分离的胰高血糖素受体拮抗剂和/或PI3K途径抑制剂可以通过对药物制剂领域技术人员明显的多种方法配制。例如，这样的方法可以见于Remington′sPharmaceutical Sciences，第19版(Mack Publishing Company，1995)中。药物组合物通常是无菌的、基本等渗的并且完全遵守美国食品与药物管理局的所有GMP条例配制。
通常，本发明的分离的胰高血糖素受体拮抗剂和/或PI3K途径抑制剂适于作为与一种或更多种药学上可接受的赋形剂或运载体缔合的制剂被施用。这样的药学上可接受的赋形剂和运载体是本领域普通技术人员所熟知并理解的，并且已被广泛描述(参见例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，第18版，A.R.Gennaro编著，Mack PublishingCompany，1990)。可以包括药学上可接受的运载体用于改变、保持或维持例如pH、摩尔渗透压浓度、黏度、透光率、颜色、等渗性、气味、无菌性、稳定性、溶解或释放速率、成分吸收或渗透的目的。这样的药物组合物可以影响多肽的物理状态、稳定性、体内释放速率、以及体内清除速率。合适的药学上可接受的运载体包括但不限于，氨基酸(诸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸)；抗生素；抗氧化剂(诸如抗坏血酸、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠)；缓冲剂(诸如硼酸盐、碳酸氢盐、Tris-HCl、柠檬酸盐、磷酸盐、其他有机酸)；膨胀剂(诸如甘露醇或甘氨酸)；螯合剂(诸如乙二胺四乙酸(EDTA))；复合剂(complexing agent)(诸如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟丙基-β-环糊精)；填充剂；单糖；二糖和其他碳水化合物(诸如葡萄糖、甘露糖或糊精)；蛋白(诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)；着色剂；调味剂和稀释剂；乳化剂；亲水性聚合物(诸如聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；盐形成抗衡离子(诸如钠)；防腐剂(诸如苯扎氯铵、苯甲酸、水杨酸、硫柳汞、苯乙醇、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、氯已定、山梨酸或过氧化氢)；溶剂(诸如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(诸如甘露醇或山梨醇)；悬浮剂；表面活性剂或润湿剂(诸如普朗尼克、PEG、山梨醇酐酯(sorbitan esters)、聚山梨醇酯诸如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、triton、氨丁三醇、卵磷脂、胆固醇、tyloxapal)；稳定性增强剂(蔗糖或山梨醇)；渗涨度增强剂(诸如碱金属卤化物(优选地氯化钠或氯化钾)、甘露醇和山梨醇)；递送媒介物；稀释剂；赋形剂和/或药物佐剂。
药物组合物中的主要媒介物(vehicle)或运载体(carrier)实质上可以是水性的或非水性的。例如，合适的媒介物或运载体可以是可能用用于肠胃外施用的组合物中常见的其他材料补充的注射用水、生理盐水溶液或人工脑脊液。中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是另外的示例性媒介物。其他的示例性药物组合物包含约pH 7.0-8.5的Tris缓冲液或约pH 4.0-5.5的乙酸盐缓冲液，其还可以包含山梨醇或其合适的替代物。在本公开内容的一个实施方案中，可以通过将选择的具有期望的纯度的组合物与任选的制剂用剂(formulation agent)(Remington’s Pharmaceutical Sciences，同上)混合来制备组合物用于以冻干的块状物或水性溶液形式储存。另外，可以使用合适的赋形剂诸如蔗糖将治疗性组合物配制为冻干物。最佳的药物组合物将取决于例如意图的施用途径、递送形式或期望的剂量由本领域普通技术人员来确定。
本发明的药物组合物通常适于肠胃外施用。如本文使用的，药物组合物的“肠胃外施用”包括特征在于以下的任何施用途径：物理破坏(physical breaching)受试者的组织并经组织中的破坏施用药物组合物，因此通常导致直接施用到血流、肌肉或内脏中。因此，肠胃外施用包括但不限于，通过注射组合物、通过经外科手术切口应用组合物、通过经组织渗透性非外科手术伤口应用组合物等施用药物组合物。在多个实施方案中，药物组合物被配制用于通过选自以下的途径肠胃外施用：例如皮下注射、腹膜内注射、肌内注射、胸骨内注射、静脉内注射、动脉内注射、鞘内注射、脑室内注射、尿道内注射、颅内注射、滑膜内注射或通过输注。
当预期肠胃外施用时，治疗性药物组合物可以呈在药学上可接受的媒介物中包含期望的分离的胰高血糖素受体拮抗剂的无致热原、肠胃外可接受的水性溶液的形式。用于肠胃外注射的特别合适的媒介物是无菌蒸馏水，其中多肽被配制为合适储存的无菌、等渗溶液。在多个实施方案中，适于可注射施用的药物制剂可以在水性溶液，优选地在生理上相容的缓冲液诸如Hanks溶液、Ringer溶液或生理缓冲盐水中配制。水性注射悬浮液可以包含增加悬浮液黏度的物质，诸如羧甲基纤维素钠、山梨醇、或右旋糖酐。另外，活性化合物的悬浮液可以被制备为合适的油性注射悬浮液。任选地，悬浮液还可以包含合适的稳定剂或增加化合物的溶解度并允许高度浓缩的溶液的制备的剂。可注射制剂可以以单位剂型，诸如在包含防腐剂的安瓿或多剂量容器中被制备、包装或销售。其他有用的可肠胃外可施用的制剂包括包含微晶形式或呈脂质体制品的活性成分的那些。用于肠胃外施用的制剂可以被配制为立刻释放和/或修改释放。修改释放制剂包括延迟、持续、脉冲、受控、靶向和编程释放。
本公开内容的分离的胰高血糖素受体拮抗剂和/或PI3K抑制剂可以鼻内或通过吸入施用，通常以干粉的形式(单独的、作为混合物或作为混合的组分颗粒，例如与合适的药学上可接受的运载体混合)从干粉吸入器施用、作为气雾剂喷雾从压力容器、泵、喷雾器(spray)、雾化器(优选地使用电水动力学产生细雾(fine mist)的雾化器)、或喷雾器(nebulizer)施用，使用或不使用合适的推进剂，或作为滴鼻液施用。
压力容器、泵、喷雾器(spray)、雾化器、或喷雾器(nebulizer)通常包含本公开内容的分离的胰高血糖素受体拮抗剂和/或PI3K抑制剂的溶液或悬浮液，所述溶液或悬浮液包含例如，用于分散、溶解或延长活性剂的释放的合适的剂、作为溶剂的推进剂。
在使用之前，在干燥粉末或悬浮液制剂中，药物产品通常被微粉化至适于通过吸入递送的尺寸(通常小于5微米)。这可以通过任何合适的粉碎方法实现，诸如螺旋气流粉碎、流化床气流粉碎、超临界流体加工以形成纳米颗粒、高压匀质或喷雾干燥。
用于在吸入器或吹药器(insufflator)中使用的胶囊、泡罩和药筒可以被配制为包含本公开内容的胰高血糖素受体拮抗剂和/或PI3K抑制剂、合适的粉末基质和性能改性剂(performance modifier)的粉末混合物。
合适的香精诸如薄荷脑和左薄荷脑，或甜味剂诸如糖精或糖精钠，可以被添加至意图用于吸入/鼻内施用的本公开内容的那些制剂。
用于吸入/鼻内施用的制剂可以被配制为立刻释放和/或修改释放。修改释放制剂包括延迟-、持续、脉冲、受控、靶向和编程释放。
在干粉吸入器和气雾剂的情况下，剂量单位借助递送计量量的阀门确定。根据本公开内容的单位通常被安排施用本公开内容的抗体的计量剂量或“喷雾(puff)”。总每天剂量将通常以单一剂量施用，或更经常地，作为分次剂量整天施用。
本公开内容的分离的胰高血糖素受体拮抗剂和/或PI3K抑制剂还可以被配制用于口服施用。口服施用可以包括吞咽以使得化合物进入肠胃道、和/或含服、经舌或经舌下施用，通过这些方式化合物从口直接进入血流。适于口服施用的制剂包括固体、半固体和液体系统，诸如片剂；包含多颗粒或纳米颗粒的软胶囊或硬胶囊、液体或粉末；锭剂(包括填充液体的)；咀嚼剂(chews)；凝胶；快速分散的剂型；薄膜；卵形剂(ovules)；喷雾剂和颊/黏膜黏附贴片(buccal/mucoadhesive patches)。
意图用于口服使用的药物组合物可以根据本领域已知的用于制造药物组合物的任何方法制备，并且这样的组合物可以包含选自由甜味剂组成的组的一种或更多种剂以提供药学上美观且可口的制剂。例如，为了制备可口服递送的片剂，将分离的胰高血糖素受体拮抗剂和/或PI3K抑制剂与至少一种药学运载体混合，并且根据已知方法压缩所述固体制剂以形成片剂，用于递送至肠胃道。片剂组合物通常与以下一起配制：添加剂例如糖类或纤维素运载体、粘合剂诸如淀粉糊或甲基纤维素、填充剂、崩解剂或典型地通常用于制造医用制品的其他添加剂。为了制备可口服递送的胶囊，将DHEA与至少一种药学运载体混合，并且将固体制剂置于适于递送至肠胃道的胶囊容器中。包含分离的胰高血糖素受体拮抗剂和/或PI3K途径抑制剂的组合物可以如Remington′s Pharmaceutical Sciences，第18版1990(Mack Publishing Co.Easton Pa.18042)中在第89章中的一般描述来制备，其通过引用并入本文。
在多个实施方案中，药物组合物被配制为包含与适于制造片剂的非毒性药学上可接受的运载体混合的分离的胰高血糖素受体拮抗剂和/或PI3K抑制剂的可口服递送的片剂。这些运载体可以是惰性稀释剂，诸如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉、明胶或阿拉伯胶，以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以是未包衣的，或者它们可以用已知技术包衣以延迟在肠胃道中的崩解和吸收并从而经更长时间段提供持续作用。例如，可以采用延时材料诸如单独的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯或与蜡一起使用。
在多个实施方案中，药物组合物被配制为硬明胶胶囊，其中将分离的胰高血糖素受体拮抗剂和/或PI3K抑制剂与惰性固体稀释剂例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或者被配制为软明胶胶囊，其中将分离的胰高血糖素受体拮抗剂和/或PI3K抑制剂与水性或油介质例如花生油(arachis oil)、花生油(peanut oil)、液体石蜡或橄榄油混合。
液体制剂包括悬浮液、溶液、糖浆和酏剂。这样的制剂可以作为软胶囊或硬胶囊(从例如明胶或羟丙甲纤维素制成)中的填充剂被采用，并且通常包含运载体，例如水、乙醇、聚乙二醇、丙二醇、甲基纤维素或合适的油，以及一种或更多种乳化剂和/或悬浮剂。液体制剂还可以通过重构固体，例如从小袋制备。
本领域公认的用于制备和施用肽、蛋白、抗体和免疫缀合物的任何方法可以合适地被采用用于施用本发明的分离的胰高血糖素受体拮抗剂。在多个实施方案中，本发明的REMD-477由经认证的GMP制造商CMCBiologics，Seattle，USA生产，并以无菌、澄清、无色至微黄色冷冻液体药物产品(DP)的形式提供，以用于皮下施用。每个无菌小瓶被填充有1mL可递送体积的用10mM乙酸钠、5％(w/v)山梨醇、0.004％(w/v)聚山梨酯20，pH 5.2配制的70mg/mL的REMD-477。
治疗方法
在一个方面，本公开内容涉及治疗患有癌症的受试者的组合治疗方法，所述组合治疗方法包括向受试者施用a)有效量的包含磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)抑制剂的药物组合物，和b)有效量的包含胰高血糖素受体拮抗剂的药物组合物。在多个实施方案中，该组合治疗方法包括施用有效量的包含PI3K抑制剂或其药学上可接受的盐和胰高血糖素受体拮抗剂抗体的药物组合物。这些多个组合疗法可以提供“协同作用(synergistic effect)”即，当活性成分一起使用时，实现的作用比单独地使用各化合物产生的作用的和大。这些组合治疗方法对于对使用单独的PI3K抑制剂、单独的另一种抗癌剂或PI3K抑制剂与另一种抗癌剂组合耐受性的或难治性的癌症特别有效。
本公开内容的药物组合物可以被临床研究测试。合适的临床研究可以是，例如，在患有癌症的患者中的非盲(open-label)、剂量递增研究。这样的研究特别证明了本发明活性成分的组合的协同作用。对癌症的有益作用可以通过对本领域技术人员已知的这些研究的结果来直接确定。这样的研究特别适于比较使用本发明的活性成分和组合的单一疗法的作用。在多个实施方案中，PI3K抑制剂的剂量递增，直至达到最大耐受剂量(MaximumTolerated Dosage)，并且胰高血糖素受体拮抗剂抗体以固定的剂量被施用。在多个实施方案中，PI3K抑制剂以固定的剂量被施用，并且胰高血糖素受体拮抗剂抗体的剂量递增。每个患者可以每天地或间歇地接受化合物的剂量。治疗的功效可以在这样的研究中确定，例如，在治疗12周、18周或24周之后，通过每4至6周评价症状评分来确定。可以预见，与仅应用本发明的组合中使用的一种药物活性成分的单一疗法相比，本公开内容的组合疗法的施用不仅会产生有益作用，例如协同治疗作用，例如关于缓解、延缓症状的进展或抑制症状，而且还会产生令人惊讶的有益作用，例如更少的副作用、改进的生活质量或减少的发病率。另外的益处可以是可以使用较低和/或较少频率剂量的本发明的组合的一种或两种活性成分，这可以使副作用的发生率或严重程度减少。这符合待治疗患者的期望和要求。
在多个实施方案中，将针对PI3K抑制剂和胰高血糖素受体拮抗剂抗体的药物组合物在治疗或预防癌症，例如PI3KCA扩增的和/或PI3KCA突变的癌症的有效性对其进行评价。
用于药物组合物的剂量量和给药方案可以被调整以提供最佳的期望的响应(例如治疗响应)。例如，可以施用单次团注(bolus)，可以随时间施用多个分次剂量(多个或重复或维持)并且剂量可以如治疗情境的迫切需要指示的按比例降低或增加。为了容易施用和剂量的一致性，配制剂量单位形式的肠胃外组合物是特别有利的。如本文使用的剂量单位形式指适于作为用于待被治疗的哺乳动物患者的单一剂量的物理上的分散单元；每一个单元包含预先确定的量的活性化合物，该确定的量被计算为与要求的药学运载体关联产生期望的治疗作用。用于本发明的剂量单位形式的规格(specification)将主要由胰高血糖素受体拮抗剂和PI3K途径抑制剂的独特特征和待被实现的特定治疗作用决定。
因此，技术人员将理解，基于本文提供的发明，根据治疗领域公知的方法调整剂量和给药方案。即，最大可耐受剂量可以被容易地确定，并且向患者提供可检测的治疗益处的有效量也可以被确定，如向患者提供可检测的治疗益处而施用每个剂的时间要求可以被确定。因此，尽管在本文中举例说明了多种剂量和施用方案，这些实例绝不限制在实践本发明时可以被提供至患者的剂量和施用方案。
应注意到，剂量值可以随着待被缓解的状况的类型和严重程度变化，并且可以包括单剂量或多剂量。还应理解，对于任何特定受试者，应根据患者需要和施用或监督组合物的施用的人士的专业判断随时间调整具体剂量方案，并且本文列出的剂量范围仅是示例性的并且不意图限制所要求保护的组合物的范围或实践。此外，使用本发明的组合物的剂量方案可以基于多个因素，包括疾病的类型、患者的年龄、体重、性别、医学状况、状况的严重程度、施用途径和采用的特定抗体。因此，给药方案可以广泛变化，但可以使用标准方法常规地确定。例如，可以基于药代动力学或药效学参数调整剂量，所述参数可以包括临床作用诸如毒性作用和/或实验值。因此，本发明包括如技术人员确定的患者内的剂量递增(intra-patient dose-escalation)。确定合适的剂量和方案是相关技术领域公知的并且可以被理解为在提供本文公开的教导后，则由技术人员掌握。
对于施用至人类受试者，当然取决于施用模式，本公开内容的分离的胰高血糖素受体拮抗剂的总每月剂量可以在以下的范围内：0.5-1200mg/受试者、0.5-1100mg/受试者、0.5-1000mg/受试者、0.5-900mg/受试者、0.5-800mg/受试者、0.5-700mg/受试者、0.5-600mg/受试者、0.5-500mg/受试者、0.5-400mg/受试者、0.5-300mg/受试者、0.5-200mg/受试者、0.5-100mg/受试者、0.5-50mg/受试者、1-1200mg/受试者、1-1100mg/受试者、1-1000mg/受试者、1-900mg/受试者、1-800mg/受试者、1-700mg/受试者、1-600mg/受试者、1-500mg/受试者、1-400mg/受试者、1-300mg/受试者、1-200mg/受试者、1-100mg/受试者或1-50mg/受试者。例如，静脉内每月剂量可以需要约1-1000mg/受试者。在某些实施方案中，本公开内容的分离的胰高血糖素受体拮抗剂抗体可以以约1-200mg/受试者、1-150mg/受试者或1-100mg/受试者被施用。总每月剂量可以以单剂量或分次剂量施用，并且可以依医生的的自由裁量落在本文给出的通常范围外。
对于本公开内容的分离的胰高血糖素受体拮抗剂抗体或抗原结合片段的治疗有效量或预防有效量的示例性的、非限制性的每周剂量范围可以是约0.001至10mg/kg体重/周、0.001至9mg/kg体重/周、0.001至8mg/kg体重/周、0.001至7mg/kg体重/周、0.001至6mg/kg体重/周、0.001至5mg/kg体重/周、0.001至4mg/kg体重/周、0.001至3mg/kg体重/周、0.001至20mg/kg体重/周、0.001至1mg/kg体重/周、0.010至10mg/kg体重/周、0.010至9mg/kg体重/周、0.010至8mg/kg体重/周、0.010至7mg/kg体重/周、0.010至6mg/kg体重/周、0.010至5mg/kg体重/周、0.010至4mg/kg体重/周、0.010至3mg/kg体重/周、0.010至2mg/kg体重/周、0.010至1mg/kg体重/周、0.1至10mg/kg体重/周、0.1至9mg/kg体重/周、0.1至8mg/kg体重/周、0.1至7mg/kg体重/周、0.1至6mg/kg体重/周、0.1至5mg/kg体重/周、0.1至4mg/kg体重/周、0.1至3mg/kg体重/周、0.1至2mg/kg体重/周、0.1至1mg/kg体重/周、0.5至10mg/kg体重/周、0.5至9mg/kg体重/周、0.5至8mg/kg体重/周、0.5至7mg/kg体重/周、0.5至6mg/kg体重/周、0.5至5mg/kg体重/周、0.5至4mg/kg体重/周、0.5至3mg/kg体重/周、0.5至2mg/kg体重/周、0.5至1mg/kg体重/周、1至10mg/kg体重/周、1至9mg/kg体重/周、1至8mg/kg体重/周、1至7mg/kg体重/周、1至6mg/kg体重/周、1至5mg/kg体重/周、1至4mg/kg体重/周、1至3mg/kg体重或2mg/kg体重/周。
在多个实施方案中，施用的胰高血糖素受体拮抗剂抗体的总剂量将获得在以下的范围内的血浆抗体浓度：例如约1至1000μg/ml、约1至750μg/ml、约1至500μg/ml、约1至250μg/ml、约10至1000μg/ml、约10至750μg/ml、约10至500μg/ml、约10至250μg/ml、约20至1000μg/ml、约20至750μg/ml、约20至500μg/ml、约20至250μg/ml、约30至1000μg/ml、约30至750μg/ml、约30至500μg/ml、约30至250μg/ml。
本公开内容的PI3K途径抑制剂的治疗有效量或预防有效量的示例性的、非限制性的剂量范围可以是约0.05mg/kg至75mg/kg接受者体重/天、0.05mg/kg至70mg/kg接受者体重/天、0.05mg/kg至60mg/kg接受者体重/天、0.05mg/kg至50mg/kg接受者体重/天、0.05mg/kg至40mg/kg接受者体重/天、0.05mg/kg至30mg/kg接受者体重/天、0.05mg/kg至20mg/kg接受者体重/天、0.05mg/kg至10mg/kg接受者体重/天、0.1mg/kg至75mg/kg接受者体重/天、0.1mg/kg至30mg/kg接受者体重/天、0.1mg/kg至40mg/kg接受者体重/天、0.1mg/kg至50mg/kg接受者体重/天、0.1mg/kg至40mg/kg接受者体重/天、0.1mg/kg至30mg/kg接受者体重/天、0.1mg/kg至20mg/kg接受者体重/天、0.1mg/kg至10mg/kg接受者体重/天、0.5mg/kg至75mg/kg接受者体重/天、0.5mg/kg至70mg/kg接受者体重/天、0.5mg/kg至60mg/kg接受者体重/天、0.5mg/kg至50mg/kg接受者体重/天、0.5mg/kg至40mg/kg接受者体重/天、0.5mg/kg至30mg/kg接受者体重/天、0.5mg/kg至20mg/kg接受者体重/天、0.5mg/kg至10mg/kg接受者体重/天、1mg/kg至75mg/kg接受者体重/天、1mg/kg至70mg/kg接受者体重/天、1mg/kg至60mg/kg接受者体重/天、1mg/kg至50mg/kg接受者体重/天、1mg/kg至40mg/kg接受者体重/天、1mg/kg至30mg/kg接受者体重/天、1mg/kg至20mg/kg接受者体重/天、1mg/kg至10mg/kg接受者体重/天、5mg/kg至75mg/kg接受者体重/天、5mg/kg至70mg/kg接受者体重/天、5mg/kg至60mg/kg接受者体重/天、5mg/kg至50mg/kg接受者体重/天、5mg/kg至40mg/kg接受者体重/天、5mg/kg至30mg/kg接受者体重/天、5mg/kg至20mg/kg接受者体重/天、5mg/kg至10mg/kg接受者体重/天。在多个实施方案中，剂量范围将是从约0.1-25mg/kg/天。在多个实施方案中，剂量范围将是从约0.5mg/kg/天至10mg/kg/天。在多个实施方案中，用于施用至70kg的人的剂量范围将是从约35-700mg/天。
在多个实施方案中，本公开内容的药物组合物将包在1∶100至1∶1范围内的比率的PI3K途径抑制剂∶GCGR拮抗剂抗体。在多个实施方案中，PI3K抑制剂∶GCGR拮抗剂抗体的比率将选自由以下组成的组：1∶100、1∶90、1∶80、1∶70、1∶60、1∶50、1∶40、1∶30、1∶20、1∶10、1∶5、1∶2和1∶1。在多个实施方案中，本公开内容的药物组合物将包含在1∶100至1∶1范围内的比率的GCGR拮抗剂抗体∶PI3K途径抑制剂。在多个实施方案中，GCGR拮抗剂抗体∶PI3K抑制剂的比率将选自由以下组成的组：1∶100、1∶90、1∶80、1∶70、1∶60、1∶50、1∶40、1∶30、1：20、1∶10、1∶5、1∶2和1∶1。
在多个实施方案中，药物组合物的单次施用或多次施用取决于患者需求和耐受的剂量和频率来施用。剂量可以被施用一次，但可以被周期性地应用直至实现治疗结果或直至副作用警告停止疗法。
在多个实施方案中，组合疗法包括同时(simultaneouslv)施用在同一药物组合物中或在分开的药物组合物中的分离的胰高血糖素受体拮抗剂组合物和PI3K途径抑制剂组合物。在多个实施方案中，依次施用分离的胰高血糖素受体拮抗剂组合物和PI3K途径抑制剂组合物，即，在施用PI3K途径抑制剂组合物之前或之后施用分离的胰高血糖素受体拮抗剂组合物。
在多个实施方案中，分离的胰高血糖素受体拮抗剂组合物和PI3K途径抑制剂组合物的施用是并行的，即，分离的胰高血糖素受体拮抗剂组合物和PI3K途径抑制剂组合物的施用时间段彼此重叠。
在多个实施方案中，分离的胰高血糖素受体拮抗剂组合物和PI3K途径抑制剂组合物的施用是非并行的。例如，在多个实施方案中，在施用PI3K途径抑制剂组合物之前终止分离的胰高血糖素受体拮抗剂组合物的施用。在多个实施方案中，在施用分离的胰高血糖素受体拮抗剂组合物之前终止施用PI3K途径抑制剂组合物。
本发明的药物组合物的毒性和治疗指数可以通过细胞培养物或实验动物中的标准药学程序来确定，例如用于确定LD50(对50％群体致死的剂量)和ED50(对50％群体治疗有效的剂量)的程序。毒性和治疗有效剂量之间的剂量比率是治疗指数，并且其可以表示为比率LD50/ED50。表现出大治疗指数的组合物通常是优选的。
可以用作本发明的方法中的第三剂的合适的药剂包括抗肥胖剂(包括食欲阻抑剂)和降葡萄糖剂(glucose-lowering agent)，例如抗糖尿病剂、抗高血糖剂、降脂质剂和抗高血压剂。
合适的抗肥胖剂(其中的一些也可以用作抗糖尿病剂)包括11β-羟基类固醇脱氢酶-1(1型11β-HSD)抑制剂、硬脂酰-CoA去饱和酶-1(SCD-1)抑制剂、MCR-4激动剂、缩胆囊素-A(cholecystokinin-A)(CCK-A)激动剂、单胺再摄取抑制剂(诸如西布曲明)、拟交感神经剂(sympathomimetic agents)、β3肾上腺素能激动剂、多巴胺激动剂(诸如溴隐亭)、黑素细胞刺激激素类似物、5HT2c激动剂、黑色素浓缩激素拮抗剂、瘦素(OB蛋白)、瘦素类似物、瘦素激动剂、甘丙肽拮抗剂、脂肪酶抑制剂(诸如四氢利泼斯汀(tetrahydrolipstatin)，即奥利司他)、减食欲剂(诸如铃蟾肽(bombesin)激动剂)、神经肽-Y拮抗剂(例如NPY Y5拮抗剂，诸如韦利贝特(velneperit))、PYY3-36(包括其类似物)、BRS3调节剂、阿片受体亚型的混合的拮抗剂、拟甲状腺素剂(thyromimetic agents)、脱氢表雄酮或其类似物、糖皮质激素激动剂或拮抗剂、增食欲素(orexin)拮抗剂、胰高血糖素样肽-1激动剂、睫状神经营养因子(诸如从Regeneron Pharmaceuticals，Inc.，Tarrytown，N.Y和Procter&Gamble Company，Cincinnati，Ohio可得的AXOKINETM)、人类刺豚鼠相关蛋白(AGRP)抑制剂、组胺3拮抗剂或反向激动剂、神经调节肽U激动剂、MTP/ApoB抑制剂(例如肠选择性MTP抑制剂，诸如dirlotapide、JTT130、Usistapide，SLx4090)、阿片拮抗剂、μ型阿片受体调节剂，包括但不限于GSK1521498、MetAp2抑制剂，包括但不限于ZGN-433，对胰高血糖素、GIP和GLP1受体中的2种或更多种具有混合的调节活性的剂，诸如MAR-701或ZP2929，去甲肾上腺素转运蛋白抑制剂、大麻素-1受体拮抗剂/反向激动剂、脑肠肽(ghrelin)激动剂/拮抗剂、调酸素(oxyntomodulin)和类似物、单胺摄取抑制剂，诸如但不限于特索芬辛、增食欲素拮抗剂特索芬辛(tesofensine)、组合剂(诸如安非他酮(bupropion)加唑尼沙胺(zonisamide)、普兰林肽加美曲普汀、安非他酮加纳曲酮、芬特明加托吡酯)等。
在多个实施方案中，抗肥胖剂选自肠选择性MTP抑制剂(例如，dirlotapide、米瑞他匹和英普他派(implitapide)、R56918(CAS号403987)和CAS号913541-47-6)、CCKa激动剂(例如，N-苄基-2-[4-(1H-吲哚-3-亚甲基)-5-氧代-1-苯基-4，5-二氢-2，3，6，10b-四氮杂-苯并[e]莫-6-基]-N-异丙基-乙酰胺(描述于PCT公布第WO 2005/116034号或美国公布第2005-0267100A1号中)、5HT2c激动剂(例如氯卡色林)、MCR4激动剂(例如美国专利第6,818,658号中描述的化合物)、脂肪酶抑制剂(例如西替利司他)、PYY3-36(如本文使用的“PYY3-36”包括类似物，诸如聚乙二醇化PYY3-36，例如在美国公布2006/0178501中描述的那些)、阿片拮抗剂(例如纳曲酮)、油酰雌酮(CAS号180003-17-2)、奥尼匹肽(obinepitide)(TM30338)、普兰林肽(SYMLINTM)、特索芬辛(NS2330)、瘦素、溴隐亭、奥利司他、AOD-9604(CAS号221231-10-3)和西布曲明。
合适的降葡萄糖剂包括抗糖尿病剂、抗高血糖剂、降脂质剂和抗高血压剂。在多个实施方案中，降葡萄糖剂选自双胍类、磺酰脲类、格列奈类(meglitinides)、噻唑烷二酮类(TZD)、α-葡萄糖苷酶抑制剂、DPP-4抑制剂、胆酸螯合剂、多巴胺-2激动剂、SGLT2抑制剂、GLP-1R激动剂、GLP-1激动剂(例如艾塞那肽(exenatide)(商品名Amylin/Astrazeneca)；利拉鲁肽(liraglutide)(商品名Novo Nordisk A/S)；利西拉来(商品名Sanofi)；阿必鲁泰(商品名GlaxoSmithKline)；度拉糖肽(商品名Eli Lilly)、胰淀素模拟物和胰岛素。
在多个实施方案中，本文描述的方法可以与针对治疗或预防增殖性紊乱的其他常规抗癌治疗方法组合使用，这样的方法包括但不限于免疫疗法、化学疗法、小分子激酶抑制剂靶向疗法、手术、放射疗法和干细胞移植。例如，这样的方法可以被用于预防性癌症预防、预防手术后癌症复发和转移，以及作为其他常规癌症疗法的辅助手段。本公开内容认识到，常规癌症疗法(例如，化学疗法、放射疗法、光疗法、免疫疗法和手术)的有效性可以通过本文描述的组合方法的使用来增强。
大量的常规化合物被证明具有抗赘生物活性。这些化合物已经被用作化学疗法中的药剂以使实体肿瘤缩小，防止转移和进一步生长，或减少白血病或骨髓恶性肿瘤中恶性T细胞的数目。尽管化学疗法在治疗多种类型的恶性肿瘤中有效，但许多抗赘生物化合物诱发不期望的副作用。已经表明，当两种或更多种不同的治疗组合时，这些治疗可以协同地起作用并允许降低每种治疗的剂量，从而降低每种化合物在较高剂量发挥的有害的副作用。在其他情况下，对治疗是难治性的恶性肿瘤可以对两种或更多种不同治疗的组合疗法有响应。
当本文公开的胰高血糖素受体拮抗剂+PI3K途径抑制剂组合物与另一种常规抗赘生物剂组合被伴随地(concomitantly)或依次地施用时，胰高血糖素受体拮抗剂+PI3K途径抑制剂组合物可以增强抗赘生物剂的治疗作用或克服细胞对这样的抗赘生物剂的耐受性。这允许减少抗赘生物剂的剂量，从而降低不期望的副作用，或者恢复抗赘生物剂在耐受性T细胞中的有效性。在多个实施方案中，第二抗癌剂，诸如化学治疗剂将被施用至患者。示例性化学治疗剂的列表包括但不限于柔红霉素、更生霉素(dactinomycin)、多柔比星、博莱霉素、丝裂霉素、氮芥、苯丁酸氮芥、美法仑、环磷酰胺、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、苯达莫司汀、阿糖胞苷(CA)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、氟尿苷(5-FUdR)、甲氨蝶呤(MTX)、秋水仙碱、长春新碱、长春花碱、依托泊苷、替尼泊苷、顺铂、卡铂、奥沙利铂、喷司他丁、克拉屈滨、阿糖胞苷、吉西他滨、普拉曲沙、米托蒽醌、己烯雌酚(DES)、氟达拉滨、异环磷酰胺、羟基脲紫杉烷(hydroxyureataxanes)(诸如紫杉醇和多西他赛(doxetaxel))和/或蒽环类抗生素，以及剂，诸如但不限于DA-EPOCH、CHOP、CVP或FOLFOX的组合。在多个实施方案中，这样的化学治疗剂的剂量包括但不限于约10mg/m2、20mg/m2、30mg/m2、40mg/m2、50mg/m2、60mg/m2、75mg/m2、80mg/m2、90mg/m2、100mg/m2、120mg/m2、150mg/m2、175mg/m2、200mg/m2、210mg/m2、220mg/m2、230mg/m2、240mg/m2、250mg/m2、260mg/m2、和300mg/m2中的任何。
在多个实施方案中，本公开内容的组合治疗方法还可以包括向受试者施用治疗有效量的免疫疗法，所述免疫疗法包括但不限于使用针对特定肿瘤抗原的消耗性抗体的治疗；使用抗体-药物缀合物的治疗；使用针对共刺激性或共抑制性分子(免疫检查点)，诸如CTLA-4、PD-1、OX-40、CD137、GITR、LAG3、TIM-3和VISTA的激动性抗体、拮抗性抗体或阻断性抗体的治疗；使用双特异性T细胞接合抗体诸如blinatumomab的治疗；涉及诸如IL-2、IL-12、IL-15、IL-21、GM-CSF、IFN-α、IFN-β和IFN-γ的生物响应调节剂的施用的治疗；使用治疗性疫苗诸如sipuleucel-T的治疗；使用树突细胞疫苗或肿瘤抗原肽疫苗的治疗；使用嵌合抗原受体(CAR)-T细胞的治疗；使用CAR-NK细胞的治疗；使用肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)的治疗；使用过继转移的抗肿瘤T细胞(离体扩增和/或TCR转基因)的治疗；使用TALL-104细胞的治疗；和使用免疫刺激性剂诸如Toll样受体(TLR)激动剂CpG和咪喹莫特的治疗；其中组合疗法提供了对肿瘤细胞增加的效应细胞杀伤，即当被共施用时，胰高血糖素受体拮抗剂、PI3K抑制剂和免疫疗法之间存在协同作用。
已经描述了本发明，以下实施例通过说明性方式来提供，而非限制。
实施例1
在正常C57BL/6小鼠中进行研究以确定使用胰高血糖素受体拮抗剂抗体的预治疗是否会降低PI3K/AKT途径抑制剂诱发的高血糖症。在该研究中使用免疫活性C57BL/6小鼠品系，其通常用于T1DM和T2DM药理学研究，包括GCGR拮抗性单克隆抗体的临床前验证，(Yan等人，J Pharmacol Exp Ther，329(1)：102-111，2009)。
在该实施例中，组合疗法包括用包含SEQ ID NO：8中列出的重链序列和SEQ IDNO：9中列出的轻链序列的嵌合抗-GCGR抗体(“REMD2.59C”)的预治疗和表2中列出的PI3K途径抑制剂的施用(从Shanghai Biochempartner，ShangHai，China获得)。
表2
PI3K/Akt途径抑制剂和制剂
该研究中与动物处理、护理和治疗相关的所有程序都是根据Pharmaron的动物护理和使用委员会(IACUC)(the Institutional Animal Care and Use Committee(IACUC))批准的指导，遵循实验动物护理评价和认证委员会(the guidance of the Associationfor Assessment and Accreditation of Laboratory Animal Care)(AAALAC)的指导进行。在研究之前将C57BL/6小鼠(Vital River Laboratory Animal Technology Co.，LTD)(雄性，8-10周龄)隔离7天。兽医对动物的一般健康状况进行评价，并进行完整的健康检查。在研究之前将异常动物排除。除了方案制定的时间段以外，在整个研究期间，动物可以自由获得辐照灭菌的干燥颗粒食品。
测试物品被如下配制以用于施用：REMD 2.59c(A10mM乙酸钠PH 5.2，5％山梨醇，0.004％T-20)；BYL719(10％NMP(ALFA AESAR)/30％PEG300(ALDRICH)/20％HS15(SIGMA)/40％水)；(BKM120(10％NMP(ALFA AESAR)/90％PEG300(ALDRICH))；MK-2206(30％Captisol(CYDEX))。
确定REMD2.59c对PI3K/Akt途径抑制剂诱发高血糖症的作用的实验方案示于图1中。基于体重，将小鼠使用计算机产生的随机化程序随机分配至表3中列出的各个治疗组。在第1天(-24h)，小鼠被施用单剂量的REMD2.59C抗体(7.0mg/kg，i.p.)，或单独的抗体媒介物(ASN)。在第2天(0h)，REMD2.59c和ASN治疗的小鼠(每组n＝3)接受单剂量(p.o.)的BYL719(50mg/kg)、BKM120(50mg/kg)、MK2206(150mg/kg)，如表3中所示。在给药前-0.5h、和给药后2h和4h的时间通过使用Accu-Chek Performa系统(Roche Diagnostics)通过尾静脉测量小鼠的餐后血糖水平。选择的REMD2.59c剂量基于先前的观察是饱和的(Yan等人，Pharmacol Exp Ther，329(1)：102-111，2009)。BYL-719、BKM120和MK2206的剂量通常大于临床前研究报告的最大剂量的50％。
使用GraphPad Prism软件5.0对REMD2.59c治疗的或REMD2.59c未治疗的小鼠中响应于PI3K/Akt途径抑制剂的葡萄糖水平进行统计分析。计算组平均值、标准偏差，并应用非配对t检验比较检验，其中显著性水平被设定为5％或P＜0.05。
对于每个时间点，在具有和不具有REMD2.59c预治疗的情况下在P13K/Akt途径抑制剂的研究中获得的基线和治疗葡萄糖水平的平均值/sd列于表3中。将数据绘制成图2A(BYL719)、图2B(BKM120)和图2C(MK2206)中的直方图，其中黑色条代表ASN预治疗的小鼠，并且灰色条代表REMD2.59c预治疗的小鼠。如图2A-2C中描绘的，用REMD 2.59c的预治疗使基线循环葡萄糖在统计学上显著地降低了33％。
表3
在C57BL/6小鼠中PI3K/AKT途径抑制和REMD2.59c预治疗的作用
注释：*p＜0.05，**p＜0.01，分别与媒介物加化合物X相比。BYL719、ASN对照结果和治疗结果是在不同天进行的实验中获得的。
在用单独的ASN抗体媒介物预处理的BYL719、BKM120和MK-2206施用后的2h，始终观察到在严重糖尿病范围内的高血糖症(相对于给药前-0.5h升高了～2倍)。在2h时由BYL719、BKM120和MK-2206诱发的高血糖症在药物施用前接受REMD 2.59c的动物中被完全阻止；葡萄糖值被维持在未治疗的ASN对照小鼠的基线以下。在4h时未用REMD 2.59c预治疗的小鼠中的葡萄糖水平的下降是归因于由于PI3K/AKT从循环中消除所致的靶覆盖率的丧失。
实施例1中获得的结果与大量公布的证据一致，示出了激活PI3K/AKT信号传导通过肝中的胰岛素受体控制喂养小鼠和其他动物的葡萄糖稳态。用某些PI3K和AKT抑制剂(BLY719、BKM120、MK2206)治疗的动物中胰高血糖素受体抑制能够有效地维持正常血糖水平的观察在先前尚未被报道过。
实施例2
实施例1中描述的实验也用PI3K/AKT途径抑制剂进行，这些抑制剂在靶选择性和其他特性方面与BLY719、BKM120和AKT不同。这些另外的抑制剂包括GDC-0980、GSK690693、GDC-0068和OSI-906(表2)。这些测试物品被如下配制：GDC-0980(0.5％甲基纤维素(SIGMA)、0.2％吐温-80(SOLARBIO))；GSK6900693(5％甘露醇(SIGMA))；GDC-0068(0.5％甲基纤维素(SIGMA)、0.2％吐温-80(SOLARBIO))；OSI-906(25mM酒石酸(Tianjing GuangfuTechnology Development Ltd.))。REMD2.59c和ASN治疗的小鼠(n＝3)接受单次饱和的或接近饱和的剂量(p.o.)的GDC-0980(10mg/kg)、GSK6900693(30mg/kg)、GDC-0068(10mg/kg)或OSI-906(100mg/kg)，如表3中所示。
将结果绘制成图3中的直方图。REMD 2.59c预治疗对GDC-0980、GSK690693、GDC-0068和OSI-906诱发的高血糖症的作用在图3中以直方图的形式表示(A.OSI-906、B.GDC-0068、C.GDC-0980、D.GSK690693)，其中黑色条表示ASN预治疗的小鼠，并且灰色条表示REMD2.59c预治疗的小鼠。在接受GDC-0980、GSK690693、GDC-0068和OSI-906的小鼠中，治疗2h后，循环葡萄糖也增加了3.0-3.2倍(表3)。用GDC-0980、GSK690693、GDC-0068和OSI-906的药物诱发的高血糖效应在2h时被REMD2.59c预治疗部分地降低。然而，高血糖症在用这些PI3K/AKT抑制剂给药后4h持续，并且REMD 2.59通常没有保护作用。
关于实施例1和实施例2中被表征的抑制剂的激酶选择性的当前信息列于表2中。低mTOR交叉反应性或不存在mTOR交叉反应性区分了BYL719和BKM120与GDC-0980的激酶特异性。MK2206在两个方面与GSK690693和GDC-0068不同。MK2206是变构的泛AKT抑制剂，而GSK690693和GDC-0068是直接靶向酶活性位点的ATP竞争性抑制剂。GSK690693和GDC-0068对AKT的选择性低于MK2206。已知被GSK690693和GDC-0068抑制的脱靶激酶(包括PKA、PKC、PKG、PRKG和其他)调节新陈代谢和细胞生物学的不同方面。
基于这一信息，似乎GCGR抑制控制PI3K药物诱发的高血糖症的能力取决于高PI3K特异性和不存在mTOR激酶交叉反应性。通过用AKT抑制剂阻断GCGR对药物诱发的高血糖症的有效正常化似乎与高AKT特异性、以及变构的激酶抑制机制，而不是ATP竞争性的激酶抑制机制相关。
REMD 2.59c预治疗不能够控制由OSI-906(一种ATP竞争性抑制剂，针对INSR、IGF1R和IRR同样有效)诱发的高血糖症疗。相比之下，最近已经显示，在使用肽INSR拮抗剂(S961)的C57BL/6小鼠制成的严重胰岛素耐受性小鼠的中用抗体拮抗剂(REGN1193)的GCGR抑制能够使血糖正常化(Okamoto等人，PNAS，114(10)：2753-2758，2017)。这种肽拮抗剂阻断胰岛素与受体胞外结构域的结合。由于IGF1R和IRR在肝细胞中不表达，如用AKT抑制剂所观察到的，似乎ATP竞争性INSR激酶抑制剂机制也与通过GCGR抑制校正高血糖症相容。
实施例3
BALB/c无胸腺裸小鼠被最常用于表征PI3K/Akt途径抑制剂的功效，因为这些免疫缺陷小鼠不排斥人类肿瘤细胞系异种移植物。进行实验，以确定荷瘤BALB/c无胸腺裸小鼠是否重现了在人类和C57BL/6小鼠中观察到的对PI3K/AKT途径抑制的高血糖症和高胰岛素血症响应。
用在DMEM：基质胶(Matrigel)(1∶1)中的5×106个人类MiaPaCa2胰腺癌细胞对BALB/c无胸腺裸小鼠(Anikeeper，Beijing)进行皮下接种。在29天后，将小鼠根据体重(21.8±0.7g)和肿瘤体积(334±27)随机化。将9只动物用REMD2.59c或ASN媒介物预治疗24小时。然后将动物施用如实施例2中所示配制的MK2206(150mg/kg；p.o.)。在给药前0.5h，以及给药后2h和4h，使用Accu-Chek Performa系统(Roche Diagnostics)通过尾部切口(tailnick)确定餐后血糖。通过眼眶放血采集餐后的血液样品，并制备血清样品并在-80℃储存。胰岛素。血清胰岛素水平使用Ultra-Sensitive Mouse Insulin ELISA试剂盒(CrystalChem，目录号：90080)测量。通过避免在每个时间点对单独的小鼠组(n＝3)取样，使期间动物应激对葡萄糖和胰岛素水平的影响最小化。
使用GraphPad Prism 5.0软件对响应于用MK2206抑制的AKT抑制的葡萄糖水平和胰岛素水平进行统计分析。计算组平均值、标准偏差，并应用非配对t检验比较检验，其中显著性水平设定为5％或P＜0.05。
在具有/不具有REMD2.59c预治疗的情况下用MK2206治疗的荷瘤BALB/c裸小鼠获得的基线和治疗葡萄糖水平和胰岛素水平的平均值/sd列于表4和表5中。将结果绘制成图4中的直方图(A.葡萄糖水平，B.胰岛素水平)，其中ASN治疗的小鼠通过黑色条表示，并且灰色条表示REMD2.59c治疗的小鼠。与实施例1中用C57BL/6小鼠获得的结果不同，用MK2206治疗2h后，在BALB/c裸小鼠中的葡萄糖水平未增加。然而，持续2h用MK2206对BALB/c裸小鼠的治疗与血清胰岛素中统计学显著的65.5倍的增加相关。该结果与用BYL719治疗的荷瘤无胸腺裸小鼠中先前报道的数据(Fritsch等人，Mol Cancer Ther，13(5)：1117-29，2014)一致。这些作者报道了，高血糖症伴高胰岛素血症在长期重复给药时出现，并且仅在高于约20μ摩尔/L药物浓度的“高血糖阈值”的高BYL719剂量出现。
MiaPaCa2肿瘤可在BALB/c裸小鼠响应于MK2206治疗具有被阻抑的葡萄糖升高。为了检查这种可能性，在未经试验的BALB/c裸小鼠中重复MK2206给药方案。所列的用未经试验的小鼠获得的葡萄糖水平与对照和MK2206治疗的荷瘤小鼠不能区分。这些结果排除了药物诱发的高血糖症被MiaPaCa2肿瘤葡萄糖摄取或另一种肿瘤相关的机制掩盖的可能性。
荷MiaPaCa2瘤的BALB/c无胸腺裸小鼠的预治疗使葡萄糖水平降低1.6倍。餐后葡萄糖的降低与用REMD2.59c治疗24h后的C57BL/67小鼠获得的作用相似。这一结果表明，区分BALB/c无胸腺裸小鼠和C57BL/6小鼠的多基因基因型不影响胰岛-肝内分泌轴。C57BL/6和BALB/c无胸腺裸小鼠的基因型在多个遗传基因座上不同(Belizario，JE，The OpenImmunology Journal，2(1)，2009)。无胸腺裸免疫缺陷表型与Foxn1的自发突变相关。
由MK2206治疗诱发的高胰岛素血症在用REMD2.59c预治疗的荷瘤BALB/c无胸腺裸小鼠中被降低至少92％。与-0.5h基线相比，REMD2.59c预治疗的小鼠的2h胰岛素水平仅升高3倍。总之，实施例1和实施例3中描述的利用MK2206的结果表明，与INSR途径抑制相关的高血糖症和高胰岛素血症两者都被REMD2.59c预治疗与AKT阻断组合逆转。
S961是一种肽拮抗剂，其结合INSR的胞外结构域并抑制受体信号传导。Okamoto等人(2017)最近报道了在C57BL/6小鼠中用拮抗性抗体(REGN1193)的GCGR抑制能够很大程度上校正由用S961的胰岛素受体阻断诱发的高血糖症(Okamoto等人，PNAS，114(10)：2753-2758，2017)。然而，REGN1193治疗并未校正该模型中的高胰岛素血症；事实上，胰岛素水平是增加的。因此，PI3K抑制(例如用BKM719和BKM120)或AKT的抑制(例如用MK220K)，而不是INSR抑制，对于癌症疗法中高血糖症和高胰岛素血症和PI3K/AKT途径抑制的其他适应症的校正可能是必不可少的。
表4
MK2206和REMD2.59c对BALB/c小鼠中葡萄糖的作用
注释：*荷瘤BALB/c小鼠携带～0.3mm3的MiaPaCa2肿瘤异种移植物。未经试验的小鼠无肿瘤。
表5
MK2206和REMD2.59c对BALB/c小鼠中胰岛素的作用
实施例4
本发明人希望确定与REMD2.59C共施用能够增加小鼠中PI3K抑制剂靶覆盖率的程度，并希望确定任何所得PI3K抑制剂覆盖率增加在小鼠中被耐受的程度。在该实施例中，组合疗法包括包含SEQ ID NO：8中列出的重链序列和SEQ ID NO：9中列出的轻链序列的嵌合抗-GCGR抗体(“REMD2.59C”)的施用以及与PI3K抑制剂BYL719和BKM120，和AKT抑制剂MK2206一起的施用。
耐受性研究如下进行：C57BL/6小鼠(Vital River Laboratory AnimalTechnology Co.，LTD)(雄性，8-10周龄)或CB17 scid小鼠(Vital River LaboratoryAnimal Technology Co.，LTD)(雌性，8-10周龄)断奶后以正常饮食饲养，并按体重(通常20-22gms)随机化分为6组(每组n＝12只动物)。将三组小鼠(组1、2和3)用REMD2.59C抗体(7.0mg/kg，s.c.，第1天、第4天、第7天和第10天)给药，并且将三组小鼠(组4、5和6)用IgG1对照抗体(7.0mg/kg，s.c.，第1天、第4天、第7天和第10天)给药。在第2天开始时用BYL719、BKM120或MK2206治疗每组：组1和组4(BYL719、BKM12050mg/kg，或MK2206，150mg/kg)，组2和组5(PI3K/AKT抑制剂剂量增加2倍)；组3和组6(PI3K/AKT抑制剂剂量增加3倍)。组7将接受单独的IgG1对照抗体。组8将接受单独的REMD2.59c。
在给药前，在一天期间的一致时间测量体重。在整个研究中，每天测量所有动物的体重。体重改变以％表示，使用以下公式计算：BW变化(％)＝BW第X天/BW第0天×100，其中BW第X天是在给定的一天的BW，并且BW第0天是在第0天(BYL719治疗的开始)的BW。根据BYL719和BKM120的先前特征(Fritsch等人，Mol Cancer Ther，13(5)：1117-29，2014)，大于5％的体重减轻被指定为确定最大耐受剂量(MTD)的安全阈值。确定小鼠腓肠肌和附睾脂肪的重量以区分健康的体重减轻和病理的体重减轻。尸体解剖包括代谢活性器官(肝和肾脏)的重量测量和任何明显的病理发现(gross pathological findings)。
进一步评价靶覆盖的生命药效标志物包括血糖、血清胰岛素和胰高血糖素。对每组采用使由重复给药诱发的动物应激效应最小化的取样方案(n＝4)。使用Accu-ChekPerforma系统(Roche Diagnostics)通过尾静脉测量通过尾静脉缺口(tail vein nick)来测量餐后血糖。在给药前2h和给药后2h之间交替进行血糖收集，持续10天以获取最大PI3K或AKT靶覆盖率和最小PI3K或AKT靶覆盖率。通过眼眶放血收集血液样品(每组n＝4，在第1天、第4天和第10天(给药后2h))以确定PI3K或AKT抑制对胰岛素水平和胰高血糖素水平的最大作用。制备血清样品并在-80℃储存。胰岛素。血清胰岛素通过Ultra-Sensitive MouseInsulin ELISA试剂盒(Crystal Chem，目录号：90080)测量。
在第10天，在给药后2h、4h和8h(每个时间点n＝4)，从各组收集末端血液和肝组织，用于更广泛的标志物分析。在预定的样品收集时间，通过末端心脏穿刺(terminalcardiac puncture)从每只动物收集血液样品(约800μL)到包含作为抗凝血剂的K2EDTA的管中，并以1500-2000g离心分离血浆。将血浆在-80℃储存。BYL719、BKM120和MK2206血浆浓度通过标准LC/MS/MS方法确定。REMD2.59c浓度通过ELISA确定。葡萄糖、氨基酸和分解代谢物(Om、Lys、Met、Thr、Gly、氨基丙二酸、Asn、His、Cys、2-氨基己二酸(2-aminoadipticacid)、Gln、Ser、Pro、瓜氨酸、N-甲基-Ala、Ala、Tyr、Asp、Glu、Leu、高丝氨酸(homo-serine)、Met亚砜(Met Sulfoxide)、b-Ala、Lie、Val、N-乙酰基--Glu/Gln、肌酸、Phe、Trp)和其他代谢物通过LC/MS/MS谱分析(profiling)(Metabolon Inc.Durham，N.C.)定量。血浆激素通过使用超敏小鼠胰岛素ELISA试剂盒(Ultra-Sensitive Mouse Insulin ELISAKit)(Crystal Chem，目录号：90080)和小鼠胰高血糖素ELISA试剂盒(Mouse GlucagonELISA Kit)(Crystal Chem目录号81518)测量。
将末端肝样品(每组N＝4，在给药后2h、4h和8h)快速冷冻并在-80℃储存。将组织在RIPA(10mM Tris-Cl(pH 8.0)、1mM EDTA、1％Triton X-100、0.1％脱氧胆酸钠、0.1％SDS、140mM NaCl、cOmpleteTM蛋白酶抑制剂混合物(Protease Inhibitor Cocktail)(目录号11697498001 Sigma-Aldrich)、磷酸酶抑制剂混合物目录号P2850 SIGMA)中均质化，并通过在4℃以10K RPM离心澄清。总AKT、S473P-Akt和糖异生酶(ALT、AST PEPCK、pCREB)使用标准方法通过定量IP/蛋白印迹(western)测量。
如实施例1和实施例2中所示，葡萄糖值可以作为在不存在REMD2.59c治疗的情况下肝PI3K或AKT靶抑制的指示(组7)。在使用单独的抗体的组8中观察到的葡萄糖的降低是GCCR阻断程度的指示(indicator)。治疗组中的高血糖症的校正使用如下公式计算：G％＝(G2/G1)×100，其中G2是在特定的PI3K剂量或AKT抑制剂剂量的组合药物治疗的葡萄糖水平，G1是用单独的PI3K或AKT抑制剂获得的葡萄糖水平。相同的计算将适用于所有药物动力学标志物。
使用PK和其他分析软件(GraphPad PRISM)，将靶暴露与循环药物动力学标志物单独相关。每个剂量水平的PK/PD关系通过比较在指示的每个时间点的PI3K或Akt抑制剂浓度相比于对照的肝S473P-Akt水平抑制％来建立。预期REMD2.59C的共施用将导致在给药时间内靶覆盖率增加～2-3倍，而增加的体重减轻不高于5％或不具有其他不良作用。该分析应进一步验证循环生物标志物，以用于在人类临床试验中校准REMD477和BYL791、BKM120和MK2206的组合给药以及单独给药。药效学标志物的预测行为列于表6中。
表6
预测的响应于GCGR和PI3K/AKT抑制的标志物
实施例5
在该实施例中，本发明人希望评价在使用人类肿瘤异种移植模型中与REMD2.59C共施用导致抗肿瘤功效增加的程度。这些实验被设计确定具有杂合性损失的PIK3CA突变和PTEN突变对肿瘤生长抑制(TGI)功效的影响。据报道，PTEN无效状态赋予对BYL719的耐受性，而BKM120和AKT抑制剂在PTEN无效肿瘤异种移植物中是有效的(Fritsch等人，MolCancer Ther，13(5)：1117-29，2014)。在该实施例中，组合疗法包括包含SEQ ID NO：8中列出的重链序列和SEQ ID NO：9中列出的轻链序列的嵌合抗-GCGR抗体(“REMD2.59C”)的施用以及与PI3K抑制剂BYL719和BKM120、以及MK2206AKT抑制剂一起施用。
用于临床前研究采用的至少1000个人类癌细胞系的全局DNA拷贝数、突变状态、RNA表达水平和表观遗传学已经使用基因组技术进行了全面评价(Barretina等人，Nature，483(7391)，603-7，2012)。携带PIK3CA突变或是PTEN无效的人类癌细胞系在该公共数据(COSMIC，CCLE，broadinstitute.org)中容易地被识别。细胞系基因组数据包括突变或改变的基因的信息，这些突变或改变的基因可以改变PIK3CA突变或PTEN损失对小鼠异种移植物的肿瘤发生、生长和存活的影响。表征PIK3CA突变和PTEN损失对与GCGR阻断组合的PI3K或AKT抑制的影响的人类肿瘤异种移植物组列于表7中。这些人类异种移植物可以被COMINAL或CCLE中鉴定出的具有相似或相同基因型的癌细胞系代替。目前的临床前证据表明，PI3Ka选择性BYL719的功效限于PIK3CA突变体和野生型肿瘤(Fritsch等人，Mol Cancer Ther，13(5)：1117-29，2014)。BKM120(一种泛特异性PI3K抑制剂)，MK2206(作用于PI3K/PTEN下游的AKT)，被预测对PTEN无效癌症更有效。
TP53、KRAS和ERBB2是已知的加强PIK3CA突变和PTEN损失对肿瘤生长和侵袭的作用的基因改变(Rodon等人，Nat Rev Clin Number，10(3)：143-53，2013)。该实施例中设计了TP53、KRAS和ERBB2突变的或扩增的异种移植物模型的选择被以阐明这些基因作为患者选择的预测标志物以及影响对PI3K/AKT抑制剂耐受性的作用。
表7
人类癌细胞系突变与基因扩增
注释：PI3KCA突变是杂合的。所有其他突变都是纯合的。
用在具有基质胶的0.2ml生长培养基中的肿瘤细胞(0.5-1.5×107个细胞)在右侧腹部皮下对CB17 scid小鼠(Charles River Labs)进行接种。已经预先确定了每个细胞系的最佳细胞数目、生长培养基和基质胶的比率。允许肿瘤发展不受干扰直至平均体积达到约200mm3。将小鼠使用计算机产生的随机化程序分成7组(每组n＝12只小鼠)。
REMD2.59c、BYL719、BKM120和MK2206如实施例1中描述的被配制和施用。在具有Mia PaCa-2肿瘤的CD-17 scid小鼠中评价与BYL719组合的REMD477的组合研究的治疗组和对照组列于表8中。同样的给药方案将适于其他异种移植模物型。REMD2.59c以饱和剂量(7.0mg/kg)被施用，该饱和剂量(7.0mg/kg)最大程度地抑制GCGR信号传导并有效地降低药物诱发的高血糖症和高胰岛素血症(实施例1和实施例2)。PI3K和AKT抑制剂以三个剂量被测试。最高剂量超过先前报道的小鼠异种移植物模型的最大剂量的50％至100％。用于BKM120组合研究的剂量范围将是每天50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg(p.o.)。MK2206的剂量将是每天150mg/kg、300mg/kg、450mg/kg(p.o.)。
用卡尺每周进行两次肿瘤尺寸的测量，并且使用以下公式估计肿瘤的体积(mm3)：TV＝a×b2/2，其中“a”和“b”分别是肿瘤的长直径和短直径。使用以下公式确定肿瘤生长抑制(TGI)：TGI＝(1-T/C)×100％，其中“T”和“C”分别是治疗组和媒介物对照组中肿瘤的平均相对体积(肿瘤生长％)。
表8
用于CB17 scid Mia PaCa-2荷瘤小鼠的给药方案
对于常规监测，不仅监测所有研究动物的肿瘤生长，还监测行为，诸如活动性、食物和水消耗(仅通过笼子侧面检查)、身体、眼垫/毛发垫和任何其他异常效应。记录任何死亡率和/或异常临床迹象。如实施例4描述的，每周两次测量体重改变。根据BYL719和BKM120的先前表征(Fritsch等人，Mol Cancer Ther，13(5)：1117-29，2014)，大于5％的体重减轻被指定为确定最大耐受剂量(MTD)的安全阈值。
使用GraphPad PRIZM软件计算对照组和治疗组的肿瘤体积和相对BW改变的平均值+SEM以及对照组和治疗组的葡萄糖水平，并针对治疗日绘图以鉴定趋势。在治疗时间结束时，将各组的TGI(％)和BW(％)改变制成表格。使用重复测量ANOVA，随后是事后Scheffe，以比较用单独的或与REMD2.59C组合的BYL719、BKM120或MK2206治疗的小鼠的肿瘤体积和体重的减少。
在用PI3K或AKT抑制剂给药后2h和给药前2小时，每周两次监测餐后血糖，以获取峰值和谷值抑制剂水平的葡萄糖作用。在使用避免由重复取样诱发的动物应激的方案中，从每组中选择三只小鼠用于每次的葡萄糖测量。如实施例1和实施例2中示出的，葡萄糖值可以作为在不存在REMD2.59c治疗的情况下的肝PI3K或AKT靶抑制的指示(组1)。在使用单独的抗体的组8中观察到的葡萄糖的降低是GCCR阻断程度的指示。治疗组中的高血糖症的校正使用如下公式计算：G％＝(G2/G1)×100，其中G2是在特定的PI3K或AKT抑制剂的剂量的组合药物治疗的葡萄糖水平，G1是用单独的PI3K或AKT抑制剂获得的葡萄糖水平。
在接受最终剂量的PI3K或AKT抑制剂后，来自每组的4只小鼠将在给药后2h、4h和8h被处死，用于血液、肝和肿瘤组织的收集。从血液中制备血清并在-80℃储存，用于后续的循环PI3K或AKt抑制剂、葡萄糖、胰岛素、胰高血糖素、氨基酸衍生物代谢物的分析，对于REMD 2.59c和激素使用ELISA测定，并且对于代谢物和药物使用LC/MS/MS方法，如实施例4描述的。将每个肝或肿瘤组织快速冷冻，然后粉碎和通过RPPA裂解缓冲液分析，以确定S473P-Akt水平，并且并行地，PI3K或AKT的浓度通过标准LC/MS/MS方法定量。
每个剂量水平的PK/PD关系通过比较在指示的每个时间点的NPI3K或AKT浓度相比于对照的S473P-Akt水平抑制％来建立。使用PK和其他分析软件(GraphPad PRISM)，将靶覆盖率和肿瘤暴露单独与循环药物动力学标志物相关。预期REMD2.59C的共施用将导致在给药时间间隔的整个持续时间内靶覆盖率增加～2-3倍(在BYL719的情况下从30％增加至≥80％)，并且PI3KA突变体、扩增型的和野生型肿瘤的抗肿瘤功效也相应增加(Fritsch等人，Mol Cancer Ther，13(5)：1117-29，2014)。PI3K和AKT抑制剂的ED50衍生自PK(Cmax/AUC)和TGI的分析。该分析应进一步验证循环生物标志物，以便将能够理解PI3K或AKT抑制剂的药物剂量对人类的作用。
实施例6
在该实施例中，本发明人希望进一步探索在肿瘤异种移植物模型(野生型PIK3A突变体和PTEN无效的)中肝和肿瘤AKT抑制(具有和不具有REMD2.59施用的情况下)与血液和组织生物标志物行为之间的关系。在该实施例中，组合疗法包括包含SEQ ID NO：8中列出的重链序列和SEQ ID NO：9中列出的轻链序列的单剂量嵌合抗-GCGR抗体(“REMD2.59C”)的施用，以及与PI3K抑制剂BYL719、BKM 120和MK2206一起施用。生物标志物的测量在接近PI3K和AKT抑制剂的给药时间间隔内获得。如实施例4和实施例5中描述的，这种类型的呈单剂量的体内药效动力学(PK/PD)中的生物标志物关联不受与重复长期给药相关的生理改变和细胞改变的影响。
在CB-17 scid小鼠中用A375(PIK3CA和PTEN野生型)、MCF7(PIK3CA突变体)和NCI-1196(PTEN无效的)肿瘤异种移植物进行体内药效动力学(PK/PD)研究。如实施例5中描述的启动肿瘤。当平均肿瘤尺寸达到约300mm3时，将小鼠随机分成八组，并如表9中描述的，用A375肿瘤和BYL719作为实例进行给药。REMD2.59c、BYL719、BKM120和MK2206如实施例1中描述的被配制和施用。在BYL719的施用之前，将小鼠用对照IgG1或REMD2.59c预治疗24h。REMD2.59c以饱和剂量(7.0mg/kg)被施用，该饱和剂量(7.0mg/kg)最大程度地抑制GCGR信号传导并有效地降低药物诱发的高血糖症和高胰岛素血症(实施例1和实施例2)。BYL719以三个剂量被测试。最高剂量超过先前报道的小鼠异种移植物模型的最大剂量的50％至100％。同样的给药方案将适于其他异种移植物模型。用于BKM120组合研究的剂量范围是每天50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg(p.o.)。MK2206的剂量是每天150mg/kg、300mg/kg、450mg/kg(p.o.)。
来自每组的3只动物在给药后1h、2h、4h和8h被处死，用于血液、肝和肿瘤组织的收集。在预定取样时间，通过心脏穿刺从每只动物收集血液样品(约800μL)到包含作为抗凝血剂的K2EDTA的管中，并以1500-2000g离心分离血浆。将血浆在-80℃储存。BYL719、BKM120和MK2206血浆浓度通过标准LC/MS/MS方法确定。REMD2.59c浓度通过用抗独特型抗体的ELSIA确定。葡萄糖水平在处死之前使用Accu-Chek Performa系统(Roche Diagnostics)通过尾部切口来确定。血浆激素通过使用超敏小鼠胰岛素ELISA试剂盒(Crystal Chem，目录号：90080)和小鼠胰高血糖素ELISA试剂盒(Crystal Chem目录号81518)测量。
将末端肝样品(每组N＝4，给药后2h、4h和8h)快速冷冻并在-80℃储存。将组织在RIPA(10mM Tris-Cl(pH 8.0)、1mM EDTA、1％Triton X-100、0.1％脱氧胆酸钠、0.1％SDS、140mM NaCl、CompleteTM蛋白酶抑制剂混合物(目录号11697498001 Sigma-Aldrich)、磷酸酶抑制剂混合物目录号P2850 SIGMA)中均质化，并通过在4℃以10K RPM离心澄清。总AKT、S473P-Akt(肝和肿瘤)和肝酶(ALT、AST PEPCK、pCREB)使用标准方法通过定量IP/蛋白印迹测量。
计算各组的肝和肿瘤AKT状态(pAKT、tAKT、pAKT/tAKT)的平均值±SEM，并绘制成直方图。同样的数据处理被应用于肝AKT、ALT、ASTPEPCK和pCREB、血糖、血液胰岛素和胰高血糖素、REMD2.59c、BYL791、BKM120和MK2206血浆浓度。对照组、药物治疗组和未治疗组之间差异的统计学显著性用学生t检验来评价。使用GraphPad PRIZM软件鉴定GCGR和AKT抑制与血液/组织生物标志物之间的相关性。预期的结果与表5中列出的耐受性研究的结果相同。该分析应进一步验证循环生物标志物的即时响应，以用于在人类临床试验中校准REMD477和BYL719、BKM120和MK2206组合给药以及单独给药。
表9
CB17 scid A375荷瘤小鼠中用于BYL719的PKPD分析的给药组
实施例7
REMD477是完全人类单克隆抗体，具有SEQ ID NO：49中列出的重链序列和SEQ IDNO：50中列出的轻链序列，其结合人类GCGR并抑制由受体信号传导介导的胰高血糖素的代谢作用(Yan等人，J Pharmco Exp Ther，329(1)：102-111，2009)。已证明单剂量的REMD-477((70毫克(mg)皮下))在患有1型糖尿病的患者中实质上降低所需要的胰岛素的量并改进葡萄糖水平，而不增加低血糖(低血糖水平)。
BLY719、BKM120和MK2206的安全性和功效已经在患有不同恶性肿瘤的患者的I/II期临床试验中被广泛表征(Nitulesca等人，International Journal of Oncology，48(3)：869-885，2016)。功效一直很小，并且一直观察到高血糖症和高胰岛素血症(Borthakur等人，第56届Annual Meeting of the American Society of Hematology(ASH)2014)。
建立REMD477与BYL719、BKM120或MK2206组合的潜在效用的临床研究将分两个阶段进行。阶段1将评价组合施用的安全性，并验证实施例4-6中描述的临床前研究中鉴定的预测标志物。阶段2将在具有和不具有PIK3CA和PTEN无效的突变的癌症中使GCGR和PI3K或AKT途径抑制的功效组合。
阶段1：将在阶段I评价单剂量水平的REMD477(70mg/每周一次)，因为它似乎相对于人类中葡萄糖正常化是饱和的。用BYL719、BKM120和MK2206的给药将以临床报道的MTD的一半开始，并增加2倍多至MTD的两倍。阶段I给药将遵循标准的3+3设计[7]。REMD477PK将利用先前验证的用抗独特型抗体的ELISA。血浆BYL719、BKM120和MK220K PK将通过使用先前描述的LC/MS/MS方法在1天时间(2h、4h、8h、16h)内确定。每个PK样品中的血糖、以及候选氨基酸和代谢物药效动力学标志物将使用LC/MS/MS来监测(Metabolon Inc，Druham，N.C.)。血浆胰岛素水平和胰高血糖素水平将用经认证的临床测定来确定。合适的统计分析将确定实施例4的表5中列出的PKPD的预测的有效性，以及REMD477在人类癌症患者中校正药物诱发的高血糖症和高胰岛素血症的能力。
阶段2：试验的阶段2将比较两组：组(arm)1将接受肿瘤学BYL719、BKM120或MK2206治疗(以标准剂量)；根据阶段1的结果，组2将接受REMD477(70mg皮下/每周一次)和更高剂量的BYL719、BKM120和MK2206。临床假设是REMD477可以更好地控制剂量限制性高血糖症，并且因此，可以耐受更高和潜在更有效的PI3K/AKT途径抑制。概念证明将是接受REMD477的患者的响应率、无进展存活期和总存活期会更高。阶段2的研究将包括每周的血浆葡萄糖、胰岛素、药物水平和阶段1验证的其他循环标志物的测量。
本文公开的和要求保护的所有物品和方法鉴于本公开内容均可以被制备和执行，无需过度实验。尽管已根据优选的实施方案描述本公开内容的物品和方法，但是变化形式可以被应用到所述物品和方法而不偏离本公开内容的精神和范围，这对本领域技术人员而言是明显的。对于本领域技术人员明显的所有这样的变化形式和等同物，无论是现存的或以后开发的，都被认为是在本公开内容的如由所附权利要求所限定的精神和范围内。本说明书中提及的所有专利、专利申请和出版物指示本公开内容所属领域的普通技术人员的水平。出于所有目的所有专利、专利申请和出版物通过引用以其整体并入本文，并且其相同程度如同每个单独出版物单独地且具体地被指示出于任何和所有目的通过引用以其整体并入本文。本文例证地描述的本公开内容可以在本文未具体地公开的任何一个或更多个要素不存在的条件下被合适地实践。采用的术语和表述被用作描述而非限制的术语，并且在使用这样的术语和表述时不意图排除所显示和所描述的特征的任何等同物或其部分，但是认识到，多种改变在本公开内容要求的范围内是可能的。因此，应理解，尽管本公开内容已通过优选的实施方案和任选的特征被具体地公开，但是本领域技术人员可以寻求本文公开的概念的改变和变化形式，并且认为这样的改变和变化形式在本公开内容的如由所附的权利要求所限定的范围内。
序列表
随附的序列表中列出的氨基酸序列使用如37 C.F.R.1.822中规定的氨基酸的标准三字母代码示出。
SEQ ID NO：1是人类胰高血糖素受体(GCGR)分子(登录号AAI04855)的氨基酸序列。
SEQ ID NO：2是完全人类抗-GCGR抗体的编码重链可变区的氨基酸序列。SEQ IDNO：3是编码完全人类抗-GCGR抗体的轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：4是完全人类抗-GCGR抗体的编码重链可变区的氨基酸序列。SEQ IDNO：5是编码完全人类抗-GCGR抗体的轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：6是完全人类抗-GCGR抗体的编码重链可变区的氨基酸序列。SEQ IDNO：7是完全人类抗-GCGR抗体的编码轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：8是嵌合抗-GCGR抗体的编码重链的氨基酸序列。SEQ ID NO：9是嵌合抗-GCGR抗体的编码轻链的氨基酸序列。
SEQ ID NO：10-27是多种完全人类抗-GCGR抗体的编码重链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：28-45是多种完全人类抗-GCGR抗体的编码轻链可变区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：46是编码κ轻链恒定区的氨基酸序列。SEQ ID NO：47是编码λ轻链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：48是编码IgG2重链恒定区的氨基酸序列。
SEQ ID NO：49是完全人类抗-GCGR抗体的编码重链的氨基酸序列。SEQ ID NO：50是完全人类抗-GCGR抗体的编码轻链的氨基酸序列。
序列表
SEQ ID NO：1-人类胰高血糖素受体(GCGR)分子的氨基酸序列
SEQ ID NO：2-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：3-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：4-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：5-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：6-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：7-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：8-结合GCGR的嵌合抗体的重链的氨基酸序列
SEQ ID NO：9-结合GCGR的嵌合抗体的轻链的氨基酸序列
SEQ ID NO：10-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：11-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：12-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：13-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：14-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：15-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：16-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：17-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：18-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：19-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：20-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：21-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：22-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：23-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：24-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：25-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：26-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：27-结合GCGR的人类抗体的HCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：28-结合GCGR的人类抗体LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：29-结合GCGR的人类抗体LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：30-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：31-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：32-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：33-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：34-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：35-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：36-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：37-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：38-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：39-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：40-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：41-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：42-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：43-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：44-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：45-结合GCGR的人类抗体的LCVR的氨基酸序列
SEQ ID NO：46-恒定轻链κ区的氨基酸序列
SEQ ID NO：47-恒定轻链λ区的氨基酸序列
SEQ ID NO：48-IgG2重链恒定区的氨基序列
SEQ ID NO：49-结合GCGR的人类抗体的HC的氨基酸序列
SEQ ID NO：50-结合GCGR的人抗体的LC的氨基酸序列
序列表
<110> 瑞美德生物医药科技有限公司
<120> 用于治疗癌症的胰高血糖素受体拮抗剂和PI3K途径抑制剂的组合
<130> CACRE1.00011WO
<160> 50
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 477
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 1
Met Pro Pro Cys Gln Pro Gln Arg Pro Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu
1 5 10 15
Leu Ala Cys Gln Pro Gln Val Pro Ser Ala Gln Val Met Asp Phe Leu
20 25 30
Phe Glu Lys Trp Lys Leu Tyr Gly Asp Gln Cys His His Asn Leu Ser
35 40 45
Leu Leu Pro Pro Pro Thr Glu Leu Val Cys Asn Arg Thr Phe Asp Lys
50 55 60
Tyr Ser Cys Trp Pro Asp Thr Pro Ala Asn Thr Thr Ala Asn Ile Ser
65 70 75 80
Cys Pro Trp Tyr Leu Pro Trp His His Lys Val Gln His Arg Phe Val
85 90 95
Phe Lys Arg Cys Gly Pro Asp Gly Gln Trp Val Arg Gly Pro Arg Gly
100 105 110
Gln Pro Trp Arg Asp Ala Ser Gln Cys Gln Met Asp Gly Glu Glu Ile
115 120 125
Glu Val Gln Lys Glu Val Ala Lys Met Tyr Ser Ser Phe Gln Val Met
130 135 140
Tyr Thr Val Gly Tyr Ser Leu Ser Leu Gly Ala Leu Leu Leu Ala Leu
145 150 155 160
Ala Ile Leu Gly Gly Leu Ser Lys Leu His Cys Thr Arg Asn Ala Ile
165 170 175
His Ala Asn Leu Phe Ala Ser Phe Val Leu Lys Ala Ser Ser Val Leu
180 185 190
Val Ile Asp Gly Leu Leu Arg Thr Arg Tyr Ser Gln Lys Ile Gly Asp
195 200 205
Asp Leu Ser Val Ser Thr Trp Leu Ser Asp Gly Ala Val Ala Gly Cys
210 215 220
Arg Val Ala Ala Val Phe Met Gln Tyr Gly Ile Val Ala Asn Tyr Cys
225 230 235 240
Trp Leu Leu Val Glu Gly Leu Tyr Leu His Asn Leu Leu Gly Leu Ala
245 250 255
Thr Leu Pro Glu Arg Ser Phe Phe Ser Leu Tyr Leu Gly Ile Gly Trp
260 265 270
Gly Ala Pro Met Leu Phe Val Val Pro Trp Ala Val Val Lys Cys Leu
275 280 285
Phe Glu Asn Val Gln Cys Trp Thr Ser Asn Asp Asn Met Gly Phe Trp
290 295 300
Trp Ile Leu Arg Phe Pro Val Phe Leu Ala Ile Leu Ile Asn Phe Phe
305 310 315 320
Ile Phe Val Arg Ile Val Gln Leu Leu Val Ala Lys Leu Arg Ala Arg
325 330 335
Gln Met His His Thr Asp Tyr Lys Phe Arg Leu Ala Lys Ser Thr Leu
340 345 350
Thr Leu Ile Pro Leu Leu Gly Val His Glu Val Val Phe Ala Phe Val
355 360 365
Thr Asp Glu His Ala Gln Gly Thr Leu Arg Ser Ala Lys Leu Phe Phe
370 375 380
Asp Leu Phe Leu Ser Ser Phe Gln Gly Leu Leu Val Ala Val Leu Tyr
385 390 395 400
Cys Phe Leu Asn Lys Glu Val Gln Ser Glu Leu Arg Arg Arg Trp His
405 410 415
Arg Trp Arg Leu Gly Lys Val Leu Trp Glu Glu Arg Asn Thr Ser Asn
420 425 430
His Arg Ala Ser Ser Ser Pro Gly His Gly Pro Pro Ser Lys Glu Leu
435 440 445
Gln Phe Gly Arg Gly Gly Gly Ser Gln Asp Ser Ser Ala Glu Thr Pro
450 455 460
Leu Ala Gly Gly Leu Pro Arg Leu Ala Glu Ser Pro Phe
465 470 475
<210> 2
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 2
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Met Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asp Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Lys Asp His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Asn Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 3
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 3
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Asn Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 4
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 4
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Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
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Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Met Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asp Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Lys Asp His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Asn Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 5
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 5
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Asn Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 6
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 6
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Met Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asp Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Lys Asp His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Asn Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 7
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 7
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Asn Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 8
<211> 471
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 结合GCGR的嵌合抗体的重链
<400> 8
Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Leu Leu Arg Gly
1 5 10 15
Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln
20 25 30
Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe
35 40 45
Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu
50 55 60
Glu Trp Val Ala Val Met Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asp Tyr Val
65 70 75 80
Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn
85 90 95
Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val
100 105 110
Tyr Tyr Cys Ala Arg Glu Lys Asp His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr
115 120 125
Asn Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr
130 135 140
Val Ser Ser Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro
145 150 155 160
Gly Ser Ala Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val
165 170 175
Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu
195 200 205
Tyr Thr Leu Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser
210 215 220
Glu Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val
225 230 235 240
Asp Lys Lys Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys
245 250 255
Thr Val Pro Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys
260 265 270
Asp Val Leu Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val
275 280 285
Asp Ile Ser Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp
290 295 300
Asp Val Glu Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe
305 310 315 320
Asn Ser Thr Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp
325 330 335
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe
340 345 350
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys
355 360 365
Ala Pro Gln Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys
370 375 380
Asp Lys Val Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp
385 390 395 400
Ile Thr Val Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys
405 410 415
Asn Thr Gln Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser
420 425 430
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435 440 445
Cys Ser Val Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser
450 455 460
Leu Ser His Ser Pro Gly Lys
465 470
<210> 9
<211> 236
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223> 结合GCGR的嵌合抗体的轻链
<400> 9
Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp
1 5 10 15
Phe Pro Gly Ala Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser
20 25 30
Leu Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser
35 40 45
Gln Gly Ile Arg Asn Asp Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys
50 55 60
Ala Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val
65 70 75 80
Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr
85 90 95
Ile Ser Ser Val Gln Pro Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln
100 105 110
His Asn Ser Asn Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
115 120 125
Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser
130 135 140
Glu Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn
145 150 155 160
Phe Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu
165 170 175
Arg Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp
180 185 190
Ser Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr
195 200 205
Glu Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr
210 215 220
Ser Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
225 230 235
<210> 10
<211> 125
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 10
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Ser Asp Gly Arg Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Asp Tyr Glu Ile Leu Thr Gly Tyr Gly Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 11
<211> 125
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 11
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Leu Asn Asp Gly Arg Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Asp Tyr Glu Ile Leu Thr Gly Tyr Gly Tyr Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 12
<211> 129
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 12
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn
20 25 30
Gly Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Tyr Asp Tyr Ala
50 55 60
Gly Ser Val Lys Ser Arg Ile Asn Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Val Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Thr Arg Asp Arg Ser Ser Gly Trp Asn Glu Gly Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 13
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Asp Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Leu Ser Ser Asp Gly Asn Asn Lys Tyr Cys Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Glu Val Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Asp Tyr
100 105 110
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 14
<211> 126
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 14
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Thr Tyr
20 25 30
Phe Trp Thr Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Phe Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Gly Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Glu Asp Tyr Ser Tyr Gly
100 105 110
Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 15
<211> 129
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 15
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ile Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Arg Val Ser Ser Asn
20 25 30
Gly Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Ser Arg Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Tyr Asp Tyr Ala
50 55 60
Gly Ser Val Lys Ser Arg Ile Asn Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn
65 70 75 80
Gln Phe Ser Leu Gln Val Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95
Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Arg Ser Ser Gly Trp Asn Glu Gly Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser
115 120 125
Ser
<210> 16
<211> 126
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 16
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Thr Tyr
20 25 30
Phe Trp Thr Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Glu Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Phe Tyr Ser Gly Asn Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Thr
50 55 60
Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu
65 70 75 80
Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Glu Gly Tyr Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Glu Asp Tyr Ser Tyr Gly
100 105 110
Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 17
<211> 125
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Asn Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Phe Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Asp Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Asn Gly Val Tyr Gly Met
100 105 110
Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 18
<211> 122
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 18
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Gly Ser Ser Ser Leu Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu His Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Arg Tyr Asn Trp Asn Asp Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 19
<211> 116
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ala Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Gly Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Val Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Leu Phe Asp Ala Phe Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 20
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 20
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Thr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Leu Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ser Asp Tyr Tyr Gly Ser Gly Ser Tyr Tyr Lys Gly Asn Tyr
100 105 110
Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 21
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 21
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Ile Ile Trp Ser Asp Gly Ile Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Arg Gly Leu Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Asp Tyr
100 105 110
Tyr Gly Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 22
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 22
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Thr Ile Ile Trp Ser Asp Gly Ile Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Asn
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Arg Gly Leu Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Tyr Asp Tyr
100 105 110
Tyr Gly Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 23
<211> 116
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 23
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ile Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Ser Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ala Ile Ser Ser Ser Ser Ser Tyr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Val Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Arg Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val
100 105 110
Thr Val Ser Ser
115
<210> 24
<211> 125
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 24
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Ser Thr Phe Arg Ser Tyr
20 25 30
Asp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Ser Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Tyr Tyr Gly Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Leu Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gln Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Ser Ser Asp Ala Phe
100 105 110
Asp Ile Trp Gly Gln Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 25
<211> 127
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 25
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser His Lys Tyr Tyr Glu Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Asp Asp Thr Gly Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Val Gly Tyr Gly Ser Gly Trp Tyr Glu Tyr Tyr Tyr His Tyr
100 105 110
Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 26
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 26
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Met Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asp Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Lys Asp His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Asn Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 27
<211> 128
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 27
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Met Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asp Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Lys Asp His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Asn Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
<210> 28
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 28
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Lys Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Val Val Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Asn Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn His Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 29
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 29
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Val Val Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asn Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asn His Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 30
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 30
Asp Ile Gln Met Thr Gln Phe Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asp Asp Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Val Asp Ile Lys Arg
100 105
<210> 31
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 31
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Asn Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 32
<211> 109
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 32
Gln Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Val Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg
100 105
<210> 33
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 33
Asp Ile Gln Met Thr Gln Phe Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Ile Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Gln Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asp Leu Glu Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ala Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Tyr Asp Asn Leu Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg
100 105
<210> 34
<211> 109
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 34
Glu Asn Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Thr Ser Ser
20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45
Ile Phe Gly Val Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu
65 70 75 80
Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Gly Asn Ser Pro
85 90 95
Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Ile Lys Arg
100 105
<210> 35
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 35
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Asp Met Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Ser Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Lys Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Phe Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Asn Ile Phe Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys Val Asp Val Lys Arg
100 105
<210> 36
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 36
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 37
<211> 114
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 37
Lys Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ala Leu Pro Val Ile Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Asp Ser
20 25 30
Asp Asp Gly Asp Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Gln Val Leu Ile His Arg Leu Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys
65 70 75 80
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met His
85 90 95
Arg Ile Glu Phe Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile
100 105 110
Lys Arg
<210> 38
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 38
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Arg Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Tyr Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 39
<211> 113
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 39
Gly Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Glu Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Met Cys Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 40
<211> 113
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 40
Gly Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Glu Ala
85 90 95
Leu Gln Thr Met Ser Ser Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 41
<211> 114
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 41
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Phe Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Thr Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln
35 40 45
Ser Pro Gln Arg Leu Ile Tyr Thr Leu Ser Tyr Arg Ala Ser Gly Val
50 55 60
Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys
65 70 75 80
Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Ile Tyr Tyr Cys Met Gln
85 90 95
His Ile Glu Phe Pro Ser Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile
100 105 110
Lys Arg
<210> 42
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 42
Ser Tyr Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ser Pro Gly Gln
1 5 10 15
Thr Ala Ser Ile Thr Cys Ser Gly Asp Lys Leu Gly Asp Lys Tyr Ala
20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Val Leu Val Ile Tyr
35 40 45
Gln Ser Thr Lys Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Met
65 70 75 80
Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ala Trp Asp Ser Ser Thr Val Val
85 90 95
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly
100 105
<210> 43
<211> 113
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 43
Asn Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Asn Tyr Leu Phe Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Glu Val Ser Tyr Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Ser Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Asn
85 90 95
Ile Gln Pro Pro Leu Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105 110
Arg
<210> 44
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 44
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Asn Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 45
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 45
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Asn Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105
<210> 46
<211> 107
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 46
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 47
<211> 106
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 47
Gly Gln Pro Lys Ala Ala Pro Ser Val Thr Leu Phe Pro Pro Ser Ser
1 5 10 15
Glu Glu Leu Gln Ala Asn Lys Ala Thr Leu Val Cys Leu Ile Ser Asp
20 25 30
Phe Tyr Pro Gly Ala Val Thr Val Ala Trp Lys Ala Asp Ser Ser Pro
35 40 45
Val Lys Ala Gly Val Glu Thr Thr Thr Pro Ser Lys Gln Ser Asn Asn
50 55 60
Lys Tyr Ala Ala Ser Ser Tyr Leu Ser Leu Thr Pro Glu Gln Trp Lys
65 70 75 80
Ser His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val
85 90 95
Glu Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys Ser
100 105
<210> 48
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 48
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 49
<211> 454
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 49
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Met Trp Tyr Asp Gly Ser Asn Lys Asp Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Arg Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Lys Asp His Tyr Asp Ile Leu Thr Gly Tyr Asn Tyr Tyr
100 105 110
Tyr Gly Leu Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
130 135 140
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
145 150 155 160
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
165 170 175
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
180 185 190
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
195 200 205
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
210 215 220
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
245 250 255
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
260 265 270
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
275 280 285
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
290 295 300
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
305 310 315 320
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
325 330 335
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
340 345 350
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
355 360 365
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
370 375 380
Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
385 390 395 400
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
405 410 415
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
420 425 430
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
435 440 445
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450
<210> 50
<211> 214
<212> PRT
<213> 智人(Homo sapiens)
<400> 50
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Arg Asn Asp
20 25 30
Leu Gly Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Glu Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Val Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Asn Ser Asn Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210

Claims (33)

1.一种用于治疗有相应需要的受试者中的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用a)治疗有效量的包含磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)途径抑制剂或其药学上可接受的盐的药物组合物，和b)治疗有效量的包含分离的胰高血糖素受体(GCGR)拮抗剂的药物组合物。
2.根据权利要求1所述的方法，其中所述分离的GCGR拮抗剂包括选自以下的分离的GCGR拮抗性抗体或抗原结合片段：完全人类抗体、人源化抗体、嵌合抗体、单克隆抗体、多克隆抗体、重组抗体、抗原结合性抗体片段、Fab、Fab’、Fab2、Fab’2、IgG、IgM、IgA、IgE、scFv、dsFv、dAb、纳米抗体、单抗体、双抗体和hemibody。
3.根据权利要求2所述的方法，其中所述分离的GCGR拮抗性抗体或抗原结合性抗体片段以至少约1×10-7M、至少约1×10-8M、至少约1×10-9M、至少约1×10-10M、至少约1×10-11M或至少约1×10-12M的解离常数(KD)与人类胰高血糖素受体特异性结合。
4.根据权利要求2所述的方法，其中所述分离的GCGR拮抗性抗体是完全人类抗体。
5.根据权利要求4所述的方法，其中所述完全人类抗体包括包含SEQ ID NO:2的编码重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO:3的编码轻链可变区的氨基酸序列的人类抗-GCGR抗体。
6.根据权利要求4所述的方法，其中所述完全人类抗体包括包含SEQ ID NO:4的编码重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO:5的编码轻链可变区的氨基酸序列的人类抗-GCGR抗体。
7.根据权利要求4所述的方法，其中所述完全人类抗体包括包含SEQ ID NO:6的编码重链可变区的氨基酸序列和SEQ ID NO:7的编码轻链可变区的氨基酸序列的人类抗-GCGR抗体。
8.根据权利要求2所述的方法，其中所述分离的GCGR拮抗性抗体是包含SEQ ID NO:8的编码重链的氨基酸序列和SEQ ID NO:9的编码轻链的氨基酸序列的嵌合抗体。
9.根据权利要求2-8中任一项所述的方法，其中所述分离的GCGR拮抗剂抗体或抗原结合片段的治疗有效量选自由以下组成的组：0.001至10mg/kg体重/周、0.001至9mg/kg体重/周、0.001至8mg/kg体重/周、0.001至7mg/kg体重/周、0.001至6mg/kg体重/周、0.001至5mg/kg体重/周、0.001至4mg/kg体重/周、0.001至3mg/kg体重/周、0.001至20mg/kg体重/周、0.001至1mg/kg体重/周、0.010至10mg/kg体重/周、0.010至9mg/kg体重/周、0.010至8mg/kg体重/周、0.010至7mg/kg体重/周、0.010至6mg/kg体重/周、0.010至5mg/kg体重/周、0.010至4mg/kg体重/周、0.010至3mg/kg体重/周、0.010至2mg/kg体重/周、0.010至1mg/kg体重/周、0.1至10mg/kg体重/周、0.1至9mg/kg体重/周、0.1至8mg/kg体重/周、0.1至7mg/kg体重/周、0.1至6mg/kg体重/周、0.1至5mg/kg体重/周、0.1至4mg/kg体重/周、0.1至3mg/kg体重/周、0.1至2mg/kg体重/周、0.1至1mg/kg体重/周、0.5至10mg/kg体重/周、0.5至9mg/kg体重/周、0.5至8mg/kg体重/周、0.5至7mg/kg体重/周、0.5至6mg/kg体重/周、0.5至5mg/kg体重/周、0.5至4mg/kg体重/周、0.5至3mg/kg体重/周、0.5至2mg/kg体重/周、0.5至1mg/kg体重/周、1至10mg/kg体重/周、1至9mg/kg体重/周、1至8mg/kg体重/周、1至7mg/kg体重/周、1至6mg/kg体重/周、1至5mg/kg体重/周、1至4mg/kg体重/周、1至3mg/kg体重/周、和1至2mg/kg/周。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述PI3K途径抑制剂是选自由以下组成的组的PI3K抑制剂：PI3Kα抑制剂、PI3Kβ抑制剂、PI3Kγ抑制剂、PI3Kδ抑制剂和泛PI3K同种型抑制剂。
11.根据权利要求10所述的方法，其中所述PI3K抑制剂选自由以下组成的组：GDC-0941、BKM120(NVP-BKM120)、XL147、PX-866、BAY806946、CH5132799、BYL719(NVP-BYL719)、MLN1117、AZD8186、SAR260301、GSK2636771、GS-1101、AMG319、GS-9820、IPI-145、GDC-0032和GDC-0084。
12.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述PI3K途径抑制剂选自由以下组成的组：胰岛素样生长因子受体1(IGFR1)小分子酪氨酸激酶抑制剂和IGFR1单克隆抗体。
13.根据权利要求12所述的方法，其中所述IGFR1小分子酪氨酸激酶抑制剂选自由以下组成的组:BMS754807、INSM-18、OSI-906(linsitinib)、XL-228、GSK1904529A、ABDP、A-928605、AXL1717(PPP)、KW-2450、NVP-ADW742、NVP-AEW541、AG-1024、BMS-536924、BMS-554417和BVP-51004。
14.根据权利要求12所述的方法，其中所述IGFR1单克隆抗体选自由以下组成的组：MK0646(dalotuzumab)、AMG479(ganitumumab)、A12(西妥木单抗)、CP751,871(figitumumab)、AVE1642、Sch717454(罗妥木单抗)、R 1507、BIIB022、h10H5、MEDI-573和BI836845。
15.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述PI3K抑制剂是AKT抑制剂。
16.根据权利要求15所述的方法，其中所述AKT抑制剂选自由以下组成的组：米替福新、哌立福辛、PF-04691502、CCT128930、A-674563、MK-2206、RX-0201、PBI-05204、AZD5363、GDC-0068(Ipatasertib)、TIC10、Akti-1/2、AT7867、AT13148、SC79、GSK690693、GSK2110183和GSK2141795。
17.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述PI3K途径抑制剂是mTOR抑制剂。
18.根据权利要求17所述的方法，其中所述mTOR抑制剂选自由以下组成的组：西罗莫司、RAD001(依维莫司)、CCI-779(坦罗莫司)、ABT578、SAR543、子囊霉素、地磷莫司、AP23573(deforolimus)、AP23841、KU-0063794、INK-128、EX2044、EX3855、EX7518、MK-8669、AZD08055、MLN0128、AZD2014、CC-223和OSI027。
19.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述PI3K途径抑制剂是泛PI3K/mTOR抑制剂。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述泛PI3K/mTOR抑制剂选自由以下组成的组：NVP-BEZ235、NVP-BGT226、XL765、GSK1059615和GDC-0980。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述PI3K途径抑制剂的治疗有效量选自由以下组成的组：0.05mg/kg至75mg/kg接受者体重/每天、0.05mg/kg至70mg/kg接受者体重/每天、0.05mg/kg至60mg/kg接受者体重/每天、0.05mg/kg至50mg/kg接受者体重/每天、0.05mg/kg至40mg/kg接受者体重/每天、0.05mg/kg至30mg/kg接受者体重/每天、0.05mg/kg至20mg/kg接受者体重/每天、0.05mg/kg至10mg/kg接受者体重/每天、0.1mg/kg至75mg/kg接受者体重/每天、0.1mg/kg至30mg/kg接受者体重/每天、0.1mg/kg至40mg/kg接受者体重/每天、0.1mg/kg至50mg/kg接受者体重/每天、0.1mg/kg至40mg/kg接受者体重/每天、0.1mg/kg至30mg/kg接受者体重/每天、0.1mg/kg至20mg/kg接受者体重/每天、0.1mg/kg至10mg/kg接受者体重/每天、0.5mg/kg至75mg/kg接受者体重/每天、0.5mg/kg至70mg/kg接受者体重/每天、0.5mg/kg至60mg/kg接受者体重/每天、0.5mg/kg至50mg/kg接受者体重/每天、0.5mg/kg至40mg/kg接受者体重/每天、0.5mg/kg至30mg/kg接受者体重/每天、0.5mg/kg至20mg/kg接受者体重/每天、0.5mg/kg至10mg/kg接受者体重/每天、1mg/kg至75mg/kg接受者体重/每天、1mg/kg至70mg/kg接受者体重/每天、1mg/kg至60mg/kg接受者体重/每天、1mg/kg至50mg/kg接受者体重/每天、1mg/kg至40mg/kg接受者体重/每天、1mg/kg至30mg/kg接受者体重/每天、1mg/kg至20mg/kg接受者体重/每天、1mg/kg至10mg/kg接受者体重/每天、5mg/kg至75mg/kg接受者体重/每天、5mg/kg至70mg/kg接受者体重/每天、5mg/kg至60mg/kg接受者体重/每天、5mg/kg至50mg/kg接受者体重/每天、5mg/kg至40mg/kg接受者体重/每天、5mg/kg至30mg/kg接受者体重/每天、5mg/kg至20mg/kg接受者体重和每天5mg/kg至10mg/kg接受者体重/每天。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述PI3K途径抑制剂和所述GCGR拮抗剂基本上同时被施用。
23.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述PI3K途径抑制剂和所述GCGR拮抗剂在不同时间被施用。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述PI3K途径抑制剂被口服施用，并且所述GCGR拮抗剂被皮下施用。
25.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述PI3K途径抑制剂和GCGR拮抗剂呈单一药物组合物或单位剂型。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中所述PI3K途径抑制剂以范围为从约0.05mg/kg至约50mg/kg体重/天的剂量被施用，并且其中所述GCGR拮抗剂是以范围为从约1mg/kg至约10mg/kg体重的剂量施用的GCGR拮抗剂抗体。
27.根据权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述癌症选自由以下组成的组：B细胞淋巴瘤；肺癌(小细胞肺癌和非小细胞肺癌)；支气管癌；结肠直肠癌；前列腺癌；乳腺癌；胰腺癌；胃癌；卵巢癌；膀胱癌；脑或中枢神经系统癌；周围神经系统癌；食道癌；宫颈癌；黑素瘤；子宫癌或子宫内膜癌；口腔或咽癌；肝癌；肾癌；胆道癌；小肠或阑尾癌；唾液腺癌；甲状腺癌；肾上腺癌；骨肉瘤；软骨肉瘤；脂肪肉瘤；睾丸癌；和恶性纤维组织细胞瘤；皮肤癌；头颈癌；淋巴瘤；肉瘤；多发性骨髓瘤；和白血病。
28.根据权利要求27所述的方法，其中所述癌症是复发性癌症。
29.根据权利要求27所述的方法，其中所述癌症对用PI3K途径抑制剂的治疗是耐受性的或难治性的。
30.根据权利要求27所述的方法，其中所述癌症是扩增的激素受体阳性的或具有突变的PIK3CA基因的乳腺癌。
31.根据权利要求27所述的方法，其中所述癌症是具有PIK3CA基因突变或PIK3CA基因扩增的卵巢癌。
32.根据权利要求1-31中任一项所述的方法，所述方法还包括选自由以下组成的组的一种或更多种另外的疗法:施用抗肥胖剂(包括食欲阻抑剂)、抗糖尿病剂、抗高血糖剂、降脂质剂、抗高血压剂、免疫疗法、化学疗法、小分子激酶抑制剂靶向疗法、手术、放射疗法和干细胞移植。
33.一种药物组合物，所述药物组合物包含PI3K途径抑制剂和胰高血糖素受体拮抗剂，与一种或更多种药学上可接受的运载体。在多个实施方案中，所述药物组合物被配制成通过选自由以下组成的组的途径被施用：皮下注射、腹膜内注射、肌内注射、胸骨内注射、静脉内注射、动脉内注射、鞘内注射、脑室内注射、尿道内注射、颅内注射、滑膜内注射和通过输注。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114096249A (zh) * 2019-07-09 2022-02-25 奥瑞克索股份公司 用于鼻腔递送的药物组合物
CN114958771A (zh) * 2022-06-27 2022-08-30 广东康盾创新产业集团股份公司 一种ipsc-car-nk细胞的制备方法

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114225045A (zh) 2016-01-11 2022-03-25 辛德弗雷克斯公司 代谢功能障碍引起的肿瘤的治疗
CN113194752A (zh) * 2018-06-01 2021-07-30 康奈尔大学 Pi3k相关疾病或病症的组合疗法
CA3117666A1 (en) * 2018-10-26 2020-04-30 Syndevrx, Inc. Biomarkers of metap2 inhibitors and applications thereof

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102958518A (zh) * 2009-05-15 2013-03-06 诺瓦提斯公司 磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂和抗糖尿病化合物的组合
CN103998935A (zh) * 2011-04-28 2014-08-20 斯隆-凯特林癌症研究所 Hsp90组合疗法
WO2015189698A2 (en) * 2014-06-08 2015-12-17 Beijing Cosci-Remd Bio Med Tech Company Ltd Methods for treating type 1 diabetes using glucagon receptor antagonistic antibodies

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CL2007002668A1 (es) * 2006-09-20 2008-05-09 Amgen Inc Proteina de union a antigeno que se une al receptor de glucagon humano; acido nucleico que la codifica; metodo de produccion; composicion farmaceutica que la comprende; y su uso para tratar o prevenir la diabetes tipo 2.

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102958518A (zh) * 2009-05-15 2013-03-06 诺瓦提斯公司 磷脂酰肌醇3-激酶抑制剂和抗糖尿病化合物的组合
CN103998935A (zh) * 2011-04-28 2014-08-20 斯隆-凯特林癌症研究所 Hsp90组合疗法
WO2015189698A2 (en) * 2014-06-08 2015-12-17 Beijing Cosci-Remd Bio Med Tech Company Ltd Methods for treating type 1 diabetes using glucagon receptor antagonistic antibodies

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114096249A (zh) * 2019-07-09 2022-02-25 奥瑞克索股份公司 用于鼻腔递送的药物组合物
CN114958771A (zh) * 2022-06-27 2022-08-30 广东康盾创新产业集团股份公司 一种ipsc-car-nk细胞的制备方法
CN114958771B (zh) * 2022-06-27 2023-12-05 广东康盾创新产业集团股份公司 一种ipsc-car-nk细胞的制备方法

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