CN109673869A - 一种修复免疫抗应激能力的虾蟹饵料及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种具有修复免疫抗应激能力的虾蟹饵料及其应用，按质量份计，配方为：玉米粉、鱼粉、虾壳粉、花生粕、豆粕、菜粕、米糠、面粉、免疫包。所述的免疫包为一类复合物，组成为：肽核酸、寡糖、益生菌、有机铬40‑80份、有机硒、酵母细胞壁、小麦水解蛋白。本发明的饲料采用纯天然发酵产物，具有无抗生素污染，适口性好，增强免疫力与抗应激能力的优点。

Description

一种修复免疫抗应激能力的虾蟹饵料及其应用
技术领域：
本发明主要涉及水产养殖领域，特别涉及南美白对虾、罗氏沼虾、小龙虾、河蟹养殖等。
背景技术：
目前的人工水产养殖业，一般都是集中化养殖，水产养殖密度高，因此容易导致水产养殖物之间疾病的传染。传染病是目前制约鱼、虾、蟹养殖发展的关键因素，尤其是病毒性传染病如：虾白斑病毒、桃拉病毒、蟹抖抖病毒、鲫鱼腮出血等危害巨大。尤其要认识到，水产养殖动物不可能像畜禽那样可以通过接种疫苗来防控传染病，所以，一旦病毒入侵，面临的是全军覆没的风险。所以要从根本上减少鱼虾蟹传染性疾病危害，必须采用多系统技术集成。
为了降低水产养殖物的得病率和提高其存活率，目前的普遍做法是在饲料中添加适量的抗生素。但是近年来抗生素药物滥用情况严重，会导致部分水产品中的药物残留量严重超标，威胁水产食品安全。同时抗生素在水中的积累会对水体造成污染，进一步破坏养殖生态环境，形成恶性循环。因此应该严格控制抗生素的用量或者开发一种无抗免疫增强饲料。鱼虾蟹不具有完整的免疫系统，其非特异性免疫机制主要通过血细胞吞噬、包囊、形成结节等来完成。除了从饲料里获取营养外，更多的要提高非特异性免疫力来预防传染性疾病的发生，提高虾蟹的养殖成功率。
此外，目前的饲料的主要配方包括：肉类、蛋白粉、油脂类、维生素、矿物质等，营养十分全面。但是许多虾蟹饲料适口性差，造成饲料浪费，而且饲料长期在水体中会容易腐败，污染水质。
发明内容：
为了解决现有技术中存在的抗生素污染，饲料适口性差等问题，本发明公开了一种增强免疫抗应激能力的虾蟹饵料及其应用，采用纯天然发酵产物，具有无抗生素污染，适口性好，增强免疫力与抗应激能力的优点。
技术方案：一种具有修复免疫抗应激能力的虾蟹饵料，按质量份计，配方为：
所述的免疫包为一类复合物，组成以质量份计为：肽核酸300-700份、寡糖 300-700份、益生菌800-1200份、有机铬40-80份、有机硒250-350份、酵母细胞壁1500-2500份、小麦水解蛋白5600-5680份。
所述的一种具有修复免疫抗应激能力的虾蟹饵料在虾蟹养殖上的应用。
有益效果：
1.本品所添加的免疫包属于纯天然生物发酵与表达产物，富含肽核酸(PNA)、寡糖、益生菌、氨基酸等成份，具有促进免疫器官发育、修复免疫系统、提高抗应激能力、强诱食、促生长并促进消化道发育功能；
2.本发明的免疫包中所含有的生物活性肽是蛋白经深度水解后主要存在形式，所以进入消化道后可被养殖动物肠道快速吸收，蛋白利用率近乎100％，氨基酸组成合理接近鱼虾蟹的理想需求模式；
3.采用本发明的饵料配方能够调节并修复受损的免疫系统，增强鱼虾蟹的非特异免疫功能与抗应激的能力；
4.采用益生菌等生物技术手段来改善虾蟹消化道内环境，为鱼虾蟹创造良好的营养消化吸收能力。
具体实施方式：
一种具有修复免疫抗应激能力的虾蟹饵料，按质量份计，配方为：
所述的免疫包为一类复合物，组成以质量份计为：肽核酸300-700份、寡糖 300-700份、益生菌800-1200份、有机铬40-80份、有机硒250-350份、酵母细胞壁1500-2500份、小麦水解蛋白5600-5680份。所述的免疫包中的肽核酸是 CN201010228664.5名称为抗WSSV和/或TSV的核酸药物中所合成的五种核酸。
实施例1
一种具有修复免疫抗应激能力的虾蟹饵料，配方如下：
配方原料 比例(质量份)
玉米粉 21
鱼粉 20
虾壳粉 5
花生粕 15
豆粕 15
菜粕 3
米糠 5
面粉 15
免疫包 3
按照3质量份比例添加免疫包，按周交替饲喂，能显著提升所养殖虾蟹对的病原菌的抗感染能力，大大降低发病率。
具体使用方法
实施例2一种免疫营养饲料对南美白对虾攻毒保护性临床试验实验目的：
通过试验验证在南美白对虾饵料中添加不同剂量的免疫包，对人工感染对虾白斑病病毒(WSSV)与桃拉病毒(TSV)的保护效率。
试验方法：
1、初级病毒滤液的制备：分别取田间疑似WSSV和TSV感染后发病虾研磨成肉糜，加入缓冲液PBS(PH7.14)匀浆，8000r离心10min去沉淀，上清液用0.45μm滤膜过滤，得到含有大量WSSV和TSV病毒上清滤液。
2、纯化携带WSSV/TSV病毒虾的制备：用上述制备方式获得的含WSSV和TSV 病毒上清滤液，按0.2ml/尾，注射育成期(体长5-10cm)健康南美白对虾50 尾，收集具有WSSV/TSV典型临床特征而濒临死亡的虾，冰箱-20℃保存，作为投喂攻毒的材料；
3、试验分组：取育成期(体长5-10cm)健康南美白对虾200尾分为4组，每组50尾，独立水箱饲养，分别为：
3.1不添加免疫包的空白对照组；
3.2投喂含1质量份的免疫包的本发明的饲料；
3.3投喂含2质量份的免疫包的本发明的饲料；
3.4投喂含3质量份的免疫包的本发明的饲料；
分组后，用同一种饲料预饲一周，然后根据要求换成含有不同剂量的免疫包的本发明的饲料；
每组用5尾纯化携带WSSV/TSV病毒病虾投喂攻毒，投喂方式：自冰箱中取出纯化携带WSSV/TSV病毒病虾5尾剪细加青霉素100万IU和链霉素处理50万 IU研磨制成肉糜，攻毒前一天停止投喂饵料，使虾空胃饥饿24h后投喂事先备好的纯化携带WSSV/TSV病毒病虾肉糜，6h以后，清除残余物，然后继续投喂各组相应饲料。
4、临床观察：攻毒感染后，每日观察对虾的活动情况，发病、阳性率情况如下：
实施例1的本发明的饲料在对虾上的抗WSSV活性分析(表1)
序号 处理方式 PCR检测阳性率 保护率
对照组 无添加 98％ 2％
2 1质量份添加 78％ 22％
3 2质量份添加 53％ 47％
4 3质量份添加 3％ 97％
结果表明，注射感染WSSV悬液的虾与自然患白斑病的病虾有同样的白斑病症状，注射感染组28h后有死亡个体出现，36～48h达到死亡高峰期,病毒感染阳性组72h内死亡率达到100％，感染个体8h后即不摄食，不运动，反应力差，20h后就有红体出现，28h可见到感染虾出现白斑，在28h后全部虾均有红体和白斑出现。濒死虾甲壳变软，血淋巴液发黄，不易凝固，各实验组死亡率见上表所示，死虾均出现典型的白斑症状。
实施例1的本发明的饲料在对虾上的抗TSV活性分析(表2)
TSV感染与检测
感染TSV的对虾早期体色变深，体表发红，呈深红色或褐色，尾扇和游泳足的颜色变化最为明显，进食减少或不食，剖检病虾空胃，严重者肝胰脏肿大或糜烂，体表可出现大量大小不一、散状分布的不规则黑色斑点等。
针对TSV的检测采用的是定量PCR进行检测，结果表明，TSV感染死亡组的虾均能检测TSV病毒，阴性对照组(健康对虾)均未检出。各实验组保护率见上表2所示。
实施例3
在江苏南通小棚养殖南美白对虾中，放养密度为6万尾/个棚，选取10个塘口做实验，选择5个从放苗后7天开始投喂实施例1的免疫饲料，另外5个做对照。每天喂4餐，第一周喂免疫料，第二周喂普通料，连续饲喂60天，最后饲喂实施例1的含免疫包饲料的五口塘，白斑病的发病率均为10％一下，而没有喂免疫包饲料的对照组另外五口塘发病率超过50％，实验室白斑检查阳性率为98％。最后饲喂免疫饲料的塘口获得了1800斤的产量，而没有饲喂免疫包产量仅为800 斤/口塘。
实施例4一例白斑综合病引起的南美白对虾游塘和死亡的案例
江苏南通刘埠镇一南美白对虾池塘，面积11亩，水深1.5米，配备6台增氧机。2017年4月26日放养虾苗60万尾，7月末规格达到120尾/斤。套养规格为1.5斤/尾的草鱼500尾。
8月10日虾开始有游塘，到8月15日未见好转，一直不论什么天气整天游塘，每天见草鱼不停追赶游塘的虾吃。期间外用1次硫酸铜和漂白粉，集中杀死一部分病虾后游塘虾略有减少，之后马上增多。发病后停料，恢复投喂后次日游塘也马上增多，一直不敢投喂。底罾和料罾没有死虾。
8月16日现场观察池塘水色浓绿色，近期水色一直没有明显变化，17点用简易测试盒检测水质，pH值8.1，氨氮0.1mg/L，亚硝酸0.1mg/L。发病游塘虾普遍体色发红，红尾红须，个别红腿，空肠空喂，肝脏外观模糊。从捕游塘虾的小网中取活虾7尾，从料罾中取3尾，现场接种肝脏做细菌分离培养和取肌肉病料带回公司研究所用PCR方法做病毒检测，结果只有1尾严重红腿病虾分离到了细菌，其它虾无细菌或只少量细菌。
病毒检测结果，虾网中的虾有6尾虾白斑综合症病毒都呈阳性，料罾中的3 尾虾也有1尾呈阳性，桃拉病毒(与预扩增片段有出入，待进一步鉴定)和皮下及造血器官坏死病毒都呈阴性。
8月17日开始服用本发明的实施例1的免疫包饲料，连续饲喂用7天后，到第三天开始死虾开始减少，游边也减少。2017年10月清塘后，亩产达到450 斤。
分析：1、本病例发病游塘虾都有身体发红的症状，病毒检测游塘虾绝大多数白斑综合症病毒都呈阳性，因此发病原因应该是白斑综合症病毒引起，正常虾也可能游进捕虾网中，所以网中个别的虾不带毒也是正常。从细菌分离结果看同时细菌感染的虾很少，被细菌感染的虾有明显的红腿症状。
2、不论何种天气、全天都在游塘也排除了气泡病游塘的可能。

Claims (3)

1.一种具有修复免疫抗应激能力的虾蟹饵料，其特征在于，按质量份计配方为：
2.如权利要求1所述的一种具有修复免疫抗应激能力的虾蟹饵料，其特征在于，所述的免疫包为一类复合物，组成以质量份计为：肽核酸300-700份、寡糖300-700份、益生菌800-1200份、有机铬40-80份、有机硒250-350份、酵母细胞壁1500-2500份、小麦水解蛋白5600-5680份。
3.权利要求1-2任一种具有修复免疫抗应激能力的虾蟹饵料在虾蟹养殖上的应用。
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