CN109706141B - 一种固定化酶皮克林乳液反应体系及其应用 - Google Patents
一种固定化酶皮克林乳液反应体系及其应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种固定化酶皮克林乳液反应体系及应用，包括以介孔纳米材料为载体的固定化酶、构成乳液的油相和水相组成，体系的乳液粒径在10‑80μm，它以反应原料作为油相，缓冲溶液作为水相，以介孔纳米材料为载体的固定化酶作为催化剂和乳化剂。本发明所述皮克林乳液酶法反应体系中，直接将反应原料作为油相，介孔纳米材料固定化酶不仅是反应催化剂同时也是皮克林乳液的乳化剂，与常规添加有机试剂或乳化剂的乳液相比，催化活性与稳定性显著提高，产物易于分离纯化，易于重复使用和规模化放大，且适用范围更广，更有利于绿色环保。
Description
技术领域
本发明属于生物催化技术领域，涉及一种固定化酶皮克林乳液反应体系的构建与应用。
背景技术
酶是一种绿色、高效的生物催化剂。但在一些高粘度或者杂相反应体系下，游离态的酶稳定性差，活性不高，且难以回收再利用，大大限制了其在工业中的应用。有研究者通过添加有机试剂来改善反应体系的黏度，但是会存在产物分离和有机溶剂残留的问题。皮克林乳液是指利用固体颗粒作为乳化剂而形成的乳液，其不仅可降低反应能，加快反应进程，而且有利于乳化剂和产物的分离回收。目前，固定化酶和皮克林乳液在食品、医学、能源、环境等领域均得到了广泛的应用。
目前，大量研究的皮克林乳液酶法反应体系是以酶液或者稀释酶溶液为水相，额外添加有机溶剂作为油相，尝试利用不同类型的材料制备皮克林乳液，但有机溶剂的加入便带来繁琐的分离纯化步骤，且容易产生残留，不适合食品级产品的制备。专利CN107955808 A公开了一种基于双面粒子稳定的皮克林乳液的制备方法及其固定化酶应用，以稀释的游离酶溶液和缓冲液为水相，不仅降低酶浓度同时减少酶与底物接触面积，催化活性下降。专利CN 107973919 A公开了一种基于多巴胺稳定的皮克林乳液的制备方法及其固定化酶应用，其通过额外添加多巴胺来提高乳液和酶的稳定性，但其成本高，操作复杂，产物分离纯化困难，应用范围受限。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对上述现有技术存在的不足而提供一种固定化酶皮克林乳液反应体系，介孔纳米材料固定化酶同时作为乳化剂和催化剂，增大酶与底物接触面积，降低反应活化能；同时该乳液直接将反应原料作为油相，常规添加有机试剂或乳化剂的乳液相比，催化活性与稳定性显著提高，产物易于分离纯化，易于重复使用和规模化放大，且适用范围更广，更有利于绿色环保。
本发明为解决上述提出的问题所采用的技术方案为：
一种固定化酶皮克林乳液反应体系，包括固定化酶、构成乳液的油相和水相组成；其中，将酶固定于介孔纳米材料中形成固定化酶，固定化酶同时作为催化剂和乳化剂；反应原料作为乳液的油相，缓冲溶液作为乳液的水相。
按上述方案，乳液的油相指的是能够以固定化酶作为催化剂制备目标产物的反应原料，主要包括酯化反应的反应原料、酯交换反应的反应原料、手性拆分反应的反应原料、水解反应的反应原料。例如制备油酸植物甾醇酯对应的反应原料植物甾醇和油酸，制备功能化磷脂对应的反应原料磷脂和共轭亚油酸乙酯，苯乙醇手性拆分对应的反应原料1-苯乙醇和乙酸乙烯酯，制备单甘酯对应的反应原料月桂酸和甘油，制备丁酸丁酯对应的反应原料丁酸和丁醇，水解橄榄油对应的反应原料橄榄油，等等。
按上述方案，作为乳液水相的缓冲溶液的pH范围是5-8，浓度为0.03M-0.3M，主要选自磷酸盐缓冲溶液，Tris缓冲溶液等。
按上述方案，所述乳液的粒径在10-80μm；所述的介孔纳米材料的颗粒直径50～500nm，比表面积为100～700m2/g，介孔的孔径尺寸为8～50nm，介孔纳米材料固定化酶的固载量在50～600mg/g范围内。
按上述方案，所述的介孔纳米材料主要选自二氧化硅颗粒、碳颗粒、有机聚合物颗粒(如聚酯颗粒等)、金属氧化物颗粒(如TiO2等)等中的一种或几种。
按上述方案，所述的酶主要包括猪胰腺酶、皱褶假丝酵母、解脂假丝酵母、南极假丝酵母、洋葱假单胞菌脂肪酶、磷脂酶、纤维素酶、蛋白酶或水解酶等。
按上述方案，乳液乳化方式包括接触式探头超声、手持式匀浆机、涡旋仪、高压均质机等。
上述皮克林乳液酶法反应体系的制备方法，步骤如下：
1)先制备出符合本发明要求的介孔纳米材料，将酶固定于介孔纳米材料上形成固定化酶；
2)根据目标产物选择反应原料，然后反应原料作为油相、缓冲溶液作为水相相互混合，再将介孔纳米碳球固定化酶利用超声分散到前述混合溶液中，作为催化剂和乳化剂，得到混合液；
3)利用接触式探头超声、手持式匀浆机、涡旋仪、高压均质机等将步骤2)所得混合液乳化，形成粒径在10-80μm的固定化酶皮克林乳液反应体系。
按上述方案，所述步骤3)所得固定化酶皮克林乳液反应体系可以在室温或者加热的条件下进行反应，得到目标产物。其中，反应结束后，反应体系中的介孔纳米固定化酶可以回收并重复利用。
按上述方案，根据乳液的需要，步骤1)中对介孔纳米材料进行亲疏水改性，例如可用硝酸或者硫酸对介孔纳米材料亲水改性，用硅烷偶联试对介孔纳米材料疏水改性，从而通过表面亲疏水性来决定形成水包油、或者形成油包水型乳液。
按上述方案，所述步骤2)中，超声分散的时间为30～60s，功率为60～120W。
按上述方案，所述步骤2)中，介孔纳米固定化酶、反应原料和缓冲溶液的质量比为(0.025～0.01)g：1g：(0.1～0.5)g。
按上述方案，所述步骤3)乳化方式中，接触式探头超声的超声功率优选为(6-50)W/mL、超声间歇时间优选为3s/9s-9s/3s；手持均质机转速优选为(10000～30000)rmp、均质时间优选为(2-10)min；涡旋仪的震荡速率优选为(2500-5000)rpm，震荡时间优选为(5-10)min；高压均质机压力优选为(2000-10000)psi，循环次数优选为(2-4)次。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1.本发明以油脂和脂肪酸等反应原料作为油相，不额外添加任何有机溶剂，以固定化酶同时作物乳化剂和酶催化剂构建皮克林乳液高效酶法反应体系，可提高乳液稳定性，避免了皮克林乳液添加入反应体系中不稳定，降低酶浓度的问题，具有制备方法简单，固定化步骤简洁，适用的酶种类多等特点，并将其广泛应用于酶法酯化、酯交换、水解等反应中，无溶剂污染，具有催化活性高，产量高，反应效率高，产物易于分离纯化，易于重复使用和规模化放大等优点。
2.本发明首次提出此介孔纳米固定化酶同时作为催化剂和乳化剂，制备固定化酶皮克林乳液反应体系，不仅可大大增加酶与底物接触面积，降低反应活化能，而且稳定乳液的介孔纳米固定化酶其具有较大的比表面、适宜的孔径，有利于酶的吸附和提高底物传质，加快反应进程。
3.本发明所述固定化酶皮克林乳液反应体系，不同于其他皮克林乳液，酶溶液和反应物随机分布在混合液中，该反应体系催化剂-酶主要分布在油水界面上，反应物分布于乳液中，这样可最大化地发挥酶活力，缩短反应物之间和酶的距离，加快反应进程。
附图说明
图1为实施例1所采用的介孔纳米碳球的扫描电镜图。
图2为实施例2所采有的介孔纳米硅球的扫描电镜图。
图3为实施例3所采有的介孔纳米钛球的扫描电镜图。
图4为本发明所述固定化酶皮克林乳液反应体系的乳液光学显微镜图(以实施例1为代表)。
具体实施方式
以下的实施例仅用于详细阐明本发明的内容，便于更好地理解本发明，包含在本发明保护的范围之内，但不限制本发明。
实施例1
一种固定化酶皮克林乳液反应体系，包括介孔纳米碳球固定化酶、构成乳液的油相和水相组成，乳液粒径在10～80μm，它以反应原料植物甾醇、油酸(植物甾醇、油酸质量比为1:4)作为油相，0.05M pH＝6.5磷酸钠缓冲溶液(PBS)作为水相，介孔纳米碳球固定化酶作为催化剂和乳化剂；其中，介孔纳米碳球固定化酶、反应原料和磷酸缓冲溶液的质量比为0.025g：1g：0.1g；载体介孔纳米碳球的颗粒直径为270～320nm，比表面积为580～700m2/g，介孔的孔径尺寸为8～14nm，载体上酶的固载量在100mg/g。
上述固定化酶皮克林乳液反应体系的制备方法，它包括如下步骤：
1)选取介孔纳米碳球，经电镜观察，所述的介孔纳米碳球的颗粒直径为270～320nm，比表面积为580～700m2/g，介孔的孔径尺寸为8～14nm；将制备的介孔纳米碳球1g置于50mL 49％浓硫酸中超声1小时，最后水洗至中性，制备出亲水介孔纳米碳球；
2)酶在介孔纳米碳球上的固定化：将0.12g皱褶假丝酵母脂肪酶分散到10mL、50mmol、pH 5.0的磷酸钠盐缓冲溶液中，配制酶溶液；
随后，将亲水介孔纳米碳球分离散到10mL酶溶液中，同时超声10min和抽真空10min后，于恒温振荡器中进行酶的固定化，反应温度为4℃，振荡速度为160转/分钟，反应时间为0.5h，反应完成后，缓冲溶液清洗3次，离心分离后冷冻干燥，得到介孔纳米碳球固定化酶，固载量为100mg/g；
3)油酸植物甾醇酯皮克林乳液酶法反应体系：将0.025g介孔纳米碳球固定化酶添加到0.2g植物甾醇、0.8g油酸反应物和0.1g PBS的混合液中，超声分散30s，在手持均质机的作用下，15000rpm，均质2min，得到乳液粒径在10～80μm的皮克林乳液酶法反应体系；
4)将步骤3)所得皮克林乳液酶法反应体系置于55℃恒温水浴中搅拌反应4h，搅拌转速为300转/分钟；反应完毕后离心分离出介孔纳米碳球固定化酶，甾醇酯化率为93.7％。
将步骤4)分离出的介孔纳米碳球固定化酶经异辛烷清洗3次后回收，重复上述反应10次，甾醇酯化率仍大于91％。
实施例2
一种固定化酶皮克林乳液反应体系，包括介孔纳米硅球固定化酶、构成乳液的油相和水相组成，乳液粒径在10～80μm，它以反应原料磷脂、共轭亚油酸乙酯(磷脂、共轭亚油酸乙酯的质量比为1:4)作为油相，0.3M pH＝6的磷酸钠缓冲溶液(PBS)作为水相，介孔介孔纳米硅球固定化酶作为催化剂和乳化剂；其中，介孔纳米硅球固定化酶、反应原料和磷酸缓冲溶液的质量比为0.05g：1g：0.2g；载体介孔纳米碳球的颗粒直径为200～350nm，比表面积为180～300m2/g，介孔的孔径尺寸为8～14nm，载体上酶的固载量在300mg/g。
上述固定化酶皮克林乳液反应体系的制备方法，它包括如下步骤：
1)制备介孔硅纳米材料，选取介孔纳米硅球，经电镜观察，所述的介孔纳米硅球的颗粒直径为200～350nm，比表面积为180～300m2/g，介孔的孔径尺寸为8～14nm；
将制备的介孔纳米硅球1g置于50mL甲苯中搅拌分散后，添加0.5g辛基三甲氧基硅烷，随后将其放在反应釜中100℃反应24h，最后离心得到固体粉末，制备出疏水介孔硅球；
2)酶在疏水介孔硅球上的固定化：将0.4g磷脂酶分散到10mL、50mmol、pH 6.5的磷酸盐缓冲溶液中，配制酶溶液；
随后，将疏水介孔硅球分离散到10mL酶溶液中，同时超声10min和抽真空10min后，于恒温振荡器中进行酶的固定化，反应温度为4℃，振荡速度为160转/分钟，反应时间为0.5h，反应完成后，缓冲溶液清洗3次，离心分离后冷冻干燥，得到介孔纳米碳球固定化酶，固载量为300mg/g；
3)功能化磷脂皮克林乳液酶法反应体系的制备及应用：将0.05g介孔纳米硅球固定化酶添加到0.2g磷脂、0.8g共轭亚油酸乙酯反应物和0.2g PBS(0.3M pH 6)混合液中，乳化方式选择接触式探头超声功率25W/mL、超声间歇时间6s/9s，得到乳液粒径在10～80μm的皮克林乳液酶法反应体系；
4)将步骤3)所得皮克林乳液酶法反应体系置于55℃恒温水浴中反应4h，搅拌转速为300转/分钟；反应完毕后离心除去固定化酶，酯化率为95.7％。
将步骤4)分离出的介孔纳米硅球固定化酶经正庚烷清洗2次后回收，重复上述反应10次，甾醇酯化率仍大于90％。
实施例3
一种固定化酶皮克林乳液反应体系，包括介孔纳米钛球固定化酶、构成乳液的油相和水相组成，乳液粒径在10～80μm，它以反应原料乙酸乙烯酯与1-苯乙醇(乙酸乙烯酯与1-苯乙醇摩尔比为4：1)作为油相，0.05M pH＝8磷酸钠缓冲溶液(PBS)作为水相，介孔纳米钛球固定化酶作为催化剂和乳化剂；其中，介孔纳米钛球固定化酶、反应原料和磷酸缓冲溶液的质量比为0.05g：4.66g：0.428g；载体介孔纳米钛球的颗粒直径为200～350nm，比表面积为100～200m2/g，介孔的孔径尺寸为8～14nm，载体上酶的固载量在200mg/g。
上述固定化酶皮克林乳液反应体系的制备方法，它包括如下步骤：
1)制备介孔钛球，选取介孔纳米钛球，经电镜观察，所述的介孔纳米钛球的颗粒直径为200～350nm，比表面积为100～200m2/g，介孔的孔径尺寸为8～14nm；
2)酶在介孔纳米钛球上的固定化：将0.4g洋葱假单胞菌脂肪酶分散到10mL、50mmol、pH 6.5的磷酸盐缓冲溶液中，配制酶溶液；
随后，将介孔钛球分离散到10mL酶溶液中，同时超声10min和抽真空10min后，于恒温振荡器中进行酶的固定化，反应温度为4℃，振荡速度为160转/分钟，反应时间为0.5h，反应完成后，缓冲溶液清洗3次，离心分离后冷冻干燥，得到介孔纳米碳球固定化酶，固载量为200mg/g；
3)苯乙醇手性拆分皮克林乳液酶法反应体系的制备及应用：称取1-苯乙醇1.22g，按乙酸乙烯酯与1-苯乙醇摩尔比为4：1称取乙酸乙烯酯，将0.05g介孔纳米钛球固定化酶添加到1-苯乙醇、乙酸乙烯酯和0.428g PBS(0.05M pH 8)混合液中，超声分散30s，在涡旋仪的震荡速率5000rpm，震荡时间10min，得到乳液粒径在10～80μm的皮克林乳液酶法反应体系；
4)将步骤3)所得皮克林乳液酶法反应体系置于50℃恒温水浴中反应6h，搅拌转速为300转/分钟；反应完毕后离心除去固定化酶，苯乙醇转化率为50％。
将步骤4)分离出的介孔纳米碳球固定化酶经丙酮清洗2次后回收，重复上述反应10次，转化率仍维持在50％左右，重复使用性好。
实施例4
一种固定化酶皮克林乳液反应体系，包括花瓣状介孔纳米钛球固定化酶、构成乳液的油相和水相组成，乳液粒径在10～80μm，它以反应原料月桂酸、甘油(月桂酸、甘油的质量比为1:2)作为油相，磷酸钾缓冲溶液(0.1M pH 7.5)作为水相，花瓣状介孔纳米钛球固定化酶作为催化剂和乳化剂；其中，花瓣状介孔纳米钛球固定化酶、反应原料和磷酸缓冲溶液的质量比为0.05g：0.6g：0.428g；花瓣状介孔纳米钛球的颗粒直径为200～350nm，比表面积为100～300m2/g，介孔的孔径尺寸为8～14nm，载体上酶的固载量在50mg/g。
上述固定化酶皮克林乳液反应体系的制备方法，它包括如下步骤：
1)制备花瓣状介孔钛球，选取花瓣状介孔纳米钛球，经电镜观察，所述的花瓣状介孔纳米钛球的颗粒直径为200～350nm，比表面积为100～300m2/g，介孔的孔径尺寸为8～14nm；
2)酶在花瓣状介孔纳米钛球上的固定化：将0.4g猪胰腺酶分散到10mL、40mmol、pH7的磷酸盐缓冲溶液中，配制酶溶液；
随后，将花瓣状介孔钛球分离散到10mL酶溶液中，同时超声10min和抽真空10min后，于恒温振荡器中进行酶的固定化，反应温度为4℃，振荡速度为160转/分钟，反应时间为0.5h，反应完成后，缓冲溶液清洗3次，离心分离后冷冻干燥，得到花瓣状介孔纳米碳球固定化酶，固载量为50mg/g；
3)单甘酯的皮克林乳液酶法反应体系的制备及应用：将0.05g花瓣状介孔纳米钛球固定化酶添加0.2g月桂酸、0.4g甘油和0.428g磷酸钾缓冲溶液(0.1M,pH＝7.5)中，超声分散30s，在高压均质机压力6000psi，循环次数2次的程序中，得到乳液粒径在10～80μm的皮克林乳液酶法反应体系；
4)将步骤3)所得皮克林乳液酶法反应体系置于50℃恒温水浴中反应6h，搅拌转速为300转/分钟；反应完毕后离心除去固定化酶，单月桂酸甘油脂转化率为95％。
将步骤4)分离出的花状介孔纳米钛球固定化酶经异辛烷清洗2次后回收，重复上述反应10次，转化率仍维持在95％左右。
实施例5
一种固定化酶皮克林乳液反应体系，包括双层中空碳球固定化酶、构成乳液的油相和水相组成，乳液粒径在10～80μm，它以反应原料丁酸、丁醇(丁酸、丁醇的质量比为0.45：0.55)作为油相，0.03M pH＝5Tris缓冲溶液作为水相，双层中空碳球固定化酶作为催化剂和乳化剂；其中，双层中空碳球固定化酶、反应原料和磷酸缓冲溶液的质量比为0.05g：1g：0.3g；双层中空碳球固定化酶的颗粒直径为200～350nm，比表面积为400～600m2/g，介孔的孔径尺寸为8～14nm，载体上酶的固载量在400mg/g。
上述一种固定化酶皮克林乳液反应体系的制备方法，它包括如下步骤：
1)制备双层中空碳球，经电镜观察，所述的双层中空碳球的颗粒直径为200～350nm，比表面积为400～600m2/g，介孔的孔径尺寸为8～14nm；
2)酶在双层中空碳球上的固定化：将0.4g洋葱假单胞菌脂肪酶分散到10mL、50mmol、pH 6.5的磷酸钠缓冲溶液中，配制酶溶液；
随后，将双层中空介孔碳球分离散到10mL酶溶液中，同时超声10min和抽真空10min后，于恒温振荡器中进行酶的固定化，反应温度为4℃，振荡速度为160转/分钟，反应时间为2.5h，反应完成后，缓冲溶液清洗3次，离心分离后冷冻干燥，得到介孔纳米碳球固定化酶，固载量为400mg/g；
3)丁酸丁酯皮克林乳液酶法反应体系的制备及应用：将0.05g双层中空介孔纳米碳球固定化酶添加到0.45g丁酸、0.55g丁醇反应物和0.3g Tris缓冲(0.03M，pH 5)混合液中，超声分散30s，在手持均质机的作用下，6000rpm，均质3min，得到乳液粒径在10～80μm的皮克林乳液酶法反应体系；
4)将步骤3)所得皮克林乳液酶法反应体系置于37℃恒温水浴中反应6h，搅拌转速为300转/分钟；反应完毕后离心除去固定化酶，丁醇酯化率为95.7％。
将步骤4)分离出的双层中空碳球固定化酶经丙酮清洗2次后回收，重复上述反应10次，酯化率仍大于90％。
实施例6
一种固定化酶皮克林乳液反应体系，包括双层中空碳球固定化酶、构成乳液的油相和水相组成，乳液粒径在10～80μm，它以反应原料丁酸、丁醇(丁酸、丁醇的质量比为0.45：0.55)作为油相，0.02M pH＝7.5的PBS缓冲溶液作为水相，双层中空碳球固定化酶作为催化剂和乳化剂；其中，双层中空碳球固定化酶、反应原料和磷酸缓冲溶液的质量比为0.05g：2mL：0.3g；双层中空碳球固定化酶的颗粒直径为200～350nm，比表面积为400～600m2/g，介孔的孔径尺寸为8～14nm，载体上酶的固载量在600mg/g。
上述固定化酶皮克林乳液反应体系的制备方法，它包括如下步骤：
1)制备双层中空碳球，经电镜观察，所述的双层中空碳球的颗粒直径为200～350nm，比表面积为400～600m2/g，介孔的孔径尺寸为8～14nm；
2)酶在双层中空碳球上的固定化：将0.4g猪胰腺酶分散到10mL、50mmol、pH 6.5的磷酸钠缓冲溶液中，配制酶溶液；
随后，将双层中空介孔碳球分离散到10mL酶溶液中，同时超声10min和抽真空10min后，于恒温振荡器中进行酶的固定化，反应温度为4℃，振荡速度为160转/分钟，反应时间为2.5h，反应完成后，缓冲溶液清洗3次，离心分离后冷冻干燥，得到介孔纳米碳球固定化酶，固载量为600mg/g；
3)水解橄榄油的皮克林乳液酶法反应体系的制备及应用：将0.05g双层中空碳球固定化酶添加到2mL橄榄油和0.3g PBS(0.02M，pH 7.5)混合液中，超声分散30s，在手持均质机的作用下，20000rpm，均质3min，得到乳液粒径在10～80μm的皮克林乳液酶法反应体系；
4)将步骤3)所得皮克林乳液酶法反应体系置于37℃恒温水浴中反应6h，搅拌转速为400转/分钟；反应完毕后离心除去固定化酶，橄榄油水解率为90％。
将步骤4)分离出的双层中空介孔纳米碳球固定化酶经正己烷清洗2次后回收，重复上述反应10次，酯化率仍大于85％。
实施例7
本实施例与实施例5基本相同，不同之处在于：步骤(1)中双层中空碳球由文献[5]所制备的中空碳球替代；步骤(2)中洋葱假单胞菌脂肪酶由南极假丝酵母脂肪酶替代。
实施例8
本实施例与实施例5基本相同，不同之处在于：步骤(1)中双层中空碳球由环糊精聚合物替代；步骤(2)中洋葱假单胞菌脂肪酶由猪胰腺酶替代。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明创造构思的前提下，还可以做出若干改进和变换，这些都属于本发明的保护范围。
Claims (6)
1.一种固定化酶皮克林乳液反应体系的制备方法，其特征在于步骤如下：
1）将酶固定于介孔纳米碳球或者中空碳球上形成固定化酶，固载量在100～600mg/g范围内；其中，介孔纳米碳球的颗粒直径为270～320nm，比表面积为580～700m2/g，介孔的孔径尺寸为8～14nm；中空碳球的颗粒直径为200～350nm，比表面积为400～600m2/g，介孔的孔径尺寸为8～14nm；
2）根据目标产物选择反应原料，然后反应原料作为油相、缓冲溶液作为水相相互混合，再将步骤1）所得固定化酶利用超声分散到前述混合溶液中作为催化剂和乳化剂，得到混合液；
3）将步骤2）所得混合液进行乳化，形成粒径在10-80μm的固定化酶皮克林乳液反应体系；
所述乳液的油相指的是以固定化酶作为催化剂制备目标产物的反应原料，主要包括酯化反应的反应原料、酯交换反应的反应原料、手性拆分反应的反应原料、水解反应的反应原料。
2.根据权利要求1所述的一种固定化酶皮克林乳液反应体系的制备方法，其特征在于所述反应原料主要包括制备油酸植物甾醇酯对应的反应原料植物甾醇和油酸，制备功能化磷脂对应的反应原料磷脂和共轭亚油酸乙酯，苯乙醇手性拆分对应的反应原料1-苯乙醇和乙酸乙烯酯，制备单甘酯对应的反应原料月桂酸和甘油，制备丁酸丁酯对应的反应原料丁酸和丁醇，水解橄榄油对应的反应原料橄榄油。
3.根据权利要求1所述的一种固定化酶皮克林乳液反应体系的制备方法，其特征在于所述缓冲溶液的pH范围是5-8，浓度为0.03M-0.3M。
4.根据权利要求1所述的一种固定化酶皮克林乳液反应体系的制备方法，其特征在于步骤3）所得固定化酶皮克林乳液反应体系在室温或者加热的条件下进行反应，得到目标产物。
5.根据权利要求1所述的一种固定化酶皮克林乳液反应体系的制备方法，其特征在于所述步骤2）中，固定化酶、反应原料和缓冲溶液的质量比为（0.025~0.01）g：1 g：(0.1~0.5)g；步骤2）中，超声分散的时间为30~60s，功率为60~120W。
6.根据权利要求1所述的一种固定化酶皮克林乳液反应体系的制备方法，其特征在于步骤3）中所述乳化的方式包括但不限于接触式探头超声、手持式匀浆机、涡旋仪、均质机。
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