CN109752548B - 评估慢性淋巴细胞白血病预后的组合试剂及系统 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种评估慢性淋巴细胞白血病预后的组合试剂及系统,属于医学技术检测领域。该组合试剂,包括以下抗体组合中的至少一种:抗体组合1,包括CD5、IgG1、CD3、CD19和CD45抗体;抗体组合2,包括CD5、ZAP70、CD3、CD19和CD45抗体;抗体组合3:包括CD38、CD49d、CD19、CD5和CD45抗体。本发明上述针对CLL的抗体组合中,ZAP70、CD38、CD49d的表达在预后评估上很有价值,ZAP70是其中较为精准的一个,但由于细胞内染色和设门技术限制了其临床应用,而本发明最大程度的解决了这个问题,另外,还增加了两个指标,结合这些标记物,可以提供更为全面的评估慢性淋巴细胞白血病预后。
Description
技术领域
本发明涉及医学技术检测领域,特别是涉及一种评估慢性淋巴细胞白血病预后的组合试剂及系统。
背景技术
慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)是一种原发于造血组织的恶性肿瘤。肿瘤细胞蓄积于血液、骨髓及淋巴组织中。95%以上的CLL为B细胞的克隆性增殖(即B-CLL),仅不到5%的病例为T细胞表型(即T-CLL),患者早期常无症状,常因发现无痛性淋巴结肿大或不明原因的淋巴细胞绝对值升高而就诊。患者有轻度乏力、易疲劳等非特异性表现,一旦进入进展期,除全身淋巴结和脾大外可表现为体重减轻、反复感染、出血和贫血症状。由于易感人群的年龄较大,患者常由于慢性肺部疾病、脑血管病变、心血管疾病等其他潜在的慢性疾病而导致病情恶化。
慢性淋巴细胞白血病虽发展缓慢,但难以治愈。部分患者可向幼淋巴细胞白血病、弥漫大B细胞淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、急淋等其他恶性淋巴增殖性疾病转化。慢性淋巴细胞白血病中位生存期一般为35~63个月,也有的患者生存时间长达10年以上。
因此,临床上需要一种方法用于慢性淋巴细胞白血病预后评估,以调整治疗方案及用药,延长患者寿命,提高生存质量。临床上评估预后最常使用有β2微球蛋白(β2-MG),患者年龄以及Rai和Binet两种临床分期系统,其它用于CLL预后评估的指标有:细胞/分子遗传学异常、免疫球蛋白重链可变区(IGHV)基因突变状态、基因缺失或突变以及流式细胞术评估CLL细胞特异分子表达的检测。
然而,上述Rai和Binet临床分期系统存在以下缺陷:①处于同一分期的患者,其疾病发展过程存在异质性;②不能预测早期患者疾病是否进展以及进展的速度。另外,细胞遗传学FISH和基因异常检测,普遍操作繁琐,检测周期较长,技术要求高,难以简单及时有效地评估患者预后。
流式细胞术具有高通量、多参数、快速简便等特点,已广泛应用,目前ZAP70已作为慢淋预后判断的一个指标,但是,ZAP70在不同的CLL患者中表达水平有差异,其检测结果主要是根据流式细胞术检测CD19+CD5+的细胞表达ZAP70的水平来确定,这导致不同实验室间有明显的差异,如果实验室能保证ZAP结果的准确性,那么ZAP70将是较好的一个反应预后的指标。ZAP70的表达较弱,由于染色或设门的原因,难以判断其表达情况,很容易出现错误,因而限制了其临床应用,而且目前尚无统一的试剂或试剂盒用于CLL预后检测。
发明内容
基于此,有必要针对现有检测方法中存在的繁琐、耗时、难以运用等问题,提供一种评估慢性淋巴细胞白血病预后的组合试剂及系统,采用该组合试剂和系统,可通过流式细胞术评估CLL预后,具有操作简单、快速的优点。
一种评估慢性淋巴细胞白血病预后的组合试剂,包括以下抗体组合中的至少一种:
抗体组合1,包括CD5、IgG1、CD3、CD19和CD45抗体;
抗体组合2,包括CD5、ZAP70、CD3、CD19和CD45抗体;
抗体组合3,包括CD38、CD49d、CD19、CD5和CD45抗体。
上述抗体组合,抗体组合1中包括CD5/IgG1/CD3/CD19/CD45,除了CD45作为设门抗体外,CD19作为B细胞的特异表达标志,可以正确定位B淋巴细胞。由于绝大部分CLL肿瘤细胞CD5+,联合CD5的表达,可识别CLL肿瘤细胞群,同时以IgG1作为判别预后的指标ZAP70的同型对照。
抗体组合2中包括CD5/ZAP70/CD3/CD19/CD45,除了正确识别出CLL肿瘤细胞,还加入了预后判断的指标ZAP70。较高水平的ZAP70与较快的疾病进展相关,其在不同的CLL患者中表达水平有差异,其检测结果主要是根据流式细胞术检测CD19+CD5+的细胞表达ZAP70的水平来确定,这导致不同实验室间有明显的差异,如果实验室能保证ZAP结果的准确性,那么ZAP70将是较好的一个反应预后的指标。由于ZAP70的表达一般较弱,有时位于阴性、阳性临界区,这样对结果判断产生了影响,有时难以下结论。
为了解决这个问题,本发明设置了同型对照(即阴性对照)及内部阳性对照:首先,以CD3作为内部阳性对照,CD3阳性细胞群,其ZAP70阳性,由此可评价其染色效果,以及对照阳性位置。另外,本发明还设置了同型对照,参照IgG1的位置,可规划出阴性区域。有了阴性、阳性对照,这样对于CLL肿瘤细胞的表达情况可以更加明确。
抗体组合3中包括CD38/CD49d/CD19/CD5/CD45,该组合除了正确识别肿瘤细胞,还增加了预后判断的另外两个指标CD38和CD49d,其中,CD38表达增加,与疾病凶险、到进展快相关,是预后较差的一个标记。CD49d是CLL预后的一个独立指标,其水平升高与生存期缩短相关,也是预后较差的因素之一。
上述针对CLL的抗体组合中,ZAP70、CD38、CD49d的表达在预后评估上很有价值,ZAP70是其中较为精准的一个,但由于细胞内染色和设门技术限制了其临床应用,而本发明最大程度的解决了这个问题,另外,还增加了两个指标,结合这些标记物,可以提供更为全面的评估CLL患者预后。
在其中一个实施例中,所述抗体标记不同的荧光标记。从而可以在十色/八色/六色/五色流式细胞仪中同时检测上述指标。具有方便、快捷的优势。
在其中一个实施例中,所述荧光标记选自:FITC、PE、ECD、PE-CyTM 5、PE-CY7、PerCP-CyTM 5.5、APC、APC-H7、APC-Cy7、APC Alexa Fluor 750、Pacific BlueTM、V450、V500、Pacific OrangeTM、Krome Orange。
在其中一个实施例中,所述抗体组合中的各抗体的荧光标记分别选自:FITC、PE、ECD、PE-CyTM 5、PE-CY7。
本发明还公开了一种评估慢性淋巴细胞白血病预后的系统,包括:
数据获取模块,获取以上述的组合试剂染色的待测细胞的流式细胞术检测结果数据;
数据分析模块,对上述获取的数据进行分析,根据预定的判断标准评估慢性淋巴细胞白血病预后。
上述评估慢性淋巴细胞白血病预后的系统,其流式细胞术测定过程参照常规技术即可,如选用溶血素、缓冲液(如:小牛血清)和固定液(如:多聚甲醛)等。所用设备和耗材选用流式细胞分析的设备和耗材,如流式专用管、震荡器,移液器等耗材。
在其中一个实施例中,还包括检测模块,所述检测模块对待测细胞进行流式细胞术检测,包括:
细胞准备模块,用以制备单细胞悬液,固定细胞后对细胞进行透膜处理,得到处理后细胞;
孵育模块,用以将处理后细胞与上述的组合试剂中的抗体组合1和抗体组合2分别进行孵育,并同时取单细胞悬液,与上述的组合试剂中的抗体组合3进行孵育;
重悬模块,用以向上述经孵育的细胞中加入溶血素、离心、洗涤后重悬;
测定模块,用以对上述重悬后的细胞进行流式细胞术测定。
上述检测模块中,由于组合1与组合2的检测指标是在细胞内的,需要进行细胞的固定和透膜处理,而组合3的检测指标都是在细胞膜表面,可直接进行孵育。
在其中一个实施例中,所述数据分析模块执行以下流程:
获取流式细胞术检测结果数据,以CD45-SSC(侧向散射光)设门,并根据CD45的表达情况将细胞群分为粒细胞区域、单核细胞区域、淋巴细胞区域、CD45弱阳性区域和CD45阴性区域,圈出目的细胞群,再对目的细胞群进行分析。
在其中一个实施例中,以淋巴细胞区域的细胞群为目的细胞群进行分析,所述目标细胞群中各荧光抗体通过抗体对方式表达,所述抗体对选自:CD19-CD5,CD3-IgG1,CD3-ZAP70,CD19-IgG1,CD19-ZAP70,CD19-CD38和CD19-CD49d。
在其中一个实施例中,所述预定的判断标准为:
在确诊为CLL的样本中,选择CD19-CD5表达均为阳性的细胞群,作为目的细胞群;
将CD19-ZAP70表达高于CD19-IgG1表达定义为CD19-ZAP70阳性:
如CD19-ZAP70阳性表达≧20%,则判定为与较快的疾病进展相关;
如CD19-CD38阳性表达≧30%,则判定为与预后较差相关;
如CD19-CD49d阳性表达≧30%,则判定为与预后较差相关。
上述判断中,如CD19-ZAP70表达高于CD19-IgG1表达,即为阳性,接着进行疾病进展和预后判断。如CD19-ZAP70表达不高于CD19-IgG1表达,则为阴性,不可进行后续判断。
在其中一个实施例中,以CD3-IgG1表达作为CD19-ZAP70表达的阴性对照,以CD3-ZAP70表达作为CD19-ZAP70表达的阳性对照。
与现有技术相比,本发明具有以下有益效果:
本发明的一种评估慢性淋巴细胞白血病预后的组合试剂,合理应用各项抗体指标,涵盖范围广,能够准确识别肿瘤细胞并对其免疫表型进行分析,联合多个判断因素,设立了参照,便于快速做出结果判断,CD45为白细胞共同抗原,将CD45作为设门抗体,根据CD45的表达情况将细胞群分为粒细胞区域、单核细胞区域、淋巴细胞区域、CD45弱阳性区域和CD45阴性区域5个区域,便于对目的细胞进行分别分析。
本发明上述针对CLL的抗体组合中,ZAP70、CD38、CD49d的表达在预后评估上很有价值,ZAP70是其中较为精准的一个,但由于细胞内染色和设门技术限制了其临床应用,而本发明最大程度的解决了这个问题,另外,还增加了两个指标,结合这些标记物,可以提供更为全面的评估慢性淋巴细胞白血病预后。并且经过大量实验数据说明,本发明各组合抗体之间不存在相互抑制表达的问题。
本发明针对CLL肿瘤细胞设有三个预后判断指标,对于双阳或三阳的患者来说,多属于高危情况,其疾病进展较快,预后较差,应及时进行干预。本发明采用流式细胞术的检测方法,2-3小时即可出结果,检测快速,而且通过内外对照,便于结果判断,适用于临床检测。
并且,本发明还对抗体进行了有效搭配,如设置骨架抗体、同一系列抗体分配于相应的抗体组、所使用荧光素之间有互无干扰情况,从而确保异常细胞群之间的免疫表型有效关联分析,不会出现荧光素相互干扰等情况,提高了结果准确性。
附图说明
图1为实施例2中案例非碎片细胞免疫表型CD45-SSC表达散点图示意;
图2为实施例2中案例有核细胞免疫表型CD19-CD5抗体对的荧光抗体表达情况;
图3为实施例2中案例淋巴细胞免疫表型CD19-CD5抗体对的荧光抗体表达情况;
图4为实施例2中案例淋巴细胞免疫表型CD3-IgG1抗体对的荧光抗体表达情况;
图5为实施例2中案例淋巴细胞免疫表型CD3-ZAP70抗体对的荧光抗体表达情况;
图6为实施例2中案例淋巴细胞免疫表型CD19-IgG1抗体对的荧光抗体表达情况;
图7为实施例2中案例淋巴细胞免疫表型CD19-ZAP70抗体对的荧光抗体表达情况;
图8为实施例2中案例淋巴细胞免疫表型CD19-CD38抗体对的荧光抗体表达情况;
图9为实施例2中案例淋巴细胞免疫表型CD19-CD49d抗体对的荧光抗体表达情况。
具体实施方式
为了便于理解本发明,下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施例。但是,本发明可以以许多不同的形式来实现,并不限于本文所描述的实施例。相反地,提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的,不是旨在于限制本发明。
以下实施例中所用抗体均为市售购得,部分具体来源参见下表。
表1.抗体来源
试剂 | 货号 | 厂商 |
CD5 FITC | 347303 | BD |
IgG1(mouse)PE | A07796 | 贝克曼库尔特 |
Cyto-ZAP70 PE | B57658 | 贝克曼库尔特 |
CD3 ECD | IM2705U | 贝克曼库尔特 |
CD19 PE-Cy<sup>TM</sup> 5 | A07771 | 贝克曼库尔特 |
CD38 FITC | A07778 | 贝克曼库尔特 |
CD49d PE | 555503 | BD Pharmingen |
CD19 ECD | A07770 | 贝克曼库尔特 |
CD5 PE-Cy<sup>TM</sup> 5 | 555354 | BD Pharmingen |
CD45 PE-CY7 | Z6410009 | 同生时代 |
实施例1
一种评估慢性淋巴细胞白血病预后的组合试剂,每组中的单抗分别采用以下荧光标记FITC、PE、ECD、PE-CyTM 5、PE-CY7,具体如下:
抗体组合1:CD5、IgG1、CD3、CD19、CD45;
抗体组合2:CD5、ZAP70、CD3、CD19、CD45;
抗体组合3:CD38、CD49d、CD19、CD5、CD45。
上述各组合中相关单克隆抗体的荧光标记和用量如下表所示。
表2.各单克隆抗体的用量
荧光标记 | 第1管(抗体组合1) | 第2管(抗体组合2) | 第3管(抗体组合3) |
FITC | CD5-5μl | CD5-5μl | CD38-5μl |
PE | IgG1(mouse)-5μl | ZAP70-5μl | CD49d-10μl |
ECD | CD3-5μl | CD3-5μl | CD19-10μl |
PE-Cy<sup>TM</sup> 5 | CD19-2.5μl | CD19-2.5μl | CD5-5μl |
PE-Cy7 | CD45-3μl | CD45-3μl | CD45-3μl |
合计 | 20.5μl | 20.5μl | 33.0μl |
注:将市售购得的上述抗体进行浓度梯度验证,确定最佳用量,从而取上述用量的单克隆抗体分别装于编号1、2、3的流式管中。
实施例2
一种评估慢性淋巴细胞白血病预后的系统,包括:检测模块,数据获取模块和数据分析模块。
所述检测模块对待测细胞进行流式细胞术检测;
所述数据获取模块获取以实施例1所述的组合试剂染色的待测细胞的流式细胞术检测结果数据;
数据分析模块,对上述获取的数据进行分析,根据预定的判断标准评估慢性淋巴细胞白血病预后。
采用上述系统的具体工作流程如下:
1、配制试剂。
配制实施例1所述的组合试剂。
2、样制备单细胞悬液。
待测细胞的样本来源可以是骨髓、外周血、胸水、腹水等,根据细胞数调整浓度为1×106-5×106个/ml,制成单细胞悬液。
3、样本处理。
本实施案例所测定样本来源于骨髓,采用贝克曼库尔特生产的PerFix-nc Kit(货号:B31167)作为细胞处理剂。
可以理解的,在实际应用中,骨髓和外周血均可以做为本检测系统样本,包括淋巴结等通过分离成单细胞悬液也可以做为本检测系统样本。
取流式管,标记1、2、3,分别加入50μl步骤2中的单细胞悬液,1管、2管分别加入5μlBuffer I,涡旋混匀,室温孵育15min。3管不作处理。
分别向上述孵育后的1管、2管加入300μl的Buffer II,立即加入步骤1配制的组合抗体的第1管、第2管抗体组合物,加入量分别为20.5μl、20.5μl,3管加入步骤1配制的第3管抗体组合物,加入量为33.0μl,涡旋混匀,室温孵育30min。
分别向孵育后的1管、2管中加入3ml 1×Buffer III,1500rmp/min离心5min,加入0.5ml 1×Buffer III重悬,3管加入溶血素,溶血透亮后离心去上清,加入2ml PBS,离心去上清,加入0.4ml PBS重悬。
4、检测及分析。
(1)数据获取。
以上流式管用贝克曼Navios流式细胞仪检测,分析各抗体标志物表达情况,获取待测细胞的流式细胞术检测结果数据。
(2)数据分析。
以下通过一例具体案例进行数据分析示意。
首先,如图1所示,根据CD45-SSC的表达情况,将细胞群分为5个区域,分别为粒细胞(Gran)(图中中间上部区域)、单核细胞(Mono)(图中右侧上部区域)、淋巴细胞(Lym)(图中右侧下部区域),CD45弱阳性(CD45DIM)(图中中间下部区域)、CD45阴性(CD45neg)(图中左侧区域)5个区域,右下角区域为本实施案例的目的细胞(淋巴细胞Lym),以下将对这群细胞进行免疫表型分析。
如图2所示,可见CD19+CD5+的CLL肿瘤细胞占有核细胞约68.49%(右上角区域);’
如图3所示,可见CD19+CD5+的CLL肿瘤细胞占淋巴细胞约92.31%(右上角区域);
根据上述CD19+CD5+的表达,判定为疑似肿瘤细胞群。
然后,以CD3为内部对照,如图4所示的CD3-IgG1表达,CD3+的淋巴细胞,其IgG1应该为阴性,本案例为0.23%(右上角区域),此为阴性对照;图如5所示的CD3-ZAP70,CD3+的淋巴细胞,其ZAP70应该为阳性,本案例为9.52%(右上角区域),此为阳性对照;通过图4-5可以看出,本案例的表达情况符合预期,说明其染色有效,同时可规划阳性位置。
在染色有效的情况下,评价CLL肿瘤细胞ZAP70的表达水平,同样以IgG1作为对照,表达水平高于IgG1的则为阳性区域。如图6所示,以CD19-IgG1为对照,其表达为0.27%,(右上角区域),再评价CD19-ZAP70的表达水平,如图7所示,本案例ZAP70的阳性表达水平为4.73%(右上角区域),低于CLL中ZAP70的辅助预后判断的临界值20%,判定为与较快的疾病进展不相关。如图8-9所示的CD19-CD38和CD19-CD49d抗体对表达,由于CD38、CD49d的阴阳性分群较容易判断,故一般无需对照,可使用内部细胞群作为对照,判断CD38、CD49d的表达情况。本实施案例中,CLL肿瘤细胞表达CD38为0.15%,表达CD49d为2.66%。
根据CLL中ZAP70、CD38和CD49d的辅助预后判断的临界值分别为≧20%、≧30%和≧30%。最终,上述案例的评估结果为:
A、CD19+CD5+占淋巴细胞比例为92.31%,为CLL肿瘤细胞群。
B、ZAP70(-),判定为与较快的疾病进展不相关。
C、CD38(-),判定为与预后较差不相关。
D、CD49d(-),判定为与预后较差不相关。
实施例3
以实施例2的评估慢性淋巴细胞白血病预后的系统进行慢性淋巴细胞白血病预后评估,随机抽取日常样本166例进行检测,IGHV基因突变检测阳性率为81.2%,本方法结果与IGHV结果符合率达到85.3%,证实上述系统可通过多参数流式细胞分析而全面、快速进行慢性淋巴细胞白血病预后评估。
对比例1
参照实施例2的评估慢性淋巴细胞白血病预后的系统进行慢性淋巴细胞白血病预后评估,所采用的系统与实施例2中的系统相比,同样以CD45设门,区别仅在于:所述抗体组合为:CD27、CD3、CD79b、CD5、CD22、CD19、CD200、CD81。
结果发现:该组合可以识别出肿瘤细胞或治疗后残留的CLL细胞并对其免疫表型进行分析,但是并不能对其预后做出判断,在指导治疗、用药监测等方面存在局限性。
对比例2
参照实施例2的评估慢性淋巴细胞白血病预后的系统进行慢性淋巴细胞白血病预后评估,专利号申请号201210401110.X公开了一种通过设立阴性对照,计算其平均荧光强度的方法来评价ZAP70的阴阳性。
结果发现:该种方法只是提供了一种判断ZAP70表达的方法;本发明更进一步的同时加入了内部阴阳性对照作为整个实验过程的质量控制,对于整个染色效果能进行有效评估,避免由于样本处理不当导致的假阴性;同时本方法无需计算,可直接通过荧光散点图判断,更为方便快捷。此外本方法还引入了另外两个预后判断指标,能更综合、全面地分析预后情况。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
Claims (8)
1.一种评估慢性淋巴细胞白血病预后的系统,其特征在于,包括:
数据获取模块,获取以评估慢性淋巴细胞白血病预后的组合试剂染色的待测细胞的流式细胞术检测结果数据;
数据分析模块,对上述获取的数据进行分析,根据预定的判断标准评估慢性淋巴细胞白血病预后;分析时,通过CD45-SSC设门,以淋巴细胞区域的细胞群为目的细胞群进行分析,所述目的 细胞群中各荧光抗体通过抗体对方式表达,所述抗体对选自:CD19-CD5,CD3-IgG1,CD3-ZAP70,CD19-IgG1,CD19-ZAP70,CD19-CD38和CD19-CD49d;
所述评估慢性淋巴细胞白血病预后的组合试剂包括以下抗体组合:
抗体组合1,包括CD5、IgG1、CD3、CD19和CD45抗体;
抗体组合2,包括CD5、ZAP70、CD3、CD19和CD45抗体;
抗体组合3,包括CD38、CD49d、CD19、CD5和CD45抗体;
所述抗体组合以CD45-SSC设门,按照以下抗体对表达进行细胞群分析:
CD19-CD5,CD3-IgG1,CD3-ZAP70,CD19-IgG1,CD19-ZAP70,CD19-CD38和CD19-CD49d。
2.根据权利要求1所述的评估慢性淋巴细胞白血病预后的系统,其特征在于,所述抗体标记不同的荧光标记。
3.根据权利要求2所述的评估慢性淋巴细胞白血病预后的系统,其特征在于,所述荧光标记选自:FITC、PE、ECD、PE-CyTM 5、PE-CY7、PerCP-CyTM 5.5、APC、APC-H7、APC-Cy7、APCAlexa Fluor 750、Pacific BlueTM、V450、V500、Pacific OrangeTM、Krome Orange。
4.根据权利要求3所述的评估慢性淋巴细胞白血病预后的系统,其特征在于,所述抗体组合中的各抗体的荧光标记分别选自:FITC、PE、ECD、PE-CyTM 5、PE-CY7。
5.根据权利要求1所述的评估慢性淋巴细胞白血病预后的系统,其特征在于,还包括检测模块,所述检测模块对待测细胞进行流式细胞术检测,包括:
细胞准备模块,用以制备单细胞悬液,固定细胞后对细胞进行透膜处理,得到处理后细胞;
孵育模块,用以将处理后细胞与所述的组合试剂中的抗体组合1和抗体组合2分别进行孵育,并同时取单细胞悬液,与所述的组合试剂中的抗体组合3进行孵育;
重悬模块,用以向上述经孵育的细胞中加入溶血素、离心、洗涤后重悬;
测定模块,用以对上述重悬后的细胞进行流式细胞术测定。
6.根据权利要求1或5所述的评估慢性淋巴细胞白血病预后的系统,其特征在于,所述数据分析模块执行以下流程:
获取流式细胞术检测结果数据,以CD45-SSC设门,并根据CD45的表达情况将细胞群分为粒细胞区域、单核细胞区域、淋巴细胞区域、CD45弱阳性区域和CD45阴性区域,圈出目的细胞群,再对目的细胞群进行分析。
7.根据权利要求6所述的评估慢性淋巴细胞白血病预后的系统,其特征在于,所述预定的判断标准为:
在确诊为CLL的样本中,选择CD19-CD5表达均为阳性的细胞群,作为目的细胞群;
将CD19-ZAP70表达高于CD19-IgG1表达定义为CD19-ZAP70阳性:
如CD19-ZAP70阳性表达≧20%,则判定为与较快的疾病进展相关;
如CD19-CD38阳性表达≧30%,则判定为与预后较差相关;
如CD19-CD49d阳性表达≧30%,则判定为与预后较差相关。
8.根据权利要求7所述的评估慢性淋巴细胞白血病预后的系统,其特征在于,以CD3-IgG1表达作为CD19-ZAP70表达的阴性对照,以CD3-ZAP70表达作为CD19-ZAP70表达的阳性对照。
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