CN109682974A - 一种胰腺癌检测试剂及其在胰腺癌检测中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种胰腺癌检测试剂，包括PDACS 1：在10mM的NH4HCO3中配制成不高于5.0%SDS，pH为7.5‑8.0的NH4HCO3溶液；PDACS 2：2~5U/µL的PNGaseF、1~2mU/µL唾液酸酶和双氧水按照体积1:1:13混合；PDACS 3：混合同体积的20mM的APTS和1M的NaCNBH3；PDACS 4：缓冲液。本发明还提供一种组合物在胰腺癌检测试剂中的应用，所述组合物由NGA2F和NG1A2F组成，所述组合物通过NGA2F/NG1A2F的比值来检测胰腺癌。本发明采用灵敏度高、操作简单、仅需微量样品、重复性高、稳定性好和高通量的检测方法，与现有技术相比，准确度达到86.3%，明显优于现有的检测方法。
Description
技术领域
本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种胰腺癌的检测试剂及其在胰腺癌检测中的应用。
背景技术
胰腺癌是一种恶性程度很高，诊断和治疗都很困难的消化道恶性肿瘤，约90%为起源于腺管上皮的导管腺癌。5年生存率<5%，是预后最差的恶性肿瘤之一。胰腺癌早期的确诊率不高，手术死亡率较高，而治愈率很低。胰腺癌发病呈快速上升趋势。中国国家癌症中心最新统计数据显示，胰腺癌位列中国城市男性恶性肿瘤发病率的第8位，居大城市（北京、上海）人群恶性肿瘤死亡率的第5位。胰腺癌起病隐匿，早期症状不典型，常表现为上腹部不适、腰背部痛、消化不良或腹泻等，易与其他消化系统疾病相混淆，出现症状时大多已属中晚期。
胰腺癌的病理分型是以组织形态结构和细胞生物学特性为基础，不同类型的胰腺癌，其形态结构和生物学行为各异，流行病学和分子机制亦不同，以致于现有的胰腺癌病理分型系统众多。在所有类型的胰腺癌中，胰腺导管腺癌（PDAC）是最为常见的，占85-90%，而患者总体的5年生存率低于5%，这一数字在近50年来都没有改善。其它各类胰腺肿瘤约占胰腺肿瘤的10% - 15%。由于胰腺癌早期转移、生长迅速且位置较深，症状及体征均缺乏典型性，临床上容易漏诊或误诊。目前出现的胰腺癌诊断试剂盒都是检测一些常见的肿瘤标记物，如C19-9、癌胚抗原CEA等，灵敏性及准确性都偏低。单项检测往往有很大的局限性，难以满足快速诊断的要求。所以，本发明专利是应用糖组学方法鉴别诊断胰腺癌及各型胰腺肿瘤，提供一种非侵入性、高灵敏度、高特异度有利于早期诊断胰腺癌的方法。
发明内容
糖基化是指N-寡聚糖能通过上百种酶、转录因子、离子通道和蛋白之间复杂的相互作用而形成的，且参与多种分子过程，如蛋白折叠、细胞粘附、分子转移、信号转导、调节受体活性等；糖蛋白上的N-寡糖链的改变与疾病相关。
通过前期大量研究发现，在胰腺癌患者血清中，N-寡聚糖NGA2F（agalactosylated, core-a-1,6-fucosylated biantennary glycan），NG1A2F（monogalactosylated ,core – a – 1 , 6 - fucosylated biantennary）相对含量与正常血清中相比，发生了明显变化，因此可作为检测胰腺癌的标志物。
针对现有的胰腺癌检测中，血液检测和影像学检测特异性和准确度不高，病理检查有创伤性，抽样误差性，患者依存性差的问题，本发明提供一种胰腺癌的N-寡糖链检测检测方法。
本发明的技术方案如下：
一种胰腺癌检测试剂，包括PDACS 1：在10mM的NH4HCO3中配制成不高于5.0% SDS，pH为7.5-8.0的NH4HCO3溶液；PDACS 2：2~5U/µL的PNGaseF、1~2mU/µL唾液酸酶和双氧水按照体积1:1:13混合；PDACS 3：混合同体积的20mM的APTS和1M的NaCNBH3；PDACS 4：缓冲液。
所述PDACS1的体积为2µL，PDACS2的体积为2µL，PDACS3体积为2µL，PDACS4体积为200µL。
本发明还提供一种组合物在胰腺癌检测试剂中的应用，所述组合物由NGA2F和NG1A2F组成，NG1A2F由同分异构体NG1A2F1和NG1A2F2组成，所述组合物通过NGA2F/NG1A2F的比值来检测胰腺癌。
试剂制备：
PDACS1：于10mM的NH4HCO3，配制成含有不高于5% SDS、pH为7.5~8.0的NH4HCO3溶液。
PDACS 2：浓度2~5U/µL的PNGaseF，浓度1~2mU/µL唾液酸酶以及双氧水按照体积1:1:13混合。
PDACS 3：混合同体积的20mM APTS和1M NaCNBH3。
PDACS 4：缓冲液。
N-寡糖链检测：
①N-寡糖链的制备：取在95℃下灭活的血清2µL，加入2µL PDACS1，
混匀放置5min，加入PDACS2试剂2µL，37~40℃反应3h后进行干燥。
②N-寡糖链的标记：在干燥后的样品中加入2µL的试剂PDACS3，不低
于60℃下进行荧光标记3h后，加入200µL的缓冲液终止反应。
③N-寡糖链分离分析：取上述反应后的液体样品10µL，在ABI3500dx
仪器下进行N-寡糖链分离，从而得到N-糖组图谱。
④数据处理分析：将所得到的N-糖组图谱进行峰值量化，用每个峰的
峰高值与所有峰的高度的总和相比，从而定量计算出每个峰的相对含量，继通过函数NGA2F/NG1A2F进行进一步的统计学分析，来检测胰腺癌。
本发明的有益效果：
（1）本发明的检测方法采用灵敏度高、操作简单、仅需微量样品、重复性高、稳定性好和高通量的检测方法，根据490例样本（胰腺癌样本50例，非胰腺癌样本440例）建立的血清的N-糖组图谱，得到胰腺癌样本血清中的聚糖NGA2F和NG1A2F相对含量，通过函数NGA2F/NG1A2F对受试者进行检测。本发明的检测方法，与现有技术相比，准确度达到86.3%，明显优于现有的检测方法。
（2）采用本发明的试剂，能够让众多高风险的人群接受常规、无创检测，帮助医生及患者及时监测胰腺癌的发生和病情进展，有望在临床中推广使用。
附图说明
图1为胰腺癌的N-寡糖链图谱；
图2为健康对照组血清样本的N-寡糖链图谱；
图3 为检测样本通过函数NGA2F/NG1A2F用于鉴别胰腺癌的ROC曲线；检测样本总数为490例，其中胰腺癌血清样本50例，健康对照组样本440例；得到曲线下面积AUC=0.863。
具体实施方式
下面结合具体实施例以及附图对本试剂进一步详述。需要说明的是，下列实施例仅用于说明而不用于限制本发明的范围。以下实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件试验，或按照制造厂商建议的条件，试剂都为实验室专用。
实例一：
（1）实验设备：
ABI3500dx 分析仪（Applied Biosystems），PCR，离心机
（2）试剂制备：
PDACS1：于10mM的NH4HCO3，配制成含有不高于5% SDS、pH为7.5~8.0的NH4HCO3溶液。
PDACS 2：浓度2~5U/µL的PNGaseF，浓度1~2mU/µL唾液酸酶以及双氧水按照体积1:1:13混合。
PDACS 3：混合同体积的20mM APTS和1M NaCNBH3。
PDACS 4：缓冲液。
（3）N-寡糖链检测
a、N-寡糖链的制备：取在95℃下灭活的血清2µL，加入2µL PDACS1，混匀放置5min，加入PDACS2试剂2µL，37~40℃反应3h后进行干燥。
b、N-寡糖链的标记：在干燥后的样品中加入2µL的试剂PDACS3，不低于60℃下进行荧光标记3h后，加入200µL的缓冲液终止反应。
c、N-寡糖链分离分析：取上述反应后的液体样品10µL，在ABI3500dx仪器下进行N-寡糖链分离，从而得到N-糖组图谱。
d、数据处理分析：将所得到的N-糖组图谱进行峰值量化，用每个峰的峰高值与所有峰的高度的总和相比，从而定量计算出每个峰的相对含量，继通过函数NGA2F/NG1A2F进行进一步的统计学分析，来检测胰腺癌。
检测样本通过函数NGA2F/NG1A2F用于鉴别胰腺癌的ROC曲线；检测样本总数为490例，其中胰腺癌血清样本50例，健康对照组样本440例；得到曲线下面积AUC=0.863。
本发明的检测方法，与现有技术相比，准确度达到86.3%，明显优于现有的检测方法。采用本发明的试剂，能够让众多高风险的人群接受常规、无创检测，帮助医生及患者及时监测胰腺癌的发生和病情进展，有望在临床中推广使用。
以上结合附图所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，凡在本发明的精神和原则之内，不需要付出创造性劳动即可做出的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (3)
1.一种胰腺癌检测试剂，其特征在于：包括PDACS 1：在10mM的NH4HCO3中配制成不高于5.0% SDS，pH为7.5-8.0的NH4HCO3溶液；PDACS 2：2~5U/µL的PNGaseF、1~2mU/µL唾液酸酶和双氧水按照体积1:1:13混合；PDACS 3：混合同体积的20mM的APTS和1M的NaCNBH3；PDACS 4：缓冲液。
2.根据权利要求1所述的胰腺癌检测试剂，其特征在于：所述PDACS1的体积为2µL，PDACS2的体积为2µL，PDACS3体积为2µL，PDACS4体积为200µL。
3.一种组合物在胰腺癌检测试剂中的应用，所述组合物由NGA2F和NG1A2F组成，所述组合物通过NGA2F/NG1A2F的比值来检测胰腺癌。
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|---|---|
| CN (1) | CN109682974A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112391469A (zh) * | 2020-10-22 | 2021-02-23 | 青岛大学附属医院 | 一种用于胰腺癌早期检测的试剂及其检测方法 |
| CN114032284A (zh) * | 2021-09-15 | 2022-02-11 | 陈翠英 | 一种食管癌检测试剂及其在食管癌检测中的应用 |
| WO2023040911A1 (zh) * | 2021-09-15 | 2023-03-23 | 江苏先思达生物科技有限公司 | 一种肠癌检测试剂及其在肠癌检测中的应用 |
Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1610831A (zh) * | 2001-12-29 | 2005-04-27 | 韩国生命工学研究院 | 通过检测肿瘤发生和转移相关蛋白的糖基化变化诊断癌症的方法及使用其诊断癌症的试剂盒 |
| WO2006114663A1 (en) * | 2005-04-26 | 2006-11-02 | Dwek Raymond A | Automated glycofingerprinting strategy |
| WO2009013538A2 (en) * | 2007-07-20 | 2009-01-29 | National Institute For Bioprocessing Research And Training | Glycosylation markers for cancer and chronic inflammation |
| US20090181461A1 (en) * | 2008-01-10 | 2009-07-16 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Tumor marker for pancreatic cancer and method of testing the same |
| WO2010071119A1 (ja) * | 2008-12-15 | 2010-06-24 | 塩野義製薬株式会社 | 糖鎖分析による膵臓がんの診断方法 |
| CN102565318A (zh) * | 2012-01-11 | 2012-07-11 | 陈翠英 | 一种肝癌监测、分期以及预后风险评估的试剂及其方法 |
| US20140273049A1 (en) * | 2011-10-06 | 2014-09-18 | Kagoshima University | Diagnostic marker for digestive organ cancer and inspection method for digestive organ cancer |
| US20150017669A1 (en) * | 2013-07-10 | 2015-01-15 | Hudson Surface Technology, Inc. | Process and its application for improving reproducibility in maldi-tof glycan profiling of human serum: experimental procedure and application to the screening for ovarian tumors |
| WO2016036705A1 (en) * | 2014-09-03 | 2016-03-10 | Musc Foundation For Research Development | Glycan panels as specific tumor tissue biomarkers |
| CN109100507A (zh) * | 2017-06-20 | 2018-12-28 | 江苏先思达生物科技有限公司 | 慢性肝炎肝损伤的血清糖蛋白n-糖组图谱模型的建立方法 |
-
2019
- 2019-01-16 CN CN201910038792.4A patent/CN109682974A/zh active Pending
Patent Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1610831A (zh) * | 2001-12-29 | 2005-04-27 | 韩国生命工学研究院 | 通过检测肿瘤发生和转移相关蛋白的糖基化变化诊断癌症的方法及使用其诊断癌症的试剂盒 |
| WO2006114663A1 (en) * | 2005-04-26 | 2006-11-02 | Dwek Raymond A | Automated glycofingerprinting strategy |
| WO2009013538A2 (en) * | 2007-07-20 | 2009-01-29 | National Institute For Bioprocessing Research And Training | Glycosylation markers for cancer and chronic inflammation |
| US20090181461A1 (en) * | 2008-01-10 | 2009-07-16 | Wako Pure Chemical Industries, Ltd. | Tumor marker for pancreatic cancer and method of testing the same |
| WO2010071119A1 (ja) * | 2008-12-15 | 2010-06-24 | 塩野義製薬株式会社 | 糖鎖分析による膵臓がんの診断方法 |
| US20140273049A1 (en) * | 2011-10-06 | 2014-09-18 | Kagoshima University | Diagnostic marker for digestive organ cancer and inspection method for digestive organ cancer |
| CN102565318A (zh) * | 2012-01-11 | 2012-07-11 | 陈翠英 | 一种肝癌监测、分期以及预后风险评估的试剂及其方法 |
| US20150017669A1 (en) * | 2013-07-10 | 2015-01-15 | Hudson Surface Technology, Inc. | Process and its application for improving reproducibility in maldi-tof glycan profiling of human serum: experimental procedure and application to the screening for ovarian tumors |
| WO2016036705A1 (en) * | 2014-09-03 | 2016-03-10 | Musc Foundation For Research Development | Glycan panels as specific tumor tissue biomarkers |
| CN109100507A (zh) * | 2017-06-20 | 2018-12-28 | 江苏先思达生物科技有限公司 | 慢性肝炎肝损伤的血清糖蛋白n-糖组图谱模型的建立方法 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| YUN-PENG ZHAO, ET AL.: "Validation of N-glycan markers that improve the performance of CA19-9 in pancreatic cancer.", 《CLIN EXP MED》 * |
| 周娉婷: "恶性胆胰肿瘤N糖组标志物和相关机制研究。", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 * |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112391469A (zh) * | 2020-10-22 | 2021-02-23 | 青岛大学附属医院 | 一种用于胰腺癌早期检测的试剂及其检测方法 |
| CN114032284A (zh) * | 2021-09-15 | 2022-02-11 | 陈翠英 | 一种食管癌检测试剂及其在食管癌检测中的应用 |
| WO2023040911A1 (zh) * | 2021-09-15 | 2023-03-23 | 江苏先思达生物科技有限公司 | 一种肠癌检测试剂及其在肠癌检测中的应用 |
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