CN109765368A - 一种检测口蹄疫病毒2c抗体的试剂盒 - Google Patents

一种检测口蹄疫病毒2c抗体的试剂盒 Download PDF

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陈豪泰
张永光
孙跃峰
祁林林
张�杰
潘丽
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Abstract

本发明提供了一种检测口蹄疫病毒2C抗体的试剂盒，涉及酶联免疫技术领域，所述试剂盒包括酶标板和酶标二抗；所述酶标板经口蹄疫病毒2C蛋白包被。本发明提供的试剂盒检测口蹄疫病毒2C的抗体，具有高效、灵敏特异性和重复性均良好的优点，该方法操作简便、快速、成本低廉，可以在室温下可视化检测，适合于在临床应用中进行推广，为口蹄疫病毒2C抗体的快速检测提供可靠的技术手段。

Description

一种检测口蹄疫病毒2C抗体的试剂盒
技术领域
本发明涉及酶联免疫技术领域，具体涉及一种检测口蹄疫病毒2C抗体的试剂盒。
背景技术
口蹄疫是一种由口蹄疫病毒(FMDV)所致的急性的、热性的、高度接触性传染病，主要侵害偶蹄兽，经常在羊、牛、猪等动物中传播。发病时易感动物的唇和蹄部出现水疱，同时伴有发烧、食欲不振等症状，患病动物体重和产奶量大幅下降。口蹄疫病毒易通过空气传播，传染性强，流行快速，易感动物在抵抗力较弱的情况下也会导致死亡，给养殖户造成巨大的经济损失，严重阻碍了养殖业的发展。
目前对于口蹄疫病毒2C抗体的诊断方法和疫苗免疫效果的评价方法只能在实验室完成，因为操作过程离不开实验室的仪器和设备，不适合基层检测。
发明内容
本发明的目的在于提供一种检测口蹄疫病毒2C抗体的试剂盒，采用本发明的试剂盒，无需借助实验室的仪器和设备，能够适合基层检测。
本发明提供了一种检测口蹄疫病毒2C抗体的试剂盒，包括酶标板和酶标二抗；
所述酶标板经口蹄疫病毒2C蛋白包被。
优选的，所述口蹄疫病毒2C蛋白的包被浓度为1～2μg/mL。
优选的，所述试剂盒还包括洗涤液、血清稀释液、底物显色液、终止液、阳性血清和阴性血清。
优选的，所述洗涤液包括磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液中含有质量分数为0.03～0.08％的吐温-20，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.2。
优选的，所述血清稀释液包括磷酸盐缓冲液，所述缓冲液中含有脱脂奶粉，所述脱脂奶粉的浓度为45～55g/L，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.2。
优选的，所述底物显色液包括TMB溶液。
优选的，所述所述终止液包括SDS溶液或硫酸溶液。
优选的，所述酶标二抗包括猪的酶标二抗或牛的酶标二抗。
本发明提供了一种检测口蹄疫病毒2C抗体的试剂盒，包括酶标板和酶标二抗；所述酶标板经口蹄疫病毒2C蛋白包被。在本发明中，当动物感染口蹄疫病毒以后，产生2C抗体，通过检测2C抗体来达到检测目的。
本发明实施例的结果显示：本发明提供的试剂盒检测口蹄疫病毒2C的抗体，具有高效、灵敏特异性和重复性均良好的优点，该方法操作简便、快速、成本低廉，可以在室温下可视化检测，适合于在临床应用中进行推广，为口蹄疫病毒2C抗体的快速检测提供可靠的技术手段。
附图说明
图1为本发明提供的试剂盒检测结果，其中，从左到右，1和2，口蹄疫病毒血清；3，猪流行性腹泻病毒抗体；4，猪瘟病毒；5，猪圆环病毒抗体；6，猪细小病毒抗体；7，伪狂犬病毒抗体；8，蓝耳病病毒抗体。
具体实施方式
本发明提供了一种检测口蹄疫病毒2C抗体的试剂盒，包括酶标板和酶标二抗；所述酶标板经口蹄疫病毒2C蛋白包被。
在本发明中，所述酶标板经口蹄疫病毒2C蛋白包被，所述包被的浓度优选为1～2μg/mL。本发明对所述包被采用的方法没有特殊限定，采用常规包被即可。
在本发明中，所述酶标板优选经浓度为50g/L的脱脂奶粉溶液封闭。
在本发明中，所述酶标二抗优选包括猪的酶标二抗或牛的酶标二抗，所述包括猪的酶标二抗或牛的酶标二抗优选为商品化的产品。
在本发明中，所述试剂盒还优选包括洗涤液、血清稀释液、底物显色液、终止液、阳性血清和阴性血清。
在本发明中，所述洗涤液优选包括磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液中含有质量分数优选为0.03～0.08％的吐温-20，更优选为0.05％；所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.2。
在本发明中，所述血清稀释液优选包括磷酸盐缓冲液，所述缓冲液中含有脱脂奶粉，所述脱脂奶粉的浓度优选为45～55g/L，更优选为50g/L；所述磷酸盐缓冲液的pH值优选为7.2。
在本发明中，所述底物显色液优选包括TMB溶液，本发明对所述TMB溶液的浓度没有特殊限定，采用常规底物显色时，所需的TMB浓度即可。
在本发明中，所述终止液优选包括SDS溶液或硫酸溶液。本发明对所述SDS溶液或硫酸溶液的浓度没有特殊限定，采用常规终止酶联免疫反应中所需的浓度即可。
在本发明中，所述阳性血清优选为感染口蹄疫的血清，所述阴性血清优选为健康动物的血清。
在本发明中，所述试剂盒检测口蹄疫病毒2C抗体的方法，优选包括以下步骤：
1)将所述血清稀释液以体积比1:40稀释血清样本，得到稀释血清；
2)向所述酶标板的孔中加入步骤1)得到的稀释血清，在20～25℃下孵育50～70min，，弃去孔中的液体，洗涤液洗涤、拍干，得到第一拍干酶标板；
3)向步骤2)得到的第一拍干酶标板的孔中加入稀释后的酶标二抗，在20～25℃下孵育50～70min，弃去孔中液体，洗涤液洗涤、拍干，得到第二拍干酶标板；
4)向步骤3)得到的第二拍干酶标板的孔中加入底物显色液，在20～25℃下显色15～25min，当孔中的颜色为蓝色时，检测到口蹄疫病毒2C抗体，当孔中的颜色为无色时，未检测到口蹄疫病毒2C抗体。
本发明将所述血清稀释液以体积比1:40稀释血清样本，得到稀释血清。
本发明向所述酶标板的孔中加入得到的稀释血清，在20～25℃下孵育50～70min，，弃去孔中的液体，洗涤液洗涤、拍干，得到第一拍干酶标板。
在本发明中，所述酶标板的孔中加入稀释血清的量优选为100μL。
在本发明中，所述酶标板的孔中加入稀释血清后进行孵育，所述孵育的温度为20～25℃，优选为21～24℃，更优选为22～23℃；所述孵育的时间为50～70min，优选为55～65min，最优选为60min。
在本发明中，所述洗涤的次数优选为3次。
本发明向得到的第一拍干酶标板的孔中加入稀释后的酶标二抗，在20～25℃下孵育50～70min，弃去孔中液体，洗涤液洗涤、拍干，得到第二拍干酶标板。
在本发明中，所述第一酶标板的孔中，加入稀释后的酶标二抗的量优选为100μL。在本发明中，所述酶标二抗优选用磷酸盐缓冲液进行稀释，稀释倍数优选为20000倍。
在本发明中，所述第一拍干酶标板的孔中加入稀释后的酶标二抗进行孵育，所述孵育的温度为20～25℃，优选为21～24℃，更优选为22～23℃；所述孵育的时间为50～70min，优选为55～65min，最优选为60min。
在本发明中，所述洗涤的次数优选为3次。
本发明向得到的第二拍干酶标板的孔中加入底物显色液，在20～25℃下显色15～25min，当孔中的颜色为蓝色时，检测到口蹄疫病毒2C抗体，当孔中的颜色为无色时，未检测到口蹄疫病毒2C抗体。
在本发明中，所述底物显色液的加入量优选为100μL/孔。在本发明中，所述显色的温度优选为21～24℃，更优选为22～23℃；所述显色的时间优选为18～23min，更优选为20min。
下面结合具体实施例对本发明所述的一种检测口蹄疫病毒2C抗体的试剂盒做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。
实施例1
1、样品稀释液、洗涤液、终止液的配制
包被液为0.05M碳酸盐缓冲液：Na2CO31.59g，NaHCO32.93g，加蒸馏水定容至1000mL，pH为9.6；
样品稀释液为含50g/L脱脂奶粉的洗涤液；
洗涤液为含0.05％Tween-20的0.01MpH为7.2的磷酸盐缓冲液，其配方为：
NaCl：8.5g，NaH2PO4·2H2O：0.356g，NaH2PO4·12H2O：2.772g，将其混合后，再用蒸馏水溶解并定容至1000mL，再向其中加入0.5mL吐温-20得到上述洗涤液；
终止液为：配置1％SDS溶液。
2、抗原的最适包被浓度和血清的最适稀释度的确定
结果显示当抗原的稀释度为2.0μg/mL每孔，血清以1:40倍稀释，酶标二抗以1:20000倍稀释。
3、作用时间的优化
抗原的最佳封闭时间为20min，血清反应时间为1h，酶标二抗最佳孵育时间为40min，最佳显色时间为20min。
4.操作程序的确定
按照以上各项所确定的最佳操作条件，确定的操作程序为：取出已包被并封闭好的ELISA板条，用血清稀释液将待检血清做1:40倍稀释，加入酶标板各孔，每孔100μL，各加一孔，A型口蹄疫病毒阴性、阳性血清各加两孔(阳性血清和阴性血清分别为感染口蹄疫的血清和健康动物血清，分别用PBS稀释100倍)，室温作用1h；弃去孔内液体，每孔用洗涤液洗3次并拍打，弃尽孔内液体；每孔加入100μL酶标二抗，室温作用1h；弃去孔内液体，每孔用洗涤液洗涤3次并拍打，弃尽孔内液体；每孔加入100μLTMB(3,3',5,5'-四甲基联苯胺)底物显色液后，室温避光显色20min，加入100μLSDS终止液；肉眼观察颜色，蓝色为阳性，无色为阴性。
实施例2
试剂盒的特异性试验：
按实施例1建立的方法分别检测已知的猪瘟病毒、乙脑病毒、猪圆环病毒、猪细小病毒、伪狂犬病毒、蓝耳病病毒和口蹄疫病毒2C阳性血清样品，阴性为无色，阳性为蓝色。结果见图1。
根据图1可知，采用本发明提供的试剂盒能够准确检测口蹄疫，与其它病毒无交叉反应，具有特异性。
由以上实施例可以得出，本发明提供的试剂盒检测口蹄疫病毒2C的抗体，具有高效、灵敏特异性和重复性均良好的优点，该方法操作简便、快速、成本低廉，可以在室温下可视化检测，适合于在临床应用中进行推广，为口蹄疫病毒2C抗体的快速检测提供可靠的技术手段。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (8)

1.一种检测口蹄疫病毒2C抗体的试剂盒，其特征在于，包括酶标板和酶标二抗；
所述酶标板经口蹄疫病毒2C蛋白包被。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述口蹄疫病毒2C蛋白的包被浓度为1～2μg/mL。
3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括洗涤液、血清稀释液、底物显色液、终止液、阳性血清和阴性血清。
4.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述洗涤液包括磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液中含有质量分数为0.03～0.08％的吐温-20，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.2。
5.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述血清稀释液包括磷酸盐缓冲液，所述缓冲液中含有脱脂奶粉，所述脱脂奶粉的浓度为45～55g/L，所述磷酸盐缓冲液的pH值为7.2。
6.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述底物显色液包括TMB溶液。
7.根据权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述所述终止液包括SDS溶液或硫酸溶液。
8.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述酶标二抗包括猪的酶标二抗或牛的酶标二抗。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113150131A (zh) * 2021-02-26 2021-07-23 上海市公共卫生临床中心 广谱识别a组肠道病毒2c蛋白的单克隆抗体及其应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030052859A (ko) * 2001-12-21 2003-06-27 대한민국(관리부서 : 농림부 국립수의과학검역원) 재조합 구제역 2ｃ 비구조단백질 항원 및 단클론항체를이용한 구제역 진단방법
CN109142727A (zh) * 2018-10-10 2019-01-04 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种o型口蹄疫病毒抗体的可视化快速检测试剂盒及其应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20030052859A (ko) * 2001-12-21 2003-06-27 대한민국(관리부서 : 농림부 국립수의과학검역원) 재조합 구제역 2ｃ 비구조단백질 항원 및 단클론항체를이용한 구제역 진단방법
CN109142727A (zh) * 2018-10-10 2019-01-04 中国农业科学院兰州兽医研究所 一种o型口蹄疫病毒抗体的可视化快速检测试剂盒及其应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JAE KU OEM等: "Development of synthetic peptide ELISA based on nonstructural protein 2C of foot and mouth disease virus", 《JOURNAL OF VETERINARY SCIENCE》 *
SONALIKA MAHAJAN等: "Truncated recombinant non-structural protein 2C-based indirect ELISA for FMD sero-surveillance", 《JOURNAL OF VIROLOGICAL METHODS》 *
王幸等: "口蹄疫病毒2C3AB基因的原核表达及ELISA方法的建立", 《中国预防兽医学报》 *
田美娜等: "口蹄疫病毒非结构蛋白2C主要表位区的原核表达及其单克隆抗体的制备", 《中国预防兽医学报》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113150131A (zh) * 2021-02-26 2021-07-23 上海市公共卫生临床中心 广谱识别a组肠道病毒2c蛋白的单克隆抗体及其应用

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