CN109646671B - 一种生长因子制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种生长因子制剂及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及药物制剂领域，尤其涉及一种生长因子制剂及其制备方法和应用。本发明所述生长因子制剂包括：活性不低于0.3×105IU％的生长因子、0.05％‑0.5％的活性促进剂、0.02％‑0.1％的蛋白多肽活性稳定剂、0.01‑0.05％的蛋白酶抑制剂。所述生长因子制剂可制备成凝胶剂，通过局部外用给药直接作用于宫颈糜烂和女阴部位，发挥生长因子促进创伤愈合、粘膜与皮肤组织的修复作用，为宫颈糜烂等妇科相关疾病的预防、修复和治疗提供了一种新的简易给药途径。

Description

一种生长因子制剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于药物技术领域，涉及一种生长因子制剂及其制备方法和应用。
背景技术
(一)相关妇科疾病
妇科炎症是女性的常见疾病，主要是指女性生殖器官的炎症，女性的生殖器官通常发生不同的急性和慢性炎症，在受到各种致病菌侵袭感染后发生的炎症。在日常生活中，常见的妇科炎症有：阴道炎、外阴炎、盆腔炎、尿道炎、附件炎、宫颈炎等等。
宫颈炎和阴道炎是女性常见病、多发病。慢性宫颈炎的表现形式和局部特征之一就是宫颈糜烂，有资料显示，其发病率在已婚已育妇女中可高达40％～60％。宫颈糜烂是慢性子宫炎病变过程中最常见的局部特征，是指宫颈外口表皮脱落，被宫颈口另外一种上皮细胞代替，由于覆盖面的新生上皮非常薄，甚至可以见到下方的血管和红色的组织，看上去像真正的糜烂而得名。宫颈口受炎性分泌物浸渍，宫颈鳞状上皮脱落，由宫颈管的柱状上皮覆盖代替，即表现为宫颈糜烂，由于其与宫颈癌的发生密切相关，因而对该病的防治应引起足够的重视。目前，临床对于宫颈糜烂的防治尚无安全有效的方法，其治疗仍以物理疗法为主，主要通过冷、热等各种物理手段(激光、冷冻、红外线及微波等)，将宫颈糜烂面单层柱状上皮破坏，使其坏死脱落后，为新生的复层鳞状上皮覆盖。物理疗法治疗宫颈糜烂的疗效是肯定的，但存在术后阴道长时间分泌物增多，甚至有大量水样排液及脱痂时出血，创面愈合时间长，且在创面尚未愈合期间需禁止性生活等缺点，许多患者不愿接受物理疗法。因此寻找一种能有效治疗宫颈糜烂，又能避免物理治疗的副反应，对于防止宫颈癌变具有非常积极的意义。
(二)相关生长因子
生长因子是生物体在伤口愈合的过程中，所分泌出来的化学物质。目前已经发现有上百种生长因子。最主要的功能包括有调节免疫反应、合成胶原蛋白及醣蛋白、调节血管新生(angiogenesis)、调节血管内皮细胞(endothelial cells)、成纤维细胞(fibroblasts)、炎症细胞因子的增生或是抑制等。目前在皮肤伤口愈合中扮演重要角色的生长因子包括有：
1.VEGF(vascular endothelial growth factor)
2.HGF(hepatocyte growth factor)
3.PDGF(platelet-derived growth factor)
4.EGF(epidermal growth factor)
5.G-CSF(granulocyte colony stimulating factor)
6.TGF-beta(transforming growth factor beta)
7.KGF(keratinocyte growth factor)
8.FGF-1 and FGF-2(acidic and basic fibroblast growth factor)
9.IGF(insuline-like growth factor)
表皮生长因子(Epidermal Growth Factor，EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，FGF)受到非常的关注，分述如下：
表皮生长因子(Epidermal Growth Factor，EGF)
美国Cohen博士于1962年首先发现EGF，它可以促进实验室中培养的皮肤表皮细胞生长，因而将其命名为表皮生长因子。Cohen博士因EGF的相关研究，于1986年荣获诺贝尔生理医学奖。
人表皮生长因子(Human Epidermal Growth Factor,以下简称hEGF)，是人体内分泌的一种重要的生长因子，是由53个氨基酸组成的多肽，分子量大约6KDa，对热稳定。EGF广泛存在于人与动物的皮肤，粘膜，胎盘等部位，不同的哺乳类动物EGF的氨基酸序列，具有很高百分比的同源性。外用EGF，在结合于细胞膜的EGF接受体后，活化许多不同的酵素，催化各种生化反应，而产生以下的生理或者药理活性：
1.抗衰老作用：促进皮肤细胞再生，延缓皮肤老化。EGF可以促进真皮层成纤维细胞的生长与分化，增加皮肤的修复能力，加速伤口愈合。另一方面，EGF能加速皮肤新陈代谢的速率，促使表皮老化细胞更新脱落，并且使皮肤弹性明显提高，减少皱纹的产生，改善皮肤肤质。
2.修复作用：促进创伤，粘膜与角膜组织的修复。EGF结合接受体后，活化蛋白质激酶(protein kinases)，使细胞质中许多蛋白质进行磷酸化作用(phosphorylation)，进而加速细胞核中DNA与RNA的合成，使得许多与创伤，黏膜，角膜修复有关的基因大量表现，而促进组织修复。
在医学临床上，EGF主要应用于外科各种创伤，烧烫伤，黏膜组织溃烂等组织修复；而眼科则着重于眼角膜外伤与眼角膜溃烂的修复。我们利用hEGF促进皮肤细胞的分裂和生长，縮短创面修复及愈合时间，促进皮肤的代谢等作用，拟将其用到妇科炎症方面。
在美容方面，EGF主要作为各种抗老化生物制剂或者护肤产品的活性成分，利用EGF加速皮肤新陈代谢速率的作用，以及EGF促进表皮细胞，真皮层成纤维细胞生长与分化的功能，有效改善皮肤肤质，增加皮肤弹性。具有修复表皮、抗衰老、淡化色斑、平复皱纹、滋润之功效，人体中EGF的含量多少直接决定着皮肤的年轻程度，EGF因此又被誉为“美丽因子”。
碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)
成纤维细胞生长因子FGF源自于胚胎发育过程的中胚层与神经组织外胚层，是一种具有多种功能的细胞激素，也是一种强效的有丝分裂原(mitogen)。由于FGF与肝素heparin有较高的亲和力，因此也称为肝素结合生长因子Heparin-binding growth factor(HBGF)。FGF的种类众多，较常见的有酸性成纤维细胞生长因子(acidic fibroblastgrowth factor，aFGF)，碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor，bFGF)，角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor，KGF)等三种。aFGF、bFGF、KGF又分别称为FGF-1、FGF-2与FGF-7。
FGF最主要的药理活性是促进人体各种组织的修复，创伤伤口愈合血管新生。FGF可以促进成成纤维细胞，成骨细胞，神经细胞，角质细胞，血管内皮细胞等各种细胞的生长，进而促使骨骼，神经，肌肉，皮肤，血管的再生与修复。
FGF作用机理：
FGF促进伤口愈合的机理是FGF可以诱发巨噬细胞，成纤维细胞，内皮细胞往创伤部位移动，启动伤口愈合的过程。另一方面，FGF可以促使血管内皮细胞的生长及迁移而加速血管新生作用(angiogenesis)。
bFGF在临床的应用着重于烧烫伤，外伤伤口修复以及神经肌肉萎缩等治疗。在美容方面，bFGF同EGF一样，也是作为各种抗老化的活性成分，促进表皮，真皮细胞的生长，增加皮肤弹性，减少皱纹，延缓皮肤老化。
(三)基因工程技术与基因工程药物
基因工程技术是以沃森(Waston)和克里克(Crick)在1953年提出DAN的双螺旋模型为理论基础，于20世纪70年代发展起来的DNA重组技术，它是利用人工的方法将将一种生物体(供体)的基因与载体在体外进行拼接重组，获得重组的DNA分子，然后导入宿主细胞(微生物或真核细胞)或者个体内进行无性繁殖，使重组基因在细胞内按照人们的意愿稳定遗传并表达出人类需要的基因产物，或者改造、创造新的生物类型。基因工程技术目前已被广泛地应用于农业、畜牧业、医药及环保等领域。
基因工程技术制取新药方面取得了惊人的成就，已有不少药物应用于临床。例如人胰岛素、人生长激素、干扰素、乙肝疫苗、人促红细胞生成素、GM－集落刺激因子、组织溶纤酶原激活素、白细胞介素－2及白介素－11等。正在研究的有降钙素基因相关因子、肿瘤坏死因子、重组人表皮生长因子等140多种。基因工程药物对预防人类的肿瘤、心血管疾病、遗传病、糖尿病、包括艾滋病在内的各种传染病、类风湿疾病等有重要作用。随着生物技术药物的发展，多肽与蛋白质类药物的研究与开发，已成为医药工业中一个重要的领域，是全球发展最快的产业之一，发展前景非常广阔。
随着生物技术药物的发展，多肽与蛋白质类药物的研究与开发，已成为医药工业中一个重要的领域，同时给生物制剂带来了新的挑战。生物制剂虽然疗效显著且安全无毒副作用，在实际应用中，基因工程药物受到一定限制，(1)口服应用时生物利用度低，会受到消化酶的破坏，在胃酸作用下不稳定，在体内半衰期较短等，因此只能注射给药或局部用药；生长因子化学本质为蛋白多肽类，人皮肤表面存在大量的蛋白酶，接触皮肤后，会很快被皮肤表面的蛋白酶降解而失去活性。(2)分子量较大一些生长因子皮肤外用时难以透过皮肤进行吸收；(3)生长因子在常温下难以保持其生物学活性。在常温下放置短时间后，其即失去其生物学活性，其水溶液一般要置于低温下保存。故其生产、运输、保存都成为不可逾越的鸿沟，从而阻碍了其实际应用。
发明内容
为了解决现有技术中生长因子临床上直接外用受限的问题，本发明提供了一种生长因子制剂，可有效用于预防、修复和治疗包括宫颈糜烂、阴道炎、外阴炎的妇科相关疾病。
具体而言，本发明所提供的生长因子制剂，包括：活性不低于0.3×105IU％的生长因子、0.05％-0.5％的活性促进剂、0.02％-0.1％的蛋白多肽活性稳定剂、0.01-0.05％的蛋白酶抑制剂；
所述活性促进剂选自胶原蛋白、转移因子、山梨糖醇中的一种或几种；
所述蛋白多肽活性稳定剂选自透明质酸钠和/或山梨糖醇或甘露醇；
所述蛋白酶抑制剂选自EDTA二钠、硼酸亮氨酸、硼酸缬氨酸、硼酸丙氨酸、N-乙酰半胱氨酸中的一种或几种。
本发明以透明质酸、山梨糖醇、甘露醇作为蛋白多肽活性稳定剂，由于透明质酸等蛋白多肽活性稳定剂的直链轴上单糖之间氢键的作用，分子在空间上呈刚性的螺旋柱状结构，柱的内侧由于存在大量的羟基而产生强亲水性及甘露醇、山梨糖醇的醇羟基，能够使细胞因子蛋白吸附或固定其中，保持其空间结构不变，保持了蛋白活性，从而具有稳定细胞因子蛋白活性作用的优点。
本发明选择以胶原蛋白(优选水溶性)、转移因子、山梨糖醇中的一种或几种作为活性促进剂。该活性促进剂的特殊结构能够保持生长因子蛋白的空间结构，利于其活性发挥。在空间结构上，胶原蛋白显示出特殊的三股螺旋缠绕的结构，三条相互独立的胶原蛋白肽链依靠甘氨酸之间形成的氢键维系三股螺旋相互缠绕的结构；在结缔组织中胶原蛋白常与及多糖蛋白相互交织成网状结构，保持生长因子蛋白的空间结构，使其易于作用物接触而起作用；选择转移因子时，由于其含有小分子多肽，对生长因子蛋白起到“伴陪”作用，具有促进生长因子蛋白发挥作用的优点。而山梨糖醇具有保湿、螯合金属离子抗蛋白水解酶作用；它与氨基酸，蛋白质等不易起美拉德反应，减缓凝胶发生褐变速度，抗氧化性可有效防止蛋白质的冷冻变性(如鱼肉蛋白质)和降低了蛋白质的盐析作用。
优选地，所述蛋白酶抑制剂选自EDTA二钠、硼酸亮氨酸、硼酸缬氨酸、硼酸丙氨酸、N-乙酰半胱氨酸中的一种或几种。其中，尤其优选EDTA二钠。蛋白水解酶能够水解破坏生长因子蛋白质，但它水解蛋白时常需要二价金属离子，而EDTA能够络合二价金属离子，起到抑制蛋白水解酶的作用，另外，EDTA还能降低金属离子对油脂的催化氧化作用，防止酸败，对防腐体系和抗氧化体系有一定协同增效作用；氨基酸是一类低毒或无毒、分子量很小的化合物，修饰后的氨基酸衍生物抑制作用较强。有一种被称为“过渡态”的修饰化氨基酸抑制剂，如硼酸亮氨酸(boroleucine)、硼酸缬氨酸(borovaline)、硼酸丙氨酸(boroalanine)等，过渡态构型与底物结构相似，但与酶结合位点的亲和力更强，是氨肽酶的可逆性强抑制剂。N-乙酰半胱氨酸，毒性低，对纯化的氨肽酶N有很强的抑制作用，且具黏膜溶解性，能降低黏膜屏障作用，是较有前途的酶抑制剂。该蛋白酶抑制剂组合具有既能抑制蛋白水解酶的作用又有抑制氨肽酶作用的优点。
本发明通过将蛋白多肽活性稳定剂、活性促进剂和蛋白酶抑制剂与生长因子配伍，相互融合，能够保持生长因子的空间结构，抑制可能存在的蛋白水解酶活性，有效的改善了生长因子的透过皮肤进行吸收效果、提高了其在常温下的生物学活性及其稳定性，配方优势非常显著。
优选地，所述生长因子的活性为0.3×105-1.5×105IU％，优选0.9×105IU％，或活性大于1.5×105IU％。在该活性条件下，所述生长因子能够最佳的发挥其生物学效应，具有最佳的修复损伤的内皮细胞等功能及性价比的优点。
优选地，所述生长因子为所述生长因子为表皮生长因子、成成纤维细胞生长因子、生长因子HGF及生长激素GH中的一种或多种。
作为本发明的一个优选的实施方案，本发明所述生长因子可以为活性蛋白质或多肽类物质。所述活性蛋白质包括但不限于(均为已知可市售购得或自行制备的活性蛋白质)：分子量小于30kDa重组牛碱性成纤维细胞生长因子；所述多肽类物质包括但不限于：分子量为6.2kDa的重组人表皮生长因子(rhEGF)。
作为本发明的另一个优选的实施方案，本发明所述生长因子的分子量6.2KDa的rhEGF。该分子量的生长因子能够刺激多种细胞的增殖，主要是表皮细胞、内皮细胞，具有广泛的生物学效应,能极强地促进各种表皮组织生长和耐热耐酸、非常稳定的优点。
本发明所述生长因子能够可刺激多种细胞的增殖，促进新血管形成，修复损害的内皮细胞，具有促进各种表皮组织生长,在医学上己用于烧烫伤、溃疡、各类创伤以及角膜损伤等的治疗。所述生长因子还具有均由基因重组技术生产，无糖基部位，非常稳定，对人体无毒副作用和依赖性的优点。
优选地，所述生长因子在所述生长因子制剂中的适宜浓度为1.8-3μg/g。
本发明所述生长因子可通过本领域常规已知技术手段制备得到，例如可通过现代的基因工程技术表达纯化制得；优选地，通过大肠杆菌、酵母、昆虫或CHO表达制得。
优选地，本发明所述的生长因子制剂中还包括0.30-0.80％的流变调节剂，优选所述流变调节剂为卡波姆940。
优选地，本发明所述的生长因子制剂中还包括保湿剂和/或防腐剂，优选所述保湿剂为丁二醇、角鲨烷、甘油、透明质酸、水溶性胶原蛋白中的一种或几种；所述防腐剂为羟苯甲酯和/或苯氧乙醇。
优选地，所述生长因子制剂的pH值为5-6.8；优选以柠檬酸及L精氨酸的混合物作为pH调节剂，更优选柠檬酸及L精氨酸的质量比为0.4-0.8:6-13。
作为本发明的一个优选的实施方案，当所述生长因子为表皮生长因子时，所述蛋白多肽活性稳定剂为透明质酸钠和/或山梨糖醇或甘露醇，所述活性促进剂为水溶性胶原蛋白和山梨糖醇，所述蛋白酶抑制剂为乙二胺四乙酸二钠；
当所述生长因子为成纤维细胞生长因子时，所述蛋白多肽活性稳定剂为透明质酸钠和/或山梨糖醇或甘露醇，所述活性促进剂为水溶性胶原蛋白/转移因子/山梨糖醇，所述蛋白酶抑制剂为乙二胺四乙酸二钠。
本发明所述生长因子制剂可根据疾病类型、施用方式、目的等，制备成本领域常见的凝胶剂制剂类型。
优选地，所述生长因子制剂为凝胶剂；按重量百分比计，所述凝胶剂的配方为：
Figure BDA0001921426050000081
优选地，所述生长因子活性为0.9×105IU-1.5×105IU％的表皮生长因子，所述蛋白多肽活性稳定剂为透明质酸钠，所述活性促进剂为重量比为1:1的水溶性胶原蛋白和山梨糖醇，所述蛋白酶抑制剂为乙二胺四乙酸二钠，所述流变调节剂为卡波姆940，所述保湿剂为丁二醇，所述防腐剂为重量比为1-4:1-3的羟苯甲酯和苯氧乙醇的混合物；
更优选地，所述凝胶剂的pH值为5-6.8(以重量比为0.4-0.8:6-13的柠檬酸和L精氨酸的混合物作为pH调节剂)。
上述配方下的生长因子凝胶剂体现出尤为突出的生物学活性，制剂质量也得到了明显保障。具体而言，本发明选用蛋白多肽活性稳定剂如透明质酸由于其分子在空间上呈刚性的螺旋柱状结构，柱的内侧存在大量的羟基而产生强亲水性能够使细胞因子蛋白吸附或固定其中，保持其空间结构不变，从而保持了蛋白活性，具有稳定细胞因子蛋白活性作用的优点。选用蛋白活性促进剂如胶原蛋白具有的氢键维系三股螺旋相互缠绕的、相互交织成网状特殊结构利于其活性发挥。本发明通过将蛋白多肽活性稳定剂、活性促进剂和蛋白酶抑制剂与生长因子配伍，相互融合，能够保持生长因子的空间结构；蛋白酶抑制剂抑制可能存在的蛋白水解酶活性，透皮剂有效的改善了生长因子的透过皮肤进行吸收效果、提高了其在常温下的生物学活性及其稳定性，配方优势非常显著。
本发明所得凝胶料体晶莹剔透，粘度合适，使用方便，易于涂抹，无不良气味，不会给患者带来不良体感。在实际应用过程中发现，采用上述配方所制得的凝胶剂，使用时可充分被人体吸收，常温条件下保存较长时间依然能保持理想的应用效果，其稳定性优良；另外，蛋白多肽活性稳定剂和活性促进剂的分子中特殊网状结构吸附的细胞因子，在作用时会延缓的慢慢释放，使作用时间延长，起到现理想的可控释放，使小剂量而达到更好的效果。
本发明所述凝胶剂可通过本领域常规方法制备得到，为了得到效果更好的凝胶剂，本发明同时提供了凝胶剂形式的生长因子制剂的制备方法，其中，所述方法包括如下步骤：
1)将流变调节剂及蛋白多肽活性稳定剂用保湿剂配方量的55-65％分散至水配方量的75-85％中，搅拌均匀，加入蛋白酶抑制剂搅拌至分散均匀，制得凝胶液体A；
2)将pH调节剂用水配方量的4-8％溶解，对步骤1)制得的凝胶液体A进行pH调节，得凝胶液体B；
3)将防腐剂溶解于配方量余量的保湿剂中，然后加入步骤2)制得的凝胶液体B中，得凝胶液体C；
4)将生长因子及活性促进剂溶解于余量水中，并在负压下加入步骤3)制得的凝胶液体C，搅拌，即得所述凝胶剂。
本发明同时提供了上述生长因子制剂在预防、修复和治疗妇科相关疾病中的用途。
本发明还提供了上述生长因子制剂在制备用于预防、修复和治疗妇科疾病的药物中的应用。
优选地，所述妇科疾病包括宫颈糜烂、宫颈炎、阴道炎、外阴炎症等。
本发明所述生长因子制剂具有如下优点：
本发明所述的生长因子制剂在预防、修复和治疗妇科相关疾病中具有显著的效果，其保证了生长因子在制剂中的活性，该凝胶剂剂型，发挥促进创伤愈合、粘膜与皮肤组织的修复作用，为宫颈糜烂等妇科相关疾病的预防、修复和治疗提供了一种新的给药途径。
附图说明
图1是宫颈糜烂模型动物阴道口红肿及分泌物情况外观图。
图2是宫颈糜烂模型动物阴道和宫颈部位水肿情况，其中纵坐标是指治疗完成后动物阴道和宫颈部位的总重量(单位g)，横坐标是动物分组情况。
图3是宫颈糜烂模型动物体重变化情况，其中纵坐标是指各组动物的体重(g)，横坐标是动物分组情况。
图4是宫颈糜烂模型动物阴道口红肿情况统计学分析，其中纵坐标是指动物阴道口红肿得分情况的统计学分析结果，横坐标是动物处理时间。
图5是宫颈糜烂模型动物阴道口分泌物情况统计学分析，其中纵坐标是指动物阴道口分泌物得分情况的统计学分析结果，横坐标是动物处理时间。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明作进一步的详细描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1
本实施例提供了一种凝胶剂形式的生长因子制剂。按重量百分比计，本实施例所述生长因子制剂的配方为：
Figure BDA0001921426050000111
其中，表皮生长因子为分子量是6.2KDa的重组人表皮生长因子(rhEGF)，本单位自制产品。
本实施例同时提供了所述凝胶剂形式的生长因子制剂的制备方法，其中所述方法包括如下步骤：
1)将卡波姆940及透明质酸钠用丁二醇配方量的60％分散至水配方量的80％中，搅拌均匀，加入EDTA-二钠搅拌至分散均匀，制得凝胶液体A；
2)将柠檬酸和L精氨酸用配方量5％的水溶解，加入步骤1)制得的凝胶液体中，得凝胶液体B；
3)将羟苯甲酯和苯氧乙醇溶解于丁二醇配方量的40％中，然后加入步骤2)制得的凝胶液体B中，得凝胶液体C；
4)将表皮生长因子及胶原蛋白/山梨糖醇溶解于余下的水中，并在负压下加入步骤3)制得的凝胶液体C中，搅拌，即得所述凝胶剂。
实施例2
本实施例提供了一种凝胶剂形式的生长因子制剂。按重量百分比计，本实施例所述生长因子制剂的配方为：
Figure BDA0001921426050000121
其中，表皮生长因子为分子量是6.2KDa的重组人表皮生长因子(rhEGF)，本单位自制产品。105IU％
本实施例所述凝胶剂形式的生长因子制剂的制备方法及制备步骤同实施例1。
实施例3
本实施例提供了一种凝胶剂形式的生长因子制剂。按重量百分比计，本实施例所述生长因子制剂的配方为：
Figure BDA0001921426050000122
Figure BDA0001921426050000131
其中，表皮生长因子为分子量是6.2KDa的重组人表皮生长因子(rhEGF)，本单位自制产品；本实施例所述凝胶剂形式的生长因子制剂的制备方法及制备步骤同实施例1。
实施例4
与实施例1相比，区别点仅在于配方不同，生长因子为碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)，具体如下：
Figure BDA0001921426050000132
其中，碱性成纤维细胞生长因子为分子量是17.2kDa的重组碱性成纤维细胞生长因子，本单位自制产品；本实施例所述凝胶剂形式的碱性成纤维细胞生长因子制剂的制备方法及制备步骤同实施例1。
动物实验例1
实验性大鼠宫颈糜烂模型的建立
取苯酚15.0g，阿拉伯树胶20.0g制成25％的苯酚胶浆，将12号注射针头尖端剪去，磨平，使头部光滑，备用。取SD大鼠，装入大鼠固定桶中，使得大鼠呈头朝下的倒立姿势，用处理过的注射针头轻轻插入大鼠阴道深处约2cm处，注入25％苯酚胶浆0.2ml，棉球适当固定阴道口，保持大鼠倒立状态5min，使胶浆充分吸收并发挥作用。每2天1次给苯酚胶浆，共4次。造模过程中观察阴道变化，造模完成后大部分大鼠阴道口红肿，有大量脓性分泌物流出(图1模型组)。
分组和处理
造模成功次日，选未造模正常喂养大鼠10只，作为①空白对照组：注射用水0.2ml/只/次；将苯酚胶浆造模成功大鼠30只，随机分为3组：②模型对照组：造模成功大鼠，注射用水0.2ml/只/次；③表皮生长因子凝胶剂高剂量组(由实施例3制得，用量为：0.2ml/只/次)；④表皮生长因子凝胶剂低剂量组(由实施例1制得，用量为：0.2ml/只/次)。给药时将SD大鼠装入大鼠固定桶中，使大鼠呈头朝下的倒立姿势，用处理过的注射针头轻轻插入大鼠阴道深处约2cm处给药，棉球适当固定阴道口，保持大鼠倒立状态5min。每2天1次给药，第10天结束试验。
常规指标检测
为明确给药组对于宫颈糜烂大鼠的治疗效果，每日测量并记录动物体重变化；每日观察大鼠阴道红肿情况(无、轻度、中度和重度分别对应评分为0、1、2和3分)以及阴道分泌物的量(无、少量、中量和多量分别对应评分为0、1、2和3分)。结果如图1-5所示，生长因子凝胶低高剂量组均对大鼠宫颈糜烂具有良好的治疗效果，可以显著减轻阴道和宫颈部位的水肿以及体重的减轻情况，还可以显著减轻阴道口红肿及分泌物量。
病理组织学检查
试验给药10天后结束给药试验，取试验动物阴道至子宫分角处组织作病理组织学检查，结果表明生长因子凝胶剂处理组可以显著减轻宫颈部位的组织水肿及炎症。
经上述动物实验证实，本发明所述生长因子制剂的凝胶剂对大鼠宫颈糜烂模型具有良好的治疗效果。

Claims (4)

1.一种生长因子制剂，其特征在于，所述生长因子制剂为凝胶剂；按重量百分比计，所述凝胶剂的配方为：
Figure FDA0002493510100000011
所述生长因子为表皮生长因子，所述蛋白多肽活性稳定剂为透明质酸钠，所述活性促进剂为重量比为1:1的水溶性胶原蛋白和山梨糖醇，所述蛋白酶抑制剂为乙二胺四乙酸二钠，所述流变调节剂为卡波姆940，所述保湿剂为丁二醇，所述防腐剂为重量比为1-4:1-3的羟苯甲酯和苯氧乙醇的混合物，所述凝胶剂的pH值为5-6.8。
2.权利要求1所述生长因子制剂的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：
1)将流变调节剂及蛋白多肽活性稳定剂用保湿剂配方量的55-65％分散至水配方量的75-85％中，搅拌均匀，加入蛋白酶抑制剂搅拌至分散均匀，制得凝胶液体A；
2)对步骤1)制得的凝胶液体A进行pH调节，得凝胶液体B；
3)将防腐剂溶解于配方量余量的保湿剂中，然后加入步骤2)制得的凝胶液体B中，得凝胶液体C；
4)将生长因子及活性促进剂溶解于余量水中，并在负压下加入步骤3)制得的凝胶液体C，搅拌，即得所述凝胶剂。
3.权利要求1所述的生长因子制剂在制备用于预防和治疗妇科疾病的药物中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述妇科疾病包括宫颈糜烂、宫颈炎、阴道炎、外阴炎症。
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