CN109662976B

CN109662976B - 一种鼠李糖乳杆菌在制备预防溃疡性结肠炎的药品中的应用

Info

Publication number: CN109662976B
Application number: CN201910115099.2A
Authority: CN
Inventors: 索化夷
Original assignee: Southwest University
Current assignee: Southwest University
Priority date: 2019-02-14
Filing date: 2019-02-14
Publication date: 2023-08-08
Anticipated expiration: 2039-02-14
Also published as: CN109662976A

Abstract

本发明公开了保藏编号为CCTCC NO：M 2018592的鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601(Lactobacillus rhamnosus 2016SWU.05.0601)在制备预防溃疡性结肠炎的药品中的应用，不仅扩大了鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601的应用范围，提高了其利用价值，而且给溃疡性结肠炎的预防带来了新的希望。

Description

一种鼠李糖乳杆菌在制备预防溃疡性结肠炎的药品中的应用

技术领域

本发明涉及一种鼠李糖乳杆菌在制备保健食品和药品中的应用。

背景技术

乳酸菌是指通过利用可发酵的碳水化合物产生以乳酸为主的代谢产物，革兰氏染色呈阳性、不产气、不运动、无芽孢，兼性厌氧或厌氧性细菌的总称，广泛存在于各种发酵食品中，并作为优势菌栖息于人和各种动物的肠道及其他器官内。乳酸杆菌是乳酸菌中最大的一个属，具有多种形态，如长杆形、短杆形等，呈栅栏状或成链状排列，是最早被发现的益生菌之一。近年来随着研究不断深入，发现乳酸菌与人体健康息息相关，具有维持肠道菌群的微生态平衡、加强机体免疫功能、预防和抑制肿瘤发生、提高食物营养的利用率、促进食品中营养的吸收、降低胆固醇、延缓机体衰老、预防龋齿、抑制病原菌生长等功效。独特的生物学特性和益生功能使得乳酸菌在农业、食品及医疗保健等领域具有广泛的应用前景和利用价值。

我国高原地区地域广袤，气候复杂，民族畜牧养殖业历史悠久，传统牦牛乳制品种类丰富，为乳酸菌提供了得天独厚的栖息环境，为野生型乳酸菌菌株的开发提供了条件。

溃疡性结肠炎是病因尚未完全明确的非特异性结肠炎性病变，常伴有腹部疼痛、发热、呕吐、腹泻、直肠便血、贫血和体重下降等临床症状。随着现代生活方式越来越西方化，溃疡性结肠炎的发病率在全球飙升，尤其是亚洲等新兴工业地区，且发病越来越年轻化，医疗保健负担也随之增加。过去十年以来，溃疡性结肠炎相关研究有了长足的进展，研究发现溃疡性结肠炎患者肠黏膜上皮细胞调亡增加、肠上皮细胞间紧密连接缺损、肠上皮黏液层变薄或缺失、肠道菌群失调或易位、固有层肠黏膜免疫系统异常激活，从而导致肠道上皮黏膜通透性增加、屏障功能受损。目前，临床上对溃疡性结肠炎多采用西药加以控制，但是西药治疗具有一定副作用且价格相对较高，具有一定局限性。除此之外，不少研究者还关注中药制剂治疗溃疡性结肠炎的效果，如黄连煎剂、葛根芩连汤、四白汤和四神丸等，虽然表现出很好的预防效果，但是中药制剂成分复杂。

发明内容

本发明的目的在于考察从牦牛酸乳中分离得到的一种鼠李糖乳杆菌对溃疡性结肠炎的预防效果，以开发功能保健制品。

经研究，本发明提供如下技术方案：

保藏编号为CCTCC NO：M 2018592的鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601(Lactobacillus rhamnosus 2016SWU.05.0601)在制备预防溃疡性结肠炎的保健食品和药品中的应用。

牦牛酸乳是青藏高原地区牧民沿用古老而传统的方法制作而成的Ⅳ型发酵乳。鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601(Lactobacillus rhamnosus 2016SWU.05.0601)分离自青海省海南藏族自治州牧民家中采集的传统发酵牦牛酸乳，于2018年9月4日保藏于中国典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址：武汉市武汉大学)，保藏编号为CCTCC No：M 2018592。

乳酸菌只有经过人体消化系统在肠道中达到一定数量后才能发挥其潜在的益生作用，即要求乳酸菌具有耐受人体胃肠道的防御机制，尤其是胃液中的低酸环境和小肠中的高胆盐环境。鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601消化道抗性强，其在pH3.0人工胃液中存活率为119.53％，在0.30％胆盐中生长率为41.64％。

葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导溃疡性结肠炎模型小鼠实验结果显示，鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601能够显著改善溃疡性结肠炎小鼠的结肠缩短及充血水肿现象，显著降低小鼠结肠重量与长度的比值；能够显著改善溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中杯状细胞大量丢失、隐窝及腺体结构遭到破坏、结肠粘膜损伤严重并伴随大量炎性细胞浸润的现象；能够显著降低小鼠血清中促炎因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的水平，显著升高抑炎因子IL-4和TGF-β的水平；能够显著减少小鼠结肠组织中IL-1β、TNF-α、iNOS、COX-2、NF-κB等促炎介质的表达，促进eNOS、nNOS和IκBα的表达，从而缓解肠道炎症，改善溃疡性结肠炎的发生与发展，起到对溃疡性结肠炎的预防作用。因此，鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601可用于制备预防溃疡性结肠炎的保健食品和药品。

本发明的有益效果在于：本发明提供了鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601在制备预防溃疡性结肠炎的保健食品和药品中的应用，不仅扩大了鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601的应用范围，提高了其利用价值，而且给溃疡性结肠炎的预防带来了新的希望。

附图说明

图1为分离菌株菌落形态(a)及革兰氏染结果(b)。

图2为鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601的16S rDNA序列PCR产物琼脂糖凝胶电泳图。图中M为DNA分子量标准，0为阴性对照，1为鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601。

图3为鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601的API 50CH反应结果。

图4为小鼠结肠长度变化。

图5为小鼠结肠组织切片观察。

图6为鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601对小鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-4和TGF-β含量的影响。

图7为鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601对小鼠结肠中IL-1β、TNF-α、eNOS、nNOS、iNOS、COX-2、NF-κB和IκBαmRNA表达的影响。

上述图6和图7中，标有相同小写英文字母(a、b、c)的组之间不存在显著差异(p＞0.05)；标有不同小写英文字母(a、b、c)的组之间存在显著差异(p<0.05)。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明的优选实施例进行详细的描述。

一、鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601的分离与鉴定

1实验材料

11份传统发酵牦牛酸乳采集自青海省海南藏族自治州不同牧民家中。

2实验方法

2.1乳酸菌的分离纯化

分别将11份牦牛酸乳按1％接种量接种到脱脂乳培养基中于37℃培养，待其凝乳后进行10倍梯度稀释，依次稀释至10^-7。选择4个适宜稀释度(稀释度为10^-4、10^-5、10^-6、10^-7)分别取100μL涂布在MRS固体平板上，37℃培养48h后，选取形态各异的单菌落采用平板划线法分离菌株。重复上述步骤直至得到纯化菌株，通过革兰氏染色进行形态学观察。

2.2PCR扩增16S rDNA序列

采用细菌基因组DNA提取试剂盒提取纯化菌株的DNA。采用25μL反应体系进行PCR扩增：模板DNA 1μL、上游引物(10μM)1μL、下游引物(10μM)1μL、2×Taq PCR MasterMix12.5μL，用无菌超纯水补足至25μL。PCR扩增条件：94℃预变性5min；94℃变性1.5min，55℃退火1min，72℃延伸1.5min，共30个循环；72℃末端延伸10min。PCR扩增结束后取5μL扩增产物用1.5％琼脂糖凝胶电泳进行检测。最后委托华大基因科技有限公司对检测合格的PCR扩增产物进行双向测序，测序结果通过NCBI中的BLAST程序进行同源性比对分析。

2.3菌株在pH 3.00人工胃液中存活率的测定

分离菌株在37℃培养18h，于3 000r/min、15min的条件下离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤菌体后重悬为菌悬液。将所得菌悬液与人工胃液(0.2％NaCl、0.35％胃蛋白酶1︰10 000，用1mol/L的HCl调节pH至3.00)按体积比1︰9混合，37℃培养3h后，采用平板涂布法分别测定0h、3h的活菌数，按式(1)计算菌株在pH 3.00人工胃液中的存活率。

式中：

c——存活率，％；

m₁——3h活菌数，CFU/mL；

m₂——0h活菌数，CFU/mL。

2.4菌株在0.30％胆盐中生长率的测定

分离菌株在37℃培养18h，以2％的接种量分别接种于含0.00％、0.30％牛胆盐的MRS-THIO培养基中，37℃培养4h后测定其生长率，以未接种菌液的液体培养基作为空白对照，按照式(2)计算菌株在胆盐中的生长率。

式中：

c——生长率，％；

A₀——空白对照OD_600nm值；

A₁——含0.00％胆盐培养基OD_600nm值；

A₂——含0.30％胆盐培养基OD_600nm值。

2.5API试剂盒鉴定

分离菌株在37℃培养18h，于3 000r/min、15min的条件下离心收集菌体，用无菌生理盐水洗涤菌体后重悬为菌悬液。参考API试剂盒说明书进行操作。

2.6统计分析

每个试验做3次平行试验，试验数据以“平均值±标准方差”表示，用SPSS20进行方差分析，以P＜0.05表示有统计学意义。

3结果与分析

3.1分离菌株的菌落形态和细胞形态

采集的11份传统发酵牦牛酸乳共分离出48株乳酸菌。菌株纯化后在MRS培养基中形成单菌落，菌落形态几乎一致，大多数呈圆形，白色，表面光滑湿润。革兰氏染色后在显微镜下观察到紫色细胞形态，判定为革兰氏阳性菌(G⁺)。其中，编号为2016SWU.05.0601的菌株的菌落形态和革兰氏染色结果见图1。

3.2菌株16S rDNA序列PCR扩增结果

48株乳酸菌的16S rDNA基因扩增产物在1000bp与2500bp之间均出现一条清晰亮带，阴性对照无条带，符合PCR扩增预期结果，说明PCR扩增产物可用于之后测序工作。其中，编号为2016SWU.05.0601的菌株的PCR扩增结果见图2。

3.3菌株16S rDNA序列分析

16S rDNA同源性分析结果显示，48株乳酸菌在种属关系上具有一定的生物多样性，包括乳杆菌属、明串珠菌属、魏斯氏菌属和肠球菌属，具体涉及植物乳杆菌1株、鼠李糖乳杆菌1株、瑞士乳杆菌2株、德氏乳杆菌保加利亚亚种37株、短乳杆菌2株、柠檬明串珠菌1株、食窦魏斯氏菌2株、融合魏斯氏菌1株、耐久肠球菌1株。其中，编号为2016SWU.05.0601的菌株的16S rDNA基因扩增产物的序列如SEQ ID No.1所示，与Gene Bank数据库中已知鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)的同源性达100％。

3.4菌株对人工胃液耐受性评价

消化道是机体抵御外来物质侵扰的天然屏障，胃是人体重要消化器官，胃蛋白酶和胃液中强酸环境成为大多数微生物进入肠道的阻碍。一般情况下，进食后人胃部pH通常在3.00左右，消化时间为1～3h。故以人工胃液pH 3.00，作用时间3h为筛选条件，根据卫办监督发〔2010〕65号文件《可用于食品的菌种名单》，对初筛后获得的11株生长旺盛的乳酸菌进行人工胃液耐受性评价。

结果见表1，11株乳酸菌中有8株乳酸菌对人工胃液有一定的耐受性，但差异明显，其中6株乳酸菌存活率＞50.00％，尤其是编号为2016SWU.05.0601的菌株和编号为2016SWU.05.1011的菌株，存活率＞100.00％，表明这2株乳酸菌在pH 3.00人工胃液环境中继续生长繁殖，使得其活菌数增加，出现存活率＞100％的情况。

表1 乳酸菌对人工胃液耐受力评价

注：ND表示未检测到。

3.5菌株对胆盐耐受性评价

菌株对小肠内胆盐耐受性是筛选乳酸菌的基本标准之一。人体中胆盐的质量浓度大约为0.03％～0.30％。选择在人工胃液中存活率达到50.00％以上的菌株，测定其在0.10％、0.20％、0.30％3种不同胆盐浓度的生长率来评价菌株对胆盐的耐受力。

结果见表2，在人工胃液中存活率达到50.00％以上的6株乳酸菌在胆盐中的生长率随着胆盐浓度增加而降低，这可能与高胆盐浓度在细胞外产生高渗透压对菌体细胞造成影响导致菌株耐受力下降有关；6株菌中，编号为2016SWU.05.0601的菌株对胆盐的耐受能力最强，在0.30％胆盐中的生长率达到41.64±0.06％，而另外5株乳酸菌对胆盐的耐受性均较差，其中编号为2016SWU.05.1011的菌株虽然在人工胃液中存活率达到102.30％，但在0.30％胆盐中的生长率仅为3.38±0.00％。同时有研究表明，鼠李糖乳杆菌在发酵过程中只产生L-乳酸，产物的单一化使得其产品安全性大大提高，婴幼儿发生不良反应几率下降。因此进一步研究鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601的益生功能及发酵性能具有广泛的应用前景。

表2 乳酸菌在不同浓度胆盐中的生长率

3.6最佳抗性菌株的生化特性鉴定结果

综合比较人工胃液和胆盐耐受性评价结果，编号为2016SWU.05.0601的菌株为最佳抗性菌株。乳酸杆菌种水平的表型鉴定主要依据碳水化合物发酵试验。API50CH试剂盒是通过菌株对49种不同碳水化合物的利用情况来进行鉴定。

图3示出了编号为2016SWU.05.0601的菌株的API 50CH反应结果。表3示出了编号为2016SWU.05.0601的菌株对49种碳水化合物发酵试验结果。由图3和表3可知，在供试的49种碳源中，编号为2016SWU.05.0601的菌株可以利用其中25种碳水化合物。经API lab plus系统最终鉴定，编号为2016SWU.05.0601的菌株为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillusrhamnosus)，其ID值为99.60％，T值为0.76，达到鉴定要求(ID值≥99.0％且T值≥0.5)。

表3 2016SWU.05.0601对49种碳水化合物发酵试验结果

注：“+”代表反应阳性；“－”代表反应阴性。

综合上述实验结果，编号为2016SWU.05.0601的菌株确认为鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)，将其命名为鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601(Lactobacillusrhamnosus2016SWU.05.0601)，于2018年9月4日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC No：M 2018592。

二、鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601对小鼠溃疡性结肠炎的预防作用

1实验材料

实验菌株为鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601(Lactobacillus rhamnosus2016SWU.05.0601)，保藏编号为CCTCC No：M 2018592。

实验动物为6周龄雄性昆明小鼠，购自重庆中药研究院动物实验中心。饲养于室温25±2℃、相对湿度50±5％、12h光照/12h黑暗的标准化实验室中，适应性喂养一周后开始实验。

2实验方法

2.1实验动物分组及处理

将50只昆明小鼠随机分成正常组、模型组、高浓度组、低浓度组、灭活组5组，每组10只。实验周期为5周，正常组和模型组小鼠每天灌胃10ml/kg·BW蒸馏水，高浓度组和低浓度组小鼠每天分别灌胃10¹⁰CFU/kg·BW、10⁹CFU/kg·BW鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601菌液，灭活组小鼠每天灌胃10¹⁰CFU/kg·BW 100℃水浴30min灭活的鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601菌液；第2周和第4周对除正常组以外的各组小鼠进行溃疡性结肠炎造模，造模方法为：第2周，各组小鼠除正常灌胃外每天自由饮用2％DSS溶液，共造模7天；第4周，各组小鼠除正常灌胃外每天自由饮用4％DSS溶液，共造模7天。实验期间观察各组小鼠的精神状态和粪便变化。

2.2结肠长度及重量的测定

实验结束后，所有小鼠禁食禁水24h，摘眼球取血，于4℃、3000r/min离心10min收集血清，-80℃保存备用；取血后脱颈椎处死小鼠，迅速解剖取出结肠组织，进行结肠长度及重量测定。

2.3结肠切片观察

取0.5cm左右的结肠组织，立即放于10％福尔马林溶液中固定48h，经脱水、透明、浸蜡、包埋、切片后进行HE染色，最后在光学显微镜下观察组织形态变化。

2.4血清中细胞因子的测定

按照ELISA试剂盒说明书对小鼠血清中细胞因子IL-1β、IL-4、IL-6、IL-8、TNF-α、TGF-β1含量进行测定。

2.5 qPCR测定结肠组织中mRNA的表达

按照Trizol(Invitrogen，美国加利福尼亚州卡尔斯巴德)说明书提取结肠总RNA，用超微量分光光度计测定总RNA的纯度和浓度，然后将每个样本的RNA浓度调整到同一水平(1μg/μL)；然后取1μg/μL的RNA样品1μL，加入1μL(oligo)primer dT，10μL无菌超纯水，混合物于65℃反应5min；反应完成后，在反应体系中加入1μL Ribolock RNase Inhibitor、2μL100mM dNTP mix、4μL 5×Reaction buffer和1μL Revert Aid M-mu/v RT，混合均匀后，在42℃、60min和70℃、5min条件下合成cDNA；接着以表4所述引物序列对目标基因进行反转录和扩增。反应条件为：95℃变性15min，60℃退火1h，95℃延伸15min，总共40个循环；最后以DAPDH作为持家基因，通过2^-ΔΔCT计算目的基因的相对表达量。

表4 实验中用到的引物序列

3实验结果与分析

3.1鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601对溃疡性结肠炎小鼠结肠长度及重量的影响

结肠长度与重量变化是衡量DSS诱发小鼠溃疡性结肠炎模型是否成功的重要依据。图4示出了小鼠结肠长度变化。由图可知，与正常组小鼠结肠相比，模型组小鼠的结肠炎症现象明显，肉眼可见其结肠缩短、充血水肿，说明DSS诱导小鼠溃疡性结肠炎建模成功；与模型组相比，鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601处理组小鼠的结肠缩短及充血水肿现象有所改善(P<0.05)。

结肠重量与长度的比值通常作为结肠水肿评价指标。因为水肿能增加结肠的重量，且结肠炎小鼠常伴有结肠缩短的特征，故该比值越大，结肠水肿和炎症程度越严重。表5给出了小鼠结肠长度及重量测定结果。由表可知，与正常组相比，模型组小鼠结肠重量与长度的比值显著增加，而经过鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601处理可以显著降低结肠炎小鼠结肠重量与长度的比值。

表5 结肠长度及重量测定

注：标有相同小写英文字母(a、b、c、d)的组之间不存在显著差异(p＞0.05)；标有不同小写英文字母(a、b、c、d)的组之间存在显著差异(p<0.05)。

3.2鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601对溃疡性结肠炎小鼠结肠组织形态的影响

图5示出了小鼠结肠组织切片观察结果。由图可知，正常组小鼠的结肠组织含有丰富的杯状细胞，隐窝和腺体排列整齐，固有层未见炎症浸润现象；模型组小鼠结肠组织中杯状细胞大量丢失，隐窝及腺体结构遭到破坏，结肠粘膜损伤严重，出现水肿现象，并伴随大量炎性细胞浸润；鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601处理可以缓解DSS导致的结肠损伤，其中高浓度组改善效果最好，杯状细胞连续分布，隐窝和腺体结构完整，炎症浸润明显减轻，低浓度组和灭活组也有一定的缓解作用，但效果差于高浓度组。

3.3鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601对溃疡性结肠炎小鼠血清中细胞因子的影响

IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α是结肠炎的发生与发展中至关重要的几种促炎因子。IL-1β主要由单核巨噬细胞产生，可以引起肠道炎症和局部并发症。IL-6是一种由单核细胞、巨噬细胞、T细胞等多种细胞产生的多效性细胞因子，具有趋化白细胞，调节T细胞分化等多种功能。IL-8可以激活并趋化中性粒细胞，使其定向移动到反应部位，释放活性物质，损伤细胞，引发局部炎症反应。TNF-α可以通过NF-κB通路进一步激活其他促炎因子如IL-1β、IL-6等的表达，致使免疫应答紊乱。IL-4和TGF-β是重要的抑炎因子，对结肠炎的发生和发展具有一定的抑制作用。研究表明IL-4在血清中含量增加有助于缓解炎症。TGF-β是一类具有免疫负调控的细胞因子，可以通过下调免疫反应来抑制炎症的发生，进而维持肠道免疫平衡。

图6示出了鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601对小鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-4和TGF-β含量的影响。由图可知，与正常组相比，模型组小鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量显著增加，反之IL-4和TGF-β含量显著下降；经过鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601处理后，结肠炎小鼠血清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量均有不同程度的下降，IL-4和TGF-β表达水平也有不同程度的提升，且高浓度组效果最佳。这说明鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601可以通过下调促炎因子，上调抑炎因子的表达缓解肠道炎症，从而改善溃疡性结肠炎的发生与发展，对溃疡性结肠炎起到预防作用。

3.4鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601对结肠炎小鼠结肠组织中mRNA表达的影响

一氧化氮(NO)在结肠炎的肠黏膜损伤中发挥着重要的作用。一氧化氮合酶(NOS)是NO合成过程中唯一的酶。NOS按其来源分为3种类型：神经型(nNOS)、内皮型(eNOS)和诱生型(iNOS)，前两种合称为结构型NOS(cNOS)。cNOS是钙离子和钙调蛋白依赖性酶，持续释放少量NO，NO作为神经递质调节局部血流。iNOS是钙离子和钙调蛋白非依赖性酶，在正常生理状态下不表达，但在炎症时表达。COX-2是环氧合酶家族中的一种诱导型酶，诱导前列腺素E2(PGE2)等炎症性前列腺素的产生，而PGE2的过量表达导致血管通透性增加，使得肠黏膜充血水肿。NF-κB是一类关键的核转录因子，能够被很多炎症细胞因子、趋化因子激活。当细胞受到外界信号刺激时，IκBα被磷酸化激活而发生泛素化，使得NF-κB从复合物中游离出来，与相应的靶向基因结合。而过度表达的NF-κB导致炎症介质IL-1β、TNF-α、iNOS合成增多。

图7示出了鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601对结肠中IL-1β、TNF-α、eNOS、nNOS、iNOS、COX-2、NF-κB和IκBαmRNA表达的影响。由图可知，与正常组相比，模型组小鼠结肠组织中IL-1β、TNF-α、iNOS、COX-2、NF-κB的表达量均显著性增加，eNOS、nNOS和IκBα的表达量显著降低，而鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601处理组可以显著性降低溃疡性结肠炎小鼠结肠组织中IL-1β、TNF-α、iNOS、COX-2、NF-κB等促炎介质的表达，促进eNOS、nNOS和IκBα的表达，从而改善肠道炎症。

最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过参照本发明的优选实施例已经对本发明进行了描述，但本领域的普通技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离所附权利要求书所限定的本发明的精神和范围。

序列表

<110> 西南大学

<120> 一种鼠李糖乳杆菌在制备预防溃疡性结肠炎的保健食品和药品中的应用

<160> 19

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1360

<212> DNA

<213> 鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601(Lactobacillus rhamnosus 2016SWU.05.0601)

<400> 1

tgcatcttga tttaattttg aacgagtggc ggacgggtga gtaacacgtg ggtaacctgc 60

ccttaagtgg gggataacat ttggaaacag atgctaatac cgcataaatc caagaaccgc 120

atggttcttg gctgaaagat ggcgtaagct atcgcttttg gatggacccg cggcgtatta 180

gctagttggt gaggtaacgg ctcaccaagg caatgatacg tagccgaact gagaggttga 240

tcggccacat tgggactgag acacggccca aactcctacg ggaggcagca gtagggaatc 300

ttccacaatg gacgcaagtc tgatggagca acgccgcgtg agtgaagaag gctttcgggt 360

cgtaaaactc tgttgttgga gaagaatggt cggcagagta actgttgtcg gcgtgacggt 420

atccaaccag aaagccacgg ctaactacgt gccagcagcc gcggtaatac gtaggtggca 480

agcgttatcc ggatttattg ggcgtaaagc gagcgcaggc ggttttttaa gtctgatgtg 540

aaagccctcg gcttaaccga ggaagtgcat cggaaactgg gaaacttgag tgcagaagag 600

gacagtggaa ctccatgtgt agcggtgaaa tgcgtagata tatggaagaa caccagtggc 660

gaaggcggct gtctggtctg taactgacgc tgaggctcga aagcatgggt agcgaacagg 720

attagatacc ctggtagtcc atgccgtaaa cgatgaatgc taggtgttgg agggtttccg 780

cccttcagtg ccgcagctaa cgcattaagc attccgcctg gggagtacga ccgcaaggtt 840

gaaactcaaa ggaattgacg ggggcccgca caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa 900

gcaacgcgaa gaaccttacc aggtcttgac atcttttgat cacctgagag atcaggtttc 960

cccttcgggg gcaaaatgac aggtggtgca tggttgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt 1020

tgggttaagt cccgcaacga gcgcaaccct tatgactagt tgccagcatt tagttgggca 1080

ctctagtaag actgccggtg acaaaccgga ggaaggtggg gatgacgtca aatcatcatg 1140

ccccttatga cctgggctac acacgtgcta caatggatgg tacaacgagt tgcgagaccg 1200

cgaggtcaag ctaatctctt aaagccattc tcagttcgga ctgtaggctg caactcgcct 1260

acacgaagtc ggaatcgcta gtaatcgcgg atcagcacgc cgcggtgaat acgttcccgg 1320

gccttgtaca caccgcccgt cacaccatga gagtttgtaa 1360

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

aggtcggtgt gaacggattt g 21

<210> 3

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ggggtcgttg atggcaaca 19

<210> 4

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tgaaggacga ggagtacgag c 21

<210> 5

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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tgcaggaacg agtctccgt 19

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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atggcagacg atgatcccta c 21

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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cggaatcgaa atcccctctg tt 22

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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gttctcagcc caacaataca aga 23

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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gtggacgggt cgatgtcac 19

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<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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tcagccatca cagtgttccc 20

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<212> DNA

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atagcccgca tagcgtatca g 21

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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cccaacgtca tttctgtccg t 21

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tggatgctct catcaggaca g 21

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caggcggtgc ctatgtctc 19

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cgatcacccc gaagttcagt ag 22

Claims

1.保藏编号为CCTCC NO：M 2018592的鼠李糖乳杆菌2016SWU.05.0601(Lactobacillusrhamnosus 2016SWU.05.0601)在制备预防溃疡性结肠炎的药品中的应用。