CN109748795A - 从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及植物化学技术领域，具体涉及一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用；本发明的化合物产品提取分离容易，方法简单，得率高；本发明的化合物结构稳定，化合物(Volvalerenal E2)作为一种首次报道其结构，并根据核磁二维等相关数据确定了其相对构型的新化合物，药理研究表明其具有保护神经细胞活的功能，在研制新型抗老年痴呆药物方面，能够作为一种潜体结构进行开发利用。

Description

从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用

技术领域

本发明涉及植物化学技术领域，具体涉及一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用。

背景技术

缬草为败酱科植物缬草(Valeriana officinalis Linn)的干燥根及根茎。缬草属植物化学成分主要含有环烯醚萜类、倍半萜类和木脂素类等化学成分，具有抗焦虑、抗抑郁、改善睡眠、神经保护和治疗老年痴呆等作用。传统中医临床用于失眠，癔病，癫痫等神经系统疾病的治疗。根据报道,缬草属在神经系统、心脑血管及抗肿瘤等方面有不同的药理作用,最新研究发现缬草属中成分对中枢神经系统退行性疾病老年痴呆有治疗作用。

对缬草的活性成分进行研究时发现倍半萜化合物对保护神经细胞有较好效果，目前尚未见所示倍半萜化合物有保护神经细胞的报道，因此市场上也尚未见与此物相关的药物。

基于此，本发明提供了一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用，不仅具有分离纯化纯化方法简单，同时倍半萜化合物具有保护神经细胞活的功能等优点。

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：

一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用，其特征在于，所述化合物化合物的分子结构式如下：

优选的，所述化合物为淡黄色油状。

优选的，所述化合物的电喷雾电离质谱ESI-MS显示：正离子277.18[M+H]+，299.16[M+Na]+；即该化合物分子量为276；且高分辨质谱给出的准分子离子峰为：299.1595[M+Na]+，计算值为299.1607[M+Na]+，分子式为C₁₇H₂₄O₃。

优选的，一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用：

分离纯化方法具体工艺步骤如下：

A.将500g缬草干燥的根粉碎后用6-12倍重量浓度为90-95％甲醇浸泡5h后提取5次，减压浓缩至浸膏状，得到浸膏a；

B.将所得浸膏a用丙酮分散，用浸膏a质量的2-3倍硅胶拌样，所得硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，以10-20倍的硅胶为填料，湿法装柱，干法上样，用石油醚和丙酮为洗脱剂进行常压洗脱，分管收集，每管约100ml，根据薄层层析结果，将含有目标化合物的收集液合并，于45℃减压浓缩至浸膏b；

C.将所得的浸膏b用甲醇分散，再用0.45μm滤膜过滤，滤液再经C18反相色谱填料高压制备分离，收集相对应的色谱峰,回收甲醇，剩余水溶液乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯相用无水硫酸钠脱水后，45℃减压浓缩至无乙酸乙酯，即得化合物。

优选的，所述石油醚和丙酮之比为50：1、20：1和10:1。

优选的，所述化合物的具体应用为保护神经细胞。

有益效果：

本发明的化合物产品提取分离容易，方法简单，得率高。

本发明的化合物结构稳定，化合物(Volvalerenal E2)作为一种首次报道其结构，并根据核磁二维等相关数据确定了其相对构型的新化合物，药理研究表明其具有保护神经细胞活的功能，在研制新型抗老年痴呆药物方面，能够作为一种潜体结构进行开发利用。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用，其特征在于，所述化合物的分子结构式如下：

化合物为淡黄色油状。

化合物的电喷雾电离质谱ESI-MS显示：正离子277.18[M+H]+，299.16[M+Na]+；即该化合物分子量为276；且高分辨质谱给出的准分子离子峰为：299.1595[M+Na]+，计算值为299.1607[M+Na]+，分子式为C₁₇H₂₄O₃。

通过核磁二维HSQC，HMBC，H-HCOSY，NOESY等分析技术手段，对该化合物碳氢进行了全归属(见下表1)，并根据它们的相关性，确定该化合物的结构。

表1化合物NMR数据归属(CDCl₃，TMS，δppm，J＝Hz)

通过以上数据分析，该化合物为：

((1S,4E,8E,10R)-8-formyl-11,11-dimethylbicyclo[8.1.0]undeca-4,8-dien-4-yl)methyl acetate，其自命名为：Volvalerenal E2。

实施例2

一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用：

分离纯化方法具体工艺步骤如下：

A.将500g缬草干燥的根粉碎后用6倍重量浓度为90％(W/W)甲醇浸泡5h后提取5次，减压浓缩至浸膏状，得到浸膏a150g；

B.将所得浸膏a用丙酮分散，用浸膏a质量的2倍硅胶拌样，所得硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，(以正己烷：丙酮＝15：1为展开剂，254nm紫外光下检视暗斑)，以10倍的硅胶为填料，湿法装柱，干法上样，用石油醚和丙酮为洗脱剂进行常压洗脱，分管收集，每管约100ml，根据薄层层析结果，将含有目标化合物的收集液合并，于45℃减压浓缩至浸膏b；

C.将所得的浸膏b用甲醇分散，再用0.45μm滤膜过滤，滤液再经C18反相色谱填料高压制备分离，A：甲醇B：水，A：B(80:20)V/V为流动相；检测波长268nm，收集相对应的色谱峰,回收甲醇，剩余水溶液乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯相用无水硫酸钠脱水后，45℃减压浓缩至无乙酸乙酯，即得化合物，得淡黄色产物0.26g。

石油醚和丙酮之比为50：1。

实施例3

一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用：

分离纯化方法具体工艺步骤如下：

A.将500g缬草干燥的根粉碎后用10倍重量浓度为95％(W/W)甲醇浸泡5h后提取5次，减压浓缩至浸膏状，得到浸膏a185g；

B.将所得浸膏a用丙酮分散，用浸膏a质量的2.5倍硅胶拌样，所得硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，(以正己烷：丙酮＝15：1为展开剂，254nm紫外光下检视暗斑)，以15倍的硅胶为填料，湿法装柱，干法上样，用石油醚和丙酮为洗脱剂进行常压洗脱，分管收集，每管约100ml，根据薄层层析结果，将含有目标化合物的收集液合并，于45℃减压浓缩至浸膏b；

C.将所得的浸膏b用甲醇分散，再用0.45μm滤膜过滤，滤液再经C18反相色谱填料高压制备分离，A：甲醇B：水，A：B(80:20)V/V为流动相；检测波长268nm，收集相对应的色谱峰,回收甲醇，剩余水溶液乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯相用无水硫酸钠脱水后，45℃减压浓缩至无乙酸乙酯，即得化合物，得淡黄色产物0.31g。

石油醚和丙酮之比为20：1。

实施例4

一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用：

分离纯化方法具体工艺步骤如下：

A.将500g缬草干燥的根粉碎后用6-12倍重量浓度为93％(W/W)甲醇浸泡5h后提取5次，减压浓缩至浸膏状，得到浸膏a205g；

B.将所得浸膏a用丙酮分散，用浸膏a质量的3倍硅胶拌样，所得硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，(以正己烷：丙酮＝15：1为展开剂，254nm紫外光下检视暗斑)，以20倍的硅胶为填料，湿法装柱，干法上样，用石油醚和丙酮为洗脱剂进行常压洗脱，分管收集，每管约100ml，根据薄层层析结果，将含有目标化合物的收集液合并，于45℃减压浓缩至浸膏b；

C.将所得的浸膏b用甲醇分散，再用0.45μm滤膜过滤，滤液再经C18反相色谱填料高压制备分离，A：甲醇B：水，A：B(80:20)V/V为流动相；检测波长268nm，收集相对应的色谱峰,回收甲醇，剩余水溶液乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯相用无水硫酸钠脱水后，45℃减压浓缩至无乙酸乙酯，即得化合物，得淡黄色产物0.36g。

石油醚和丙酮之比为10:1。

实施例5

化合物(Volvalerenal E2)神经保护活性实验

采用MTT法对化合物Volvalerenal E2的神经保护活性进行筛选，在DMEM培养基中加入10％的胎牛血清，并加入1％双抗(100U/mL链霉素，100U/mL青霉素)，使用该培养液将PC12细胞放在37℃、5％CO2、饱和湿度培养箱中培养，经胰酶消化传代后，选取对数生长期细胞用于实验。实验共分14组，每组8孔。空白对照组、模型组每孔加入无血清DMEM低糖培养基120μL；各给药组每孔加入无血清DMEM低糖培养基配制的各浓度(25、12.5和5μmol/L)的单体化合物及各浓度(50、25和12.5μmol/L)的维生素E(VE)120μL；37℃培养4h后除空白对照组加10μL的无血清DMEM低糖培养基外，其他各组均加入10μLAβ1-42并使其终浓度为1.5μmol/L；37℃培养24h后，每孔加入5mg/mLMTT 20μL，继续培养4h后吸去DMEM培养基，每孔加入DMSO 150μL，振摇混匀10min，待孔内颗粒完全溶解后，在酶标仪492nm处测定吸光度(A)值。上述实验重复3次，结果以x±s表示，各组细胞活力＝各组细胞A值/空白对照组细胞A值×100％。

实验结果表明，化合物Volvalerenal E2对神经细胞。可见，本发明所述的倍半萜化合物Volvalerenal E2可作为保护神经细胞药物或其他生物活性先导物。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。在没有更多限制的情况下，由语句“包括一个……”限定的要素，并不排除在包括所述要素的过程、方法、物品或者设备中还存在另外的相同要素。

以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。

Claims (6)

1.一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用，其特征在于，所述化合物化合物的分子结构式如下：

2.根据权利要求1所述的一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用，其特征在于，所述化合物为淡黄色油状。

3.据权权利要求1所述的一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用，其特征在于：所述化合物的电喷雾电离质谱ESI-MS显示：正离子277.18[M+H]+，299.16[M+Na]+；即该化合物分子量为276；且高分辨质谱给出的准分子离子峰为：299.1595[M+Na]+，计算值为299.1607[M+Na]+，分子式为C₁₇H₂₄O₃。

4.根据权利要求1所述的一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用，其特征在于：

分离纯化方法具体工艺步骤如下：

A.将500g缬草干燥的根粉碎后用6-12倍重量浓度为90-95％甲醇浸泡5h后提取5次，减压浓缩至浸膏状，得到浸膏a；

B.将所得浸膏a用丙酮分散，用浸膏a质量的2-3倍硅胶拌样，所得硅胶拌样物进行正相硅胶柱层析，以10-20倍的硅胶为填料，湿法装柱，干法上样，用石油醚和丙酮为洗脱剂进行常压洗脱，分管收集，每管约100ml，根据薄层层析结果，将含有目标化合物的收集液合并，于45℃减压浓缩至浸膏b；

C.将所得的浸膏b用甲醇分散，再用0.45μm滤膜过滤，滤液再经C18反相色谱填料高压制备分离，收集相对应的色谱峰,回收甲醇，剩余水溶液乙酸乙酯萃取，所得乙酸乙酯相用无水硫酸钠脱水后，45℃减压浓缩至无乙酸乙酯，即得化合物。

5.根据权利要求4所述的一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用，其特种在于：所述石油醚和丙酮之比为50：1、20：1h和10:1。

6.根据权利要求1所述的一种从缬草中分离纯化的化合物及其方法和应用，其特征在于：所述化合物的具体应用为保护神经细胞。