CN112391469A - 一种用于胰腺癌早期检测的试剂及其检测方法 - Google Patents

一种用于胰腺癌早期检测的试剂及其检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种用于胰腺癌早期检测的试剂及其检测方法，包括十二烷基硫酸钠、反转录酶、PDACS、RNA酶抑制剂和双氧水，各原料重量份数的组份为：十二烷基硫酸钠10‑12份、反转录酶10‑12份、RNA酶抑制剂10‑12份和双氧水160‑180份，所述反转录酶的浓度设置为2‑3摩尔每升，RNA酶抑制剂的浓度设置为2‑3摩尔每升；一种用于胰腺癌早期检测的试剂的检测方法，包括以下步骤：S1、分离：提取受试者的血清血浆，得到血清血浆样本；S2、逆转录：将得到的血清血浆样本,通过RNA逆转录反应得到样品，然后将样品置于试剂内。该用于胰腺癌早期检测的试剂及其检测方法，能够提升样品的稳定性，辅助提升检测效果。

Description

一种用于胰腺癌早期检测的试剂及其检测方法
技术领域
本发明属于胰腺癌早期检测技术领域，具体涉及一种用于胰腺癌早期检测的试剂，还涉及一种用于胰腺癌早期检测的试剂的检测方法。
背景技术
胰腺是分泌作为消化液的胰腺液，并经由胰管向消化道送入的外分泌腺，并且还具有作为将胰岛素、胰高血糖素等激素分泌至血液中的内分泌腺的功能。
胰腺癌是发生于胰腺外分泌腺的恶性肿瘤。胰腺恶性肿瘤可来自胰腺外分泌腺、内分泌腺或非上皮组织，其中95%为胰腺癌,该疾病预后最差，其发病率和死亡率很高。主要是使用药物、手术、放化疗等方法治疗疾病，在日常生活中患者也要改正生活以及饮食习惯。
胰腺癌的病理分型以组织形态结构和细胞生物学特征为基础，不同类型的胰腺癌形态结构和生物学行为各异，流行病学和分子机制也不同，致使现有胰腺癌病理分型系统众多，其中，胰腺导管腺癌（PDACs）最多，由于胰腺癌早期转移和生长较快且位置较深，早期症状缺乏典型性，非常容易漏诊或者误诊。现有技术中的胰腺癌试剂盒基本都是通过检测一般性肿瘤标记物诸如C19-9、癌胚抗原CEA等实现，因此很难满足胰腺癌以及各型胰腺肿瘤的诊断鉴别。
因此针对这一现状，现有技术中存在一些用于胰腺癌早期检测的试剂及其检测方法，以满足实际使用的需要。
诸如中国专利文献CN109682974A中提供了一种胰腺癌检测试剂及其在胰腺癌检测中的应用，所述胰腺癌检测试剂包括PDACS 1：在10mM的NH4HCO3中配制成不高于5.0%SDS，pH为7.5-8.0的NH4HCO3溶液；PDACS 2：2~5U/µL的PNGaseF、1~2mU/µL唾液酸酶和双氧水按照体积1:1:13混合；PDACS 3：混合同体积的20mM的APTS和1M的NaCNBH3；PDACS 4：缓冲液。检测胰腺癌通过由NGA2F和NG1A2F组成的组合物的比值而实现。该种检测方式通过N-寡糖链检测，得到胰腺癌样本血清中的聚糖NGA2F和NG1A2F相对含量，提升了检测的准确度。然而在该检测方法中，由于需要测量血清样本中的聚糖NGA2F和NG1A2F的相对含量，因此，对血清样本的稳定性的要求较高。
另一方面，作为miRNA，其功能不断被分子机理研究团队挖掘创新，诸如2020年5月3日Gastroenterology杂志中Nishiwada S 团队发表了一篇关于miRNA表达谱特征识别胰腺导管腺癌淋巴结转移风险性研究文章。针对胰腺导管腺癌（PDACs）经常性淋巴结转移，寻找预测PDACs患者是否发生淋巴结转移的靶基因。
发明内容
鉴于现有技术中存在的技术问题，本发明的目的在于提供一种操作简单、准确率高、取样少、稳定性高的用于胰腺癌早期检测的试剂及其检测方法。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于胰腺癌早期检测的试剂，包括十二烷基硫酸钠、反转录酶、PDACS、RNA酶抑制剂和双氧水，各原料重量份数的组份为：十二烷基硫酸钠10-12份、反转录酶10-12份、RNA酶抑制剂10-12份和双氧水160-180份。
优选的，所述反转录酶的浓度设置为2-3摩尔每升，RNA酶抑制剂的浓度设置为2-3摩尔每升。
一种用于胰腺癌早期检测的试剂的检测方法，包括以下步骤：
S1、分离：提取受试者的血清血浆，得到血清血浆样本；
S2、逆转录：将得到的血清血浆样本,通过RNA逆转录反应得到样品，然后将样品置于试剂内；
S3、处理：将含有样品的试剂经过定量、质量控制分析、荧光标记、反转录、扩增、扫描图像、归一化分析、统计数据分析，找出具有极显著差异miRNAs；
S4、反应：将选定的miRNAs用定量RT-PCR方法分析验证分子内在表达量，并将选定的miRNAs分子在临床样品上进行内在表达验证，筛选出差异表达的miRNAs；
S5、筛选：将筛选的差异表达的miRNAs再次进行小临床实验，进行定量PCR、理化特征分析、临床稳定性试验筛选出灵敏度和特异性高的miRNAs；
S6、检测：检测并比较血清血浆样本相对于正常的血清血浆中微小核糖核酸的量的变化；
S7、对比：对比图谱，得到检测效果。
优选的，所述血清血浆样本来源于人体活体、组织、器官或者尸体。
优选的，所述处理和反应的温度设置为50-70摄氏度。
优选的，所述处理和反应的时间设置为1-2小时。
优选的，所述处理的过程中使用的探针设置为DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其衍生物。
本发明的技术效果和优点：该用于胰腺癌早期检测的试剂及其检测方法，十二烷基硫酸钠、反转录酶、PDACS、RNA酶抑制剂和双氧水的配合使用，能够保证血清血浆样品的稳定性，延长样品的使用寿命；利用处理和反应，取样少、能够对选取的血清血浆样本进行挑选和表达，通过试剂的配合，能够提升检测的效果；该用于胰腺癌早期检测的试剂及其检测方法，能够提升样品的稳定性，辅助提升检测效果，操作简单、准确率高。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式对本发明做出清楚、完整地描述，本领域技术人员懂得，该说明是示例性的，本发明并不仅限于该具体实施例之中。
实施例1
本发明提供了一种用于胰腺癌早期检测的试剂，包括十二烷基硫酸钠、反转录酶、PDACS、RNA酶抑制剂和双氧水，各原料重量份数的组份为：十二烷基硫酸钠10份、反转录酶10份、RNA酶抑制剂10份和双氧水160份。
具体的，所述反转录酶的浓度设置为2-3摩尔每升，RNA酶抑制剂的浓度设置为2-3摩尔每升。
一种用于胰腺癌早期检测的试剂的检测方法，包括以下步骤：
S1、分离：提取受试者的血清血浆，得到血清血浆样本；
S2、逆转录：将得到的血清血浆样本,通过RNA逆转录反应得到样品，然后将样品置于试剂内；
S3、处理：将含有样品的试剂经过定量、质量控制分析、荧光标记、反转录、扩增、扫描图像、归一化分析、统计数据分析，找出具有极显著差异miRNAs；
S4、反应：将选定的miRNAs用定量RT-PCR方法分析验证分子内在表达量，并将选定的miRNAs分子在临床样品上进行内在表达验证，筛选出差异表达的miRNAs；
S5、筛选：将筛选的差异表达的miRNAs再次进行小临床实验，进行定量PCR、理化特征分析、临床稳定性试验筛选出灵敏度和特异性高的miRNAs；
S6、检测：检测并比较血清血浆样本相对于正常的血清血浆中微小核糖核酸的量的变化；
S7、对比：对比图谱，得到检测效果。
具体的，所述血清血浆样本来源于人体活体、组织、器官或者尸体。
具体的，所述处理和反应的温度设置为50-70摄氏度。
具体的，所述处理和反应的时间设置为1-2小时。
具体的，所述处理的过程中使用的探针设置为DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其衍生物。
实施例2
本发明提供了一种用于胰腺癌早期检测的试剂，包括十二烷基硫酸钠、反转录酶、PDACS、RNA酶抑制剂和双氧水，各原料重量份数的组份为：十二烷基硫酸钠12份、反转录酶12份、RNA酶抑制剂12份和双氧水180份。
具体的，所述反转录酶的浓度设置为2-3摩尔每升，RNA酶抑制剂的浓度设置为2-3摩尔每升。
一种用于胰腺癌早期检测的试剂的检测方法，包括以下步骤：
S1、分离：提取受试者的血清血浆，得到血清血浆样本；
S2、逆转录：将得到的血清血浆样本,通过RNA逆转录反应得到样品，然后将样品置于试剂内；
S3、处理：将含有样品的试剂经过定量、质量控制分析、荧光标记、反转录、扩增、扫描图像、归一化分析、统计数据分析，找出具有极显著差异miRNAs；
S4、反应：将选定的miRNAs用定量RT-PCR方法分析验证分子内在表达量，并将选定的miRNAs分子在临床样品上进行内在表达验证，筛选出差异表达的miRNAs；
S5、筛选：将筛选的差异表达的miRNAs再次进行小临床实验，进行定量PCR、理化特征分析、临床稳定性试验筛选出灵敏度和特异性高的miRNAs；
S6、检测：检测并比较血清血浆样本相对于正常的血清血浆中微小核糖核酸的量的变化；
S7、对比：对比图谱，得到检测效果。
具体的，所述血清血浆样本来源于人体活体、组织、器官或者尸体。
具体的，所述处理和反应的温度设置为50-70摄氏度。
具体的，所述处理和反应的时间设置为1-2小时。
具体的，所述处理的过程中使用的探针设置为DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其衍生物。
实施例3
本发明提供了一种用于胰腺癌早期检测的试剂，包括十二烷基硫酸钠、反转录酶、PDACS、RNA酶抑制剂和双氧水，各原料重量份数的组份为：十二烷基硫酸钠11份、反转录酶11份、RNA酶抑制剂11份和双氧水170份。
具体的，所述反转录酶的浓度设置为2-3摩尔每升，RNA酶抑制剂的浓度设置为2-3摩尔每升。
一种用于胰腺癌早期检测的试剂的检测方法，包括以下步骤：
S1、分离：提取受试者的血清血浆，得到血清血浆样本；
S2、逆转录：将得到的血清血浆样本,通过RNA逆转录反应得到样品，然后将样品置于试剂内；
S3、处理：将含有样品的试剂经过定量、质量控制分析、荧光标记、反转录、扩增、扫描图像、归一化分析、统计数据分析，找出具有极显著差异miRNAs；
S4、反应：将选定的miRNAs用定量RT-PCR方法分析验证分子内在表达量，并将选定的miRNAs分子在临床样品上进行内在表达验证，筛选出差异表达的miRNAs；
S5、筛选：将筛选的差异表达的miRNAs再次进行小临床实验，进行定量PCR、理化特征分析、临床稳定性试验筛选出灵敏度和特异性高的miRNAs；
S6、检测：检测并比较血清血浆样本相对于正常的血清血浆中微小核糖核酸的量的变化；
S7、对比：对比图谱，得到检测效果。
具体的，所述血清血浆样本来源于人体活体、组织、器官或者尸体。
具体的，所述处理和反应的温度设置为50-70摄氏度。
具体的，所述处理和反应的时间设置为1-2小时。
具体的，所述处理的过程中使用的探针设置为DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其衍生物。
具体的，该用于胰腺癌早期检测的试剂及其检测方法，经过实施例1-3的检测对比，实施例3的辅助效果更佳，提升检测的效果更好。
最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选内容而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述内容对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各内容所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换,凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种用于胰腺癌早期检测的试剂，其特征在于，包括十二烷基硫酸钠、反转录酶、PDACS、RNA酶抑制剂和双氧水，各原料重量份数的组份为：十二烷基硫酸钠10-12份、反转录酶10-12份、RNA酶抑制剂10-12份和双氧水160-180份。
2.根据权利要求1所述的一种用于胰腺癌早期检测的试剂，其特征在于：所述反转录酶的浓度设置为2-3摩尔每升，RNA酶抑制剂的浓度设置为2-3摩尔每升。
3.一种用于胰腺癌早期检测的试剂的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
S1、分离：提取受试者的血清血浆，得到血清血浆样本；
S2、逆转录：将得到的血清血浆样本,通过RNA逆转录反应得到样品，然后将样品置于试剂内；
S3、处理：将含有样品的试剂经过定量、质量控制分析、荧光标记、反转录、扩增、扫描图像、归一化分析、统计数据分析，找出具有极显著差异miRNAs；
S4、反应：将选定的miRNAs用定量RT-PCR方法分析验证分子内在表达量，并将选定的miRNAs分子在临床样品上进行内在表达验证，筛选出差异表达的miRNAs；
S5、筛选：将筛选的差异表达的miRNAs再次进行小临床实验，进行定量PCR、理化特征分析、临床稳定性试验筛选出灵敏度和特异性高的miRNAs；
S6、检测：检测并比较血清血浆样本相对于正常的血清血浆中微小核糖核酸的量的变化；
S7、对比：对比图谱，得到检测效果。
4.根据权利要求3所述的一种用于胰腺癌早期检测的试剂的检测方法，其特征在于：所述血清血浆样本来源于人体活体、组织、器官或者尸体。
5.根据权利要求3所述的一种用于胰腺癌早期检测的试剂的检测方法，其特征在于：所述处理和反应的温度设置为50-70摄氏度。
6.根据权利要求3所述的一种用于胰腺癌早期检测的试剂的检测方法，其特征在于：所述处理和反应的时间设置为1-2小时。
7.根据权利要求3所述的一种用于胰腺癌早期检测的试剂的检测方法，其特征在于：所述处理的过程中使用的探针设置为DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其衍生物。
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