CN109765358A - 微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法 - Google Patents
微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109765358A CN109765358A CN201910046477.6A CN201910046477A CN109765358A CN 109765358 A CN109765358 A CN 109765358A CN 201910046477 A CN201910046477 A CN 201910046477A CN 109765358 A CN109765358 A CN 109765358A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- glass
- room temperature
- solution
- micro
- fluidic chip
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明涉及一种微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法，包括：步骤一：对玻璃片表面用BS3溶液进行处理，步骤二：在该表面键合有BS3的玻璃载体上进行ELISA实验，步骤一包括：使用丙酮、异丙醇和去离子水依次超声清洗玻璃片；用氮气吹干玻璃片后，对玻璃片表面进行plasma处理，再在玻璃片表面加入APTMS溶液，在室温下反应；将玻璃片清洗风干后，对该玻璃片加热，实现表面键合；恢复室温后在玻璃片表面加入BS3溶液，得到表面键合有BS3的玻璃载体。本发明提供的微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法，得到的固相载体检测区域面积小，对cTnI捕获均匀，检测精度高，能够为抗原抗体检测和药物筛选等领域提供有力的技术支持，可以很好地满足实际应用的需要。
Description
技术领域
本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法。
背景技术
蛋白质芯片是微流量为零的点阵列型杂交芯片，属于一种特殊的微流控芯片类型。微流控芯片技术是把生物、化学、医学分析过程的样品制备、反应、分离、检测等基本操作单元集成到一块微米尺度的芯片上的技术。由于它在生物、化学、医学等领域的巨大潜力，已经发展成为一个生物、化学、医学、流体、电子、材料、机械等学科交叉的崭新研究领域。传统蛋白质芯片一般是对固相载体整体进行特殊的化学处理，再将已知的蛋白分子固定其上捕获能与之特异性结合的待测蛋白从而实现生物分子检测与分析，然而，传统蛋白质芯片存在以下几个缺陷：固相载体检测区域面积大，对cTnI捕获不均匀，检测精度不够高。
发明内容
针对上述现有技术中存在的问题，本发明的目的在于提供一种可避免出现上述技术缺陷的微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供的技术方案如下：
一种微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法，包括：
步骤一：对玻璃片表面用BS3溶液进行处理。
进一步地，所述方法还包括步骤二：在该表面键合有BS3的玻璃载体上进行ELISA实验。
进一步地，所述步骤一包括：
步骤1)使用丙酮、异丙醇和去离子水依次超声清洗玻璃片4～6min；
步骤2)用氮气吹干玻璃片后，对玻璃片表面进行plasma处理，实现其表面羟基化，再在玻璃片表面加入浓度为8％～12％的APTMS溶液，在室温下反应13～17min；
步骤3)将玻璃片清洗风干后，使用热板对该玻璃片在75～85℃范围内加热1.8～2.2h，实现表面键合；
步骤4)恢复室温后在玻璃片表面加入4～6mM的BS3溶液，在室温下与表面已键合有APTMS的玻璃片表面反应23～27min，清洗后得到表面键合有BS3的玻璃载体。
进一步地，在所述步骤2)中，对玻璃片表面进行plasma处理，打60W plasma85～95s，实现其表面羟基化。
进一步地，所述步骤二包括：
步骤(1)在该玻璃载体表面加入18～22μg/ml的cTnI单克隆抗体溶液室温下反应1.8～2.2h，实现cTnI捕获；
步骤(2)清洗该玻璃载体后，再加入4～6％的BSA溶液室温下反应0.8～1.2h；
步骤(3)清洗该玻璃载体后，再加入不同浓度cTnI溶液室温下反应1.8～2.2h；
步骤(4)清洗该玻璃载体后，加入18～22μg/ml cTnI多克隆抗体溶液室温下反应1.8～2.2h；
步骤(5)清洗该玻璃载体后，加入1.8～2.2μg/ml荧光标记的兔抗山羊IgG溶液室温下反应0.8～1.2h；
步骤(6)清洗该玻璃载体后，在荧光显微镜下测得各浓度cTnI对应的荧光强度，得到荧光免疫曲线，并与未经过化学处理的干净玻璃片进行对比。
进一步地，在所述步骤(3)中，所述cTnI溶液的浓度取值范围为1pg/ml-1μg/ml。
进一步地，所述室温的温度范围为22℃～26℃。
本发明提供的微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法，得到的固相载体检测区域面积小，对cTnI捕获均匀，检测精度高，能够为抗原抗体检测和药物筛选等领域提供有力的技术支持，可以很好地满足实际应用的需要。
附图说明
图1为本发明的步骤一的流程示意图。
图2为利用本发明的方法进行抗原检测实验原理图。
图3为利用本发明的方法进行抗原检测实验结果图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面结合附图和具体实施例对本发明做进一步说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法，包括：
步骤一：对玻璃片表面用BS3溶液进行处理；如图1所示，具体包括：
步骤1)使用丙酮、异丙醇和去离子水依次超声清洗玻璃片4～6min，优选5min；
步骤2)用氮气吹干玻璃片后，对玻璃片表面进行plasma处理，打60W plasma 85～95s(优选90s)，实现其表面羟基化，再立即在玻璃片表面加入浓度为8％～12％(优选10％)的APTMS溶液(3-氨基丙基-三甲氧基硅烷，3-aminopropyltrimethoxysilane)，在室温下反应13～17min(优选15min)；
步骤3)将玻璃片清洗风干后，使用热板对该玻璃片在75～85℃范围内(优选80℃)加热1.8～2.2h(优选2h)，实现表面键合；
步骤4)恢复室温后在玻璃片表面加入4～6mM(优选5mM)的BS3溶液(双琥珀酰亚胺辛二酸酯钠盐，bis[sulfosuccinimidyl]suberate)，在室温下与表面已键合有APTMS的玻璃片表面反应23～27min(优选25min)，清洗后得到表面键合有BS3的玻璃载体；
步骤二：在该表面键合有BS3的玻璃载体上进行ELISA实验；包括：
步骤(1)在该玻璃载体表面加入18～22μg/ml(优选20μg/ml)的的心肌钙蛋白I(cTnI)单克隆抗体溶液室温下反应1.8～2.2h(优选2h)，实现cTnI捕获；
步骤(2)清洗该玻璃载体后，再加入4～6％(优选5％)的牛血清蛋白(BSA)溶液室温下反应0.8～1.2h(优选1h)；
步骤(3)清洗该玻璃载体后，再加入不同浓度(浓度取值范围为1pg/ml-1μg/ml)cTnI溶液室温下反应1.8～2.2h(优选2h)；
步骤(4)清洗该玻璃载体后，加入18～22μg/ml(优选20μg/ml)的cTnI多克隆抗体(山羊属)溶液室温下反应1.8～2.2h(优选2h)；
步骤(5)清洗该玻璃载体后，加入1.8～2.2μg/ml(优选2μg/ml)的荧光标记的兔抗山羊IgG溶液室温下反应0.8～1.2h(优选1h)；
步骤(6)清洗该玻璃载体后，在荧光显微镜下测得各浓度cTnI对应的荧光强度，得到荧光免疫曲线，并与未经过化学处理的干净玻璃片进行对比。
本实施例中提到的室温指的是22℃～26℃的温度范围。
利用本发明的方法进行抗原检测实验，原理及结果如图2和图3所示。
本发明提供的微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法，得到的固相载体检测区域面积小，对cTnI捕获均匀，检测精度高，能够为抗原抗体检测和药物筛选等领域提供有力的技术支持，可以很好地满足实际应用的需要。
以上所述实施例仅表达了本发明的实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (7)
1.一种微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法，其特征在于，包括：
步骤一：对玻璃片表面用BS3溶液进行处理。
2.根据权利要求1所述的微流控芯片应用蛋白质检测的处理方法，其特征在于，所述方法还包括步骤二：在该表面键合有BS3的玻璃载体上进行ELISA实验。
3.根据权利要求1所述的微流控芯片应用蛋白质检测的处理方法，其特征在于，所述步骤一包括：
步骤1)使用丙酮、异丙醇和去离子水依次超声清洗玻璃片4～6min；
步骤2)用氮气吹干玻璃片后，对玻璃片表面进行plasma处理，实现其表面羟基化，再在玻璃片表面加入浓度为8％～12％的APTMS溶液，在室温下反应13～17min；
步骤3)将玻璃片清洗风干后，使用热板对该玻璃片在75～85℃范围内加热1.8～2.2h，实现表面键合；
步骤4)恢复室温后在玻璃片表面加入4～6mM的BS3溶液，在室温下与表面已键合有APTMS的玻璃片表面反应23～27min，清洗后得到表面键合有BS3的玻璃载体。
4.根据权利要求1-3所述的微流控芯片应用蛋白质检测的处理方法，其特征在于，在所述步骤2)中，对玻璃片表面进行plasma处理，打60W plasma85～95s，实现其表面羟基化。
5.根据权利要求2所述的微流控芯片应用蛋白质检测的处理方法，其特征在于，所述步骤二包括：
步骤(1)在该玻璃载体表面加入18～22μg/ml的cTnI单克隆抗体溶液室温下反应1.8～2.2h，实现cTnI捕获；
步骤(2)清洗该玻璃载体后，再加入4～6％的BSA溶液室温下反应0.8～1.2h；
步骤(3)清洗该玻璃载体后，再加入不同浓度cTnI溶液室温下反应1.8～2.2h；
步骤(4)清洗该玻璃载体后，加入18～22μg/ml cTnI多克隆抗体溶液室温下反应1.8～2.2h；
步骤(5)清洗该玻璃载体后，加入1.8～2.2μg/ml荧光标记的兔抗山羊IgG溶液室温下反应0.8～1.2h；
步骤(6)清洗该玻璃载体后，在荧光显微镜下测得各浓度cTnI对应的荧光强度，得到荧光免疫曲线，并与未经过化学处理的干净玻璃片进行对比。
6.根据权利要求1-5所述的微流控芯片应用蛋白质检测的处理方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，所述cTnI溶液的浓度取值范围为1pg/ml-1μg/ml。
7.根据权利要求3或5所述的微流控芯片应用蛋白质检测的处理方法，其特征在于，所述室温的温度范围为22℃～26℃。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910046477.6A CN109765358A (zh) | 2019-01-18 | 2019-01-18 | 微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201910046477.6A CN109765358A (zh) | 2019-01-18 | 2019-01-18 | 微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN109765358A true CN109765358A (zh) | 2019-05-17 |
Family
ID=66452285
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201910046477.6A Pending CN109765358A (zh) | 2019-01-18 | 2019-01-18 | 微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN109765358A (zh) |
Citations (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020098364A1 (en) * | 2000-09-29 | 2002-07-25 | International Business Machines Corporation | Silicone elastomer stamp with hydrophilic surfaces and method of making same |
| KR20030092847A (ko) * | 2002-05-31 | 2003-12-06 | 한국과학기술원 | 분자수준에서 배향성을 조절하면서 항체 단분자막을제조하는 방법 |
| CN101263390A (zh) * | 2005-09-16 | 2008-09-10 | 株式会社山武 | 生物芯片用基板、生物芯片、生物芯片用基板的制造方法以及生物芯片的制造方法 |
| CN102128934A (zh) * | 2010-01-13 | 2011-07-20 | 贵州省临床检验中心 | 流式微球检测人心肌钙蛋白t的方法 |
| CN105015200A (zh) * | 2015-08-12 | 2015-11-04 | 中国科学院电子学研究所 | 基于纳米印章固定单抗修饰层的光学微流控芯片 |
| CN105115878A (zh) * | 2015-09-11 | 2015-12-02 | 上海交通大学 | 一种循环肿瘤细胞检测试剂盒及其制备方法和应用 |
| CN205067292U (zh) * | 2015-09-11 | 2016-03-02 | 上海交通大学 | 一种循环肿瘤细胞检测试剂盒 |
| CN105435868A (zh) * | 2015-10-26 | 2016-03-30 | 深圳华迈兴微医疗科技有限公司 | 定量检测全血中肌钙蛋白i的磁微粒化学发光微流控芯片 |
| CN108226536A (zh) * | 2018-02-10 | 2018-06-29 | 湖南永和阳光生物科技股份有限公司 | 一种心肌肌钙蛋白i的微流控免疫检测芯片及方法 |
| CN108375559A (zh) * | 2018-02-08 | 2018-08-07 | 南京岚煜生物科技有限公司 | 基于微流控芯片的心肌肌钙蛋白试剂盒及制备和检测方法 |
| CN108387563A (zh) * | 2018-02-07 | 2018-08-10 | 浙江大学 | 基于纳米棒的荧光增强结构、荧光检测系统及自动进样检测芯片 |
| CN109142754A (zh) * | 2018-09-29 | 2019-01-04 | 江苏医联生物科技有限公司 | 一种基于微纳流体的蛋白质检测芯片及其制备方法 |
| CN109211870A (zh) * | 2018-11-17 | 2019-01-15 | 郑州亲和力科技有限公司 | 一种快速定量检测cTnI的微流控荧光免疫芯片 |
-
2019
- 2019-01-18 CN CN201910046477.6A patent/CN109765358A/zh active Pending
Patent Citations (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20020098364A1 (en) * | 2000-09-29 | 2002-07-25 | International Business Machines Corporation | Silicone elastomer stamp with hydrophilic surfaces and method of making same |
| KR20030092847A (ko) * | 2002-05-31 | 2003-12-06 | 한국과학기술원 | 분자수준에서 배향성을 조절하면서 항체 단분자막을제조하는 방법 |
| CN101263390A (zh) * | 2005-09-16 | 2008-09-10 | 株式会社山武 | 生物芯片用基板、生物芯片、生物芯片用基板的制造方法以及生物芯片的制造方法 |
| CN102128934A (zh) * | 2010-01-13 | 2011-07-20 | 贵州省临床检验中心 | 流式微球检测人心肌钙蛋白t的方法 |
| CN105015200A (zh) * | 2015-08-12 | 2015-11-04 | 中国科学院电子学研究所 | 基于纳米印章固定单抗修饰层的光学微流控芯片 |
| CN205067292U (zh) * | 2015-09-11 | 2016-03-02 | 上海交通大学 | 一种循环肿瘤细胞检测试剂盒 |
| CN105115878A (zh) * | 2015-09-11 | 2015-12-02 | 上海交通大学 | 一种循环肿瘤细胞检测试剂盒及其制备方法和应用 |
| CN105435868A (zh) * | 2015-10-26 | 2016-03-30 | 深圳华迈兴微医疗科技有限公司 | 定量检测全血中肌钙蛋白i的磁微粒化学发光微流控芯片 |
| CN108387563A (zh) * | 2018-02-07 | 2018-08-10 | 浙江大学 | 基于纳米棒的荧光增强结构、荧光检测系统及自动进样检测芯片 |
| CN108375559A (zh) * | 2018-02-08 | 2018-08-07 | 南京岚煜生物科技有限公司 | 基于微流控芯片的心肌肌钙蛋白试剂盒及制备和检测方法 |
| CN108226536A (zh) * | 2018-02-10 | 2018-06-29 | 湖南永和阳光生物科技股份有限公司 | 一种心肌肌钙蛋白i的微流控免疫检测芯片及方法 |
| CN109142754A (zh) * | 2018-09-29 | 2019-01-04 | 江苏医联生物科技有限公司 | 一种基于微纳流体的蛋白质检测芯片及其制备方法 |
| CN109211870A (zh) * | 2018-11-17 | 2019-01-15 | 郑州亲和力科技有限公司 | 一种快速定量检测cTnI的微流控荧光免疫芯片 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 程佳等: "基于玻璃基底微流控芯片的制备", 《生物医学工程研究》 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Song et al. | Comparative study of random and oriented antibody immobilization as measured by dual polarization interferometry and surface plasmon resonance spectroscopy | |
| US6887362B2 (en) | Dielectrophoretic separation and immunoassay methods on active electronic matrix devices | |
| US7435579B2 (en) | Biosensor and related method | |
| US20030036054A1 (en) | Biosensor and related method | |
| Yang et al. | Automated support-resolution strategy for a one-way chemiluminescent multiplex immunoassay | |
| US20030157587A1 (en) | Biosensor and related method | |
| CN103946704A (zh) | 用于现场护理诊断使用的生物涂覆型压电生物传感器平台 | |
| Huy et al. | Characterization of immobilization methods of antiviral antibodies in serum for electrochemical biosensors | |
| CN105785009B (zh) | 一种定量检测试纸条及其检测用标准曲线制定方法、检测方法和应用 | |
| JP2001004628A (ja) | 免疫分析装置と免疫分析方法 | |
| IE20080934A1 (en) | A method of immobilising biological molecules to a support and products thereof | |
| JP2011523702A (ja) | センサー | |
| CN108700581A (zh) | 用于定量生物试样中的测定对象物质的试剂盒及定量生物试样中的测定对象物质的方法 | |
| JP2021529940A (ja) | 側方流動アッセイのシグナルを増幅させるシステム、装置および方法 | |
| JP5006459B1 (ja) | 標識用複合粒子 | |
| JP2022058778A5 (zh) | ||
| JP2005513496A (ja) | 結合アフィニティを決定するための改良された方法 | |
| WO2007037530A9 (ja) | 超高速で生体分子反応を測定する方法 | |
| CN108051588A (zh) | 用于全血样品分离检测的微流控芯片上的抗体固定方法 | |
| CN203630139U (zh) | 一种化学发光免疫生物传感器检测装置 | |
| CN104677889B (zh) | 一种基于鲁米诺功能化的磁性免疫探针检测甲胎蛋白的方法 | |
| CN109765358A (zh) | 微流控芯片应用蛋白质检测的化学处理方法 | |
| DE59909404D1 (de) | Verfahren zum nachweis von antikörpern oder antigenen sowie zur blutgruppenbestimmung | |
| US10307759B2 (en) | Biosensor for the detection of target components in a sample | |
| CN109647555A (zh) | 微流控芯片纳米信号增强结构加工方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190517 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |