CN109715205A - 用于癌症治疗的rna - Google Patents

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CN109715205A
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CN
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isrna
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peptide
nucleic acid
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CN201780050519.2A
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马里奥啦·福廷-姆莱泽科
亚历山大·科瓦尔奇克
雷吉娜·海登赖希
乌尔丽克·格纳德-福格特
尤特·克林克哈德特
卡甲·费德勒
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Curevac AG
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Abstract

本发明涉及RNA，特别是免疫刺激性RNA(isRNA)，编码RNA或其组合，其用于治疗或预防疾病，特别是肿瘤和/或癌症疾病。本发明还提供包含所述RNA的药物组合物和试剂盒。此外，本发明还包括所述RNA和包含所述RNA的组合物的医学用途。

Description

用于癌症治疗的RNA
本发明涉及RNA，特别是免疫刺激性RNA(isRNA)，编码RNA或其组合，用于治疗或预防疾病，特别是肿瘤和/或癌症疾病。本发明还提供了包含RNA的药物组合物和试剂盒。此外，本发明还包括RNA和包含RNA的组合物的医学用途。
癌症疾病，也称为恶性肿瘤，是一组涉及可能侵入或扩散到身体的其他部位的异常细胞生长的疾病。2012年，全球约有1410万新发癌症病例(不包括黑素瘤以外的皮肤癌)。
癌症的标准治疗包括化疗，放射和手术，或免疫疗法，其中这些治疗单独或组合应用。癌症免疫疗法，其重点是通过疫苗接种，过继性细胞免疫疗法，免疫检查点阻断或其他免疫刺激剂或免疫调节剂来刺激免疫系统以引发抗肿瘤反应。
一些方法使用基因治疗和基因疫苗接种来治疗癌症或其他肿瘤疾病。基因治疗和基因疫苗接种是分子医学方法，其基于将核酸引入患者的细胞或组织中。随后，由引入的核酸编码的信息在生物体中被加工，即导致治疗性肽或蛋白质的表达或由核酸编码的抗原的表达。
常规的基因治疗方法(包括基因治疗和基因疫苗接种)是基于DNA分子的使用，以便将所期望的遗传信息传递到细胞中。已经开发了各种方法用于将DNA引入细胞，例如磷酸钙转染，聚凝胺转染，原生质体融合，电穿孔，显微注射和脂质转染。DNA病毒同样可以用作实现非常高转染率的DNA载体。DNA的使用具有DNA通过例如重组插入宿主细胞基因组的完整基因中的风险。在这种情况下，受影响的基因可能发生突变和失活，或者可能给出错误的信息。使用DNA作为药剂的另一个风险是在患者中诱导致病性抗药物抗体(抗DNA抗体)的风险，这可能导致自身免疫不良反应。
使用RNA作为基因治疗剂或基因疫苗实质上更安全，因为RNA不涉及整合到基因组中从而诱导不期望的抗药物抗体的病原性诱导的风险。
因此，RNA表达系统在基因治疗和基因疫苗接种中相对于DNA表达系统具有相当大的优势，尽管长期以来已经假定mRNA或RNA的不稳定性可能对基于RNA表达系统的医学方法造成严重问题。
RNA的不稳定性特别是归因于RNA降解酶(核糖核酸酶-RNase)。还存在许多使RNA不稳定的另外过程，其中RNA和蛋白质之间的相互作用通常似乎起关键作用。已经提出了一些增加RNA稳定性的措施，因此能够将其用作基因治疗剂或RNA疫苗。
关于RNA的离体稳定性，欧洲专利申请EP 1 083 232 A1描述了将RNA特别是mRNA引入细胞和生物体中的方法，其中RNA与阳离子肽或蛋白质形成复合物。
已知mRNA用于治疗和/或预防癌症。例如，国际专利申请WO 03/051401 A2描述了药物组合物，其包含至少一种mRNA(所述至少一种mRNA含有至少一个编码来自肿瘤的抗原的区域)与含水溶剂并且优选与细胞因子例如GM-CSF组合。提出该药物组合物用于治疗和/或预防癌症。
国际专利申请WO 2006/008154 A1公开了用于针对肿瘤疾病接种的mRNA混合物，其中至少一种类型的mRNA含有至少一个肿瘤抗原编码区。至少一种其他mRNA含有至少一个类型的免疫原性蛋白质编码区。然而，对于有效地治疗癌症或肿瘤疾病仍有需要。因此，本发明的目的是提供一种有效治疗肿瘤疾病的方法，其中肿瘤组织和癌细胞被特异性地破坏。
该目的通过权利要求的主题解决。特别地，本发明的目的通过用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA，编码RNA或其组合来解决。根据本发明的其他方面，该目的通过药物组合物，试剂盒或成套试剂盒，以及治疗肿瘤或癌症疾病的方法来解决。
为了清楚和可读性，提供了以下定义。对于本发明的每个实施方案，可以参阅针对这些定义提及的任何技术特征。另外的定义和解释可以在这些实施方案的上下文中具体提供。
免疫系统：免疫系统可以保护生物免受感染。如果病原体突破生物体的物理屏障并进入该生物体，则先天免疫系统提供即时但非特异性的应答。如果病原体逃避这种先天应答，脊椎动物就拥有第二层保护，即适应性免疫系统。在这里，免疫系统在感染期间调整其应答以改善其对病原体的识别。除了病原体感染外，这种应答还可以针对身体的恶性肿瘤细胞。在病原体或肿瘤细胞被消除后，改善的响应以免疫记忆的形式保留，并且允许适应性免疫系统在每次遇到该病原体时发起更快和更强的攻击。据此，免疫系统包括先天免疫系统和适应性免疫系统。这两部分中的每一部分都包含所谓的体液和细胞组分。
免疫响应：免疫响应通常可能是适应性免疫系统对抗原(抗原是肿瘤衍生的)的特异性反应(所谓的特异性或适应性免疫响应)或先天免疫系统的非特异性反应(所谓的非特异性或先天性免疫响应)。
适应性免疫系统：适应性免疫系统由高度特异化的系统性细胞和消除或预防病原性生长的过程组成。适应性免疫响应为脊椎动物免疫系统提供识别和记忆特定病原体(产生免疫力)并在每次遇到病原体时发起更强攻击的能力。由于体细胞超突变(体细胞突变频率增加的过程)和V(D)J重组(抗原受体基因区段的不可逆遗传重组)，该系统具有高度适应性。该机制允许少量基因产生大量不同的抗原受体，所述受体然后在每个单独的淋巴细胞上独特地表达。因为基因重排导致每个细胞的DNA发生不可逆转的变化，所以该细胞的所有后代(子代)(包括记忆B细胞和记忆T细胞)将继承编码相同受体特异性的基因，这是长期的特异性免疫力的关键。免疫网络理论是适应性免疫系统如何工作的理论，其基于T细胞，B细胞的受体的可变区和具有可变区的由T细胞和B细胞产生的分子之间的相互作用。
适应性免疫应答：适应性免疫应答通常被理解为抗原特异性的。抗原特异性允许产生针对特定抗原，病原体或感染病原体的细胞的应答。通过“记忆细胞”在体内维持产生这些针对性应答的能力。如果病原体不止一次感染身体，这些特定的记忆细胞就会被用来快速消除它。在这种情况下，适应性免疫响应的第一步是激活初始抗原特异性T细胞或能够通过抗原呈递细胞诱导抗原特异性免疫响应的不同免疫细胞。这发生在初始T细胞不断通过的淋巴组织和器官中。可用作抗原呈递细胞的细胞类型尤其是树突细胞，巨噬细胞和B细胞。这些细胞中的每一种在引发免疫应答方面具有不同的功能。树突细胞通过吞噬作用和巨胞饮作用摄取抗原，并通过与例如外来抗原接触被刺激迁移到局部淋巴组织，在那里它们分化成成熟的树突细胞。巨噬细胞摄取颗粒抗原例如细菌，并由感染因子或其他适当的刺激物诱导表达MHC分子。B细胞通过其受体结合和内化可溶性蛋白抗原的独特能力对于诱导T细胞也是重要的。在MHC分子上呈递抗原导致T细胞的激活，诱导其增殖并分化成武装效应T细胞。效应T细胞最重要的功能是：通过CD8+细胞毒性T细胞杀死感染细胞和通过Th1细胞激活巨噬细胞(它们共同构成细胞介导的免疫)，以及通过Th2和Th1细胞激活B细胞产生不同类别的抗体，从而驱动体液免疫响应。T细胞通过其T细胞受体识别抗原，所述T细胞受体不能直接识别和结合抗原，而是识别与其他细胞的表面的MHC分子结合的短肽片段，例如病原体来源的蛋白质抗原的短肽片段。
细胞免疫/细胞免疫应答：细胞免疫通常涉及巨噬细胞，天然杀伤细胞(NK)，抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞的激活以及响应抗原的各种细胞因子的释放。更一般地，细胞免疫与抗体无关，而与免疫系统细胞的激活有关。细胞免疫响应的特征在于例如激活抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞，其能够诱导在表面展示抗原表位的体细胞(例如病毒感染细胞)，具有细胞内细菌的细胞和显示肿瘤抗原的癌细胞的凋亡；激活巨噬细胞和自然杀伤细胞，使它们能够破坏病原体；并且刺激细胞分泌多种细胞因子，这些细胞因子影响参与适应性免疫应答和先天性免疫应答的其他细胞的功能。
体液免疫/体液免疫应答：体液免疫通常指抗体产生和可能伴随它的辅助过程。体液免疫应答通常可以通过例如Th2激活和细胞因子产生，生发中心形成和同种型转换，亲和力成熟和记忆细胞产生来表征。体液免疫通常也可以指抗体的效应子功能，其包括病原体和毒素中和，经典补体激活和调理素促进吞噬作用和病原体消除。
先天免疫系统：先天免疫系统，也称为非特异性免疫系统，包括以非特异性方式保护宿主免受其他生物感染的细胞和机制。这意味着先天系统的细胞以通用方式识别并响应病原体，但与适应性免疫系统不同，它不会给宿主带来持久或保护性免疫。先天免疫系统可以是例如由病原体相关分子模式(PAMP)受体的配体(例如Toll样受体(TLR))或其他辅助物质(如脂多糖，TNF-α，CD40配体或细胞因子，单核因子，淋巴因子，白细胞介素或趋化因子，免疫刺激性核酸，免疫刺激性RNA(isRNA)，CpG-DNA，抗细菌剂，或抗病毒剂)激活。通常，先天免疫系统的应答包括通过产生化学因子(包括称为细胞因子的特异性化学介质)将免疫细胞募集到感染部位；激活补体级联；通过特异性白细胞识别和去除器官，组织，血液和淋巴中存在的外来物质；通过称为抗原呈递的过程激活适应性免疫系统；和/或作为传染因子的物理和化学屏障。
佐剂/佐剂组分：广义上的佐剂或佐剂组分通常是(例如药理学或免疫学的)药剂或组合物，其可以改变，例如增强其他药剂例如药物或疫苗的功效。通常，该术语在本发明的上下文中是指用作免疫原和/或其他药学活性化合物的载体或辅助物质的化合物或组合物。它应在广义上解释，并且是指广谱的物质，其能够增加掺入所述佐剂或与所述佐剂共同施用的抗原的免疫原性。在本发明的上下文中，佐剂优选增强本发明活性剂的特异性免疫原性作用。通常，“佐剂”或“佐剂组分”具有相同的含义并且可以相互使用。佐剂可以分为例如免疫增强剂，抗原递送系统或甚至其组合。术语“佐剂”通常理解为不包括自身赋予免疫性的试剂。佐剂通过例如促进抗原呈递给免疫系统或诱导非特异性先天免疫响应而非特异性辅助免疫系统增强抗原特异性免疫响应。此外，佐剂可以优选地例如是通过例如将主导的基于Th2的抗原特异性响应转移到更多基于Thl的抗原特异性响应或反之亦然来调节抗原特异性免疫响应。因此，佐剂可以有利地调节细胞因子表达/分泌，抗原呈递，免疫应答类型等。
免疫刺激/免疫刺激性RNA：本发明上下文中的免疫刺激/免疫刺激性RNA(isRNA)通常可以是能够通过其自身诱导先天性免疫应答的RNA。它通常不包含开放阅读框，因此不提供肽-抗原或免疫原，但例如通过结合特定种类的Toll样受体(TLR)或其他合适的受体引发先天性免疫应答。因此，免疫刺激/免疫刺激性RNA优选是非编码RNA。然而，当然，具有开放阅读框并编码肽/蛋白质(例如抗原功能)的mRNA也可以诱导先天性免疫应答。
抗原：术语抗原通常是指可以被免疫系统识别并且能够例如通过形成抗体或作为适应性免疫响应的一部分的抗原特异性T细胞引发抗原特异性免疫响应的物质。抗原可以是蛋白质或肽。在这种情况下，适应性免疫应答的第一步是通过抗原呈递细胞激活初始抗原特异性T细胞。这发生在初始T细胞不断通过的淋巴组织和器官中。可用作抗原呈递细胞的三种细胞类型是树突细胞，巨噬细胞和B细胞。这些细胞中的每一种在引发免疫应答方面具有不同的功能。组织树突细胞通过吞噬作用和大型胞饮作用摄取抗原，并通过感染刺激迁移至局部淋巴组织，在那里它们分化成成熟的树突细胞。巨噬细胞摄取颗粒抗原例如细菌，并由感染因子诱导表达MHC II类分子。B细胞通过其受体结合和内化可溶性蛋白抗原的独特能力对于诱导T细胞是重要的。在MHC分子上呈递抗原导致T细胞的激活，诱导其增殖并分化成武装效应T细胞。效应T细胞最重要的功能是：通过CD8+细胞毒性T细胞杀死感染细胞和通过Th1细胞激活巨噬细胞(它们共同构成细胞介导的免疫)，以及通过Th2和Th1细胞激活B细胞产生不同类别的抗体，从而驱动体液免疫响应。T细胞通过其T细胞受体识别抗原，所述T细胞受体不能直接识别和结合抗原，而是识别与其他细胞的表面的MHC分子结合的短肽片段，例如病原体蛋白质抗原的短肽片段。
T细胞分为两大类，其具有不同的效应功能。这两类的特征在于细胞表面蛋白CD4和CD8的表达。这两种类型的T细胞在它们识别的MHC分子类别方面不同。有两类MHC分子-MHC I类和MHC II类分子-它们在身体各组织上的结构和表达模式不同。CD4+T细胞与MHCII类分子结合，CD8+T细胞与MHC I类分子结合。MHC I类和MHC II类分子在细胞中具有不同的分布，其反映识别它们的T细胞的不同效应功能。MHC I类分子将例如来自病原体(通常是病毒)的细胞溶质肽和核肽呈递给CD8+T细胞，所述CD8+T细胞分化成细胞毒性T细胞，专门用于杀死它们特异性识别的任何细胞。几乎所有细胞都表达MHC I类分子，尽管组成型表达水平因细胞类型而异。但是，MHC I类分子不仅呈现来自病毒的致病性肽，而且还呈现自身抗原如肿瘤抗原。MHC I类分子结合来自细胞溶质中降解的蛋白质的肽并在内质网中转运。识别MHC I类的CD8+T细胞：感染细胞表面的肽复合物专门杀死任何展示外源肽的细胞，从而清除体内感染病毒和其他细胞溶质病原体的细胞。识别MHC II类分子的CD4+T细胞(CD4+辅助T细胞)的主要功能是激活免疫系统的其他效应细胞。因此，MHC II类分子通常存在于参与免疫应答的B淋巴细胞，树突细胞和巨噬细胞上，但不存在于其他组织细胞上。例如，巨噬细胞被激活以杀伤它们所拥有的囊泡内病原体，并且B细胞分泌针对外来分子的免疫球蛋白。阻止MHC II类分子与内质网中的肽结合，因此MHC II类分子结合来自内体中降解的蛋白质的肽。它们可以从已经进入巨噬细胞的囊泡系统的病原体捕获肽，或者从未成熟的树突细胞内化的抗原或B细胞的免疫球蛋白受体捕获肽。在巨噬细胞和树突细胞囊泡内大量积累的病原体倾向于刺激Th1细胞的分化，而细胞外抗原倾向于刺激Th2细胞的产生。Th1细胞激活巨噬细胞的杀微生物特性并诱导B细胞产生IgG抗体，其非常有效地调理细胞外病原体以供吞噬细胞摄取，而Th2细胞通过激活初始细胞分泌IgM引发体液应答，并诱导产生弱调理性抗体例如IgG1和IgG3(小鼠)和IgG2和IgG4(人)以及IgA和IgE(小鼠和人)。
表位(也称为抗原决定簇)：T细胞表位可包含优选长度为约6至约20或甚至更多个氨基酸的片段，例如，由MHC I类分子加工和呈递的片段，优选具有约8至约10个氨基酸的长度的片段，例如8，9或10个氨基酸(或甚至11或12个氨基酸)的片段，或由MHC II类分子加工和呈递的片段，优选具有约13个或更多个氨基酸的长度，例如13，14，15，16，17，18，19，20或甚至更多个氨基酸，其中这些片段可选自氨基酸序列的任何部分。这些片段通常以由肽片段和MHC分子组成的复合物的形式被T细胞识别。B细胞表位通常是位于(天然)蛋白质或肽抗原外表面上的片段。
疫苗：疫苗通常被理解为包含衍生自抗原物质(其优选衍生自疾病的病原体)的化合物的组合物，其中所述化合物用于提供针对一种或若干种疾病的免疫力。在本发明的上下文中，术语“疫苗”还可以优选地指(合成的/人工的)化合物，其不衍生自来自疾病的病原体的抗原物质，并且其中所述化合物用于提供对一种或若干种疾病的免疫力。例如，如本文所用的术语“疫苗”可以指包含作为活性成分的(合成的/人工的)化合物例如(人造的)核酸分子，肽或蛋白质(其优选不衍生自来自疾病的病原体的抗原物质)的组合物，其中所述化合物诱导免疫响应，优选先天免疫响应。在本文中，疫苗可包含作为活性成分的(合成/人工)化合物，其优选充当佐剂和/或免疫调节剂。在本文中，术语“免疫调节剂”是指例如通过特定干扰某些免疫细胞中的信号传导途径而增强或抑制免疫反应的化合物。在本发明的含义中，疫苗可因此刺激身体的适应性和/或先天性免疫系统，以提供免疫应答，例如针对肿瘤(细胞)的免疫应答。
提供抗原的mRNA：提供抗原的mRNA通常可以是mRNA，其具有至少一个可以被提供有该mRNA的细胞或生物翻译的开放阅读框。该翻译的产物是可以作为抗原优选作为免疫原的肽或蛋白质。该产物也可以是由一种以上免疫原组成的融合蛋白，例如由两个或更多个表位，肽或蛋白质组成的融合蛋白，其中所述表位，肽或蛋白质可以通过接头序列连接。
双/多顺反子mRNA：双/多顺反子mRNA通常可具有两个(双顺反子)或更多个(多顺反子)编码序列(cds)(通常也称为开放阅读框(ORF))。在该上下文中的编码序列/开放阅读框是可以翻译成肽或蛋白质的若干个核苷酸三联体(密码子)的序列。这种mRNA的翻译产生两个(双顺反子)或更多个(多顺反子)不同的翻译产物(条件是编码序列/ORF不相同)。为了在真核生物中表达，这种mRNA可以例如包含内部核糖体进入位点(IRES)序列。
5′-CAP-结构：5′-CAP通常是添加到mRNA分子的5′端的经修饰的核苷酸(CAP类似物)，特别是鸟嘌呤核苷酸。优选地，使用5′-5′-三磷酸键(也称为m7GpppN)添加5′帽。5′帽结构的其他实例包括甘油基，反向脱氧无碱基残基(部分)，4′，5′亚甲基核苷酸，1-(β-D-赤呋喃糖基)核苷酸，4′-硫代核苷酸，碳环核苷酸，1，5-脱氢己糖醇核苷酸，L-核苷酸，α-核苷酸，修饰的碱基核苷酸，苏-戊呋喃糖基核苷酸，非环3′，4′-裂核苷酸，非环3，4-二羟基丁基核苷酸，非环3，5二羟基戊基核苷酸，3′-3′-反向核苷酸部分，3′-3′-反向无碱基部分，3′-2′-反向核苷酸部分，3′-2′-反向无碱基部分，1，4-丁二醇磷酸酯，3′-氨基磷酸酯，己基磷酸酯，氨基己基磷酸酯，3′-磷酸酯，3′硫代磷酸酯，二硫代磷酸酯，或桥接或非桥接的甲基膦酸酯部分。这些经修饰的5′帽结构可用于本发明的上下文中，以修饰本发明组合物的mRNA序列。可以在本发明的上下文中使用的进一步修饰的5′帽结构是CAP1(m7GpppN的相邻核苷酸的核糖的额外甲基化)，CAP2(m7GpppN下游的第二个核苷酸的核糖的额外甲基化)，CAP3(m7GpppN下游第3个核苷酸的核糖的额外甲基化)，CAP4(m7GpppN下游第4个核苷酸的核糖的额外甲基化)，ARCA(抗反向CAP类似物)，修饰的ARCA(例如硫代磷酸酯修饰的ARCA)，肌苷，N1-甲基-鸟苷，2′-氟-鸟苷，7-脱氮-鸟苷，8-氧代-鸟苷，2-氨基-鸟苷，LNA-鸟苷和2-叠氮基-鸟苷。
在本发明的上下文中，还可以使用帽类似物在化学RNA合成或RNA体外转录(共转录加帽)中形成5′帽结构，或者可以使用加帽酶(例如，市售加帽试剂盒)在体外形成帽结构。
帽类似物：帽类似物是指具有帽功能的不可聚合的二核苷酸，其促进翻译或定位，和/或当掺入RNA分子的5′末端时防止RNA分子的降解。不可聚合是指帽类似物仅在5′末端掺入，因为它不具有5′三磷酸，因此不能通过模板依赖性RNA聚合酶在3′方向上延伸。
帽类似物包括但不限于选自由以下组成的组的化学结构：m7GpppG，m7GpppA，m7GpppC；未甲基化的帽类似物(例如，GpppG)；二甲基化帽类似物(例如m2，7GpppG)，三甲基化帽类似物(例如m2，2，7GpppG)，二甲基化对称帽类似物(例如m7Gpppm7G)或抗反向帽类似物(例如ARCA；m7，2′OmeGpppG，m7，2′dGpppG，m7，3′OmeGpppG，m7，3′dGpppG及其四磷酸酯衍生物)(Stepinski等.，2001.RNA 7(10)：1486-95)。
先前已描述了其他帽类似物(US 7,074,596，WO 2008/016473，WO 2008/157688，WO 2009/149253，WO 2011/015347，和WO 2013/059475)。最近已经描述了N7-(4-氯苯氧基乙基)取代的二核苷酸帽类似物的合成(Kore等.(2013)Bioorg.Med.Chem.21(15)：4570-4)。
蛋白质片段：本发明上下文中蛋白质或肽的“片段”通常可包含本文所定义的蛋白质或肽的序列，就其氨基酸序列(或其编码的核酸分子)而言，所述序列与原始(天然)蛋白质的氨基酸序列(或其编码的核酸分子)相比在N末端和/或C末端截短。因此，这种截短可以在氨基酸水平上或相应地在核酸水平上发生。因此，关于如本文所定义的这种片段的序列同一性可优选指本文所定义的完整蛋白质或肽或这种蛋白质或肽的完整(编码)核酸分子。在抗原的情况下，这种片段可具有约6至约20或甚至更多个氨基酸长度，例如，由MHC I类分子加工和呈递的片段，优选具有约8至约10个氨基酸的长度的片段，例如8，9或10个氨基酸(或甚至6，7，11或12个氨基酸)的片段，或由MHC II类分子加工和呈递的片段，优选具有约13个或更多个氨基酸的长度，例如13，14，15，16，17，18，19，20或甚至更多个氨基酸，其中这些片段可选自氨基酸序列的任何部分。这些片段通常以由肽片段和MHC分子组成的复合物的形式被T细胞识别，即片段通常不以其天然形式被识别。蛋白质或肽的片段(例如在抗原的情况下)可包含那些蛋白质或肽的至少一个表位。此外，蛋白质的结构域，例如细胞外结构域，细胞内结构域或跨膜结构域以及蛋白质的缩短或截短形式可以理解为包含蛋白质的片段。优选地，蛋白质的片段包含蛋白质的功能片段，这意味着该片段发挥与其衍生的整个蛋白质相同的作用或功能。更优选地，本文所用的“片段”与衍生它的肽或蛋白质至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％相同。
蛋白质的变体：可以产生如本发明上下文中定义的蛋白质或肽的变体，其氨基酸序列与原始序列具有一个或多个突变的不同，例如一个或多个置换的，插入的和/或删除的氨基酸。优选地，与全长天然蛋白质例如其特异性抗原特性相比，这些片段和/或变体具有相同的生物学功能或比活性。与其天然(即非突变的生理学)序列相比，本发明上下文中定义的蛋白质或肽的“变体”可包含保守氨基酸置换。那些氨基酸序列以及它们的编码核苷酸序列特别属于本文定义的术语变体。其中源自相同类别的氨基酸彼此交换的置换称为保守置换。特别地，这些是具有脂肪族侧链的，带正电荷侧链或带负电荷侧链的，在侧链中具有芳族基团的氨基酸，或其侧链(例如具有羟基官能团的侧链)可以进入氢桥的氨基酸。这意味着，例如具有极性侧链的氨基酸被具有同样极性侧链的另一种氨基酸取代，或者例如，具有疏水性侧链的氨基酸被具有同样疏水性侧链的另一种氨基酸置换(例如丝氨酸(苏氨酸)被苏氨酸(丝氨酸)置换或亮氨酸(异亮氨酸)被异亮氨酸(亮氨酸)置换)。特别地，插入和置换可以在那些不引起三维结构修饰或不影响结合区的序列位置。例如使用CD谱(圆二色谱)可以容易地确定插入或删除对三维结构的修饰(Urry，1985，Absorption，CircularDichroism and ORD of Polypeptides，in：Modern Physical Methods in Biochemistry，Neuberger等.(ed.)，Elsevier，Amsterdam)。
蛋白质或肽的“变体”在这种蛋白质或肽的10，20，30，50，75或100个氨基酸的区段上可具有至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，98％或99％的氨基酸同一性。备选地，更优选地，本文所用的“变体”与衍生它的肽或蛋白质至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，或99％相同。
此外，可以由核酸分子编码的如本文所定义的蛋白质或肽的变体也可以包含那些序列，其中编码核酸序列的核苷酸根据遗传密码简并性进行交换，而不会导致蛋白质或肽的相应氨基酸序列的改变，即氨基酸序列或其至少部分可以在上述含义内与原始序列不同。
优选地，蛋白质的变体包含蛋白质的功能变体，这意味着变体发挥与其衍生的蛋白质相同的作用或功能。
序列的同一性：为了确定两个序列相同的百分比，例如，如本文所定义的核酸序列或氨基酸序列，优选由本文定义的聚合物载体的核酸序列编码的氨基酸序列或氨基酸序列本身，可以比对所述序列以便随后相互比较。因此，例如可以将第一序列的位置与第二序列的对应位置进行比较。如果第一序列中的位置被与第二序列中的位置处的情况相同的组分(残基)占据，则这两个序列在该位置是相同的。如果不是这种情况，则序列在此位置不同。如果与第一序列相比在第二序列中发生插入，则可以将缺口插入第一序列以允许进一步比对。如果与第一序列相比在第二序列中发生缺失，则可以将缺口插入第二序列以允许进一步比对。两个序列相同的百分比则是相同位置数除以包括仅在一个序列中占据的那些位置的位置总数的函数。可以使用数学算法确定两个序列相同的百分比。可以使用的数学算法的优选但非限制性的例子是Karlin等.(1993)，PNAS USA，90：5873-5877或Altschul等.(1997)，Nucleic Acids Res.，25：3389-3402的算法。这种算法集成在BLAST程序中。通过该程序可以鉴定在一定程度上与本发明的序列相同的序列。
单顺反子mRNA：单顺反子mRNA通常可以是mRNA，其仅包含一个编码序列(开放阅读框)。在该上下文中的编码序列/开放阅读框是可以翻译成肽或蛋白质的若干个核苷酸三联体(密码子)的序列。
核酸：术语核酸是指任何DNA或RNA分子，并且与多核苷酸同义使用。在本文中，无论何处提及编码特定蛋白质和/或肽的核酸或核酸序列，所述核酸或核酸序列优选还包含允许其在合适的宿主(例如人)中表达(即编码特定蛋白质或肽的核酸序列的转录和/或翻译)的调节序列。
肽：肽是氨基酸单体的聚合物。通常，单体通过肽键连接。术语“肽”不限制氨基酸聚合物链的长度。在本发明的一些实施方案中，肽可以例如含有少于50个单体单元。较长的肽也称为多肽，通常具有50至600个单体单元，更具体地50至300个单体单元。
药学有效量：本发明上下文中的药学有效量通常被理解为足以诱导免疫应答或触发所期望治疗效果的量。
蛋白质：蛋白质通常由折叠成三维形式促进生物学功能的一个或多个肽和/或多肽组成。
聚(C)序列：聚(C)序列通常是胞嘧啶核苷酸的长序列，通常约10至约200个胞嘧啶核苷酸，优选约10至约100个胞嘧啶核苷酸，更优选约10至约70个胞嘧啶核苷酸或甚至更多，优选约20至约50，或甚至约20至约30个胞嘧啶核苷酸。聚(C)序列可以优选位于核酸包含的编码区的3′。
聚(A)尾：聚(A)尾也称为“3′聚(A)尾”或“聚(A)尾序列”，通常是添加至mRNA的3′末端的腺苷核苷酸的长同聚序列，其高达约400个腺苷核苷酸，例如从约25至约400，优选约50至约400，更优选约50至约300，甚至更优选约50至约250，最优选约60至约250个腺苷核苷酸。在本发明的上下文中，mRNA的聚(A)尾优选通过RNA体外转录从DNA模板衍生。或者，聚(A)序列也可以通过常规的化学合成方法在体外获得，而不必从DNA祖先转录。此外，聚(A)序列或聚(A)尾可以通过RNA的酶促多聚腺苷酸化产生。
稳定的核酸：稳定的核酸通常表现出增加对体内降解(例如外切或内切核酸酶降解)和/或离体降解(例如通过疫苗施用前的制造过程，例如在制备待施用的疫苗溶液的过程中)的抗性的修饰。RNA的稳定化可以例如通过提供5′帽结构，聚(A)尾或任何其他UTR修饰来实现。其也可以通过骨架修饰或修饰核酸的G/C含量或C含量来实现。各种其他方法在本领域中是已知的并且在本发明的上下文中是可想到的。
载体/聚合物载体(carrier)：本发明上下文中的载体通常可以是促进另一种化合物的转运和/或复合的化合物。所述载体可与所述其他化合物形成复合物。聚合物载体是由聚合物形成的载体。
阳离子组分：术语阳离子组分通常是指带电荷分子，其在通常为约1至9的pH值，优选在9或低于9(例如5至9)的pH值，8或低于8(例如5至8)的pH值，7或低于7(例如5至7)的pH值，最优选在生理pH值(例如约7.3至7.4)下带正电荷(阳离子)。因此，根据本发明的阳离子肽，蛋白质或聚合物在生理条件下特别是在体内细胞的生理盐条件下带正电荷。阳离子肽或蛋白质优选含有与其他氨基酸残基相比大量阳离子氨基酸，例如大量Arg，His，Lys或Orn(特别是比阴离子氨基酸残基如Asp或Glu更多的阳离子氨基酸)或含有主要由阳离子氨基酸残基形成的嵌段。“阳离子”的定义也可以指“聚阳离子”组分。
媒剂(vehicle)：媒剂是试剂，例如：载体，通常可以在药物组合物或疫苗中使用，以便于将药物组合物或疫苗的组分施用给个体。
3′非翻译区(3′UTR)：3′UTR通常是mRNA的一部分，其位于mRNA的蛋白质编码区(即开放阅读框)和聚(A)序列之间。mRNA的3′UTR不翻译成氨基酸序列。3′UTR序列通常由基因编码，该基因在基因表达过程中转录成相应的mRNA。首先将基因组序列转录成成熟前mRNA，其包含任选的内含子。然后在成熟过程中将成熟前mRNA进一步加工成成熟mRNA。该成熟过程包括以下步骤：5′加帽，剪接成熟前mRNA以切除任选的内含子和3′末端的修饰，例如成熟前mRNA的3′末端的多聚腺苷酸化和任选的内切酶切割或外切酶切割等。在本发明的上下文中，3′UTR对应于成熟mRNA的序列，其位于蛋白质编码区的终止密码子的3′，优选紧邻蛋白质编码区的终止密码子的3′，并且延伸至聚(A)序列的5′侧，优选延伸至紧邻聚(A)序列的5′的核苷酸。术语“对应于”是指3′UTR序列可以是例如在用于定义3′UTR序列的mRNA序列中的RNA序列，或对应于这种RNA序列的DNA序列。在本发明的上下文中，术语“基因的3′UTR”，例如“白蛋白基因的3′UTR”，是对应于衍生自该基因的成熟mRNA(即通过该基因转录和成熟前mRNA的成熟获得的mRNA)的3′UTR的序列。术语“基因的3′UTR”包括3′UTR的DNA序列和RNA序列。
5′非翻译区(5′UTR)：5′UTR通常被理解为信使RNA(mRNA)的特定部分。它位于mRNA的开放阅读框的5′。通常，5′UTR以转录起始位点开始并在开放阅读框的起始密码子之前的一个核苷酸结束。5′UTR可包含用于控制基因表达的元件，也称为调节元件。这些调节元件可以是例如核糖体结合位点或5′末端寡嘧啶段。5′UTR可以是例如通过添加5′帽经转录后修饰的。在本发明的上下文中，5′UTR对应于位于5′帽和起始密码子之间的成熟mRNA的序列。优选地，5′UTR对应于从位于5′帽的3′的核苷酸(优选从紧邻5′帽的3′核苷酸)延伸至位于蛋白质编码区的起始密码子的5′的核苷酸(紧邻蛋白质编码区的起始密码子的5′核苷酸)的序列。紧邻成熟mRNA的5′帽的3′端核苷酸通常对应于转录起始位点。术语“对应于”是指5′UTR序列可以是例如在用于定义5′UTR序列的mRNA序列中的RNA序列，或对应于这种RNA序列的DNA序列。在本发明的上下文中，术语“基因的5′UTR”，例如“TOP基因的5′UTR”，是对应于衍生自该基因的成熟mRNA(即通过该基因转录和成熟前mRNA的成熟获得的mRNA)的5′UTR的序列。术语“基因的5′UTR”包括5′UTR的DNA序列和RNA序列。
5′末端寡聚嘧啶段(TOP)：5′末端寡嘧啶段(TOP)通常是位于核酸分子5′末端区域(例如某些mRNA分子的5′末端区域或功能实体(例如某些基因的转录区域)的5′末端区域)的一段嘧啶核苷酸。该序列以胞苷开始，该胞苷通常对应于转录起始位点，然后是一段通常约3至30个嘧啶核苷酸。例如，TOP可包含3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21，22，23，24，25，26，27，28，29，30或甚至更多个核苷酸。嘧啶段并因此5′TOP终止于位于TOP下游的第一个嘌呤核苷酸的5′的一个核苷酸。含有5′末端寡嘧啶段的mRNA通常称为TOP mRNA。因此，提供这种信使RNA的基因被称为TOP基因。例如，在编码肽延伸因子和核糖体蛋白的基因和mRNA中发现了TOP序列。
TOP基序：在本发明的上下文中，TOP基序是对应于如上定义的5′TOP的核酸序列。因此，本发明上下文中的TOP基序优选是长度为3-30个核苷酸的一段嘧啶核苷酸。优选地，TOP基序由至少3个嘧啶核苷酸，优选至少4个嘧啶核苷酸，优选至少5个嘧啶核苷酸，更优选至少6个核苷酸，更优选至少7个核苷酸，最优选至少8个嘧啶核苷酸组成，其中嘧啶核苷酸段优选在其5′末端以胞嘧啶核苷酸开始。在TOP基因和TOP mRNA中，TOP基序优选在其5′末端以转录起始位点开始，并且在所述基因或mRNA中的第一个嘌呤残基的5′的一个核苷酸结束。本发明意义上的TOP基序优选位于代表5′UTR的序列的5′末端或编码5′UTR的序列的5′末端。因此，优选地，如果一段3个或更多个嘧啶核苷酸位于相应序列(例如本发明的mRNA，本发明mRNA的5′UTR元件，或衍生自本文所述TOP基因的5′UTR的核酸序列)的5′末端，则在本发明的意义上，该段为“TOP基序”。换句话说，一段3个或更多个嘧啶核苷酸(它不位于5′UTR或5′UTR元件的5′末端，而是位于5′UTR或5′UTR元件内的任何位置)优选地不称其为“TOP基序”。
TOP基因：TOP基因通常以存在5末端寡嘧啶段为特征。此外，大多数TOP基因的特征在于与生长相关的翻译调节。然而，具有组织特异性翻译调节的TOP基因也是已知的。如上所定义，TOP基因的5′UTR对应于源自TOP基因的成熟mRNA的5′UTR序列，其优选从位于5′帽的3′的核苷酸延伸至位于起始密码子的5′的核苷酸。TOP基因的5′UTR通常不包含任何起始密码子，优选不包含上游AUG(uAUG)或上游开放阅读框(uORF)。其中，上游AUG和上游开放阅读框通常被理解为发生在应翻译的开放阅读框的起始密码子(AUG)的5′的AUG和开放阅读框。TOP基因的5′UTR通常相当短。TOP基因的5′UTR的长度可以在20个核苷酸至500个核苷酸之间变化，并且通常小于约200个核苷酸，优选小于约150个核苷酸，更优选小于约100个核苷酸。在根据国际专利申请WO2013/143700(其公开内容通过引用并入本文)的SEQ IDNO.1-1363，SEQ ID NO：1395，SEQ ID NO：1421和SEQ ID NO：1422的序列或其同源物或变体中，本发明意义上的TOP基因的示例性5′UTR从位置5处的核苷酸延伸至紧邻起始密码子(例如ATG)的5′核苷酸。在该上下文中，TOP基因的5′UTR的特别优选的片段是缺乏5′TOP基序的TOP基因的5′UTR。术语“TOP基因的5′UTR”优选是指天然存在的TOP基因的5′UTR。
RNA的化学合成：具有确定化学结构的相对短的寡核苷酸片段的化学合成提供了对任何所需序列的定制寡核苷酸的快速且廉价的获取。尽管酶仅以5′至3′方向合成DNA和RNA，但化学寡核苷酸合成没有这种限制，尽管它通常在相反的方向上进行，即3′至5′方向。目前，该方法使用亚磷酰胺方法和衍生自受保护的核苷(A，C，G和U)或化学修饰的核苷的亚磷酰胺构建单元作为固相合成来实施。
为了获得所需的寡核苷酸，结构单元在完全自动化的过程中以产物序列所需的顺序依次与固相上的生长寡核苷酸链偶联。完成链组装后，将产物从固相释放到溶液中，脱保护并收集。副反应的发生成为合成寡核苷酸的长度(高达约200个核苷酸残基)的实际限制，因为错误的数量随着合成的寡核苷酸的长度而增加。通常通过HPLC分离产物以获得高纯度的所期望寡核苷酸。
化学合成的寡核苷酸在分子生物学和医学中具有多种应用。它们最常用作反义寡核苷酸，小干扰RNA，用于DNA测序和扩增的引物，用于通过分子杂交检测互补DNA或RNA的探针，用于靶向引入突变和限制性位点的工具，以及用于合成人工基因的工具。
RNA体外转录：术语“RNA体外转录”或“体外转录”涉及其中RNA在无细胞系统(体外)中合成的过程。DNA，特别是质粒DNA，用作产生RNA转录物的模板。RNA可以通过合适的DNA模板的DNA依赖性体外转录获得，根据本发明，该模板优选是线性化的质粒DNA模板。用于控制体外转录的启动子可以是任何DNA依赖性RNA聚合酶的任何启动子。DNA依赖性RNA聚合酶的具体实例是T7，T3和SP6RNA聚合酶。用于体外RNA转录的DNA模板可以通过以下来获得：克隆核酸，特别是对应于待体外转录的相应RNA的cDNA，并将其导入合适的体外转录载体中，例如导入质粒DNA中。在本发明的一个优选实施方案中，在体外转录之前，用合适的限制酶将DNA模板线性化。cDNA可以通过mRNA的逆转录或化学合成获得。此外，用于体外RNA合成的DNA模板也可以通过基因合成获得。
用于体外转录的方法是本领域已知的(参见例如，Geall等.(2013)Semin.Immunol.25(2)：152-159；Brunelle等.(2013)Methods Enzymol.530：101-14)。所述方法中使用的试剂通常包括：
1)具有启动子序列的线性化DNA模板，所述启动子序列对其各自的RNA聚合酶例如噬菌体编码的RNA聚合酶具有高结合亲和力；
2)四种碱基(腺嘌呤，胞嘧啶，鸟嘌呤和尿嘧啶)的核糖核苷三磷酸(NTP)；
3)任选地如上定义的帽类似物(例如m7G(5′)ppp(5′)G(m7G))；
4)能够与线性化DNA模板内的启动子序列结合的DNA依赖性RNA聚合酶(例如T7，T3或SP6RNA聚合酶)；
5)任选地核糖核酸酶(RNase)抑制剂，以灭活任何污染性RNase；
6)任选地焦磷酸酶，以降解可以抑制转录的焦磷酸盐；
7)MgCl2，其提供作为聚合酶的辅因子的Mg2+离子；
8)保持合适pH值的缓冲液，其也可以含有最佳浓度的抗氧化剂(例如DTT)和/或多胺如亚精胺。
RNA，mRNA：RNA是核糖核酸的通常缩写。它是核酸分子，即由核苷酸单体组成的聚合物。这些核苷酸通常是腺苷一磷酸(AMP)，尿苷一磷酸(UMP)，鸟苷一磷酸(GMP)和胞苷一磷酸(CMP)单体或其类似物，它们沿着所谓的骨架相互连接。骨架由第一相邻单体的糖(即核糖)与第二相邻单体的磷酸酯部分之间的磷酸二酯键形成。单体的特定顺序，即与糖/磷酸酯骨架连接的碱基的顺序称为RNA序列。通常，RNA可以通过DNA序列例如在细胞内的转录获得。在真核细胞中，转录通常在细胞核或线粒体内进行。在体内，DNA的转录通常导致所谓的成熟前RNA(也称为前mRNA，前体mRNA或异源核RNA)，其必须被加工成所谓的信使RNA，通常缩写为mRNA。成熟前RNA在例如真核生物中的加工包括多种不同的转录后修饰，例如剪接，5′加帽，多腺苷酸化，从细胞核或线粒体输出等。这些过程的总和也称为RNA的成熟。成熟信使RNA通常提供可以翻译成特定肽或蛋白质的氨基酸序列的核苷酸序列。通常，成熟mRNA包含5′帽，任选的5′UTR，开放阅读框，任选的3′UTR和聚(A)尾。
除了信使RNA之外，还存在若干种非编码类型的RNA，其可能参与转录和/或翻译的调节以及免疫刺激。在本发明中，术语“RNA”还包括本领域已知的任何类型的单链(ssRNA)或双链RNA(dsRNA)分子，例如病毒RNA，逆转录病毒RNA和复制子RNA，小干扰RNA(siRNA)，反义RNA(asRNA)，环状RNA(circRNA)，核酶，适体，核糖开关，免疫刺激性/免疫刺激RNA，转运RNA(tRNA)，核糖体RNA(rRNA)，小核RNA(snRNA)，小核仁RNA(snoRNA)，microRNA(miRNA)和Piwi相互作用RNA(piRNA)。
核酸序列特别是RNA的片段：核酸序列的片段由连续的核苷酸段组成，其对应于作为该片段的核酸序列的基础的全长核酸序列中的连续的核苷酸段，表示全长核酸序列的至少20％，优选至少30％，更优选至少40％，更优选至少50％，甚至更优选至少60％，甚至更优选至少70％，甚至更优选至少80％，甚至更优选至少80％，甚至更优选至少85％，甚至更优选至少90％，甚至更优选至少95％，最优选至少98％或99％。在本发明的意义上，这种片段优选是全长核酸序列的功能片段。
核酸序列特别是RNA的变体：核酸序列的变体是指形成核酸序列基础的核酸序列的变体。例如，与衍生变体的核酸序列相比，变体核酸序列可以表现出一个或多个核苷酸缺失，插入，添加和/或置换。优选地，核酸序列的变体与衍生该变体的核酸序列至少40％，优选至少50％，更优选至少60％，更优选至少70％，甚至更优选至少80％，甚至更优选至少90％，最优选与至少95％相同。优选地，变体是功能变体。核酸序列的“变体”在这种核酸序列的10，20，30，50，75或100个核苷酸的区段上可具有至少70％，75％，80％，85％，90％，95％，98％或99％的核苷酸同一性。
瘤内施用/应用：术语“瘤内施用/应用”是指将药物组合物直接递送到肿瘤或癌症中或附近和/或肿瘤或癌症的紧邻区域。因此，在本发明的上下文中，术语“肿瘤内施用/应用”通常也指局部区域或肿瘤周围施用/应用。还包括多次注射到肿瘤或癌症的不同区域。此外，肿瘤内施用/应用包括将药物组合物递送到一个或多个转移瘤中。用于肿瘤内递送药物的方法是本领域已知的(Brincker，1993.Crit.Rev.Oncol.Hematol.15(2)：91-8；Celikoglu等.，2008.Cancer Therapy 6，545-552)。例如，药物组合物可通过常规针注射，无针喷射注射或电穿孔或其组合施用到肿瘤或癌组织中。通过成像引导注射(优选使用成像技术，例如计算机断层扫描，超声，γ相机成像，正电子发射断层扫描或磁共振肿瘤成像)可以非常精确地将药物组合物直接注射到肿瘤或癌症(组织)中。进一步的程序选自包括但不限于通过内窥镜检查，支气管镜检查，膀胱镜检查，结肠镜检查，腹腔镜和导管插入术直接瘤内注射的组。此外，药物组合物可以通过相同的方法局部区域或肿瘤周围注射。肿瘤或癌症组织包括原发性肿瘤的转移，例如转移至淋巴结，皮肤，软组织，骨骼，内脏器官或身体的其他器官。
诱饵(decoy)受体：诱饵受体以高亲和力和特异性识别某些生长因子或细胞因子，但在结构上不能传导信号或将激动剂呈递给信号传导受体复合物。它们充当激动剂和信号传导受体组分的分子陷阱。诱饵受体或槽受体(sink receptor)是结合配体的受体，抑制配体与其正常受体的结合。例如，VEGFR-1受体可以阻止血管内皮生长因子(VEGF)与VEGFR-2结合。
显性负性受体：显性负性受体是包含显性-负性(DN)突变的特定受体的变体，所述突变导致在过表达时破坏野生型受体的活性的突变多肽。在第一方面，本发明涉及用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的免疫刺激性RNA(isRNA)。特别地，提供了isRNA用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病，其中isRNA是肿瘤内施用。
发明人发现，如本文所述的施用，特别是肿瘤内施用的isRNA可用于治疗或预防肿瘤或癌症疾病和相关病症。已经表明用isRNA治疗肿瘤或癌症疾病是出人意料地有效，特别是如果肿瘤内施用，则肿瘤尺寸减小。此外，根据本发明的isRNA的应用能够增加动物模型中的存活并保护存活的动物免于被相同的肿瘤再次激发，尽管在再次激发时已停止用药物组合物治疗。该发现与对肿瘤产生持久的免疫记忆一致。由于isRNA不能直接诱导适应性免疫应答，因此无法预料到这一点。
如本文所用，术语“肿瘤”，“癌症”或“癌症疾病”是指恶性疾病，其优选选自由以下组成的组：腺样囊状癌(Adenocystic carcinoma，Adenoid cystic carcinoma)，肾上腺皮质癌，AIDS相关的癌症，AIDS相关的淋巴瘤，肛门癌，阑尾癌，星形细胞瘤，基底细胞癌，胆管癌，膀胱癌，骨癌，骨肉瘤/恶性纤维组织细胞瘤，脑干胶质瘤，脑肿瘤，小脑星形细胞瘤，小脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤，室管膜瘤，成神经管细胞瘤，幕上原始神经外胚层肿瘤，视觉通路和下丘脑胶质瘤，乳腺癌，支气管腺瘤/类癌，伯基特淋巴瘤(Burkitt lymphoma)，儿童类癌肿瘤，胃肠道类癌肿瘤，不明原发癌，原发性中枢神经系统淋巴瘤，儿童小脑星形细胞瘤，儿童小脑星形细胞瘤/恶性胶质瘤，宫颈癌，儿童期癌症，慢性淋巴细胞白血病，结肠癌，皮肤T细胞淋巴瘤包括蕈样真菌病和西泽里综合征(Sezary Syndrome)，促结缔织增生性小圆细胞肿瘤，子宫内膜癌，室管膜瘤，食道癌，尤因肿瘤家族中的尤因肉瘤(Ewing′ssarcoma)，儿童颅外生殖细胞肿瘤，外生殖细胞肿瘤，肝外胆管癌，眼内黑素瘤，视网膜母细胞瘤，胆囊癌，胃癌，胃肠道类癌肿瘤，胃肠道间质瘤(GIST)，颅外、性腺外、或卵巢生殖细胞肿瘤，妊娠滋养细胞肿瘤，脑干胶质瘤，儿童脑星形细胞瘤儿童视觉通路和下丘脑胶质瘤，胃类癌，毛细胞白血病，头颈癌，心脏癌，肝细胞癌(肝癌)，霍奇金淋巴瘤(Hodgkinlymphoma)，人乳头瘤病毒(HPV)相关癌症，下咽癌，儿童时期下丘脑和视觉通路胶质瘤，眼内黑素瘤，胰岛细胞癌(内分泌胰腺)，卡波西肉瘤(Kaposi sarcoma)，肾癌(肾细胞癌)，喉癌，唇和口腔癌，脂肪肉瘤，肝癌，非小细胞肺癌，小细胞肺癌，淋巴瘤，艾滋病相关的淋巴瘤，伯基特淋巴瘤，霍奇金淋巴瘤非霍奇金淋巴瘤，原发性中枢神经系统淋巴瘤，骨/骨肉瘤的恶性纤维组织细胞瘤，儿童成神经管细胞瘤，黑素瘤，眼内(眼)黑素瘤，默克尔细胞癌(Merkel Cell Carcinoma)，成人恶性间皮瘤，儿童间皮瘤，头颈癌，口腔癌，儿童多发性内分泌肿瘤综合征多发性骨髓瘤/浆细胞肿瘤，多发性骨髓瘤(骨髓癌)，鼻腔和鼻窦癌，鼻咽癌，神经母细胞瘤，口腔癌，口咽癌，骨肉瘤/骨恶性纤维组织细胞瘤，卵巢癌，卵巢上皮癌(表面上皮-间质瘤)，卵巢生殖细胞肿瘤，卵巢低恶性潜在肿瘤，胰腺癌，胰岛细胞胰腺癌，鼻窦和鼻腔癌，甲状旁腺癌，阴茎癌，咽癌，嗜铬细胞瘤，松果体星形细胞瘤，松果体生殖细胞瘤，儿童松果体细胞瘤和幕上原始神经外胚层肿瘤，垂体腺瘤，浆细胞肿瘤/浆细胞瘤/多发性骨髓瘤，胸膜肺母细胞瘤，原发性中枢神经系统淋巴瘤，前列腺癌，直肠癌，肾细胞癌(肾癌)，肾盂和输尿管癌，视网膜母细胞瘤，儿童横纹肌肉瘤，唾液腺癌，尤因(Ewing)肿瘤家族中的肉瘤，卡波西肉瘤，软组织肉瘤，子宫肉瘤，皮肤癌(非黑素瘤)，皮肤癌(黑素瘤)，默克尔细胞皮肤癌(Merkel cell Skin carcinoma)，小肠癌，鳞状细胞癌，转移性隐匿性原发性颈部鳞癌，软组织肉瘤(STS)，儿童幕上原始神经外胚层肿瘤，睾丸癌(精原细胞瘤和非精原细胞瘤)，咽喉癌，儿童胸腺瘤，胸腺瘤和胸腺癌，甲状腺癌，儿童甲状腺癌，肾盂和输尿管的移行细胞癌，妊娠滋养细胞肿瘤，尿道癌，子宫内膜子宫癌，子宫肉瘤，阴道癌，儿童视觉通路和下丘脑胶质瘤，外阴癌，和儿童肾母细胞瘤(Wilms tumor)(肾癌)。
特别优选的适用于肿瘤内施用(包括肿瘤周围或局部区域施用，优选成像引导的局部区域施用)的肿瘤或癌症的实例是前列腺癌，肺癌，乳腺癌，脑癌，头颈癌包括嘴唇癌，口癌，或舌癌，鼻咽癌或淋巴瘤，甲状腺癌，胸腺癌，结肠癌，胃癌，食道癌，肝癌，胆道癌胰腺癌，卵巢癌，皮肤癌，(黑素瘤和非黑素瘤皮肤癌)，膀胱癌和尿路上皮癌，子宫癌和子宫颈癌，肛门癌骨癌，肾癌，肾上腺癌，睾丸癌，皮肤T细胞淋巴瘤，皮肤B细胞淋巴瘤，浆细胞瘤，具有可注射的孤立性病变的其他霍奇金和非霍奇金淋巴瘤，腺样囊状癌，其他唾液腺癌，神经内分泌肿瘤，外阴癌，肉瘤(包括小儿肉瘤)，阴茎癌淋巴瘤。
优选地，肿瘤或癌症疾病选自由以下组：乳腺癌(激素受体阳性或阴性形式)；黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，最优选晚期皮肤黑色素瘤(cMEL)；皮肤的鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除和/或晚期SCC，最优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，或其他形式的恶性皮肤癌；腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL-MF)；头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期或局部晚期HNSCC；滤泡性淋巴瘤(FL)；边缘区淋巴瘤，优选淋巴结边缘区淋巴瘤(nMZL)；套细胞淋巴瘤；原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤(PC-ALCL)；外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)；软组织肉瘤；乳腺癌；肝细胞癌；结直肠癌(包括MSI-High CRC)；神经内分泌肿瘤；胰腺癌；胃食管癌；葡萄膜黑素瘤；阴茎癌淋巴瘤；唾液腺癌；鼻咽癌；肺癌，优选局部晚期或晚期非小细胞肺癌或局限期或广泛期的小细胞肺癌，其他恶性肿瘤的肺转移；间皮瘤；尿路上皮或膀胱癌；甲状腺癌；食道癌和胃癌；胃癌，食道癌，肝癌；肝转移恶性肿瘤；卵巢癌；子宫颈癌；肾癌；肾上腺恶性肿瘤，软组织肉瘤，具有可注射病变的血液恶性肿瘤，例如皮肤T细胞淋巴瘤；单发性或多发性骨髓瘤；霍奇金病；非霍奇金淋巴瘤，优选顽固性经皮可触及的非霍奇金淋巴瘤(CTCL)或具有可注射病变的非霍奇金淋巴瘤；包括其各种亚型的肉瘤；胶质瘤I-IV级；结直肠癌，直肠癌或肛门癌。特别地，本文所用的术语“肿瘤”，“癌症”或“癌症疾病”是指基底细胞癌；或黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤；鳞状细胞癌(SCC)，优选皮肤的SCC，更优选皮肤的不可切除和/或晚期SCC；或头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期和/或铂难治性和/或免疫治疗难治性HNSCC；或外阴癌或外阴鳞状细胞癌(VSCC)，优选不可切除和/或晚期VSCC，更优选晚期和/或铂难治性和/或免疫治疗难治性VSCC；或腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；或皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL-MF)，优选晚期CTCL-MF，优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤；或滤泡性淋巴瘤；或边缘区淋巴瘤，优选淋巴结边缘区淋巴瘤(nMZL)；或套细胞淋巴瘤；或原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤(PC-ALCL)；或软组织肉瘤(STS)；或人乳头瘤病毒(HPV)相关癌症；或乳腺癌；或肝细胞癌；或结直肠癌(包括MSI-High CRC)；或神经内分泌肿瘤；或胰腺癌；或胃食管癌；或葡萄膜黑素瘤；或阴茎癌淋巴瘤。在本发明的某些实施方案中，本文所用的术语“肿瘤”，“癌症”或“癌症疾病”是指基底细胞癌；或黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤；鳞状细胞癌(SCC)，优选皮肤的SCC，更优选皮肤的不可切除和/或晚期SCC；或头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期和/或铂难治性和/或免疫治疗难治性HNSCC；或外阴癌或外阴鳞状细胞癌(VSCC)，优选不可切除和/或晚期VSCC，更优选晚期和/或铂难治性和/或免疫治疗难治性VSCC；或/腺囊癌(ACC)，优选晚期ACC；或皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL-MF)，更优选晚期CTCL-MF，更优选局部治疗或化疗难治性晚期CTCL-MF；或滤泡性淋巴瘤；或边缘区淋巴瘤，优选淋巴结边缘区淋巴瘤(nMZL)；或原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤(PC-ALCL)；或软组织肉瘤(STS)；或人乳头瘤病毒(HPV)相关癌症；
根据优选的实施方案，本发明因此涉及用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA，其中所述肿瘤或癌症疾病选自由以下组成的组：黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤的鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除和/或晚期SCC或皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，和/或头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期和/或免疫治疗难治性铂难治性HNSCC，和/或腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC，和/或皮肤T细胞淋巴瘤，优选局部治疗或化疗难治性晚期皮肤T细胞淋巴瘤。
在进一步优选的实施方案中，本发明涉及用于治疗和/或预防肿瘤和/或癌症疾病的优选如本文所述的isRNA，其中所述肿瘤或癌症疾病选自由以下组成的组：
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤的鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC。
根据特别优选的实施方案，本发明涉及用于治疗和/或预防肿瘤和/或癌症疾病的优选如本文所述的isRNA，其中所述肿瘤或癌症疾病选自由以下组成的组：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准治疗难治性的。
根据进一步特别优选的实施方案，本发明涉及用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA，其中所述肿瘤或癌症疾病选自由以下组成的组：晚期黑素瘤，优选晚期皮肤黑色素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)和腺样囊状癌(ACC)。
在另一个优选的实施方案中，本发明涉及用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA，其中所述肿瘤或癌症疾病选自由以下组成的组：晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(hnSCC)和腺样囊状癌(ACC)。
根据一个优选的实施方案，如本文所述的isRNA用于治疗晚期黑素瘤，优选在组织学上被证实的晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，优选是不可切除的和/或转移性(皮肤)黑素瘤。更优选地，黑素瘤是标准治疗难治性的，特别是用检查点抑制剂或免疫刺激剂或用靶向化疗或其组合的免疫治疗难治性的。
在另一个实施方案中，如本文所述的isRNA用于治疗晚期SCC，优选在组织学上被证实的皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，优选是不可切除的和/或转移性SCC。更优选地，SCC是标准治疗难治性的或不存在针对SCC的疗法。
根据优选的实施方案，如本文所述的isRNA用于治疗在组织学上被证实的局部晚期或晚期HNSCC，优选是不可切除的和/或复发的和/或转移性的HNSCC。更优选地，HNSCC是标准治疗难治性的，特别是基于铂的治疗或放疗难治性的或用检查点抑制剂或免疫刺激剂的免疫治疗或任何上述的组合难治性的。
根据进一步优选的实施方案，如本文所述的isRNA用于治疗在组织学上被证实的腺样囊状癌(ACC)，优选是不可切除的和/或复发的和/或转移性的腺样囊状癌(ACC)。更优选地，ACC是标准治疗难治性的，特别是基于铂的治疗或放疗难治性的或用检查点抑制剂或免疫刺激剂的免疫治疗或任何上述的组合难治性的。根据另一个实施方案，如本文中所述的isRNA用于治疗在组织学上被证实的皮肤T细胞淋巴瘤，优选是不可切除的和/或复发的和/或转移性的皮肤T细胞淋巴瘤。更优选地，皮肤T细胞淋巴瘤是标准治疗难治性的，特别是基于铂的治疗或放疗难治性的或用检查点抑制剂或免疫刺激剂的免疫治疗或任何上述的组合难治性的。
根据进一步的实施方案，如本文所述的isRNA用于治疗在组织学上被证实的外阴鳞状细胞癌(VSCC)，优选是不可切除的和/或复发的和/或转移性的VSCC。更优选地，VSCC是标准治疗难治性的，特别是基于铂的治疗或放疗难治性的或用检查点抑制剂或免疫刺激剂的免疫治疗或任何上述的组合难治性的。
在优选的实施方案中，优选如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症的isRNA引发先天性免疫应答，其可以支持适应性免疫应答。
如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA可以优选为任何(双链或单链)RNA，例如如本文所定义的编码RNA。在优选的实施方案中，如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA是非编码RNA。在本文中，术语“非编码”是指以下事实：优选如本文所述，isRNA优选不编码肽或蛋白质，或者isRNA优选不包含编码序列。
在一些实施方案中，如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA可以是单链RNA，双链RNA或部分双链RNA，更优选单链RNA和/或环状或线性RNA，更优选线性RNA。更优选地，isRNA可以是(线性)单链RNA。甚至更优选地，isRNA可以是(长)(线性)单链)非编码RNA。在这种情况下，特别优选的是，isRNA在其5′末端携带三磷酸，这通常是体外转录的RNA的情况。isRNA也可以作为如本文定义的短RNA寡核苷酸存在。
用于治疗或预防本文所述的肿瘤和/或癌症疾病的isRNA可以进一步选自任何类别的RNA分子(天然存在的或合成制备的)，并且其可以诱导先天性免疫响应并且优选支持抗原诱导的适应性免疫响应。在这种情况下，免疫应答可以以各种方式发生。合适的(适应性)免疫应答的实质因素是刺激不同的T细胞亚群。T淋巴细胞通常分为两个亚群，即T辅助细胞1(Th1)细胞和T辅助细胞2(Th2)细胞，免疫系统利用它们能够破坏细胞内(Thl)和细胞外(Th2)病原体(例如抗原)。两种Th细胞群在它们产生的效应蛋白(细胞因子)的模式方面不同。因此，Th1细胞通过激活巨噬细胞和细胞毒性T细胞来辅助细胞免疫应答。另一方面，Th2细胞通过刺激B细胞转化为浆细胞并通过形成抗体(例如针对抗原的抗体)来促进体液免疫应答。因此，Th1/Th2比率在诱导和维持适应性免疫应答方面非常重要。关于本发明，(适应性)免疫应答的Th1/Th2比率优选在朝向细胞应答(Th1应答)的方向上移动，从而诱导细胞免疫应答。
根据一个实例，可以支持适应性免疫应答的先天免疫系统可以被Toll样受体(TLR)的配体激活。TLR是高度保守的模式识别受体(PRR)多肽家族，其识别病原体相关分子模式(PAMP)并在哺乳动物的先天免疫中起关键作用。目前已鉴定出至少十三个家族成员，称为TLR1-TLR13(Toll样受体：TLR1，TLR2，TLR3，TLR4，TLR5，TLR6，TLR7，TLR8，TLR9，TLR10，TLR11，TLR12或TLR13)。此外，已经鉴定了许多特异性TLR配体。例如，发现未甲基化的细菌DNA及其合成类似物(CpG DNA)是TLR9的配体(Hemmi H等.(2000)Nature 408：740-5；BauerS等.(2001)Proc NatlAcadSci USA 98，9237-42)。此外，据报道，某些TLR的配体包括某些核酸分子，并且某些类型的RNA以序列非依赖性或序列依赖性方式具有免疫刺激性，其中这些各种免疫刺激性RNA可以例如刺激TLR3，TLR7或TLR8，或细胞内受体例如RIG-I，MDA-5等。例如，Lipford等确定某些含G，U的寡核糖核苷酸是免疫刺激性的，其通过TLR7和TLR8起作用(参见WO 03/086280)。Lipford等描述的免疫刺激性含G，U的寡核糖核苷酸据信可以从RNA来源衍生，所述RNA来源包括核糖体RNA，转运RNA，信使RNA和病毒RNA。
优选地，如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA可包含任何已知具有免疫刺激性的RNA序列，包括但不限于代表和/或编码TLR配体的RNA序列，优选选自人家族成员TLR1-TLR10或鼠家族成员TLR1-TLR13，更优选选自(人)家族成员TLR1-TLR10，甚至更优选选自TLR7和TLR8，RNA的细胞内受体配体(例如RIG-I或MDA-5等)(参见例如Meylan，E.，Tschopp，J.(2006).Toll-like receptors and RNA helicases：two parallelways to trigger antiviral responses.Mol.Cell 22，561-569)或任何其他免疫刺激性RNA序列。此外，如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的免疫刺激性RNA分子(的类别)可包括能够引发免疫应答的任何其他RNA。不限于此，如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA可包括核糖体RNA(rRNA)，转运RNA(tRNA)，信使RNA(mRNA)和病毒RNA(vRNA)。在优选的实施方案中，isRNA可以具有1000至5000，500至5000，5至5000，或5至1000，5至500，5至250，5至100，5至50或5至30个核苷酸的长度。
根据特别优选的实施方案，本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA由下式(I)或(II)的核酸组成或包含下式(I)或(II)的核酸：
GlXmGn， (式(I))
其中：
G是鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，或是鸟苷(鸟嘌呤)或尿苷(尿嘧啶)的类似物；
X是鸟苷(鸟嘌呤)，(尿苷)尿嘧啶，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)或上述核苷酸(核苷)的类似物；
l是1到40的整数，
其中，
当l＝1时，G是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物，
当1＞1时，至少50％的核苷酸(核苷)是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
m是整数，并且至少为3；
其中，
当m＝3时，X是尿苷(尿嘧啶)或其类似物，
当m＞3时，出现至少3个连续的尿苷(尿嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)类似物；
n是1到40的整数，
其中，
当n＝1时，G是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物，
当n＞1时，至少50％的核苷酸(核苷)是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
ClXmCn，(式(II))
其中：
C是胞苷(胞嘧啶)，尿苷(尿嘧啶)或胞苷(胞嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)的类似物；
X是鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)或上述核苷酸(核苷)的类似物；
l是1到40的整数，
其中，
当l＝1时，C是胞苷(胞嘧啶)或其类似物，
当1＞1时，至少50％的核苷酸(核苷)是胞苷(胞嘧啶)或其类似物；
m是整数，并且至少为3；
其中，
当m＝3时，X是尿苷(尿嘧啶)或其类似物，
当m＞3时，出现至少3个连续的尿苷(尿嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)类似物；
n是1到40的整数，
其中，
当n＝1时，C是胞苷(胞嘧啶)或其类似物，
当n＞1时，至少50％的核苷酸(核苷)是胞苷(胞嘧啶)或其类似物。
可以用作isRNA的式(I)或(II)的核酸可以是相对短的核酸分子，其具有约5至100(但是对于特定实施方案，也可以长于100个核苷酸，例如，多至200个核苷酸)，5至90或5至80个核苷酸，优选长度约5至70，更优选长度约8至60，更优选长度约15至60个核苷酸，更优选20至60，最优选30至60个核苷酸的典型长度。如果本发明的核酸货物复合物的核酸具有例如100个核苷酸的最大长度，则m通常≤98。式(I)的核酸中的核苷酸G的数量由1或n确定。1和n彼此独立地各自为1至40的整数，其中当l或n＝1时G是鸟苷或其类似物，并且当l或n＞1时，至少50％的核苷酸是鸟苷或其类似物。例如，在不暗示任何限制的情况下，当l或n＝4时，Gl或Gn可以是例如GUGU，GGUU，UGUG，UUGG，GUUG，GGGU，GGUG，GUGG，UGGG或GGGG等；当1或n＝5时，G1或Gn可以是，例如，GGGUU，GGUGU，GUGGU，UGGGU，UGGUG，UGUGG，UUGGG，GUGUG，GGGGU，GGGUG，GGUGG，GUGGG，UGGGG，或GGGGG等；在根据本发明的式(I)的核酸中与Xm相邻的核苷酸优选不是尿嘧啶。类似地，根据本发明的式(II)的核酸中的核苷酸C的数目由1或n确定。l和n彼此独立地各自为1至40的整数，其中当l或n＝1时C是胞苷或其类似物，并且当l或n＞1时，至少50％的核苷酸是胞苷或其类似物。例如，在不暗示任何限制的情况下，当l或n＝4时，Cl或Cn可以是例如CUCU，CCUU，UCUC，UUCC，CUUC，CCCU，CCUC，CUCC，UCCC或CCCC等；当l或n＝5时，Cl或Cn可以是，例如，CCCUU，CCUCU，CUCCU，UCCCU，UCCUC，UCUCC，UUCCC，CUCUC，CCCCU，CCCUC，CCUCC，CUCCC，UCCCC，或CCCCC等；在根据本发明的式(II)的核酸中与Xm相邻的核苷酸优选不是尿嘧啶。优选地，对于式(I)，当1或n＞1时，至少60％，70％，80％，90％或甚至100％的核苷酸是如上文所定义的鸟苷或其类似物。在侧翼序列G1和/或Gn中100％的剩余核苷酸(当鸟苷构成少于100％的核苷酸时)是如上文所定义的尿苷或其类似物。还优选地，l和n彼此独立地各自为2至30的整数，更优选为2至20的整数，还更优选为2至15的整数。如果需要，l或n的下限可以变化，并且至少为1，优选至少为2，更优选至少为3，4，5，6，7，8，9或10。该定义相应地适用于式(II)。
根据特别优选的实施方案，可以在本发明的上下文中用作mRNA的根据上述式(I)或(II)中任一项的核酸可以选自包含序列SEQ ID NO：471至554中任一个或由其组成，或来自与这些序列中的任一个具有至少60％，70％，80％，90％或甚至95％序列同一性的序列。在一些实施方案中，所述isRNA选自核酸序列，所述核酸序列包含SEQ ID NO：471至554中的任一个的核算序列或这些序列中的任一个的片段或变体或者由其组成。
根据进一步优选的实施方案，本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA由(III)或(IV)的核酸组成或包含式(III)或(IV)的核酸：
(NuGlXmGnNv)a，(式(III))
其中：
G是鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)或鸟苷(鸟嘌呤)或尿苷(尿嘧啶)的类似物，优选鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
X是鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)，或这些核苷酸的类似物(核苷)，优选尿苷(尿嘧啶)或其类似物；
N是长度为约4至50，优选约4至40，更优选约4至30或4至20个核酸的核酸序列，每个N独立地选自鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)或这些核苷酸(核苷)的类似物；
a为1至20，优选1至15，最优选1至10的整数；
l是1到40的整数，
其中当1＝1时，G是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物，
当1＞1时，这些核苷酸(核苷)中至少50％是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
m是整数，并且至少为3；
其中当m＝3时，X是尿苷(尿嘧啶)或其类似物，和
当m＞3时，出现至少3个连续的尿苷(尿嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)类似物；
n是1到40的整数，
其中当n＝1时，G是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物，
当n＞1时，这些核苷酸(核苷)中至少50％是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
u，v可以彼此独立地为0到50的整数，
优选地，其中当u＝0时，v≥1，或当v＝0时，u≥1；
其中式(III)的核酸分子具有至少50个核苷酸，优选至少100个核苷酸，更优选至少150个核苷酸，甚至更优选至少200个核苷酸，最优选至少250个核苷酸的长度。
(NuClXmCnNv)a，(式(IV))
其中：
C是胞苷(胞嘧啶)，尿苷(尿嘧啶)或胞苷(胞嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)的类似物，优选胞苷(胞嘧啶)或其类似物；
X是鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)，或上述核苷酸(核苷)的类似物，优选尿苷(尿嘧啶)或其类似物；
N各自是彼此独立地长度为约4至50，优选约4至40，更优选约4至30或4至20个核酸的核酸序列，每个N独立地选自鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)或这些核苷酸(核苷)的类似物；
a为1至20，优选1至15，最优选1至10的整数；
1是1到40的整数，
其中当1＝1时，C是胞苷(胞嘧啶)或其类似物，
当l＞1时，这些核苷酸(核苷)中至少50％是胞苷(胞嘧啶)或其类似物；
m是整数，并且至少为3；
其中当m＝3时，X是尿苷(尿嘧啶)或其类似物，
当m＞3时，出现至少3个连续的尿苷(尿嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)类似物；
n是1到40的整数，
其中当n＝1时，C是胞苷(胞嘧啶)或其类似物，
当n＞1时，这些核苷酸(核苷)中至少50％是胞苷(胞嘧啶)或其类似物。
u，v可以彼此独立地为0到50的整数，
优选地，其中当u＝0时，v≥1，或当v＝0时，u≥1；
其中根据本发明的式(V)的核酸分子具有至少50个核苷酸，优选至少100个核苷酸，更优选至少150个核苷酸，甚至更优选至少200个核苷酸，最优选至少250个核苷酸的长度。
对于式(IV)，对于要素N(即Nu和Nv)和X(Xm)给出的任何定义，特别是如上定义的核心结构，以及对于整数a，l，m，n，u和v，相应地类似地适用于式(IV)的要素，其中在式(IV)中，核心结构由ClXmCn定义。边界要素Nu和Nv的定义与上面对Nu和Nv给出的定义相同。
根据非常特别优选的实施方案，核酸分子(优选根据式(III)的免疫刺激性RNA)可选自例如，根据SEQ ID NO：555至563的任何序列或与这些序列中的任一个具有至少60％，70％，80％，90％或甚至95％序列同一性的序列。优选地，如本文所用的isRNA包含SEQ IDNO：555至563中任一个的核酸序列或这些序列中任一个的片段或变体，或由其组成。
在该上下文中，特别优选的是根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016，1055或1056中任一个的免疫刺激性RNA。更优选地，如本文所用的免疫刺激性RNA包含根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016，1055或1056中任一个的核酸序列或这些序列中任一个的片段或变体，或由其组成。甚至更优选地，免疫刺激性RNA包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列与根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016，1055或1056的核酸序列中任一个具有至少60％，70％，80％，90％或甚至95％的序列同一性。
根据特别优选的实施方案，如本文所用的免疫刺激性RNA包含根据SEQ ID NO：433，434，或1014至1016中任一个的核酸序列或这些序列中任何一个的片段或变体，或由其组成。甚至更优选地，免疫刺激性RNA包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列与根据SEQID NO：433，434，或1014至1016中任一个的核酸序列具有至少60％，70％，80％，90％或甚至95％的序列同一性。
根据另一个非常特别优选的实施方案，根据式(IV)的核酸分子可选自例如根据SEQ ID NO：433，434，1014至1016的任何序列或与这些序列中的任一个具有至少60％，70％，80％，90％或甚至95％序列同一性的序列。优选地，如本文所用的isRNA包含根据SEQID NO：433，434，1014至1016的核酸序列或这些序列中任一个的片段或变体，或由其组成。
此外，如果适用，本文公开的在编码RNA的背景下的所有修饰也可以应用于非编码RNA。
如本文所述使用的isRNA可以裸露施用而不与任何其他媒剂，载体，转染剂或复合剂结合。
在一个优选的实施方案中，用于治疗或预防如本文所述的肿瘤和/或癌症疾病的isRNA与其他化合物一起配制，用于提高isRNA的转染效率和/或免疫刺激性质。此类化合物在本文中也称为载体，媒剂，转染剂或复合剂。优选地，如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA与阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与阳离子或聚阳离子聚合物，阳离子或聚阳离子肽或蛋白质，例如鱼精蛋白，阳离子或聚阳离子多糖和/或阳离子或聚阳离子脂质复合。根据特别优选的实施方案，用于治疗或预防如本文所述的肿瘤和/或癌症疾病的isRNA与阳离子或聚阳离子化合物复合，其中阳离子或聚阳离子化合物是聚合物载体。
这种阳离子或聚阳离子聚合物，阳离子或聚阳离子肽或蛋白质，阳离子或聚阳离子多糖，阳离子或聚阳离子脂质或聚合物载体可用作本发明上下文中的核酸(特别是如本文所述使用的isRNA)的载体，媒剂，转染剂或复合剂。因此，在本发明的另一个实施方案中，优选的是，isRNA与阳离子或聚阳离子化合物或聚合物载体缔合或复合，任选地以选自约6∶1(w/w)至约0.25∶1(w/w)的重量比，更优选约5∶1(w/w)至约0.5∶1(w/w)，甚至更优选约4∶1(w/w)至约1∶1(w/w)或约3∶1(w/w)至约1∶1(w/w)，最优选约3∶1(w/w)至约2∶1(w/w)的RNA：阳离子或聚阳离子化合物和/或聚合物载体重量比；或者任选地，RNA与阳离子或聚阳离子化合物和/或聚合物载体的氮/磷比在约0.1至10，优选在约0.3至4或0.3至1的范围内，并且最优选在约0.5至1或0.7至1的范围内，甚至最优选约0.3至0.9或0.5至0.9的范围内。
本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA与阳离子或聚阳离子化合物的比可以基于所有这些组分的氮/磷比(N/P比)计算。在本发明的上下文中，关于本发明的疫苗中包含的核酸：阳离子或聚阳离子肽的比例，N/P比优选在约0.01至4，0.01至2，0.1至2或0.1至1.5的范围内，最优选在约0.1至1的范围内。备选地，isRNA与所述阳离子或聚阳离子化合物优选阳离子或聚阳离子肽或蛋白质的N/P比率为约0.1至10，包括约0.3至4，约0.5至2，约0.7至2，以及约0.7至1.5。这种N/P比优选设计成在体内提供良好的转染性质并转运到细胞膜中和通过细胞膜。优选地，为此目的，本文使用的阳离子或聚阳离子化合物和/或聚合物载体基于肽序列。
在本文中特别优选的阳离子或聚阳离子化合物包括鱼精蛋白，nucleoline，精胺或亚精胺，或其他阳离子肽或蛋白质，例如聚-L-赖氨酸(PLL)，聚精氨酸，碱性多肽，细胞穿透肽(CPP)，包括HIV结合肽，HIV-1Tat(HIV)，Tat衍生肽，穿膜肽，VP22衍生肽或类似肽，HSVVP22(单纯疱疹)，MAP，KALA或蛋白转导结构域(PTD)，PpT620，富含脯氨酸的肽，富含精氨酸的肽，富含赖氨酸的肽，MPG-肽，Pep-1，L-寡聚体，降钙素肽，Antennapedia衍生肽(特别是来自Drosophila antennapedia)，pAntp，pIsl，FGF，乳铁蛋白，Transportan，Buforin-2，Bac715-24，SynB，SynB(1)，pVEC，hCT衍生肽，SAP或组蛋白。在这方面，鱼精蛋白是特别优选的。
另外，优选的阳离子或聚阳离子蛋白质或肽可选自具有以下总式(V)的以下蛋白质或肽：
(Arg)1；(Lys)m；(His)n；(Om)o；(Xaa)x，(式(V)
其中l+m+n+o+x＝8-15，并且1，m，n或o彼此独立地可以是选自0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15中的任何数字，条件是Arg，Lys，His和Orn的总含量占寡肽的所有氨基酸的至少50％；以及Xaa可以是选自天然(＝天然存在的)或非天然氨基酸的任何氨基酸，Arg，Lys，His或Orn除外；以及x可以是选自0，1，2，3或4的任何数字，条件是Xaa的总含量不超过寡肽的所有氨基酸的50％。在上下文中特别优选的阳离子肽是例如Arg7，Arg8，Arg9，H3R9，R9H3，H3R9H3，YSSR9SSY，(RKH)4，Y(RKH)2R等。在上下文中，WO 2009/030481的公开内容通过引用并入本文。
根据本发明使用的聚合物载体可以是由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体。
根据另一个特别优选的实施方案，聚合物载体的阳离子或聚阳离子肽或蛋白质(具有如上所示的经验总和式(V)并且包含或另外被修饰以包含至少一个-SH部分)可以(不限制于此)选自由通式Arg7(也称为R7)，Arg9(也称为R9)，Arg12(也称为R12)组成的亚组。
根据另一个特别优选的实施方案，聚合物载体的阳离子或聚阳离子肽或蛋白质(当根据如上所示的式{(Arg)1；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x}(式(V))定义时并且包含或另外被修饰以包含至少一个-SH部分))可以(不限制于此)选自子式(Va)：
{(Arg)1；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa′)x(Cys)y} 式(Va)
其中(Arg)1；(Lys)m；(His)n；(Om)o；和x如本文所定义，Xaa′是选自天然(＝天然存在的)或非天然氨基酸的任何氨基酸(Arg，Lys，His，Orn或Cys除外)，y是选自0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21-30，31-40，41-50，51-60，61-70，71-80和81-90的任何数字，条件是Arg(精氨酸)，Lys(赖氨酸)，His(组氨酸)和Orn(鸟氨酸)的总含量占寡肽的所有氨基酸的至少10％。
该实施方案可适用于这样的情况，其中例如当根据如上所示的经验式(Arg)1；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x(式(V))定义时，聚合物载体的阳离子或聚阳离子肽或蛋白质包含以上含义的-SH部分或至少一个半胱氨酸已经被修饰为以上含义的-SH部分，使得作为阳离子组分的阳离子或聚阳离子肽带有能够与聚合物载体的其它组分形成二硫键的至少一个半胱氨酸。示例可包括以下任何序列：
Cys(Arg7)(SEQ ID NO：581)，Cys(Arg8)(SEQ ID NO：582)，Cys(Arg9)(SEQ ID NO：583)，Cys(Arg10)(SEQ ID NO：584)，Cys(Arg11)(SEQ ID NO：585)，Cys(Arg12)(SEQ ID NO：580)(SEQ ID NO：571)，Cys(Arg13)(SEQ ID NO：586)，Cys(Arg14)(SEQ ID NO：587)，Cys(Arg15)(SEQ ID NO：588)，Cys(Arg16)(SEQ ID NO：589)，Cys(Arg17)(SEQ ID NO：590)，Cys(Arg18)(SEQ ID NO：591)，Cys(Arg19)(SEQ ID NO：592)，Cys(Arg20)(SEQ ID NO：593)。
根据另一个特别优选的实施方案，聚合物载体的阳离子或聚阳离子肽或蛋白质(当根据如上所示的式{(Arg)l；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x} (式(V))定义时)可以(不限制于此)选自子式(Vb)：
Cys1{(Arg)1；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x}Cys2 (式(Vb))
其中经验式{(Arg)l；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x}(式(V))如本文所定义并且形成根据(半经验)式(V)的氨基酸序列的核心，并且其中Cys1和Cys2是(Arg)1；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x的近端或末端的半胱氨酸。实例可包括侧接两个Cys和以下序列的任何上述序列：
Cys(Arg7)Cys(SEQ ID NO：566)，Cys(Arg8)Cys(SEQ ID NO：567)，Cys(Arg9)Cys(SEQ ID NO：568)，Cys(Arg10)Cys(SEQ ID NO：569，Cys(Arg11)Cys(SEQ ID NO：570)，Cys(Arg12)Cys(SEQ ID NO：579)，Cys(Arg13)Cys(SEQ ID NO：571)，Cys(Arg14)Cys(SEQ ID NO：572)，Cys(Arg15)Cys(SEQ ID NO：573)，Cys(Arg16)Cys(SEQ ID NO：574)，Cys(Arg17)Cys(SEQ ID NO：575)，Cys(Arg18)Cys(SEQ ID NO：576)，Cys(Arg19)Cys(SEQ ID NO：577)，Cys(Arg20)Cys(SEQ ID NO：578)。
该实施方案可适用于这样的情况，其中例如当根据如上所示的经验式(Arg)1；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x(式(V))定义时，聚合物载体的阳离子或聚阳离子肽或蛋白质的至少两个半胱氨酸已经被修饰为以上含义的-SH部分，使得作为阳离子组分的本发明聚合物载体货物复合物的阳离子或聚阳离子肽带有能够与聚合物载体的其它组分形成二硫键的至少两个(末端)半胱氨酸。
在优选的实施方案中，聚合物载体包含肽CysArg12Cys(CRRRRRRRRRRRRC)(SEQ IDNO：579)或CysArg12(CRRRRRRRRRRRR)(SEQ ID NO：580)，或由其组成。在一些实施方案中，聚合物载体化合物由(R12C)-(R12C)二聚体(Arg12Cys-CysArg12二聚体)形成，包含其或由其组成，其中二聚体(CR12(CysArg12；SEQ ID NO：580))中的各个肽单体通过-SH基团连接。在进一步优选的实施方案中，聚合物载体化合物由(WR12C)-(WR12C)二聚体(TrpArg12Cys-CysArg12Trp二聚体)形成，包含其或由其组成，其中二聚体(WR12C(TrpArg12Cys；SEQ IDNO：1017))中的各个肽单体通过-SH基团连接。根据某些实施方案，聚合物载体化合物由(CR12)-(CR12C)-(CR12)三聚体(Arg12Cys-CysArg12Cys-CysArg12三聚体)形成，包含其或由其组成，其中二聚体(CR12C(CysArg12Cys；SEQ ID NO：579)中的各个肽单体和CR12(CysArg12；SEQ ID NO：580))通过-SH基团连接。在具体的实施方案中，聚合物载体由(R12C)-(R12C)二聚体，(WR12C)-(WR12C)二聚体，或(CRl2)-(CR12C)-(CR12)三聚体组成，其中二聚体(例如(WR12C))中的单个阳离子肽(元件)或三聚体(例如(CR12))通过其半胱氨酸残基的-SH基团连接。
根据第二备选方案，聚合物载体的至少一种阳离子(或聚阳离子)组分可以选自例如在此上下文中适用的任何(非肽)阳离子或聚阳离子聚合物，条件是该(非肽)阳离子或聚阳离子聚合物表现出或被改性以显示至少一个-SH-部分，其提供连接阳离子或聚阳离子聚合物与本文定义的聚合物载体的另一组分的二硫键。因此，同样如本文所定义，聚合物载体可包含相同或不同的阳离子或聚阳离子聚合物。
在聚合物载体的阳离子组分包含(非肽)阳离子或聚阳离子聚合物的特定情况下，当与阳离子聚合物的组分的总电荷相比时(非肽)阳离子或聚阳离子聚合物的阳离子性质可以根据其阳离子电荷含量来确定。优选地，在如本文定义的(生理)pH下阳离子聚合物中的阳离子电荷含量为至少10％，20％，或30％，优选至少40％，更优选至少50％，60％或70％，但还优选至少80％，90％，或甚至95％，96％，97％，98％，99％或100％，最优选至少30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％，95％，96％，97％，98％，99％或100％，或可以在约10％至90％的范围内，更优选在约30％至约30％的范围内，甚至优选在约50％至100％的范围内，例如50％，60％，70％，80％，90％或100％，或在由前述任何两个值形成的范围内，条件是在整个阳离子聚合物中的所有电荷(如本文所定义的(生理)pH下的正电荷和负电荷)的含量是100％。
优选地，聚合物载体的(非肽)阳离子组分代表阳离子或聚阳离子聚合物，通常表现出约0.1或0.5kDa至约100kDa，优选约1kDa至约75kDa，约5kDa至约50kDa，甚至更优选约5kDa至约30kDa的分子量，或分子量约10kDa至约50kDa，甚至更优选约10kDa至约30kDa的分子量。另外，(非肽)阳离子或聚阳离子聚合物通常表现出至少一个-SH-部分，其能够在与如本文所定义的其它阳离子组分或聚合物载体的其他组分缩合后形成二硫键。
在上文中，聚合物载体的(非肽)阳离子组分可选自丙烯酸酯，经修饰的丙烯酸酯，例如pDMAEMA(聚(二甲基氨基乙基甲基丙烯酸酯))，壳聚糖，氮丙啶或2-乙基-2-噁唑啉(形成低聚乙烯亚胺或经修饰的低聚乙烯亚胺)，通过双丙烯酸酯与胺反应得到的聚合物(形成低聚β氨基酯或聚酰胺基胺)，或其它聚合物例如聚酯，聚碳酸酯等。这些(非肽)阳离子或聚阳离子聚合物的每个分子通常表现出至少一个-SH-部分，其中这些至少一个-SH-部分可以通过化学修饰引入(非肽)阳离子或聚阳离子聚合物中，例如使用亚氨基硫杂环戊烷，3-硫代丙酸或引入含有氨基酸的-SH-部分，例如半胱氨酸或任何其他(经修饰的)氨基酸。这些-SH-部分优选如上所定义。
二硫键交联的阳离子组分可以彼此相同或不同。聚合物载体还可含有其他组分。还特别优选的是，根据本发明使用的聚合物载体包含通过如本文所述的二硫键交联的以下项的混合物：阳离子肽、蛋白质或聚合物和任选的如本文所定义的其他组分。在该上下文中，WO 2012/013326的公开内容通过引用并入本文。
在本文中，通过二硫键交联形成聚合物载体基础的阳离子组分通常选自适合于该目的的任何合适的阳离子或聚阳离子肽，蛋白质或聚合物，特别是能够复合如本文所述使用的isRNA从而优选缩合isRNA的任何阳离子或聚阳离子的肽，蛋白质或聚合物。阳离子或聚阳离子肽，蛋白质或聚合物优选是线性分子。然而，也可以使用支链的阳离子或聚阳离子肽，蛋白质或聚合物。
可用于复合如本文所述使用的isRNA的聚合物载体的每个二硫键交联的阳离子或聚阳离子蛋白质，肽或聚合物含有至少一个-SH部分，最优选至少一个半胱氨酸残基或任何表现出-SH部分的其他化学基团，其能够在与作为如本文所述的聚合物载体的阳离子组分的至少一个另外的阳离子或聚阳离子蛋白质，肽或聚合物缩合后形成二硫键。
如上所定义，可以用于复合如本文所述使用的isRNA的聚合物载体可以通过二硫键交联的阳离子(或聚阳离子)组分形成。
与这种聚合物载体复合的核酸(例如本文所述使用的isRNA)复合物，在本文中也称为“聚合物载体货物复合物”。
在本文中，特别优选的是本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA与如上定义的聚合物载体复合。优选地，isRNA(例如包含根据式I至IV中任一个的RNA序列，更优选包含根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016中任一个的RNA序列，或这些序列中任一个的片段或变体，最优选包含根据SEQ ID NO：433，434或1014至1016中任一个的RNA序列，或这些序列中任一个的片段或变体)与包含根据式V，Va或Vb的二硫键交联的肽的或由其形成的聚合物载体(优选由Cys(Arg12)Cys或Cys(Arg12)形成的聚合物载体)复合。这种特别优选的实施方案在本文中也称为“RNAdjuvant”。
在另一个具体实施方案中，可用于复合如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA的聚合物载体可选自根据通式(VI)的聚合物载体分子：
L-P1-S-[S-P2-S]n-S-P3-L 式(VI)
其中，
P1和P3彼此不同或相同，代表线性或支链的亲水聚合物链，每个P1和P3具有至少一个-SH-部分，能够在与组分P2缩合后形成二硫键，或者备选地与(AA)，(AA)x，或[(AA)x]z一起形成二硫键(如果这些组分用作P1和P2或P3和P2之间的连接子)和/或与其他组分(例如(AA)，(AA)x，[(AA)x]z或L)一起形成二硫键，线性或支链的亲水聚合物链彼此独立地选自聚乙二醇(PEG)，聚-N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺，聚-2-(甲基丙烯酰氧基)乙基磷酰胆碱，聚(羟烷基L-天冬酰胺)，聚(2-(甲基丙烯酰氧基)乙基磷酰胆碱)，羟乙基淀粉或聚(羟烷基L-谷氨酰胺)，其中亲水聚合物链的分子量为约1kDa至约100kDa，优选约2kDa至约25kDa；或者更优选约2kDa至约10kDa，例如约5kDa至约25kDa或5kDa至约10kDa；
P2是阳离子或聚阳离子肽或蛋白质(例如，如针对由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体所定义的)，优选长度为约3至约100个氨基酸，更优选长度为约3至约50个氨基酸，甚至更优选长度为约3至约25个氨基酸，例如长度为约3至10，5至15，10至20或15至25个氨基酸，更优选长度为约5至约20，甚至更优选长度为约10至约20个氨基酸；或者
是阳离子或聚阳离子聚合物(例如，如针对由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体所定义的)，通常具有约0.5kDa至约30kDa的分子量，包括约1kDa至约20kDa的分子量，甚至更优选约1.5kDa至约10kDa的分子量，或约0.5kDa至约100kDa的分子量，包括约10kDa至约50kDa的分子量，甚至更优选约10kDa至约30kDa的分子量；
每个P2表现出至少两个-SH-部分，能够在与其他组分P2或组分P1和/或P3缩合后形成二硫键，或者备选地与其他组分(例如(AA)，(AA)x，或[(AA)x]z)缩合后形成二硫键；
-S-S-是(可逆的)二硫键(为了更好的可读性省略括号)，其中S优选代表硫或带有-SH的部分，其形成(可逆的)二硫键。(可逆的)二硫键优选通过P1和P2，P2和P2，或P2和P3或任选的本文定义的其他组分(例如L，(AA)，(AA)x，[(AA)x]z等)的-SH-部分的缩合形成；-SH-部分可以是这些组分结构的一部分或通过如下定义的修饰加入；
L是任选的配体，其可以存在或不存在，并且可以独立地选自RGD，转铁蛋白，叶酸，信号肽或信号序列，定位信号或序列，核定位信号或序列(NLS)，抗体，细胞穿透肽(例如TAT或KALA)，受体配体(例如细胞因子，激素，生长因子等)，小分子(例如碳水化合物例如甘露糖或半乳糖或合成配体)，小分子激动剂，抑制剂或受体拮抗剂(例如RGD肽模拟物类似物)，或本文定义的任何其他蛋白质等；
n是整数，通常选自约1至50的范围，优选约1，2或3至30的范围，更优选约1，2，3，4或5至25的范围，或约1，2，3，4或5至20的范围，或约1，2，3，4或5至15的范围，或约1，2，3，4或5至10的范围，包括例如约4至9，4至10，3至20，4至20，5至20或10至20的范围，或约3至15，4至15，5至15或10至15的范围，或约6至11或7至10的范围。最优选地，n在约1，2，3，4或5至10的范围，更优选在约1，2，3或4至9的范围，在约1，2，3或4至8的范围，或约1，2或3至7的范围。
在该上下文中，WO 2011/026641和WO 2012/116811的公开内容通过引用并入本文。亲水性聚合物P1和P3中的每一种通常表现出至少一个-SH-部分，其中至少一个-SH-部分在与组分P2或与组分(AA)或(AA)x(如果用作下面定义的P1和P2或P3和P2之间的连接器)以及任选地与其他组分(例如L和/或(AA)或(AA)x)(例如如果含有两个或更多个-SH-部分)反应后能够形成二硫键。以上通式中的以下子式“P1-S-S-P2”和“P2-S-S-P3”，其中S，P1和P3中的任何一个如本文所定义，通常表示以下情况：其中亲水聚合物P1和P3的一个-SH-部分与上述通式的组分P2的一个-SH-部分缩合，其中这些-SH-部分的两个硫形成二硫键-S-S-。这些-SH-部分通常例如通过内部半胱氨酸或任何其他(经修饰的)氨基酸或带有-SH-部分的化合物由亲水性聚合物P1和P3中的每一种提供。因此，如果-SH-部分由半胱氨酸提供，子式“P1-S-S-P2”和“P2-S-S-P3”也可以写为“P1-Cys-Cys-P2”和“P2-Cys-Cys-P3”，其中术语Cys-Cys代表通过二硫键而不是通过肽键偶联的两个半胱氨酸。在这种情况下，这些式中的术语“-S-S-”也可以写成“-S-Cys”，“-Cys-S”或“-Cys-Cys-”。在该上下文中，术语“-Cys-Cys-”不代表肽键，而是通过它们的-SH-部分形成二硫键的两个半胱氨酸的连接。因此，术语“-Cys-Cys-”通常也可理解为“-(Cys-S)-(S-Cys)-”，其中在该特定情况下，S表示半胱氨酸的-SH-部分的硫。同样，术语“-S-Cys”和“-Cys-S”表示含有-SH的部分和半胱氨酸之间的二硫键，其也可以写成“-S-(S-Cys)”和“-(Cvs-S)-S”。或者，亲水性聚合物P1和P3可以优选通过与带有-SH部分的化合物的化学反应用-SH部分修饰，使得亲水性聚合物P1和P3中的每一个带有至少一个这样的-SH部分。这种带有-SH部分的化合物可以是例如(另外的)半胱氨酸或任何其他(经修饰的)携带-SH部分的氨基酸。这种化合物也可以是任何非氨基化合物或部分，其含有或允许将-SH部分引入如本文所定义的亲水聚合物P1和P3中。这些非氨基化合物可以通过以下连接至聚合物载体的亲水聚合物P1和P3：化学反应或化合物的结合(例如结合3-硫代丙酸或硫代乙酰胺)，酰胺形成(例如羧酸，磺酸，胺等)，迈克尔加成(例如马来酰亚胺部分，不饱和羰基等)，点击化学(例如叠氮化物或炔烃)，烯烃/炔烃转移(例如烯烃或炔烃)，亚胺或腙形成(醛或酮，肼，羟胺，胺)，复合反应(抗生物素蛋白，生物素，蛋白G)，或连接至允许Sn型取代反应的组分(例如卤代烷，硫醇，醇，胺，肼，酰肼，磺酸酯，氧鳞盐)或其它可用于连接其它组分的化学部分。在本文中，特别优选的PEG衍生物是α-甲氧基-ω-巯基聚(乙二醇)。在每种情况下，(例如，半胱氨酸或任何其他(经修饰的)氨基酸或化合物的)SH部分可以存在于亲水性聚合物P1和P3的末端或内部任何位置。如本文所定义，亲水性聚合物P1和P3中的每一种通常优选在一个末端显示至少一个-SH-部分，但也可以含有两个或甚至更多个-SH-部分，其可以用于另外连接如在本文中所定义的其他组分，优选其他功能性肽或蛋白质例如配体，氨基酸组分(AA)或(AA)x，抗体，细胞穿透肽或增强子肽(如TAT，KALA)等。
如上所定义，配体(L)可任选地用于根据通式(VI)的聚合物载体分子中，例如指导本发明的载体聚合物及其整个“货物”(例如用于治疗或预防如本文所述的肿瘤和/或癌症的isRNA)进入特定细胞。它们可以彼此独立地选自RGD，转铁蛋白，叶酸，信号肽或信号序列，定位信号或序列，核定位信号或序列(NLS)，抗体，细胞穿透肽(CPP)(例如TAT，KALA)，受体配体(例如细胞因子，激素，生长因子等)，小分子(例如碳水化合物例如甘露糖或半乳糖或合成配体)，小分子激动剂，抑制剂或受体拮抗剂(例如RGD肽模拟类似物)或如下进一步定义的任何这种分子，等等。尤其优选的是细胞细胞穿透肽(CPP)，它诱导核内体中pH介导的构象变化，并通过插入脂质体的脂质层，使本发明聚合物载体(与核酸复合)从核内体中更好地释放。用于运输的此类所谓的CPP或阳离子肽可包括但不限于鱼精蛋白，核苷，精胺或亚精胺，聚-L-赖氨酸(PLL)，碱性多肽，聚精氨酸，嵌合CPP，例如Transportan，或MPG肽，HIV结合肽，Tat，HIV-1Tat(HIV)，Tat衍生肽，寡聚精氨酸，穿透蛋白家族成员，例如穿膜肽，Antennapedia衍生的肽(特别是来自Drosophila antenpedia)，pAntp，pIsl等，，抗微生物衍生的CPP，例如，Buforin-2，Bac715-24，SynB，SynB(1)，pVEC，hCT衍生肽，SAP，MAP，PpTG20，富含脯氨酸的肽，Loligomers，富含精氨酸的肽，降钙素肽，FGF，乳铁蛋白，聚-L-赖氨酸，聚精氨酸，组蛋白，VP22衍生肽或类似肽，瘟病毒属Erns，HSV，VP22(单纯疱疹)，MAP，KALA或蛋白质转导结构域(PTD，PpT620，富含脯氨酸的肽，富含精氨酸的肽，富含赖氨酸的肽，Pep-1，L-低聚物，降钙素肽等。在本文中特别优选的是作为靶抗原呈递细胞(其通常在其细胞膜上携带甘露糖受体)的配体的甘露糖。在本发明的另一个优选实施方案中，作为任选配体的半乳糖可用于靶向肝细胞。这些配体可以通过如下定义的可逆二硫键或通过任何其他可能的化学连接(例如，酰胺形成(例如羧酸，磺酸，胺等)，迈克尔加成(例如马来酰亚胺部分，α，β不饱和羰基等)，点击化学(例如叠氮化物或炔烃)，烯烃/炔烃转移(例如烯烃或炔烃)，亚胺或腙形成(醛或酮，肼，羟胺，胺)，复合反应(抗生物素蛋白，生物素，蛋白G))连接至组分P1和/或P3或连接至允许Sn型取代反应的组分(例如卤代烷，硫醇，醇，胺，肼，酰肼，磺酸酯，氧鳞盐)或其它可用于连接其它组分的化学部分。
在本发明的式(VI)的上下文中，组分P1和P3代表线性或支链的亲水性聚合物链，其含有至少一个-SH-部分，每个P1和P3彼此独立地选自例如聚乙二醇(PEG)，聚-N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺，聚-2-(甲基丙烯酰氧基)乙基磷酰胆碱，聚(羟烷基L-天冬酰胺)或聚(羟烷基L-谷氨酰胺)。P1和P3可以彼此相同或不同。优选地，亲水性聚合物P1和P3各自的分子量为约1kDa至约100kDa，优选约1kDa至约75kDa，更优选约5kDa至约50kDa，甚至更优选约5kDa至大约25kDa。另外地，亲水性聚合物P1和P3中的每一种通常表现出至少一个-SH-部分，其中至少一个-SH-部分在与组分P2或与组分(AA)或(AA)x(如果用作下面定义的P1和P2或P3和P2之间的连接器)以及任选地与其他组分(例如L和/或(AA)或(AA)x)(例如如果含有两个或更多个-SH-部分)反应后能够形成二硫键。以上通式(VI)中(为了更好的可读性省略了括号)的以下子式“P1-S-S-P2”和“P2-S-S-P3”，其中S，P1和P3中的任何一个如本文所定义，通常表示以下情况：其中亲水聚合物P1和P3的一个-SH-部分与以上通式(VI)的组分P2的一个-SH-部分缩合，其中这些-SH-部分的两个硫形成式(VI)中如本文所定义的二硫键-S-S-。这些-SH-部分通常例如通过内部半胱氨酸或任何其他(经修饰的)氨基酸或带有-SH-部分的化合物由亲水性聚合物P1和P3中的每一种提供。因此，如果-SH-部分由半胱氨酸提供，子式“P1-S-S-P2”和“P2-S-S-P3”也可以写为“P1-Cys-Cys-P2”和“P2-Cys-Cys-P3”，其中术语Cys-Cys代表通过二硫键而不是通过肽键偶联的两个半胱氨酸。在这种情况下，这些式中的术语“-S-S-”也可以写成“-S-Cys”，“-Cys-S”或“-Cys-Cys-”。在该上下文中，术语“-Cys-Cys-”不代表肽键，而是通过它们的-SH-部分形成二硫键的两个半胱氨酸的连接。因此，术语“-Cys-Cys-”通常也可理解为“-(Cys-S)-(S-Cys)-”，其中在该特定情况下，S表示半胱氨酸的-SH-部分的硫。同样，术语“-S-Cys”和“-Cys-S”表示含有-SH的部分和半胱氨酸之间的二硫键，其也可以写成“-S-(S-Cys)”和“-(Cys-S)-S”。或者，亲水性聚合物P1和P3可以优选通过与带有-SH部分的化合物的化学反应用-SH部分修饰，使得亲水性聚合物P1和P3中的每一个带有至少一个这样的-SH部分。这种带有-SH部分的化合物可以是例如(另外的)半胱氨酸或任何其他(经修饰的)携带-SH部分的氨基酸。这种化合物也可以是任何非氨基化合物或部分，其含有或允许将-SH部分引入如本文所定义的亲水聚合物P1和P3中。这些非氨基化合物可以通过以下连接至根据本发明的聚合物载体的式(VI)的亲水聚合物P1和P3：化学反应或化合物的结合(例如结合3-硫代丙酸或硫代乙酰胺)，酰胺形成(例如羧酸，磺酸，胺等)，迈克尔加成(例如马来酰亚胺部分，α，β不饱和羰基等)，点击化学(例如叠氮化物或炔烃)，烯烃/炔烃转移(例如烯烃或炔烃)，亚胺或腙形成(醛或酮，肼，羟胺，胺)，复合反应(抗生物素蛋白，生物素，蛋白G)，或连接至允许Sn型取代反应的组分(例如卤代烷，硫醇，醇，胺，肼，酰肼，磺酸酯，氧鳞盐)或其它可用于连接其它组分的化学部分。在本文中，特别优选的PEG衍生物是α-甲氧基-ω-巯基聚(乙二醇)。在每种情况下，(例如，半胱氨酸或任何其他(经修饰的)氨基酸或化合物的)SH部分可以存在于亲水性聚合物P1和P3的末端或内部任何位置。如本文所定义，亲水性聚合物P1和P3中的每一种通常优选在一个末端显示至少一个-SH-部分，但也可以含有两个或甚至更多个-SH-部分，其可以用于另外连接如在本文中所定义的其他组分，优选其他功能性肽或蛋白质例如配体，氨基酸组分(AA)或(AA)x，抗体，细胞穿透肽或增强子肽(如TAT，KALA)等。
根据一个优选的备选方案，此类其他功能性肽或蛋白质可包含所谓的细胞穿透肽(CPP)或阳离子肽用于运输。尤其优选的是CPP，它诱导核内体中pH介导的构象变化，并通过插入脂质体的脂质层，使本发明聚合物载体(与核酸复合)从核内体中更好地释放。用于运输的此类细胞穿透肽(CPP)或阳离子肽可包括但不限于鱼精蛋白，核苷，精胺或亚精胺，聚-L-赖氨酸(PLL)，碱性多肽，聚精氨酸，嵌合CPP，例如Transportan，或MPG肽，HIV结合肽，Tat，HIV-1Tat(HIV)，Tat衍生肽，寡聚精氨酸，穿透蛋白家族成员，例如穿膜肽，Antennapedia衍生的肽(特别是来自Drosophila antenpedia)，pAntp，pIsl等，抗微生物衍生的CPP，例如，Buforin-2，Bac715-24，SynB，SynB(1)，pVEC，hCT衍生肽，SAP，MAP，PpTG20，富含脯氨酸的肽，Loligomers，富含精氨酸的肽，降钙素肽，FGF，乳铁蛋白，聚-L-赖氨酸，聚精氨酸，组蛋白，VP22衍生肽或类似肽，瘟病毒属Erns，HSV，VP22(单纯疱疹)，MAP，KALA或蛋白质转导结构域(PTD，PpT620，富含脯氨酸的肽，富含精氨酸的肽，富含赖氨酸的肽，Pep-1，L-低聚物，降钙素肽等。
根据本发明的另一个优选实施方案，根据本发明使用的聚合物载体的式(VI)的亲水聚合物P1和P3中的每一种还可以含有至少一个另外的官能部分(其允许连接如本文所定义的其他组分(例如如上定义的配体))或官能团(其允许通过以下连接其它组分，例如酰胺形成(例如羧酸，磺酸，胺等)，迈克尔加成(例如马来酰亚胺部分，不饱和羰基等)，点击化学(例如叠氮化物或炔烃)，烯烃/炔烃转移(例如烯烃或炔烃)，亚胺或腙形成(醛或酮，肼，羟胺，胺)，复合反应(抗生物素蛋白，生物素，蛋白G)，或连接允许Sn型取代反应的组分(例如卤代烷，硫醇，醇，胺，肼，酰肼，磺酸酯，氧鳞盐))或其它可用于连接其它组分的化学部分。其他官能部分可包含如本文所定义的氨基酸组分(AA)或(AA)x，其中(AA)优选为如上定义的氨基组分。在上文中，x优选为整数，并且可以选自约1至100的范围，优选约1至50的范围，更优选1至30，甚至更优选选自包含1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15-30的数字(例如约1到30的范围，约1到15的范围)，或选自包含1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15的数字，或可以选自由上述任何两个值形成的范围。最优选地，x是1。这种氨基酸组分(AA)或(AA)x可以包含在根据上式(VI)的本发明聚合物载体的每个部分中，因此可以连接到根据式(VI)的聚合物载体的所有组分上。特别优选氨基酸组分(AA)或(AA)x作为聚合物载体的式(VI)内的重复组分[S-P2-S]n的配体或部分存在。
在聚合物载体的整个式(VI)的上下文中，可以优选定义如下：
L-p1-S-[Cys-P2-Cys]n-S-P3-L
其中L，P1，P2，P3和n如本文所定义，S是硫，并且每个Cys为二硫键提供一个-SH-部分。
根据具体实施方案，如上定义的根据式(VI)的聚合物载体可包含至少一个如上定义的氨基酸组分(AA)或(AA)x。这种氨基酸组分(AA)或(AA)x可以包含在根据上式(VI)的本发明聚合物载体的每个部分中，因此可以连接到根据式(VI)的聚合物载体的所有组分上。特别优选氨基酸组分(AA)或(AA)x作为聚合物载体的式(VI)内的重复组分[S-P2-S]n的配体或部分存在。氨基酸组分(AA)或(AA)x优选含有或侧接(例如末端侧接)至少一个含-SH的部分，其允许通过二硫键将该组分(AA)或(AA)x引入根据本文定义的式(VI)的聚合物载体中。这种含-SH的部分可以是任何含-SH的部分(或者，当然，也可以是二硫键的一个硫)，例如半胱氨酸残基。在含-SH的部分代表半胱氨酸的特定情况下，氨基酸组分(AA)x也可以读作-Cys-(AA)x-或-Cys-(AA)x-Cys-，其中Cys代表半胱氨酸并为二硫键提供必需的-SH-部分。还可以使用如上对组分P1，P2或P3所示的任何修饰或反应将含-SH部分引入氨基酸组分(AA)x中。在氨基酸组分(AA)x与根据式(VI)的聚合物载体的两个组分连接的特定情况下，优选(AA)或(AA)x含有至少两个-SH-部分，例如优选在其末端含有至少两个半胱氨酸。如果(AA)或(AA)x是重复组分[S-P2-S]n的一部分，则这是特别优选的。备选地，通过任何化学上可能的加成反应，将氨基酸组分(AA)或(AA)x引入根据本文定义的式(VI)的聚合物载体中。因此，氨基酸组分(AA)或(AA)x含有至少一个另外的官能部分，其允许将其连接到如本文所定义的另外的组分，例如组分P1或P3，P2，L或另外的氨基酸组分(AA)或(AA)x等。这些官能部分可以选自允许例如通过酰胺形成(例如羧酸，磺酸，胺等)，迈克尔加成(例如马来酰亚胺部分，α，β不饱和羰基等)，点击化学(例如叠氮化物或炔烃)，烯烃/炔烃转移(例如烯烃或炔烃)，亚胺或腙形成(醛或酮，肼，羟胺，胺)，复合反应(抗生物素蛋白，生物素，蛋白G))连接其它组分的官能团(例如，如本文所定义的官能团)或允许连接允许Sn型取代反应的组分(例如卤代烷，硫醇，醇，胺，肼，酰肼，磺酸酯，氧鳞盐)的官能团，或选自其它可用于连接其它组分的化学部分。
式(VI)的聚合物载体中的氨基酸组分(AA)或(AA)x也可以作为混合的重复氨基酸组分[(AA)x]z出现，其中氨基酸组分(AA)或(AA)x的数目进一步由整数z定义。在本文中，z可以选自约1至30的范围，优选约1至15的范围，更优选1至10或1至5，甚至更优选选自1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15的数字，或可以选自由前述值中的任何两个形成的范围。
根据具体且特别优选的备选方案，氨基酸组分(AA)或(AA)x(优选书写为S-(AA)x-S或[S-(AA)x-S])可用于修饰组分P2，特别是上述式(VI)的聚合物载体的重复组分[S-P2-S]n中组分S-P2-S的含量。这可以在根据式(VI)的整个聚合物载体的上下文下例如通过以下式(VIa)表示：
L-P1-S-{[S-P2-S]a[S-(AA)x-S]b}-S-P3-L，
其中x，S，L，AA，P1，P2和P3优选如本文所定义。在上式(VIa)中，任何单组分[S-p2-S]和[S-(AA)x-S]可以在子式{[S-P2-S]a[S-(AA)x-S]b}中以任何顺序出现。子式{[S-P2-S]a[S-(AA)x-S]b}中的单组分[S-P2-S]和[S-(AA)x-S]的数量]由整数a和b确定，其中a+b＝n。n是整数并且如上对式(VI)定义。
a是整数，通常独立于整数b地选自约1至50的范围，优选约1，2或3至30的范围，更优选约1，2，3，4或5至25的范围，或约1，2，3，4或5至20的范围，或约1，2，3，4或5至15的范围，或约1，2，3，4或5至10的范围，包括例如约3至20，4至20，5至20或10至20的范围，或约3至15，4至15，5至15或10至15的范围，或约6至11或7至10的范围。最优选地，a在约1，2，3，4或5至10的范围，更优选在约1，2，3或4至9的范围，在约1，2，3或4至8的范围，或约1，2或3至7的范围。
b是整数，通常独立于整数a地选自约0至50或1至50的范围，优选约0，1，2或3至30的范围，更优选约0，1，2，3，4或5至25的范围，或约0，1，2，3，4或5至20的范围，或约0，1，2，3，4或5至15的范围，或约0，1，2，3，4或5至10的范围，包括例如约3至20，4至20，5至20或10至20的范围，或约3至15，4至15，5至15或10至15的范围，或约6至11或7至10的范围。最优选地，b在约1，2，3，4或5至10的范围，更优选在约1，2，3或4至9的范围，在约1，2，3或4至8的范围，或约1，2或3至7的范围。
在这种情况下，特别优选的是如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA至少部分地与阳离子或聚阳离子化合物和/或聚合物载体优选阳离子蛋白质或肽复合。在该上下文中，WO 2010/037539和WO 2012/113513的公开内容通过引用并入本文。在该上下文中“部分地”是指仅一部分RNA与阳离子化合物复合，并且其余RNA是非复合形式(“游离”)(优选包含在相同制剂中)。优选地，(在本发明的组合物中)复合的RNA与游离的RNA的比选自约5∶1(w/w)至约1∶10(w/w)的范围，更优选约4∶1(w/w)至约1∶8(w/w)的范围，甚至更优选约3∶1(w/w)至约1∶5(w/w)或1∶3(w/w)的范围，最优选地，本发明组合物中复合的RNA与游离的RNA的比选自约1∶1(w/w)的比。
根据优选的实施方案，如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA可以与脂质复合以形成一种或多种脂质体，脂质纳米颗粒和/或脂质复合物。
基于脂质的制剂由于其生物相容性和易于大规模生产而越来越多地被认为是最有希望的RNA递送系统之一。已经广泛研究了阳离子脂质作为用于递送RNA的合成材料。混合在一起后，核酸被阳离子脂质缩合形成称为脂质复合物的脂质/核酸复合物。这些脂质复合物能够保护遗传物质免受核酸酶的作用，并通过与带负电荷的细胞膜相互作用将其传递到细胞中。脂质复合物可以通过在生理pH下将带正电荷的脂质与带负电荷的核酸直接混合来制备。
常规脂质体由脂质双层组成，所述脂质双层可由阳离子，阴离子或中性(磷酸)脂质和胆固醇组成，其包封水性核心。脂双层和水性空间均可分别掺入疏水或亲水化合物。脂质体的体内特征和行为可以通过添加亲水性聚合物(例，聚乙二醇(PEG))涂层到脂质体表面来修饰以赋予空间稳定性。此外，脂质体可以通过将配体(例如，抗体，肽和碳水化合物)连接到其表面或连接的PEG链的末端(Front Pharmacol.2015Dec1；6：286))用于特异性靶向。
脂质体是基于胶体脂质和基于表面活性剂的递送系统，其由围绕水性隔室的磷脂双层组成。它们可以呈球形囊泡，尺寸范围为20nm至几微米。基于阳离子脂质的脂质体能够通过静电相互作用与带负电荷的核酸复合，产生具有生物相容性，低毒性和体内临床应用所需的大规模生产可能性的复合物。脂质体可以与质膜融合以便摄取；一旦进入细胞内，脂质体通过内吞途径加工，然后遗传物质从内体/载体释放到细胞质中。脂质体由于其优异的生物相容性而长期以来被认为是药物递送载体，因为脂质体基本上是生物膜的类似物，并且可以由天然和合成磷脂制备(Int J Nanomedicine.2014；9：1833-1843)。
阳离子脂质体传统上是寡核苷酸最常用的非病毒递送系统，包括质粒DNA，反义寡核苷酸和siRNA/小发夹RNA-shRNA)。阳离子脂质，例如DOTAP，(1，2-二油酰基-3-三甲基铵-丙烷)和DOTMA(N-[1-(2，3-二油酰基氧基)丙基]-N，N，N-三甲基-铵甲基硫酸盐)可通过静电相互作用形成具有带负电荷的核酸的复合物或脂质复合物以形成纳米颗粒，从而提供高的体外转染效率。此外，开发了用于RNA递送的中性的基于脂质的纳米脂质体例如中性的基于1，2-二油酰基-sn-甘油基-3-磷脂酰胆碱(DOPC)的纳米脂质体用于RNA递送。(Adv DrugDeliv Rev.2014Feb；66：110-116.)。
因此，在一个实施方案中，用于治疗或预防如本文所述的肿瘤和/或癌症疾病的isRNA与阳离子脂质和/或中性脂质复合，从而形成脂质体，脂质纳米颗粒，脂质复合物或基于中性脂质的纳米脂质体。
根据一些实施方案，将如本文所述使用的isRNA配制为脂质制剂。脂质制剂优选选自但不限于脂质体，脂质复合物，共聚物，例如PLGA和脂质纳米颗粒。
在一个优选的实施方案中，脂质纳米颗粒(LNP)包含：
(a)核酸，
(b)阳离子脂质，
(c)聚集减少剂(例如聚乙二醇(PEG)脂质或PEG修饰的脂质)，
(d)任选地非阳离子脂质(例如中性脂质)，和
(e)任选地，甾醇。
在一个实施方案中，脂质纳米颗粒制剂由以下组成(i)至少一种阳离子脂质组成；(ii)中性脂质；(iii)甾醇，例如，胆固醇；和(iv)PEG-脂质，摩尔比为约20-60％阳离子脂质：5-25％中性脂质：25-55％甾醇；0.5-15％PEG-脂质。
阳离子脂质
脂质纳米颗粒优选包括适于形成脂质纳米颗粒的阳离子脂质。优选地，阳离子脂质在约生理pH下带有净正电荷。
阳离子脂质可以是，例如，N，N-二油基-N，N-二甲基氯化铵(DODAC)，N，N-二硬脂基-N，N-二甲基溴化铵(DDAB)，1，2-二油酰基三甲基铵丙烷氯化物(DOTAP)(也称为N-(2，3-二油酰基氧基)丙基)-N，N，N-三甲基氯化铵和1，2-二油基氧基-3-三甲基氨基丙烷氯化物盐)，N-(1-(2，3-二油基氧基)丙基)-N，N，N-三甲基氯化铵(DOTMA)，N，N-二甲基-2，3-二油基氧基)丙胺(DODMA)，1，2-二亚油基氧基-N，N-二甲基氨基丙烷(DLinDMA)，1，2-二亚麻烯基氧基-N，N-二甲基氨基丙烷(DLenDMA)，1，2-二-y-亚麻烯基氧基-N，N-二甲基氨基丙烷(γ-DLenDMA)，1，2-二亚油基氨基甲酰基氧基-3-二甲基氨基丙烷(DLin-C-DAP)，1，2-二亚油基氧基-3-(二甲基氨基)乙酰氧基丙烷(DLin-DAC)，1，2-二亚油基氧基-3-吗啉代丙烷(DLin-MA)，1，2-二亚油酰基-3-二甲基氨基丙烷(DLinDAP)，1，2-二亚油基硫代-3-二甲基氨基丙烷(DLin-S-DMA)，1-亚油酰基-2-亚油基氧基-3-二甲基氨基丙烷(DLin-2-DMAP)，1，2-二亚油基氧基-3-三甲基氨基丙烷氯化物盐(DLin-TMA.Cl)，1，2-二亚油酰基-3-三甲基氨基丙烷氯化物盐(DLin-TAP.Cl)，1，2-二亚油基氧基-3-(N-甲基哌嗪基)丙烷(DLin-MPZ)，或3-(N，N-二亚油基氨基)-1，2-丙二醇(DLinAP)，3-(N，N-二油基氨基)-1，2-丙二醇(DOAP)，1，2-二亚油基氧代-3-(2-N，N-二甲基氨基)乙氧基丙烷(DLin-EG-DM A)，2，2-二亚油基-4-二甲基氨基甲基-[1，3]-二氧戊环(DLin-K-DMA)或其类似物，(3aR，5s，6aS)-N，N-二甲基-2，2-二((9Z，12Z)-十八-9，12-二烯基)四氢-3aH-环戊[d][1，3]间二氧杂环戊烯-5-胺，(6Z，9Z，28Z，31Z)-三十七烷-6，9，28，31-四烯-19-基4-(二甲基氨基)丁酸酯(MC3)，1，1′-(2-(4-(2-((2-(双(2-羟基十二烷基)氨基)乙基)(2-羟基十二烷基)氨基)乙基)哌嗪-1-基)乙基氮烷二基)双十二烷-2-醇(C12-200)，2，2-二亚油基-4-(2-二甲基氨基乙基)-[1，3]-二氧戊环(DLin-K-C2-DMA)，2，2-二亚油基-4-二甲基氨基甲基-[1，3]-二氧戊环(DLin-K-DMA)，(6Z，9Z，28Z，31Z)-三十七烷-6，9，28，31-四烯-19-基4-(二甲基氨基)丁酸酯(DLin-M-C3-DMA)，3-((6Z，9Z，28Z，31Z)-三十七烷-6，9，28，31-四烯-19-基氧基)-N，N-二甲基丙-1-胺(MC3Ether)，4-((6Z，9Z，28Z，31Z)-三十七烷-6，9，28，31-四烯-19-基氧基)-N，N-二甲基丁-1-胺(MC4Ether)，或任何前述物质的任何组合。其他阳离子脂质包括但不限于N，N-二硬脂基-N，N-二甲基溴化铵(DDAB)，3P-(N-(N′，N′-二甲基氨基乙烷)-氨基甲酰基)胆固醇(DC-Chol)，N-(1-(2，3-二油基氧基)丙基)-N-2-(精胺甲酰胺基)乙基)-N，N-二甲基三氟乙酸铵(DOSPA)，双十八基酰胺基甘氨酰基羧基精胺(DOGS)，1，2-二油酰基-sn-3-磷酸乙醇胺(DOPE)，1，2-二油酰基-3-二甲基铵丙烷(DODAP)，N-(1，2-二肉豆蔻基氧基丙-3-基)-N，N-二甲基-N-羟乙基溴化铵(DMRIE)，和2，2-二亚油基-4-二甲基氨基乙基-[1，3]-二氧戊环(XTC)。另外，可以使用阳离子脂质的商业制剂，例如LIPOFECTIN(包括DOTMA和DOPE，可从GIBCO/BRL获得)和Lipofectamine(包括DOSPA和DOPE，可从GIBCO/BRL获得)。
其他合适的阳离子脂质公开于国际公开号WO 09/086558，WO 09/127060，WO 10/048536，WO 10/054406，WO 10/088537，WO 10/129709和WO 2011/153493；美国专利公开号2011/0256175，2012/0128760和2012/0027803；美国专利号8,158,601；和Love等，PNAS，107(5)，1864-69，2010。其它合适的氨基脂质包括具有可替代的脂肪酸基团和其他二烷基氨基的那些，包括其中烷基取代基不同的那些(例如N-乙基-N-甲基氨基-和N-丙基-N-乙基氨基-)。通常，具有较少饱和酰基链的氨基脂质针对过滤除菌的目的更容易确定尺寸(特别是当复合物的尺寸必须小于约0.3微米时)。可以使用含有碳链长度在C14至C22范围内的不饱和脂肪酸的氨基脂质。其他支架也可用于分离氨基和氨基脂质的脂肪酸或脂肪烷基部分。
在进一步优选的实施方案中，LNP包含根据专利申请PCT/EP2017/064066的式(III)的阳离子脂质。在本文中，PCT/EP2017/064066的公开内容也通过引用并入本文。
在某些实施方案中，本发明的氨基或阳离子脂质具有至少一个可质子化或可去质子化的基团，使得脂质在等于或低于生理pH(例如pH 7.4)的pH下带正电荷，并且在第二pH下优选在或高于生理pH下中性。当然，应该理解，作为pH的函数的质子的添加或去除是平衡过程，并且对带电或中性脂质的提及是指主要物质的性质并且不要求所有脂质以带电荷或中性形式存在。具有多于一个可质子化或可去质子化的基团或两性离子的脂质不排除在本发明的使用之外。在某些实施方案中，可质子化脂质的可质子化基团的pKa为约4至约11，例如pKa为约5至约7。
阳离子脂质可包含颗粒中存在的总脂质约20mol％至约70或75mol％或约45至约65mol％或约20，25，30，35，40，45，50，55，60，65，或约70mol％。在另一个实施方案中，脂质纳米颗粒包含按摩尔计约25％至约75％，例如约20％至约70％，约35％至约65％，约45％至约65％，约60％，约57.5％，约57.1％，约50％或约40％(基于脂质纳米颗粒中脂质的100％总摩尔数)的阳离子脂质。在一个实施方案中，阳离子脂质与核酸的比例为约3至约15，例如约5至约13或约7至约11。
非阳离子脂质
非阳离子脂质可以是中性脂质，阴离子脂质或两亲性脂质。当存在时，中性脂质可以是在生理pH下以不带电荷或中性两性离子形式存在的许多脂质物质中的任何一种。这些脂质包括，例如，二酰基磷脂酰胆碱，二酰基磷脂酰乙醇胺，神经酰胺，鞘磷脂，二氢鞘磷脂，脑磷脂和脑苷脂。用于本文所述颗粒的中性脂质的选择通常通过考虑例如脂质颗粒大小和血流中脂质颗粒的稳定性来指导。优选地，中性脂质是具有两个酰基的脂质(例如二酰基磷脂酰胆碱和二酰基磷脂酰乙醇胺)。在一个实施方案中，中性脂质含有碳链长度为C10至C20的饱和脂肪酸。在另一个实施方案中，使用具有碳链长度为C10至C20的单或二不饱和脂肪酸的中性脂质。另外，可以使用具有饱和和不饱和脂肪酸链的混合物的中性脂质。
合适的中性脂质包括但不限于二硬脂酰基磷脂酰胆碱(DSPC)，二油酰基磷脂酰胆碱(DOPC)，二棕榈酰基磷脂酰胆碱(DPPC)，二油酰基磷脂酰甘油(DOPG)，二棕榈酰基磷脂酰甘油(DPPG)，二油酰基-磷脂酰乙醇胺(DOPE)，棕榈酰基油酰基磷脂酰胆碱(POPC)，棕榈酰基油酰基磷脂酰乙醇胺(POPE)，二油酰基-磷脂酰乙醇胺4-(N-马来酰亚胺基甲基)-环己烷-1-甲酸酯(DOPE-mal)，二棕榈酰基磷脂酰乙醇胺(DPPE)，二肉豆蔻酰基磷脂酰乙醇胺(DMPE)，二肉豆蔻酰基磷脂酰胆碱(DMPC)，二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(DSPE)，SM，16-0-单甲基PE，16-O-二甲基PE，18-1-反式PE，1-硬脂酰基-2-油酰基-磷脂酰乙醇胺(SOPE)，胆固醇，或其混合物。适用于本发明的脂质颗粒的阴离子脂质包括但不限于磷脂酰甘油，心磷脂，二酰基磷脂酰丝氨酸，二酰基磷脂酸，N-十二烷酰基磷脂酰乙醇胺，N-琥珀酰基磷脂酰乙醇胺，N-戊二酰基磷脂酰乙醇胺，赖氨酰磷脂酰甘油和加入中性脂质中的其它阴离子修饰基团。
非阳离子脂质可以为颗粒中存在的总脂质的约5mol％至约90mol％，约5mol％至约10mol％，约5，10，15，20，25，30，35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85或约90mol％。在一个实施方案中，脂质纳米颗粒包含按摩尔计约0％至约15或45％，例如约3至约12％或约5至约10％的中性脂质。例如，脂质纳米颗粒可以包含按摩尔计约15％，约10％，约7.5％或约7.1％的中性脂质(基于脂质纳米颗粒中脂质的100％总摩尔数)。
甾醇
优选的甾醇是胆固醇。甾醇可以是脂质颗粒的约10mol％至约60mol％或约25mol％至约40mol％。在一个实施方案中，甾醇是脂质颗粒中存在的总脂质的约10，15，20，25，30，35，40，45，50，55或约60mol％。在另一个实施方案中，脂质纳米颗粒包含按摩尔计约5％至约50％，例如约15％至约45％，约20％至约40％，约48％，约40％，约38.5％，约35％，约34.4％，约31.5％或约31％(基于脂质纳米颗粒中脂质的100％总摩尔数)的甾醇。
聚集减少剂
聚集减少剂可以是能够减少聚集的脂质。此类脂质的实例包括但不限于聚乙二醇(PEG)修饰的脂质，单唾液酸神经节苷脂Gml和聚酰胺低聚物(PAO)，例如美国专利号6,320,017中描述的那些，其通过引用整体并入。具有不带电荷的，亲水的，空间阻隔部分的其他化合物(其在配制期间防止聚集，例如PEG，Gml或ATTA)也可以与脂质偶联。ATTA-脂质描述于例如美国专利号6,320,017中，并且PEG-脂质缀合物描述于例如美国专利号5,820,873，5,534,499和5,885,613中，其各自通过引用整体并入。
聚集减少剂可以是例如聚乙二醇(PEG)-脂质，包括但不限于PEG-二酰基甘油(DAG)，PEG-二烷基甘油，PEG-二烷基氧基丙基(DAA)，PEG-磷脂，PEG-神经酰胺(Cer)或其混合物(例如PEG-Cerl4或PEG-Cer20)。PEG-DAA缀合物可以是，例如，PEG-二月桂基氧基丙基(C12)，PEG-二肉豆蔻酰基氧基丙基(C14)，PEG-二棕榈酰基氧基丙基(C16)，或PEG-二硬脂酰基氧基丙基(C18)。其他聚乙二醇化脂质包括但不限于聚乙二醇-二肉豆蔻酰基甘油(C14-PEG或PEG-C14，其中PEG具有2000Da的平均分子量)(PEG-DMG)；(R)-2，3-双(十八烷基氧基)丙基-1-(甲氧基聚(乙二醇)2000)丙基氨基甲酸酯)(PEG-DSG)；PEG-氨基甲酰基-1，2-二肉豆蔻基氧基丙胺，其中PEG的平均分子量为2000Da(PEG-cDMA)；N-乙酰半乳糖胺-((R)-2，3-双(十八烷基氧基)丙基-1-(甲氧基聚(乙二醇)2000)丙基氨基甲酸酯))(GalNAc-PEG-DSG)；mPEG(mw2000)-二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)；和聚乙二醇-二棕榈酰基甘油(PEG-DPG)。在一个实施方案中，聚集减少剂是PEG-DMG。在另一个实施方案中，聚集减少剂是PEG-c-DMA。
PEG修饰的脂质中PEG部分的平均分子量可以为约500至约8,000道尔顿(例如，约1,000至约4,000道尔顿)。在一个优选的实施方案中，PEG部分的平均分子量为约2,000道尔顿。
基于脂质颗粒中脂质的100％总摩尔数，聚集减少剂的浓度可以为约0.1至约15mol％。在一个实施方案中，基于脂质颗粒中脂质的总摩尔数，制剂包含少于约3摩尔％，2摩尔％或1摩尔％的PEG或PEG修饰的脂质。在另一个实施方案中，脂质纳米颗粒包含按摩尔计约0.1％至约20％，例如约0.5至约10％，约0.5至约5％，约10％，约5％，约3.5％，约1.5％，约0.5％，或约0.3％(基于脂质纳米颗粒中脂质的100％总摩尔数)的PEG修饰的脂质。
根据优选的实施方案，通过使用如本文所述的isRNA和一种或多种脂质体，脂质复合物或脂质纳米颗粒来配制如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA。在一个实施方案中，本发明的组合物包含脂质体。脂质体通常是人工制备的囊泡，其可以主要由脂质双层组成，并且可以用作施用营养物和药物制剂的递送载体。脂质体可以具有不同的尺寸，例如但不限于多层囊泡(MLV)(其可以是数百纳米直径并且可以包含由窄水性隔室分隔的一系列同心双层)，小单层囊泡(SUV)(其可以是直径小于50nm)，大单层囊泡(LUV)(其直径可以在50和500nm之间)。脂质体设计可以包括但不限于调理素或配体，以改善脂质体与不健康组织的附着或激活事件，例如但不限于内吞作用。特别是当作为如本文所述的药物组合物施用时，脂质体可含有低或高pH，以改善如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症疾病的isRNA的递送。
脂质纳米颗粒(LNP)
优选地，脂质纳米颗粒可具有脂质体的结构。脂质体通常是具有包含水性内部的含脂质膜的结构。脂质体优选具有一个或多个脂质膜。在优选的实施方案中，脂质体可以是单层的(称为单层的)，或多层的(称为多层的)。当与核酸(例如RNA)复合时，脂质颗粒也可以是脂质复合物，其优选由夹在核酸层之间的阳离子脂质双层组成。脂质体可以进一步具有不同的尺寸，例如但不限于多层囊泡(MLV)(其可以是数百纳米直径并且可以包含由窄水性隔室分隔的一系列同心双层)，小单层囊泡(SUV)(其可以是直径小于50nm)，大单层囊泡(LUV)(其直径可以在50和500nm之间)。在某些实施方案中，脂质体设计可以包括但不限于调理素或配体，以改善脂质体与不健康组织的附着或激活事件，例如但不限于内吞作用。脂质体可含有低(例如酸性)或高(例如碱性)pH，以改善药物制剂的递送。
作为非限制性实例，可以通过美国专利公开号US20130177638，US20130177637，US20130177636，US20130177635，US20130177634，US20130177633，US20130183375，US20130183373和US20130183372(其全部内容通过引用并入本文)中描述的方法，设备和装置制备脂质体，例如合成的膜囊泡。在优选的实施方案中，核酸(例如本文所述的RNA)可以被脂质体包封，和/或它可以包含在水性核心中，然后可以被脂质体包封(参见国际公开号WO2012031046，WO2012031043，WO2012030901和WO2012006378以及美国专利公开号US20130189351，US20130195969和US20130202684；其全部内容通过引用整体并入本文中)。
在另一个实施方案中，脂质纳米颗粒的中值直径尺寸为约50nm至约300nm，例如约50nm至约250nm，例如约50nm至约200nm。在另一个实施方案中，核酸可以使用较小的LNP递送，所述较小的LNP可以包含以下直径：从约1nm至约100nm，从约1nm至约10nm，约1nm至约20nm，从约1nm至约30nm，从约1nm至约40nm，从约1nm至约50nm，从约1nm至约60nm，从约1nm至约70nm，从约1nm至约80nm，从约1nm至约90nm，从约5nm至约from 100nm，从约5nm至约10nm，约5nm至约20nm，从约5nm至约30nm，从约5nm至约40nm，从约5nm至约50nm，从约5nm至约60nm，从约5nm至约70nm，从约5nm至约80nm，从约5nm至约90nm，约10至约50nm，从约20至约50nm，从约30至约50nm，从约40至约50nm，从约20至约60nm，从约30至约60nm，从约40至约60nm，从约20至约70nm，从约30至约70nm，从约40至约70nm，从约50至约70nm，从约60至约70nm，从约20至约80nm，从约30至约80nm，从约40至约80nm，从约50至约80nm，从约60至约80nm，从约20至约90nm，从约30至约90nm，从约40至约90nm，从约50至约90nm，从约60至约90nm，从约70至约80nm，和/或从约70至约90nm。
在一个实施方案中，脂质与RNA的重量比为至少约0.5∶1，至少约1∶1，至少约2∶1，至少约3∶1，至少约4∶1，至少约5∶1，至少约6∶1，至少约7∶1，至少约11∶1，至少约20∶1，至少约25∶1，至少约27∶1，至少约30∶1，或至少约33∶1。在一个实施方案中，脂质与RNA的重量比为约1∶1至约35∶1，约3∶1至约15∶1，约4∶1至约15∶1，或约5∶1至约13∶1或约25∶1至约33∶1。在一个实施方案中，脂质与RNA的重量比为约0.5∶1至约12∶1。
根据一个优选的实施方案，如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症的isRNA在肿瘤内(i.t.)局部区域或肿瘤周围施用/应用。如本文所用，术语“肿瘤内施用/应用”是指直接递送药学活性成分例如本文所述的isRNA(例如，以包含如本文所述的isRNA的组合物/制剂的形式)进入肿瘤，到肿瘤附近和/或肿瘤的紧邻区域(肿瘤周围)。所述递送可通过本领域已知的若干种方法实现，包括但不限于注射(例如常规针注射或无针注射，例如喷射注射)或电穿孔或其组合。本领域描述了肿瘤内递送药物的方法(参见，例如，Brincker，1993.Crit.Rev.Oncol.Hematol.15(2)：91-8；Celikoglu等.，2008.Cancer Therapy 6，545-552)。
如本文所用，术语“肿瘤内”还可以指将活性药物成分施用给带有肿瘤或癌症的器官，或带有肿瘤或癌症的组织。因此，如本文所用的术语“肿瘤内”还可以包括肿瘤周围或局部区域区域施用，其中活性药物成分优选施用于肿瘤或癌症近端的器官或组织，优选施用于与肿瘤或癌症直接物理接触的器官或组织。在本发明的上下文中，肿瘤内，局部区域或肿瘤周围施用优选包括将活性药物成分递送(即通过注射)至浅表肿瘤或癌症，或递送至位于组织内部的肿瘤或癌症。
在一些实施方案中，局部区域施用活性药物成分(例如本文所述的RNA)包括通过将活性药物成分施用于将血液携带至肿瘤或癌症或携带肿瘤或癌症的组织或器官的血管(例如，动脉，例如肝动脉，或静脉，例如肺静脉)将活性药物成分递送至肿瘤或癌症或携带肿瘤或癌症的组织或器官。
根据优选的实施方案，药学活性成分，例如用于治疗或预防本文所述的肿瘤和/或癌症疾病的isRNA在肿瘤内(i.t.)施用，包括局部区域或肿瘤周围，其中所述施用包括注射技术。其中，药学活性成分，例如本文所述使用的isRNA，优选每次治疗以单剂量注射。或者，还设想多次注射到肿瘤或癌症或携带肿瘤的器官或组织的相同或分开的区域。此外，肿瘤内施用/应用包括将药学活性成分优选通过注射递送到一个或多个转移瘤中。药学活性成分的施用可以以优选如本文所述的各种治疗间隔进行单剂量或重复剂量治疗。
在优选的实施方案中，药学活性成分(例如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症的isRNA)通过注射肿瘤内施用，包括局部区域或肿瘤周围施用。优选地，肿瘤内施用涉及成像技术，其优选地提高施用的精确度。更优选地，这种成像技术选自由以下组成的组：计算机断层扫描，超声，γ相机成像，正电子发射断层扫描和磁共振肿瘤成像。此外，肿瘤内施用可优选包括直接肿瘤内注射，其优选包括选自内窥镜检查，支气管镜检查，膀胱镜检查，结肠镜检查，腹腔镜和导管插入术组成的组中的至少一种程序。
在一个优选的实施方案中，通过注射局部区域给予药学活性成分，例如本文所述的用于治疗或预防肿瘤和/或癌症的isRNA。优选地，局部区域施用涉及成像技术，其优选地增强施用的精确度，所述施用优选为如本文所述的肿瘤内或肿瘤周围施用。更优选地，这种成像技术选自由以下组成的组：计算机断层扫描，超声，γ相机成像，正电子发射断层扫描和磁共振肿瘤成像。此外，局部区域施用可优选包括直接局部区域注射，其优选包括选自内窥镜检查，支气管镜检查，膀胱镜检查，结肠镜检查，腹腔镜和导管插入术组成的组中的至少一种程序。如本文所用，术语“局部区域施用”因此也可以指肿瘤内或肿瘤周围施用优选注射药学活性成分(例如本文所述的RNA)，其中所述施用优选涉及成像技术，其中所述成像技术优选地包括选自内窥镜检查，支气管镜检查，膀胱镜检查，结肠镜检查，腹腔镜和导管插入术组成的组中的至少一种程序。
根据优选的实施方案，本发明提供用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中isRNA包含根据式(I)(GlXmGn)，式(II)(ClXmCn)，式(III)(NuGlXmGnNv)a或式(IV)(NuClXmCnNv)a的核酸序列，优选至少一个根据SEQ ID NO：433至437或1014至1016中任一项的核酸序列，或这些序列中任一个的片段或变体，更优选至少一个根据SEQ ID NO：433，434或1014至1016中任一项的核酸序列，或这些核酸序列中的任何一个的片段或变体，
其中isRNA与阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与聚合物载体复合，更优选与由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体复合，所述阳离子组分优选包含根据式(V)，(Va)和/或(Vb)的肽，和/或根据式(VI)(L-P1-S-[S-P2-S]n-S-P3-L)的化合物，更优选二硫键交联阳离子肽Cys-Arg12，Cys-Arg12-Cys，或Trp-Arg12-Cys中的至少一种，并且
其中isRNA优选肿瘤内施用。
根据特别优选的实施方案，本发明提供用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，
其中isRNA包含根据式(I)(GlXmGn)，式(II)(ClXmCn)，式(III)(NuGlXmGnNv)a或式(IV)(NuClXmCnNv)a的核酸序列，优选至少一个根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016中任一项的核酸序列，或这些序列中任一个的片段或变体，更优选至少一个根据SEQ ID NO：433，434或1014至1016中任一项的核酸序列，或这些核酸序列中的任何一个的片段或变体，
其中isRNA与阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与聚合物载体复合，更优选与由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体复合，所述阳离子组分优选包含根据式(V)，(Va)和/或(Vb)的肽，和/或根据式(VI)(L-P1-S-[S-P2-S]n-S-P3-L)的化合物，更优选二硫键交联阳离子肽Cys-Arg12，Cys-Arg12-Cys，或Trp-Arg12-Cys中的至少一种，
其中isRNA优选在肿瘤内施用，并且
其中肿瘤或癌症疾病优选选自由以下各项组成的组：黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤；皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除和/或晚期SCC；腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；皮肤T细胞淋巴瘤，优选局部治疗或化疗难治性晚期皮肤T细胞淋巴瘤；以及头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC。在这种情况下，肿瘤或癌症疾病优选选自由以下组成的组：晚期黑素瘤，优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)和腺样囊状癌(ACC)。
在另一个优选的实施方案中，肿瘤或癌症疾病选自由以下各项组成的组：晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(hnSCC)和腺样囊状癌(ACC)。
根据特别优选的实施方案，本发明提供用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，
其中isRNA包含根据式(I)(GlXmGn)，式(II)(ClXmCn)，式(III)(NuGlXmGnNv)a或式(IV)(NuClXmCnNv)a的核酸序列，优选至少一个根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016中任一项的核酸序列，或这些序列中任一个的片段或变体，更优选至少一个根据SEQ ID NO：433，434，1014至1016中任一项的核酸序列，或这些核酸序列中的任何一个的片段或变体，
其中isRNA与阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与聚合物载体复合，更优选与由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体复合，所述阳离子组分优选包含根据式(V)，(Va)和/或(Vb)的肽，和/或根据式(VI)(L-P1-S-[S-P2-S]n-S-P3-L)的化合物，更优选二硫键交联阳离子肽Cys-Arg12，Cys-Arg12-Cys，或Trp-Arg12-Cys中的至少一种，
其中isRNA优选肿瘤内施用，并且
其中肿瘤或癌症疾病优选选自由以下各项组成的组：
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
其中肿瘤或癌症疾病优选选自由以下各项组成的组：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)；
其中肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的。
在某些实施方案中，提供如本文所述的isRNA用于治疗优选如本文所定义的肿瘤或癌症疾病，其中所述治疗包括施用至少一种另外的药学活性成分，并且其中所述isRNA优选肿瘤内施用，包括优选如本文所述的肿瘤周围或局部区域。特别地，本发明提供如本文所述的用于治疗或预防肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种优选如本文所述的常规用于治疗和/或预防肿瘤或癌症疾病的另外的药学活性成分，并且其中所述isRNA优选肿瘤内施用，包括肿瘤周围或局部区域。在本发明的上下文中，短语‘常规用于治疗和/或预防[肿瘤或癌症疾病]的药学活性成分’优选是指优选根据标准疗法使用的治疗和/或预防肿瘤或癌症疾病的药学活性成分。更优选地，该短语包括本领域已知的适合于治疗和/或预防肿瘤或癌症疾病的药学活性成分。
根据优选的实施方案，提供了isRNA用于治疗如本文所述的肿瘤或癌症疾病，其中所述治疗包括施用至少一种常规用于治疗和/或预防相应疾病的另外的药学活性成分，其中isRNA优选肿瘤内施用。
甚至更优选地，提供的isRNA用于治疗选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症：黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，最优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期SCC；最优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)；腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；皮肤T细胞淋巴瘤，优选局部治疗或化疗难治性晚期皮肤T细胞淋巴瘤；头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，其中所述治疗包括伴随的局部或全身施用至少一种另外的药学活性成分，其常规用于治疗和/或预防任何这些疾病，并且其中isRNA优选肿瘤内施用。
根据优选的实施方案，提供isRNA用于治疗选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症疾病
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
用于治疗选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)；
其中肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治，
其中所述治疗包括伴随的局部或全身施用至少一种另外的药学活性成分，其常规用于治疗和/或预防任何这些疾病，并且其中isRNA优选肿瘤内施用。
所述至少一种另外的药学活性成分可以通过优选如本文所述的任何合适的施用途径或技术施用，或通过静脉内，口服或局部应用。在优选的实施方案中，肿瘤内施用isRNA以及至少一种另外的药学活性成分。在更优选的实施方案中，肿瘤内施用isRNA，并且全身施用(口服或静脉内或皮下或肌肉内或腹膜内或皮内)至少一种另外的药学活性成分。
在一些实施方案中，将至少一种另外的药学活性成分与isRNA一起配制以用于本文所述的用途。在特别优选的实施方案中，所述至少一种另外的药学活性成分与isRNA分开配制以供如本文所述使用。
至少一种另外的药学活性成分不限于特定类别的化合物。例如，所述至少一种另外的药学活性成分可以优选是化合物，其常规用于使用如本文所述的isRNA的肿瘤或癌症疾病的化疗。优选地，至少一种另外的药学活性成分是如本文所述的与如本文所述的isRNA组合使用的化合物。或者，所述至少一种另外的药学活性成分可以优选为治疗性肽或蛋白质(例如抗体或诱饵受体)或其片段或变体。
在一些实施方案中，所述至少一种另外的药学活性成分是化合物，其通常用于治疗和/或预防黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，并且最优选晚期cMEL，其中所述化合物优选选自由以下组成的组：纳武单抗(Nivolumab)(Opdivo)，伊匹单抗(Ipilimumab)(Winglore，Yervoy)，派姆单抗(Pembrolizumab)(Keytruda)，达拉菲尼甲磺酸盐(dabrafenib mesylate)+曲美替尼二甲基亚砜(trametinib dimethyl sulfoxide)(Tafinlar+Mekinist)，替莫唑胺(temozolomide)(Astromide，Temodal，Temozolomide)，维莫非尼(vemurafenib)(Zelboraf)，聚乙二醇干扰素α-2b(Pegintron)，阿地白介素(aldesleukin)(Proleukin)，硫酸博来霉素(bleomycin sulfate)(Bleo，Bleoprim)，卡铂(carboplatin)(Paraplatin)，卡莫司汀(carmustine)(Becenun，Bicnu)，顺铂(cisplatin)(Platinol，Cisplatin，Displanor，Nuoxin)，考比替尼延胡索酸盐(cobimetinibfumarate)(Cotellic)，环磷酰胺(cyclophosphamide)(Endoxan)，达拉菲尼甲磺酸盐(dabrafenib mesylate)(Tafinlar)，达卡巴嗪(dacarbazine)(Dacarbazine，DBLDacarbazine，DTIC，DTIC-Dome，Dacarbazina Mayne，Dacarbazine，Dacarbazina，Detimedac，Dacarb，Celdaz，Dabaz，Dacarzine，Dacarin，Dacmed，Oncodac，Dti，Dacarbazine Sandoz，Fauldacar，Dacarex，Daczin，Arzi，Tiferomed，Acocarb，DTI，Evodazin)，放线菌素D(dactinomycin)(Cosmegen，Kosmegen，Lyovac Cosmegen)，盐酸地芬尼多(diphenidol hydrochloride)(Bleocina，Raamfen，Dimensal)，盐酸表柔比星(epirubicin hydrochloride)(Pharmorubicin)，福莫司汀(fotemustine)(Muphoran，Mustoforan，Mustophoran，Fotemustine)，羟基脲(Hydrine，Durea，Myelostat，Riborea，Unidrea，Hydran，Leukocel，Hydroxyurea，Hydrea，hydroxyurea)，干扰素α(Alfanative，Immunex)，干扰素α-2a(Intermax Alpha，Inron-A，Intefen，Viteron-A，Roferon A，Alferon)，干扰素α-2b(Realfa-2B，Shanferon，Intron A，Viraferon，Alfaron，Lemoron，Liveral，重组人干扰素α-2b，ReliFeron，Fni 2B，Infostat，Altevir，Lanstion，干扰素β(Feron)，白细胞介素-2(Inleusin，重组人白细胞介素-2)，伊立替康盐酸盐(irinotecanhydrochloride)(Camptolem)，洛莫司汀(lomustine)(Belustine，Lomustine，Moostin)，黑素瘤裂解液疫苗(Melacine)，美法仑(melphalan)(Alkacel，Alkeran，Melphalan)，甲氨蝶呤(Methotrexate)，纳武单抗+伊匹单抗(Opdivo+Yervoy)，Sylatron(Pegintron，Sylatron)talimogene laherparepvec(Imlygic)，他莫昔芬柠檬酸盐(tamoxifencitrate)(Tamoxifen)，替莫唑胺(temozolomide)(Emzolam，Temozolomide，TemozolomideLW，Tiloshil，Temolida，Temozod，Temozolomide，Temizole)，曲美替尼二甲基亚砜(Mekinist)，硫酸长春新碱(vincristine sulfate)(Oncovin，Vincristine Sulfate，Vincristine，Fauldvincri，Eldisine)，(甲氧苯酚(mequinol)+维甲酸(tretinoin))(Solage)，达卡巴嗪(Dacarbazine)，干扰素α(Biaferone，Isiferone)，顺铂；达卡巴嗪；硫酸长春地辛(vindesine sulfate)，fifibrin，sealant，tremelimumab，干扰素α-2b，重组干扰素α咪喹莫特(imiquimod)，依那西普(etanercept)，索拉非尼甲苯磺酸盐(sorafenibtosylate)；舒尼替尼苹果酸盐(sunitinib malate)，阿地白介素，甲磺酸伊马替尼(imatinib mesylate)；尼罗替尼(nilotinib)，沙格司亭(sargramostim)，阿地白介素，伊匹单抗；沙格司亭(sargramostim)，伊匹单抗，帕瑞肽(pasireotide)，阿地白介素；伊匹单抗，维莫非尼，美法仑，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；环磷酰胺；达卡巴嗪；多西他赛(docetaxel)；多柔比星(doxorubicin)；依托泊苷(etoposide)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；吉西他滨盐酸盐(gemcitabine hydrochloride)；伊立替康盐酸盐(irinotecanhydrochloride)；奥沙利铂(oxaliplatin)；紫杉醇(paclitaxel)；培美曲塞二钠(pemetrexed disodium)；替莫唑胺，干扰素α-2b；Sylatron，博来霉素(bleomycin)，talimogene laherparepvec，达拉菲尼甲磺酸盐；达拉菲尼甲磺酸盐(dabrafenibmesylate)+曲美替尼二甲基亚砜(trametinib dimethyl sulfoxide)；曲美替尼二甲基亚砜；维莫非尼，曲美替尼二甲基亚砜，达拉菲尼甲磺酸盐；曲美替尼二甲基亚砜，达拉菲尼甲磺酸盐；粒细胞巨噬细胞集落刺激因子；伊匹单抗，博来霉素；未披露的化疗，伊匹单抗；维莫非尼，纳武单抗，硼替佐米(bortezomib)；苹果酸卡博替尼(cabozantinib s-malate)；色瑞替尼(ceritinib)；克唑替尼(crizotinib)；达沙替尼(dasatinib)；厄洛替尼盐酸盐(erlotinib hydrochloride)；依维莫司(everolimus)；吉非替尼(gefiitinib)；伊马替尼(imatinib)；拉帕替尼二甲苯磺酸盐(lapatinib ditosylate)；尼罗替尼(nilotinib)；奥拉帕尼(olaparib)；帕博西尼(palbociclib)；帕唑帕尼盐酸盐(pazopanibhydrochloride)；雷莫芦单抗(ramucirumab)；瑞戈非尼(regorafenib)；索拉非尼甲苯磺酸盐(sorafenib tosylate)；舒尼替尼苹果酸盐(sunitinib malate)；曲美替尼二甲基亚砜；伏立诺他(vorinostat)，硼替佐米(bortezomib)；苹果酸卡博替尼(cabozantinib s-malate)；色瑞替尼(ceritinib)；克唑替尼(crizotinib)；达沙替尼(dasatinib)；厄洛替尼盐酸盐(erlotinib hydrochloride)；依维莫司(everolimus)；吉非替尼(gefitinib)；伊马替尼(imatinib)；拉帕替尼二甲苯磺酸盐(lapatinib ditosylate)；尼罗替尼(nilotinib)；奥拉帕尼(olaparib)；帕博西尼(palbociclib)；帕唑帕尼盐酸盐(pazopanibhydrochloride)；雷莫芦单抗(ramucirumab)；瑞戈非尼(regorafenib)；索拉非尼甲苯磺酸盐(sorafenib tosylate)；舒尼替尼苹果酸盐(sunitinib malate)；曲美替尼二甲基亚砜；伏立诺他(vorinostat)，氨基乙酰丙酸盐酸盐(aminolevulinic acid hydrochloride)，达拉菲尼甲磺酸盐；维莫非尼，派姆单抗，GSK-2132231A，福莫司汀，M-Vax，美法仑；肿瘤坏死因子α，Canvaxin，阿地白介素；肿瘤浸润性淋巴细胞干扰素α-2a，talimogenelaherparepvec，阿地白介素；顺铂；达卡巴嗪；非格司亭(filgrastim)；干扰素α；长春碱(vinblastine)，velimogene aliplasmid，奥利默森钠(oblimersen sodium)，靶向转移性黑素瘤的gp100抗原的疫苗，替莫唑胺，velimogene aliplasmid，索拉非尼甲苯磺酸盐；DHA紫杉醇，美法仑，vitespen，顺铂；达卡巴嗪，聚乙二醇干扰素α-2b，来那度胺(lenalidomide)，黑素瘤裂解液疫苗，塞来昔布(celecoxib)，他斯索兰钠(tasisulamsodium)，紫杉醇白蛋白结合，索拉非尼甲苯磺酸盐；阿地白介素；组胺二盐酸盐，Canvaxin，索拉非尼甲苯磺酸盐；GM2-KLH疫苗+QS21，伊利司莫(elesclomol)；紫杉醇(paclitaxel)，聚乙二醇干扰素α-2b，BMS-734019；伊匹单抗，阿地白介素；顺铂；达卡巴嗪；非格司亭(filgrastim)；长春碱(vinblastine)，阿地白介素；顺铂；达卡巴嗪；干扰素α-2b；长春碱硫酸盐(vinblastine sulfate)，达卡巴嗪；奥利默森钠(oblimersen sodium)，贝伐单抗(bevacizumab)，奥利默森钠(oblimersen sodium)，顺铂；阿糖胞苷(cytarabine)；紫杉醇；苏消安(treosulfan)，黑素瘤疫苗，美法仑；重组肿瘤坏死因子，GM2-KLH疫苗；QS-21，多价黑素瘤疫苗+BCG疫苗，阿地白介素；顺铂；达卡巴嗪；干扰素α；长春碱(vinblastine)，替莫唑胺，干扰素γ；美法仑；肿瘤坏死因子α，黑素瘤的细胞免疫疗法，视黄醇，干扰素α-2a，肉芽肿棒状杆菌(Corynebacterium granulosum)P40，美法仑，顺铂，卡介苗(bacilluscalmette-guerin vaccine)；环磷酰胺，阿地白介素；顺铂；达卡巴嗪；干扰素α；长春碱(vinblastine)，兰尼单抗(ranibizumab)，干扰素α，卡介苗，卡介苗，美法仑，干扰素α，甲地孕酮(megestrol)，干扰素α-2，顺铂；达卡巴嗪，卡介苗(bacillus calmette-guerinvaccine)；达卡巴嗪，阿地白介素；利索茶碱(lisofylline)，达拉菲尼甲磺酸盐；环磷酰胺；放线菌素D(dactinomycin)；长春新碱(vincristine)，卡介苗，卡介苗；达卡巴嗪，曲美替尼二甲基亚砜，PV-10，胆钙化醇(cholecalciferol)，噻吗洛尔马来酸盐(timolol maleate)，马赛替尼(masitinib)，福莫司汀；干扰素α-2b，talimogene laherparepvec，亚硒酸钠(sodium biselenite)，顺铂；达卡巴嗪；长春地辛(vindesine)，异维甲酸(isotretinoin)，Sylatron，福莫司汀，seviprotimut-L，达拉菲尼甲磺酸盐；曲美替尼二甲基亚砜，聚乙二醇干扰素α-2a，阿地白介素；异维甲酸；聚乙二醇干扰素α-2b，达拉菲尼甲磺酸盐；曲美替尼二甲基亚砜，考比替尼延胡索酸盐；维莫非尼，干扰素α-2b；M-Vax，纳武单抗，达卡巴嗪；紫杉醇(paclitaxel)，M-200，胆钙化醇(cholecalciferol)，binimetinib，美法仑，沙格司亭(sargramostim)，派姆单抗，恶性黑素瘤的基因治疗，eltrapuldencel-T，binimetinib；encorafenib，沙格司亭；酪氨酸酶肽疫苗，派姆单抗；talimogene laherparepvec，自体肿瘤浸润性淋巴细胞，talimogene laherparepvec，达拉菲尼甲磺酸盐；伊匹单抗；纳武单抗；曲美替尼二甲基亚砜，阿地白介素；环磷酰胺；氟达拉滨(fludarabine)；肿瘤浸润性淋巴细胞，PV-10，talimogene laherparepvec，HM-95573，达拉菲尼甲磺酸盐；曲美替尼二甲基亚砜，干扰素β，伊匹单抗；纳武单抗，Darleukin；Fibromun，LN-144，binimetinib，epacadostat；派姆单抗，奥利默森钠(oblimersen sodium)，agatolimod sodium，来那度胺(lenalidomide)，干扰素α-2a；聚乙二醇干扰素α-2a，CSF-470，修饰以表达HLA A2/4-1BB配体的黑素瘤疫苗(转移性黑素瘤的细胞免疫疗法)，伊匹单抗；纳武单抗；沙格司亭(sargramostim)，ImmuniCell(癌症和病毒感染的细胞免疫疗法)，trabedersen，BTH-1677，曲美替尼二甲基亚砜，美法仑(Melblez)，AS15+recMAGE-A3，binimetinib，binimetinib+encorafenib，癌症和病毒感染的细胞免疫疗法，CSF-470，达拉菲尼甲磺酸盐(dabrafenibmesylate)(Tafinlar)，达拉菲尼甲磺酸盐(dabrafenib mesylate)+曲美替尼二甲基亚砜(trametinib dimethyl sulfoxide)，Darleukin，encorafenib，epacadostat，马赛替尼(masitinib)，PV-10，沙格司亭(Sargramostim)(Leukine)，seviprotimut-L，trabedersen，乳腺癌疫苗，黑素瘤和软组织肉瘤和维莫非尼(Zelboraf)。
在特别优选的实施方案中，所述至少一种另外的药学活性成分是化合物，其通常用于治疗和/或预防黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，并且最优选晚期cMEL，其中所述化合物是PD-1抑制剂，优选拮抗性PD-1抗体，优选选自由纳武单抗(Opdivo)和派姆单抗(Keytruda)组成的组。
在某些实施方案中，所述至少一种另外的药学活性成分是化合物，其通常用于治疗和/或预防皮肤的鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期SCC，其中所述化合物优选选自由以下组成的组：西妥昔单抗(Erbitux)，紫杉醇白蛋白结合(Abraxane)，(吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur))(TS-1)，多西他赛(Docetaxel，Doxel，Taxotere，Docetaxel An，Docel，Nanoxel M，Tautax，Docetaxel-AS，Docetaxel-M，Qvidadotax，Relidoce，Taxelo，Oncodocel，Doxotel，Pacancer，Docetrust，Dodetax，Dodabur，Soulaxcin，Taxedol，Docefim，Docetaxel，Ribodocel，Critidoc，Asodoc，Chemodoc，Docelibbs，Docenat，Dincilezan，Dostradixinol，Docefrez，Camitotic，Oncotaxel，Somatixel，Belotaxel，Qvidadotax，Taxceus，Cetadocure，Docetaxel CT，Tevaxter，Docirena，Eurotere，Axtere，Celotax，Taxanit，Drobanos，Cetado，Doxocad，Taxceus，Egidox，Tedocad，Docecad，Docelex，Docetax，Docetaxel，Docetere，Dotax，，Taxuba，Monotaxel，Taceedo，Detaxl，Docet，Docetaxel，Ferdotax，Wintaxel)，(替加氟+尿嘧啶)(Uft，Uft E，Tefudex，Unitoral，Luporal，Tagracil)，氟尿嘧啶(5-FU)，(吉美嘧啶+奥替拉西+替加氟)ODT(TS-1组合OD)，硫酸博来霉素(Tecnomicina，Cinaleo，Bleomycin，Bloicin-S，Bonar，Bleocin，Bleomycin Sulfate，Bleo，Bleocel，Bleotex，Oncobleo，Bleonco，Bleosol，Lyoble，Bleomycin Sulfate，Blenamax，Bleomycin，Blenoxane，Bleomicina，Bleomycine Bellon，Bleoprim)，卡铂(Carboplatin，Platamine CS，Carbaccord，Carboplatina，Carboplatino，Paraplatin，Carbosin，Tecnocarb，Carbomerck，Paract，Carboplatine CTRS，Carboplatine Intsel Chimos，Carboplatin，Carbokem，Carbotinol，Fauldcarbo，Evocarb，Citoplatina，Platin)，环丙沙星(Hypoflox，Ufexil)，盐酸环丙沙星(Ciprofloxacin Pharma，Prodin，Ciproxin)，顺铂(Cisplatin，Stritin，Ifapla，Accocit，Unistin，Cancertin，Cisplan，Citoplax，Nuoxin，Placis，Cisplatino，Displanor，Randa，Cispla，Fauldcispla，Briplatin，Platinex，Platinol，Platinex，Riboplatin，Cisplatine，Platistine CS，Platosin，Accocit，Cisplatino)环磷酰胺(Endoxan，Cyclophosphamide)，去氧氟尿苷(doxifluridine)(Doxifluridine，MayVladimir)，多柔比星(Doxorubicin Hydrochloride，Adriamycin RDF，Doxorubicin，Doxorubicin PFS)，盐酸表柔比星(Brecila，Cloridrato De Epirrubicina，Epirubicin，Farmorubicina，Nuovodox，Adnexa，4-Eppedo，Favicin)，氟尿嘧啶(Agicil，Fluorouracil，Fauldfluor，Oncourcil，Flocil，5Flucel)，叶酸+甲氨蝶呤(Truxofol)，人腺病毒5型(重组)(Oncorine)，羟基脲(Oxyrea，Durea，Myelostat，Riborea，Unidrea，Ondrea，Hydran，Leukocel，Hydroxyurea，Hydrea)，异环磷酰胺(ifosfamide)(Holoxan，异环磷酰胺EG)，左旋咪唑(levamisole)(Zirsol)，甲氨蝶呤甲氨蝶呤(Tratoben，Methotrexate，Fresexate，Neometho，Fauldmetro，Methotrexate Sodium，Methocel，Hytas，Methaccord，Methofill，Metotrexato，Traxacord，Plastomet，Tevatrex，Metrex，Caditrex，Carditrex，Vibzi，Imutrex，Biotrexate，Methorex，Mexate，Neotrexate，Oncotrex，Remtrex，Trixilem，Hi-Trex，Metorex，Trex，Unitrexate，Ebetrexac，Fauldexato，Lantarel，Maxtrex，MiantrexCS，Rheumatrex，Folex，Folex PFS，Abitrexate，Tevametho，Trexall，Emthexate，Abitrexate，Meadow)，丝裂霉素(Mitomycin C，Mitomycin，Mitonco，Lyomit)，奈达铂(nedaplatin)(Jiebaishu，Aoxianda，Aqupla)，尼美舒利(nimesulide)(Nimulid)，尼妥珠单抗(nimotuzumab)(Biomab EGFR，Laedemab)，呋喃妥因(nimotuzumab)(Furatsilin)，氧氟沙星(ofloxacin)(Entof)，紫杉醇(Paclitaxel，Taxol)，培洛霉素硫酸盐(peplomycinsulfate)(Pepleo)，沙培林(picibanil)(Picibanil)，吡柔比星(pirarubicin)(Pirarubicin Hydrochloride，Therarubicin，Pinorubin)，甘氨双唑钠(sodiumglycididazole)(CMNa)，替加氟(Utefos，Icarus，Futraful，替加氟吉美嘧啶奥替拉西钾)，替莫卟吩(temoporfin)(Foscan)，拓泊替康盐酸盐(topotecan hydrochloride)(Topotecan)，乌苯美司(ubenimex)(Ubenimex)，长春碱硫酸盐(Vinblastine，Vblastin)，硫酸长春新碱(Vincristine，Vincristine Sulfate，Vincristin，Sutivin，硫酸长春地辛(Eldisine)，卡铂(Carboplatine Qualimed，Carboplatine，Carboplatino，Carboplatin)，顺铂(Cisplatin)，多西他赛(Kamdocon，Naltoxater，Docetaxel)，氟尿嘧啶(Fluorouracil，Fluorouracile，Fluorouracil)，甲氨蝶呤(Methotrexate Sodium，Mexate，Mexate Aq，Biometrox，Medsatrexate，Otaxem)，硫酸长春新碱(Oncovin)，氟尿嘧啶，舒尼替尼苹果酸盐(sunitinib malate)，阿曲汀(acitretin)，血纤蛋白粘合剂(fibrinsealant)，西妥昔单抗，西妥昔单抗，厄洛替尼，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，未公开的抗癌药物，吉非替尼，普伐他汀钠(pravastatin sodium)，西罗莫司(sirolimus)，未披露的化疗，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，西罗莫司(sirolimus)，氟尿嘧啶(fluorouracil)；未公开的紫杉烷，甲基氨基乙酰丙酸盐酸盐，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，厄洛替尼盐酸盐，西妥昔单抗，咪喹莫特(imiquimod)，未公开的中草药，阿司匹林；依那普利马来酸盐(enalapril maleate)，未披露的化疗，西妥昔单抗，(吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur))；卡铂；顺铂，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；尼妥珠单抗，卡铂；紫杉醇白蛋白结合，顺铂；奈达铂，博来霉素(bleomycin)，奈达铂，顺铂；紫杉醇(paclitaxel)，紫杉醇白蛋白结合，(吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur))，博来霉素；未披露的化疗，阿帕替尼(apattinib)；多西他赛，未公开的免疫调节补充剂，BCM-95，氨基乙酰丙酸盐酸盐(aminolevulinic acid hydrochloride)，奈达铂，顺铂；帕利夫明(palifermin)，西妥昔单抗，吉非替尼，贝伐单抗(bevacizumab)，belagenpumatucel-L，顺铂；替拉扎明(tirapazamine)，顺铂；替拉扎明(tirapazamine)，顺铂；吉西他滨；紫杉醇；托泊替康；长春瑞滨，顺铂；氟尿嘧啶，帕尼单抗(panitumumab)，卡铂；多西他赛(docetaxel)；吉西他滨盐酸盐(gemcitabine hydrochloride)；长春瑞滨酒石酸盐，氨磷汀(amifostine)；氟尿嘧啶，顺铂；氟尿嘧啶，卡铂；紫杉醇(paclitaxel)，替拉扎明(tirapazamine)，顺铂；依泊亭α(epoetin alfa)，figitumumab，美法仑；肿瘤坏死因子alf，顺铂，顺铂；氟尿嘧啶，顺铂；未披露的化疗，多西他赛，拉康舒集(contusugene ladenovec)，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；紫杉醇(paclitaxel)，多西他赛，人乳头瘤病毒[血清型16，18](二价)疫苗，异维甲酸(isotretinoin)，顺铂；氟尿嘧啶，米索硝唑(misonidazole)，紫杉醇(paclitaxel)，帕利夫明(palifermin)，内皮抑素(endostatin)，毛果芸香碱(pilocarpine)，顺铂；多西他赛(docetaxel)；非格司亭(filgrastim)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；紫杉醇(paclitaxel)，顺铂；多西他赛(docetaxel)；非格司亭(filgrastim)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；紫杉醇(paclitaxel)，顺铂；伊立替康盐酸盐，顺铂；吉西他滨，顺铂；表柔比星；氟尿嘧啶(fluorouracil)；未披露的化疗，甲基氨基乙酰丙酸盐酸盐，卡铂；紫杉醇(paclitaxel)，卡波金(carbogen)；二氧化碳；烟酰胺，顺铂；氟尿嘧啶，talimogene laherparepvec，依泊亭α(epoetin alfa)，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；帕尼单抗(panitumumab)，顺铂；氟尿嘧啶，顺铂；氟尿嘧啶，阿地白介素，顺铂；氟尿嘧啶，顺铂；紫杉醇(paclitaxel)，顺铂；氟尿嘧啶，氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸(leucovorin)；洛铂(lobaplatin)，顺铂，顺铂；乙硫醇(ethyl mercaptan)；异环磷酰胺；美司钠(mesna)；二溴卫矛醇(mitolactol)，多柔比星(doxorubicin)；左旋咪唑，(替加氟+尿嘧啶)，顺铂；氟尿嘧啶，顺铂；长春瑞滨，卡铂；顺铂；吉西他滨盐酸盐，短棒状杆菌(Corynebacterium parvum)；多柔比星，卡培他滨(capecitabine)；顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；紫杉醇(paclitaxel)，氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸(leucovorin)；甲氨喋呤，rAd-p53，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；多西他赛，PV-10，甲基氨基乙酰丙酸盐酸盐，顺铂；氟尿嘧啶，紫杉醇；拓泊替康盐酸盐，卡铂；顺铂；紫杉醇(paclitaxel)，顺铂；拓泊替康盐酸盐，顺铂；依托泊苷，多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，阿司匹林，顺铂；吉西他滨，短乳杆菌(Lactobacillus brevis)CD2，顺铂；多西他赛，康布瑞汀氨丁三醇(fosbretabulin tromethamine)，帕尼单抗(panitumumab)，氟尿嘧啶，紫杉醇(paclitaxel)，卡铂；顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，氟尿嘧啶，厄洛替尼盐酸盐，顺铂；未披露的化疗；长春瑞滨，(吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur))；卡铂，西妥昔单抗，拉康舒集(contusugene ladenovec)，西妥昔单抗，甲基氨基乙酰丙酸盐酸盐，环磷酰胺，(吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur))；顺铂，紫杉醇白蛋白结合，卡铂；紫杉醇(paclitaxel)，顺铂；吉西他滨，卡培他滨(capecitabine)；顺铂，多西他赛，Z-100，顺铂；异环磷酰胺；紫杉醇(paclitaxel)，尼妥珠单抗，伊立替康盐酸盐，塞来昔布；甲氨喋呤，能全素(Nutrison)，卡铂；顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；紫杉醇(paclitaxel)，顺铂；紫杉醇(paclitaxel)，顺铂；多西他赛(docetaxel)；长春瑞滨，紫杉醇，(吉美嘧啶+奥替拉西+替加氟)；顺铂，卡铂；紫杉醇(paclitaxel)，甲基氨基乙酰丙酸盐酸盐，Aibin，顺铂；氟尿嘧啶，卟吩姆钠(porfimersodium)，卡铂；顺铂；生育三烯酚(tocotrienol)；长春瑞滨，(吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur))；顺铂；紫杉醇(paclitaxel)，多西他赛，伊匹单抗，顺铂，VB-4847，塞来昔布；沙利度胺(thalidomide)，顺铂；表柔比星；氟尿嘧啶，顺铂；氟尿嘧啶，氟尿嘧啶，卡铂；紫杉醇(paclitaxel)，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；多西他赛，自体细胞因子诱导的杀伤细胞，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，顺铂；表柔比星；氟尿嘧啶，tergenpumatucel-L，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；多西他赛，爱伦多(Elental)，顺铂；尼妥珠单抗；紫杉醇(paclitaxel)，二十碳五烯酸；未公开的营养补充剂，帕博西尼，派姆单抗(Keytruda)，尼妥珠单抗，apatorsen和达克替尼(dacomitinib)。
在特别优选的实施方案中，所述至少一种另外的药学活性成分是化合物，其通常用于治疗和/或预防皮肤的鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期SCC，其中所述化合物是PD-1抑制剂，优选拮抗性PD-1抗体，优选选自由纳武单抗(Opdivo)和派姆单抗(Keytruda)组成的组。
在一些实施方案中，所述至少一种另外的药学活性成分是化合物，其通常用于治疗和/或预防头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，其中所述化合物优选选自由以下组成的组：纳武单抗，西妥昔单抗(Erbitux)，紫杉醇白蛋白结合(Abraxane)，吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur)(TS-1)，多西他赛(Docetaxel，Doxel，Taxotere，Docetaxel An，Nanoxel M，Tautax，Docetaxel-AS，Docetaxel-M，Qvidadotax，Relidoce，Taxelo，Oncodocel，Doxotel，Pacancer，Docetrust，Dodetax，Dodabur，Soulaxcin，Taxedol，Docefim，R1bodocel，Critidoc，Asodoc，Chemodoc，Docelibbs，Docenat，Dincilezan，Dostradixinol，Docefrez，Camitotic，Oncotaxel，Somatixel，Belotaxel，Qvidadotax，Taxceus，Cetadocure，Docetaxel CT，Tevaxter，Docirena，Eurotere，Axtere，Celotax，Taxanit，Drobanos，Cetado，Doxocad，Taxceus，Egidox，Tedocad，Docecad，Docelex，Docetax，Docetere，Dotax，Taxuba，Monotaxel，Taceedo，Detaxl，Docet，Ferdotax，Wintaxel，Kamdocon，Naltoxater)，替加氟+尿嘧啶(Uft，Uft E，tefudex，Unitoral，Luporal Tagracil)，氟尿嘧啶(bn：5-FU，Fluorouracil，Fluorouracile)，吉美嘧啶+奥替拉西+替加氟ODT(bn TS-1组合OD)，硫酸博来霉素(Tecnomicina，Cinaleo，Bleomvcin，Bloicin-S，Bonar，Bleocin，BleoBleomycin Sulfate，Bleocel，Bleotex，Oncobleo，Bleonco，Bleosol，Lyoble，Bleomycin Sulfate，Blenamax，Blenoxane，Bleomicina Bleomycine Bellon Bleoprim)，卡铂(Carboplatin PlatamineCS Carbaccord Carboplatina CarboplatinoParaplatin Carbosin TecnoearbCarbomerck，Paract，Carboplatine CTRS，Carboplatine Intsel Chimos，CarbokemCarbotinol Fauldcarbo，Evocarb，Citoplatina，Platin，Carboplatine Qualimed，Carboplatine，Carboplatino，Carboplatin)，环丙沙星(HYPoflox，Ufexil)，盐酸环丙沙星(Ciprofloxacin Pharma，Prodin，Ciproxin)，顺铂(Cisplatin，Stritin，Ifapla，Accocit，Unistin，Cancertin，Cisplan，Citoplax，Nuoxin，Placis，Cisplatino，Displanor，Cisplatine，Randa，Cisplatin，Cispla，Fauldcispla，Briplatin，Platinex，Platinol，Riboplatin，Platistine CS，Platosin，Aeeocit)，环磷酰胺(Endoxan，Cyclophosphamide)，去氧氟尿苷(doxifluridine)(Doxifluridine，May Vladimir，Doxifluridine)，多柔比星(Doxorubicin Hydrochloride，Adriamycin RDF，Doxorubici，Doxorubicin Hydrochloride，Doxorubicin PFS)，盐酸表柔比星(Brecila，CloridratoDeEpirubicina，Epirubicin，Farmorubicina，Nuovodox，Adnexa，4-Eppedo，Favicin)，氟尿嘧啶(Agicil，Fluorouracil，Fauldfluor，Oncourcil Flocil，5Flucel)，叶酸+甲氨蝶呤(Truxofol)，人腺病毒5型(重组)(Oncorine)，羟基脲(Oxyrea，Durea，Myelostat，Riborea，Unidrea，Ondrea，Hydran，Leukocel，Hydroxyurea，Hydrea)，异环磷酰胺(ifosfamide)(Holoxan，异环磷酰胺EG)，左旋咪唑(levamisole)(Zirsol)，甲氨蝶呤(Tratoben，Methotrexate，Fresexate，Neometho，Fauldmetro，Methotrexate Sodium，Methocel，Hytas，Methaccord，Methofiill，Metotrexato，Traxacord，Plastomet，Tevatrex，Metrex，Caditrex，Carditrex，Vibzi，Imutrex，Biotrexate，Methorex，Mexate，Neotrexate，Oncotrex，Remtrex，Trixilem，Hi-Trex，Metorex，Trex，Unitrexate，Ebetrexac，Fauldexato，Lantarel，Maxtrex，Miantrex CS，Rheumatrex，Folex，Folex PFS，Abitrexate，Trexall，Emthexate，Abitrexate，Meadow，Mexate Aq，Biometrox，Otaxem)，丝裂霉素(丝裂霉素C，Mitomycin，Mitonco，Lyomit)，奈达铂(Jiebaishu，Aoxianda，Aqupla)，尼美舒利(Nimulid)，尼妥珠单抗(Biomab EGFR，Laedemab)，呋喃妥因(Furatsilin)，氧氟沙星(Entof)，紫杉醇(Paclitaxel，Taxol)，培洛霉素硫酸盐(peplomycin sulfate)(Pepleo)，沙培林(picibanil)(Picibanil)，吡柔比星(pirarubicin)(PirarubicinHydrochloride，Therarubicin，Pinorubin)，甘氨双唑钠(sodium glycididazole)(CMNa)，替加氟(Utefos，Icarus，Futraful，替加氟吉美嘧啶奥替拉西钾)，替莫卟吩(temoporfin)(Foscan)，拓泊替康盐酸盐(topotecan hydrochloride)(Topotecan)，乌苯美司(ubenimex)(Ubenimex)，长春碱硫酸盐(Vinblastine，Vblastin，Vincristine，Vincristine Sulfate，Vincristin，Sutivin，Vincrisan，Eldisine)，硫酸长春新碱(Oncovin)，吉非替尼，依他普仑草酸盐(escitalopram oxalate)，激活肿瘤学p53的基因疗法，西维美林盐酸盐(cevimeline hydrochloride)，多西他赛(docetaxel)；来格司亭(lenograstim)，硼替佐米(bortezomib)；多西他赛(docetaxel)；伊立替康，卡铂；紫杉醇(paclitaxel)，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，人乳头瘤病毒疫苗(针对人乳头瘤病毒16型和18型的疫苗接种和未接种疫苗的对照)，卡铂；顺铂；紫杉醇(paclitaxel)，未公开的表皮生长因子受体抑制剂，西妥昔单抗，索拉非尼甲苯磺酸盐(sorafenib tosylate)；舒尼替尼苹果酸盐(sunitinib malate)，氨磷汀，顺铂；地塞米松(dexamethasone)；多西他赛(docetaxel)；胃复安(metoclopramide)，铂类化疗，西妥昔单抗(cetuximab)；尼妥珠单抗，尼妥珠单抗，多巴酚丁胺盐酸盐(dobutamine hydrochloride)；多培沙明盐酸盐(dopexamine hydrochloride)；肾上腺素(epinephrine)；去甲肾上腺素酒石酸氢盐(norepinephrine bitartrate)，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，顺铂；紫杉醇(paclitaxel)，今又生(Gendicine)，Doce onkovis(Docetaxel)，沙培林(Picibanil)，多西他赛(docetaxel)；洛铂(lobaplatin)，土霉素盐酸盐(oxytetracycline hydrochloride)，顺铂；丝裂霉素，博来霉素，尼妥珠单抗，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；尼妥珠单抗，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；环磷酰胺；达卡巴嗪；多西他赛(docetaxel)；多柔比星(doxorubicin)；依托泊苷(etoposide)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；吉西他滨盐酸盐(gemcitabine hydrochloride)；伊立替康盐酸盐(irinotecan hydrochloride)；奥沙利铂(oxaliplatin)；紫杉醇；培美曲塞二钠(pemetrexed disodium)；替莫唑胺，伐尼克兰(varenicline)，乙酰半胱氨酸(acetylcysteine)，多巴胺；去甲肾上腺素，(吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur))，尼妥珠单抗，埃克替尼盐酸盐(icotinib hydrochloride)，苦参(Kushen)(kuh-seng)，羧甲基茯苓多糖(Carboxymethylpachymaran)，BCM-95，Lactofos，培非格司亭(Pegfilgrastim)，美沙酮(methadone)，Varanadi ghrita，顺铂；帕利夫明(palifermin)，西妥昔单抗，顺铂；拉帕替尼二甲苯磺酸盐，吉非替尼，扎妥木单抗(zalutumumab)，厄洛替尼盐酸盐，β-胡萝卜素；E-Tabs，贝伐单抗(bevacizumab)，左旋甲状腺素(levothyroxine)；碘塞罗宁钠(liothyronine sodium)；重组人促甲状腺激素，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；羟基脲，氟尿嘧啶，多西他赛(docetaxel)；St.John′s Wort，卡铂；顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；紫杉醇(paclitaxel)，比亚芬(Biafine)，甲氨喋呤，顺铂；氟尿嘧啶，α生育酚；异维甲酸；重组干扰素α帕尼单抗(panitumumab)，顺铂，博来霉素；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸(leucovorin)；甲氨蝶呤；长春新碱(vincristine)，尼妥珠单抗，帕尼单抗(panitumumab)，氨磷汀(amifostine)；氟尿嘧啶，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，卡培他滨(capecitabine)；顺铂；氟尿嘧啶，培美曲塞二钠，顺铂；吉西他滨，氨甲环酸(tranexamicacid)，卡铂；氟尿嘧啶，头孢唑啉(cefazolin)，依泊亭α(epoetin alfa)，替拉扎明(tirapazamine)，厄洛替尼盐酸盐，西妥昔单抗(cetuximab)；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，甲地孕酮(megestrol)，拉康舒集(contusugene ladenovec)，西维美林盐酸盐(cevimeline hydrochloride)，顺铂；氟尿嘧啶，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；紫杉醇(paclitaxel)，异维甲酸(isotretinoin)，泊非霉素(porfiromycin)，依他普仑草酸盐(escitalopram oxalate)，吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur)，IntraDose(顺铂加肾上腺素)，米索硝唑(misonidazole)，替拉扎明(tirapazamine)，卡铂；顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，吉非替尼，依泊亭α(epoetin alfa)，紫杉醇(paclitaxel)，吉非替尼，帕利夫明(palifermin)，毛果芸香碱(pilocarpine)，塞来昔布(celecoxib)，顺铂；多西他赛(docetaxel)；非格司亭(filgrastim)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；紫杉醇(paclitaxel)，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸，顺铂；吉西他滨；甘露醇，短乳杆菌CD2，谷氨酰胺，卡波金(carbogen)；niacinamidem，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，卡波金(carbogen)；二氧化碳；烟酰胺，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，可溶性β葡聚糖，拉康舒集(contusugene ladenovec)，扎妥木单抗(zalutumumab)，talimogenelaherparepvec，硫糖铝(sucralfate)，多虑平(doxepin)，甲氨喋呤，氨磷汀，辣椒素(capsaicin)，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；帕尼单抗(panitumumab)，阿地白介素，氨甲环酸(tranexamic acid)，硫酸锌，卡介苗[connaught]疫苗；博来霉素；环磷酰胺；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲氨喋呤，氨磷汀，氟尿嘧啶(fluorouracil)；羟基脲，杆菌肽(bacitracin)；克霉唑(clotrimazole)；庆大霉素(gentamicin)，环磷酰胺；多柔比星，pelareorep，非格司亭，肠内营养，己酮可可碱(pentoxifylline)，表柔比星；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸(leucovorin)；丝裂霉素，泊非霉素(porfiromycin)，博来霉素；顺铂；甲氨蝶呤；长春新碱(vincristine)，卡介苗(bacillus calmette-guerinvaccine)；异烟肼(isoniazid)；甲氨喋呤，氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸(leucovorin)；甲氨喋呤，rAd-p53，PV-10，白细胞白细胞介素，尼妥珠单抗，阿法替尼马来酸氢盐(afatinib dimaleate)，阿法替尼马来酸氢盐；顺铂，卡铂；西妥昔单抗(cetuximab)；氟尿嘧啶，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂，奈达铂，多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，尼莫拉唑(nimorazole)，吉西他滨盐酸盐，阿法替尼马来酸氢盐(afatinibdimaleate)，奈达铂，拉康舒集(contusugene ladenovec)，短乳杆菌CD2，西妥昔单抗，尼妥珠单抗，E-10A，顺铂；吉西他滨，顺铂；洛铂(lobaplatin)，内皮抑素(重组)氨苯砜；多西环素(doxycycline)；米诺环素(minocycline)，卡铂；环磷酰胺；多西他赛(docetaxel)；多柔比星(doxorubicin)；紫杉醇(paclitaxel)，纳武单抗，pelareorep，自体干细胞；卡铂；依托泊苷(etoposide)；异环磷酰胺，长春氟宁酒石酸氢盐(vinflunine ditartrate)，吉西他滨，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；丝裂霉素，泊非霉素(porfiiromycin)，Olimel，派姆单抗，AminoPure，奈达铂，Liang Ge San，二十碳五烯酸，塞来昔布；甲氨喋呤，顺铂；派姆单抗，(替加氟+尿嘧啶)；顺铂；表柔比星；丝裂霉素，度伐单抗；tremelimumab，次氯酸钠，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂，顺铂；紫杉醇(paclitaxel)，amcasertib，卡培他滨，R-TPR-033，VB-4847，加巴喷丁(gabapentin)，雷替曲塞(raltitrexed)，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸，顺铂；多西他赛，塞来昔布(celecoxib)，度伐单抗；度伐单抗+tremelimumab，TT-10，(海藻酸钠+碳酸钠+蜂胶+芦荟+金盏花+蜂蜜+洋甘菊)；顺铂，派姆单抗；talimogene laherparepvec，avelumab，尼莫拉唑(nimorazole)，二十碳五烯酸，洛伐他汀(lovastatin)，地塞米松(dexamethasone)；依托泊苷(etoposide)；吉西他滨；培门冬酶(pegaspargase)，伊匹单抗；纳武单抗，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；纳武单抗，卡培他滨(capecitabine)；顺铂；多西他赛，异维甲酸(isotretinoin)，卡铂；顺铂；吉西他滨；紫杉醇(paclitaxel)，厄洛替尼盐酸盐，VB-4847(Proxinium加最佳支持性治疗)，塞来昔布；沙利度胺(thalidomide)，顺铂；氟尿嘧啶，姜黄素(curcumin)，塞来昔布(celecoxib)，咪喹莫特(imiquimod)，顺铂；环磷酰胺；依托泊苷，sotatercept，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；多西他赛，人内皮抑素褪黑激素，表没食子儿茶素没食子酸盐，顺铂；吉西他滨，吉西他滨；紫杉醇(paclitaxel)，(吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur))，二十碳五烯酸；未公开的营养补充剂，塞来昔布；甲氨喋呤，派姆单抗(Keytruda)，阿法替尼马来酸氢盐(afatinib dimaleate)，西妥昔单抗(Erbitux)，度伐单抗，度伐单抗+tremelimumab，E-10A，恩曲替尼(entrectinib)，白细胞白细胞介素(Multikine)，尼妥珠单抗，纳武单抗(Opdivo)，pelareorep(Reolysin)，TT-10，长春氟宁酒石酸氢盐(Javlor)，acalabrutinib，AlloVax和alpelisib。
在特别优选的实施方案中，所述至少一种另外的药学活性成分是化合物，其通常用于治疗和/或预防头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，其中所述化合物是PD-1抑制剂，优选拮抗性PD-1抗体，优选选自由纳武单抗和派姆单抗(Keytruda)组成的组。
在一些实施方案中，所述至少一种另外的药学活性成分是化合物，其通常用于治疗和/或预防腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC，其中所述化合物优选选自由以下组成的组：纳武单抗，西妥昔单抗(Erbitux)，紫杉醇白蛋白结合(Abraxane)，吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur)(TS-1)，多西他赛(Docetaxel，Doxel，Taxotere，Docetaxel An，Nanoxel M，Tautax，Docetaxel-AS，Docetaxel-M，Qvidadotax，Relidoce，Taxelo，Oncodocel，Doxotel，Pacancer，Docetrust，Dodetax，Dodabur，Soulaxcin，Taxedol，Docefim，Ribodocel，Critidoc，Asodoc，Chemodoc，Docelibbs，Docenat，Dincilezan，Dostradixinol，Docefrez，Camitotic，Oncotaxel，Somatixel，Belotaxel，Qvidadotax，Taxceus，Cetadocure，Docetaxel CT，Tevaxter，Docirena，Eurotere，Axtere，Celotax，Taxanit，Drobanos，Cetado，Doxocad，Taxceus，Egidox，Tedocad，Docecad，Docelex，Docetax，Docetere，Dotax，Taxuba，Monotaxel，Taceedo，Detaxl，Docet，Ferdotax，Wintaxel，Kamdocon，Naltoxater)，替加氟+尿嘧啶(Uft，Uft E，tefudex，Unitoral，Luporal Tagracil)，氟尿嘧啶(bn：5-FU，Fluorouracil，Fluorouracile)，吉美嘧啶+奥替拉西+替加氟ODT(bn TS-1组合OD)，硫酸博来霉素(Tecnomicina，Cinaleo，Bleomycin，Bloicin-S，Bonar，Bleocin，BleoBleomycin Sulfate，Bleocel，Bleotex，Oncobleo，Bleonco，Bleosol，Lyoble，Bleomycin Sulfate，Blenamax，Blenoxane，Bleomicina，Bleomycine Bellon Bleoprim)，卡铂(Carboplatin Platamine CSCarbaccord Carboplatina Carboplatino Paraplatin Carbosin TecnocarbCarbomerck，Paract，Carboplatine CTRS，Carboplatine Intsel Chimos，CarbokemCarbotinol Fauldcarbo，Evocarb，Citoplatina，Platin，Carboplatine Qualimed，Carboplatine，Carboplatino，Carboplatin)，环丙沙星(Hypoflox，Ufexil)，盐酸环丙沙星(Ciprofloxacin Pharma，Prodin，Ciproxin)，顺铂(Cisplatin，Stritin，Ifapla，Aeeocit，Unistin，Cancertin，Cisplan，Citoplax，Nuoxin，Placis，Cisplatino，Displanor，Cisplatine，Randa，Cisplatin，Cispla，Fauldcispla，Briplatin，Platinex，Platinol，Riboplatin，Platistine CS，Platosin，Aeeocit)，环磷酰胺(Endoxan，Cyclophosphamide)，去氧氟尿苷(doxifluridine)(Doxifluridine，May Vladimir，Doxifluridine)，多柔比星(Doxorubicin Hydrochloride，Adriamycin RDF，Doxorubici，Doxorubicin Hydrochloride，Doxorubicin PFS)，盐酸表柔比星(Brecila，Cloridrato DeEpirrubicina，Epirubicin，Farmorubicina，Nuovodox，Adnexa，4-Eppedo，Favicin)，氟尿嘧啶(Agicil，Fluorouracil，Fauldfluor，Oncourcil Flocil，5Flucel)，叶酸+甲氨蝶呤(Truxofol)，人腺病毒5型(重组)(Oncorine)，羟基脲(Oxyrea，Durea，Myelostat，Riborea，Unidrea，Ondrea，Hydran，Leukocel，Hydroxyurea，Hydrea)，异环磷酰胺(ifosfamide)(Holoxan，异环磷酰胺EG)，左旋咪唑(levamisole)(Zirsol)，甲氨蝶呤(Tratoben，Methotrexate，Fresexate，Neometho，Fauldmetro，Methotrexate Sodium，Methocel，Hytas，Methaccord，Methofill，Metotrexato，Traxacord，Plastomet，Tevatrex，Metrex，Caditrex，Carditrex，Vibzi，Imutrex，Biotrexate，Methorex，Mexate，Neotrexate，Oncotrex，Remtrex，Trixilem，Hi-Trex，Metorex，Trex，Unitrexate，Ebetrexac，Fauldexato，Lantarel，Maxtrex，Miantrex CS，Rheumatrex，Folex，Folex PFS，Abitrexate，Trexall，Emthexate，Abitrexate，Meadow，Mexate Aq，Biometrox，Otaxem)，丝裂霉素(Mitomycin C，Mitomycin，Mitonco，Lyomit)，奈达铂(Jiebaishu，Aoxianda，Aqupla)，尼美舒利(Nimulid)，尼妥珠单抗(Biomab EGFR，Laedemab)，呋喃妥因(Furatsilin)，氧氟沙星(Entof)，紫杉醇(Paclitaxel，Taxol)，培洛霉素硫酸盐(peplomycin sulfate)(Pepleo)，沙培林(picibanil)(Picibanil)，吡柔比星(pirarubicin)(Pirarubicin Hydrochloride，Therarubicin，Pinorubin)，甘氨双唑钠(sodium glycididazole)(CMNa)，替加氟(Utefos，Icarus，Futraful，替加氟吉美嘧啶奥替拉西钾)，替莫卟吩(temmoporfin)(Foscan)，拓泊替康盐酸盐(topotecan hydroehloride)(Topotecan)，乌苯美司(ubenimex)(Ubenimex)，长春碱硫酸盐(Vinblastine，Vblastin，Vincristine，Vincristine Sulfate，Vincristin，Sutivin，Vincrisan，Eldisine)，硫酸长春新碱(Oncovin)，吉非替尼，依他普仑草酸盐(escitalopram oxalate)，激活肿瘤学p53的基因疗法，西维美林盐酸盐(cevimeline hydrochloride)，多西他赛(docetaxel)；来格司亭(lenograstim)，硼替佐米(bortezomib)；多西他赛(docetaxel)；伊立替康，卡铂；紫杉醇(paclitaxel)，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，人乳头瘤病毒疫苗(针对人乳头瘤病毒16型和18型的疫苗接种和未接种疫苗的对照)，卡铂；顺铂；紫杉醇(paclitaxel)，未公开的表皮生长因子受体抑制剂，西妥昔单抗，索拉非尼甲苯磺酸盐(sorafenib tosylate)；舒尼替尼苹果酸盐(sunitinib malate)，氨磷汀，顺铂；地塞米松(dexamethasone)；多西他赛(docetaxel)；胃复安(metoclopramide)，铂类化疗，西妥昔单抗(cetuximab)；尼妥珠单抗，尼妥珠单抗，多巴酚丁胺盐酸盐(dobutamine hydrochloride)；多培沙明盐酸盐(dopexamine hydrochloride)；肾上腺素(epinephrine)；去甲肾上腺素酒石酸氢盐(norepinephrine bitartrate)，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，顺铂；紫杉醇(paclitaxel)，今又生(Gendicine)，Doce onkovis(Docetaxel)，沙培林(Picibanil)，多西他赛(docetaxel)；洛铂(lobaplatin)，土霉素盐酸盐(oxytetracycline hydrochloride)，顺铂；丝裂霉素，博来霉素(bleomycin)，尼妥珠单抗，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；尼妥珠单抗，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；环磷酰胺；达卡巴嗪；多西他赛(docetaxel)；多柔比星(doxorubicin)；依托泊苷(etoposide)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；吉西他滨盐酸盐(gemcitabinehydrochloride)；伊立替康盐酸盐(irinotecan hydrochloride)；奥沙利铂(oxaliplatin)；紫杉醇；培美曲塞二钠(pemetrexed disodium)；替莫唑胺，伐尼克兰(varenicline)，乙酰半胱氨酸(acetylcysteine)，多巴胺；去甲肾上腺素，(吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur))，尼妥珠单抗，埃克替尼盐酸盐(icotinib hydrochloride)，苦参(Kushen)(kuh-seng)，羧甲基茯苓多糖(Carboxymethylpachymaran)，BCM-95，Lactofos，培非格司亭(Pegfilgrastim)，美沙酮(methadone)，Varanadi ghrita，顺铂；帕利夫明(palifermin)，西妥昔单抗，顺铂；拉帕替尼二甲苯磺酸盐，吉非替尼，扎妥木单抗(zalutumumab)，厄洛替尼盐酸盐，β-胡萝卜素；E-Tabs，贝伐单抗(bevacizumab)，左旋甲状腺素(levothyroxine)；碘塞罗宁钠(liothyronine sodium)；重组人促甲状腺激素，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；羟基脲，氟尿嘧啶，多西他赛(docetaxel)；St.John′s Wort，卡铂；顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；紫杉醇(paclitaxel)，比亚芬(Biafine)，甲氨喋呤，顺铂；氟尿嘧啶，α生育酚；异维甲酸；重组干扰素α帕尼单抗(panitumumab)，顺铂，博来霉素；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸(leucovorin)；甲氨蝶呤；长春新碱(vincristine)，尼妥珠单抗，帕尼单抗(panitumumab)，氨磷汀(amifostine)；氟尿嘧啶，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，卡培他滨(capecitabine)；顺铂；氟尿嘧啶，培美曲塞二钠，顺铂；吉西他滨，氨甲环酸(tranexamic acid)，卡铂；氟尿嘧啶，头孢唑啉(cefazolin)，依泊亭α(epoetin alfa)，替拉扎明(tirapazamine)，厄洛替尼盐酸盐，西妥昔单抗(cetuximab)；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，甲地孕酮(megestrol)，拉康舒集(contusugeneladenovec)，西维美林盐酸盐(cevimeline hydrochloride)，顺铂；氟尿嘧啶，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；紫杉醇(paclitaxel)，异维甲酸(isotretinoin)，泊非霉素(porfiromycin)，依他普仑草酸盐(escitalopram oxalate)，吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur)，IntraDose(顺铂加肾上腺素)，米索硝唑(misonidazole)，替拉扎明(tirapazamine)，卡铂；顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，吉非替尼，依泊亭α(epoetin alfa)，紫杉醇(paclitaxel)，吉非替尼，帕利夫明(palifermin)，毛果芸香碱(pilocarpine)，塞来昔布(celecoxib)，顺铂；多西他赛(docetaxel)；非格司亭(filgrastim)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；紫杉醇(paclitaxel)，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸，顺铂；吉西他滨；甘露醇，短乳杆菌CD2，谷氨酰胺，卡波金(carbogen)；niacinamidem，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，卡波金(carbogen)；二氧化碳；烟酰胺，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，可溶性β葡聚糖，拉康舒集(contusugene ladenovec)，扎妥木单抗(zalutumumab)，talimogene laherparepvec，硫糖铝(sucralfate)，多虑平(doxepin)，甲氨喋呤，氨磷汀，辣椒素(capsaicin)，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；帕尼单抗(panitumumab)，阿地白介素，氨甲环酸(tranexamic acid)，硫酸锌，卡介苗[connaught]疫苗；博来霉素；环磷酰胺；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲氨喋呤，氨磷汀，氟尿嘧啶(fluorouracil)；羟基脲，杆菌肽(bacitracin)；克霉唑(clotrimazole)；庆大霉素(gentamicin)，环磷酰胺；多柔比星，pelareorep，非格司亭，肠内营养，己酮可可碱(pentoxifylline)，表柔比星；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸(leucovorin)；丝裂霉素，泊非霉素(porfiiromycin)，博来霉素；顺铂；甲氨蝶呤；长春新碱(vincristine)，卡介苗(bacillus calmette-guerin vaccine)；异烟肼(isoniazid)；甲氨喋呤，氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸(1eucovorin)；甲氨喋呤，rAd-p53，PV-10，白细胞白细胞介素，尼妥珠单抗，阿法替尼马来酸氢盐(afatinib dimaleate)，阿法替尼马来酸氢盐；顺铂，卡铂；西妥昔单抗(cetuximab)；氟尿嘧啶，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂，奈达铂，多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，尼莫拉唑(nimorazole)，吉西他滨盐酸盐，阿法替尼马来酸氢盐(afatinib dimaleate)，奈达铂，拉康舒集(contusugene ladenovec)，短乳杆菌CD2，西妥昔单抗，尼妥珠单抗，E-10A，顺铂；吉西他滨，顺铂；洛铂(lobaplatin)，内皮抑素(重组)_氨苯砜；多西环素(doxycycline)；米诺环素(minocycline)，卡铂；环磷酰胺；多西他赛(docetaxel)；多柔比星(doxorubicin)；紫杉醇(paclitaxel)，纳武单抗，pelareorep，自体干细胞；卡铂；依托泊苷(etoposide)；异环磷酰胺，长春氟宁酒石酸氢盐(vinflunineditartrate)，吉西他滨，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；丝裂霉素，泊非霉素(porfiromycin)，Olimel，派姆单抗，AminoPure，奈达铂，Liang Ge San，二十碳五烯酸，塞来昔布；甲氨喋呤，顺铂；派姆单抗，(替加氟+尿嘧啶)；顺铂；表柔比星；丝裂霉素，度伐单抗；tremelimumab，次氯酸钠，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂，顺铂；紫杉醇(paclitaxel)，amcasertib，卡培他滨，R-TPR-033，VB-4847，加巴喷丁(gabapentin)，雷替曲塞(raltitrexed)，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸，顺铂；多西他赛，塞来昔布(celecoxib)，度伐单抗；度伐单抗+tremelimumab，TT-10，(海藻酸钠+碳酸钠+蜂胶+芦荟+金盏花+蜂蜜+洋甘菊)；顺铂，派姆单抗；talimogene laherparepvec，avelumab，尼莫拉唑(nimorazole)，二十碳五烯酸，洛伐他汀(lovastatin)，地塞米松(dexamethasone)；依托泊苷(etoposide)；吉西他滨；培门冬酶(pegaspargase)，伊匹单抗；纳武单抗，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；纳武单抗，卡培他滨(capecitabine)；顺铂；多西他赛，异维甲酸(isotretinoin)，卡铂；顺铂；吉西他滨；紫杉醇(paclitaxel)，厄洛替尼盐酸盐，VB-4847(Proxinium加最佳支持性治疗)，塞来昔布；沙利度胺(thalidomide)，顺铂；氟尿嘧啶，姜黄素(curcumin)，塞来昔布(celecoxib)，咪喹莫特(imiquimod)，顺铂；环磷酰胺；依托泊苷，sotatercept，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；多西他赛，人内皮抑素褪黑激素，表没食子儿茶素没食子酸盐，顺铂；吉西他滨，吉西他滨；紫杉醇(paclitaxel)，(吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur))，二十碳五烯酸；未公开的营养补充剂，塞来昔布；甲氨喋呤，派姆单抗(Keytruda)，阿法替尼马来酸氢盐(afatinib dimaleate)，西妥昔单抗(Erbitux)，度伐单抗，度伐单抗+tremelimumab，E-10A，恩曲替尼(entrectinib)，白细胞白细胞介素(Multikine)，尼妥珠单抗，纳武单抗(Opdivo)，pelareorep(Reolysin)，TT-10，长春氟宁酒石酸氢盐(Javlor)，acalabrutinib，AlloVax和alpelisib。
在一些实施方案中，所述至少一种另外的药学活性成分是化合物，其通常用于治疗和/或预防皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤，其中所述化合物优选选自由以下组成的组：纳武单抗，西妥昔单抗(Erbitux)，紫杉醇白蛋白结合(Abraxane)，吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur)(TS-1)，多西他赛(Docetaxel，Doxel，Taxotere，Docetaxel An，Nanoxel M，Tautax，Docetaxel-AS，Docetaxel-M，Qvidadotax，Relidoce，Taxelo，Oncodocel，Doxotel，Pacancer，Docetrust，Dodetax，Dodabur，Soulaxcin，Taxedol，Docefim，Ribodocel，Critidoc，Asodoc，Chemodoc，Docelibbs，Docenat，Dincilezan，Dostradixinol，Docefrez，Camitotic，Oncotaxel，Somatixel，Belotaxel，Qvidadotax，Taxceus，Cetadocure，Docetaxel CT，Tevaxter，Docirena，Eurotere，Axtere，Celotax，Taxanit，Drobanos，Cetado，Doxocad，Taxceus，Egidox，Tedocad，Docecad，Docelex，Docetax，Docetere，Dotax，Taxuba，Monotaxel，Taceedo，Detaxl，Docet，Ferdotax，Wintaxel，Kamdocon，Naltoxater)，替加氟+尿嘧啶(Uft，Uft E，tefudex，Unitoral，Luporal Tagracil)，氟尿嘧啶(bn：5-FU，Fluorouracil，Fluorouracile)，吉美嘧啶+奥替拉西+替加氟ODT(bn TS-1组合OD)，硫酸博来霉素(Tecnomicina，Cinaleo，Bleomycin，Bloicin-S，Bonar，Bleocin，BleoBleomycin Sulfate，Bleocel，Bleotex，Oncobleo，Bleonco，Bleosol，Lyoble，Bleomycin Sulfate，Blenamax，Blenoxane，Bleomicina，Bleomycine Bellon Bleoprim)，卡铂(Carboplatin PlatamineCS Carbaccord Carboplatina Carboplatino Paraplatin Carbosin TecnocarbCarbomerck，Paract，Carboplatine CTRS，Carboplatine Intsel Chimos，CarbokemCarbotinol Fauldcarbo，Evocarb，Citoplatina，Platin，Carboplatine Qualimed，Carboplatine，Carboplatino，Carboplatin)，环丙沙星(Hypoflox，Ufexil)，盐酸环丙沙星(Ciprofloxacin Pharma，Prodin，Ciproxin)，顺铂(Cisplatin，Stritin，Ifapla，Accocit，Unistin，Cancertin，Cisplan，Citoplax，Nuoxin，Placis，Cisplatino，Displanor，Cisplatine，Randa，Cisplatin，Cispla，Fauldcispla，Briplatin，Platinex，Platinol，Riboplatin，Platistine CS，Platosin，Accocit)，环磷酰胺(Endoxan，Cyclophosphamide)，去氧氟尿苷(doxifluridine)(Doxifluridine，May Vladimir，Doxifluridine)，多柔比星(Doxorubicin Hydrochloride，Adriamycin RDF，Doxorubici，Doxorubicin Hydrochloride，Doxorubicin PFS)，盐酸表柔比星(Brecila，CloridratoDeEpirrubicina，Epirubicin，Farmorubicina，Nuovodox，Adnexa，4-Eppedo，Favicin)，氟尿嘧啶(Agicil，Fluorouracil，Fauldfluor，Oncourcil Flocil，5Flucel)，叶酸+甲氨蝶呤(Truxofol)，人腺病毒5型(重组)(Oncorine)，羟基脲(Oxyrea，Durea，Myelostat，Riborea，Unidrea，Ondrea，Hydran，Leukocel，Hydroxyurea，Hydrea)，异环磷酰胺(ifosfamide)(Holoxan，异环磷酰胺EG)，左旋咪唑(levamisole)(Zirsol)，甲氨蝶呤(Tratoben，Methotrexate，Fresexate，Neometho，Fauldmetro，Methotrexate Sodium，Methocel，Hytas，Methaccord，Methofill，Metotrexato，Traxacord，Plastomet，Tevatrex，Metrex，Caditrex，Carditrex，Vibzi，Imutrex，Biotrexate，Methorex，Mexate，Neotrexate，Oncotrex，Remtrex，Trixilem，Hi-Trex，Metorex，Trex，Unitrexate，Ebetrexac，Fauldexato，Lantarel，Maxtrex，Miantrex CS，Rheumatrex，Folex，Folex PFS，Abitrexate，Trexall，Emthexate，Abitrexate，Meadow，Mexate Aq，Biometrox，Otaxem)，丝裂霉素(Mitomycin C，Mitomycin，Mitonco，Lyomit)，奈达铂(Jiebaishu，Aoxianda，Aqupla)，尼美舒利(Nimulid)，尼妥珠单抗(Biomab EGFR，Laedemab)，呋喃妥因(Furatsilin)，氧氟沙星(Entof)，紫杉醇(Paclitaxel，Taxol)，培洛霉素硫酸盐(peplomycin sulfate)(Pepleo)，沙培林(picibanil)(Picibanil)，吡柔比星(pirarubicin)(Pirarubicin Hydrochloride，Therarubicin，Pinorubin)，甘氨双唑钠(sodium glycididazole)(CMNa)，替加氟(Utefos，Icarus，Futraful，替加氟吉美嘧啶奥替拉西钾)，替莫卟吩(temoporfin)(Foscan)，拓泊替康盐酸盐(topotecan hydrochloride)(Topotecan)，乌苯美司(ubenimex)(Ubenimex)，长春碱硫酸盐(Vinblastine，Vblastin，Vincristme，Vmcristme Sulfate，Vincristin，Sutivin，Vincrisan，Eldisine)，硫酸长春新碱(Oncovin)，吉非替尼，依他普仑草酸盐(escitalopram oxalate)，激活肿瘤学p53的基因疗法，西维美林盐酸盐(cevimeline hydrochloride)，多西他赛(docetaxel)；来格司亭(lenograstim)，硼替佐米(bortezomib)；多西他赛(docetaxel)；伊立替康，卡铂；紫杉醇(paclitaxel)，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，人乳头瘤病毒疫苗(针对人乳头瘤病毒16型和18型的疫苗接种和未接种疫苗的对照)，卡铂；顺铂；紫杉醇(paclitaxel)，未公开的表皮生长因子受体抑制剂，西妥昔单抗，索拉非尼甲苯磺酸盐(sorafenib tosylate)；舒尼替尼苹果酸盐(sunitinib malate)，氨磷汀，顺铂；地塞米松(dexamethasone)；多西他赛(docetaxel)；胃复安(metoclopramide)，铂类化疗，西妥昔单抗(cetuximab)；尼妥珠单抗，尼妥珠单抗，多巴酚丁胺盐酸盐(dobutamine hydrochloride)；多培沙明盐酸盐(dopexamine hydrochloride)；肾上腺素(epinephrine)；去甲肾上腺素酒石酸氢盐(norepinephrine bitartrate)，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，顺铂；紫杉醇(paclitaxel)，今又生(Gendicine)，Doce onkovis(Docetaxel)，沙培林(Picibanil)，多西他赛(docetaxel)；洛铂(lobaplatin)，土霉素盐酸盐(oxytetracycline hydrochloride)，顺铂；丝裂霉素，博来霉素(bleomycin)，尼妥珠单抗，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；尼妥珠单抗，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；环磷酰胺；达卡巴嗪；多西他赛(docetaxel)；多柔比星(doxorubicin)；依托泊苷(etoposide)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；吉西他滨盐酸盐(gemcitabinehydrochloride)；伊立替康盐酸盐(irinotecan hydrochloride)；奥沙利铂(oxaliplatin)；紫杉醇；培美曲塞二钠(pemetrexed disodium)；替莫唑胺，伐尼克兰(varenicline)，乙酰半胱氨酸(acetylcysteine)，多巴胺；去甲肾上腺素，(吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur))，尼妥珠单抗，埃克替尼盐酸盐(icotinib hydrochloride)，苦参(Kushen)(kuh-seng)，羧甲基茯苓多糖(Carboxymethylpachymaran)，BCM-95，Lactofos，培非格司亭(Pegfilgrastim)，美沙酮(methadone)，Varanadi ghrita，顺铂；帕利夫明(palifermin)，西妥昔单抗，顺铂；拉帕替尼二甲苯磺酸盐，吉非替尼，扎妥木单抗(zalutumumab)，厄洛替尼盐酸盐，β-胡萝卜素；E-Tabs，贝伐单抗(bevacizumab)，左旋甲状腺素(levothyroxine)；碘塞罗宁钠(liothyronine sodium)；重组人促甲状腺激素，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；羟基脲，氟尿嘧啶，多西他赛(docetaxel)；St.John′s Wort，卡铂；顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；紫杉醇(paclitaxel)，比亚芬(Biafine)，甲氨喋呤，顺铂；氟尿嘧啶，α生育酚；异维甲酸；重组干扰素α帕尼单抗(panitumumab)，顺铂，博来霉素；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸(leucovorin)；甲氨蝶呤；长春新碱(vincristine)，尼妥珠单抗，帕尼单抗(panitumumab)，氨磷汀(amifostine)；氟尿嘧啶，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，卡培他滨(capecitabine)；顺铂；氟尿嘧啶，培美曲塞二钠，顺铂；吉西他滨，氨甲环酸(tranexamic acid)，卡铂；氟尿嘧啶，头孢唑啉(cefazolin)，依泊亭α(epoetin alfa)，替拉扎明(tirapazamine)，厄洛替尼盐酸盐，西妥昔单抗(cetuximab)；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，甲地孕酮(megestrol)，拉康舒集(contusugeneladenovec)，西维美林盐酸盐(cevimeline hydrochloride)，顺铂；氟尿嘧啶，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；紫杉醇(paclitaxel)，异维甲酸(isotretinoin)，泊非霉素(porfiromycin)，依他普仑草酸盐(escitalopram oxalate)，吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur)，IntraDose(顺铂加肾上腺素)，米索硝唑(misonidazole)，替拉扎明(tirapazamine)，卡铂；顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，吉非替尼，依泊亭α(epoetin alfa)，紫杉醇(paclitaxel)，吉非替尼，帕利夫明(palifermin)，毛果芸香碱(pilocarpine)，塞来昔布(celecoxib)，顺铂；多西他赛(docetaxel)；非格司亭(filgrastim)；氟尿嘧啶(fluorouracil)；紫杉醇(paclitaxel)，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸，顺铂；吉西他滨；甘露醇，短乳杆菌CD2，谷氨酰胺，卡波金(carbogen)；niacinamidem，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，卡波金(carbogen)；二氧化碳；烟酰胺，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，可溶性β葡聚糖，拉康舒集(contusugene ladenovec)，扎妥木单抗(zalutumumab)，talimogene laherparepvec，硫糖铝(sucralfate)，多虑平(doxepin)，甲氨喋呤，氨磷汀，辣椒素(capsaicin)，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；帕尼单抗(panitumumab)，阿地白介素，氨甲环酸(tranexamic acid)，硫酸锌，卡介苗[connaught]疫苗；博来霉素；环磷酰胺；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲氨喋呤，氨磷汀，氟尿嘧啶(fluorouracil)；羟基脲，杆菌肽(bacitracin)；克霉唑(clotrimazole)；庆大霉素(gentamicin)，环磷酰胺；多柔比星，pelareorep，非格司亭，肠内营养，己酮可可碱(pentoxifylline)，表柔比星；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸(leucovorin)；丝裂霉素，泊非霉素(porfiromycin)，博来霉素；顺铂；甲氨蝶呤；长春新碱(vincristine)，卡介苗(bacillus calmette-guerin vaccine)；异烟肼(isoniazid)；甲氨喋呤，氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸(1eucovorin)；甲氨喋呤，rAd-p53，PV-10，白细胞白细胞介素，尼妥珠单抗，阿法替尼马来酸氢盐(afatinib dimaleate)，阿法替尼马来酸氢盐；顺铂，卡铂；西妥昔单抗(cetuximab)；氟尿嘧啶，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂，奈达铂，多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，尼莫拉唑(nimorazole)，吉西他滨盐酸盐，阿法替尼马来酸氢盐(afatinib dimaleatte)，奈达铂，拉康舒集(contusugene ladenovec)，短乳杆菌CD2，西妥昔单抗，尼妥珠单抗，E-10A，顺铂；吉西他滨，顺铂；洛铂(lobaplatin)，内皮抑素(重组)_氨苯砜；多西环素(doxycycline)；米诺环素(minocycline)，卡铂；环磷酰胺；多西他赛(docetaxel)；多柔比星(doxorubicin)；紫杉醇(paclitaxel)，纳武单抗，pelareorep，自体干细胞；卡铂；依托泊苷(etoposide)；异环磷酰胺，长春氟宁酒石酸氢盐(vinflunineditartrate)，吉西他滨，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；丝裂霉素，泊非霉素(porfiromycin)，Olimel，派姆单抗，AminoPure，奈达铂，Liang Ge San，二十碳五烯酸，塞来昔布；甲氨喋呤，顺铂；派姆单抗，(替加氟+尿嘧啶)；顺铂；表柔比星；丝裂霉素，度伐单抗；tremelimumab，次氯酸钠，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂，顺铂；紫杉醇(paclitaxel)，amcasertib，卡培他滨，R-TPR-033，VB-4847，加巴喷丁(gabapentin)，雷替曲塞(raltitrexed)，顺铂；氟尿嘧啶(fluorouracil)；甲酰四氢叶酸，顺铂；多西他赛，塞来昔布(celecoxib)，度伐单抗；度伐单抗+tremelimumab，TT-10，(海藻酸钠+碳酸钠+蜂胶+芦荟+金盏花+蜂蜜+洋甘菊)；顺铂，派姆单抗；talimogene laherparepvec，avelumab，尼莫拉唑(nimorazole)，二十碳五烯酸，洛伐他汀(lovastatin)，地塞米松(dexamethasone)；依托泊苷(etoposide)；吉西他滨；培门冬酶(pegaspargase)，伊匹单抗；纳武单抗，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；纳武单抗，卡培他滨(capecitabine)；顺铂；多西他赛，异维甲酸(isotretinoin)，卡铂；顺铂；吉西他滨；紫杉醇(paclitaxel)，厄洛替尼盐酸盐，VB-4847(Proxinium加最佳支持性治疗)，塞来昔布；沙利度胺(thalidomide)，顺铂；氟尿嘧啶，姜黄素(curcumin)，塞来昔布(celecoxib)，咪喹莫特(imiquimod)，顺铂；环磷酰胺；依托泊苷，sotatercept，顺铂；多西他赛(docetaxel)；氟尿嘧啶，西妥昔单抗(cetuximab)；顺铂；多西他赛，人内皮抑素褪黑激素，表没食子儿茶素没食子酸盐，顺铂；吉西他滨，吉西他滨；紫杉醇(paclitaxel)，(吉美嘧啶(gimeracil)+奥替拉西(oteracil)+替加氟(tegafur))，二十碳五烯酸；未公开的营养补充剂，塞来昔布；甲氨喋呤，派姆单抗(Keytruda)，阿法替尼马来酸氢盐(afatinib dimaleate)，西妥昔单抗(Erbitux)，度伐单抗，度伐单抗+tremelimumab，E-10A，恩曲替尼(entrectinib)，白细胞白细胞介素(Multikine)，尼妥珠单抗，纳武单抗(Opdivo)，pelareorep(Reolysin)，TT-10，长春氟宁酒石酸氢盐(Javlor)，acalabrutinib，AlloVax和alpelisib。
在一些实施方案中，所述至少一种另外的药学活性成分是化合物，其通常用于治疗和/或预防外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选手术或化疗难治性VSCC，最优选为手术或化疗难治性晚期VSCC，其中所述化合物优选选自由以下组成的组：丝裂霉素-C2，顺铂，卡铂，长春瑞滨，紫杉醇(paclitaxel)，酪氨酸激酶抑制剂(例如厄洛替尼)，纳武单抗，硫酸博来霉素(例如博来霉素，硫酸博来霉素blenamax，tevableo，oncobleo，bleo，bloicin-S)，5-氟尿嘧啶(5-FU)，加德西(Gardasil)9(人乳头瘤病毒(9价)疫苗)，盐酸奥米加南(omiganan pentahydrochloride)，alisertib，ISA-101(13种合成长肽(25-35个氨基酸长)，衍生自HPV16病毒的E6和E7致癌蛋白)，PDS-0101，Vicoryx(P16_37-63疫苗)，TA-CIN(包含来自HPV16的衣壳蛋白L2，E6和E7的融合蛋白疫苗)和人乳头瘤病毒16E6肽疫苗。
根据一些实施方案，所述至少一种另外的药学活性成分是治疗性肽或蛋白质(例如抗体，诱饵受体或细胞因子)或其片段或变体。所述治疗性肽或蛋白质或其片段或变体可以原样提供或以编码所述治疗性肽或蛋白质或其片段或变体的核酸(例如本文所述的RNA)的形式提供。进一步优选的是，治疗性肽或蛋白质(例如抗体，诱饵受体或细胞因子)包含信号肽，例如分泌信号肽。此类信号肽是序列，其通常表现出约15至30个氨基酸的长度，并且优选位于编码肽的N末端，但不限于此。如本文所定义的信号肽优选地允许治疗性肽或蛋白质或其片段或变体定位于某些细胞膜或某些细胞区室，优选细胞表面，细胞质膜，内质网(ER)或内体-溶酶体区室。
在某些实施方案中，信号肽可选自根据国际专利申请WO2017/081082的SEQ IDNO：1-1115和SEQ ID NO：1728的氨基酸序列的列表，或任何这些序列的片段或变体。在核酸水平上，可以选择编码这种氨基酸序列的任何核酸序列(例如RNA序列)。在本上下文中，WO2017/081082的公开内容在此引入作为参考。
如本文所定义的信号肽序列的实例包括但不限于经典或非经典MHC分子的信号序列(例如MHC I和II分子的信号序列，例如MHC I类分子HLA-A*0201的信号序列)(或其片段或变体)，如本文所定义的细胞因子或免疫球蛋白，如本文所定义的免疫球蛋白或抗体的恒定链，Lamp1，Tapasin，Erp57，Calretikulin，Calnexin，其他膜相关蛋白，与内质网相关的蛋白质(ER)或与内体-溶酶体区室相关的蛋白质。在本发明的上下文中特别优选的是MHC I类分子HLA-A*0201的信号序列或其片段或变体。
根据优选的实施方案，所述至少一种另外的药学活性成分是治疗性肽或蛋白质或其片段或变体，其包含衍生自HLA-A2，HsPLAT，HsEPO，HsALB，IgE，HsCD5，HsIL2，HsCTRB2，人免疫球蛋白重链，人免疫球蛋白轻链，GpLuc，小鼠免疫球蛋白κ，NrChit1，C1Lp1.1，NgNepl，HsAzu1，HsCD33，VcCtxB，HsCST4，HsIns-isol，HsSPARC，H1N1(Netherlands2009)，FV，MHCII或JEV的信号序列(或其片段或变体)。
进一步优选所述至少一种另外的药学活性成分是治疗性肽或蛋白质(例如抗体，诱饵受体或细胞因子)或其片段或变体，其包含SEQ ID NO：739-769任一个的氨基酸序列或由其组成，或这些氨基酸序列中的任一个的片段或变体。优选地，所述至少一种另外的药学活性成分是治疗性肽或蛋白质(例如抗体，诱饵受体或细胞因子)或其片段或变体，其包含与SEQ ID NO：739-769中的任一个相同的或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的氨基酸序列或由其组成。
根据特别优选的实施方案，所述至少一种另外的药学活性成分是检查点调节剂或细胞因子。
发现负调节性T细胞表面分子，其在激活的T细胞中上调以抑制其活性，从而降低所述激活的T细胞在杀死肿瘤细胞中的有效性。这些抑制性分子由于与T细胞共刺激分子CD28的同源性而被称为负共刺激分子。这些蛋白质，也称为免疫检查点蛋白，在多种途径中起作用，包括早期激活信号的减弱，正共刺激的竞争和抗原呈递细胞的直接抑制(Bour-Jordan等.，2011.Immunol Rev.241(1)：180-205)。
在本发明的上下文中，检查点调节剂通常是分子，例如蛋白质(例如抗体)，显性负受体，诱饵受体，或其配体或片段或变体，其调节免疫检查点蛋白的功能，例如它抑制或降低检查点抑制剂(或抑制性检查点分子)的活性，或它刺激或增强检查点刺激剂(或刺激性检查点分子)的活性。因此，如本文所定义的检查点调节剂影响检查点分子的活性。
在本文中，抑制性检查点分子被定义为检查点抑制剂并且可以同义使用。此外，刺激性检查点分子被定义为检查点刺激剂并且可以同义使用。
优选地，检查点调节剂选自激动性抗体，拮抗性抗体，配体，显性负性受体和诱饵受体或其组合。
产生和使用mRNA编码的抗体的方法是本领域已知的(例如WO2008/083949或PCT/EP2017/060226)。
在本发明的上下文中可被检查点调节剂抑制的优选的抑制性检查点分子是PD-1，PD-L1，CTLA-4，PD-L2，LAG3，TIM3/HAVCR2，2B4，A2aR，B7H3，B7H4，BTLA，CD30，CD160，CD155，GAL9，HVEM，IDO1，IDO2，KIR，LAIR1和VISTA。
在本发明的上下文中可被检查点调节剂刺激的优选的刺激性检查点分子是CD2，CD27，CD28，CD40，CD137，CD226，CD276，GITR，ICOS，OX40和CD70。
根据优选的实施方案，isRNA用于本文所述的用途，其中所述用途包含作为另外的药学活性成分的选自由以下各项组成的检查点调节剂组成的组的检查点调节剂：PD-1抑制剂，PD-L1抑制剂，PD-L2抑制剂，CTLA-4抑制剂，LAG3抑制剂，TIM3抑制剂，TIGIT抑制剂，OX40刺激剂，4-1BB刺激剂，CD40L刺激剂，CD28刺激剂和GITR刺激剂。
根据优选的实施方案，如本文所用的检查点调节剂靶向PD-1途径的成员。PD-1途径的成员通常是蛋白质，其与PD-1信号传导相关。一方面，该组包含蛋白质(其在PD-1上游诱导PD-1信号传导)，例如PD-1，PD-L1和PD-L2的配体，以及信号传导受体PD-1。另一方面，该组包含PD-1受体下游的信号转导蛋白。在本发明的上下文中特别优选作为PD-1途径的成员是PD-1，PD-L1和PD-L2。
在本发明的上下文中，PD-1途径拮抗剂(或PD-1抑制剂)优选在本文中定义为能够损害PD-1途径信号传导优选PD-1受体介导的信号传导的化合物。因此，PD-1途径拮抗剂可以是针对能够拮抗PD-1途径信号传导的PD-1途径的任何成员的任何拮抗剂。
在优选的实施方案中，本文使用的检查点调节剂是PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂，其中PD-1抑制剂优选是针对PD-1的拮抗性抗体，PD-L1抑制剂优选是针对PD-L1的拮抗性抗体。
在本文中，拮抗剂可以是如本文所定义的靶向PD-1途径的任何成员的拮抗性抗体，优选针对PD-1受体，PD-L1或PD-L2的拮抗性抗体。这种拮抗性抗体也可以由核酸编码。而且，PD-1途径拮抗剂可以是阻断PD1配体活性的PD-1受体的片段。B7-1或其片段也可以作为PD1拮抗配体。另外，PD-1途径拮抗剂可以是包含能够结合PD-1但例如通过抑制PD-1和B7-H1或B7-DL相互作用阻止PD-1信号传导的氨基酸序列的蛋白质(或是编码能够结合PD-1但例如通过抑制PD-1和B7-H1或B7-DL相互作用阻止PD-1信号传导的氨基酸序列的核酸)(WO 2014/127917；WO2012062218)。
特别优选的是抗PD1抗体Nivolumab(MDX-1106/BMS-936558/ONO-4538)，(Brahmer等.，2010.J Clin Oncol.28(19)：3167-75；PMID：20516446)；Pidilizumab(CT-011)，(Berger等.，2008.Clin Cancer Res.14(10)：3044-51；PMID：18483370)；Pembrolizumab(MK-3475，SCH 900475)；AMP-224和MEDI0680(AMP-514)。
特别优选的还有抗PD-L1抗体MDX-1105/BMS-936559(Brahmer等.2012.N Engl JMed.366(26)：2455-65；PMID：22658128)；阿特朱单抗(atezolizumab)(MPDL3280A/RG7446)；度伐单抗(MEDI4736)；和avelumab(MSB0010718)。
在另一个优选的实施方案中，检查点调节剂是诱饵受体(例如可溶性受体)。优选地，诱饵受体是可溶性PDl受体。更优选地，诱饵受体是PD-1受体的可溶性变体或其片段或变体，其中PD-1受体衍生自哺乳动物，优选选自下组，该组包括但不限于山羊，牛，猪，狗，猫，驴，马，猴，猿，啮齿动物(例如小鼠，仓鼠，兔或大鼠)，最优选人。甚至更优选地，诱饵受体是PD-1受体的可溶性变体或其片段或变体，其中PD-1受体包含与根据SEQ ID NO：1的氨基酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的氨基酸序列或其片段或变体。在特别优选的实施方案中，本文中用作检查点调节剂的诱饵受体是可溶性PD-1受体，其包含与根据SEQ ID NO：2的氨基酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的氨基酸序列或其片段或变体。
根据另一个实施方案，本文使用的检查点调节剂是OX40刺激剂。OX40是TNFR-受体超家族的成员，并且在抗原激活的哺乳动物CD4+和CD8+T淋巴细胞的表面上表达。OX40配体(OX40L，也称为gp34，ACT-4-L和CD252)是与OX40受体特异性相互作用的蛋白质。术语OX40L包括完整的OX40配体，可溶性OX40配体和融合蛋白，所述融合蛋白包含与第二部分(例如蛋白质结构域)共价连接的OX40配体的功能活性部分。OX40L的定义中还包括变体，其氨基酸序列与天然存在的OX40L不同，但保留了与OX40受体特异性结合的能力。进一步包括在OX40L的定义中的是其变体，其增强OX40的生物活性。OX40激动剂是诱导或增强OX40的生物活性(例如由OX40介导的信号转导)的分子。OX40激动剂优选在本文中定义为能够特异性结合OX40的结合分子。因此，OX40激动剂可以是与OX40结合并且能够刺激OX40信号传导的任何激动剂。在这种情况下，OX40激动剂可以是结合OX40的激动性抗体。
OX40激动剂和抗OX40单克隆抗体描述于WO1995/021251，WO1995/012673和WO1995/21915中。特别优选的是抗OX40抗体9B12，一种针对人OX40细胞外结构域的鼠抗OX40单克隆抗体(Weinberg等.，2006.J.Immunother.29(6)：575-585)。
在另一个实施方案中，如本文所用的检查点调节剂是拮抗性抗体，其选自由以下组成的组：抗CTLA4，抗-PD1，抗-PD-L1，抗-Vista，抗-Tim-3，抗-TIGIT，抗-VLAG-3和抗BTLA。
优选地，可用作检查点调节剂的抗CTLA4抗体针对细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)。CTLA-4主要在T细胞的细胞内区室内表达。在通过T细胞受体(TCR)对初始T细胞进行有效或持久的刺激后，CTLA-4被转运至细胞表面并在免疫突触处浓缩。然后CTLA-4与CD28竞争CD80/CD86并通过对Akt信号传导的影响下调TCR信号传导。因此，CTLA-4在生理学上起到信号抑制剂的作用(Weber，J.2010.Semin.Oncol.37(5)：430-9)。
在优选的实施方案中，isRNA如本文所述使用，其中所述用途包含作为另外的药学活性成分的CTLA4拮抗剂，其优选是针对CTLA4的拮抗性抗体(抗CTLA4抗体)。如本文所用的术语“CTLA4拮抗剂”包括拮抗CTLA4的生理功能的任何化合物，例如抗体。在本发明的上下文中，术语“抗CTLA4抗体”可以指针对CTLA4的拮抗性抗体(或所述抗体的功能片段或变体)或指编码所述拮抗性抗体(或其功能片段)的核酸，优选RNA。抗CTLA4抗体的功能片段或变体优选充当CTLA4拮抗剂。更优选地，术语“抗CTLA4抗体”是指针对CTLA4的单克隆抗体(或这种抗体的功能片段或变体)或指编码针对CTLA4的单克隆抗体(或这种抗体的功能片段或变体)的核酸。如本文所用的术语“抗CTLA4抗体”可以分别指重链或轻链抗体，或者也指抗体链(重链和轻链)，或指这些链中的任何一个的片段或变体。优选地，如本文所用的抗CTLA4抗体的片段或变体是优选如本文所述的功能片段或变体。
特别优选的是抗CTLA-4抗体伊匹单抗tremelimumab和AGEN-1884。本文使用的进一步优选的抗CTLA4抗体包含BMS 734016；BMS-734016；BMS734016；MDX 010；MDX 101；MDX-010；MDX-101；MDX-CTLA-4；MDX-CTLA4；MDX010；Winglore；和Yervoy，或这些抗体中的任何一种的功能片段或变体。
根据一些实施方案，如本文所用的检查点调节剂是CTLA4拮抗剂，优选抗CTLA4抗体。其中，抗CTLA4抗体优选包含两条多肽链，通常分别称为“重链”和“轻链”。在一个优选的实施方案中，重链包含SEQ ID NO：645，832，661或833中任一个的氨基酸序列或这些氨基酸序列中的任何一个的片段或变体(优选根据SEQ ID NO：645的氨基酸序列或其片段或变体)，或者由其组成。重链优选包含与SEQ ID NO：645，832，661或833中任一个(优选SEQ IDNO：645)相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的氨基酸序列或由其组成。轻链优选包含SEQ ID NO：677，834，693或706中任一个的氨基酸序列或这些氨基酸序列中的任何一个的片段或变体(优选根据SEQ ID NO：677的氨基酸序列或其片段或变体)，或者由其组成。更优选地，轻链包含与SEQ ID NO：677，834，693或706中任一个(优选SEQ ID NO：677)相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的氨基酸序列或由其组成。在优选的实施方案中，抗CTLA4抗体因此包含如上所述的重链和轻链，或这些链中的每一个的片段或变体。最优选地，抗CTLA4抗体包含重链和轻链，或其片段或变体，其中重链或其片段或变体包含根据SEQ ID NO：645的氨基酸序列或其片段或变体或由其组成，并且其中轻链或其片段或变体包含根据SEQ ID NO：677的氨基酸序列或其片段或变体或由其组成。
根据进一步的实施方案，如本文所用的检查点调节剂是表1中描述的至少一种抗体或其片段或变体
表1：针对检查点分子的抗体
根据优选的实施方案，至少一种另外的药学活性成分是细胞因子。
更优选地，至少一种另外的药学活性成分是IL-12或其片段或变体。甚至更优选地，至少一种另外的药学活性成分是IL-12类似物或其片段或变体。最优选地，所述至少一种另外的药学活性成分是化合物，例如肽或蛋白质，突变的肽或突变的蛋白质，偶联的异二聚体，抗体，优选RNA编码的抗体，或人工结合结构域，其与IL-12受体结合并优选导致JAK-STAT信号传导途径的激活。在优选的实施方案中，至少一种另外的药学活性成分是IL-12受体激动剂。
天然存在的IL-12通常是由两个独立基因IL-12A(p35)和IL-12B(p40)编码的异二聚体细胞因子。天然存在的异二聚体也称为p70。在本发明的上下文中，术语“IL-12”是指包含以下或由以下组成的蛋白质：天然存在形式的异二聚体IL-12，单体IL-12A，单体IL-12B以及任何这些的片段或变体，例如作为IL-12A或其片段或变体与IL-12B或其片段或变体的融合体，其中所述蛋白质还可以包含与IL-12A或IL-12B无关的氨基酸序列。例如，如本文所用的术语“IL-12”还包含含有IL-12A或其片段或变体、IL-12B或其片段或变体的蛋白质，其中IL-12A或其片段或变体是通过接头与IL-12B或其片段或变体共价连接，其中接头优选是与IL-12A或IL-12B无关的氨基酸序列。更优选地，接头是肽或蛋白质接头，其优选包含根据SEQ ID NO：9的氨基酸序列或其片段或变体。此外，术语“IL-12”还包含蛋白质，其中IL-12A或其片段或变体与IL-12B或其片段或变体直接连接，优选通过共价键连接，更优选通过肽键连接。此外，本文所用的术语“IL-12”或“IL-12类似物”还包括任何化合物，例如肽或蛋白质，突变的肽或突变的蛋白质，偶联的异二聚体，抗体，优选RNA编码的抗体，或人工结合结构域，其结合IL-12受体并且优选导致JAK-STAT信号传导途径的激活。因此，如本文所用的术语“IL-12”或“IL-12类似物”还包含作为IL-12受体激动剂起作用的化合物，例如肽或蛋白质。
如本文所用，如本文所定义的IL-12的片段或变体优选能够特异性结合IL-12受体，更优选地，能够作为IL-12受体激动剂起作用。
根据一个优选的实施方案，在本发明的上下文中使用的IL-12衍生自哺乳动物，优选选自下组，该组包括但不限于山羊，牛，猪，狗，猫，驴，马，猴，猿，啮齿动物(例如小鼠，仓鼠，兔或大鼠)，最优选人。甚至更优选地，本文使用的IL-12包含与根据SEQ ID NO：3至8中任一个氨基酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的氨基酸序列，或任何这些序列的片段或变体。备选地或另外地，本文使用的IL-12包含与根据SEQ ID NO：9的氨基酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的氨基酸序列或其片段或变体。在特别优选的实施方案中，如本文所用的IL-12包含与根据SEQ ID NO：10的氨基酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的氨基酸序列或其片段或变体。
在一个备选实施方案中，至少一种另外的药学活性成分是CD40L或其片段或变体。CD40L(也称为“CD40配体”，“CD40LG”或“CD154”)主要在激活的T细胞和B细胞上表达。CD40L与CD40结合，CD40通常在抗原呈递细胞(APC)上表达。CD40和CD40L的相互作用在体液和细胞免疫应答的发展中起关键作用。如本文所用，术语“CD40L”是指天然存在的CD40L蛋白或其片段或变体，其中所述片段或变体优选能够特异性结合CD40。
根据一个优选的实施方案，在本发明的上下文中使用的CD40L衍生自哺乳动物，优选选自下组，该组包括但不限于山羊，牛，猪，狗，猫，驴，马，猴，猿，啮齿动物(例如小鼠，仓鼠，兔或大鼠)，最优选人。甚至更优选地，本文使用的CD40L包含与根据SEQ ID NO：11的氨基酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的氨基酸序列或其片段或变体。
根据特别优选的实施方案，所述至少一种另外的药学活性成分是肿瘤抗原，优选地选自包含选自PCT/EP2017/059525的SEQ ID NO：1-504，4558-4560的氨基酸序列组成的组中的任何肿瘤抗原，或任何一种所述氨基酸序列的片段或变体。
在优选的实施方案中，本发明因此提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用编码至少一种肿瘤抗原优选至少一种mRNA的至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，其中所述至少一种编码序列包含选自PCT/EP2017/059525的SEQ ID NO：505-4033；4561-4591组成的组中的核酸序列，或所述序列的片段或变体。
更优选地，肿瘤抗原选自由以下组成的组：1A01HLA-A/m；1A02；5T4；ACRBP；AFP；AKAP4；α-辅肌动蛋白_4/m；α-甲基酰基-辅酶_A_消旋酶；ANDR；ART-4；ARTC1/m；AURKB；B2MG；B3GN5；B4GN1；B7H4；BAGE-1；BASI；BCL-2；bcr/abl；β-连环蛋白/m；BING-4；BIRC7；BRCA1/m；BY55；钙网蛋白；CAMEL；CASP-8/m；CASPA；组织蛋白酶_B；组织蛋白酶_L；CD1A；CD1B；CD1C；CD1D；CD1E；CD20；CD22；CD276；CD33；CD3E；CD3Z；CD44_同种型_1；CD44_同种型_6；CD4；CD52；CD55；CD56；CD80；CD86；CD8A；CDC27/m；CDE30；CDK4/m；CDKN2A/m；CEA；CEAM6；CH3L2；CLCA2；CML28；CML66；COA-1/m；毛状蛋白样_蛋白；胶原_XXIII；COX-2；CP1B1；CSAG2；CT45A1；CT55；CT-_9/BRD6；CTAG2_同种型_LAGE-1A；CTAG2_同种型_LAGE-1B；CTCFL；Cten；细胞周期蛋白_B1；细胞周期蛋白_D1；cyp-B；DAM-10；DEP1A；E7；EF1A2；EFTUD2/m；EGFR；EGLN3；ELF2/m；EMMPRIN；EpCam；EphA2；EphA3；ErbB3；ERBB4；ERG；ETV6；EWS；EZH2；FABP7；FCGR3A_形式_1；FCGR3A_形式2；FGF5；FGFR2；纤连蛋白；FOS；FOXP3；FUT1；G250；GAGE-1；GAGE-2；GAGE-3；GAGE-4；GAGE-5；GAGE-6；GAGE7b；GAGE-8_(GAGE-2D)；GASR；GnT-V；GPC3；GPNMB/m；GRM3；HAGE；hepsin；Her2/neu；HLA-A2/m；同源框_NKX3.1；HOM-TES-85；HPG1；HS71A；HS71B；HST-2；hTERT；iCE；IF2B3；IL10；IL-13Ra2；IL2-RA；IL2-RB；IL2-RG；IL-5；IMP3；ITA5；ITB1；ITB6；激肽释放酶2；激肽释放酶3；激肽释放酶4；KI20A；KIAA0205；KIF2C；KK-LC-1；LDLR；LGMN；LIRB2；LY6K；MAGA5；MAGA8；MAGAB；MAGE-A10；MAGE-A12；MAGE-A1；MAGE-A2；MAGE-A3；MAGE-A4；MAGE-A6；MAGE-A9；MAGE-B10；MAGE-B16；MAGE-B17；MAGE-_B1；MAGE-B2；MAGE-B3；MAGE-B4；MAGE-B5；MAGE-B6；MAGE-C1；MAGE-C2；MAGE-C3；MAGE-D1；MAGE-D2；MAGE-D4；MAGE-_E1；MAGE-E1_(MAGE1)；MAGE-E2；MAGE-F1；MAGE-H1；MAGEL2；乳腺珠蛋白_A；MART-1/melan-A；MART-2；MC1_R；M-CSF；间皮素；MITF；MMP1_1；MMP7；MUC-1；MUM-1/m；MUM-2/m；MYCN；MYO1A；MYO1B；MYO1C；MYO1D；MYO1E；MYO1F；MYO1G；MYO1H；NA17；NA88-A；Neo-PAP；NFYC/m；NGEP；NPM；NRCAM；NSE；NUF2；NY-ESO-1；OA1；OGT；OS-9；骨钙素；骨桥蛋白；p53；PAGE-4；PAI-1；PAI-2；PAP；PATE；PAX3；PAX5；PD1L1；PDCD1；PDEF；PECA1；PGCB；PGFRB；Pim-1_激酶；Pin-1；PLAC1；PMEL；PML；POTEF；POTE；PRAME；PRDX5/m；PRM2；prostein；蛋白酶-3；PSA；PSB9；PSCA；PSGR；PSM；PTPRC；RAB8A；RAGE-1；RARA；RASH；RASK；RASN；RGS5；RHAMM/CD168；RHOC；RSSA；RU1；RU2；RUNX1；S-100；SAGE；SART-_1；SART-2；SART-3；SEPR；SERPINB5；SIA7F；SIA8A；SIAT9；SIRT2/m；SOX10；SP17；SPNXA；SPXN3；SSX-1；SSX-2；SSX3；SSX-4；ST1A1；STAG2；STAMP-1；STEAP-1；生存素2B；生存素；SYCP1；SYT-SSX-1；SYT-SSX-2；TARP；TCRg；TF2AA；TGFB1；TGFR2；TGM-4；TIE2；TKTL1；TPI/m；TRGV11；TRGV9；TRPC1；TRP-p8；TSG10；TSPY1；TVC_(TRGV3)；TX101；酪氨酸酶；TYRP1；TYRP2；UPA；VEGFR1；WT1；和XAGE1。
在优选的实施方案中，优选如本文所定义的肿瘤抗原以优选如本文所定义的至少一种编码RNA的形式提供，其包含至少一种编码包含肿瘤抗原或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列。所述至少一种编码RNA(包含至少一种编码包含肿瘤抗原的肽或蛋白质的编码序列)或其片段或变体优选肿瘤内施用。备选地，所述至少一种编码RNA可以皮内，肌肉内或皮下施用。
在优选的实施方案中，本文使用的至少一种另外的药学活性成分是编码RNA，优选mRNA。因此，根据某些实施方案，本发明提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗还包括施用至少一种编码RNA，优选至少一种mRNA，其中所述mRNA是优选地肿瘤内施用(例如如局部区域施用)。在一个特别优选的实施方案中，通过肿瘤内(例如局部区域)施用编码RNA，优选mRNA。更优选地，肿瘤内(例如局部区域地)施用isRNA以及至少一种编码RNA。
在优选的实施方案中，本文使用的至少一种另外的药学活性成分是编码RNA，优选mRNA。因此，根据某些实施方案，本发明提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗还包括施用至少一种编码RNA，优选至少一种mRNA，其中所述mRNA是优选地肿瘤内施用。在特别优选的实施方案中，肿瘤内施用编码RNA，优选mRNA。更优选地，肿瘤内施用isRNA以及至少一种编码RNA。
在一些实施方案中，所述至少一种编码RNA与isRNA一起配制以用于本文所述的用途。在特别优选的实施方案中，至少一种编码RNA与isRNA分开配制，其中至少一种编码RNA以及isRNA优选在肿瘤内(例如局部区域)施用。
根据优选的实施方案，isRNA与至少一种编码RNA一起配制，其中共制剂优选在肿瘤内(例如局部区域)施用。
在一些实施方案中，所述至少一种编码RNA与isRNA一起配制以用于本文所述的用途。在特别优选的实施方案中，至少一种编码RNA与isRNA分开配制，其中至少一种编码RNA以及isRNA优选肿瘤内施用。
根据优选的实施方案，isRNA与至少一种编码RNA一起配制，其中共制剂优选肿瘤内施用。
根据优选的实施方案，所述至少一种编码RNA编码至少一种肽或蛋白质，所述肽或蛋白质包含至少一种本文所述的肽或蛋白质作为另外的药学活性成分。更优选地，所述至少一种编码RNA编码至少一种肽或蛋白质，所述肽或蛋白质包含至少一种选自由以下组成的组中的肽或蛋白质：
-IL-12，
-CD40L和
-诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，
或任何这些的的片段或变体，
其中IL-12，CD40L或诱饵PD-1受体或任何这些的片段或变体优选如本文所述。甚至更优选地，所述至少一种编码RNA编码至少一种肽或蛋白质，所述肽或蛋白质包含至少一种选自由以下组成的组中的肽或蛋白质：
-IL-12，
-CD40L，
-诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，和
-抗CTLA4抗体，
或任何这些的的片段或变体，
其中IL-12，CD40L，诱饵PD-1受体或抗CTLA4抗体或任何这些的片段或变体优选如本文所述。
备选地，所述至少一种编码RNA编码至少一种肽或蛋白质，所述肽或蛋白质包含至少一种选自由以下组成的组中的肽或蛋白质：
-IL-12，
-CD40L，和
-抗CTLA4抗体，
或任何这些的的片段或变体，
其中IL-12，CD40L或抗CTLA4抗体或任何这些的片段或变体优选如本文所述。
根据优选的实施方案，本发明提供用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，
其中isRNA包含根据式(I)(GlXmGn)，式(II)(ClXmCn)，式(III)(NuGlXmGnNv)a或式(IV)(NuClXmCnNv)a的核酸序列，优选至少一个根据SEQ ID NO：433至434，1014至1016中任一项的核酸序列，或任何这些序列的片段或变体，
其中isRNA与阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与聚合物载体复合，更优选与由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体复合，所述阳离子组分优选包含根据式(V)，(Va)和/或(Vb)的肽，和/或根据式(VI)的化合物，更优选二硫键交联阳离子肽Cys-Arg12，Cys-Arg12-Cys，或Trp-Arg12-Cys中的至少一种，
其中isRNA优选肿瘤内施用，
其中肿瘤或癌症疾病的治疗包括施用至少一种编码RNA，优选至少一种mRNA，其编码至少一种肽或蛋白质，所述肽或蛋白质包含至少一种选自由以下组成的组中的肽或蛋白质：
-IL-12，
-CD40L和
-诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，
或任何这些的的片段或变体，
其中IL-12，CD40L或诱饵PD-1受体或任何这些的片段或变体优选如本文所述。
根据特别优选的实施方案，本发明提供用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，
其中isRNA包含根据式(I)(GlXmGn)，式(II)(ClXmCn)，式(III)(NuGlXmGnNv)a或式(IV)(NuClXmCnNv)a的核酸序列，优选至少一个根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016，1055或1056中任一项的核酸序列，或任何这些序列的片段或变体，
其中isRNA与阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与聚合物载体复合，更优选与由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体复合，所述阳离子组分优选包含根据式(V)，(Va)和/或(Vb)的肽，和/或根据式(VI)的化合物，更优选二硫键交联阳离子肽Cys-Arg12，Cys-Arg12-Cys，或Trp-Arg12-Cys中的至少一种，
其中isRNA优选肿瘤内施用，
其中肿瘤或癌症疾病优选选自由以下各项组成的组：黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，最优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除和/或晚期SCC，最优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，或其他形式的恶性皮肤癌，腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC，皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤和头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC；
其中肿瘤或癌症疾病的治疗包括施用至少一种编码RNA，优选至少一种mRNA，其编码至少一种肽或蛋白质，所述肽或蛋白质包含至少一种选自由以下组成的组中的肽或蛋白质：
-IL-12，
-CD40L和
-诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，
或任何这些的的片段或变体，和
其中IL-12，CD40L或诱饵PD-1受体或任何这些的片段或变体优选如本文所述。
根据进一步优选的实施方案，本发明提供用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，
其中isRNA包含根据式(I)(GlXmGn)，式(II)(ClXmCn)，式(III)(NuGlXmGnNv)a或式(IV)(NuClXmCnNv)a的核酸序列，优选至少一个根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016或1055或1056中任一项的核酸序列，更优选至少一个根据SEQ ID NO：433，434，1014至1016中任一项的核酸序列，或任何这些序列的片段或变体，
其中isRNA与阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与聚合物载体复合，更优选与由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体复合，所述阳离子组分优选包含根据式(V)，(Va)和/或(Vb)的肽，和/或根据式(VI)的化合物，更优选二硫键交联阳离子肽Cys-Arg12，Cys-Arg12-Cys，或Trp-Arg12-Cys中的至少一种，
其中isRNA优选肿瘤内施用，包括肿瘤周围或局部区域施用，
其中肿瘤或癌症疾病的治疗包括施用至少一种编码RNA，优选至少一种mRNA，其编码至少一种肽或蛋白质，所述肽或蛋白质包含至少一种选自由以下组成的组中的肽或蛋白质：
-IL-12，
-CD40L，
-抗CTLA4抗体，和
-任选地，诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，
或任何这些的的片段或变体，
其中IL-12，CD40L，诱饵PD-1受体或抗CTLA4抗体或任何这些的片段或变体优选如本文所述。
根据特别优选的实施方案，本发明提供用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，
其中isRNA包含根据式(I)(GlXmGn)，式(II)(ClXmCn)，式(III)(NuGlXmGnNv)a或式(IV)(NuClXmCnNv)a的核酸序列，优选至少一个根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016中任一项的核酸序列，优选至少一个根据SEQ ID NO：433，434，1014至1016中任一项的核酸序列，或任何这些序列的片段或变体，
其中isRNA与阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与聚合物载体复合，更优选与由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体复合，所述阳离子组分优选包含根据式(V)，(Va)和/或(Vb)的肽，和/或根据式(VI)的化合物，更优选二硫键交联阳离子肽Cys-Arg12，Cys-Arg12-Cys，或Trp-Arg12-Cys中的至少一种，
其中isRNA优选肿瘤内施用，包括肿瘤周围或局部区域施用，
其中肿瘤或癌症疾病优选选自由以下各项组成的组：
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
选自由以下各项组成的组：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)；
其中肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治；
其中肿瘤或癌症疾病的治疗包括施用至少一种编码RNA，优选至少一种mRNA，其编码至少一种肽或蛋白质，所述肽或蛋白质包含至少一种选自由以下组成的组中的肽或蛋白质：
-IL-12，
-CD40L，
-抗CTLA4抗体，和
-任选地，诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，
或任何这些的的片段或变体，
其中IL-12，CD40L，诱饵PD-1受体或抗CTLA4抗体或任何这些的片段或变体优选如本文所述。
根据本发明的优选实施方案，如本文所述的治疗或预防癌症或肿瘤疾病包括在受试者不接受或未接受PD-1拮抗剂和/或PD-L1拮抗剂治疗的情况下施用如本文所述的诱饵PD-1受体。在患者不接受或未接受抗PD-1和/或抗PD-L1(例如抗PD-1抗体或抗PD-L1抗体)治疗的情况下，特别优选至少一种mRNA编码诱饵PD-1受体。
在其他情况下，当受试者接受或已经接受PD-1或PD-L1拮抗剂治疗的情况下，如本文所设想的治疗或预防癌症或肿瘤疾病优选不包括施用如本文所述的诱饵PD-1受体，或编码诱饵PD-1受体的核酸或其片段或变体。
根据优选的实施方案，在接受或已经接受PD-1或PD-L1拮抗剂治疗的受试者中治疗肿瘤或癌症疾病包括施用至少一种编码RNA，优选至少一种mRNA，其编码至少一种肽或蛋白质，所述肽或蛋白质包含至少一种选自由以下组成的组中的肽或蛋白质：
-IL-12，
-CD40L，和
-抗CTLA4抗体，
或任何这些的的片段或变体，
其中IL-12，CD40L或抗CTLA4抗体或任何这些的片段或变体优选如本文所述。
在进一步优选的实施方案中，在不接受或未接受PD-1或PD-L1拮抗剂治疗的受试者中治疗肿瘤或癌症疾病包括施用至少一种编码RNA，优选至少一种mRNA，其编码至少一种肽或蛋白质，所述肽或蛋白质包含至少一种选自由以下组成的组中的肽或蛋白质：
-IL-12，
-CD40L，和
-抗CTLA4抗体，和
-诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，
或任何这些的的片段或变体，
其中IL-12，CD40L，抗CTLA4抗体或诱饵PD-1受体或任何这些的片段或变体优选如本文所述。
根据优选的实施方案，所述至少一种编码RNA编码包含如本文定义的IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质。在一些实施方案中，所述至少一种编码RNA编码肽或蛋白质，突变的肽或突变的蛋白质，偶联的异二聚体，抗体，优选地由RNA编码的抗体，或包含如本文所定义的IL-12类似物或其片段或变体的人工结合结构域。优选地，编码的肽或蛋白质包含根据SEQ ID NO：SEQ ID NO：3至8中任一个的氨基酸，或任何这些序列的片段或变体。编码的肽或蛋白质可以优选地还包含根据SEQ ID NO：9的氨基酸序列，或其片段或变体。更优选地，编码的肽或蛋白质包含根据SEQ ID NO：10的氨基酸，或其片段或变体。最优选地，编码的肽或蛋白质包含与根据SEQ ID NO：3至8中任一个氨基酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的氨基酸序列，或任何这些序列的片段或变体。在特别优选的实施方案中，编码的肽或蛋白质包含与根据SEQ ID NO：10的氨基酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的氨基酸序列或其片段或变体。
在进一步优选的实施方案中，所述至少一种编码RNA编码包含如本文定义的IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述至少一种编码RNA包含根据SEQ ID NO：14至19或21或SEQ ID NO：440至445或447中任一项的核酸序列，优选SEQ ID NO：440至445或447中的任一项的核酸序列，或任何这些序列的片段或变体。更优选地，所述至少一种编码RNA编码包含如本文定义的IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述至少一种编码RNA包含与根据SEQ ID NO：14至19或21或SEQ ID NO：440至445或447的任一个核酸序列，优选SEQ IDNO：440至445或447的任一个核酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的核酸序列，或任何这些序列的片段或变体。
备选地或另外地，所述至少一种编码RNA编码包含如本文定义的IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述至少一种编码RNA包含根据SEQ ID NO：20或446的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：446的核酸序列，或任何这些序列的片段或变体。更优选地，所述至少一种编码RNA编码包含如本文定义的IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述至少一种编码RNA包含与根据SEQ ID NO：20或446的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：446的核酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的核酸序列，或任何这些序列的片段或变体。
在特别优选的实施方案中，所述至少一种编码RNA编码包含如本文定义的IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述至少一种编码RNA包含根据SEQ ID NO：21或SEQ IDNO：447的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：447的核酸序列，或其片段或变体。更优选地，所述至少一种编码RNA编码包含如本文定义的IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述至少一种编码RNA包含与根据SEQ ID NO：21或SEQ ID NO：447的核酸序列，优选根据SEQ IDNO：447的核酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的核酸序列，或其片段或变体。
根据另一个实施方案，所述至少一种编码RNA编码包含如本文定义的CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质。优选地，编码的肽或蛋白质包含根据SEQ ID NO：11的氨基酸，或其片段或变体。更优选地，编码的肽或蛋白质包含与根据SEQ ID NO：11的氨基酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的氨基酸序列或其片段或变体。
在进一步优选的实施方案中，所述至少一种编码RNA编码包含如本文定义的CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述至少一种编码RNA包含根据SEQ ID NO：22或SEQID NO：448的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：448的核酸序列，或其片段或变体。更优选地，所述至少一种编码RNA编码包含如本文定义的CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述至少一种编码RNA包含与根据SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：448的核酸序列，优选根据SEQID NO：448的核酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的核酸序列，或任何这些序列的片段或变体。
根据备选实施方案，所述至少一种编码RNA编码包含如本文所定义的诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质，更优选编码包含如本文所定义的可溶性PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质。优选地，编码的肽或蛋白质包含根据SEQ ID NO：2或SEQ ID NO：1042中任一个的氨基酸，或其片段或变体。更优选地，编码的肽或蛋白质包含与根据SEQ IDNO：2或SEQ ID NO：1042的氨基酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的氨基酸序列或其片段或变体。
在进一步优选的实施方案中，所述至少一种编码RNA编码包含如本文所定义的诱饵PD-1受体(更优选可溶性PD-1受体)或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述至少一种编码RNA包含根据SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：439的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：439的核酸序列，或其片段或变体。更优选地，所述至少一种编码RNA编码包含如本文所定义的诱饵PD-1受体(更优选可溶性PD-1受体)或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述至少一种编码RNA包含与根据SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：439的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：439的核酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的核酸序列，或任何这些序列的片段或变体。
根据备选实施方案，所述至少一种编码RNA编码包含如本文所定义的诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质，更优选编码包含如本文所定义的可溶性PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质。优选地，编码的肽或蛋白质包含根据SEQ ID NO：1的氨基酸，或其片段或变体。更优选地，编码的肽或蛋白质包含与根据SEQ ID NO：1的氨基酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的氨基酸序列或其片段或变体。
在进一步优选的实施方案中，所述至少一种编码RNA编码包含如本文所定义的诱饵PD-1受体(更优选可溶性PD-1受体)或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述至少一种编码RNA包含根据SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：438的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：438的核酸序列，或其片段或变体。更优选地，所述至少一种编码RNA编码包含如本文所定义的诱饵PD-1受体(更优选可溶性PD-1受体)或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述至少一种编码RNA包含与根据SEQ ID NO：12或SEQ ID NO：438的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：438的核酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的核酸序列，或任何这些序列的片段或变体。
根据优选的实施方案，所述至少一种编码RNA编码包含如本文所述的CTLA4拮抗剂的肽或蛋白质。优选地，所述至少一种编码RNA编码包含如本文所述的如本文所定义的抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述片段或变体优选为功能片段或功能变体。更优选地，所述至少一种编码RNA编码包含如本文所述的如本文所定义的抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述至少一种编码RNA包含根据SEQ ID NO：646-660，662-676，678-692，694-705，或707-715中任一项的核酸序列，优选SEQ ID NO：646-660，679-692，或710-715中的任一项的核酸序列，或任何这些核酸序列的片段或变体。甚至更优选地，所述至少一种编码RNA编码包含如本文所定义的抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述至少一种编码RNA包含与根据SEQ ID NO：646-660，662-676，678-692，694-705，或707-715中任一项的核酸序列，优选SEQ ID NO：646-660，679-692，或710-715中的任一项的核酸序列相同或至少50％，60％，70％，75％，80％，81％，82％，83％，84％，85％，86％，87％，88％，89％，90％，91％，92％，93％，94％，95％，96％，97％，98％，99％相同的核酸序列。
进一步优选所述至少一种编码RNA编码包含抗CTLA4抗体的重链或其片段或变体以及抗CTLA4抗体的轻链或其片段或变体的肽或蛋白质，其中所述重链和轻链或其片段或变体优选如在本文中所述。
优选地，所述至少一种编码RNA编码肽或蛋白质，所述肽或蛋白质包含抗CTLA4抗体的重链或其片段或变体以及抗CTLA4抗体的轻链或其片段或变体，
其中所述重链或其片段或变体由选自SEQ ID NO：646-660，662-676或710-715中任一个的核酸序列，优选来自SEQ ID NO：646-660中任一个的核酸序列，或这些核酸序列中的任何一个的片段或变体编码，和
其中所述轻链或其片段或变体由选自SEQ ID NO：678-692，694-705，707-709或710-715中任一个的核酸序列，优选来自SEQ ID NO：678-692中任一个的核酸序列，或这些核酸序列中任一个的片段或变体编码。
其中，所述重链和轻链，或任何这些的片段或变体分别优选由同一种编码RNA或不同编码RNA编码。
根据优选的实施方案，本发明涉及如本文所述使用的isRNA，其中所述用途包含作为另外的药学活性成分的如本文所述的抗CTLA4抗体或其片段或变体，其中所述抗CTLA4抗体以两种单独的RNA的形式提供(单独或一起配制)，其中
抗CTLA4抗体的重链或其片段或变体由RNA编码，所述RNA包含以下或由以下组成：选自SEQ ID NO：646-660，662-676或710-715中任一个的核酸序列，优选来自SEQ ID NO：646-660中任一个的核酸序列，或这些核酸序列中的任何一个的片段或变体，并且
其中抗CTLA4抗体的轻链或其片段或变体由另一个RNA编码，所述RNA包含以下或由以下组成：选自SEQ ID NO：678-692，694-705，707-709或710-715中任一个的核酸序列，优选来自SEQ ID NO：678-692中任一个的核酸序列，或这些核酸序列中任一个的片段或变体。
在一个备选实施方案中，本发明涉及如本文所述使用的isRNA，其中所述用途包含作为另外的药学活性成分的如本文所述的抗CTLA4抗体或其片段或变体，其中抗CTLA4抗体或其片段或变体以RNA的形式提供，其中一个RNA编码以下两者：抗CTLA4抗体的重链或其片段或变体以及抗CTLA4抗体的轻链或其片段或变体，并且其中所述RNA优选地包含或由以下组成：根据SEQ ID NO：710-712，713-715中任一个的核酸序列或这些核酸序列中任一个的片段或变体。
本发明进一步提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括使用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中所述至少一种编码RNA编码至少两种肽或蛋白质，所述肽或蛋白质选自由以下组成的组：
-IL-12，
-CD40L，
-抗CTLA4抗体，和
-任选地，诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，
或任何这些的的片段或变体，和
其中IL-12，CD40L，诱饵PD-1受体或抗CTLA4抗体或任何这些的片段或变体优选如本文所述。
在本发明的上下文中，即使(成熟的)抗CTLA4抗体或片段或变体优选包含至少两种肽或蛋白质，即重链或其片段或变体和轻链或其片段或变体，本文中使用的抗CTLA4抗体也可称为′(一种)肽或蛋白′(以单数形式)。
在某些实施方案中，肿瘤或癌症疾病的治疗因此包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少两种，三种，四种或五种编码RNA，其编码至少两种，优选两种，三种或四种肽或蛋白质，或任何这些的片段或变体，优选在施用至少一种编码RNA给受试者后导致所述至少两种肽或蛋白质或任何这些的片段或变体的表达。
根据一个特别优选的实施方案，肿瘤或癌症疾病的治疗包括施用至少两种或三种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，其中每种编码RNA编码选自由以下组成的组中的不相同的一种肽或蛋白质
-IL-12，
-CD40L，
-抗CTLA4抗体，和
-任选地，诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，
或任何这些的的片段或变体，和
其中IL-12，CD40L，诱饵PD-1受体或抗CTLA4抗体或任何这些的片段或变体优选如本文所述。
在另一个实施方案中，肿瘤或癌症疾病的治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，其中所述至少一种编码RNA是编码至少一种肽的双或多顺反子RNA或蛋白质，优选两种，三种或四种肽或蛋白质，选自下组其中所述至少一种编码RNA是双或多顺反子RNA，其编码至少一种肽或蛋白质，优选两种，三种或四种肽或蛋白质，所述肽或蛋白质选自由以下组成的组：
-IL-12，
-CD40L，
-抗CTLA4抗体，和
-任选地，诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，
或任何这些的的片段或变体，和
其中IL-12，CD40L，诱饵PD-1受体或抗CTLA4抗体或任何这些的片段或变体优选如本文所述。
在本文中，发明人出人意料地发现，本文定义的肽或蛋白质的两种，优选三种或四种的组合的表达在治疗肿瘤或癌症疾病中特别有益，特别是当与如本文所述的isRNA组合时。
根据优选的实施方案，本发明提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，并且
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含IL12或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列。
在进一步优选的实施方案中，本发明提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，并且
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列。
根据另一个实施方案，本发明提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码包含IL12或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，并且
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含诱饵PD 1受体，优选可溶性PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列。
根据优选的实施方案，本发明提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码包含IL12或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，并且
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列。
根据优选的实施方案，本发明提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，并且
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列。
根据优选的实施方案，本发明提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码包含诱饵PD 1受体，优选可溶性PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，并且
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列。
在特别优选的实施方案中，本发明提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含诱饵PD 1受体，优选可溶性PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，并且
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列。
在该实施方案中，编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，编码包含诱饵PD1受体，优选可溶性PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列可以优选位于单独的编码RNA上，优选单独的mRNA上。备选地，编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，编码包含诱饵PD1受体，优选可溶性PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列中的至少两种位于相同的编码RNA上，所述编码RNA优选为双或多顺反子RNA。
根据某些优选的实施方案，本发明提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码包含IL-12或其片段或变体或由IL-12或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列，
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含CD40L或其片段或变体或由CD40L或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列，并且
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含优选如本文所述的抗CTLA4抗体或其片段或变体或由优选如本文所述的抗CTLA4抗体或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列。
如果患者接受或已经接受PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂(例如抗PD-1或抗PD-L1抗体)的治疗，则该实施方案是特别优选的。
根据某些优选的实施方案，本发明提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码包含IL-12或其片段或变体或由IL-12或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列，
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含诱饵PD 1受体优选可溶性PD-1受体或其片段或变体或由诱饵PD 1受体优选可溶性PD-1受体或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列，
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含CD40L或其片段或变体或由CD40L或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列，并且
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含优选如本文所述的抗CTLA4抗体或其片段或变体或由优选如本文所述的抗CTLA4抗体或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列。
如果患者不接受或未接受PD-1拮抗剂或PD-L1拮抗剂(例如抗PD-1或抗PD-L1抗体)的治疗，则该实施方案是特别优选的。
在这些实施方案中，编码包含IL-12或其片段或变体或由IL-12或其片段组成的肽或蛋白质的编码序列，任选地编码包含诱饵PD1受体或优选可溶性PD-1受体或其片段或变体或由诱饵PD1受体或优选可溶性PD-1受体或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列，编码包含CD40L或其片段或变体或由CD40L或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列，和编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体或由抗CTLA4抗体或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列可以优选位于单独的编码RNA上，优选地是单独的mRNA。或者，编码包含IL-12或其片段或变体或由IL-12或其片段组成的肽或蛋白质的编码序列，任选地编码包含诱饵PD1受体或优选可溶性PD-1受体或其片段或变体或由诱饵PD1受体或优选可溶性PD-1受体或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列，编码包含CD40L或其片段或变体或由CD40L或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列，和编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体或由抗CTLA4抗体或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列中的至少两种位于相同的编码RNA上，所述编码RNA优选为双或多顺反子RNA。
在一些实施方案中，本发明提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码包含IL-12或其片段或变体或由IL-12或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列，
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含CD40L或其片段或变体或由CD40L或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列，并且
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码包含优选如本文所述的抗CTLA4抗体或其片段或变体或由优选如本文所述的抗CTLA4抗体或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列。
在这些实施方案中，编码包含IL-12或其片段或变体或由IL-12或其片段组成的肽或蛋白质的编码序列，编码包含CD40L或其片段或变体或由CD40L或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列，和编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体或由抗CTLA4抗体或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列可以优选位于单独的编码RNA上，优选地是单独的mRNA。或者，编码包含IL-12或其片段或变体或由IL-12或其片段组成的肽或蛋白质的编码序列，编码包含CD40L或其片段或变体或由CD40L或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列，和编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体或由抗CTLA4抗体或其片段或变体组成的肽或蛋白质的编码序列中的至少两种位于相同的编码RNA上，所述编码RNA优选为双或多顺反子RNA。
在优选的实施方案中，本发明提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中所述至少一种编码序列编码至少一种肿瘤抗原或其片段或变体。优选地，所述编码序列包含至少一种核酸序列，其优选地选自PCT/EP2017/059525的SEQ ID NO：505-4033；4561-4591组成的组中的核酸序列，或所述序列中任一个的片段或变体。
在优选的实施方案中，本发明提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中所述至少一种编码序列包含
a)选自由SEQ ID NO：14至19或SEQ ID NO：440至445或447组成的组的核酸序列，优选选自由SEQ ID NO：440至445或447组成的组的核酸序列，或任何这些序列的片段或变体，优选根据SEQ ID NO：21或SEQ ID NO：447的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：447的核酸序列，或任何这些序列的片段或变体；
b)根据SEQ ID NO：22或SEQ ID NO：448的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：448的核酸序列，或其片段或变体，
c)根据SEQ ID NO：646-660或662-676中任一个的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：646-660中的任一个的核酸序列，或这些核酸序列中任一个的片段或变体，和根据SEQ IDNO：678-692，694-705或707-709中任一个的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：678-692中的任一个的核酸序列，或这些核酸序列中任一个的片段或变体；
或者
根据SEQ ID NO：710-712，713-715中任一个的核酸序列或这些核酸序列中任一个的片段或变体，和/或
d)任选地，根据SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：439的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：439的核酸序列，或其片段或变体。
根据一个实施方案，如本文所述的至少一种编码RNA或isRNA可以是经修饰的RNA的形式，其中如本文所定义的任何修饰可以如所述引入如本文所述的至少一种编码RNA或isRNA中。根据优选的实施方案，如本文所述的至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述编码序列包含与相应野生型RNA的编码序列的核酸序列相比经修饰的核酸序列，并且其中与由相应野生型RNA的编码序列编码的氨基酸序列相比，由所述编码序列编码的氨基酸序列优选不经修饰。如本文所定义的修饰优选导致本文所用的至少一种编码RNA的稳定化。
在另一个优选的实施方案中，本发明因此提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中所述至少一种编码序列包含
a)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：14-19；440-445；447；25-30；36-41；47-52；58-63；69-74；80-85；91-96；102-107；113-118；124-129；135-140；601-606；612-617；623-628；716-725；727；1018-1021和1059-1062，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：21；447；32；43；54；65；76；87；98；109；120；131；142；608；619；630；632-644；726和1058，或任何这些序列的片段或变体；
b)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：22；448；33；44；55；66；77；88；99；110；121；132；143；609；620；631；728-738和1025-1028，或任何这些序列的片段或变体；
c)根据SEQ ID NO：646-660；662-676或1029-1036中任一个的核酸序列，优选地根据SEQ ID NO：646-660中的任一个的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和根据SEQ ID NO：678-692，694-705，707-709或1037-1041中任一个的核酸序列；优选地根据SEQ ID NO：678-692中任一个的核酸序列，或这些核酸序列中的任何一个的片段或变体；
或者
根据SEQ ID NO：710-712，713-715中任一个的核酸序列或这些核酸序列中任一个的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：12；438；23；34；45；56；67；78；89；100；111；122；133；599；610；621和1022-1024，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：13，439；24；439；35；46；57；68；79；90；101；112；123；134；600；611；622和1043-1054，或任何这些序列的片段或变体。
在优选的实施方案中，本发明因此提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中所述至少一种编码序列包含
a)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：25-30；36-41；47-52；58-63；69-74；80-85；91-96；102-107；113-118；124-129；135-140；601-606；612-617；623-628；716-725；727；1018-1021和1059-1062，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：32；43；54；65；76；87；98；109；120；131；142；608；619；630；632-644；726和1058，或任何这些序列的片段或变体；
b)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：33；44；55；66；77；88；99：110；121；132；143；609；620；631；728-738；1025-1028和1025-1028，或任何这些序列的片段或变体；
c)根据SEQ ID NO：646-660；662-676或1029-1036中任一个的核酸序列，优选地根据SEQ ID NO：646-660中的任一个的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和根据SEQ ID NO：678-692，694-705，707-709或1037-1041中任一个的核酸序列；优选地根据SEQ ID NO：678-692中任一个的核酸序列，或这些核酸序列中的任何一个的片段或变体；
或者
根据SEQ ID NO：710-712，713-715中任一个的核酸序列或这些核酸序列中任一个的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：23；34；45；56；67；78；89；100；111；122；133；599；610；621；1022-1024，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：24；35；46；57；68；79；90；101；112；123；134；600；611；622和1043-1054，或任何这些序列的片段或变体。
在本文中，如本文所用包含至少一种编码序列(所述编码序列包含编码如本文所述的IL-12或其片段或变体的(野生型或经修饰的)核酸序列)的编码RNA可优选包含根据以下中任一个的核酸序列：SEQ ID NO：20；31；42；53；64；75；86；97；108；119；130；141；446；607；618或629，或任何这些序列的片段或变体。
根据一个实施方案，如本文所述的至少一种编码RNA因此可以作为“稳定的RNA”，即作为对体内降解具有实质性抗性的RNA(例如通过外切或内切核酸酶)提供。这种稳定化可以例如通过本文所用的至少一种编码RNA的经修饰的磷酸骨架实现。与本发明有关的骨架修饰是一种修饰，其中RNA中包含的核苷酸骨架的磷酸酯被化学修饰。在这方面可以优选使用的核苷酸包含例如硫代磷酸酯修饰的磷酸骨架，优选磷酸骨架中含有的至少一个磷酸氧被硫原子替代。稳定的RNA可以进一步包括，例如：非离子磷酸酯类似物，例如烷基和芳基膦酸酯(其中带电荷的膦酸氧被烷基或芳基替代)，或磷酸二酯和烷基磷酸三酯，其中带电荷的氧残基以烷基化形式存在。这种骨架修饰通常包括，但不意味着任何限制，来自由甲基膦酸酯，氨基磷酸酯和硫代磷酸酯(例如胞苷-5′-O-(1-硫代磷酸酯))组成的组的修饰。
在下文中，描述了特定修饰，其优选能够“稳定”如本文所定义的至少一种编码RNA。
化学修饰：
如本文所用的术语“RNA修饰”可以指包含骨架修饰以及糖修饰或碱基修饰的化学修饰。
在本文中，如本文所定义的经修饰的RNA可含有核苷酸类似物/修饰，例如，骨架修饰，糖修饰或碱基修饰。与本发明有关的骨架修饰是一种修饰，其中如本文所定义的RNA中包含的核苷酸骨架的磷酸酯被化学修饰。与本发明有关的糖修饰是如本文所定义的RNA的核苷酸的糖的化学修饰。此外，与本发明有关的碱基修饰是RNA的核苷酸的碱基部分的化学修饰。在本文中，核苷酸类似物或修饰优选选自核苷酸类似物，其适用于转录和/或翻译。
糖修饰：
可以在糖部分中修饰可以掺入如本文所述的经修饰的RNA中的经修饰的核苷和核苷酸。例如，2′羟基(OH)可以被许多不同的“氧基”或“脱氧”取代基修饰或替代。“氧基”-2′羟基修饰的实例包括但不限于烷氧基或芳氧基(-OR，例如R＝H，烷基，环烷基，芳基，芳烷基，杂芳基或糖)；聚乙二醇(PEG)，-O(CH2CH2O)nCH2CH2OR；“锁定的”核酸(LNA)，其中2′羟基例如通过亚甲基桥连接到相同核糖的4′碳上；和氨基(-O-氨基，其中氨基，例如NRR，可以是烷基氨基，二烷基氨基，杂环基，芳基氨基，二芳基氨基，杂芳基氨基或二杂芳基氨基，乙二胺，多氨基)或氨基烷氧基。
“脱氧”修饰包括氢，氨基(例如NH2；烷基氨基，二烷基氨基，杂环基，芳基氨基，二芳基氨基，杂芳基氨基，二杂芳基氨基或氨基酸)；或者氨基可以通过接头与糖连接，其中所述接头包含原子C，N和O中的一个或多个。
糖基团还可含有一个或多个碳，其具有与核糖中相应碳相反的立体化学构型。因此，经修饰的RNA可包括含有例如阿拉伯糖作为糖的核苷酸。
骨架修饰：
磷酸骨架可以进一步在经修饰的核苷和核苷酸中进行修饰，所述经修饰的核苷和核苷酸可以掺入如本文所述的经修饰的RNA中。骨架的磷酸酯基团可以通过用不同的取代基替代一个或多个氧原子来修饰。此外，经修饰的核苷和核苷酸可包括用本文所述的经修饰的磷酸酯完全替代未经修饰的磷酸酯部分。经修饰的磷酸酯基团的实例包括但不限于硫代磷酸酯，磷酸硒酸酯，硼酸磷酸酯，硼酸磷酸盐酯，氢膦酸酯，氨基磷酸酯，烷基或芳基膦酸酯和磷酸三酯。二硫代磷酸酯的两个非连接氧都被硫替代。也可以通过用氮(桥连的氨基磷酸酯)，硫(桥连的硫代磷酸酯)和碳(桥连的亚甲基-膦酸酯)替代连接氧来修饰磷酸酯接头。
碱基修饰：
可以在核碱基部分中进一步修饰可以掺入如本文所述的经修饰的RNA中的经修饰的核苷和核苷酸。在RNA中发现的核碱基的实例包括但不限于腺嘌呤，鸟嘌呤，胞嘧啶和尿嘧啶。例如，本文所述的核苷和核苷酸可在大沟面上进行化学修饰。在一些实施方案中，大沟化学修饰可包括氨基，硫醇基，烷基或卤素基团。
在本发明特别优选的实施方案中，核苷酸类似物/修饰选自碱基修饰，其优选选自2-氨基-6-氯嘌呤核苷-5′-三磷酸，2-氨基嘌呤-核糖-5′-三磷酸；2-氨基腺苷-5′-三磷酸，2′-氨基-2′-脱氧胞苷-三磷酸，2-硫代胞苷-5′-三磷酸，2-硫代尿苷-5′-三磷酸，2′-氟胸苷-5′-三磷酸，2′-O-甲基肌苷-5′-三磷酸4-硫代尿苷-5′-三磷酸，5-氨基烯丙基胞苷-5′-三磷酸，5-氨基烯丙基尿苷-5′-三磷酸，5-溴胞苷-5′-三磷酸，5-溴尿苷-5′-三磷酸，5-溴-2′-脱氧胞苷-5′-三磷酸，5-溴-2′-脱氧尿苷-5′-三磷酸，5-碘胞苷-5′-三磷酸，5-碘-2′-脱氧胞苷-5′-三磷酸，5-碘尿苷-5′-三磷酸，5-碘-2′-脱氧尿苷-5′-三磷酸，5-甲基胞苷-5′-三磷酸，5-甲基尿苷-5′-三磷酸，5-丙炔基-2′-脱氧胞苷-5′-三磷酸，5-丙炔基-2′-脱氧尿苷-5′-三磷酸，6-氮杂胞苷-5′-三磷酸，6-氮杂尿苷-5′-三磷酸，6-氯嘌呤核苷-5′-三磷酸，7-脱氮腺苷-5′-三磷酸，7-脱氮鸟苷-5′-三磷酸，8-叠氮基腺苷-5′-三磷酸，8-叠氮基腺苷-5′-三磷酸，苯并咪唑-核苷-5′-三磷酸，N1-甲基腺苷-5′-三磷酸，N1-甲基鸟苷-5′-三磷酸，N6-甲基腺苷-5′-三磷酸，O6-甲基鸟苷-5′-三磷酸，假尿苷-5′-三磷酸，或嘌呤霉素-5′-三磷酸，黄嘌呤核苷-5′-三磷酸。特别优选用于碱基修饰的核苷酸，其选自由以下组成的组中的碱基修饰的核苷酸：5-甲基胞苷-5′-三磷酸，7-脱氮鸟苷-5′-三磷酸，5-溴胞苷-5′-三磷酸和假尿苷5′-三磷酸。
在一些实施方案中，经修饰的核苷包括吡啶-4-酮核糖核苷，5-氮杂-尿苷，2-硫代-5-氮杂-尿苷，2-硫代尿苷，4-硫代-假尿苷，2-硫代-假尿苷，5-羟基尿苷，3-甲基尿苷，5-羧甲基-尿苷，1-羧甲基-假尿苷，5-丙炔基-尿苷，1-丙炔基-假尿苷，5-牛磺酸甲基尿苷，1-牛磺酸甲基-假尿苷，5-牛磺酸甲基-2-硫代-尿苷，1-牛磺酸甲基-4-硫代-尿苷，5-甲基-尿苷，1-甲基-假尿苷，4-硫代-1-甲基-假尿苷，2-硫代-1-甲基-假尿苷，1-甲基-1-脱氮-假尿苷，2-硫代-1-甲基-1-脱氮-假尿苷，二氢尿苷，二氢假尿苷，2-硫代-二氢尿苷，2-硫代-二氢假尿苷，2-甲氧基尿苷，2-甲氧基-4-硫代-尿苷，4-甲氧基-假尿苷，和4-甲氧基-2-硫代-假尿苷。
在一些实施方案中，经修饰的核苷包括5-氮杂-胞苷，假异胞苷，3-甲基胞苷，N4-乙酰基胞苷，5-甲酰基胞苷，N4-甲基胞苷，5-羟基甲基胞苷，1-甲基-假异胞苷，吡咯并-胞苷，吡咯并-假异胞苷，2-硫代-胞苷，2-硫代-5-甲基-胞苷，4-硫代-假异胞苷，4-硫代-1-甲基-假异胞苷，4-硫代-1-甲基-1-脱氮-假异胞苷，1-甲基-1-脱氮-假异胞苷，4-脱氧尿苷(zebularine)，5-氮杂-4-脱氧尿苷，5-甲基-4-脱氧尿苷，5-氮杂-2-硫代-4-脱氧尿苷，2-硫代-4-脱氧尿苷，2-甲氧基-胞苷，2-甲氧基-5-甲基-胞苷，4-甲氧基-假异胞苷，和4-甲氧基-1-甲基-假异胞苷。
在其他实施方案中，经修饰的核苷包括2-氨基嘌呤，2，6-二氨基嘌呤，7-脱氮-腺嘌呤，7-脱氮-8-氮杂-腺嘌呤，7-脱氮-2-氨基嘌呤，7-脱氮-8-氮杂-2-氨基嘌呤，7-脱氮-2，6-二氨基嘌呤，7-脱氮-8-氮杂-2，6-二氨基嘌呤，1-甲基腺苷，N6-甲基腺苷，N6-异戊烯基腺苷，N6-(顺式-羟基异戊烯基)腺苷，2-甲硫基-N6-(顺式-羟基异戊烯基)腺苷，N6-甘氨酰基氨基甲酰基腺苷，N6-苏氨酰氨基甲酰基腺苷，2-甲硫基-N6-苏氨酰氨基甲酰腺苷，N6，N6-二甲基腺苷，7-甲基腺嘌呤，2-甲硫基-腺嘌呤和2-甲氧基-腺嘌呤。
在其他实施方案中，经修饰的核苷包括肌苷，1-甲基-肌苷，怀俄苷(wyosine)，怀丁苷(wybutosine)，7-脱氮-鸟苷，7-脱氮-8-氮杂-鸟苷，6-硫代-鸟苷，6-硫代-7-脱氮-鸟苷，6-硫代-7-脱氮-8-氮杂-鸟苷，7-甲基-鸟苷，6-硫代-7-甲基-鸟苷，7-甲基肌苷，6-甲氧基-鸟苷，1-甲基鸟苷，N2-甲基鸟苷，N2，N2-二甲基鸟苷，8-氧代-鸟苷，7-甲基-8-氧代-鸟苷，1-甲基-6-硫代-鸟苷，N2-甲基-6-硫代-鸟苷，和N2，N2-二甲基-6-硫代-鸟苷。
在一些实施方案中，核苷酸可以在大沟面上修饰，并且可以包括用甲基或卤素基团替代尿嘧啶的C-5上的氢。
在具体的实施方案中，经修饰的核苷是5′-O-(1-硫代磷酸酯)-腺苷，5′-O-(1-硫代磷酸酯)-胞苷，5′-O-(1-硫代磷酸酯)-鸟苷，5′-O-(1-硫代磷酸酯)-尿苷或5′-O-(1-硫代磷酸酯)-假尿苷。
在进一步的具体实施方案中，如本文所述的经修饰的RNA可包含选自以下的核苷修饰：6-氮杂-胞苷，2-硫代-胞苷，α-硫代-胞苷，假-异-胞苷，5-氨基烯丙基-尿苷，5-碘-尿苷，N1-甲基-假尿苷，5，6-二氢尿苷，α-硫代-尿苷，4-硫代-尿苷，6-氮杂-尿苷，5-羟基-尿苷，脱氧-胸苷，5-甲基-尿苷，吡咯并-胞苷，肌苷，α-硫代-鸟苷，6-甲基-鸟苷，5-甲基-胞苷，8-氧代-鸟苷，7-脱氮-鸟苷，N1-甲基一腺苷，2-氨基-6-氯-嘌呤，N6-甲基-2-氨基-嘌呤，假-异-胞苷，6-氯-嘌呤，N6-甲基-腺苷，α-硫代-腺苷，8-叠氮基-腺苷，7-脱氮-腺苷。
脂质修饰：
根据进一步的实施方案，如本文所定义的经修饰的RNA可含有脂质修饰。这种脂质修饰的RNA通常包含如本文所定义的RNA，优选如本文所述的编码RNA。如本文所定义的这种脂质修饰的RNA通常还包含至少一个与该RNA共价连接的接头，和至少一个与相应接头共价连接的脂质。或者，脂质修饰的RNA包含至少一个如本文所定义的RNA(优选如本文所述的编码RNA)和与该RNA共价连接(没有接头)的至少一个(双功能)脂质。根据第三备选方案，脂质修饰的RNA包含如本文所定义的RNA分子(优选如本文所述的编码RNA)，与该RNA共价连接的至少一个接头，和与相应接头共价连接的至少一个脂质，和还有与该RNA共价连接(没有接头)至少一个(双功能)脂质。在这种情况下，特别优选脂质修饰存在于线性RNA序列的末端。
G/C含量优化：
根据本发明特别优选的实施方案，修饰如本文所述的至少一种编码RNA。优选地，通过修饰并优选增加其至少一个编码区的G(鸟苷)/C(胞苷)含量来稳定RNA。其中，与其特定野生型编码序列(即相应的未经修饰的RNA)的编码区的G/C含量相比，编码区的RNA的G/C含量增加。然而，与特定野生型/未经修饰RNA的编码氨基酸序列相比，RNA的编码氨基酸序列优选不经修饰。
如本文所述的对至少一种编码RNA的G/C含量的修饰基于以下事实：具有增加的G(鸟苷)/C(胞苷)含量的RNA序列通常比具有增加的A(腺苷)/U(尿苷)含量的RNA序列更稳定。因此，与野生型编码序列或RNA相比，编码序列或完整RNA的密码子可以变化，使得它们包括增加量的G/C核苷酸，而优选保留翻译的氨基酸序列。关于若干个密码子编码同一个氨基酸(所谓的遗传密码简并性)的事实，可以确定对稳定性最有利密码子(所谓的备选密码子使用)。取决于由至少一种RNA编码的氨基酸，与其野生型序列相比，存在修饰RNA序列的各种可能性。在由密码子编码的氨基酸的情况下，其仅含有G或C核苷酸，不需要修饰密码子。因此，Pro(CCC或CCG)，Arg(CGC或CGG)，Ala(GCC或GCG)和Gly(GGC或GGG)的密码子不需要修饰，因为不存在A或U。相反，含有A和/或U核苷酸的密码子可以通过置换编码相同氨基酸但不含A和/或U的其他密码子进行修饰。这些密码子的例子是：Pro的密码子可以从CCU或CCA修饰为CCC或CCG；Arg的密码子可以从CGU或CGA或AGA或AGG修饰为CGC或CGG；Ala的密码子可以从GCU或GCA修饰为GCC或GCG；Gly的密码子可以从GGU或GGA修饰为GGC或GGG。在其他情况下，尽管不能从密码子中除去A或U核苷酸，但是可以通过使用含有较低含量的A和/或U核苷酸的密码子来降低A和U含量。这些的例子是：Phe的密码子可以从UUU修饰为UUC；Leu的密码子可以从UUA，UUG，CUU或CUA修饰为CUC或CUG；Ser的密码子可以从UCU或UCA或AGU修饰为UCC，UCG或AGC；Tyr的密码子可以从UAU修饰为UAC；Cys的密码子可以从UGU修饰为UGC；His的密码子可以从CAU修饰为CAC；Gln的密码子可以从CAA修饰为CAG；Ile的密码子可以从AUU或AUA修饰为AUC；Thr的密码子可以从ACU或ACA修饰为ACC或ACG；Asn的密码子可以从AAU修饰为AAC；Lys的密码子可以从AAA修饰为AAG；Val的密码子可以从GUU或GUA修饰为GUC或GUG；Asp的密码子可以从GAU修饰为GAC；Glu的密码子可以从GAA修饰为GAG；终止密码子UAA可以修饰为UAG或UGA。另一方面，在Met(AUG)和Trp(UGG)的密码子的情况下，不存在序列修饰的可能性。上面列出的置换可以单独使用或以所有可能的组合使用，以增加本发明组合物的至少一种mRNA与其特定野生型mRNA(即原始序列)相比的G/C含量。因此，例如，野生型序列中出现的Thr的所有密码子可以修饰为ACC(或ACG)。然而，优选地，例如，使用上述置换可能性的组合：
将编码原始序列(野生型mRNA)中的Thr的所有密码子置换为ACC(或ACG)和
将原始编码Ser的所有密码子置换为UCC(或UCG或AGC)；将编码原始序列中的Ile的所有密码子置换为AUC和
将原始编码Lys的所有密码子置换为AAG和
将原始编码Tyr的所有密码子置换为UAC；将原始序列中编码Val的所有密码子置换为GUC(或GUG)和
将原始编码Glu的所有密码子置换为GAG和
将原始编码A1a的所有密码子置换为GCC(或GCG)和
将原始编码Arg的所有密码子置换为CGC(或CGG)和
将原始编码Gly的所有密码子置换为GGC(或GGG)和
将原始编码Asn的所有密码子置换为AAC和
将原始编码Phe的所有密码子置换为UUC和
将原始编码Cys的所有密码子置换为UGC和
将原始编码Leu的所有密码子置换为CUG(或CUC)和
将原始编码Gln的所有密码子置换为CAG和
将原始编码Pro的所有密码子置换为CCC(或CCG)和
将原始编码His的所有密码子置换为CAC和
将原始编码Asp的所有密码子置换为GAC和
将原始编码终止密码子的所有密码子置换为UGA(或UAG)；等等。
优选地，与野生型RNA的编码区的G/C含量相比，如本文所述的至少一种编码RNA的编码区的G/C含量增加至少7％，更优选至少15％，特别优选至少20％。根据一个具体实施方案，编码本文定义的蛋白质或肽或其片段或变体的区域中至少5％，10％，20％，30％，40％，50％，60％，更优选至少70％，甚至更优选至少80％，最优选至少90％，95％或甚至100％的可置换密码子或野生型RNA序列或编码序列的完整序列被置换，从而增加G/C所述序列的含量。在这种情况下，与野生型序列相比，特别优选将本文所述的至少一种编码RNA的G/C含量增加至最大值(即100％的可置换密码子)，特别是在编码区中。
根据本发明，至少一种编码RNA的编码序列的进一步优选修饰是基于以下发现：翻译效率也由细胞中tRNA发生的不同频率确定。因此，如果所谓的“稀有密码子”存在于如本文所述的至少一种编码RNA的至少一个编码区中的程度增加，则相应的经修饰的至少一种编码RNA被翻译的程度相比于存在编码相对“频繁”tRNA的密码子的情况下显著更差。根据本发明，在如本文所述的经修饰的至少一种编码RNA中，与野生型RNA的相应区域相比，编码上述定义的肽或蛋白质之一的区域被修饰，使得野生型序列的至少一个密码子(其编码在细胞中相对稀有的tRNA的类型序列)被交换为以下密码子，所述密码子编码在细胞中相对频繁且携带与相对稀有的tRNA相同的氨基酸的tRNA。通过该修饰，修饰如本文所述的至少一种编码RNA的至少一个编码区的序列，使得插入频繁出现的tRNA的密码子。换句话说，根据本发明，通过该修饰，编码在细胞中相对稀有的tRNA的野生型序列的所有密码子在每种情况下可以交换为编码在细胞中相对频繁并且在每种情况下携带与相对稀有的tRNA相同的氨基酸的tRNA的密码子。相反，哪些tRNA在细胞中相对频繁地出现以及相反地哪些稀有出现，这是本领域技术人员已知的；参考例如Akashi，Curr.Opin.Genet.Dev.2001，11(6)：660-666。用于最频繁出现的tRNA的特定氨基酸的密码子例如Gly密码子(其使用在(人)细胞中最频繁发生的tRNA)是特别优选的。根据本发明，特别优选将在本文所述的经修饰的至少一种编码RNA中增加(特别是最大化)的序列G/C含量与“频繁”密码子连接而不修饰由RNA的编码区编码的蛋白质的氨基酸序列。该优选实施方案允许提供如本文所述的特别有效翻译和稳定(修饰)的至少一种编码RNA。如本文所述测定经修饰的至少一种编码RNA(增加的G/C含量；tRNA的交换)可以使用WO 02/098443(其公开内容包括在本发明的全部范围内)中解释的计算机程序进行。使用该计算机程序，可以借助遗传密码或其简并性结合使用编码在细胞中尽量频繁发生的tRNA的密码子来修饰任何所期望的编码RNA的核苷酸序列，使得产生最大G/C含量，与未经修饰的序列相比，由经修饰的至少一种编码RNA编码的氨基酸序列优选不被修饰。备选地，也可以仅修饰G/C含量或仅修饰与原始序列相比的密码子使用。Visual Basic 6.0中的源代码(使用的开发环境：带有Servicepack 3的Microsoft VisualStudio Enterprise 6.0)也在WO 02/098443中描述。在本发明的另一个优选实施方案中，本文所述的至少一种编码RNA的核糖体结合位点环境中的A/U含量与其特定的野生型RNA的核糖体结合位点环境中的A/U含量相比增加。该修饰(核糖体结合位点周围的A/U含量增加)提高了核糖体与所述至少一种RNA结合的效率。核糖体与核糖体结合位点的有效结合(Kozak序列：GCCGCCACCAUGG(SEQ ID NO：429)，AUG形成起始密码子)又具有所述至少一种编码RNA的有效翻译的作用。根据本发明的另一个实施方案，可以针对潜在的去稳定序列元件修饰如本文所述的至少一种编码RNA。特别地，与特定野生型RNA相比，可以修饰该RNA的编码区和/或5′和/或3′非翻译区，使得其不包含去稳定序列元件，经修饰的至少一种编码RNA编码的氨基酸序列与其特定的野生型RNA相比优选不被修饰。已知例如在真核RNA的序列中发生去稳定序列元件(DSE)，信号蛋白在体内与其结合并调节RNA的酶促降解。为了进一步稳定经修饰的至少一种编码RNA，任选地在编码如本文所定义的蛋白质或肽的区域中，因此可以进行与野生型RNA的相应区域相比的一个或多个这样的修饰，使得那里不含或基本上不含有去稳定序列元件。根据本发明，存在于非翻译区(3′-和/或5′-UTR)中的DSE也可以通过这些修饰从本文所述的至少一种编码RNA中消除。这种去稳定序列例如是富含AU的序列(AURES)，其存在于许多不稳定RNA的3′UTR区段中(Caput等.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 1986，83：1670to1674)。因此，与野生型RNA相比，优选修饰如本文所述的至少一种编码RNA，使得所述至少一种编码RNA不包含此类去稳定序列。这也适用于那些被可能的内切核酸酶识别的序列基序，例如，序列GAACAAG，其包含在编码转铁蛋白受体的基因的3′UTR区段中(Binder等.，EMBO J.1994，13：1969至1980)。这些序列基序也优选在如本文所述的至少一种编码RNA中除去。
在优选的实施方案中，本发明因此提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中所述至少一种编码序列包含
a)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：25-30；80-85；91-96；102-107；113-118；601-606；124-129；135-140；612-617；623-628；716-725；727；1018-1021和1059-1062，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：32；87；98；109；120；131；142；608；619；630；632；636-644；726和1058，或任何这些序列的片段或变体；
b)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：33；88；99；110；121；132；143；609；620；631；728-738和1025-1028，或任何这些序列的片段或变体；
c)根据SEQ ID NO：646，650-658，662，666-674或1029-1036中任一个的核酸序列，优选地根据SEQ ID NO：646或650-658中的任一个的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和根据SEQ ID NO：678，682-690，694，698-705，707或1037-1041中任一个的核酸序列；优选地根据SEQ ID NO：678或682-690中任一个的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体；
或者
根据SEQ ID NO：710或713的核酸序列或这些核酸序列中任一个的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：23；78；89；100；111；122；133；599；610；621和1022-1024，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：24；79；90；101；112；123；134；600；611；622；1043和1047-1054，或任何这些序列的片段或变体。
适应人类密码子使用：
根据本发明，如本文所述的至少一种编码RNA的进一步优选的修饰基于以下发现：编码相同氨基酸的密码子以不同频率出现。根据本发明，在如本文所述的经修饰的至少一种编码RNA中，与野生型RNA的相应区域相比，优选修饰编码至少一种上述定义的肽或蛋白质(编码序列)的区域，使得编码相同氨基酸的密码子的频率对应于例如表2所示人编码使用中存在的该密码子的天然存在频率。
这意味着，例如，对于根据本发明的编码的蛋白质的氨基酸序列中存在的氨基酸丙氨酸(Ala)，野生型编码序列的调整方式是使密码子“GCC”的使用频率为0.40，密码子“GCT”的使用频率为0.28，密码子“GCA”的使用频率为0.22，并且密码子“GCG”的使用频率为0.10等(见表2)。
表2：人密码子使用表(最常用密码子标记星号)
在优选的实施方案中，本发明因此提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中所述至少一种编码序列包含
a)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：47-52和58-63，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：54；65和634，或任何这些序列的片段或变体；
b)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：55-66，或任何这些序列的片段或变体；
c)根据SEQ ID NO：648，659，664或675中任一个的核酸序列，优选地根据SEQ IDNO：648或659的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和根据SEQ ID NO：680，691，696或708中任一个的核酸序列；优选地根据SEQ ID NO：680或691的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体；
或者
根据SEQ ID NO：711或714的核酸序列或这些核酸序列中任一个的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：45和56，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：46-57和1045，或任何这些序列的片段或变体。
密码子优化：
根据特别优选的实施方案，优选的是，编码在细胞中相对稀有的tRNA的本文所述的至少一种编码RNA的编码区的野生型序列的所有密码子在每种情况下被交换为编码在细胞中相对频繁并且在每种情况下携带与相对稀有的tRNA相同的氨基酸的tRNA的密码子。因此，特别优选针对每个编码的氨基酸使用最频繁的密码子(参见表2，最频繁的密码子用星号标记)。
这意味着，例如，对于根据本发明的编码的肽或蛋白质的氨基酸序列中存在的氨基酸丙氨酸(Ala)，野生型编码序列以如下方式进行调整：最频繁的人密码子“GCC”总是用于所述氨基酸，或对于氨基酸半胱氨酸(Cys)，野生型序列以如下方式进行调整：最频繁的人密码子“TGC”总是用于所述氨基酸，等。
在优选的实施方案中，本发明因此提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中所述至少一种编码序列包含
a)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：69至74，或任何这些序列的片段或变体，优选根据SEQ ID NO：76和635的核酸序列，或去片段或变体；
b)根据SEQ ID NO：77的核酸序列，或其片段或变体；
c)根据SEQ ID NO：649，660，665或676中任一个的核酸序列，优选地根据SEQ IDNO：649或660的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和根据SEQ ID NO：681，692，697或709中任一个的核酸序列；优选地根据SEQ ID NO：681或692的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体；
或者
根据SEQ ID NO：712或715的核酸序列或这些核酸序列中任一个的片段或变体，和/或
d)任选地，根据SEQ ID NO：67的核酸序列，或其片段或变体，更优选根据SEQ IDNO：68或1046的核酸序列，或其片段或变体。
C-富集：
根据另一个实施方案，可以通过增加RNA的C含量，优选至少一种编码RNA的编码区的C含量来修饰如本文所述的至少一种编码RNA。
在本发明特别优选的实施方案中，本文所述的至少一种编码RNA的编码区的C含量与其特定野生型RNA(即未经修饰的mRNA)的编码区的C含量相比被修饰，特别是增加。与由特定野生型RNA编码的氨基酸序列相比，由至少一种编码RNA编码的氨基酸序列优选不被修饰。
在本发明的优选实施方案中，经修饰的RNA被修饰使得理论上实现最大胞嘧啶含量的至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％或80％，或至少90％或甚至最大胞嘧啶含量。
在进一步优选的实施方案中，“胞嘧啶含量可优化的”RNA野生型序列的密码子的至少10％，20％，30％，40％，50％，60％，70％，80％，90％或甚至100％被野生型序列中存在的具有更高胞嘧啶含量的密码子替代。
在进一步优选的实施方案中，可以另外修饰野生型编码序列的一些密码子，使得细胞中相对稀有的tRNA的密码子被密码子交换为细胞中相对频繁的tRNA，条件是置换的相对频繁的tRNA的密码子携带与原始野生型密码子的相对稀有的tRNA相同的氨基酸。优选地，相对稀有的tRNA的所有密码子被细胞中相对频繁的tRNA的密码子替代，仅由不含任何胞嘧啶的密码子编码的编码氨基酸的密码子除外，或者由两个密码子(每个密码子含有相同数量的胞嘧啶)编码的谷氨酰胺(Gln)除外。
在本发明的另一个优选实施方案中，修饰经修饰的RNA，使得通过编码细胞中相对频繁的tRNA的密码子实现理论上最大胞嘧啶含量的至少80％或至少90％或甚至最大胞嘧啶含量，其中氨基酸序列保持不变。
由于遗传密码的天然存在的简并性，不止一个密码子可编码特定的氨基酸。因此，20个天然存在的氨基酸中的18个由超过1个密码子编码(Tryp和Met例外)，例如，由2个密码子(例如Cys，Asp，Glu)，3个密码子(例如Ile)，4个密码子(例如Al，Gly，Pro)或6个密码子(例如Leu，Arg，Ser)编码。然而，并非所有编码相同氨基酸的密码子在体内条件下同样频繁使用。根据每个单一生物，建立典型的密码子使用概况。
在本发明的上下文中使用的术语“胞嘧啶含量可优化的密码子”是指密码子，其表现出比编码相同氨基酸的其他密码子更低量的胞嘧啶。因此，任何野生型密码子(其可以被编码相同氨基酸的另一个密码子替代并且在该密码子内显示更高数量的胞嘧啶)被认为是胞嘧啶可优化的(C可优化的)。通过野生型编码区内的特定C优化密码子对C可优化的野生型密码子的任何此类置换增加了其总C含量并反映了富含C的经修饰的RNA序列。C最大化的RNA序列包含所有可能的C可优化的密码子的C优化密码子。因此，100％或所有理论上可替代的C可优化的密码子在这样的条件下实际上在编码区的整个长度上被C优化的密码子替代。
在这种情况下，胞嘧啶含量可优化的密码子是以下密码子，其含有比编码相同氨基酸的其他密码子更少数量的胞嘧啶。
任何密码子GCG，GCA，GCU编码氨基酸Ala，其可以由编码相同氨基酸的密码子GCC交换，和/或
编码Cys的密码子UGU可以由编码相同氨基酸的密码子UGC交换，和/或
编码Asp的密码子GAU可以由编码相同氨基酸的密码子GAC交换，和/或
编码Phe的密码子UUU可以与编码相同氨基酸的密码子UUC交换，和/或
编码Gly的任何密码子GGG，GGA，GGU可以与编码相同氨基酸的密码子GGC交换，和/或
编码His的密码子CAU可以由编码相同氨基酸的密码子CAC交换，和/或
编码Ile的任何密码子AUA，AUU可以与密码子AUC交换，和/或
编码Leu的任何密码子UUG，UUA，CUG，CUA，CUU可以与编码相同氨基酸的密码子CUC交换，和/或
编码Asn的密码子AAU可以与编码相同氨基酸的密码子AAC交换，和/或
编码Pro的任何密码子CCG，CCA，CCU可以与编码相同氨基酸的密码子CCC交换，和/或
编码Arg的任何密码子AGG，AGA，CGG，CGA，CGU可以与编码相同氨基酸的密码子CGC交换，和/或
编码Ser的任何密码子AGU，AGC，UCG，UCA，UCU可以与编码相同氨基酸的密码子UCC交换，和/或
编码Thr的任何密码子ACG，ACA，ACU可以与编码相同氨基酸的密码子ACC交换，和/或
编码Val的任何密码子GUG，GUA，GUU可以与编码相同氨基酸的密码子GUC交换，和/或
编码Tyr的密码子UAU可以与编码相同氨基酸的密码子UAC交换。
在任何上述情况中，胞嘧啶的数量每交换密码子增加1。编码区的所有非C优化密码子(对应于C可优化的密码子)的交换产生C最大化编码序列。在本发明的上下文中，至少70％(优选编码区域内至少80％，更优选至少90％)的非C优化密码子被野生型序列的C优化密码子替代。
可能优选的是，对于一些氨基酸，C可优化密码子被C优化密码子替代的百分比小于70％，而对于其他氨基酸，替代的密码子的百分比高于70％以满足编码区的所有C可优化的野生型密码子的至少70％的C优化的总百分比。
优选地，在本发明的C优化的RNA中，对于任何给定的氨基酸，至少50％的C可优化的野生型密码子被C优化的密码子替代，例如，任何经修饰的富含C的RNA优选在C可优化的野生型密码子(其编码任何一种上述氨基酸Ala，Cys，Asp，Phe，Gly，His，Ile，Leu，Asn，Pro，Arg，Ser，Thr，Val和Tyr)位置含有至少50％优选至少60％C优化的密码子。
在这种情况下，可以使用编码氨基酸的密码子(其不是胞嘧啶含量可优化的但由至少两个密码子编码)而无需任何进一步的选择过程。然而，编码细胞例如人细胞中相对稀有的tRNA的野生型序列的密码子可以被替换为编码细胞中相对频繁的tRNA的密码子，由此两者编码相同的氨基酸。因此，编码Glu的相对稀有的密码子GAA可以与编码相同氨基酸的相对频繁的密码子GAG交换，和/或
编码Lys的相对稀有的密码子AAA可以与编码相同氨基酸的相对频繁的密码子AAG交换，和/或
编码Gln的相对稀有的密码子CAA与编码相同氨基酸的相对频繁的密码子CAG交换。
在这种情况下，仅由一个密码子编码的氨基酸Met(AUG)和Trp(UGG)保持不变。终止密码子不是胞嘧啶含量优化的，然而，相对稀有的终止密码子琥珀密码子，赭石密码子(UAA，UAG)可以通过与相对频繁的终止密码子蛋白石密码子(UGA)交换。
上面列出的置换显然可以单独使用，但也可以以所有可能的组合使用，以便与野生型RNA序列相比优化经修饰的RNA的胞嘧啶含量。
因此，与野生型RNA的编码区相比，可以改变编码肽或蛋白质的经修饰RNA的区域，使得氨基酸由至少两个或更多个密码子(其中一个包含一个额外的胞嘧啶，这种密码子可以与包含一个额外胞嘧啶的C可优化密码子交换)编码，由此与野生型序列相比氨基酸不变。
在优选的实施方案中，本发明因此提供如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少一种mRNA，其中所述至少一种编码序列包含
a)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：36至41，或任何这些序列的片段或变体，优选根据SEQ ID NO：43和633的核酸，或去片段或变体；
b)根据SEQ ID NO：44的核酸序列，或其片段或变体；
c)根据SEQ ID NO：647或663的核酸序列，优选地根据SEQ ID NO：647的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和根据SEQ ID NO：679或695的核酸序列；优选地根据SEQ ID NO：679的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和/或
d)任选地，根据SEQ ID NO：34的核酸序列，或其片段或变体，优选根据SEQ ID NO：35和1044的核酸序列，或其片段或变体。
根据进一步的实施方案，如本文所述的至少一种编码RNA优选包含以下结构元件中的至少一种：5′和/或3′非翻译区域元件(UTR元件)，特别是5′UTR元件，所述5′UTR元件包含衍生自TOP基因的5′UTR的核酸序列或其片段，同源物或变体或由其组成，或5′和/或3′UTR元件，可以从提供稳定mRNA的基因或从其同源物，片段或变体衍生；组蛋白茎环结构，优选其3′非翻译区的组蛋白茎环；5′帽结构；聚A尾(聚(A)序列)；或聚(C)序列。
在优选的实施方案中，如本文所述的至少一种编码RNA包含至少一种5′或3′UTR元件。在该上下文中，UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列衍生自任何天然存在的基因的5′或3′UTR或衍生自基因的5′或3′UTR的片段，同源物或变体。优选地，根据本发明使用的5′或3′UTR元件与如本文所述的至少一种编码RNA的编码区异源。即使优选衍生自天然存在的基因的5′或3′UTR元件，也可以在本发明的上下文中使用合成工程化的UTR元件。
在一个特别优选的实施方案中，所述至少一种编码RNA包含至少一种5′非翻译区元件(5′UTR元件)，其包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列衍生自TOP基因的5′UTR或衍生自TOP基因的5′UTR的片段，同源物或变体。
特别优选5′UTR元件不包含如上定义的TOP基序或5′TOP。
在一些实施方案中，衍生自TOP基因的5′UTR的5′UTR元件的核酸序列在其3′末端在衍生其的基因或mRNA的起始密码子(例如A(U/T)G)上游位置1，2，3，4，5，6，7，8，9或10处的核苷酸处终止。因此，5′UTR元件不包含蛋白质编码区的任何部分。因此，优选地，编码区提供如本文所述的至少一种编码RNA的唯一蛋白质编码部分。
衍生自TOP基因的5′UTR的核酸序列优选衍生自真核TOP基因，优选植物或动物TOP基因，更优选脊索动物TOP基因，甚至更优选脊椎动物TOP基因，最优选哺乳动物TOP基因，例如人TOP基因。
例如，5′UTR元件优选选自以下5′UTR元件，所述5′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列衍生自选自由以下组成的组的核酸序列：专利申请WO2013/143700(其公开内容通过引用并入本文)的SEQ ID No.1-1363，SEQ ID NO：1395，SEQ ID NO：1421和SEQID NO：1422，选自专利申请WO2013/143700的SEQ ID No.1-1363，SEQ ID NO：1395，SEQ IDNO：1421和SEQ ID NO：1422的同源物，选自其变体，或优选选自相应的RNA序列。术语“专利申请WO2013/143700的SEQ ID No.1-1363，SEQ ID NO：1395，SEQ ID NO：1421和SEQ ID NO：1422的同源物”是指除了智人之外的其他物种的序列，其是与根据专利申请WO2013/143700的SEQ ID No.1-1363，SEQ ID NO：1395，SEQ ID NO：1421和SEQ ID NO：1422的序列的同源物。
在一个优选的实施方案中，5′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列衍生自专利申请WO2013/143700的SEQ ID No.1-1363，SEQ ID NO：1395，SEQ ID NO：1421和SEQ ID NO：1422的、专利申请WO2013/143700的SEQ ID No.1-1363，SEQ ID NO：1395，SEQID NO：1421和SEQ ID NO：1422的同源物的、其变体的、或相应的RNA序列的核酸序列的从核苷酸位置5(即位于序列中第5位的核苷酸)延伸至紧邻起始密码子5′的核苷酸位置(位于序列的3′末端)(例如紧邻ATG序列5′的核苷酸位置)的核酸序列。特别优选5′UTR元件衍生自专利申请WO2013/143700的SEQ ID No.1-1363，SEQ ID NO：1395，SEQ ID NO：1421和SEQ IDNO：1422的、专利申请WO2013/143700的SEQ ID No.1-1363，SEQ ID NO：1395，SEQ ID NO：1421和SEQ ID NO：1422的同源物的、其变体的、或相应的RNA序列的核酸序列的从紧邻5′-TOP的3′的核苷酸位置延伸至紧邻起始密码子5′的核苷酸位置(位于序列的3′末端)(例如紧邻ATG序列5′的核苷酸位置)的核酸序列。
在一些实施方案中，5′UTR元件可以是WO2016/107877中描述的任何5′UTR元件。在本文中，涉及5′UTR元件/序列的WO2016/107877的公开内容在此引入作为参考。特别优选的5′UTR元件是根据专利申请WO2016/107877的SEQ ID NO：25-30和SEQ ID NO：319-382的核酸序列，或这些序列的片段或变体。在这种情况下，特别优选5′UTR元件包含根据专利申请WO2016/107877的SEQ ID NO：25-30和SEQ ID NO：319-382的核酸序列的相应RNA序列或由其组成。
在某些实施方案中，5′UTR元件可以是WO2017/036580中描述的任何5′UTR元件。在本文中，涉及5′UTR元件/序列的WO2017/036580的公开内容在此引入作为参考。特别优选的5′UTR元件是根据专利申请WO2017/036580的SEQ ID NO：1至151的核酸序列，或这些序列的片段或变体。在本文中，特别优选5′UTR元件包含根据专利申请WO2017/036580的SEQ IDNO：1至151的核酸序列的相应RNA序列或由其组成。
在一个特别优选的实施方案中，5′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列衍生自编码核糖体蛋白的TOP基因的5′UTR或来自编码核糖体蛋白的TOP基因的5′UTR的变体。例如，5′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列衍生自专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：67，170，193，244，259，554，650，675，700，721，913，1016，1063，1120，1138，和1284-1360中任一项的核酸序列的、如本文所述的其相应RNA序列，其同源物或其变体的5′UTR(优选缺乏5′-TOP基序)。如上所述，从位置5延伸至紧邻ATG的5′的核苷酸(位于序列的3′末端)的序列对应于所述序列的5′UTR。
优选地，5′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列衍生自编码核糖体大蛋白(RPL)的TOP基因的5′UTR或来自编码核糖体大蛋白(RPL)的TOP基因的5′UTR的同源物或变体(RPL)。例如，5′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列衍生自专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：67，259，1284-1318，1344，1346，1348-1354，1357，1358，1421和1422中任一项的核酸序列的、如本文所述的其相应RNA序列，其同源物或其变体的5′UTR(优选缺乏5′-TOP基序)。
在一个特别优选的实施方案中，5′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列衍生自核糖体蛋白大32基因的5′UTR，优选来自脊椎动物核糖体蛋白大32(L32)基因的5′UTR，更优选来自哺乳动物核糖体蛋白大32(L32)基因的5′UTR，最优选来自人核糖体蛋白大32(L32)基因的5′UTR，或来自核糖体蛋白大32基因的5′UTR变体，优选来自脊椎动物核糖体蛋白大32(L32)基因的5′UTR变体，更优选来自哺乳动物核糖体蛋白大32(L32)基因的5′UTR变体，最优选来自人核糖体蛋白大32(L32)基因的5′UTR变体，其中优选5′UTR元件不包含所述基因的5′-TOP。
5′UTR元件的优选序列对应于专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：1368。
因此，在特别优选的实施方案中，5′UTR元件包含核酸序列或由核酸序列组成，所述核酸序列与如上所述的核酸序列(根据SEQ ID NO：408(缺乏5′末端寡嘧啶段的人核糖体蛋白大32的5′UTR：
GGCGCTGCCTACGGAGGTGGCAGCCATCTCCTTCTCGGCATC；
对应于专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：1368))或与对应的RNA序列具有至少约20％，优选至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，或其中至少一个5′UTR元件包含核酸序列的片段或由其组成，所述片段与根据SEQ ID NO：409的核酸序列或更优选与相应的RNA序列具有至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，其中优选地，所述片段如上所述，即是连续的核苷酸段，代表全长5′UTR的至少20％等。
优选地，片段的长度为至少约20个核苷酸或更多，优选至少约30个核苷酸或更多，更优选至少约40个核苷酸或更多。优选地，片段是如本文所述的功能片段。
在一些实施方案中，如本文所述的至少一种编码RNA包含5′UTR元件，其包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列源自脊椎动物TOP基因例如哺乳动物例如人TOP基因的5′UTR，所述TOP基因选自RPSA，RPS2，RPS3，RPS3A，RPS4，RPS5，RPS6，RPS7，RPS8，RPS9，RPS10，RPS11，RPS12，RPS13，RPS14，RPS15，RPS15A，RPS16，RPS17，RPS18，RPS19，RPS20，RPS21，RPS23，RPS24，RPS25，RPS26，RPS27，RPS27A，RPS28，RPS29，RPS30，RPL3，RPL4，RPL5，RPL6，RPL7，RPL7A，RPL8，RPL9，RPL10，RPL10A，RPLl1，RPL12，RPL13，RPL13A，RPL14，RPL15，RPL17，RPL18，RPL18A，RPL19，RPL21，RPL22，RPL23，RPL23A，RPL24，RPL26，RPL27，RPL27A，RPL28，RPL29，RPL30，RPL31，RPL32，RPL34，RPL35，RPL35A，RPL36，RPL36A，RPL37，RPL37A，RPL38，RPL39，RPL40，RPL41，RPLP0，RPLP1，RPLP2，RPLP3，RPLP0，RPLP1，RPLP2，EEF1A1，EEF1B2，EEF1D，EEF1G，EEF2，EIF3E，EIF3F，EIF3H，EIF2S3，EIF3C，EIF3K，EIF3EIP，EIF4A2，PABPC1，HNRNPAl，TPT1，TUBB1，UBA52，NPM1，ATP5G2，GNB2L1，NME2，UQCRB，或来自其同源物或变体，其中优选5′UTR元件不包含TOP基序或所述基因的5′-TOP，并且其中任选地，5′UTR元件在其5′末端以在5′末端寡嘧啶段(TOP)下游的位置1，2，3，4，5，6，7，8，9或10处的核苷酸开始，并且其中进一步任选地衍生自TOP基因的5′UTR的5′UTR元件的核酸序列在其3′末端在衍生其的基因的起始密码子(A(U/T)G)上游位置1，2，3，4，5，6，7，8，9或10处的核苷酸处终止。
在某些实施方案中，如本文所述的至少一种编码RNA包含5′UTR元件，其包含核酸序列或由所述核酸序列组成，所述核酸序列衍生自由以下组成的组的基因的5′UTR：Mp68(6.8kDa线粒体蛋白脂质)，Nosip(一氧化氮合酶相互作用蛋白)，HSD17B4(羟基类固醇(17-β)脱氢酶4)，Rpl31(60S核糖体蛋白L31)，TUBB4B(微管蛋白β-4B链)，ATP5A1(ATP合酶亚基α(线粒体))和Ndufa4.1(细胞色素c氧化酶亚基NDUFA4)，或选自任何这些基因的变体的5′UTR，其中基因或其变体优选是脊椎动物基因，更优选哺乳动物基因，甚至更优选人基因。
根据进一步优选的实施方案，如本文所述的至少一种编码RNA包含5′UTR元件，其包含核酸序列或由所述核酸序列组成，所述核酸序列衍生自由以下组成的组的基因的5′UTR：Mp68(6.8kDa线粒体蛋白脂质)，Nosip(一氧化氮合酶相互作用蛋白)，HSD17B4(羟基类固醇(17-β)脱氢酶4)，Rpl31(60S核糖体蛋白L31)，TUBB4B(微管蛋白β-4B链)，ATP5A1(ATP合酶亚基α(线粒体))，Ndufa4.1(细胞色素c氧化酶亚基NDUFA4)，核糖体蛋白大32基因(RPL32)，核糖体蛋白大35基因(RPL35)，核糖体蛋白大21基因(RPL21)，ATP合酶，H+转运，线粒体F1复合物，α亚基1，心肌(ATP5A1)基因，雄激素诱导型1基因(AIG1)，细胞色素c氧化酶亚基VIc基因(COX6C)和N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶(酸性神经酰胺酶))1基因(ASAH1)，或选自任何这些基因的变体的5′UTR，其中基因或其变体优选是脊椎动物基因，更优选哺乳动物基因，甚至更优选人基因。
在进一步特别优选的实施方案中，5′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列衍生自核糖体蛋白大32基因(RPL32)，核糖体蛋白大35基因(RPL35)，核糖体蛋白大21基因(RPL21)，ATP合成酶，H+转运，线粒体F1复合物，α亚基1，心肌(ATP5A1)基因，羟基类固醇(17-β)脱氢酶4基因(HSD17B4)，雄激素诱导型1基因(AIG1)，细胞色素c氧化酶亚基VIc基因(COX6C)，或N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶(酸性神经酰胺酶)1基因(ASAH1)或其变体的5′UTR，优选来自脊椎动物核糖体蛋白大32基因(RPL32)，脊椎动物核糖体蛋白大35基因(RPL35)，脊椎动物核糖体蛋白大21基因(RPL21)，脊椎动物ATP合酶，H+转运，线粒体F1复合物，α亚基1，心肌(ATP5A1)基因，脊椎动物羟基类固醇(17-β)脱氢酶4基因(HSD17B4)，脊椎动物雄激素诱导型1基因(AIG1)，脊椎动物细胞色素c氧化酶亚基VIc基因(COX6C)，或脊椎动物N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶(酸性神经酰胺酶)1基因(ASAH1)或其变体的5′UTR，更优选来自哺乳动物核糖体蛋白质大32基因(RPL32)，核糖体蛋白大35基因(RPL35)，核糖体蛋白大21基因(RPL21)，哺乳动物ATP合酶，H+转运，线粒体F1复合物，α亚基1，心肌(ATP5A1)基因，哺乳动物羟基类固醇(17-β)脱氢酶4基因(HSD17B4)，哺乳动物雄激素诱导型1基因(AIG1)，哺乳动物细胞色素c氧化酶亚基VIc基因(COX6C)，或哺乳动物N-酰基鞘氨醇氨基水解酶(酸性神经酰胺酶)1基因(ASAHH1)或其变体的5′UTR，最优选来自人核糖体蛋白大32基因(RPL32)，人核糖体蛋白大35基因(RPL35)，人核糖体蛋白大21基因(RPL21)，人ATP合酶，H+转运，线粒体F1复合物，α亚基1，心肌(ATP5A1)基因，人羟基类固醇(17-β)脱氢酶4基因(HSDl7B4)，人雄激素诱导型1基因(AIG1)，人细胞色素c氧化酶亚基VIc基因(COX6C)，或者人N-酰基鞘氨醇酰胺水解酶(酸性神经酰胺酶)1基因(ASAHi)或其变体的5′UTR，其中优选5′UTR元件不包含所述基因的5′-TOP。
因此，在特别优选的实施方案中，5′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列与根据专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：1368或SEQ ID NO：1412-1420的核酸序列或相应的RNA序列具有至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，或其中至少一个5′UTR元件包含核酸序列的片段或由其组成，所述片段与根据专利申请WO2013/143700的EQ ID NO：1368或SEQ ID NO：1412-1420的核酸序列具有至少约20％，优选至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，其中优选地，所述片段如上所述，即是连续的核苷酸段，代表全长5′UTR的至少20％等。优选地，片段的长度为至少约20个核苷酸或更多，优选至少约30个核苷酸或更多，更优选至少约40个核苷酸或更多。优选地，片段是如本文所述的功能片段。
根据特别优选的实施方案中，5′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列与根据专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：838，840，842，844，846，848，850或1004-1013中任一个的核酸序列或相应的RNA序列具有至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，或其中至少一个5′UTR元件包含核酸序列的片段或由其组成，所述片段与根据SEQ ID NO：838，840，842，844，846，848，850或1004-1013中任一个的核酸序列具有至少约20％，优选至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，其中优选地，所述片段如上所述，即是连续的核苷酸段，代表全长5′UTR的至少20％等。优选地，片段的长度为至少约20个核苷酸或更多，优选至少约30个核苷酸或更多，更优选至少约40个核苷酸或更多。优选地，片段是如本文所述的功能片段。
在进一步优选的实施方案中，5′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列与根据SEQ ID NO：838，840，842，844，846，848或850中任一个的核酸序列或相应的RNA序列优选选自SEQ ID NO：839，841，843，845，847，849和851的核酸序列具有至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，或其中至少一个5′UTR元件包含核酸序列的片段或由其组成，所述片段与根据SEQ ID NO：838，840，842，844，846，848或850中任一个的核酸序列具有至少约20％，优选至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，其中优选地，所述片段如上所述，即是连续的核苷酸段，代表全长5′UTR的至少20％等。优选地，片段的长度为至少约20个核苷酸或更多，优选至少约30个核苷酸或更多，更优选至少约40个核苷酸或更多。优选地，片段是如本文所述的功能片段。
因此，在特别优选的实施方案中，5′UTR元件包含核酸序列或由核酸序列组成，所述核酸序列与根据SEQ ID NO：410(缺乏5′末端寡嘧啶段的ATP5A1的5′UTR：GCGGCTCGGCCATTTTGTCCCAGTCAGTCCGGAGGCTGCGGCTGCAGAAGTACCGCCTGCGGAGTAACTGCAAAG；对应于专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：1414(缺乏5′末端寡嘧啶段的ATP5A1的5′UTR))的核酸序列或优选与对应的RNA序列(SEQ ID NO：411)具有至少约20％，优选至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，或其中至少一个5′UTR元件包含核酸序列的片段或由其组成，所述片段与根据(专利申请WO2013/143700的)SEQ ID NO：26的核酸序列或更优选与相应的RNA序列具有至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，其中优选地，所述片段如上所述，即是连续的核苷酸段，代表全长5′UTR的至少20％等。优选地，片段的长度为至少约20个核苷酸或更多，优选至少约30个核苷酸或更多，更优选至少约40个核苷酸或更多。优选地，片段是如本文所述的功能片段。
在进一步优选的实施方案中，如本文所述的至少一种编码RNA还包含至少一种3′UTR元件，其包含核酸序列或由所述核酸序列组成，所述核酸序列衍生自脊索动物基因、优选脊椎动物基因、更优选哺乳动物基因、最优选人基因的3′UTR，或衍生自脊索动物基因、优选脊椎动物基因、更优选哺乳动物基因、最优选人基因的3′UTR变体。
术语“3′UTR元件”是指核酸序列，其包含衍生自3′UTR或3′UTR变体的核酸序列或由其组成。在本发明意义上的3′UTR元件可代表mRNA的3′UTR。因此，在本发明的意义上，优选地，3′UTR元件可以是mRNA的3′UTR，优选是人工mRNA的3′UTR，或者它可以是mRNA的3′UTR的转录模板。因此，3′UTR元件优选是核酸序列，其对应于mRNA的3′UTR，优选对应于人工mRNA的3′UTR，例如通过基因工程化的载体构建体的转录获得的mRNA。优选地，3′UTR元件实现3′UTR的功能或编码实现3′UTR的功能的序列。
优选地，本发明的mRNA包含3′UTR元件，所述3′UTR元件可以衍生自与具有增强的半衰期的mRNA相关的基因(其提供稳定的mRNA)，例如下面定义和描述的3′UTR元件。优选地，3′UTR元件是衍生自基因的3′UTR的核酸序列，其优选编码稳定的mRNA，或衍生自所述基因的同源物，片段或变体。
在一个特别优选的实施方案中，3′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列衍生自选自由以下组成的组的基因的3′UTR：白蛋白基因，α珠蛋白基因，β珠蛋白基因，酪氨酸羟化酶基因，脂氧合酶基因和胶原α基因，例如胶原α1(I)基因，或衍生自选自由以下组成的组的基因的3′UTR的变体：白蛋白基因，α珠蛋白基因，β珠蛋白基因，酪氨酸羟化酶基因，脂氧合酶基因和胶原α基因，例如根据专利申请WO2013/143700(其公开内容通过引用结合在此)的SEQ ID NO：1369-1390的胶原α1(I)基因。在一个特别优选的实施方案中，3′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列衍生自白蛋白基因，优选脊椎动物白蛋白基因，更优选哺乳动物白蛋白基因，最优选根据SEQ ID NO：420(根据专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：1369)的人白蛋白基因的3′UTR。mRNA序列可包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列衍生自根据GenBank登录号NM_000477.5的人白蛋白基因的3′UTR，或衍生自其片段或变体。
在本文中，特别优选的是，如本文所述的至少一种编码RNA包含3′UTR元件，其包含衍生自根据专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：1369-1390的核酸或其片段，同源物或变体的相应RNA序列。
最优选地，3′UTR元件包含衍生自根据SEQ ID NO：422或424(根据专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：1376)的人白蛋白基因片段(白蛋白73′UTR)的核酸序列。
在本文中，特别优选本发明组合物的至少一种RNA的3′UTR元件包含SEQ ID NO：423或425的核酸序列的相应RNA序列或由其组成。
在另一个特别优选的实施方案中，3′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列衍生自α珠蛋白基因的3′UTR，优选脊椎动物α或β珠蛋白基因的3′UTR，更优选哺乳动物α或β珠蛋白基因的3′UTR，最优选根据SEQ ID NO：412(对应于专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：1370(智人3′UTR血红蛋白α1(HBA1)的3′UTR))的，或根据SEQ ID NO：414(对应于专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：1371(智人血红蛋白α2(HBA2)的3′UTR))的和/或根据SEQ ID NO：416(对应于专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：1372(智人血红蛋白β(HBB)的3′UTR))的人α或β珠蛋白基因的3′UTR。
例如，3′UTR元件可以包含根据SEQ ID NO：418(对应于专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：1393)的α珠蛋白基因的3′UTR的中心α复合物结合部分或由其组成。
在这种情况下，特别优选本发明组合物的RNA的3′UTR元件包含根据SEQ ID NO：419的核酸序列的或者根据上述同源物，其片段或变体的相应RNA序列或由其组成。
术语“衍生自[...]基因的3′UTR的核酸序列”优选是指基于[...]基因的3′UTR序列或其部分的核酸序列，例如基于白蛋白基因，α珠蛋白基因，β珠蛋白基因，酪氨酸羟化酶基因，脂氧合酶基因或胶原α基因(例如胶原蛋白1(I)基因)的3′UTR的核酸序列，优选基于白蛋白基因的3′UTR或其部分的核酸序列。该术语包括对应于整个3′UTR序列的序列，即基因的全长3′UTR序列，和对应于基因3′UTR序列片段的序列，所述基因是例如白蛋白基因，α珠蛋白基因，β珠蛋白基因，酪氨酸羟化酶基因，脂氧合酶基因或胶原α基因，例如胶原α1(I)基因，优选白蛋白基因。
术语“衍生自[...]基因的3′UTR变体的核酸序列”优选是指基于基因的3′UTR序列的变体的核酸序列，例如，基于白蛋白基因，α珠蛋白基因，β珠蛋白基因，酪氨酸羟化酶基因，脂氧合酶基因或胶原α基因(例如胶原蛋白α1(I)基因)的3′UTR的变体的或基于如上所述的其部分的核酸序列。该术语包括对应于基因的3′UTR变体的整个序列的序列，即基因的全长变体3′UTR序列，和对应于基因的变体3′UTR序列片段的序列。本文中的片段优选由对应于全长变体3′UTR中连续核苷酸段的连续核苷酸段(其代表全长变体3′UTR的至少20％，优选至少30％，更优选至少40％。更优选至少50％，甚至更优选至少60％，甚至更优选至少70％，甚至更优选至少80％，最优选至少90％)组成。在本发明的意义上，变体的这种片段优选是如本文所述的变体的功能片段。
在一些实施方案中，3′UTR元件可以是WO2016/107877中描述的任何3′UTR元件。在本文中，涉及3′UTR元件/序列的WO2016/107877的公开内容在此引入作为参考。特别优选的3′UTR元件是专利申请WO2016/107877的SEQ ID NO：1-24和SEQ ID NO：49-318，或这些序列的片段或变体。在这种情况下，特别优选3′UTR元件包含根据专利申请WO2016/107877的SEQID NO：1-24和SEQ ID NO：49-318的核酸序列的相应RNA序列或由其组成。
在某些实施方案中，3′UTR元件可以是WO2017/036580中描述的任何3′UTR元件。在本文中，涉及3′UTR元件/序列的WO2017/036580的公开内容在此引入作为参考。特别优选的3′UTR元件是根据专利申请WO2017/036580的SEQ ID NO：152至204的核酸序列，或这些序列的片段或变体。在本文中，特别优选3′UTR元件包含根据专利申请WO2017/036580的SEQ IDNO：152至204的核酸序列的相应RNA序列或由其组成。
根据一个实施方案，如本文所述的至少一种编码RNA还包含至少一种3′UTR元件，其包含核酸序列或由所述核酸序列组成，所述核酸序列衍生自由以下组成的组的基因的3′UTR：40S核糖体蛋白S9(RPS9)，蛋白酶体亚基β3(PSMB3)，半胱天冬酶1(CASP1)和细胞色素c氧化酶亚基6B1(COX6B1)，或任何这些基因的变体，其中所述基因或其变体优选是脊椎动物基因，更优选哺乳动物基因，甚至更优选人基因。
在一个特别优选的实施方案中，3′UTR元件含核酸序列或由所述核酸序列组成，所述核酸序列衍生自由以下组成的组的基因的3′UTR：白蛋白基因，α珠蛋白基因，β珠蛋白基因，酪氨酸羟化酶基因，脂氧合酶基因和胶原α基因(例如优选如本文所述的胶原α1(I)基因)，40S核糖体蛋白S9基因(RPS9)，蛋白酶体亚基β3基因(PSMB3)，半胱天冬酶1基因(CASP1)和细胞色素c氧化酶亚基6B1基因(COX6B1)，或这些基因的变体，其中所述基因或其变体优选为脊椎动物基因，更优选为哺乳动物基因，甚至更优选人基因。
在进一步优选的实施方案中，3′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列与根据SEQ ID NO：852，854，856或858中任一个的核酸序列或相应的RNA序列优选选自SEQID NO：853，855，857或859的核酸序列具有至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，或其中至少一个3′UTR元件包含核酸序列的片段或由其组成，所述片段与根据SEQ ID NO：852，854，856或858中任一个的核酸序列具有至少约20％，优选至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，其中优选地，所述片段如上所述，即是连续的核苷酸段，代表全长3′UTR的至少20％等。优选地，片段的长度为至少约20个核苷酸或更多，优选至少约30个核苷酸或更多，更优选至少约40个核苷酸或更多。优选地，片段是如本文所述的功能片段。
根据特别优选的实施方案中，3′UTR元件包含核酸序列或由其组成，所述核酸序列与根据专利申请WO2013/143700的SEQ ID NO：852，854，856，858，412，414，416，418，420，422或424中任一个的核酸序列或相应的RNA序列具有至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，或其中至少一个3′UTR元件包含核酸序列的片段或由其组成，所述片段与根据SEQ ID NO：852，854，856，858，412，414，416，418，420，422或424，中任一个的核酸序列具有至少约20％，优选至少约40％，优选至少约50％，优选至少约60％，优选至少约70％，更优选至少约80％，更优选至少约90％，甚至更优选至少约95％，甚至更优选至少约99％的同一性，其中优选地，所述片段如上所述，即是连续的核苷酸段，代表全长3′UTR的至少20％等。优选地，片段的长度为至少约20个核苷酸或更多，优选至少约30个核苷酸或更多，更优选至少约40个核苷酸或更多。优选地，片段是如本文所述的功能片段。
优选地，至少一种5′UTR元件和至少一种3′UTR元件协同作用以增加来自如本文所述的至少一种编码RNA的蛋白质产生。
在优选的实施方案中，如本文所述的至少一种编码RNA因此包含优选如本文所述的至少一种5′UTR元件，和优选如本文所述的至少一种3′UTR元件。特别优选的5′UTR元件，3′UTR元件及其各自的组合总结在下表A中。
其中，5′UTR元件和3′UTR元件优选如本文所述。
表A：5′UTR元件和3′UTR元件的优选组合：
根据优选的实施方案，表A的第1列(‘5′UTR元件′)所示和本文所述的5′UTR元件与在表A的第4列(‘3′UTR元件′)中同一行所示和本文所述的3′UTR元件组合在本文所用的至少一种编码RNA中。例如，衍生自如本文所述的Mp68基因或其变体的5′UTR元件可优选与衍生自如本文所述的RPS9基因或其变体的3′UTR元件组合。更优选地，5′UTR元件(其包含表A中第2列(′SEQ ID NO：RNA′)所示的SEQ ID NO：的RNA序列或表A中第3列(′SEQ ID NO：DNA′)所示的SEQ ID NO：的DNA序列，或所述RNA或DNA序列的片段或变体)可以与表A的同一行中的3′UTR元件(即优选3′UTR元件，其包含表A中同一行中第5列(′SEQ ID NO：RNA′)所示的SEQ ID NO：的RNA序列或表A中同一行中第6列(′SEQ ID NO：DNA′)所示的SEQ ID NO：的DNA序列，或所述RNA或DNA序列的片段或变体)组合。例如，如本文所用的至少一种编码RNA可包含5′UTR元件和3′UTR元件，所述5′UTR元件包含以下或由以下组成：SEQ ID NO：841所定义的核酸序列或其如本文所定义的片段或变体，所述3′UTR元件包含以下或由以下组成：SEQ ID NO：853所定义的核酸序列或其如本文所定义的片段或变体。
根据本发明的另一个优选实施方案，可以通过添加所谓的“5′帽”结构来修饰如本文所述的isRNA或至少一种编码RNA，所述“5′帽”结构优选稳定如本文所述的RNA。5′帽是实体，通常是经修饰的核苷酸实体，其通常“封闭”成熟mRNA的5′末端。5′帽通常可以由经修饰的核苷酸形成，特别是由鸟嘌呤核苷酸的衍生物形成。优选地，5′帽通过5′-5′-三磷酸键连接到5′末端。5′帽可以是甲基化的，例如m7GpppN，其中N是携带5′帽的核酸的末端5′核苷酸，通常是mRNA的5′末端。m7GpppN是5′帽结构，其天然存在于由聚合酶II转录的mRNA中，因此优选不被认为是在该上下文下包含在经修饰的RNA中的修饰。因此，本发明的经修饰的RNA可包含m7GpppN作为5′帽，但另外地，经修饰的RNA通常包含至少一种如本文所定义的进一步修饰。
5′帽结构的其他实例包括甘油基，反向脱氧无碱基残基(部分)，4′，5′亚甲基核苷酸，1-(β-D-赤呋喃糖基)核苷酸，4′-硫代核苷酸，碳环核苷酸，1，5-脱氢己糖醇核苷酸，L-核苷酸，α-核苷酸，修饰的碱基核苷酸，苏-戊呋喃糖基核苷酸，非环3′，4′-裂核苷酸，非环3，4-二羟基丁基核苷酸，非环3，5二羟基戊基核苷酸，3′-3′-反向核苷酸部分，3′-3′-反向无碱基部分，3′-2′-反向核苷酸部分，3′-2′-反向无碱基部分，1，4-丁二醇磷酸酯，3′-氨基磷酸酯，己基磷酸酯，氨基己基磷酸酯，3′-磷酸酯，3′硫代磷酸酯，二硫代磷酸酯，或桥接或非桥接的甲基膦酸酯部分。在这种上下文下，这些经修饰的5′帽结构被认为是至少一种修饰。
特别优选的经修饰的5′帽结构是cap1(m7G的相邻核苷酸的核糖的甲基化)，cap2(m7G下游的第二个核苷酸的核糖的额外甲基化)，cap3(m7G下游的第3个核苷酸的核糖的额外甲基化)，cap4(m7G下游的第4个核苷酸的核糖的甲基化)，ARCA(抗反转帽类似物，经修饰的ARCA(例如硫代磷酸酯修饰的ARCA)，肌苷，N1-甲基-鸟苷，2′-氟-鸟苷，7-脱氮-鸟苷，8-氧代-鸟苷，2-氨基-鸟苷，LNA-鸟苷和2-叠氮基-鸟苷。
在一些实施方案中，如本文所述的至少一种编码RNA优选包含聚(A)和/或聚(C)序列。
在特别优选的实施方案中，如本文所述的至少一种编码RNA另外包含编码至少一种如上所述的肽或蛋白质或其片段或变体的编码区，聚(A)序列(也称为聚A尾，优选在RNA的3′末端)。如果存在，这种聚(A)序列包含约25至约400个腺苷核苷酸的序列，优选约50至约400个腺苷核苷酸的序列，更优选约50至约300个腺苷核苷酸的序列，甚至更优选约50至约250个腺苷核苷酸的序列，最优选约60至约250个腺苷核苷酸的序列。在本文中，术语“约”是指其附着的值的±10％的偏差。该聚(A)序列优选位于如本文所述的至少一种编码RNA中包含的编码区的3′。
优选地，如本文所述的至少一种编码RNA中的聚(A)序列通过RNA体外转录从DNA模板衍生。或者，聚(A)序列也可以通过常规的化学合成方法在体外获得，而不必从DNA祖细胞转录。此外，聚(A)序列或聚(A)尾可以通过使用市售的聚腺苷酸化试剂盒和本领域已知的相应方案通过至少一种RNA的酶促多聚腺苷酸化产生。
备选地，如本文所述的至少一种编码RNA任选地包含聚腺苷酸化信号，其在本文中定义为信号，其通过特定蛋白质因子(例如切割和聚腺苷酸化特异性因子(CPSF)，切割刺激因子(CstF)，切割因子I和II(CF I和CF II)，聚(A)聚合酶(PAP))将聚腺苷酸化传递至(转录的)RNA)。在该上下文中，优选包含NN(U/T)ANA共有序列的共有聚腺苷酸化信号。在特别优选的方面，聚腺苷酸化信号包括以下序列之一：AA(U/T)AAA或A(U/T)(U/T)AAA(其中尿苷通常存在于RNA中，胸苷通常存在于DNA中)。
根据进一步优选的实施方案，如本文所述的至少一种编码RNA可以用至少10个胞嘧啶，优选至少20个胞嘧啶，更优选至少30个胞嘧啶(所谓的“聚(C)序列”)的序列进行修饰。特别地，RNA可含有通常约10至200个胞嘧啶核苷酸的聚(C)序列，优选约10至100个胞嘧啶核苷酸，更优选约10至70个胞嘧啶核苷酸，或甚至更优选约20至50个或甚至20至30个胞嘧啶核苷酸的聚(C)序列。该聚(C)序列优选位于编码区的3′，更优选位于如本文所述的至少一种编码RNA中包含的任选的聚(A)序列的3′。
在特别优选的实施方案中，如本文所述的至少一种编码RNA包含组蛋白茎-环序列/结构。此类组蛋白茎-环序列优选选自如WO2012/019780中所公开(其公开内容通过引用并入本文)的组蛋白茎-环序列。
适用于本发明的组蛋白茎环序列优选选自下列通式(VII)或(VIII)中的至少一种：
式(VII)(茎环序列，无茎毗邻元件)：
式(VIII)(茎环序列，有茎毗邻元件)：
其中：
茎1或茎2毗邻元件N1-6是1至6，优选2至6，更优选2至5，甚至更优选3至5，最优选4至5或5个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A，U，T，G和C的核苷酸或其核苷酸类似物；
茎1[N0-2GN3-5]与元件茎2反向互补或部分反向互补，并且是5至7个核苷酸的连续序列；
其中N0-2是0至2，优选0至1，更优选1个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A，U，T，G和C的核苷酸或其核苷酸类似物；
其中N3-5是3至5，优选4至5，更优选4个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A，U，T，G和C的核苷酸或其核苷酸类似物，和
其中G是鸟苷或其类似物，并且可以任选地被胞苷或其类似物替代，条件是其茎2中的互补核苷酸胞苷被鸟苷替代；
环序列[N0-4(U/T)N0-4]位于元件茎1和茎2之间，是3至5个核苷酸更优选4个核苷酸的连续序列；
其中每个N0-4彼此独立地是0至4，优选1至3，更优选1至2个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A，U，T，G和C的核苷酸或其核苷酸类似物；以及
其中U/T代表尿苷或任选的胸苷；
茎2[N3-5CN0-2]与元件茎1反向互补或部分反向互补，并且是5至7个核苷酸的连续序列；
其中N3-5是3至5，优选4至5，更优选4个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A，U，T，G和C的核苷酸或其核苷酸类似物；
其中N0-2是0至2，优选0至1，更优选1个N的连续序列，其中每个N彼此独立地选自A，U，T，G或C的核苷酸或其核苷酸类似物；以及
其中C是胞苷或其类似物，并且可任选地被鸟苷或其类似物替代，条件是其茎1中的互补核苷鸟苷被胞苷替代；
其中，
茎1和茎2能够彼此碱基配对形成反向互补序列，其中碱基配对可以例如通过核苷酸A和U/T或G和C的沃森-克里克碱基配对或通过非沃森-克里克碱基配对(例如摆动碱基配对，反向沃森-克里克碱基配对，Hoogsteen碱基配对，反向Hoogsteen碱基配对)在茎1和茎2之间发生，或茎1和茎2能够彼此碱基配对形成部分反向互补序列，其中由于一个茎中的一个或多个碱基在另一个茎的反向互补序列中不具有互补碱基，可以茎1和茎2之间可以发生不完全碱基配对。
根据第一发明方面的另一优选实施方案，本发明组合物序列的至少一种mRNA可包含至少一种根据下列特定式(VIIa)或(VIIIa)中的至少一种的组蛋白茎-环序列：
式(VIIa)(茎环序列，无茎毗邻元件)：
式(VIIIa)(茎环序列，有茎毗邻元件)：
其中：
N，C，G，T和U如上所定义。
根据第一方面的另一个更特别优选的实施方案，本发明组合物序列的至少一种mRNA可包含至少一种根据下列特定式(VIIb)或(VIIIb)中的至少一种的组蛋白茎-环序列：
式(VIIb)(茎环序列，无茎毗邻元件)：
式(VIIIb)(茎环序列，有茎毗邻元件)：
其中：
N，C，G，T和U如上所定义。
特别优选的组蛋白茎-环序列是根据SEQ ID NO：426的序列。
更优选地，茎环序列是根据SEQ ID NO：427的核酸序列的相应RNA序列。
根据另一个特别优选的实施方案，如本文所述的至少一种编码RNA可以另外地或替代地编码分泌信号肽。此类信号肽是序列，其通常表现出约15至30个氨基酸的长度，并且优选位于编码肽的N末端，但不限于此。如本文所定义的信号肽优选地允许将由如本文所述的至少一种编码RNA编码的抗原，抗原蛋白或抗原肽转运至限定的细胞区室，优选细胞表面，内质网(ER)或内体-溶酶体区室。如本文所定义的分泌信号肽序列的实例包括但不限于经典或非经典MHC分子的信号序列(例如MHC I和II分子的信号序列，例如MHC I类分子HLA-A*0201的信号序列)，如本文所定义的细胞因子或免疫球蛋白的信号序列，如本文所定义的免疫球蛋白或抗体的恒定链的信号序列，序列Lamp1，Tapasin，Erp57，Calretikulin，Calnexin的信号序列，以及其他膜相关蛋白或与内质网(ER)或内体-溶酶体区室相关的蛋白质的信号序列。特别优选地，根据本发明可以使用MHC I类分子HLA-A*0201的信号序列。
在一些实施方案中，如本文所述的至少一种编码RNA(优选mRNA)优选以5′至3′方向包含以下元件：
a)5′帽结构，优选m7GpppN，
b)至少一种编码序列，其编码至少一种包含IL-12，诱饵PD-1受体，优选如本文所述的可溶性PD-1受体，CD40L，抗CTLA4抗体和/或肿瘤抗原或任何这些蛋白质的片段或变体的肽或蛋白质，
c)包含核酸序列的3′UTR元件，所述核酸序列衍生自α珠蛋白基因，优选包含根据SEQ ID NO：418的核酸序列的相应RNA序列，或其同源物，片段或变体，
d)聚(A)尾，优选由10至200，10至100，40至80或50至70个腺苷核苷酸组成，
e)聚(C)尾，优选由10至200，10至100，20至70，20至60或10至40个胞嘧啶核苷酸组成，和
f)组蛋白茎-环，优选包含根据SEQ ID NO：427的RNA序列。
根据优选的实施方案，如本文所述的至少一种编码RNA包含
a)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：146-151；157-162；168-173；179-184；190-195；201-206；212-217；223-228；234-239；245-250；256-261和267-272，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：153；164；175；186；197；208；219；230；241；252；263，274；992和598，或任何这些序列的片段或变体；
b)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：154；165；176；187；198；209；220；231；242；253；264，275和596，或任何这些序列的片段或变体，
c)根据SEQ ID NO：860-874，875-889或594中任一个的核酸序列，优选地根据SEQID NO：594的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和根据SEQ ID NO：890-904，905-919或595中任一个的核酸序列；优选地根据SEQ ID NO：595的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体；
或者
根据SEQ ID NO：920-922或923-925的核酸序列或这些核酸序列中任一个的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：144；155；166；177；188；199；210；221；232；243；254和265，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：145；156；167；178；189；200；211；222；233；244；255；266和597，或任何这些序列的片段或变体；
根据进一步的实施方案，如本文所述的至少一种编码RNA包含
a)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：146-151；451-456；157-162；168-173；179-184；190-195；201-206；212-217；223-228；234-239；245-250；256-261和267-272，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：153；458；164；175；186；197；208；219；230；241；252；263，274；992和598，或任何这些序列的片段或变体；
b)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：154；459；165；176；187；198；209；220；231；242；253；264，275和596，或任何这些序列的片段或变体，
c)根据SEQ ID NO：860-874，875-889或594中任一个的核酸序列，优选地根据SEQID NO：594的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和根据SEQ ID NO：890-904，905-919或595中任一个的核酸序列；优选地根据SEQ ID NO：595的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体；
或者
根据SEQ ID NO：920-922或923-925的核酸序列或这些核酸序列中任一个的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：144；449；155；166；177；188；199；210；221；232；243；254和265，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：145；450；156；167；178；189；200；211；222；233；244；255；266和597，或任何这些序列的片段或变体。
在优选的实施方案中，如本文所述的至少一种编码RNA包含
a)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：451-456；157-162；168-173；179-184；190-195；201-206；212-217；223-228；234-239；245-250；256-261和267-272，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：164；175；186；197；208；219；230；241；252；263，274；992和598，或任何这些序列的片段或变体，
b)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：459；165；176；187；198；209；220；231；242；253；264，275和596，或任何这些序列的片段或变体，
c)根据SEQ ID NO：860-874，875-889或594中任一个的核酸序列，优选地根据SEQID NO：594的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和根据SEQ ID NO：890-904，905-919或595中任一个的核酸序列；优选地根据SEQ ID NO：595的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体；
或者
根据SEQ ID NO：920-922或923-925的核酸序列或这些核酸序列中任一个的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：144；449；166；177；188；199；210；221；232；243；254和265，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：145；450；167；178；189；200；211；222；233；244；255；266和597，或任何这些序列的片段或变体。
根据特别优选的实施方案，本发明提供用于治疗如本文所述的肿瘤或癌症疾病的isRNA，优选包括瘤内施用isRNA，其中所述治疗包括施用至少三种，优选至少四种或者五种如本文所述的编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少三种，更优选至少四种或五种mRNA，其中
第一编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：153；164；175；186；197；208；219；230；241；252；263；274；992和598，或任何这些序列的片段或变体，
第二编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：154；165；176；187；198；209；220；231；242；253；264；275和596，或任何这些序列的片段或变体，
第三编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：根据SEQ ID NO：860-874或594中任一个的核酸序列，优选地根据SEQ ID NO：594的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和根据SEQ ID NO：890-904或595中任一个的核酸序列；优选地根据SEQID NO：595的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和/或
任选地，第四编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：145；156；167；178；189；200；211；222；233；244；255；266和597，或任何这些序列的片段或变体，
其中所述第一，第二，第三和第四编码RNA优选肿瘤内施用。
根据特别优选的实施方案，本发明提供用于治疗如本文所述的肿瘤或癌症疾病的isRNA，优选包括瘤内施用isRNA，其中所述治疗包括施用至少三种，优选至少四种或者五种如本文所述的编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少三种，更优选至少四种或五种mRNA，其中
a)第一编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：153；164；175；186；197；208；219；230；241；252；263；274；992和598，或任何这些序列的片段或变体，
b)第二编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：154；165；176；187；198；209；220；231；242；253；264；275和596，或任何这些序列的片段或变体，
c)第三编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：根据SEQ ID NO：860-874或594中任一个的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：594的核酸序列，或任何这些核酸序列的片段或变体，并且
第四编码RNA包含根据SEQ ID NO：890-904或595中任一个的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：595，或任何这些核酸序列的片段或变体，和/或
d)任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：145；156；167；178；189；200；211；222；233；244；255；266和597，或任何这些序列的片段或变体
其中所述第一，第二，第三，第四和第五编码RNA优选肿瘤内施用。
在特别优选的实施方案中，本发明提供用于治疗如本文所述的肿瘤或癌症疾病的isRNA，优选包括瘤内施用isRNA，其中所述治疗包括施用至少三种，优选至少四种或者五种如本文所述的编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少三种，更优选至少四种或五种mRNA，其中
a)第一编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：164；175；186；197；208；219；230；241；252；263；274；992和598，或任何这些序列的片段或变体，
b)第二编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：165；176；187；198；209；220；231；242；253；264；275和596，或任何这些序列的片段或变体，
c)第三编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：根据SEQ ID NO：860-874或594中任一个的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：594的核酸序列，或任何这些核酸序列的片段或变体，并且
第四编码RNA包含根据SEQ ID NO：890-904或595中任一个的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：595，或任何这些核酸序列的片段或变体，和/或
d)任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：156；167；178；189；200；211；222；233；244；255；266和597，或任何这些序列的片段或变体，
其中所述第一，第二，第三，第四和第五编码RNA优选肿瘤内施用。
在某些实施方案中，如本文所述的至少一种编码RNA(优选mRNA)优选以5′至3′方向包含以下元件：
a)5′帽结构，优选m7GpppN，
b)5′UTR元件，其包含核酸序列或由所述核酸序列组成，所述核酸序列衍生自TOP基因的5′UTR，优选地包含对应于根据SEQ ID NO：408的核酸序列的RNA序列，或其同源物，片段或变体，
c)至少一种编码序列，其编码至少一种包含IL-12，诱饵PD-1受体，优选如本文所述的可溶性PD-1受体，CD40L，抗CTLA4抗体和/或肿瘤抗原或任何这些蛋白质的片段或变体的肽或蛋白质，
d)包含核酸序列的3′UTR元件，所述核酸序列衍生自α珠蛋白基因，优选包含根据SEQ ID NO：418的核酸序列的相应RNA序列，或其同源物，片段或变体；和/或
包含核酸序列的3′UTR元件，所述核酸序列衍生自白蛋白基因，优选包含根据SEQID NO：422或424的核酸序列的相应RNA序列，或任何这些序列的同源物，片段或变体，
e)聚(A)尾，优选由10至200，10至100，40至80或50至70个腺苷核苷酸组成，
f)聚(C)尾，优选由10至200，10至100，20至70，20至60或10至40个胞嘧啶核苷酸组成，和
g)组蛋白茎-环，优选包含根据SEQ ID NO：427的RNA序列。
根据优选的实施方案，如本文所述的至少一种编码RNA包含
a)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：278-283；289-294；300-305；311-316；322-327；333-338；344-349；355-360；366-371；377-382；388-393；399-404和462-467，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：285；296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430；469和992，或任何这些序列的片段或变体，
b)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396；470和407，或任何这些序列的片段或变体，
c)根据SEQ ID NO：926-940或941-955中任一个的核酸序列，优选地根据SEQ IDNO：926-940的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和根据SEQ ID NO：956-970或971-985中任一个的核酸序列；优选地根据SEQ ID NO：956-970的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体；
或者
根据SEQ ID NO：986-988或989-991的核酸序列或这些核酸序列中任一个的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：276；287；298；309；320；331；342；353；364；375；386；460和397，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；461；387和398，或任何这些序列的片段或变体。
根据另一个的实施方案，如本文所述的至少一种编码RNA包含
a)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：289-294；300-305；311-316；322-327；333-338；344-349；355-360；366-371；377-382；388-393和399-404，或任何这些序列的片段或变体，
b)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396和407，或任何这些序列的片段或变体，
c)根据SEQ ID NO：926-940或941-955中任一个的核酸序列，优选地根据SEQ IDNO：926-940的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和根据SEQ ID NO：956-970或971-985中任一个的核酸序列；优选地根据SEQ ID NO：956-970的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体；
或者
根据SEQ ID NO：986-988或989-991的核酸序列或这些核酸序列中任一个的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430和992，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；387和398，或任何这些序列的片段或变体。
在优选的实施方案中，如本文所述的至少一种编码RNA包含
a)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：278-283；289-294；300-305；311-316；322-327；333-338；344-349；355-360；366-371；377-382；388-393；399-404和462-467，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：285；296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430；469和992，或任何这些序列的片段或变体，
b)选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396和407，或任何这些序列的片段或变体，
c)根据SEQ ID NO：926-940或941-955中任一个的核酸序列，优选地根据SEQ IDNO：926-940的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体，和根据SEQ ID NO：956-970或971-985中任一个的核酸序列；优选地根据SEQ ID NO：956-970的核酸序列，或这些核酸序列中的任一个的片段或变体；
或者
根据SEQ ID NO：986-988或989-991的核酸序列或这些核酸序列中任一个的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：276；287；298；309；320；331；342；353；364；375；386；460和397，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；461；387和398，或任何这些序列的片段或变体。
根据特别优选的实施方案，本发明提供用于治疗如本文所述的肿瘤或癌症疾病的isRNA，优选包括瘤内施用isRNA，其中所述治疗包括施用至少三种，优选至少四种或者五种如本文所述的编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少三种，更优选至少四种或五种mRNA，其中
a)第一编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：285；296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430；469和992，或任何这些序列的片段或变体，
b)第二编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396；470和407，或任何这些序列的片段或变体，
c)第三编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：根据SEQ ID NO：926-940中任一个的核酸序列，或任何这些核酸序列的片段或变体，并且
第四编码RNA包含根据SEQ ID NO：956-970中任一个的核酸序列，或任何这些核酸序列的片段或变体，和/或
d)任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；387；461和398，或任何这些序列的片段或变体；
其中所述第一，第二，第三，第四和第五编码RNA优选肿瘤内施用。
在进一步优选的实施方案中，本发明提供用于治疗如本文所述的肿瘤或癌症疾病的isRNA，优选包括瘤内施用isRNA，其中所述治疗包括施用至少三种，优选至少四种或者五种如本文所述的编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少三种，更优选至少四种或五种mRNA，其中
a)第一编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：285；296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430；469和992，或任何这些序列的片段或变体，
b)第二编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396；470和407，或任何这些序列的片段或变体，
c)第三编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：根据SEQ ID NO：926-940中任一个的核酸序列，或任何这些核酸序列的片段或变体，并且
第四编码RNA包含根据SEQ ID NO：956-970中任一个的核酸序列，或任何这些核酸序列的片段或变体，和/或
d)任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；387；461和398，或任何这些序列的片段或变体，
其中所述第一，第二，第三，第四和第五编码RNA优选肿瘤内施用。
根据特别优选的实施方案，本发明提供用于治疗如本文所述的肿瘤或癌症疾病的isRNA，优选包括瘤内施用isRNA，其中所述治疗包括施用至少三种，优选至少四种或者五种如本文所述的编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少三种，更优选至少四种或五种mRNA，其中
a)第一编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：285；296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430；469和992，或任何这些序列的片段或变体，
b)第二编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396；470和407，或任何这些序列的片段或变体，
c)第三编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：根据SEQ ID NO：926-940中任一个的核酸序列，或任何这些核酸序列的片段或变体，并且
第四编码RNA包含根据SEQ ID NO：956-970中任一个的核酸序列，或任何这些核酸序列的片段或变体，和/或
b)任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；387；461和398，或任何这些序列的片段或变体；
其中所述第一，第二，第三，第四和第五编码RNA优选肿瘤内施用。
根据优选的实施方案，本发明涉及如本文所述的用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种如本文所述的编码RNA(作为另外的药学活性成分)，其中所述isRNA以与一种或多种阳离子或聚阳离子化合物优选如本文所述的聚合物载体复合的RNA施用，并且所述至少一种编码RNA更优选mRNA作为游离RNA施用。
根据进一步优选的实施方案，本发明提供用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA，
其中isRNA包含根据式(I)(GlXmGn)，式(II)(ClXmCn)，式(III)(NuGlXmGnNv)a或式(IV)(NuClXmCnNv)a的核酸序列，优选至少一个根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016，1055或1056中任一项的核酸序列，或这些序列中任一个的片段或变体，更优选至少一个根据SEQID NO：433，434，1014至1016中任一项的核酸序列，或其的片段或变体，
其中isRNA与阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与聚合物载体复合，更优选与由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体复合，所述阳离子组分优选包含根据式(V)，(Va)和/或(Vb)的肽，和/或根据式(VI)的化合物，更优选二硫键交联阳离子肽Cys-Arg12，Cys-Arg12-Cys，或Trp-Arg12-Cys中的至少一种，
其中isRNA优选肿瘤内施用，
其中肿瘤或癌症疾病优选选自由以下各项组成的组：
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
选自由以下各项组成的组：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)；
其中肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治；
其中肿瘤或癌症疾病的治疗包括施用至少三种，优选至少四种或者五种如本文所述的编码RNA(作为另外的药学活性成分)，优选至少三种，更优选至少四种或五种mRNA，其中
a)第一编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：285；296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430；469和992，或任何这些序列的片段或变体，
b)第二编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396；470和407，或任何这些序列的片段或变体，
c)第三编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：根据SEQ ID NO：926-940中任一个的核酸序列，或任何这些核酸序列的片段或变体，并且
第四编码RNA包含根据SEQ ID NO：956-970中任一个的核酸序列，或任何这些核酸序列的片段或变体，和/或
d)任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；387；461和398，或任何这些序列的片段或变体，
其中所述第一，第二，第三，第四和第五编码RNA优选肿瘤内施用。
根据本发明的另一方面，提供了isRNA和至少一种编码RNA的组合，其中所述至少一种编码RNA编码至少一种包含ILl2，CD40L，诱饵PD1受体(优选地可溶性PD-1受体)和抗CTLA4抗体的肽或蛋白质，或任何这些蛋白质的片段或变体。
根据本发明的组合中的isRNA优选是如本文关于用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA所述的isRNA。根据本发明的组合的至少一种编码RNA优选是如本文所述的编码RNA，更优选如本文关于至少一种用作另外的药学活性成分的编码RNA所述的编码RNA。另外地或备选地，至少一种编码RNA可以编码优选如本文所定义的至少一种肿瘤抗原，或其片段或变体。
在一个优选的实施方案中，所述组合包含isRNA和至少一种编码RNA，它们优选如本文所述地一起或分开配制。
独立于它们的制剂，优选同时施用isRNA和至少一种编码RNA。备选地，组合的isRNA和至少一种编码RNA可以以时间交错的方式施用。
如本文所用的短语“组合施用”，共同施用或“同时施用”是指这样的情况，其中一种药学活性成分(例如本文所述的isRNA)在施用至少一种另外的药学活性成分(例如本文所述的至少一种编码RNA)给受试者之前，同时或之后地施用给同一受试者。施用药学活性成分之间的时间间隔取决于特定药学活性成分的性质和生物学效应，并且可以由医师确定。优选地，时间间隔小于约48小时，更优选小于约24小时，12小时，6小时，4小时，2小时，1小时，最优选小于约30分钟，15分钟或5分钟。在一个特别优选的实施方案中，短语“组合施用”是指同时施用药学活性成分，即同步施用至少两种化合物或在通常包含少于5分钟的时间范围内施用至少两种化合物。短语“组合施用”不仅指药学活性成分彼此物理接触或配制在一起的情况。本文所用的短语“组合施用”还包括药学活性成分的单独施用(例如通过两次单独的注射)。备选地，一种药学活性成分(例如本文所述的isRNA)可以通过以下组合施用：在施用之前将所述成分与至少一种另外的药学活性成分(例如至少一种编码RNA)混合并将所述混合物施用给受试者。
如本文所用的短语“组合施用”，共同施用或“同时施用”进一步包括这样的情况，其中一种药学活性成分(例如本文所述的isRNA)在施用至少一种另外的药学活性成分(例如本文所述的至少一种编码RNA)给受试者之前，同时或之后地(优选之后地)施用给同一受试者。在一些实施方案中，药学活性成分的施用之间的时间间隔是至少一，二，三，四，五，六，七，八，九，十，十五，二十或三十分钟。在某些实施方案中，在施用如本文所述的至少一种编码RNA后至少一，二，三，四，五，六，七，八，九，十，十五，二十或三十分钟施用isRNA。
根据本发明的组合的isRNA和至少一种编码RNA优选在相同位点或不同位点施用，优选通过注射施用。最优选地，至少一种isRNA和组合的至少一种编码RNA，优选两者，优选如本文所述肿瘤内施用。
另一方面，本发明提供了如本文所述的isRNA和至少一种编码RNA的组合，其用作药物。本发明进一步提供了isRNA和至少一种编码RNA的组合，用于制备药物。
根据一个实施方案，提供如本文所述的组合用于治疗或预防选自由肿瘤和癌症疾病，感染性疾病，过敏和自身免疫疾病组成的组中的疾病。在一个优选的实施方案中，提供如本文所述的组合用于治疗或预防肿瘤或癌症疾病，优选如本文所定义的肿瘤或癌症疾病。根据特别优选的实施方案，该组合用于治疗或预防黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，最优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除和/或晚期SCC，最优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，或其他形式的恶性皮肤癌，腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC，皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤和头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC。或者，该组合用于治疗或预防
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
用于治疗或预防选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的。
优选地，如本文所述的组合用于治疗或预防本文所述的疾病，其中所述治疗或预防包括施用至少一种优选如本文所述的另外的药学活性成分。在优选的实施方案中，该组合用于治疗或预防
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
用于治疗或预防选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治；
其中所述治疗或预防包括施用至少一种另外的药学活性成分，其中所述至少一种另外的药学活性成分是常规用于治疗或预防任何所述疾病的化合物，优选在该上下文中如本文所述的化合物。
根据特别优选的实施方案，如本文所述的组合用于治疗或预防
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
用于治疗或预防选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治；
其中治疗或预防包括施用优选如本文所述的PD1抑制剂或PD-L1抑制剂，更优选针对PD-1或PD-L1的拮抗性抗体。
在进一步优选的实施方案中，如本文所述的组合用于治疗或预防
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
用于治疗或预防选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治；
其中治疗或预防包括施用优选如本文所述的抗CTLA4抗体。
在另一方面，本发明涉及如本文所述的编码RNA。根据本发明的编码RNA的特征通常在于至少一种编码RNA的上下文中描述的任何一种特征，所述至少一种编码RNA也可以用作如关于根据本发明使用的isRNA所描述的另外的药学活性成分。特别地，根据本发明的编码RNA编码包含至少一种选自由以下组成的组中的肽或蛋白质：IL12，CD40L，诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，抗CTLA4抗体和肿瘤抗原，或任何这些蛋白质的片段或变体。
根据优选的实施方案，根据本发明的编码RNA编码包含IL12，CD40L和诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体或任何这些蛋白质的片段或变体的肽或蛋白质。例如，编码所述肽或蛋白质的编码RNA可以是包含三个开放阅读框的多顺反子RNA，其中每个开放阅读框编码选自由以下组成的组中的不同肽或蛋白质：IL12，CD40L，诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，抗CTLA4抗体和肿瘤抗原，或任何这些蛋白质的片段或变体。
另一方面，本发明涉及根据本发明的编码RNA，其用于治疗或预防选自肿瘤和癌症疾病，感染性染病，过敏和自身免疫疾病组成的组中的疾病。在优选的实施方案中，提供如本文所述的编码RNA用于治疗或预防肿瘤或癌症疾病，优选如本文所定义的肿瘤或癌症疾病。根据特别优选的实施方案，该编码RNA用于治疗或预防黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，最优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除和/或晚期SCC，最优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，或其他形式的恶性皮肤癌，腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC，皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤和头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC。在进一步优选的实施方案中，编码RNA用于治疗或预防
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
用于治疗或预防选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的。
根据本发明的编码RNA优选用于治疗或预防本文所述的疾病，优选用于治疗或预防黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，最优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除和/或晚期SCC，最优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，或其他形式的恶性皮肤癌，腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC，皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤和头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC；
其中编码RNA包含至少一种编码包含IL-12，CD40L，诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，并且其中所述治疗或预防包括施用第二编码RNA和/或第三编码RNA，其中第二或第三编码RNA包含至少一种编码包含CD40L，或诱饵PD 1受体，优选可溶性PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，因此，由所述编码RNA编码的肽或蛋白质一起包含IL-12，CD40L或诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体或其片段或变体。其中，所述编码RNA以及所述第二和/或第三编码RNA优选是如本文所述的编码RNA。
根据本发明的编码RNA优选用于治疗或预防本文所述的疾病，优选用于治疗或预防
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
用于治疗或预防选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治；
其中编码RNA包含至少一种编码包含IL-12，CD40L，诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，或抗CTLA4抗体的肽或蛋白质，或这些的肽或蛋白质的片段或变体的编码序列，并且其中所述治疗或预防包括施用第二编码RNA，第三编码RNA和/或第四编码RNA，其中所述第二，第三或第四编码RNA包含至少一种编码包含IL12，CD40L，或诱饵PD 1受体(优选可溶性PD-1受体)，或抗CTLA4抗体，或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，因此，由所述编码RNA编码的肽或蛋白质一起包含IL-12，CD40L或诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，或抗CTLA4抗体，或其片段或变体。其中，所述编码RNA以及所述第二，第三或第四编码RNA优选是如本文所述的编码RNA。
在某些实施方案中，提供编码RNA用于治疗或预防本文所述的疾病，其中治疗或预防还包括化疗，放疗和/或手术。根据优选的实施方案，其中所述治疗或预防包括施用至少一种另外的药学活性成分。在进一步优选的实施方案中，治疗或预防包括施用化合物，所述化合物常规用于治疗
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
用于治疗或预防选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治；
优选地，施用在该上下文中如本文所述的化合物。更优选地，治疗或预防包括施用PD1抑制剂或PD L1抑制剂，优选针对PD-1或PD-L1的拮抗性抗体。在特别优选的实施方案中，所述治疗或预防包括优选肿瘤内施用isRNA，优选如本文所述的isRNA。
在一些实施方案中，治疗或预防包括施用化合物，所述化合物常规用于治疗
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
用于治疗或预防选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治；优选地，施用在该上下文中如本文所述的化合物。更优选地，所述治疗或预防包括施用抗CTLA4抗体。在特别优选的实施方案中，所述治疗或预防包括优选肿瘤内施用isRNA，优选如本文所述的isRNA。
如本文所述使用的编码RNA优选肿瘤内施用。在特别优选的实施方案中，肿瘤内施用如本文所述的编码RNA。
在另一方面，本发明提供药物组合物，其包含优选如本文所述的isRNA，优选如本文所述的至少一种编码RNA，或其组合，其中所述药物组合物包含药学上可接受的载体和/或媒剂。
优选地，制备药物组合物用于肿瘤内施用，优选通过注射到肿瘤组织中。本发明药物组合物的无菌可注射形式可以是水性或油性悬浮液。可以根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制这些悬浮液。
药学上可接受的载体通常包括组合物的液体或非液体基础，所述组合物包含优选如本文所述的isRNA，优选如本文所述的至少一种编码RNA，或其如本文所述的组合。如果组合物以液体形式提供，则载体通常是无热原的水；等渗盐水或缓冲(水性)溶液，例如磷酸盐，柠檬酸盐等缓冲溶液。相对于特定参考介质，注射缓冲液可以是高渗的，等渗的或低渗的，即缓冲液可以具有相对于特定参考介质更高，相同或更低的盐含量，其中优选地，可以使用前述盐的浓度，由于渗透或其他浓度效应，其不会导致细胞损伤。参考介质例如是以“体内”方法存在的液体，例如血液，淋巴液，细胞溶质液或其他体液，或例如用作“体外”方法中的参考介质的液体，例如普通缓冲液或液体。这种常见的缓冲液或液体是技术人员已知的。特别优选林格(Ringer)-乳酸盐溶液作为液体基础。
然而，一种或多种相容的固体或液体填充剂或稀释剂或包封化合物(其适合于对待治疗的患者施用)也可用于本发明的药物组合物。本文所用的术语“相容的”是指本发明的药物组合物的这些成分能够与本发明的药物组合物的组分混合，使得在典型的使用条件下不发生显著降低药物组合物的药物有效性的相互作用。
本发明的药物组合物可以包含其他组分，用于促进药物组合物的组分的施用和摄取。这些其他组分可以是合适的载体或媒剂，用于支持任何免疫应答的其他佐剂，抗细菌剂和/或抗病毒剂。
本发明药物组合物的另一组分可以是免疫治疗剂，其可以选自免疫球蛋白，优选IgG，单克隆或多克隆抗体，多克隆血清或血清等。优选地，这种另外的免疫治疗剂可以作为肽/蛋白质提供或者可以由核酸编码，优选由DNA或RNA编码，更优选由mRNA编码。
本发明的药物组合物通常包含“安全有效量”的本发明药物组合物的组分，特别是isRNA，本文定义的编码RNA或如本文所定义的其组合。如本文所用，“安全有效量”是指如本文所定义的RNA分子的量足以显著诱导疾病优选肿瘤或癌症疾病的正向改变。然而，与此同时，“安全有效量”足够小以避免严重的副作用，并在优势和风险之间建立明智的关系。确定这些限制通常属于合理的医学判断范围。
本发明的药物组合物通常可用作人类和兽医医学目的，优选作为药物组合物用于人类医学目的。
根据另一个特别优选的方面，可以提供如本文所述的药物组合物或将其用作疫苗。通常，这种疫苗如上文对药物组合物所定义。优选地，这种疫苗通常含有如本文所述的isRNA，如本文所述的至少一种编码RNA或如本文所述的其组合。疫苗还可包含药学组合物的药学上可接受的如本文所定义的载体，佐剂和/或媒剂。在疫苗的具体情况中，药学上可接受的载体的选择原则上通过施用本发明疫苗的方式来确定。疫苗可优选局部施用于肿瘤组织。
如果需要，疫苗可另外含有一种或多种辅助物质以增加其免疫原性或免疫刺激能力。特别优选的如针对药物组合物所定义的辅助物质或添加剂的佐剂。
在另一方面，本发明涉及试剂盒或成套试剂盒，其包含如本文所述的isRNA，至少一种如本文所述的编码RNA，本文所述的组合(其包含本文所述的isRNA和至少一种编码RNA)，或包含本文所述的药物组合物或疫苗，或其组分和任选的关于组分的施用和剂量的信息的技术说明书。
除了isRNA和/或至少一种编码RNA之外，该试剂盒还可以含有药学上可接受的媒剂，佐剂和至少一种其他组分，例如，本文定义的另外的药学活性组分/化合物，以及施用方法和技术说明书。组合物的组分，特别是本文所述的isRNA或至少一种编码RNA，以及可能的其他组分可以以冻干形式提供。在优选的实施方案中，在使用试剂盒之前，然后将所提供的媒剂以例如在提供的技术说明中写明的预定量加入到冻干的组分中。
在一个特别优选的实施方案中，试剂盒可以包含以冻干形式的如本文所述优选与聚合物载体复合的isRNA和至少一种如本文所述的冻干形式的编码RNA以及另外包含药学上可接受的媒剂，佐剂和至少一种其他组分，例如本文定义的另外的药学活性组分/化合物，以及施用方法和技术说明书。优选地，试剂盒包含以冻干形式的如本文所述优选与聚合物载体复合的isRNA和至少三种，优选至少四种或五种以冻干形式和用于重构(例如林格乳酸盐溶液或水)的液体的编码RNA，所述编码RNA编码IL-12，CD40L，诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1受体，抗CTLA4抗体和/或本文所述的肿瘤抗原，或任何这些的片段或变体。
本发明还有如本文所述的isRNA，如本文所述的至少一种编码RNA，如本文所述的其组合，或相应的如本文定义的药物组合物，或疫苗，或试剂盒或成套试剂盒的若干种应用和用途。作为本发明的主要方面，如本文所述的isRNA，如本文所述的至少一种编码RNA，如本文所述的其组合，或相应的如本文定义的药物组合物，或疫苗，或试剂盒或成套试剂盒可以用作药物，优选用于治疗或预防本文所述的疾病，更优选用于治疗肿瘤或癌症疾病，最优选用于治疗
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
用于治疗选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的。
因此，本发明提供如本文所述的isRNA，如本文所述的至少一种编码RNA，如本文所述的其组合，或相应的药物组合物，或疫苗，或试剂盒或成套试剂盒，其用于制造药物。在这种情况下，治疗优选通过肿瘤内施用，特别是通过注射到肿瘤组织中来进行。根据另一方面，本发明涉及如本文所述的isRNA，如本文所述的至少一种编码RNA，如本文所述的其组合，或相应的如上所述的药物组合物，或疫苗，或试剂盒或成套试剂盒第二医学用途，其中这些主题用于制备药物，特别是用于肿瘤内应用(施用)以治疗优选如本文所述的肿瘤或癌症疾病。
在一个方面，本发明提供治疗或预防病症的方法，其中所述方法包括优选在肿瘤内向有需要的受试者施用有效量的如本文所述的药物，优选如本文所述的isRNA，如本文所述的至少一种编码RNA，如本文所述其组合，或相应的药物组合物或疫苗。更优选地，所述方法用于治疗或预防如本文所述的肿瘤或癌症疾病，最优选选自由以下组成的组的病症
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
选自由以下各项组成的组：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述病症优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的。
因此，本发明提供如本文所述的isRNA，如本文所述的至少一种编码RNA，如本文所述的其组合，或相应的如本文定义的药物组合物，或疫苗，或试剂盒或成套试剂盒，用作药物。因此，如本文所用的术语“药物”通常是指如本文所述的isRNA，如本文所述的至少一种编码RNA，如本文所述的其组合(优选配制以允许施用，例如以液体制剂施用)或相应的如本文定义的药物组合物，或疫苗，或试剂盒或成套试剂盒。在本文中，优选本文所述的isRNA和/或至少一种编码RNA以冻干形式提供并在施用前再溶解，例如通过添加本领域已知的或如本文所述的合适媒剂，例如林格乳酸盐溶液或水。
如本文所述的药物可通过常规针头注射或无针射流注射施用到肿瘤组织中。在优选的实施方案中，药物通过喷射注射施用。喷射注射是指无针注射方法，其中包含组合物和任选的其它合适的赋形剂的流体被迫通过孔口，从而产生能够穿透哺乳动物皮肤的超细液体高压流。原则上，液体流在皮肤中形成孔，液体流通过该孔被推入靶组织，即肿瘤组织。根据本发明，喷射注射可用于如本文所述的药物的瘤内应用。
药物可以通过在肿瘤组织附近和/或紧邻肿瘤组织的常规针注射或无针喷射注射施用。在优选的实施方案中，药物通过在肿瘤组织附近和/或紧邻肿瘤组织喷射注射施用。根据本发明，喷射注射可用于瘤内应用(肿瘤组织附近和/或紧邻肿瘤组织)，特别是用于注射药物。
在一些实施方案中，药物可以口服，胃肠外，通过吸入喷雾，局部，直肠，鼻腔，口腔，阴道或通过植入的储库施用。本文所用的术语肠胃外包括皮下，静脉内，肌肉内，关节内，结内，滑膜内，胸骨内，鞘内，肝内，病灶内，颅内，透皮，皮内，肺内，腹膜内，心内，动脉内和舌下注射或输注技术。进一步特别优选的施用途径是皮内和肌内注射。优选地，施用包括优选如本文所述的成像技术。更优选地，优选如本文所述局部区域施用药物。甚至更优选地，局部区域施用药物，其中所述施用包括优选如本文所述的成像技术。
根据进一步的实施方案，治疗或预防本文所述的疾病(优选肿瘤或癌症疾病)包括施用至少一种包含如本文所述的isRNA的药物组合物和至少一种另外的包含如本文所述的至少一种编码RNA的药物组合物，其中这些药物组合物可以通过相同或不同的途径施用。更优选地，药物组合物通过相同的途径施用，优选肿瘤内，例如，肿瘤内或瘤周注射。
根据一个具体实施方案，药物可以作为单剂量或若干个剂量施用给患者。在某些实施方案中，药物可以作为单剂量施用给患者，然后施用第二剂量，并且任选地甚至在其后施用第三，第四(或更多)剂量等。
优选地，药物每剂量包含至少25μg的isRNA和/或编码RNA。或者，单剂量的药物可包含至少15，20，25，30，35，40，45，50，55，60，65，70，75，80，85，90，95或100μg的isRNA和/或如本文所述的编码RNA。更具体地，单剂量中包含的iRNA和/或编码RNA的量通常为至少100μg或200μg，优选为200μg至1.000μg，更优选为300μg至850μg，甚至更优选为300μg至700μg。当药物包含一种以上类型的RNA时，上述值优选是指每种单一类型RNA的量。
根据特别优选的实施方案，本发明提供如本文所述的isRNA，其用于治疗肿瘤或癌症疾病，优选选自由以下组成的组的疾病
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
选自由以下各项组成的组：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的。
优选地，所述治疗包括优选在肿瘤内施用如本文所述的isRNA，所述isRNA被阳离子或聚阳离子化合物复合。在优选的实施方案中，isRNA包含根据式(I)(GlXmGn)，式(II)(ClXmCn)，式(III)(NuGlXmGnNv)a或式(IV)(NuClXmCnNv)a的核酸序列，优选至少一个根据SEQID NO：433至437，1014至1016，1055或1056中任一项的核酸序列，或这些序列中任一个的片段或变体，优选至少一个根据SEQ ID NO：433，434，或1014至1016中任一项的核酸序列，或这些核酸序列中的任何一个的片段或变体，其中isRNA与阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与聚合物载体复合，更优选与由二硫键交联的阳离子组分形成的聚合物载体复合，所述阳离子组分优选包含根据式(V)，(Va)和/或(Vb)的肽，和/或根据式(VI)的化合物，更优选二硫键交联阳离子肽Cys-Arg12或Cys-Arg12-Cys中的至少一种。更优选地，isRNA包含根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016的核酸序列或任何这些序列的片段或变体，优选根据SEQID NO：433的核酸序列或其片段或变体，所述isRNA与如本文所述的阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与二硫键交联的肽Cys-Arg12-Cys复合。最优选地，其中的isRNA由根据SEQ IDNO：433的RNA序列或其片段或变体组成，其与二硫键交联的肽Cys-Arg12-Cys复合。
治疗优选包括将如上所述的isRNA(或分别包含所述isRNA的药物组合物)瘤内施用给患有选自由以下组成的组中的疾病的受试者
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
选自由以下各项组成的组：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的。
在优选的实施方案中，接受治疗的受试者患有晚期和/或转移性黑素瘤，不可切除和/或晚期SCC，不可切除和/或晚期腺样囊状癌(ACC)，不可切除和/或晚期或皮肤T细胞淋巴瘤或晚期和/或铂难治性HNSCC。优选地，受试者具有可注射的肿瘤病变。更优选地，受试者没有其他治疗选择。
更优选地，治疗包括将如上所述的isRNA(或分别地，包含所述isRNA的药物组合物)瘤内施用于患有晚期黑素瘤，优选晚期皮肤黑素瘤的受试者，所述受试者正在用优选如本文所述的检查点抑制剂治疗。最优选地，用优选如本文所述的PD-1或PD-L1抑制剂治疗受试者，更优选抗PD-1的拮抗性抗体或抗PD-L1的拮抗性抗体。
治疗优选包括一次或重复地向受试者瘤内施用单剂量的如上所述的isRNA(或分别地，包含所述isRNA的药物组合物)。在这种情况下，单剂量优选包含20μg至500μg，更优选50μg至350μg的如上所述的isRNA。在优选的实施方案中，单剂量包含至少25μg，50μg，75μg，100μg，125μg，150μg，175μg，200μg，225μg或至少250μg如上所述的isRNA。最优选地，单剂量包含约25μg，约50μg，约100μg或约150μg的如上所述的isRNA。
治疗可以包括对受试者重复肿瘤内施用如上所述的单剂量的isRNA(或分别地，包含所述isRNA的药物组合物)，其中优选向受试者施用至少2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12或更多单剂量，并且其中两次单剂量施用之间的间隔为至少1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13或14天。两次单剂量给药之间的间隔可以是恒定的，或者可以在整个治疗过程中变化。例如，治疗可包括每周一次肿瘤内施用单剂量，持续四周，然后进行另外的单剂量，优选每两周施用3至8次单剂量。
根据另一个实施方案，所述治疗包括将如上所述的isRNA(或分别地，包含所述isRNA的药物组合物)瘤内施用给患有肿瘤或癌症疾病的受试者，所述肿瘤或癌症疾病优选选自由以下组成的组：乳腺癌(激素受体阳性或阴性形式)；黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤；皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除和/或晚期SCC，或其他形式的恶性皮肤癌；腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤；头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC；唾液腺癌；鼻咽癌；肺癌或其他恶性肿瘤的肺转移；间皮瘤；膀胱癌；甲状腺癌；食道癌和胃癌；肝癌；肝转移恶性肿瘤；卵巢癌；子宫颈癌；肾癌；具有可注射病变的血液恶性肿瘤，例如皮肤T细胞淋巴瘤；单发性或多发性骨髓瘤；霍奇金病；具有可注射病变的非霍奇金淋巴瘤；包括其各种亚型的肉瘤；胶质瘤I-IV级；结肠直肠癌，直肠癌和肛门癌，更优选选自由以下组成的组：黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，最优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期SCC，最优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，或其他形式的恶性皮肤癌，腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC，皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤和头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，其中所述治疗还包括施用优选肿瘤内施用至少一种如本文所定义的编码RNA。在该实施方案中，所述治疗因此优选包括施用如本文所述的根据本发明的组合。
在该实施方案中，isRNA优选如上所述，并且至少一种编码RNA优选为如本文所述的mRNA，其编码至少一种包含IL-12，诱饵PD-1受体，优选可溶性PD-1，CD40L或抗CTLA4抗体或如本文所述的任何这些蛋白质的片段或变体的肽或蛋白质。
更优选地，所述治疗包括如上所述瘤内施用isRNA(或分别地，包含所述isRNA的药物组合物)，并且还包括优选在肿瘤内施用至少三种，优选至少四种或五种如本文所述的编码RNA，优选至少三种，更优选至少四种或五种mRNA，其中，
第一编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：285；296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430；469和992，或任何这些序列的片段或变体，
第二编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396；470和407，或任何这些序列的片段或变体，
第三编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：926-940，或任何这些序列的片段或变体；
第四编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：956-970，或任何这些序列的片段或变体；和/或
任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；387；461和398，或任何这些序列的片段或变体。其中，所述第一，第二，第三，第四和第五编码RNA优选分开配制并同时施用。
甚至更优选地，所述治疗包括如上所述瘤内施用isRNA(或分别地，包含所述isRNA的药物组合物)，并且还包括优选在肿瘤内施用至少三种，优选至少四种或五种如本文所述的编码RNA，优选至少三种，更优选至少四种或五种mRNA，其中，
第一编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：285；296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430；469和992，或任何这些序列的片段或变体，
第二编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396；470和407，或任何这些序列的片段或变体，
第三编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：926-940，或任何这些序列的片段或变体；
第四编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：956-970，或任何这些序列的片段或变体；和/或
任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；387；461和398，或任何这些序列的片段或变体。其中，所述第一，第二，第三，第四和第五编码RNA优选分开配制并同时施用。
最优选地，所述治疗包括如上所述瘤内施用isRNA(或分别地，包含所述isRNA的药物组合物)，并且还包括优选在肿瘤内施用至少三种，优选至少四种或五种如本文所述的编码RNA，优选至少三种，更优选至少四种或五种mRNA，其中，
第一编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：285；296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430；469和992，或任何这些序列的片段或变体，
第二编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396；470和407，或任何这些序列的片段或变体，
第三编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：926-940，或任何这些序列的片段或变体；
第四编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：956-970，或任何这些序列的片段或变体；和/或
任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；387；461和398，或任何这些序列的片段或变体。其中，所述第一，第二，第三，第四和第五编码RNA优选分开配制并同时施用。
因此，所述治疗优选包括
瘤内施用包含根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016的核酸序列或任何这些序列的片段或变体的isRNA，优选根据SEQ ID NO：433或其片段或变体的isRNA，所述isRNA与如本文所述的阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与二硫键交联的肽Cys-Arg12-Cys复合，和
瘤内，肿瘤周围或局部区域施用至少五种编码RNA，优选mRNA，其中
第一编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430和992，或任何这些序列的片段或变体，
第二编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：297；308；319；330；341；352；363；374；385；396和407，或任何这些序列的片段或变体，
第三编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：926-940，或任何这些序列的片段或变体；
第四编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：956-970，或任何这些序列的片段或变体；和/或
任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：288；299；310；321；332；343；354；365；376；387和398，或任何这些序列的片段或变体，
其中所述第一，第二，第三，第四和第五编码RNA优选分开配制并同时施用。
根据备选实施方案，所述治疗包括
瘤内施用包含根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016，10555或1056的核酸序列或任何这些序列的片段或变体的isRNA，优选根据SEQ ID NO：433或其片段或变体的isRNA，所述isRNA与如本文所述的阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与二硫键交联的肽Cys-Arg12-Cys复合，和
瘤内，肿瘤周围或局部区域施用至少五种编码RNA，优选mRNA，其由
第一编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：285；296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430；469和992，或任何这些序列的片段或变体，
第二编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396；470和407，或任何这些序列的片段或变体，
第三编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：926-940，或任何这些序列的片段或变体；
第四编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：956-970，或任何这些序列的片段或变体；和/或
任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；387；461和398，或任何这些序列的片段或变体，
其中所述第一，第二，第三，第四和第五编码RNA优选分开配制并同时施用。
最优选地，所述治疗优选包括
瘤内，肿瘤周围或局部区域施用包含根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016，1055或1056的核酸序列或任何这些序列的片段或变体的isRNA，优选根据SEQ ID NO：433或其片段或变体的isRNA，所述isRNA与如本文所述的阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与二硫键交联的肽Cys-Arg12-Cys复合，和
瘤内，肿瘤周围或局部区域施用至少五种编码RNA，优选mRNA，其中
第一编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430和992，或任何这些序列的片段或变体，
第二编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：297；308；319；330；341；352；363；374；385；396和407，或任何这些序列的片段或变体，
第三编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：926-940，或任何这些序列的片段或变体；
第四编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：956-970，或任何这些序列的片段或变体；和/或
任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组中的核酸序列：SEQ ID NO：288；299；310；321；332；343；354；365；376；387和398，或任何这些序列的片段或变体，
其中，所述第一，第二，第三，第四和第五编码RNA优选分开配制并同时施用。
在该实施方案中，isRNA，isRNA的剂量方案和isRNA的施用优选如上文关于用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA所述。
与上述isRNA同时施用的至少一种编码RNA的剂量方案和施用优选与上文关于用于治疗肿瘤或癌症疾病的isRNA的剂量方案和施用相同。所述治疗因此优选包括一次或重复地向受试者瘤内施用单剂量的如本文所述的至少一种编码RNA(或分别地，包含所述RNA的药物组合物)。在这种情况下，单剂量优选包含20μg至500μg，更优选50μg至350μg的如上所述的至少一种编码RNA。在优选的实施方案中，单剂量包含至少25μg，50μg，75μg，100μg，125μg，150μg，175μg，200μg，225μg或至少250μg如上所述的至少一种编码RNA。最优选地，单剂量包含约25μg，约50μg，约100μg或约150μg的如本文所述的至少一种编码RNA。更优选地，所述治疗包括施用至少三种如上所述的编码RNA，其中单剂量包含每种编码RNA的上述量。所述治疗优选包括重复给予如上所述的单剂量。优选地，至少一种编码RNA的剂量与如上所述的isRNA同时施用，并且优选遵循在该上下文中描述的方案。
在特别优选的实施方案中，接受isRNA，至少一种编码RNA，其组合或包含所述RNA的药物组合物或疫苗的受试者可以是接受或接受过标准癌症治疗的患有癌症或肿瘤的患者。优选地，患者在接受标准治疗后已达到部分应答或稳定的疾病。
癌症的标准治疗取决于待治疗的特定癌症或肿瘤类型而包括化疗，放射，化放疗和手术，其中这些治疗单独或组合应用。
在一些实施方案中，接受isRNA，至少一种编码RNA，其组合或包含所述RNA的药物组合物或疫苗的受试者可以是患有优选如本文所定义的肿瘤或癌症疾病的患者，更优选患有选自由以下组成的组中的疾病的患者：黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，最优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除和/或晚期SCC，最优选皮肤鳞状细胞(cSCC)，或其他形式的恶性皮肤癌，腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC，皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤和头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，所述患者接受过或接受化疗(例如一线或二线化疗)，放疗，化放疗(化疗和放疗联合)，激酶抑制剂，抗体治疗和/或检查点调节剂(例如，CTLA4抑制剂，PD1途径抑制剂)，或者接受isRNA，至少一种编码RNA，其组合或包含所述RNA的药物组合物或疫苗的受试者可以是在接受上述一种或多种治疗后已达到部分应答或稳定疾病的患者。
根据某些实施方案中，接受isRNA，至少一种编码RNA，其组合或包含所述RNA的药物组合物或疫苗的受试者可以是患有选自由以下组成的组中的疾病的患者：黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，最优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除和/或晚期SCC，最优选皮肤鳞状细胞(cSCC)，或其他形式的恶性皮肤癌，腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC，皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤和头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，所述患者接受过或接受(优选通过肿瘤内使用)常规用于本文所述的任何这些疾病的化合物。
更优选地，接受isRNA，至少一种编码RNA，其组合或包含所述RNA的药物组合物或疫苗的受试者可以是患有选自由以下组成的组中的疾病并且接受或接受过检查点调节剂的患者：黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，最优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除和/或晚期SCC，最优选皮肤鳞状细胞(cSCC)，或其他形式的恶性皮肤癌，腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC，皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤和头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC。
根据一些实施方案，接受isRNA，至少一种编码RNA，其组合或包含所述RNA的药物组合物或疫苗的受试者可以是患有选自以下的肿瘤或癌症的患者
-黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，更优选晚期皮肤黑素瘤(cMEL)；
-皮肤鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除的和/或晚期的皮肤SCC，更优选皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，甚至更优选不可切除的和/或晚期的cSCC；
-头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，更优选免疫疗法难治性或铂难治性HNSCC，甚至更优选免疫疗法难治性晚期HNSCC或铂难治性晚期HNSCC；
-腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC；
-皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，更优选局部治疗或化疗难治性皮肤T细胞淋巴瘤，甚至更优选局部治疗或化疗难治性的晚期皮肤T细胞淋巴瘤，或局部治疗或化疗难治性蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和
-外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选外科手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治的晚期VSCC；或者
选自皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选蕈样真菌病亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，
其中肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的。
更优选地，接受isRNA，至少一种编码RNA，其组合或包含所述RNA的药物组合物或疫苗的受试者是患有如本文所述的肿瘤或癌症疾病且接受过或接受化疗(例如一线或二线化疗)，放疗，化放疗(化疗和放疗联合)，激酶抑制剂，抗体治疗和/或检查点调节剂(例如，CTLA4抑制剂，PD1途径抑制剂)的患者，或是在接受上述一种或多种治疗后已达到部分应答或稳定疾病的患者。更优选地，受试者是患有如本文所述的肿瘤或癌症疾病并且优选通过肿瘤内施用接受过或接受常规用于本文所述的任何这些疾病的化合物的患者，更优选是接受或接受过(优选通过肿瘤内施用)检查点调节剂的患者。
接受isRNA，至少一种编码RNA，其组合或包含所述RNA的药物组合物或疫苗的受试者优选患有黑素瘤，优选晚期和/或转移性黑素瘤，并且优选通过肿瘤内施用接受过或接受以下治疗中的至少一种：
-检查点调节剂单药治疗，例如派姆单抗，纳武单抗或伊匹单抗；
-检查点调节剂联合治疗，例如纳武单抗和伊匹单抗；
-包含达拉菲尼和曲美替尼的联合治疗，或维莫非尼和考比替尼或使用维莫非尼或达拉菲尼的单药治疗；
-高剂量IL-2治疗；
-伊马替尼；
-使用例如以下化合物进行细胞毒性治疗：达卡巴嗪，Temozolomide，紫杉醇，白蛋白结合的紫杉醇，卡铂/紫杉醇；
-生物化学疗法，其在具有/不具有长春碱和/或亚硝基脲和/或IL-2和/或干扰素α2b的情况下使用化合物例如达卡巴嗪和/或替莫唑胺和/或卡铂。
接受isRNA，至少一种编码RNA，其组合或包含所述RNA的药物组合物或疫苗的受试者优选患有头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)，优选晚期HNSCC，并且优选通过肿瘤内施用接受过或接受以下治疗中的至少一种：
-使用单一药剂治疗，例如顺铂，卡铂，紫杉醇，多西他赛，5-FU，甲氨蝶呤，西妥昔单抗，吉西他滨，卡培他滨，长春瑞滨，阿法替尼；
-使用药剂组合的治疗；例如
卡铂和输注5-FU；
5-FU和羟基脲；
顺铂和紫杉醇；
顺铂和输注5-FU；
顺铂和5-FU；
卡铂和紫杉醇；
顺铂接着是顺铂和5-FU；
多西他赛和顺铂和5-FU；
紫杉醇和顺铂和输注5-FU；
多西他赛和顺铂；
顺铂和表柔比星和紫杉醇；
顺铂或卡铂和5-FU和西妥昔单抗；
顺铂或卡铂和多西他赛或紫杉醇；
顺铂和西妥昔单抗；
顺铂和多西他赛和西妥昔单抗；
顺铂和紫杉醇西妥昔单抗；
卡铂和西妥昔单抗；
顺铂和吉西他滨；
吉西他滨和长春瑞滨。
接受isRNA，至少一种编码RNA，其组合或包含所述RNA的药物组合物或疫苗的受试者优选患有皮肤的鳞状细胞癌(SCC)，优选不可切除和/或晚期SCC，并且优选通过肿瘤内施用接受过或接受以下治疗中的至少一种：
-5-FU；
-顺铂；
-顺铂和5-FU；
-干扰素α；
-顺式视黄酸；
-干扰素α和顺式视黄酸和顺铂；
-西妥昔单抗；
-vismodegib；
-顺铂和5-FU和西妥昔单抗；
-咪喹莫特；
-光动力疗法(氨基乙酰丙酸，卟吩姆钠)；
-剧烈的冷冻疗法；
-电干燥法；
-双氯芬酸(Diclofenac)；
-化学剥脱术(三氯乙酸)；
-冷冻疗法和5-FU和咪喹莫特；
-类维生素A(acitretin，异维甲酸)；
-钙调神经磷酸酶抑制剂和/或mTOR抑制剂(雷帕霉素，替西罗莫司(temsirolimus)，西罗莫司，依维莫司，地磷莫司(ridaforolimus)，息斯敏(Deforolimus))；
-顺铂和/或卡铂和/或5-FU和/或紫杉醇和/或多西他赛。
接受isRNA，至少一种编码RNA，其组合或包含所述RNA的药物组合物或疫苗的受试者优选患有腺样囊状癌(ACC)，优选晚期ACC，并且优选通过肿瘤内施用接受过或接受以下治疗中的至少一种：使用单一药剂或组合使用的治疗
-放疗；
-顺铂；
-紫杉醇；
-米托蒽醌；
-Doxo-/表柔比星；
-甲氨蝶呤；
-长春瑞滨；
-外粒子束放射治疗。
接受isRNA，至少一种编码RNA，其组合或包含所述RNA的药物组合物或疫苗的受试者优选患有皮肤T细胞淋巴瘤，优选晚期皮肤T细胞淋巴瘤或蕈样真菌病亚型T细胞淋巴瘤，并且优选通过肿瘤内施用接受过或接受以下治疗中的至少一种：使用单一药剂或组合使用的治疗
-皮质类固醇；
-卡莫司汀；
-氮芥(二氯甲基二乙胺盐酸盐)；
-蓓萨罗丁(Bexarotene)；
-Taxarotene凝胶；
-咪喹莫特；
-光疗；
-电子束疗法(TSEBT)；
-阿仑单抗(Alemtuzumab)；
-类维生素A；
-干扰素；
-伏立诺他；
-罗米地辛(Romidepsin)；
-体外光分离置换疗法(extracorporeak photopheresis，ECP)；
-甲氨蝶呤；
-脂质体多柔比星；
-吉西他滨；
-喷司他丁；
-替莫唑胺；
-普拉曲沙(Pralatrexate)；
-同种异体细胞移植。
接受isRNA，至少一种编码RNA，其组合或包含所述RNA的药物组合物或疫苗的受试者优选患有外阴癌，优选外阴鳞状细胞癌(VSCC)，更优选晚期VSCC，甚至更优选手术或化疗难治性VSCC，最优选手术或化疗难治性晚期VSCC，并且优选通过肿瘤内施用接受过或接受以下治疗(使用单一药剂或组合使用的治疗)中的至少一种：
-丝裂霉素-C2；
-顺铂；
-卡铂；
-长春瑞滨；
-紫杉醇；
-酪氨酸激酶抑制剂(例如厄洛替尼)；
-纳武单抗；
-硫酸博来霉素(例如博来霉素，硫酸博来霉素blenamax，tevableo，oncobleo，bleo，bloicin-S)；
-5-氟尿嘧啶(5-FU)；
-加德西(Gardasil)9(人乳头瘤病毒(9价)疫苗)；
-盐酸奥米加南(omiganan pentahydrochloride)；
-alisertib；
-ISA-101(13种合成长肽(25-35个氨基酸长)，衍生自HPV16病毒的E6和E7致癌蛋白)；
-PDS-0101；
-Vicoryx(P1637-63疫苗)；
-TA-CIN(包含来自HPV16的衣壳蛋白L2，E6和E7的融合蛋白疫苗)；和
-人乳头瘤病毒16E6肽疫苗。
通过以下项目进一步描述本发明及其优选实施方案：
1.免疫刺激性RNA(isRNA)，其用于治疗或预防优选选自由以下组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的。
2.用于根据项1所述的用途的isRNA，其中所述isRNA肿瘤内施用，包括肿瘤周围或局部区域。
3.用于根据项2所述的用途的isRNA，其中所述isRNA通过注射施用。
4.用于根据前述项中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA是非编码RNA。
5.用于根据前述项中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA包含
根据下式的核酸序列
式(I)(GlXmGn)，
其中：
G是鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，或是鸟苷(鸟嘌呤)或尿苷(尿嘧啶)的类似物；
X是鸟苷(鸟嘌呤)，(尿苷)尿嘧啶，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)或上述核苷酸(核苷)的类似物；
l是1到40的整数，
其中，
当l＝1，G是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物，
当l＞1时，至少50％的核苷酸(核苷)是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
m是整数，并且至少为3；
其中，
当m＝3时，X是尿苷(尿嘧啶)或其类似物，
当m＞3时，出现至少3个连续的尿苷(尿嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)类似物；
n是1到40的整数，
其中，
当n＝1时，G是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物，
当n＞1时，至少50％的核苷酸(核苷)是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
根据下式的核酸序列
式(II)(ClXmCn)
其中：
C是胞苷(胞嘧啶)，尿苷(尿嘧啶)或胞苷(胞嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)的类似物；
X是鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)或上述核苷酸(核苷)的类似物；
l是1到40的整数，
其中，
当l＝1时，C是胞苷(胞嘧啶)或其类似物，
当l＞1时，至少50％的核苷酸(核苷)是胞苷(胞嘧啶)或其类似物；
m是整数，并且至少为3；
其中，
当m＝3时，X是尿苷(尿嘧啶)或其类似物，
当m＞3时，出现至少3个连续的尿苷(尿嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)类似物；
n是1到40的整数，
其中，
当n＝1时，C是胞苷(胞嘧啶)或其类似物，
当n＞1时，至少50％的核苷酸(核苷)是胞苷(胞嘧啶)或其类似物；
根据下式的核酸序列
式(III)(NuGlXmGnNv)a
其中：
G是鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)或鸟苷(鸟嘌呤)或尿苷(尿嘧啶)的类似物，优选鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
X是鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)，或这些核苷酸(核苷)的类似物，优选尿苷(尿嘧啶)或其类似物；
N是长度为约4至50，优选约4至40，更优选约4至30或4至20个核酸的核酸序列，每个N独立地选自鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)或这些核苷酸(核苷)的类似物；
a为1至20，优选1至15，最优选1至10的整数；
l是1到40的整数，
其中当1＝1时，G是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物，
当1＞1时，这些核苷酸(核苷)中至少50％是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
m是整数，并且至少为3；
其中当m＝3时，X是尿苷(尿嘧啶)或其类似物，和
当m＞3时，出现至少3个连续的尿苷(尿嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)类似物；
n是1到40的整数，
其中当n＝1时，G是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物，
当n＞1时，这些核苷酸(核苷)中至少50％是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
u，v可以彼此独立地为0到50的整数，
优选地，其中当u＝0时，v≥1，或当v＝0时，u≥1；
其中式(III)的核酸分子具有至少50个核苷酸，优选至少100个核苷酸，更优选至少150个核苷酸，甚至更优选至少200个核苷酸，最优选至少250个核苷酸的长度；和/或
根据下式的核酸序列
式(IV)(NuClXmCnNv)a
其中：
C是胞苷(胞嘧啶)，尿苷(尿嘧啶)或胞苷(胞嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)的类似物，优选胞苷(胞嘧啶)或其类似物；
X是鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)，或上述核苷酸(核苷)的类似物，优选尿苷(尿嘧啶)或其类似物；
N各自是彼此独立地长度为约4至50，优选约4至40，更优选约4至30或4至20个核酸的核酸序列，每个N独立地选自鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)或这些核苷酸(核苷)的类似物；
a为1至20，优选1至15，最优选1至10的整数；
1是1到40的整数，
其中当l＝1时，C是胞苷(胞嘧啶)或其类似物，
当1＞1时，这些核苷酸(核苷)中至少50％是胞苷(胞嘧啶)或其类似物；
m是整数，并且至少为3；
其中当m＝3时，X是尿苷(尿嘧啶)或其类似物，
当m＞3时，出现至少3个连续的尿苷(尿嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)类似物；
n是1到40的整数，
其中当n＝1时，C是胞苷(胞嘧啶)或其类似物，
当n＞1时，这些核苷酸(核苷)中至少50％是胞苷(胞嘧啶)或其类似物。
u，v可以彼此独立地为0到50的整数，
优选地，其中当u＝0时，v≥1，或当v＝0时，u≥1；
其中根据本发明的式(V)的核酸分子具有至少50个核苷酸，优选至少100个核苷酸，更优选至少150个核苷酸，甚至更优选至少200个核苷酸，最优选至少250个核苷酸的长度。
6.用于根据前述项中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA包含至少一种根据SEQ ID NO：433至437或1014至1016中任一个的核酸序列，优选根据SEQ ID NO：433，434或1014至1016中任一个的核酸序列，或这些核酸序列中的任何一个的片段或变体。
7.用于根据前述项中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA与阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与阳离子或聚阳离子聚合物，阳离子或聚阳离子肽或蛋白质，例如鱼精蛋白，阳离子或聚阳离子多糖和/或阳离子或聚阳离子脂质复合。
8.用于根据项7所述的用途的isRNA，其中阳离子或聚阳离子化合物是聚合物载体。
9.用于根据项8所述的用途的isRNA，其中所述聚合物载体由二硫化物交联的阳离子组分形成，优选二硫化物交联的阳离子肽，其中所述二硫化物交联的阳离子肽优选包含
根据式V的肽
(Arg)1；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x， (式(V)，
其中l+m+n+o+x＝8-15，并且l，m，n或o彼此独立地可以是选自0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15中的任何数字，条件是Arg，Lys，His和Orn的总含量代表寡肽的所有氨基酸的至少50％；以及Xaa可以是选自天然(＝天然存在的)或非天然氨基酸的任何氨基酸，Arg，Lys，His或Orn除外；以及x可以是选自0，1，2，3或4的任何数字，条件是Xaa的总含量不超过寡肽的所有氨基酸的50％；
根据式Va的肽
{(Arg)1；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa’)x(Cys)y} 式(Va)，
其中(Arg)1；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；和x如式V所定义，Xaa′是选自天然(＝天然存在的)或非天然氨基酸的任何氨基酸(Arg，Lys，His，Orn或Cys除外)，y是选自0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21-30，31-40，41-50，51-60，61-70，71-80和81-90的任何数字，条件是Arg(精氨酸)，Lys(赖氨酸)，His(组氨酸)和Orn(鸟氨酸)的总含量占寡肽的所有氨基酸的至少10％；
根据式Vb的肽
Cys1{(Arg)1；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x}Cys2 式(Vb)
其中经验式{(Arg)1；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x}如式(V)所定义并且形成根据(半经验)式(V)的氨基酸序列的核心，并且其中Cys1和Cys2是(Arg)1；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x的近侧或末端的半胱氨酸；和/或
根据式VI的化合物
L-P1-S-[S-P2-S]n-S-P3-L 式(VI)
其中，
P1和P3彼此不同或相同，代表线性或支链的亲水聚合物链，每个P1和P3具有至少一个-SH-部分，能够在与组分P2缩合后形成二硫键，或者备选地与(AA)，(AA)x，或[(AA)x]z一起形成二硫键(如果这些组分用作P1和P2或P3和P2之间的连接子)和/或与其他组分(例如(AA)，(AA)x，[(AA)x]z或L)一起形成二硫键，线性或支链的亲水聚合物链彼此独立地选自聚乙二醇(PEG)，聚-N-(2-羟丙基)甲基丙烯酰胺，聚-2-(甲基丙烯酰氧基)乙基磷酰胆碱，聚(羟烷基L-天冬酰胺)，聚(2-(甲基丙烯酰氧基)乙基磷酰胆碱)，羟乙基淀粉或聚(羟烷基L-谷氨酰胺)，其中亲水聚合物链的分子量为约1kDa至约100kDa，优选约2kDa至约25kDa；或者更优选约2kDa至约10kDa，例如约5kDa至约25kDa或5kDa至约10kDa；
P2是阳离子或聚阳离子肽或蛋白质(例如，如针对由二硫化物交联的阳离子组分形成的聚合物载体所定义的)，优选长度为约3至约100个氨基酸，更优选长度为约3至约50个氨基酸，甚至更优选长度为约3至约25个氨基酸，例如长度为约3至10，5至15，10至20或15至25个氨基酸，更优选长度为约5至约20，甚至更优选长度为约10至约20个氨基酸；或者
是阳离子或聚阳离子聚合物(例如，如针对由二硫化物交联的阳离子组分形成的聚合物载体所定义的)，通常具有约0.5kDa至约30kDa的分子量，包括约1kDa至约20kDa的分子量，甚至更优选约1.5kDa至约10kDa的分子量，或约0.5kDa至约100kDa的分子量，包括约10kDa至约50kDa的分子量，甚至更优选约10kDa至约30kDa的分子量；
每个P2表现出至少两个-SH-部分，能够在与其他组分P2或组分P1和/或P3缩合后形成二硫键，或者备选地与其他组分(例如(AA)，(AA)x，或[(AA)x]z)缩合后形成二硫键；
-S-S-是(可逆的)二硫键(为了更好的可读性省略括号)，其中S优选代表硫或带有-SH的部分，其形成(可逆的)二硫键。(可逆的)二硫键优选通过P1和P2，P2和P2，或P2和P3或任选的本文定义的其他组分(例如L，(AA)，(AA)x，[(AA)x]z等)的-SH-部分的缩合形成；-SH-部分可以是这些组分结构的一部分或通过如下定义的修饰加入；
L是任选的配体，其可以存在或不存在，并且可以独立地选自RGD，转铁蛋白，叶酸，信号肽或信号序列，定位信号或序列，核定位信号或序列(NLS)，抗体，细胞穿透肽(例如TAT或KALA)，受体配体(例如细胞因子，激素，生长因子等)，小分子(例如碳水化合物例如甘露糖或半乳糖或合成配体)，小分子激动剂，抑制剂或受体拮抗剂(例如RGD肽模拟物类似物)，或本文定义的任何其他蛋白质，等；
n是整数，通常选自约1至50的范围，优选约1，2或3至30的范围，更优选约1，2，3，4或5至25的范围，或约1，2，3，4或5至20的范围，或约1，2，3，4或5至15的范围，或约1，2，3，4或5至10的范围，包括例如约4至9，4至10，3至20，4至20，5至20或10至20的范围，或约3至15，4至15，5至15或10至15的范围，或约6至11或7至10的范围。最优选地，n在约1，2，3，4或5至10的范围，更优选在约1，2，3或4至9的范围，在约1，2，3或4至8的范围，或约1，2或3至7的范围。
10.用于根据项8或9所述的用途的isRNA，其中所述聚合物载体包含二硫化物交联的阳离子肽Cys-Arg12或Cys-Arg12-Cys中的至少一种。
11.用于项7至10中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA与所述阳离子或聚阳离子化合物，优选阳离子或聚阳离子肽或蛋白质的N/P比为约0.1至10，包括约0.3至4，约0.5至2，约0.7至2，以及约0.7至1.5。
12.用于根据前述项中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA与一种或多种脂质复合，从而形成脂质体，脂质纳米颗粒和/或脂质复合物。
13.用于根据前述项中任一项所述的用途的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种另外的药学活性成分。
14.用于项13所述的用途的isRNA，其中所述至少一种另外的药学活性成分是用于治疗肿瘤或癌症疾病的化合物，所述肿瘤或癌症疾病优选选自由以下各项组成的组：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的。
15.用于项13或14所述的用途的isRNA，其中所述至少一种另外的药学活性成分是检查点调节剂，或其片段或变体。
16.用于项15所述的用途的isRNA，其中所述检查点调节剂选自由以下组成的组：PD-1抑制剂，PD-L1抑制剂，PD-L2抑制剂，CTLA-4抑制剂，LAG3抑制剂，TIM3抑制剂，TIGIT抑制剂，OX40刺激剂，4-1BB刺激剂，CD40L刺激剂，CD28刺激剂和GITR刺激剂，或这些检查点调节剂中的任何一种的片段或变体。
17.用于项16所述的用途的isRNA，其中所述检查点调节剂是PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂，其中所述PD-1抑制剂优选是针对PD-1的拮抗性抗体，PD-L1抑制剂是针对PD-L1的拮抗性抗体，或所述抗体的片段或变体。
18.用于项16所述的用途的isRNA，其中所述检查点调节剂是CTLA-4抑制剂，优选抗CTLA4抗体，或其片段或变体。
19.用于项13或14所述的用途的isRNA，其中所述至少一种另外的药学活性成分是白细胞介素，优选IL-12，或其片段或变体。
20.用于项1-19中任一项所述的用途的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA，优选至少一种mRNA。
21.用于项20所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码至少一种肽或蛋白质，所述至少一种肽或蛋白质包含选自以下各项组成的组中的至少一种肽或蛋白质：
-IL-12，
-CD40L，
-诱饵PD-1受体，和
-抗CTLA4抗体，
或任何这些的片段或变体。
22.用于项20或21所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含IL-12或其片段或变体或者IL-12类似物或其片段或变体的肽或蛋白质。
23.用于项20或21所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质。
24.根据项20或21使用的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质。
25.用于项20或21所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质。
26.用于项20或21所述的用途的isRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，并且
所述相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质。
27.用于项20或21所述的用途的isRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，并且
所述相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质。
28.用于项20或21所述的用途的isRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，并且
所述相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质。
28.用于项20或21所述的用途的isRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，并且
所述相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含至少一种肿瘤抗原或其片段或变体的肽或蛋白质。
29.用于项20或21所述的用途的isRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，并且
所述相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质。
30.用于项20或21所述的用途的isRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，并且
所述相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质。
31.用于项20或21所述的用途的isRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质，并且
所述相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质。
32.用于项20或21所述的用途的isRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，
所述相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，以及
所述相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质。
33.用于项20或21所述的用途的isRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，
所述相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质。
所述相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质，并且
任选地，所述相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质。
34.用于项1至33中任一项所述的用途的isRNA，其中所述受试者不接受或未接受PD-1或PD-L1拮抗剂的治疗，并且其中所述用途包括施用至少一种包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质，或施用包含编码至少一种包含诱饵PD-1受体或其片段或其变体的肽或蛋白质的核酸序列的核酸，优选编码RNA，更优选mRNA。
35.用于项1至34中任一项所述的用途的isRNA，其中所述受试者接受或已经接受PD-1或PD-L1拮抗剂的治疗，并且其中所述用途不包括施用至少一种包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质或施用包含编码至少一种包含诱饵PD-1受体或其片段或其变体的肽或蛋白质的核酸序列的核酸，优选编码RNA，更优选mRNA。
36.用于项33所述的用途的isRNA，其中编码肽或蛋白质的每个编码序列位于单独的编码RNA上，优选地是单独的mRNA。
37.用于项33所述的用途的isRNA，其中编码肽或蛋白质的至少两种编码序列位于相同的编码RNA上，所述编码RNA优选为双或多顺反子RNA。
38.用于项20至37中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA肿瘤内施用。
39.用于项20至38中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA是皮内，肌内或皮下施用。
40.用于项36所述的用途的isRNA，其中所述单独的编码RNA一起配制并肿瘤内施用。
41.用于项20至40中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA与所述至少一种编码RNA一起配制。
42.用于项37所述的用途的isRNA，其中所述共制剂肿瘤内施用。
43.用于项20至42中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含IL-12，优选IL-12A或IL-12B中的至少一种，或任何这些蛋白质的片段或变体的肽或蛋白质。
44.用于项43所述的用途的isRNA，其中编码的肽或蛋白质包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO：3至8，或任何这些序列的片段或变体。
45.用于项43或44所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码序列包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：440至445或任何这些序列的片段或变体。
46.用于项43至45所述的用途的isRNA，其中编码的肽或蛋白质包含IL-12A和IL-12B或这些蛋白质中的每一种的片段或变体。
47.用于项46所述的用途的isRNA，其中编码的肽或蛋白质包含根据SEQ ID NO：10的氨基酸序列或其片段或变体。
48.用于项43至47所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码序列包含根据SEQID NO：447的核酸序列或其片段或变体。
49.用于项20至48所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，其中编码的肽或蛋白质优选包含根据SEQ ID NO：11的氨基酸序列或其片段或变体。
50.用于项49所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码序列包含根据SEQ IDNO：448的核酸序列或其片段或变体。
51.用于项20至50中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含诱饵PD-1受体或其片段或变体优选PD-1受体的细胞外部分或其片段或变体的肽或蛋白质。
52.用于项51所述的用途的isRNA，其中所述诱饵PD-1受体是包含可溶性PD-1或其片段或变体的肽或蛋白质。
53.用于项51或52所述的用途的isRNA，其中编码的肽或蛋白质包含根据SEQ IDNO：2或1042的氨基酸序列或其片段或变体。
54.用于项51至53所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码序列包含根据SEQID NO：439的核酸序列或其片段或变体。
55.用于项20至54中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质。
56.用于项55所述的用途的isRNA，其中编码的肽或蛋白质包含根据SEQ ID NO：645和/或677的氨基酸序列或任何这些氨基酸序列的片段或变体。
57.用于项55或56所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码序列包含根据SEQID NO：646和/或678的核酸序列或任何这些核酸序列的片段或变体。
58.用于项20或57所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含至少一种肿瘤抗原或肿瘤抗原的片段或变体的肽或蛋白质。
59.用于项58所述的用途的isRNA，其中所述肿瘤抗原优选选自由以下组成的组：1A01_HLA-A/m；1A02；5T4；ACRBP；AFP；AKAP4；α-辅肌动蛋白-_4/m；α-甲基酰基-辅酶_A_消旋酶；ANDR；ART-4；ARTCl/m；AURKB；B2MG；B3GN5；B4GN1；B7H4；BAGE-1；BASI；BCL-2；bcr/abl；β-连环蛋白/m；BING-4；BIRC7；BRCA1/m；BY55；钙网蛋白；CAMEL；CASP-8/m；CASPA；组织蛋白酶_B；组织蛋白酶_L；CD1A；CD1B；CD1C；CD1D；CD1E；CD20；CD22；CD276；CD33；CD3E；CD3Z；CD44_同种型_1；CD44_同种型_6；CD4；CD52；CD55；CD56；CD80；CD86；CD8A；CDC27/m；CDE30；CDK4/m；CDKN2A/m；CEA；CEAM6；CH3L2；CLCA2；CML28；CML66；COA-1/m；coactosin样_蛋白；胶原_XXIII；COX-2；CP1B1；CSAG2；CT45A1；CT55；CT-_9/BRD6；CTAG2_同种型_LAGE-1A；CTAG2_同种型_LAGE-1B；CTCFL；Cten；细胞周期蛋白_B1；细胞周期蛋白_D1；cyp-B；DAM-10；DEP1A；E7；EF1A2；EFTUD2/m；EGFR；EGLN3；ELF2/m；EMMPRIN；EpCam；EphA2；EphA3；ErbB3；ERBB4；ERG；ETV6；EWS；EZH2；FABP7；FCGR3A_形式_1；FCGR3A_形式2；FGF5；FGFR2；纤连蛋白；FOS；FOXP3；FUT1；G250；GAGE-1；GAGE-2；GAGE-3；GAGE-4；GAGE-5；GAGE-6；GAGE7b；GAGE-8_(GAGE-2D)；GASR；GnT-V；GPC3；GPNMB/m；GRM3；HAGE；hepsin；Her2/neu；HLA-A2/m；同源框_NKX3.1；HOM-TES-85；HPG1；HS71A；HS71B；HST-2；hTERT；iCE；IF2B3；IL10；IL-13Ra2；IL2-RA；IL2-RB；IL2-RG；IL-5；IMP3；ITA5；ITB1；ITB6；激肽释放酶2；激肽释放酶3；激肽释放酶4；KI20A；KIAA0205；KIF2C；KK-LC-1；LDLR；LGMN；LIRB2；LY6K；MAGA5；MAGA8；MAGAB；MAGE-A10；MAGE-A12；MMAGE-A1；MAGE-A2；MAGE-A3；MAGE-A4；MAGE-A6；MAGE-A9；MAGE-B10；MAGE-B16；MAGE-B17；MAGE-_B1；MAGE-B2；MAGE-B3；MAGE-B4；MAGE-B5；MAGE-B6；MAGE-C1；MAGE-C2；MAGE-C3；MAGE-D1；MAGE-D2；MAGE-D4；MAGE-_E1；MAGE-E1_(MAGE1)；MAGE-E2；MAGE-F1；MAGE-H1；MAGEL2；mammaglobin_A；MART-1/melan-A；MART-2；MC1_R；M-CSF；mesothelin；MITF；MMP1_1；MMP7；MUC-1；MUM-1/m；MUM-2/m；MYCN；MYO1A；MYO1B；MYO1C；MYO1D；MYO1E；MYO1F；MYO1G；MYO1H；NA17；NA88-A；Neo-PAP；NFYC/m；NGEP；NPM；NRCAM；NSE；NUF2；NY-ESO-1；OA1；OGT；OS-9；骨钙素；骨桥蛋白；p53；PAGE-4；PAI-1；PAI-2；PAP；PATE；PAX3；PAX5；PD1L1；PDCD1；PDEF；PECA1；PGCB；PGFRB；Pim-1_-激酶；Pin-1；PLAC1；PMEL；PML；POTEF；POTE；PRAME；PRDX5/m；PRM2；prostein；蛋白酶-3；PSA；PSB9；PSCA；PSGR；PSM；PTPRC；RAB8A；RAGE-1；RARA；RASH；RASK；RASN；RGS5；RHAMM/CD168；RHOC；RSSA；RU1；RU2；RUNXl；S-100；SAGE；SART-1；SART-2；SART-3；SEPR；SERPINB5；SIA7F；SIA8A；SIAT9；SIRT2/m；SOX10；SP17；SPNXA；SPXN3；SSX-1；SSX-2；SSX3；SSX-4；ST1A1；STAG2；STAMP-1；STEAP-1；生存素2B；生存素；SYCP1；SYT-SSX-1；SYT-SSX-2；TARP；TCRg；TF2AA；TGFB1；TGFR2；TGM-4；TIE2；TKTL1；TPI/m；TRGV11；TRGV9；TRPC1；TRP-p8；TSG10；TSPY1；TVC_(TRGV3)；TX101；酪氨酸酶；TYRP1；TYRP2；UPA；VEGFR1；WT1；和XAGE1。
60.用于项58或59所述的用途的isRNA，其中编码的肽或蛋白质包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：PCT/EP2017/059525的SEQ ID NOs：1-504；4558-4560，或任何这些序列的片段或变体。
61.用于项58至60中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA的至少一种编码序列包含选自由以下组成的组的核酸序列：PCT/EP2017/059525的SEQ ID NO：505-4033；4561-4591，或任何这些序列的片段或变体。
62.用于项58至61中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA不肿瘤内施用。
63.用于项58至62中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA是皮内，肌内或皮下施用。
64.用于项20至63中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列包含与相应野生型RNA的编码序列的核酸序列相比经修饰的核酸序列，并且其中与由相应野生型RNA的编码序列编码的氨基酸序列相比，由所述编码序列编码的氨基酸序列优选不经修饰。
65.用于项64所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码序列包含
a)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：25-30；36-41；47-52；58-63；69-74；80-85；91-96；102-107；113-118；124-129；135-140；601-606；612-617；623-628；716-725；727；1018-1021和1059-1062，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：32；43；54；65；76；87；98；109；120；131；142；608；619；630；632-644；726和1058，或任何这些序列的片段或变体；
b)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：33；44；55；66；77；88；99；110；121；132；143；609；620；631；728-738和1025-1028，或任何这些序列的片段或变体，
c)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：646-660；662-676；678-692；694-705；707-715和1029-1041，或任何这些核酸序列的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：23；34；45；56；67；78；89；100；111；122；133；599；610；621和1022-1024，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：24；35；46；57；68；79；90；101；112；123；134；600；611；622和1043-1054，或任何这些序列的片段或变体。
66.用于项20至65中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列具有与相应的野生型RNA的编码序列的G/C含量相比改变的优选增加的G/C含量，并且其中与由相应野生型RNA的编码序列编码的氨基酸序列相比，由所述编码序列编码的氨基酸序列优选不经修饰。
67.用于项66所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码序列包含
a)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：25-30；80-85；91-96；102-107；113-118；601-606；124-129；135-140；612-617；623-628；716-725；727和1018-1021和1059-1062，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：32；87；98；109；120；131；142；608；619；630；632；636-644和726和1058，或任何这些序列的片段或变体；
b)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：33；88；99；110；121；132；143；609；620；631；728-778和1025-1028，或任何这些序列的片段或变体，
c)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：646；650-658；662；666-674；678；682-690；694；698-705；707；710；713和1029-1041，或任何这些核酸序列的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：23；78；89；100；111；122；133；599；610；621和1022-1024，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：24；79；90；101；112；123；134；600；611；622和1043-1054，或任何这些序列的片段或变体。
68.用于项20至67中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含5′帽结构。
69.用于项20至68中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含5’-UTR元件和/或3’-UTR元件。
70.用于项20至69中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含聚(A)和/或聚(C)序列。
71.用于项20至70中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含组蛋白茎-环序列。
72.用于项20至71中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含
a)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：146-151；451-456；157-162；168-173；179-184；190-195；201-206；212-217；223-228；234-239；245-250；256-261和267-272，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：153；458；164；175；186；197；208；219；230；241；252；263，274；992和598，或任何这些序列的片段或变体，
b)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：154；459；165；176；187；198；209；220；231；242；253；264，275和596，或任何这些序列的片段或变体，
c)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：594；595；860-925，或任何这些序列的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：144；449；155；166；177；188；199；210；221；232；243；254和265，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：145；450；156；167；178；189；200；211；222；233；244；255；266和597，或任何这些序列的片段或变体。
73.用于项20至72中任一项所述的用途的isRNA，其中所述治疗包括施用，优选肿瘤内施用至少三种编码RNA，其中
第一编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：153；164；175；186；197；208；219；230；241；252；263；274；992；458；598；32；43；54；65；76；87；98；109；120；131；142；608；619；630；632-644；726和1058，或任何这些序列的片段或变体，
第二编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：33；44；55；66；77；88；99；110；121；132；143；609；620；631；728-738；1025-1028；154；165；176；187；198；209；220；231；242；253；264；275；459和596，或任何这些序列的片段或变体，
第三编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：920-922；923-925；646-660；662-676；678-692；694-705；707-715或1029-1041，或任何这些序列的片段或变体，和
任选地，第四编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：145；156；167；178；189；200；211；222；233；244；255；266；450；597；24；35；46；57；68；79；90；101；112；123；134；600；611；622和1043-1054，或任何这些序列的片段或变体。
74.用于项20至73中任一项所述的用途的isRNA，其中所述治疗包括施用，优选肿瘤内施用至少四种编码RNA，其中
第一编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：153；164；175；186；197；208；219；230；241；252；263；274；992；458和598，或任何这些序列的片段或变体，
第二编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：154；165；176；187；198；209；220；231；242；253；264；275；459和596，或任何这些序列的片段或变体，
第三编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：594和860-874，或任何这些序列的片段或变体；
第四编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：595和890-904，或任何这些序列的片段或变体；和
任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：145；156；167；178；189；200；211；222；233；244；255；266；450和597，或任何这些序列的片段或变体。
75.用于项20至74中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含
a)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：278-283；289-294；300-305；311-316；322-327；333-338；344-349；355-360；366-371；377-382；388-393；399-404和462-467，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：285；296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430；469和992，或任何这些序列的片段或变体，
b)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396；470和407，或任何这些序列的片段或变体，和/或
c)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：926-955；或任何这些核酸序列的片段或变体，和选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：956-985，或任何这些核酸序列的片段或变体；b)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：986-991，或任何这些核酸序列的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：276；287；298；309；320；331；342；353；364；375；386；460和397，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；461；387和398或任何这些序列的片段或变体。
76.用于项20至65中任一项所述的用途的isRNA，其中所述治疗包括施用，优选肿瘤内施用至少四种编码RNA，其中
第一编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：285；296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430；469和992，或任何这些序列的片段或变体，
第二编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396；470和407，或任何这些序列的片段或变体，
第三编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：926-940，或任何这些序列的片段或变体；和/或
第四编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：956-970任何这些序列的片段或变体；和/或
任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；387；461和398，或任何这些序列的片段或变体。
77.用于项20至76中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA作为与一种或多种阳离子或聚阳离子化合物复合的RNA施用，并且所述至少一种编码RNA更优选mRNA作为游离RNA施用或者是作为与一种或多种脂质复合从而形成脂质体，脂质纳米颗粒和/或脂质复合物的RNA施用。
78.用于项1至77中任一项所述的用途的isRNA，其中所述治疗包括化疗，放疗和/或手术。
79.包含免疫刺激性RNA(isRNA)和药学上可接受的载体和/或媒剂的药物组合物，其用于治疗或预防选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的，其中所述药物组合物肿瘤内施用。
80.用于项79所述的用途的药物组合物，其中所述isRNA如项1至12中所定义。
81.用于根据项79或80所述的用途的药物组合物，其中所述治疗包括施用优选如项13至68中任一项所定义的至少一种另外的药学活性成分。
82.试剂盒或成套试剂盒，其包含免疫刺激性RNA(isRNA)，优选项1至12中定义的isRNA，或项79至81中任一项所定义的药物组合物，以及任选的具有关于施用和施用剂量的信息的技术说明书，
所述试剂盒或成套试剂盒用于治疗选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的，
其中所述药物组合物肿瘤内施用。
83.isRNA，优选项1至12中任一项所定义的isRNA，项79至81中任一项所定义的药物组合物，或项82中定义的试剂盒或成套试剂盒用于制造治疗选自下组的肿瘤或癌症疾病的药物的用途，该组由以下组成：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的，所述药物用于肿瘤内，肿瘤周围或局部区域施用，优选用于肿瘤内施用。
84.治疗或预防选自由以下组成的组的病症的方法：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述病症优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的，其中所述方法包括施用优选肿瘤内施用有效量isRNA，优选项1至12中任一项所定义的isRNA，项79至81中任一项所定义的药物组合物，或项82中定义的试剂盒或成套试剂盒给有需要的受试者。
85.isRNA和至少一种编码RNA的组合，其中所述至少一种编码RNA编码至少一种包含IL-12，CD40L，诱饵PD-1受体，抗CTLA4抗体和/或肿瘤抗原或这些蛋白质中每一种的片段或变体的肽或蛋白质。
86.根据项85所述的组合，其中所述isRNA是项4至12中任一项所定义的isRNA。
87.根据项85或86所述的组合，其中所述至少一种编码RNA是如项13至78中任一项所定义的编码RNA。
88.根据项85至87中任一项所述的组合，其中所述isRNA和所述至少一种编码RNA一起或分开配制。
89.根据项85至88中任一项所述的组合，其中同时施用所述isRNA和所述至少一种编码RNA。
90.根据项85至89中任一项所述的组合，其中所述isRNA和所述至少一种编码RNA在相同位点施用。
91.根据项85至90中任一项所述的组合，其用于治疗或预防选自由肿瘤和癌症疾病，感染性疾病，过敏和自身免疫疾病组成的组中的疾病。
92.根据项91所述的组合，其中所述组合用于治疗或预防肿瘤或癌症疾病。
93.根据项92所述的组合，其中所述组合用于治疗或预防选自由以下各项组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的。
94.根据项93所述的组合，其中所述组合肿瘤内施用。
95.根据项93或94所述的组合，其中所述治疗或预防包括施用至少一种另外的药学活性成分。
96.根据项95所述的组合，其中所述至少一种另外的药学活性成分是项14至18中定义的化合物。
97.根据项96所述的组合，其中所述至少一种另外的药学活性成分是PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂，优选针对PD-1或PD-L1的拮抗性抗体，或其片段或变体。
98.根据项96所述的组合，其中所述至少一种另外的药学活性成分是抗CTLA4抗体，或其片段或变体。
99.编码包含至少一种肽或蛋白质的蛋白质的编码RNA，所述至少一种肽或蛋白质包含IL-12，CD40L，诱饵PD-1受体，抗CTLA4抗体和/或肿瘤抗原，或任何这些蛋白质的片段或变体。
100.根据项99所述的编码RNA，其是项13至78中任一项所定义的编码RNA。
101.根据项99或100所述的编码RNA，其用于治疗或预防选自由以下组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的。
102.用于根据项101所述的用途的编码RNA，其中所述编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质。
103.用于项99至102中任一项所述的用途的编码RNA，其中所述至少一种编码RNA包含
至少一种编码序列，其编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质以及
至少一种编码序列，其编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质。
104.用于项99至103中任一项所述的用途的编码RNA，其中所述至少一种编码RNA包含
至少一种编码序列，其编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，以及
至少一种编码序列，其编码包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质。
105.用于项99至104中任一项所述的用途的编码RNA，其中所述至少一种编码RNA包含
至少一种编码序列，其编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，以及
至少一种编码序列，其编码包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质。
106.用于项99至105中任一项所述的用途的编码RNA，其中所述至少一种编码RNA包含
至少一种编码序列，其编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，以及
至少一种编码序列，其编码至少一种肿瘤抗原或其片段或变体。
107.用于项99至106中任一项所述的用途的编码RNA，其中所述至少一种编码RNA包含
至少一种编码序列，其编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，以及
至少一种编码序列，其编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质。
108.用于项99至107中任一项所述的用途的编码RNA，其中所述至少一种编码RNA包含
至少一种编码序列，其编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，以及
至少一种编码序列，其编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质。
109.用于项99至108中任一项所述的用途的编码RNA，其中所述至少一种编码RNA包含
至少一种编码序列，其编码包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质，以及
至少一种编码序列，其编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质。
110.用于项99至109中任一项所述的用途的编码RNA，其中所述至少一种编码RNA包含
至少一种编码序列，其编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，至少一种编码序列，其编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，以及
至少一种编码序列，其编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质。
111.用于根据项99至110中任一项所述的用途的编码RNA，其中所述治疗或预防包括施用第二编码RNA和/或第三编码RNA，其中
所述编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，
所述第二编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，
所述第三编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含抗CTLA4抗体或其片段或变体的肽或蛋白质。
112.用于根据项111所述的用途的编码RNA，其中所述治疗或预防还包括施用第四编码RNA，其中所述第四编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质。
113.用于根据项111或112所述的用途的编码RNA，其中所述第二RNA，所述第三RNA和/或所述第四RNA是项13至78中任一项所定义的编码RNA。
114.用于根据项101至113所述的用途的编码RNA，其中所述治疗或预防包括施用isRNA。
115.用于根据项114所述的用途的编码RNA，其中所述isRNA是如项4至12中任一项所定义的isRNA。
116.用于根据项101至115中任一项所述的用途的编码RNA，其中所述至少一种编码RNA肿瘤内施用。
117.用于根据项101至116中任一项所述的用途的编码RNA，其中所述治疗或预防包括施用至少一种另外的药学活性成分，优选通常用于治疗选自下组的肿瘤或癌症疾病的化合物，该组由以下各项组成：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准疗法难治性的。
118.用于根据项117所述的用途的编码RNA，其中所述至少一种另外的药学活性成分是项14至33中任一项所定义的化合物。
119.用于根据项117或118所述的用途的编码RNA，其中所述至少一种另外的药学活性成分是PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂，优选针对PD-1或PD-L1的拮抗性抗体，或其片段或变体。
120.用于根据项117至119中任一项所述的用途的编码RNA，其中所述至少一种另外的药学活性成分是抗CTLA4抗体，或其片段或变体。
附图简要说明
以下所示的示例和附图仅是说明性的，并且将以进一步的方式描述本发明。这些图和示例不应解释为将本发明限制于此。
图1：图(A)显示用RNAdjuvant，编码IL-12的mRNA和编码可溶性PD-1的mRNA肿瘤内处理后携带CT26肿瘤的Balb/C小鼠的中值肿瘤生长的分析。如图中所示测试这些化合物的各自组合，包括对照组。如实施例1中所述进行实验。
图(B)显示用RNAdjuvant，编码IL-12的mRNA和编码可溶性PD-1的mRNA进行肿瘤内治疗后携带CT26肿瘤的小鼠的存活比例。如图中所示测试这些化合物的各自组合，包括对照组。如实施例1中所述进行实验。呈现了Kaplan-Meier生存曲线。
图2：显示用RNAdjuvant肿瘤内处理和抗PD-1抗体腹膜内处理之后携带CT26肿瘤的Balb/C小鼠的存活比例。如图中所示测试这些化合物的各自组合，包括对照组。如实施例2中所述进行实验。呈现了Kaplan-Meier生存曲线。
图3：显示与单独用编码IL-12的mRNA的肿瘤内治疗相比较，用RNAdjuvant，编码IL-12和mRNA和mRNA编码的CD40L的肿瘤内处理后携带CT26肿瘤的Balb/C小鼠的存活比例。如图中所示测试这些化合物的各自组合，包括对照组。如实施例3中所述进行实验。呈现了Kaplan-Meier生存曲线。
图4：显示在第一次肿瘤激发后第113天用同源CT26结肠癌细胞再次激发Balb/C小鼠后中值肿瘤生长的分析。小鼠先前单独用RNAdjuvant或与抗PD1治疗组合在肿瘤内进行了治疗。如图中所示测试这些化合物的各自组合，包括对照组。如实施例4中所述进行实验。
图5：显示在第一次肿瘤激发后第113天用同源CT26结肠癌细胞再次激发Balb/C小鼠后中值肿瘤生长的分析。小鼠先前单独用RNAdjuvant或与编码CD40L的mRNA和mRNA编码的IL-12组合在肿瘤内进行了治疗。如图中所示测试这些化合物的各自组合，包括对照组。如实施例5中所述进行实验。
图6：显示用免疫刺激性RNA(RNAdjuvant)，编码可溶性PD1(solPD1)和CD40配体(CD40L)的mRNA与检查点抑制剂抗CTLA4抗体组合进行肿瘤内治疗后携带CT26肿瘤的Balb/C小鼠的中值肿瘤生长的分析。如实施例7中所述进行实验。
图7：显示用免疫刺激性RNA(RNAdjuvant)，编码可溶性PD1(solPD1)和CD40配体(CD40L)的mRNA与检查点抑制剂抗CTLA4抗体组合进行肿瘤内治疗一个病灶后，在两胁携带CT26肿瘤的Balb/C小鼠的未治疗病灶的中值肿瘤生长的分析。如实施例8中所述进行实验。
图8：图(A)显示用以下进行肿瘤内治疗后携带E.G7-OVA肿瘤的Balb/C小鼠的中值肿瘤生长的分析：免疫刺激性RNAdjuvant以及OVA(RNActive)皮内注射接种或与抗PD1检查点抑制剂(腹膜内施用)和作为非特异性对照的PpLuc RNActive或缓冲液组合。如实施例10中所述进行实验。
图(B)显示用以下进行肿瘤内治疗后携带E.G7-OVA肿瘤的小鼠的存活比例：免疫刺激性RNAdjuvant以及OVA(RNActive)皮内注射接种或与检查点抑制剂抗PD1(腹膜内施用)和作为非特异性对照的PpLuc RNActive或缓冲液组合。如实施例10中所述进行实验。呈现了Kaplan-Meier生存曲线。
图9：图(A)显示用以下进行肿瘤内治疗后携带E.G7-OVA肿瘤的Balb/C小鼠的中值肿瘤生长的分析：免疫刺激性RNAdjuvant和编码IL12的mRNA，OVA(RNActive)和PpLucRNActive皮内注射接种，或作为非特异性对照的缓冲液。如实施例11中所述进行实验。
图(B)显示用以下进行肿瘤内处理后携带E.G7-OVA肿瘤的小鼠的存活比例：免疫刺激性RNAdjuvant和编码IL12的mRNA，OVA(RNActive)和PpLuc RNActive皮内注射接种，以及作为非特异性对照的缓冲液。如实施例11中所述进行实验。呈现了Kaplan-Meier生存曲线。
图10：图(A)显示5小时后RNA转染的A375细胞的上清液中IL12的翻译的mRNA产物。如实施例13中所述进行实验。
图(B)显示24小时后RNA转染的A375细胞的上清液中IL12的翻译的mRNA产物。如实施例13中所述进行实验。
图11：图(A)显示5小时后RNA转染的A375细胞的上清液中solPD1的翻译的mRNA产物。如实施例13中所述进行实验。
图(B)显示24小时后RNA转染的A375细胞的上清液中solPD1的翻译的mRNA产物。如实施例13中所述进行实验。
图12：图(A)显示5小时后RNA转染的A375细胞的上清液中抗CTLA4抗体的翻译的mRNA产物。如实施例13中所述进行实验。
图(B)显示24小时后RNA转染的A375细胞的上清液中抗CTLA4抗体的翻译的mRNA产物。如实施例13中所述进行实验。
图13：显示通过FACS分析24小时后转染的A375细胞上CD40LG的膜结合的翻译的mRNA产物。如实施例13中所述进行实验。
实施例
以下所示的实施例仅是说明性的，并且将以进一步的方式描述本发明。这些实施例不应解释为将本发明限制于此。
DNA，mRNA构建体和免疫刺激性RNA(RNAdjuvant)的制备
1.DNA和RNA构建体的制备
表3：RNA构建体
通过来自白蛋白3’-UTR的稳定序列，一段64个腺苷(聚(A)序列)，一段30个胞嘧啶(聚(C)序列)和组蛋白茎环制备IL-12(GC)，可溶性PD-1(GC)(solPD1)，CD40L(GC)和两种抗CTLA4抗体链的构建体，大多数DNA序列通过如下修饰野生型编码DNA序列来制备：使用与野生型编码序列相比增加相应编码序列的GC含量的计算机模拟算法，引入GC优化的稳定序列。通过使用相应的人编码序列以类似方式制备表达人IL-12，可溶性PD-1受体，CD40L和抗CTLA4抗体的mRNA。
对于本实施例，制备编码非编码免疫刺激性RNA(isRNA)R2025的DNA序列，并用于随后的RNA体外转录反应。
2.RNA体外转录
使用T7聚合酶在体外转录根据上文第1部分制备的各DNA质粒。在CAP类似物(m7GpppG)存在下进行IL-12，CD40L，可溶性PD-1和抗CTLA4抗体编码构建体的RNA体外转录反应。在没有CAP类似物的情况下制备isRNA R2025。随后，使用(CureVac，Tübingen，Germany；WO2008077592)纯化RNA。
3.聚合物货物复合物的制备(“RNAdjuvant”)
根据SEQ ID NO：579或SEQ ID NO：580，使用作为聚合物载体的阳离子组分的以下阳离子肽(Cys-Arg12-Cys或CR12C)。
为了合成聚合物载体货物复合物，将具有如上文第1部分中定义的RNA序列R2025的RNA分子与如上定义的阳离子CR12C肽组分混合。如下所示，将指定量的RNA与各阳离子组分以质量比混合，从而形成复合物。如果根据本发明使用聚合阳离子组分，则阳离子组分的聚合同时发生在核酸货物的复合中。然后，用水调节所得溶液至最终体积为50ul，并在室温下孵育30分钟。进一步的细节描述于WO2012013326中。
肽：RNA的质量比为1∶3，7。聚合物载体货物复合物由作为载体的二硫化物交联的阳离子肽CR12C和作为核酸货物的免疫刺激性R2025形成。该聚合物载体货物复合物R2025/CR12C(R2391)在以下实施例中用作佐剂(称为“RNAdjuvant”)
4.制备用于施用的RNA
在林格乳酸盐(RiLa)溶液中施用IL-12mRNA(R1328)，可溶性PD-1mRNA(R3971)和CD40L mRNA(R3571)。在注射前直接混合两种组分后，也在林格乳酸盐(RiLa)中施用裸mRNA和聚合物载体货物复合物“RNAdjuvant”(R2391)的共同制剂。
实施例1：用免疫刺激性RNA(“RNAdiuvant”)和编码可溶性PD-1的mRNA和编码IL- 12的mRNA的肿瘤内治疗
在实验的第0天，对Balb/c小鼠(参见表4)在右胁腹每个小鼠(100μl PBS体积)皮下(s.c)注射1x106 CT26细胞(结肠癌细胞系)。在肿瘤激发后第9天，根据肿瘤大小对小鼠进行分选，以获得平均肿瘤体积为约50mm3的组。肿瘤内(i.t.)治疗在第9天开始，每周持续两次，持续三周。给小鼠注射RNAdjuvant(25μg R2391)，mRNA编码的IL-12(25μg R2763)和mRNA编码的可溶性PD-1(R3971)(根据表2的A组)的组合或单独的mRNA编码的IL-12(25μgR2763)(根据表2的B组)或单独的RNAdjuvant(25μg R2391)(根据表2的C组)。为了控制由于注射过程引起的抗肿瘤作用，分别向小鼠注射缓冲液(RiLa，根据表4的D组)。
通过使用卡尺测量三维肿瘤大小来监测肿瘤生长。根据以下式计算肿瘤体积：
在实验的第9，11，14，17和21天，根据下表4，用RNA肿瘤内(i.t.)注射小鼠。肿瘤内注射的体积为50μl。
表4总结了本实施例中使用的治疗。通过肿瘤内(i.t.)施用RNAdjuvant和编码IL-12和可溶性PD-1的mRNA构建体。在CT26肿瘤激发的小鼠中，分析存活率和中值肿瘤生长。
表4：组，处理和RNA稀释
肿瘤激发和本发明组合物的施用：
根据表4中所示的指示方案注射小鼠。根据上式确定中值肿瘤生长。实验结果如图1所示，其中图1A显示了本发明组合物对肿瘤生长的影响，图1B显示了本发明组合物对存活的影响。
结果：
图1A中的结果显示，与其他处理(根据表4的B-D组)相比，包含编码IL-12的mRNA和编码可溶性PD-1的mRNA与RNAdjuvant组合的本发明组合物(根据表4的A组)强烈降低肿瘤体积中值。另外，图1B中的结果显示，与其他处理(根据表4的B-D组)相比，包含编码IL-12的mRNA和编码可溶性PD-1的mRNA与RNAdjuvant组合的本发明组合物(根据表4的“A”组)强烈增加肿瘤激发小鼠的存活率。
实施例2：用免疫刺激性RNA(“RNAdjuvant”)与检查点抑制剂抗PD-1抗体组合进行 的治疗
表5总结了本实施例中使用的治疗。除了RNAdjuvant(i.t.施用)之外，在CT26肿瘤激发的小鼠中腹膜内(i.p.)施用检查点抑制剂抗PD-1(BioXCell)，分析存活率。
表5：组，处理和RNA稀释/抗体稀释
肿瘤激发和本发明组合物的施用：
根据先前的实验进行肿瘤激发(参见实施例1)。根据表5中所示的指示方案注射小鼠。实验结果如图2所示。
结果：
图2显示用(R2391)的肿瘤内(i.t.)治疗与腹膜内施用抗PD-1抗体(根据表5的“C”组)相结合导致：与仅接受检查点抑制剂抗PD-1抗体的相关对照组(根据表5的“D”组)相比存活率增加，与用RNAdjuvant和对照抗体(抗仓鼠IgG，BioXCell)(根据表5的“B”组)处理相比存活率增加。
实施例3：用免疫刺激性RNA(“RNAdiuvant”)和编码CD40配体(CD40L)的mRNA和编 码IL-12的mRNA的肿瘤内治疗
表6总结了本实施例中使用的治疗。通过肿瘤内(i.t.)施用RNAdjuvant和编码IL-12和鼠CD40L的mRNA构建体。在CT26肿瘤激发的小鼠中，分析存活率。
表6：组，处理和RNA稀释
肿瘤激发和本发明组合物的施用：
根据先前的实验进行肿瘤激发(参见实施例1)。根据表6中所示的指示方案注射小鼠。实验结果如图3所示。
结果：
图3中的结果显示，与其他处理(根据表6的B-C组)相比，包含编码IL-12的mRNA和编码CD40L的mRNA与RNAdjuvant组合的本发明组合物(根据表6的A组)强烈增加肿瘤激发小鼠的中值存活率。
实施例4：通过用免疫刺激性RNA(“RNAdjuvant”)的肿瘤内治疗与全身性抗PD-1治 疗相结合诱导全身抗肿瘤记忆响应
表7总结了本实施例中使用的治疗。通过对第一次治疗后完全根除原发性CT-26肿瘤的小鼠进行再次激发，评估RNAdjuvant(i.t.施用)和用检查点抑制剂抗PD-1(BioXCell)的全身治疗，分析存活率。
表7：组，处理和RNA稀释
施用本发明组合物后肿瘤再次激发：
第一次肿瘤激发是通过在Balb/C小鼠右胁腹皮下注射CT-26肿瘤细胞进行，而在第一次肿瘤激发后第113天在左胁腹进行用1x106同源CT26结肠癌细胞的再激发。初始动物的激发作为对照。与全身性抗PD-1与肿瘤内RNAdjuvant(9只小鼠中的7只)的组合相比，在单独使用肿瘤内RNAdjuvant的较低百分比的动物(10只小鼠中的3只)中注意到原发性肿瘤的肿瘤根除。实验结果如图4所示。
结果：
图4中的结果显示已经根除第一肿瘤的所有小鼠完全受到保护免于第二次肿瘤激发，证明了系统记忆响应的诱导。仅通过肿瘤内RNAdjuvant治疗也诱导了全身记忆响应。全身记忆响应的诱导是显著的，因为没有施用诱导适应性免疫响应的疫苗。因此，本发明的isRNA的施用，特别是与全身性抗PD-1治疗的组合，足以诱导原本不可预期的全身免疫响应。
实施例5：通过用编码CD40配体(CD40L)的mRNA的肿瘤内治疗与编码IL-12的mRNA 的组合诱导全身抗肿瘤记忆响应
表8总结了本实施例中使用的治疗。通过对处理后完全根除原发性CT-26肿瘤的小鼠进行再激发来评估RNAdjuvant和编码IL-12和鼠CD40L的mRNA构建体(i.t.施用)，分析存活率。
表8：组，处理和RNA稀释
施用本发明组合物后肿瘤再次激发：
第一次肿瘤激发是通过在Balb/C小鼠右胁腹皮下注射CT-26肿瘤细胞进行。在单独使用RNAdjuvant进行肿瘤内治疗或与编码CD40配体(CD40L)的mRNA和编码IL-12的mRNA组合治疗后，在第一次肿瘤激发后第113天在左胁腹进行1x106同源CT26结肠癌细胞的再激发。初始动物的激发作为对照。与编码CD40配体(CD40L)的mRNA和编码IL-12的mRNA与肿瘤内RNAdjuvant的组合(10只小鼠中的5只)相比，在单独使用瘤内RNAdjuvant的较低百分比的动物(10只小鼠中的3只)中注意到原发性肿瘤的肿瘤根除。实验结果如图5所示。
结果：
图5中的结果显示已经根除第一肿瘤的所有小鼠完全受到保护免于第二次肿瘤激发，证明了系统记忆响应的诱导。仅通过肿瘤内RNAdjuvant治疗也诱导了全身记忆响应。
实施例6：在患有晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞 癌(hnSCC)或腺样囊状癌(ACC)的患者中肿瘤内应用RNAdiuvant(CV8102)的I/II期研究)。
第1部分：
对患有晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(hnSCC)或腺样囊状癌(ACC)的患者进行肿瘤内施用RNAdjuvant(在有或没有全身抗PD-1治疗情况下)的I期，开放标签，基于群组的剂量递增和扩增研究。
肿瘤内注射RNAdjuvant：将CV8102施用于皮肤，皮下或易于接近的淋巴结病变，其可以通过临床确定的直接可视化或成像引导(超声)进行注射。
时间表：患者最多接受8次CV8102肿瘤内施用，除非疾病进展需要开始下一次治疗或出现不可接受的毒性：
前5次施用以每周间隔(第1，8，15，22，29天)进行。对于在C组和D组中进行抗PD-1治疗的患者，在抗PD-1治疗的当天开始CV8102治疗，并且在第29天后将遵循抗PD-1治疗方案。
随后的3次施用CV8102以2周的间隔进行(群组A和B)。对于在研究群组C和D中进行抗PD-1治疗的患者，第29天后CV8102的施用遵循抗PD-1治疗方案并且在抗PD-1施用药当天进行；即纳武单抗患者每2周接受一次CV8102；派姆单抗患者每3周接受一次CV8102。
A部分：单药RNAdjuvant的剂量递增
该研究的A部分使用用于剂量递增的2参数贝叶斯逻辑回归模型(具有过量剂量对照)。晚期cMEL，cSCC，hnSCC或ACC的至少1个(起始剂量水平)或2个患者(任何其他剂量水平)的群组以递增剂量的肿瘤内施用RNAdjuvant治疗，直至确定最大耐受剂量(MTD)和测定推荐剂量(RD)。至少应有7名患者参加A部分。
A部分的起始剂量为25μg RNAdjuvant。进一步的剂量水平列于下表9中。
表9：RNAdjuvant的剂量水平
纳入标准：
群组A：
具有组织学证实的晚期(不可切除或转移)cMEL或cSCC的未通过标准治疗或对其未指示标准治疗的患者
不适合手术切除或具有治愈意图的局部区域放射治疗
至少一系列治疗中/之后进展
或
组织学证实的复发或转移性hnSCC
不适合手术切除或具有治愈意图的局部区域放射治疗
放射学记录的进展(在至少一系列治疗中/之后记录新的或进行性病变)。
或
组织学或细胞学证实的ACC
不适合手术切除或具有治愈意图的局部区域放射治疗
放射学记录的进展；在至少一系列治疗中/之后
B部分：扩展群组
在完成A部分后，患有晚期cSCC或ACC的患者参加以先前定义的推荐剂量分离扩展群组，以进一步表征肿瘤内施用的RNAdjuvant在这些患者群体中的耐受性和安全性，并收集抗肿瘤活性的初步证据。B部分每个扩展群组最多可招募10名患者。纳入标准：
群组B：
扩展群组B1和B2
组织学证实晚期(不可切除/转移)cSCC(B1)或ACC(B2)的未通过标准治疗或未指定标准治疗的患者
不适合治愈性局部区域治疗
至少一系列治疗中/之后进展(ACC所需的放射学记录)
C部分：晚期cMEL或HNSCC患者中RNAdjuvant联合抗PD-1治疗的剂量递增
C部分包括目前接受抗PD-1治疗的晚期cMEL或HNSCC患者。在施用RNAjuvant之前，在抗PD-1治疗至少12周后，患者必须具有稳定的疾病或缓慢进展的疾病。以递增剂量的RNAdjuvant中依次治疗至少2名患者的组群。剂量递增和MTD和RCD的确定(“推荐的组合剂量”)由具有过量对照的5参数贝叶斯逻辑回归模型指导。
在A部分中已经评估至少3个RNAdjuvant剂量时，C部分中的剂量递增开始。C部分的起始剂量是比C部分开始时A部分认为可耐受的最高剂量水平低的一个剂量水平(见表9)。
纳入标准：
群组C和D：
在组群C和D1中组织学证实的晚期(不可切除或转移)cMEL
目前根据产品特征总结(Summary of Product Characteristics，SPC)接受标准抗PD-1治疗，根据研究者评估在抗PD-1治疗至少12周后稳定或缓慢进展的疾病
根据研究者的判断，由于持续的抗PD-1治疗推定的临床益处，有意继续目前的抗PD-1治疗
在组群C和D2中组织学证实的复发或转移性hnSCC
目前根据SPC接受标准的抗PD-1疗法
抗PD-1治疗至少12周后疾病稳定或缓慢进展，定义如下：
根据irRECIST，疾病稳定
根据研究者的判断，由于推定的临床益处，有意继续目前的抗PD-1治疗
D部分：晚期cMEL或HNSCC患者中RNAdjuvant联合抗PD-1治疗的扩展群组。
一旦在C部分确定了RCD(“推荐的组合剂量”)，D扩增部分就招募使用PD-1拮抗剂治疗的其他患有晚期cMEL或HNSCC的患者(参见资格要求C部分)以进一步表征耐受性和安全性，并评估组合治疗的抗肿瘤活性。D部分应招募约21名患者。
第2部分(可备选地作为单独的临床试验进行)
晚期恶性黑素瘤，皮肤鳞状细胞癌(SCCs)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，或头颈鳞状细胞癌(HNSCC)患者中肿瘤内施用RNAdjuvant和RNArt(有或没有全身抗PD-1治疗的情况下年)的I期，开放标签，基于群组的剂量递增和扩展研究。
在I期临床试验的第2部分中，重复第1部分，但研究了RNArt和RNAdjuvant的固定剂量组合。包括临床适应症在内的剂量递增方法和群组定义与第1部分类似。有关详细信息，请参阅上一节。
但是，对于第2部分，考虑从第1部分获得的信息，其可能导致第1部分和/或第2部分的研究设计发生变化。RNArt包含3种基于优化的RNA(其编码IL-12，PD-1诱饵受体和CD-40L)的化合物。
实施例7：用免疫刺激性RNA(“RNAdiuvant”)和编码CD40配体的mRNA(CD40L)和编 码可溶性PD1的mRNA(solPD1)与检查点抑制剂抗CTLA-4抗体组合的肿瘤内治疗
表10总结了本实施例中使用的治疗。将RNAdjuvant和编码可溶性PD1和CD40L的mRNA与检查点抑制剂抗CTLA4抗体(BioXcell，克隆9H10)组合肿瘤内(i.t.)施用于CT26肿瘤激发的小鼠中，分析中值肿瘤生长。
表10：组，处理和RNA稀释/抗体稀释
肿瘤激发和本发明组合物的施用：
根据先前的实验进行肿瘤激发(参见实施例1)。根据表10中所示的指示方案注射小鼠。实验结果如图6所示。
结果：
图6中的结果显示，包含RNAdjuvant的本发明组合物和编码可溶性PD1和CD40L的mRNA与检查点抑制剂抗CTLA4抗体(根据表10的A组)组合，强烈减小肿瘤中值体积。
实施例8：用免疫刺激性RNA(RNAdjuvant)和编码CD40配体的mRNA(CD40L)和编码 可溶性PD1的mRNA(solPD1)与检查点抑制剂抗CTLA-4抗体组合的瘤内治疗的远位作用
肿瘤激发和本发明组合物的施用：在实验的第0天，对Balb/c小鼠在右胁腹每个小鼠(100μl PBS体积)皮下(s.c)注射1x106个CT26细胞(结肠癌细胞系)。在实验的第5天，在左胁腹皮下(s.c)注射1x106个CT26细胞(100μl PBS体积)，观察本发明组合物的远位作用(对未治疗肿瘤的作用)。实施例7的表10总结了本实施例中使用的治疗。将RNAdjuvant和编码可溶性PD1和CD40L的mRNA与抗CTLA4检查点抑制剂组合肿瘤内(i.t.)施用给携带CT26肿瘤的小鼠(右胁腹)，分析未治疗的肿瘤(左胁腹)的中值肿瘤生长。
根据实施例7的表10中所示的指示方案注射小鼠。分析未治疗的肿瘤(左胁腹)的中值肿瘤生长。实验结果如图7所示。
结果：
用抗CTLA4抗体与RNAdjuvant，编码可溶性PD1的mRNA和编码CD40配体的mRNA组合对病灶进行瘤内治疗，诱导全身作用并抑制未治疗的肿瘤的肿瘤生长。
实施例9：用免疫刺激性RNA(RNAdjuvant)和编码CD40配体(CD40L)的mRNA，编码 IL12的mRNA，编码可溶性PD1的mRNA(solPD1)和抗CTLA4抗体的肿瘤内治疗与抗PD1抗体(腹 膜内施用)组合
肿瘤激发和本发明组合物的施用：
根据先前的实验进行肿瘤激发(参见实施例1)。根据表11中所示的指示方案注射小鼠。
表11总结了本实施例中使用的治疗。RNAdjuvant和编码CD40L的mRNA，编码可溶性PD1的mRNA，编码IL12的mRNA，编码CD40L的mRNA和编码检查点抑制剂抗CTLA4抗体的mRNA与检查点抑制剂抗PD1抗体组合在CT26肿瘤激发小鼠中肿瘤内(i.t.)施用，分析中位数肿瘤生长和存活率。
表11：组，处理和RNA稀释/抗体稀释
实施例10：用免疫刺激性RNA(RNAdjuvant)的肿瘤内治疗和皮内施用(i.d.)的编 码抗原的mRNA(RNActive)与抗PD1抗体(i.p.施用)组合
在右胁腹使用3x105E.G7-OVA肿瘤细胞皮下接种C57BL/6小鼠。治疗开始时的平均肿瘤大小为30mm3。用免疫刺激性RNAdjuvant肿瘤内治疗小鼠并且皮内注射接种OVARNActive(编码卵清蛋白的mRNA)，与抗PD1抗体组合(腹膜内施用)。编码Photinus pyralis荧光素酶(PpLuc)的mRNA或缓冲液用作非特异性对照。在实验的第7，11，14，17和20天，根据下表12处理小鼠。分析中值肿瘤生长和存活率。
表12：组，处理和RNA稀释/抗体稀释
肿瘤激发和本发明组合物的施用：
根据表12中所示的指示方案注射小鼠。实验结果如图8所示。
结果：
图8中的结果显示，与其他治疗(根据表12的B-E组)相比，i.t.施用免疫刺激性RNA(RNAdjuvant)与编码肿瘤抗原卵清蛋白(OVA)的mRNA组合并与抗PD1抗体组合强烈地降低肿瘤生长。值得注意的是，图8中的结果显示免疫刺激性RNAdjuvant与检查点抑制剂PD1抗体和mRNA疫苗接种(OVA，i.d.施用)组合诱导完全肿瘤缓解并且与其他治疗(根据表13的B-E组)相比显著增加肿瘤激发小鼠的存活。
实施例11：用免疫刺激性RNA(RNAdiuvant)的肿瘤内治疗和i.t.施用的编码IL12 的mRNA与i.d.施用的编码抗原的mRNA(RNActive)组合
在右胁腹使用3x105E.G7-OVA肿瘤细胞皮下接种C57BL/6小鼠。治疗开始时的平均肿瘤大小为30mm3。用免疫刺激性RNAdjuvant治疗小鼠并且i.d.接种编码肿瘤抗原卵清蛋白的mRNA(OVA RNActive)，与编码IL12的mRNA组合(i.t.施用)。编码Photinus pyralis荧光素酶(PpLuc RNActive)的mRNA或缓冲液用作非特异性对照。在实验的第7，11，14，17和20天，根据下表13处理小鼠。分析中值肿瘤生长和存活率。
表13：组，处理和RNA稀释
肿瘤激发和本发明组合物的施用：
根据表13中所示的指示方案注射小鼠。实验结果如图9所示。
结果：
图9中的结果显示，与其他治疗(根据表13的B-E组)相比，用免疫刺激性RNA(RNAdjuvant)和编码IL12的mRNA的肿瘤内治疗与OVA RNActive的皮内接种组合强烈降低中值肿瘤体积。此外，图9中的结果显示，与其他治疗(根据表13的B-E组)相比，包含免疫刺激性RNA(RNAdjuvant)和编码IL12的mRNA的本发明组合物与mRNA接种(OVA RNActive)组合强烈增加肿瘤激发小鼠的存活率。
实施例12：在患有晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞 癌(hnSCC)，腺样囊状癌(ACC)，外阴鳞状细胞癌(VSCC)，或皮肤T细胞淋巴瘤，真菌病真菌样 亚型(CTCL-MF)的患者中肿瘤内应用RNAdjuvant(CV8102)的I/II期研究。
第1部分：
对患有晚期皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(hnSCC)，腺样囊状癌(ACC)，外阴鳞状细胞癌(VSCC)或皮肤T细胞淋巴瘤，真菌病真菌样亚型(CTCL-MF)的患者进行肿瘤内施用RNAdjuvant(在有或没有全身抗PD-1治疗情况下)的I期，开放标签，基于群组的剂量递增和扩增研究。
肿瘤内注射RNAdjuvant：将CV8102施用于皮肤，皮下或易于接近的淋巴结病变，其可以通过临床确定的直接可视化或成像引导(超声)进行注射。
时间表：患者最多接受8次CV8102肿瘤内施用，除非疾病进展需要开始下一次治疗或出现不可接受的毒性：
前5次施用以每周间隔(第1，8，15，22，29天)进行。对于在C组和D组中进行抗PD-1治疗的患者，在抗PD-1治疗的当天开始CV8102治疗，并且在第29天后将遵循抗PD-1治疗方案。
随后的3次施用CV8102以2周的间隔进行(群组A和B)。对于在研究群组C和D中进行抗PD-1治疗的患者，第29天后CV8102的施用遵循抗PD-1治疗方案并且在抗PD-1施用药当天进行；即纳武单抗患者每2周接受一次CV8102；派姆单抗患者每3周接受一次CV8102。
A部分：单药RNAdjuvant的剂量递增
该研究的A部分使用用于剂量递增的2参数贝叶斯逻辑回归模型(具有过量剂量对照)。晚期cMEL，cSCC，hnSCC或ACC的至少1个(起始剂量水平)或2个患者(任何其他剂量水平)的群组以递增剂量的肿瘤内施用RNAdjuvant治疗，直至确定最大耐受剂量(MTD)和测定推荐剂量(RD)。至少应有7名患者参加A部分。
A部分的起始剂量为25μg RNAdjuvant。进一步的剂量水平列于下表14中。
表14：RNAdjuvant的剂量水平
纳入标准：
群组A：
具有组织学证实的晚期(不可切除或转移)cMEL或cSCC的未通过标准治疗或未指示标准治疗的患者
不适合手术切除或具有治愈意图的局部区域放射治疗
至少一系列治疗中/之后进展
或
组织学证实的复发或转移性hnSCC
不适合手术切除或具有治愈意图的局部区域放射治疗
放射学记录的进展(在至少一系列治疗中/之后记录新的或进行性病变)。
或
组织学或细胞学证实的ACC
不适合手术切除或具有治愈意图的局部区域放射治疗
放射学记录的进展；在至少一系列治疗中/之后
或
组织学证实复发或转移性VSCC
不适合具有治愈意图的手术，放疗或放化疗，
不是标准系统疗法的候选者
或
复发或难治性CTCL，蕈样真菌病(MF)亚型
基于标准分期分类系统的诊断
没有CD30+大细胞转化的MF，没有内脏受累的证据
在至少一次预先治疗后复发，难治或进展
B部分：扩展群组
在完成A部分后，患有晚期cSCC，ACC，VSCC或CTCL-MF的患者参加以先前定义的推荐剂量分离扩展群组，以进一步表征肿瘤内施用的RNAdjuvant在这些患者群体中的耐受性和安全性，并收集抗肿瘤活性的初步证据。B部分每个扩展群组最多可招募10名患者。纳入标准：
群组B：
扩展群组B1，B2
组织学证实晚期(不可切除/转移)cSCC(B1)或ACC(B2)的未通过标准治疗或未指定标准治疗的患者
不适合治愈性局部区域治疗
至少一系列治疗中/之后进展(ACC所需的放射学记录)
扩展群组B3
组织学证实复发或转移性VSCC
不适合具有治愈意图的手术，放疗或放化疗，
不是标准系统疗法的候选者
扩展群组B4
复发或难治性CTCL，蕈样真菌病(MF)亚型
基于标准分期分类系统的诊断
没有CD30+大细胞转化的MF，没有内脏受累的证据
在至少一次预先治疗后复发，难治或进展
C部分：晚期cMEL或HNSCC患者中RNAdiuvant联合抗PD-1治疗的剂量递增
C部分包括目前接受抗PD-1治疗的晚期cMEL或HNSCC患者。在施用RNAjuvant之前，在抗PD-1治疗至少12周后，患者必须具有稳定的疾病或缓慢进展的疾病。以递增剂量的RNAdjuvant中依次治疗至少2名患者的组群。剂量递增和MTD和RCD的确定(“推荐的组合剂量”)由具有过量对照的5参数贝叶斯逻辑回归模型指导。
在A部分中已经评估至少3个RNAdjuvant剂量时，C部分中的剂量递增开始。C部分中的起始剂量是25μg(参见表14)。
纳入标准：
群组C和D：
在组群C和D1中组织学证实的晚期(不可切除或转移)cMEL
目前根据产品特性总结(SPC)接受标准的抗PD-1疗法
根据研究者评估，抗PD-1治疗至少12周后疾病稳定或进展缓慢
根据研究者的判断，由于持续的抗PD-1治疗推定的临床益处，有意继续目前的抗PD-1治疗
在组群C和D2中组织学证实的复发或转移性hnSCC
目前根据SPC接受标准的抗PD-1疗法
抗PD-1治疗至少12周后疾病稳定或缓慢进展，定义如下：
根据irRECIST，疾病稳定
在第1天之前至少12周的间隔期间，稳定的疾病需要小于或等于5％的疾病减少(定义为疾病可测量维度的≤5％消退)
根据研究者的判断，由于推定的临床益处，有意继续目前的抗PD-1治疗
D部分：晚期cMEL或HNSCC患者中RNAdjuvant联合抗PD-1治疗的扩增群组。
一旦在C部分确定了RCD(“推荐的组合剂量”)，D扩增部分就招募使用PD-1拮抗剂治疗的其他患有晚期cMEL或HNSCC的患者(参见资格要求C部分)以进一步表征耐受性和安全性，并评估组合治疗的抗肿瘤活性。D部分应招募约21名患者。
第2部分(将作为单独的临床试验进行)
在患者的经皮可接近的实体瘤或淋巴瘤中肿瘤内施用RNAdjuvant和RNArt(有或没有全身抗PD-1治疗的情况下)的I期，开放标签，基于群组的剂量递增和扩展研究。
基本上，RNArt+RNadjuvnat的I期临床试验的设计对应于RNAdjuvant的I期研究的设计(第1部分)。首先使用剂量递增程序(组群A)研究耐受剂量组合的范围。Rnart(包含编码IL-12，CD40L，可溶性PD-1和两条抗CTLA-4链的5种RNA化合物)将逐步增加，而RNADjuvnat将保持25μg的固定剂量。RNArt和RNadjuvnat将同时给予相同的肿瘤病灶。剂量递增方法类似于第1部分，群组A(贝叶斯剂量递增方法)。施用方案对应于上述RNADjuvant的方案(即每周5次，然后是3次另外注射，Q2W)。
剂量递增部分(组群A)包括第1部分中列出的适应症，以及以下其他适应症：
具有以下情况的患者
人乳头瘤病毒相关的晚期肿瘤，包括晚期，复发或转移性外阴鳞状细胞癌，宫颈癌或阴道癌
不适合具有治愈意图的手术，放疗或放化疗，
不是标准系统疗法的候选者
或
滤泡性低级非霍奇金淋巴瘤
初治或在至少一次预先治疗后复发或难治
不需要积极治疗(无症状，观察等待的患者)
或
淋巴结边缘区B细胞淋巴瘤
初治或在至少一次预先治疗后复发或难治
不需要积极治疗(无症状，观察等待的患者)
或
原发性皮肤间变性大细胞淋巴瘤
在至少一次预先治疗后复发，难治或进展，或者没有其他治疗选择可用
或
组织学证实的晚期，复发或转移性成人软组织肉瘤
不适合手术或治愈意图的其他治疗选择
至少一系列先前的全身治疗或其中没有已知的标准全身治疗的肉瘤组织学亚型
或
组织学证实的皮肤晚期(不可切除或转移)基底细胞癌
对于具有治愈意图的任何其他治疗选择的手术不顺从
不是全身治疗的候选人
群组B：扩展群组
有关适应症，请参阅第1部分，扩展群组B。
群组C：晚期cMEL，HNSCC或cSCC患者中RNart+RNAdiuvant联合抗PD-1治疗的剂量 递增
与使用RNAdjuvant的I期研究一样，C部分招募晚期cMEL或HNSCC患者。根据在组群C开始时是否批准抗PD-1抗体用于治疗晚期cSCC，cSCC患者也将招募进入该群组。在施用RNArt+RNAjuvant之前，在抗PD-1治疗至少12周后，患者必须具有稳定的疾病或缓慢进展的疾病。RNart(包含编码IL-12，CD40L和两条抗CTLA-4链的4种RNA化合物)将逐步增加，而RNADjuvnat将保持25μg的固定剂量。有关剂量递增方法，请参阅第1部分，群组C。
纳入标准：
群组C和D：
包括第1部分，群组C和群组D中列出的适应症。根据抗PD-1抗体的批准状态，以下患者将被招募进入这些群组：
组织学证实的晚期(不可切除或转移)cSCC
目前根据产品特性总结(SPC)接受标准的抗PD-1疗法
根据研究者评估，抗PD-1治疗至少12周后疾病稳定或进展缓慢
根据研究者的判断，由于持续的抗PD-1治疗推定的临床益处，有意继续目前的抗PD-1治疗
实验13：在A375人黑素瘤细胞中表达单个RNArt构建体
将A375细胞以50000个细胞/孔的密度接种在24孔板中。24小时后，用指定量的RNA和lipofectamine 2000(Invitrogen)以恒定的RNA：lipofectamine比例1∶2转染细胞。5小时后，收集上清液并加入1ml新鲜培养基。再培养24小时后，再次收集上清液。在上清液中测量翻译的mRNA产物IL12，solPD1和抗CTLA4抗体。
使用人IL-12p70DuoSet试剂盒，R&D Systems，Cat：DY1270，根据制造商的方案，使用1∶10，1∶100和1∶1000稀释的上清液测量上清液中的人IL12含量(参见图10)。
使用人PD1 DuoSet试剂盒，R&D Systems，Catt：DY1086，根据制造商的方案，使用1∶10，1∶100和1∶1000稀释的上清液，一式两份进行人PD1 ELISA(参见图11)。
使用利妥昔单抗抗体标准品(山羊抗人IgG(SouthernBiotech Cat.No：2044-01，c＝1mg/ml，1∶1000)和山羊抗人IgG生物素(Dianova Cat.No：109065088-01，1∶20000)使用1∶10，1∶100和1∶1000稀释的上清液一式两份进行人抗CTLA4 IgG1 ELISA(参见图12)。
为了检测膜结合的CD40LG蛋白，将A375细胞以130,000个细胞/孔的密度接种在6孔板中。24小时后，用指定量的RNA和lipofectamine 2000(Invitrogen)以恒定的RNA：lipofectamine比例1∶2转染细胞。培养24小时后，收集细胞并用CD154抗人APC(BDPharmingen)进行细胞表面染色。最后，通过流式细胞术分析CD40LG的细胞表面表达(参见图13)。
表15：RNA构建体

Claims (73)

1.免疫刺激性RNA(isRNA)，其用于治疗或预防选自由以下组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准治疗难治性的。
2.用于根据权利要求1所述的用途的isRNA，其中所述isRNA是肿瘤内施用。
3.用于根据权利要求2所述的用途的isRNA，其中所述isRNA通过注射施用。
4.用于根据前述权利要求中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA是非编码RNA。
5.用于根据前述权利要求中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA包含
根据下式的核酸序列
式(I)(GlXmGn)，
其中：
G是鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，或是鸟苷(鸟嘌呤)或尿苷(尿嘧啶)的类似物；
X是鸟苷(鸟嘌呤)，(尿苷)尿嘧啶，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)或上述核苷酸(核苷)的类似物；
l是1到40的整数，
其中，
当l＝1时，G是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物，
当l＞1时，至少50％的核苷酸(核苷)是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
m是整数，并且至少为3；
其中，
当m＝3时，X是尿苷(尿嘧啶)或其类似物，
当m＞3时，出现至少3个连续的尿苷(尿嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)类似物；
n是1到40的整数，
其中，
当n＝1时，G是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物，
当n＞1时，至少50％的核苷酸(核苷)是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
根据下式的核酸序列
式(III)(NuGlXmGnNv)a
其中：
G是鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)或鸟苷(鸟嘌呤)或尿苷(尿嘧啶)的类似物，优选鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
X是鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)，或这些核苷酸(核苷)的类似物，优选尿苷(尿嘧啶)或其类似物；
N是长度为约4至50，优选约4至40，更优选约4至30或4至20个核酸的核酸序列，每个N独立地选自鸟苷(鸟嘌呤)，尿苷(尿嘧啶)，腺苷(腺嘌呤)，胸苷(胸腺嘧啶)，胞苷(胞嘧啶)或这些核苷酸(核苷)的类似物；
a为1至20，优选1至15，最优选1至10的整数；
l是1到40的整数，
其中当l＝1时，G是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物，
当l＞1时，这些核苷酸(核苷)中至少50％是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
m是整数，并且至少为3；
其中当m＝3时，X是尿苷(尿嘧啶)或其类似物，和
当m＞3时，出现至少3个连续的尿苷(尿嘧啶)或尿苷(尿嘧啶)类似物；
n是1到40的整数，
其中当n＝1时，G是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物，
当n＞1时，这些核苷酸(核苷)中至少50％是鸟苷(鸟嘌呤)或其类似物；
u，v可以彼此独立地为0到50的整数，
优选地，其中当u＝0时，v≥1，或当v＝0时，u≥1；
其中式(III)的核酸分子具有至少50个核苷酸，优选至少100个核苷酸，更优选至少150个核苷酸，甚至更优选至少200个核苷酸，最优选至少250个核苷酸的长度；和/或
6.用于根据前述权利要求中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA包含至少一种根据SEQ ID NO：433至437，1014至1016中任一个的核酸序列，或这些核酸序列中的任何一个的片段或变体。
7.用于根据前述权利要求中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA与阳离子或聚阳离子化合物复合，优选与阳离子或聚阳离子聚合物，阳离子或聚阳离子肽或蛋白质，阳离子或聚阳离子多糖和/或阳离子或聚阳离子脂质复合。
8.用于根据权利要求7所述的用途的isRNA，其中所述阳离子或聚阳离子化合物是聚合物载体。
9.用于根据权利要求8所述的用途的isRNA，其中所述聚合物载体由二硫化物交联的阳离子组分优选二硫化物交联的阳离子肽形成，其中所述二硫化物交联的阳离子肽优选包含
根据式V的肽
(Arg)l；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x， (式(V)，
其中l+m+n+o+x＝8-15，并且l，m，n或o彼此独立地可以是选自0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15的任何数字，条件是Arg，Lys，His和Orn的总含量占寡肽的所有氨基酸的至少50％；并且Xaa可以是选自天然(＝天然存在的)或非天然氨基酸的任何氨基酸，Arg，Lys，His或Orn除外；并且x可以是选自0，1，2，3或4的任何数字，条件是Xaa的总含量不超过寡肽的所有氨基酸的50％；
根据式Va的肽
{(Arg)l；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa′)x(Cys)y} 式(Va)，
其中(Arg)l；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；和x如式V所定义，Xaa′是选自天然(＝天然存在的)或非天然氨基酸的任何氨基酸，Arg，Lys，His，Orn或Cys除外，y是选自0，1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19，20，21-30，31-40，41-50，51-60，61-70，71-80和81-90的任何数字，条件是Arg(精氨酸)，Lys(赖氨酸)，His(组氨酸)和Orn(鸟氨酸)的总含量占寡肽的所有氨基酸的至少10％；
根据式Vb的肽
Cys1{(Arg)l；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x}Cys2 式(Vb)
其中经验式{(Arg)l；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x}如式(V)所定义并且形成根据(半经验)式(V)的氨基酸序列的核心，并且其中Cys1和Cys2是(Arg)l；(Lys)m；(His)n；(Orn)o；(Xaa)x的近侧或末端的半胱氨酸；和/或
10.用于根据权利要求8或9所述的用途的isRNA，其中所述聚合物载体包含二硫化物交联的阳离子肽Cys-Arg12或Cys-Arg12-Cys中的至少一种。
11.用于根据权利要求7至10中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA与所述阳离子或聚阳离子化合物优选阳离子或聚阳离子肽或蛋白质的N/P比为约0.1至10，包括约0.3至4，约0.5至2，约0.7至2，以及约0.7至1.5。
12.用于根据前述权利要求中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA与一种或多种脂质复合，从而形成脂质体，脂质纳米颗粒和/或脂质复合物。
13.用于根据前述权利要求中任一项所述的用途的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种另外的药学活性成分。
14.用于根据权利要求13所述的用途的isRNA，其中所述至少一种另外的药学活性成分是用于治疗肿瘤或癌症疾病的化合物，所述肿瘤或癌症疾病优选选自由以下组成的组：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或者癌症疾病优选处于晚期和/或是标准治疗难治性的。
15.用于根据权利要求13或14所述的用途的isRNA，其中所述至少一种另外的药学活性成分是检查点调节剂，或其片段或变体。
16.用于根据权利要求15所述的用途的isRNA，其中所述检查点调节剂选自由以下组成的组：PD-1抑制剂，PD-L1抑制剂，CTLA-4抑制剂，LAG3抑制剂，TIM3抑制剂，TIGIT抑制剂，OX40刺激剂，4-1BB刺激剂，CD40L刺激剂，CD28刺激剂和GITR刺激剂，或这些检查点调节剂中的任何一种的片段或变体。
17.用于根据权利要求16所述的用途的isRNA，其中所述检查点调节剂是PD-1抑制剂或PD-L1抑制剂，其中所述PD-1抑制剂优选是针对PD-1的拮抗性抗体，并且所述PD-L1抑制剂优选是针对PD-L1的拮抗性抗体，或所述抗体的片段或变体。
18.用于根据权利要求16所述的用途的isRNA，其中所述检查点调节剂是CTLA-4抑制剂，优选针对CTLA4的拮抗性抗体，或其片段或变体。
19.用于根据权利要求13或14所述的用途的isRNA，其中所述至少一种另外的药学活性成分是白细胞介素，优选IL-12，或其片段或变体。
20.用于根据权利要求1-19中任一项所述的用途的isRNA，其中所述治疗包括施用至少一种编码RNA，优选至少一种mRNA。
21.用于根据权利要求20所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码至少一种肽或蛋白质，所述至少一种肽或蛋白质包含选自以下组成的组的至少一种肽或蛋白质：
-IL-12，
-CD40L，
-诱饵PD-1受体，和
-针对CTLA4的拮抗性抗体，
或任何这些的片段或变体。
22.用于根据权利要求20或21所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质。
23.用于根据权利要求20或21所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含CD40L或CD40L类似物或其片段或变体的肽或蛋白质。
24.用于根据权利要求209或21所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含诱饵PD-1受体或PD-1诱饵受体类似物或其片段或变体的肽或蛋白质。
25.用于根据权利要求20或21所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含针对CTLA4的拮抗性抗体或其类似物或片段或变体的肽或蛋白质。
26.用于根据权利要求20或21所述的用途的isRNA，其中
所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质，
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质。
相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含针对CTLA4的拮抗性抗体或其片段或变体的肽或蛋白质，以及
任选地，相同或不同的编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质。
27.用于根据权利要求20至26中任一项所述的用途的isRNA，其中受试者不接受或未接受利用PD-1或PD-L1拮抗剂的治疗，并且其中所述用途包括施用至少一种包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质，或施用包含编码至少一种包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质的核酸序列的核酸。
28.用于根据权利要求26或27所述的用途的isRNA，其中编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，编码包含针对CTLA4的拮抗性抗体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，以及任选地，编码包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列位于单独的编码RNA，优选单独的mRNA。
29.用于根据权利要求26或27所述的用途的isRNA，其中编码包含IL-12或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，编码包含针对CTLA4的拮抗性抗体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列，以及任选地，编码包含诱饵PD-1受体或其片段或变体的肽或蛋白质的编码序列中的至少两种位于相同的编码RNA上，所述相同的编码RNA优选是双或多顺反子RNA。
30.用于根据权利要求20-29中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA肿瘤内施用。
31.用于根据权利要求28所述的用途的isRNA，其中所述单独的编码RNA一起配制并肿瘤内施用。
32.用于根据权利要求20-31中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA与所述至少一种编码RNA一起配制。
33.用于根据权利要求32所述的用途的isRNA，其中共制剂肿瘤内施用。
34.用于根据权利要求20-33中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含IL-12，优选IL-12A或IL-12B中的至少一种，或任何这些蛋白质的片段或变体的肽或蛋白质。
35.用于根据权利要求34所述的用途的isRNA，其中编码的肽或蛋白质包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：SEQ ID NO：3至8，或任何这些序列的片段或变体。
36.用于根据权利要求34或35所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码序列包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：440至445或任何这些序列的片段或变体。
37.用于根据权利要求34-36中任一项所述的用途的isRNA，其中编码的肽或蛋白质包含IL-12A和IL-12B或这些蛋白质中的每一种的片段或变体。
38.用于根据权利要求37所述的用途的isRNA，其中编码的肽或蛋白质包含根据SEQ IDNO：10的氨基酸序列或其片段或变体。
39.用于根据权利要求34-38中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码序列包含根据SEQ ID NO：447的核酸序列或其片段或变体。
40.用于根据权利要求20-39中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含CD40L或其片段或变体的肽或蛋白质，其中编码的肽或蛋白质优选包含根据SEQ ID NO：11的氨基酸序列或其片段或变体。
41.用于根据权利要求40所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码序列包含根据SEQ ID NO：448的核酸序列或其片段或变体。
42.用于根据权利要求20-41中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含诱饵PD-1受体或其片段或变体优选PD-1受体的细胞外部分或其片段或变体的肽或蛋白质。
43.用于根据权利要求42所述的用途的isRNA，其中所述诱饵PD-1受体是包含可溶性PD-1或其片段或变体的肽或蛋白质。
44.用于根据权利要求42或43所述的用途的isRNA，其中编码的肽或蛋白质包含根据SEQ ID NO：2的氨基酸序列或其片段或变体。
45.用于根据权利要求42-44中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码序列包含根据SEQ ID NO：439的核酸序列或其片段或变体。
46.用于根据权利要求20-45中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含针对CTLA4的拮抗性抗体或其片段或变体的肽或蛋白质。
47.用于根据权利要求46所述的用途的isRNA，其中编码的肽或蛋白质包含根据SEQ IDNO：645和/或677的氨基酸序列或任何这些氨基酸序列的片段或变体。
48.用于根据权利要求46或47所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码序列包含根据SEQ ID NO：646和/或678的核酸序列或任何这些核酸序列的片段或变体。
49.用于根据权利要求20-48中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列编码包含肿瘤抗原或其片段或变体的肽或蛋白质。
50.用于根据权利要求49所述的用途的isRNA，其中所述肿瘤抗原优选选自由以下组成的组：1A01_HLA-A/m；1A02；5T4；ACRBP；AFP；AKAP4；α-辅肌动蛋白-_4/m；α-甲基酰基-辅酶_A_消旋酶；ANDR；ART-4；ARTC1/m；AURKB；B2MG；B3GN5；B4GN1；B7H4；BAGE-1；BASI；BCL-2；bcr/abl；β-连环蛋白/m；BING-4；BIRC7；BRCA1/m；BY55；钙网蛋白；CAMEL；CASP-8/m；CASPA；组织蛋白酶_B；组织蛋白酶_L；CD1A；CD1B；CD1C；CD1D；CD1E；CD20；CD22；CD276；CD33；CD3E；CD3Z；CD44_同种型_1；CD44_同种型_6；CD4；CD52；CD55；CD56；CD80；CD86；CD8A；CDC27/m；CDE30；CDK4/m；CDKN2A/m；CEA；CEAM6；CH3L2；CLCA2；CML28；CML66；COA-1/m；coactosin样_蛋白；胶原_XXIII；COX-2；CP1B1；CSAG2；CT45A1；CT55；CT-_9/BRD6；CTAG2_同种型_LAGE-1A；CTAG2_同种型_LAGE-1B；CTCFL；Cten；细胞周期蛋白_B1；细胞周期蛋白_D1；cyp-B；DAM-10；DEP1A；E7；EF1A2；EFTUD2/m；EGFR；EGLN3；ELF2/m；EMMPRIN；EpCam；EphA2；EphA3；ErbB3；ERBB4；ERG；ETV6；EWS；EZH2；FABP7；FCGR3A_形式_1；FCGR3A_形式_2；FGF5；FGFR2；纤连蛋白；FOS；FOXP3；FUT1；G250；GAGE-1；GAGE-2；GAGE-3；GAGE-4；GAGE-5；GAGE-6；GAGE7b；GAGE-8_(GAGE-2D)；GASR；GnT-V；GPC3；GPNMB/m；GRM3；HAGE；hepsin；Her2/neu；HLA-A2/m；同源框_NKX3.1；HOM-TES-85；HPG1；HS71A；HS71B；HST-2；hTERT；iCE；IF2B3；IL10；IL-13Ra2；IL2-RA；IL2-RB；IL2-RG；IL-5；IMP3；ITA5；ITB1；ITB6；激肽释放酶2；激肽释放酶3；激肽释放酶4；KI20A；KIAA0205；KIF2C；KK-LC-1；LDLR；LGMN；LIRB2；LY6K；MAGA5；MAGA8；MAGAB；MAGE-A10；MAGE-A12；MAGE-A1；MAGE-A2；MAGE-A3；MAGE-A4；MAGE-A6；MAGE-A9；MAGE-B10；MAGE-B16；MAGE-B17；MAGE-_B1；MAGE-B2；MAGE-B3；MAGE-B4；MAGE-B5；MAGE-B6；MAGE-C1；MAGE-C2；MAGE-C3；MAGE-D1；MAGE-D2；MAGE-D4；MAGE-_E1；MAGE-E1_(MAGE1)；MAGE-E2；MAGE-F1；MAGE-H1；MAGEL2；mammaglobin_A；MART-1/melan-A；MART-2；MC1_R；M-CSF；mesothelin；MITF；MMP1_1；MMP7；MUC-1；MUM-1/m；MUM-2/m；MYCN；MYO1A；MYO1B；MYO1C；MYO1D；MYO1E；MYO1F；MYO1G；MYO1H；NA17；NA88-A；Neo-PAP；NFYC/m；NGEP；NPM；NRCAM；NSE；NUF2；NY-ESO-1；OA1；OGT；OS-9；骨钙素；骨桥蛋白；p53；PAGE-4；PAI-1；PAI-2；PAP；PATE；PAX3；PAX5；PD1L1；PDCD1；PDEF；PECA1；PGCB；PGFRB；Pim-1_-激酶；Pin-1；PLAC1；PMEL；PML；POTEF；POTE；PRAME；PRDX5/m；PRM2；prostein；蛋白酶-3；PSA；PSB9；PSCA；PSGR；PSM；PTPRC；RAB8A；RAGE-1；RARA；RASH；RASK；RASN；RGS5；RHAMM/CD168；RHOC；RSSA；RU1；RU2；RUNX1；S-100；SAGE；SART-_1；SART-2；SART-3；SEPR；SERPINB5；SIA7F；SIA8A；SIAT9；SIRT2/m；SOX10；SP17；SPNXA；SPXN3；SSX-1；SSX-2；SSX3；SSX-4；ST1A1；STAG2；STAMP-1；STEAP-1；生存素2B；生存素；SYCP1；SYT-SSX-1；SYT-SSX-2；TARP；TCRg；TF2AA；TGFB1；TGFR2；TGM-4；TIE2；TKTL1；TPI/m；TRGV11；TRGV9；TRPC1；TRP-p8；TSG10；TSPYl；TVC_(TRGV3)；TX101；酪氨酸酶；TYRP1；TYRP2；UPA；VEGFR1；WT1；和XAGE1。
51.用于根据权利要求49或50所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA不肿瘤内施用。
52.用于根据权利要求49-51中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA皮内，肌内或皮下施用。
53.用于根据权利要求20-52中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列包含与相应野生型RNA的编码序列的核酸序列相比经修饰的核酸序列，并且其中与由相应野生型RNA的编码序列编码的氨基酸序列相比，由所述编码序列编码的氨基酸序列优选不经修饰。
54.用于根据权利要求53所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码序列包含
a)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：25-30；36-41；47-52；58-63；69-74；80-85；91-96；102-107；113-118；124-129；135-140；601-606；612-617；623-628；716-725；727；1018-1021和1059-1062，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：32；43；54；65；76；87；98；109；120；131；142；608；619；630；632-644；726和1058，或任何这些序列的片段或变体；
b)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：33；44；55；66；77；88；99；110；121；132；143；609；620；631；728-738和1025-1028，或任何这些序列的片段或变体，
c)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：646-660；662-676；678-692；694-705；707-715或1029-1041，或任何这些序列的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：23；34；45；56；67；78；89；100；111；122；133；599；610；621；1022-1024，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：24；35；46；57；68；79；90；101；112；123；134；600；611；622和1043-1054，或任何这些序列的片段或变体。
55.用于根据权利要求20-54中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含至少一种编码序列，所述至少一种编码序列具有与相应野生型RNA的编码序列的G/C含量相比改变的优选增加的G/C含量，并且其中与由相应野生型RNA的编码序列编码的氨基酸序列相比，由所述编码序列编码的氨基酸序列优选不被修饰。
56.用于根据权利要求55所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码序列包含
a)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：25-30；80-85；91-96；102-107；113-118；601-606；124-129；135-140；612-617；623-628；716-725和72，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：32；87；98；109；120；131；142；608；619；630；632；636-644和726，或任何这些序列的片段或变体；
b)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：33；88；99；110；121；132；143；609；620；631和728-738，或任何这些序列的片段或变体，和/或
c)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：646；650-658；662；666-674；SEQ IDNO：678；682-690；694；698-705；707；710和713，或任何这些序列的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：23；78；89；100；111；122；133；599；610和621，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：24；79；90；101；112；123；134；600；611和622，或任何这些序列的片段或变体。
57.用于根据权利要求20-58中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含5′-帽结构。
58.用于根据权利要求20-57中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含5’-UTR元件和/或3’-UTR元件。
59.用于根据权利要求20-58中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含聚(A)和/或聚(C)序列。
60.用于根据权利要求20-59中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含组蛋白茎-环序列。
61.用于根据权利要求20-60中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含
a)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：146-151；451-456；157-162；168-173；179-184；190-195；201-206；212-217；223-228；234-239；245-250；256-261和267-272，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：153；458；164；175；186；197；208；219；230；241；252；263，274；992和598，或任何这些序列的片段或变体，
b)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：154；459；165；176；187；198；209；220；231；242；253；264，275和596，或任何这些序列的片段或变体，
c)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：594；595；860-925，或任何这些序列的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：144；449；155；166；177；188；199；210；221；232；243；254和265，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：145；450；156；167；178；189；200；211；222；233；244；255；266和597，或任何这些序列的片段或变体。
62.用于根据权利要求20-61中任一项所述的用途的isRNA，其中所述治疗包括施用优选肿瘤内施用至少三种编码RNA，其中
第一编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：153；164；175；186；197；208；219；230；241；252；263；274；992；458和598，或任何这些序列的片段或变体，
第二编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：154；165；176；187；198；209；220；231；242；253；264；275；459和596，或任何这些序列的片段或变体，并且
第三编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：-920-922或923-925，或任何这些序列的片段或变体；并且
任选地，第四编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：145；156；167；178；189；200；211；222；233；244；255；266；450和597，或任何这些序列的片段或变体。
63.用于根据权利要求20-62中任一项所述的用途的isRNA，其中所述治疗包括施用优选肿瘤内施用至少四种编码RNA，其中
第一编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：153；164；175；186；197；208；219；230；241；252；263；274；992；458和598，或任何这些序列的片段或变体，
第二编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：154；165；176；187；198；209；220；231；242；253；264；275；459和596，或任何这些序列的片段或变体，
第三编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：594和860-874，或任何这些序列的片段或变体；
第四编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：595和890-904，或任何这些序列的片段或变体；并且
任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：145；156；167；178；189；200；211；222；233；244；255；266；450和597，或任何这些序列的片段或变体。
64.用于根据权利要求20-63中任一项所述的用途的isRNA，其中所述至少一种编码RNA包含
a)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：278-283；289-294；300-305；311-316；322-327；333-338；344-349；355-360；366-371；377-382；388-393；399-404和462-467，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：285；296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430；469和992，或任何这些序列的片段或变体，
b)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396；470和407，或任何这些序列的片段或变体，
c)选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：926-955，或任何这些核酸序列的片段或变体，和选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：956-985，或任何这些核酸序列的片段或变体；或选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：986-991，或任何这些核酸序列的片段或变体，和/或
d)任选地，选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：276；287；298；309；320；331；342；353；364；375；386；460和397，或任何这些序列的片段或变体，优选选自由以下组成的组：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；461；387和398，或任何这些序列的片段或变体。
65.用于根据权利要求20-64中任一项所述的用途的isRNA，其中所述治疗包括施用优选肿瘤内施用至少四种编码RNA，其中
第一编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：285；296；307；318；329；340；351；362；373；384；395；406；430；469和992，或任何这些序列的片段或变体，
第二编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：286；297；308；319；330；341；352；363；374；385；396；470和407，或任何这些序列的片段或变体，
第三编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：926-940，或任何这些序列的片段或变体；
第四编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：956-970，或任何这些序列的片段或变体；并且
任选地，第五编码RNA包含选自由以下组成的组的核酸序列：SEQ ID NO：277；288；299；310；321；332；343；354；365；376；387；461和398，或任何这些序列的片段或变体。
66.用于根据权利要求20-65中任一项所述的用途的isRNA，其中所述isRNA作为与一种或多种阳离子或聚阳离子化合物复合的RNA施用，并且所述至少一种编码RNA优选mRNA作为游离RNA施用或者是作为与一种或多种脂质复合从而形成脂质体，脂质纳米颗粒和/或脂质复合物的RNA施用。
67.用于根据权利要求1-66中任一项所述的用途的isRNA，其中所述治疗包括化疗，放疗和/或手术。
68.药物组合物，其包含免疫刺激性RNA(isRNA)和药学上可接受的载体和/或媒剂，其用于治疗优选选自由以下组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准治疗难治性的。
69.用于根据权利要求68所述的用途的药物组合物，其中所述isRNA如权利要求1-12中所定义。
70.用于根据权利要求68或69所述的用途的药物组合物，其中所述治疗包括施用优选如权利要求13-62中任一项所定义的至少一种另外的药学活性成分。
71.试剂盒或成套试剂盒，其包含免疫刺激性RNA(isRNA)，优选权利要求1-12中定义的isRNA，或权利要求68-70中任一项所定义的药物组合物，以及任选的具有关于施用和施用剂量的信息的技术说明书，
所述试剂盒或成套试剂盒用于治疗优选选自由以下组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准治疗难治性的，
其中所述药物组合物肿瘤内施用。
72.isRNA，优选权利要求1-12中任一项所定义的isRNA，权利要求68-70中任一项所定义的药物组合物，或权利要求71所定义的试剂盒或成套试剂盒用于制造用于肿瘤内施用的药物的用途，所述药物用于治疗优选选自由以下组成的组的肿瘤或癌症疾病：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或者癌症疾病优选处于晚期和/或是标准治疗难治性的。
73.治疗或预防选自由肿瘤或癌症疾病组成的组的疾病的方法，所述肿瘤或癌症疾病优选选自由以下组成的组：皮肤黑素瘤(cMEL)，皮肤鳞状细胞癌(cSCC)，头颈鳞状细胞癌(HNSCC)，腺样囊状癌(ACC)，皮肤T细胞淋巴瘤，优选真菌病真菌样亚型的皮肤T细胞淋巴瘤，和外阴鳞状细胞癌(VSCC)，其中所述肿瘤或癌症疾病优选处于晚期和/或是标准治疗难治性的，其中所述方法包括施用优选肿瘤内施用有效量的isRNA，优选权利要求1-12中任一项所定义的isRNA，权利要求68-70中任一项所定义的药物组合物，或权利要求71中定义的试剂盒或成套试剂盒给有需要的受试者。
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