CN109709124A - 液体材料的透射电镜包埋前处理方法 - Google Patents

液体材料的透射电镜包埋前处理方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供液体样品的透射电镜包埋前处理方法，包括以下步骤：(1)、封住毛细滴管的一端，将毛细滴管另一端浸入融化的琼脂糖凝胶中，使毛细滴管一端表面均匀粘上琼脂糖凝胶，形成管状的琼脂糖凝胶，然后将粘有琼脂糖凝胶的毛细滴管在冷冻金属上放置1‑1.5分钟；(2)、在冷冻金属上放载玻片，将步骤(1)得到的管状的琼脂糖凝胶从毛细滴管上脱离至载玻片上；(3)、将琼脂糖凝胶切割成小管，将液体样品加入小管；(4)、用琼脂糖凝胶封住小管两端的开口，待琼脂糖凝胶彻底凝固后，切割带有小管的琼脂糖凝胶并用醛固定。本发明的方法不会造成形貌发生改变，能够真实反映物质真实的形貌，且对液体样品的浓度没有最低要求。

Description

液体材料的透射电镜包埋前处理方法
技术领域
本发明涉及一种液体材料的透射电镜包埋前处理方法。
背景技术
传统的透射电镜包埋方法对液体材料的浓度要求较高，基本采取离心取沉淀物进行包埋的方法。而离心会造成样品有形物质形貌发生改变，不能真实反映物质真实的形貌。且当样品浓度很低，离心后无法获得沉淀物的样本，基本没有办法进行包埋。且传统方法对获得的沉淀物包埋时，容易让样品分散在琼脂糖凝胶中，对切片后的观察造成诸多不便。
发明内容
为了解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种液体材料的透射电镜包埋前处理方法，该方法不会造成形貌发生改变，能够真实反映物质真实的形貌，且对液体样品的浓度没有最低要求。
本发明提供液体样品的透射电镜包埋前处理方法，包括以下步骤：
(1)封住毛细滴管的一端，将毛细滴管另一端浸入融化的琼脂糖凝胶中，使毛细滴管一端表面均匀粘上琼脂糖凝胶，形成管状的琼脂糖凝胶，然后将粘有琼脂糖凝胶的毛细滴管在冷冻金属上放置1-1.5分钟；
(2)在冷冻金属上放载玻片，将步骤(1)得到的管状的琼脂糖凝胶从毛细滴管上脱离至载玻片上；
(3)将琼脂糖凝胶切割成小管，将液体样品加入小管；
(4)用琼脂糖凝胶封住小管两端的开口，待琼脂糖凝胶彻底凝固后，切割带有小管的琼脂糖凝胶并用醛固定。
作为优选，步骤(1)中，所述将毛细滴管另一端浸入融化的琼脂糖凝胶中，使毛细滴管一端表面均匀粘上琼脂糖凝胶的具体操作为：将毛细滴管另一端浸入55-65℃水浴锅中的琼脂糖凝胶中10-20秒，拿出来后，迅速来回移动毛细滴管，使琼脂糖凝胶更加均匀的附着在毛细滴管表面。
作为优选，步骤(1)中，将粘有琼脂糖凝胶的毛细滴管在冷冻金属上放置时，需要确保有琼脂糖凝胶的部分不碰到冷冻金属。
作为优选，步骤(2)中，所述冷冻金属是在-15摄氏度至-20摄氏度下冷冻一段时间得到的。
作为优选，步骤(2)中，所述步骤(1)得到的管状的琼脂糖凝胶从毛细滴管上脱离至载玻片上的具体操作为：从毛细滴管靠近粗口的一端向靠近细口的一端轻轻推动裹在毛细滴管上的琼脂糖凝胶，使得管状的琼脂糖凝胶脱离至载玻片上。
作为优选，步骤(3)中，将琼脂糖凝胶切割成1-3微米长的小管。
作为优选，步骤(3)中，所述将液体样品加入小管是用注射器将液体样从小管的一端注射进入，直到到达另一端时停止。
作为优选，步骤(4)中，用琼脂糖凝胶封住小管两端的开口后，还包括在小管的周围及上方再滴加融化的琼脂糖凝胶的步骤。
作为优选，步骤(4)中，所述切割带有小管的琼脂糖凝胶时，在不破坏凝胶管的前提下尽可能的切小。
作为优选，步骤(4)中，所述用醛固定是用2.5-3％的戊二醛固定。
本发明的方法不会造成形貌发生改变，能够真实反映物质真实的形貌，且对液体样品的浓度没有最低要求。实际操作中，可以应用于各项液体样品的透射电镜观察，比如应用本发明的方法能够很好的观察牛奶的有形成分，不会发生分层或者变形。
附图说明
附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：
图1为毛细滴管。
图2为牛奶离心有形成分后琼脂糖凝胶包埋，超薄切片的透射电镜图。
图3为用本发明方法进行切片后的透射电镜图。
图4为用本发明方法切片后的透射电镜图。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为市售。
实施例1
本发明的液体样品的透射电镜包埋方法步骤如下：
1、制作新鲜的2.5％-3.5％琼脂糖胶(0.5g-0.7g琼脂糖溶于20ml的水)，让其在80-90℃之间充分溶解。然后放置于55-65℃水浴锅中备用。
2、提前在冰箱中冷冻一块金属，不需要太大，能够放置一张载玻片大小即可。对金属的材质没有要求，金属表面平整即可。
冷冻金属的目的是：可以快速让凝胶冷却定型。
3、选择锥形的毛细滴管(见图1)，做凝胶管的一头内径为1毫米，另一头为5毫米，将毛细滴管粗口端用食指封住，将毛细滴管的细口端浸入水浴锅中的琼脂糖凝胶中约10-20秒，浸入深度一般1.5-2厘米为宜，然后拿出来，将毛细滴管握在手中，180度上下旋转移动，目的是让琼脂糖凝胶更加均匀的附着在毛细滴管上面。
图1为毛细滴管。
4、将粘有琼脂糖凝胶的毛细滴管放置在冷冻金属上面，约1-1.5分钟。确保有琼脂糖凝胶的部分不能碰到冷冻金属，即将粘有凝胶的部分悬空放置。
这样操作的目的是：让毛细滴管没有琼脂糖凝胶的部分和冷冻好的金属直接接触，让毛细滴管冷却下来，以至于让凝胶迅速定型，但不破坏凝胶。
5、拿起毛细滴管，在冷冻金属上放置一张干净的载玻片。
6、用手指从毛细滴管靠近粗口的一端向靠近细口的一端轻轻推动裹在毛细滴管上的琼脂糖凝胶，使得管状的琼脂糖凝胶脱离至载玻片上。
7、用双面刀片将步骤6得到的凝胶管切割成约1-3微米长的小管。
8、用注射器将液体样品轻轻的从小管的一端注射进入，直到到达另一端时停止，液体不会自动流出。
9、用吸管吸取水浴锅中的琼脂糖凝胶，分别在装满样品的小管两端各滴一滴，将小管两端的开口封闭。
10、在小管的周围及上方再滴上1-2滴琼脂糖凝胶，使得小管有很好的支撑。
11、待琼脂糖凝胶彻底凝固之后，用双面刀片切取带有小管的琼脂糖凝胶块，在不破坏凝胶管的前提下尽可能的切小，这样有利于液体样品后期包埋制作。
12、用体积浓度百分比为2.5-3％戊二醛固定。
将固定后的凝胶进行包埋制作以及透射电镜观察，包埋方法可以参考现有技术中的方法。比如可以为：锇酸后固定，酒精梯度脱水后包埋。
实施例2应用实施例
牛奶的消化过程研究一直是国内外科研热点，如何通过透射电镜技术亲眼目睹消化过程，一直以来是一个难以攻克的难题。即便通过离心，也很难分离出有形成分，且使得有形成分发生分层变形。而应用本发明的方法能够很好的解决该问题，适用于所有的牛奶样品材料。
将牛奶离心有形成分后琼脂糖凝胶包埋，切片后的透射电镜图见图2。
将牛奶应用本实施例1中的方法处理并进行包埋后，进行透射电镜观察的结果见图3和图4。
图2为牛奶离心有形成分后琼脂糖凝胶包埋，超薄切片观察，细胞变形严重。
图3为用本发明方法进行切片后透射电镜图。牛奶的脂肪细胞及蛋白形态清晰可见。
图4为用本发明方法切片后透射电镜图。可见脂肪细胞已经被部分消化。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.液体样品的透射电镜包埋前处理方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)封住毛细滴管的一端，将毛细滴管另一端浸入融化的琼脂糖凝胶中，使毛细滴管一端表面均匀粘上琼脂糖凝胶，形成管状的琼脂糖凝胶，然后将粘有琼脂糖凝胶的毛细滴管在冷冻金属上放置1-1.5分钟；
(2)在冷冻金属上放载玻片，将步骤(1)得到的管状的琼脂糖凝胶从毛细滴管上脱离至载玻片上；
(3)将琼脂糖凝胶切割成小管，将液体样品加入小管；
(4)用琼脂糖凝胶封住小管两端的开口，待琼脂糖凝胶彻底凝固后，切割带有小管的琼脂糖凝胶并用醛固定。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述将毛细滴管另一端浸入融化的琼脂糖凝胶中，使毛细滴管一端表面均匀粘上琼脂糖凝胶的具体操作为：将毛细滴管另一端浸入55-65℃水浴锅中的琼脂糖凝胶中10-20秒，拿出来后，迅速来回移动毛细滴管，使琼脂糖凝胶更加均匀的附着在毛细滴管表面。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，将粘有琼脂糖凝胶的毛细滴管在冷冻金属上放置时，需要确保有琼脂糖凝胶的部分不碰到冷冻金属。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述冷冻金属是在-15摄氏度至-20摄氏度下冷冻一段时间得到的。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述步骤(1)得到的管状的琼脂糖凝胶从毛细滴管上脱离至载玻片上的具体操作为：从毛细滴管靠近粗口的一端向靠近细口的一端轻轻推动裹在毛细滴管上的琼脂糖凝胶，使得管状的琼脂糖凝胶脱离至载玻片上。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，将琼脂糖凝胶切割成1-3微米长的小管。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(3)中，所述将液体样品加入小管是用注射器将液体样从小管的一端注射进入，直到到达另一端时停止。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，用琼脂糖凝胶封住小管两端的开口后，还包括在小管的周围及上方再滴加融化的琼脂糖凝胶的步骤。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，所述切割带有小管的琼脂糖凝胶时，在不破坏凝胶管的前提下尽可能的切小。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，所述用醛固定是用2.5-3％的戊二醛固定。
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113640323A (zh) * 2021-09-07 2021-11-12 南通大学 一种少量细胞的透射电镜样品制备方法

Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11271197A (ja) * 1998-03-19 1999-10-05 Denki Kagaku Kogyo Kk 透過型電子顕微鏡観察のための重合液の前処理方法およびその形態観察方法
CN1587959A (zh) * 2004-09-23 2005-03-02 上海交通大学 基于原子力显微镜观察的生物样品包埋块的制备方法
CN1661039A (zh) * 2004-12-06 2005-08-31 李文生 一种制备细胞芯片的方法及其装置
US20110094318A1 (en) * 2008-06-11 2011-04-28 Wibke Hellmich Method for embedding a biological sample in a transparent matrix for analysis using single plane illumination microscopy
CN102768209A (zh) * 2012-08-06 2012-11-07 河南中医学院 一种观察植物根内部显微结构的方法
CN103115809A (zh) * 2013-01-23 2013-05-22 浙江大学 一种昆虫触角的透射电镜样品处理方法
CN103940658A (zh) * 2014-04-10 2014-07-23 青岛大学医学院附属医院 一种组织细胞标本石蜡包埋的制作方法
CN104977202A (zh) * 2015-08-07 2015-10-14 广西医科大学 一种石蜡包埋切片组织的透射电镜样品制备方法
CN105258999A (zh) * 2015-11-06 2016-01-20 中南大学湘雅医院 一种单细胞透射电镜制样方法
CN106404475A (zh) * 2016-06-29 2017-02-15 西南大学 一种鸭茅根部组织石蜡切片的制备方法
CN108303295A (zh) * 2018-01-15 2018-07-20 北京赛普九洲科技发展有限公司 一种细胞块制备方法及容器

Patent Citations (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH11271197A (ja) * 1998-03-19 1999-10-05 Denki Kagaku Kogyo Kk 透過型電子顕微鏡観察のための重合液の前処理方法およびその形態観察方法
CN1587959A (zh) * 2004-09-23 2005-03-02 上海交通大学 基于原子力显微镜观察的生物样品包埋块的制备方法
CN1661039A (zh) * 2004-12-06 2005-08-31 李文生 一种制备细胞芯片的方法及其装置
US20110094318A1 (en) * 2008-06-11 2011-04-28 Wibke Hellmich Method for embedding a biological sample in a transparent matrix for analysis using single plane illumination microscopy
CN102768209A (zh) * 2012-08-06 2012-11-07 河南中医学院 一种观察植物根内部显微结构的方法
CN103115809A (zh) * 2013-01-23 2013-05-22 浙江大学 一种昆虫触角的透射电镜样品处理方法
CN103940658A (zh) * 2014-04-10 2014-07-23 青岛大学医学院附属医院 一种组织细胞标本石蜡包埋的制作方法
CN104977202A (zh) * 2015-08-07 2015-10-14 广西医科大学 一种石蜡包埋切片组织的透射电镜样品制备方法
CN105258999A (zh) * 2015-11-06 2016-01-20 中南大学湘雅医院 一种单细胞透射电镜制样方法
CN106404475A (zh) * 2016-06-29 2017-02-15 西南大学 一种鸭茅根部组织石蜡切片的制备方法
CN108303295A (zh) * 2018-01-15 2018-07-20 北京赛普九洲科技发展有限公司 一种细胞块制备方法及容器

Non-Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
DIMICCO M.A.等: "Structure of pericellular matrix around agarose-embedded chondrocytes", 《OSTEOARTHRITIS AND CARTILAGE》 *
GRAHAM LESLEY: "Processing tissue and cells for transmission electron microscopy in diagnostic pathology and research", 《NATURE PROTOCOLS》 *
KOGA DAISUKE等: "A useful method for observing intracellular structures of free and cultured cells by scanning electron microscopy", 《JORUNAL OF ELECTRON MICROSCOPY》 *
PAUL STRAUSBAUCH等: "embedding of cell suspensions in ultra‐low gelling temperature agarose Improved specimen preparation for TEM", 《JOURNAL OF ELECTRON MICROSCOPY TECHNIQUE》 *
YUAN LYDIA C.等: "An improved method for processing single cells for electron microscopy utilizing agarose", 《THE ANATOMICAL RECORD》 *
朱琦等: "《生物教学模式与实验创新》", 31 October 2017, 吉林人民出版社 *
杨鸢劼等: "《水生动物病害防治员培训教材》", 31 July 2012, 吉林人民出版社 *
白占涛等: "《细胞生物学实验》", 30 June 2014, 华中科技大学出版社 *
贺延玉等: "绒山羊毛囊超微结构在透射电镜下的识别依据", 《中国兽医科学》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113640323A (zh) * 2021-09-07 2021-11-12 南通大学 一种少量细胞的透射电镜样品制备方法

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