CN109651469B - 阿扎胞苷二糖杂质与其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉阿扎胞苷二糖杂质及其制备方法与应用，以式Ⅳ所示的化合物作为起始原料，与四乙酰基核糖在Lewis酸的催化作用下制得式Ⅲ的化合物，式Ⅲ化合物水解制得式Ⅱ的化合物。制备的式Ⅱ的化合物可作为阿扎胞苷的有关物质检测用对照品，用于阿扎胞苷及其相关制剂的质量控制的应用。

Description

阿扎胞苷二糖杂质与其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及阿扎胞苷二糖杂质与其制备方法与应用。
背景技术
阿扎胞苷(Azacitidine)最早由捷克斯洛伐克科学家Piskala和Sorm合成，后来又从拉达克链轮丝菌(Streptoverticilliumladakanus)发酵液中被分离得到。
阿扎胞苷为胞苷的5-氮杂类似物，属于一类被称为低甲基化药物(Hypomethylating agents)的表观遗传学(Epigenetic)抗肿瘤药。异常的DNA甲基化使得调控正常细胞生长、分化和凋亡的关键基因失活，与肿瘤的发生和发展有关。阿扎胞苷治疗MDS有效主要源自其DNA低甲基化活性和对骨髓中异常造血细胞的直接细胞毒作用。阿扎胞苷为DNA甲基转移酶抑制剂，其在最大抑制DNA甲基化的浓度时并不会显著抑制DNA合成。
阿扎胞苷结构式如式Ⅰ所示：
Figure BDA0001429383970000011
在阿扎胞苷的生产过程中可能会产生少量的如式Ⅱ所示结构的杂质：
Figure BDA0001429383970000012
关于该杂质的制备分离方法，国内外尚未有文献报道，因此阿扎胞苷的二糖杂质是阿扎胞苷原料药及相关制剂的质量研究的重要化合物。
发明内容
在研究中我们发现阿扎胞苷在生产过程中会产生少量的式Ⅱ的化合物杂质。因此本发明对该化合物的合成进行了研究。
本发明的第一个方面提供具有式Ⅱ、Ⅲ所示结构的化合物：
Figure BDA0001429383970000021
本发明的第二个方面，提供一种式Ⅱ所示化合物的制备方法，其路线如下所示：
Figure BDA0001429383970000022
本发明所述的制备方法包括：步骤1：式Ⅳ所示化合物与四乙酰基核糖在路易斯酸的催化作用下进行反应制备得式Ⅲ所示化合物；步骤2：式Ⅲ所示化合物进行水解反应后制备得到式Ⅱ所示的化合物。
所述步骤1中的路易斯酸选自三氟甲磺酸三甲基硅酯或三氯化铝，优选自三氯化铝。
所述路易斯酸与四乙酰基核糖的投料摩尔比为1～10:1，优选2～5:1，优选自2.5～3:1。
所述式Ⅳ所示化合物与四乙酰基核糖的投料量摩尔比为1.5～10:1，优选2～6:1，进一步，优选自3.5～5:1。
所述步骤1中的反应是在有机溶剂下进行的，所述有机溶剂可以为非质子性溶剂，优选自二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷中的一种或几种。
所述步骤1中的反应温度为20～60℃，优选20～50℃。
所述步骤2的水解反应是在碱性物质下进行的，所述碱性物质选自甲醇钠。
所述水解反应是在质子性溶剂下进行的，所述质子性溶剂选自甲醇或乙醇中的一种或两种混合。
所述水解反应的温度为0～30℃，优选0～10℃，进一步优选为5～10℃。
本发明的第三个方面，提供式Ⅱ化合物作为对照品在阿扎胞苷及其相关制剂的质量控制的应用。式Ⅱ所示的化合物可作为杂质作为阿扎胞苷的有关物质检测用对照品，用于阿扎胞苷及其相关制剂的质量控制的应用。
具体实施方式
本发明将于下文通过实施例更加详细的描述，这些实施例示例性地用于进一步说明，且不应当视为对本发明的限制。
使用Bruker的光谱仪在室温记录1H-NMR谱。将氘代二甲亚砜作溶剂，所述溶剂包括四甲基硅烷作为内标(如果没有另外提及的话)。使用安捷伦6100液质连用仪记录MS谱。给出了相对信号强度(以基于主峰的百分比表示)。使用安捷伦1200HPLC进行纯度检查。确定的条件伴随各自的工作实施例给出。
实验过程中各化合物的分子量如下所示：
Figure BDA0001429383970000031
实施例1：式Ⅲ化合物的制备
将四乙酰基核糖20g(62.9mmol)与式Ⅳ的化合物57g(222.7mmol)混合，加入二氯甲烷，升温至30℃，加入三氯化铝21g(157.9mmol)，反应23小时。降温至常温25℃，将反应液倒入到碳酸氢钠的冰水中，同时加入二氯甲烷，过滤除去不溶物，分液，有机相浓缩至干。硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝30:1)，得到类白色固体24.1g(38.3mmol，收率61％)。
实施例2：式Ⅲ化合物的制备
将四乙酰基核糖17g(53.4mmol)与式Ⅳ的化合物55g(214.5mmol)混合，加入1,2-二氯甲烷，升温至50℃，加入三氯化铝18g(133.5mmol)，反应19小时。降温至常温25℃，将反应液倒入到碳酸氢钠的冰水中，同时加入二氯甲烷，过滤除去不溶物，分液，有机相浓缩至干。硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝30:1)，得到类白色固体19.1g(30.4mmol，收率57％)。
实施例3：式Ⅲ化合物的制备
将四乙酰基核糖15g(47.1mmol)与式Ⅳ的化合物60g(235.6mmol)混合，加入1,2-二氯甲烷，升温至30℃，加入三氟甲磺酸三甲基硅酯42g(188.4mmol.)，反应19小时。降温至常温25℃，将反应液倒入到碳酸氢钠的冰水中，同时加入二氯甲烷，过滤除去不溶物，分液，有机相浓缩至干。硅胶柱层析纯化(洗脱剂：二氯甲烷/甲醇＝30:1)，得到类白色固体13.0g(20.7mmol，收率44％)。
式Ⅲ所示的化合物的结构确证数据见表1和表2所示。
Figure BDA0001429383970000041
表1氢谱测定结果
化学位移 质子数 峰形 相关质子化学位移 归属 备注
9.18 1 d 5.70 H15 J＝9.2Hz
8.50 1 s / H17 /
5.76 1 d 5.59 H8 J＝3.6Hz
5.70 1 dd 5.21 H25 J＝9.2,5.7Hz
5.59 1 dd 5.44,5.76 H6 J＝6.2,3.6Hz
5.44 1 t 4.26,5.59 H4 J＝6.5Hz
5.29 1 m 4.16,5.21 H21 /
5.21 1 t 5.29 H23 J＝5.6Hz
4.36 1 dd 4.26 H2 J＝11.7,3.1Hz
4.26 1 m 4.10,4.36,5.44 H3 /
4.24 1 m 4.16 H19 /
4.16 1 m 5.29 H20 /
4.11 1 m 4.16 H19 /
4.10 1 m 4.26 H2 /
2.06 18 s / H28,H31,H34,H38,H40,H43 /
表2碳谱测定结果
Figure BDA0001429383970000051
实施例4：式Ⅱ化合物的制备
将式Ⅲ的化合物31g(49.3mmol)与甲醇250mL，乙醇50mL混合溶解，降温至5℃，加入甲醇钠甲醇溶液(30wt％)1mL，搅拌30分钟，大量淡黄色固体析出，过滤，干燥得白色固体16.4g。制备HPLC分离纯化得白色固体10.2g(27.1mmol，收率55％)。
实施例5：式Ⅱ化合物的制备
将式Ⅲ的化合物29g(46.1mmol)与乙醇500mL混合溶解，降温至5℃，加入甲醇钠甲醇溶液(30wt％)2mL，搅拌30分钟，大量淡黄色固体析出，过滤，干燥得白色固体15.2g。制备HPLC分离纯化得白色固体11.1g(29.5mmol，收率64％)。
结构确证：
式Ⅱ所示的化合物的结构确证数据如表3和表4所示。
Figure BDA0001429383970000061
表3氢谱测定结果
化学位移 质子数 峰形 相关质子化学位移 归属 备注
8.67 1 s / H2 /
5.99 1 br s / H6 重水交换消失
5.68 1 d 4.08 H11 J＝3.5Hz
5.40 1 d 3.89 H19 J＝4.0Hz
4.08 1 t 3.87,4.02,5.68 H10 J＝4.0Hz
4.02 1 t 3.89 H17 J＝4.0Hz
3.91 1 d 3.74,4.02,5.40 H18 J＝4.0Hz
3.89 1 d 3.91,4.08 H9 J＝4.0Hz
3.87 1 t 3.58,3.71,3.87 H13 J＝4.0Hz
3.74 1 t 3.39,3.47 H21 J＝4.0Hz
3.71 1 dd 3.58,3.91 H15-1 J＝12.2,2.8Hz
3.58 1 dd 3.71,3.91 H15-2 J＝12.2,2.8Hz
3.47 1 dd 3.39,3.74 H24-1 J＝11.7,4.6Hz
3.39 1 dd 3.47,3.74 H24-2 J＝11.7,4.6Hz
表4碳谱测定结果
Figure BDA0001429383970000062
Figure BDA0001429383970000071

Claims (4)

1.一种式Ⅱ所示化合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
Figure QLYQS_1
步骤1：式Ⅳ所示化合物与四乙酰基核糖在路易斯酸的催化作用下进行反应制备得式Ⅲ所示化合物；所述路易斯酸选自三氟甲磺酸三甲基硅酯或三氯化铝；路易斯酸与四乙酰基核糖的投料摩尔比为2～5:1；式Ⅳ所示化合物与四乙酰基核糖的投料量摩尔比为3.5～5:1；步骤1的反应是在有机溶剂下进行的，所述有机溶剂选自二氯甲烷、氯仿或1,2-二氯乙烷中的一种或几种；反应温度为30～50℃；
步骤2：式Ⅲ所示化合物进行水解反应后制备得到式Ⅱ所示的化合物；所述水解反应是在碱性物质下进行的，所述碱性物质选自甲醇钠；步骤2的反应是在质子性溶剂下进行的，所述质子性溶剂选自甲醇或乙醇中的一种或两种混合；反应的温度为0～10℃。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤1中的路易斯酸选自三氯化铝。
3.如权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于所述路易斯酸与四乙酰基核糖的投料摩尔比为2.5～3:1。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于所述步骤2的反应的温度为5～10℃。
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