CN109642893B - Hilic柱用填充剂、填充了该hilic柱用填充剂的hilic柱及使用了该hilic柱的寡糖的分析方法 - Google Patents

Hilic柱用填充剂、填充了该hilic柱用填充剂的hilic柱及使用了该hilic柱的寡糖的分析方法 Download PDF

Info

Publication number
CN109642893B
CN109642893B CN201780050874.XA CN201780050874A CN109642893B CN 109642893 B CN109642893 B CN 109642893B CN 201780050874 A CN201780050874 A CN 201780050874A CN 109642893 B CN109642893 B CN 109642893B
Authority
CN
China
Prior art keywords
hilic
index
separation
column
filler
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201780050874.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN109642893A (zh
Inventor
加藤顺也
近藤英幸
高桥龙二
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Lishennoco Co ltd
Resonac Holdings Corp
Original Assignee
Showa Denko KK
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Showa Denko KK filed Critical Showa Denko KK
Publication of CN109642893A publication Critical patent/CN109642893A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109642893B publication Critical patent/CN109642893B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B01J20/265—Synthetic macromolecular compounds modified or post-treated polymers
    • B01J20/267—Cross-linked polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/26—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism
    • B01D15/38—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the separation mechanism involving specific interaction not covered by one or more of groups B01D15/265 - B01D15/36
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01D—SEPARATION
    • B01D15/00—Separating processes involving the treatment of liquids with solid sorbents; Apparatus therefor
    • B01D15/08—Selective adsorption, e.g. chromatography
    • B01D15/42—Selective adsorption, e.g. chromatography characterised by the development mode, e.g. by displacement or by elution
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/22—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof comprising organic material
    • B01J20/26—Synthetic macromolecular compounds
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28002—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their physical properties
    • B01J20/28004—Sorbent size or size distribution, e.g. particle size
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/28—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties
    • B01J20/28054—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof characterised by their form or physical properties characterised by their surface properties or porosity
    • B01J20/28078—Pore diameter
    • B01J20/28083—Pore diameter being in the range 2-50 nm, i.e. mesopores
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/282—Porous sorbents
    • B01J20/285—Porous sorbents based on polymers
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J20/00—Solid sorbent compositions or filter aid compositions; Sorbents for chromatography; Processes for preparing, regenerating or reactivating thereof
    • B01J20/281—Sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J20/286—Phases chemically bonded to a substrate, e.g. to silica or to polymers
    • B01J20/288—Polar phases
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/54—Sorbents specially adapted for analytical or investigative chromatography
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/50—Aspects relating to the use of sorbent or filter aid materials
    • B01J2220/58—Use in a single column
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01J—CHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J2220/00—Aspects relating to sorbent materials
    • B01J2220/80—Aspects related to sorbents specially adapted for preparative, analytical or investigative chromatography
    • B01J2220/86—Sorbents applied to inner surfaces of columns or capillaries
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
    • G01N30/02—Column chromatography
    • G01N30/88—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86
    • G01N2030/8809—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample
    • G01N2030/8813—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials
    • G01N2030/8836—Integrated analysis systems specially adapted therefor, not covered by a single one of the groups G01N30/04 - G01N30/86 analysis specially adapted for the sample biological materials involving saccharides

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nanotechnology (AREA)
  • Solid-Sorbent Or Filter-Aiding Compositions (AREA)
  • Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)

Abstract

本发明提供能够使采用液相色谱的寡糖分析更准确、更简便地进行的HILIC柱用填充剂、填充了该HILIC柱用填充剂的HILIC柱、以及使用了该HILIC柱的寡糖的分析方法。本发明的HILIC柱用填充剂是对具有羟基的多孔质的交联性聚合物基材的羟基加成了缩水甘油的粒子，并且表示亲水性的指数为2.30以上，且表示表面的pH性的指数为0.95以上且1.05以下。

Description

HILIC柱用填充剂、填充了该HILIC柱用填充剂的HILIC柱及使 用了该HILIC柱的寡糖的分析方法
技术领域
本发明涉及亲水性相互作用色谱(Hydrophilic Interaction Chromatography，以下记为“HILIC”。)柱用填充剂、HILIC柱以及寡糖的分析方法。
本申请基于2016年8月26日在日本申请的特愿2016-165907号来主张优先权，将其内容援用到本文中。
背景技术
寡糖是多个单糖通过糖苷键结合而得的糖类的低聚物。例如，寡糖具有促进双歧杆菌活性的生理作用等有用性是众所周知的。
特别是近年来，由于在以植物作为原料的生物醇燃料生产工艺的中间体中包含寡糖，因此对寡糖的兴趣高。由植物原料获得包含单糖和寡糖的中间体的工序被称为糖化。糖化工序是决定生物醇燃料生产中的生产性以及经济性的重要工序。
在生物醇燃料生产中，主要通过作为单糖的葡萄糖的醇发酵来获得乙醇。此时，包含单糖和寡糖、以及其它杂质的中间体的品质大大影响发酵效率。即，为了使生物醇燃料的生产性进一步改善，需要对经过糖化工序而获得的中间体的成分进行正确、简便地分析的方法。
已知液相色谱作为对天然物、发酵生产物、培养生产物、或合成反应物中的目标物质进行分离分析的手段、或对它们进行分离纯化的手段而被广泛使用。此外，已知液相色谱也被用作对生物醇燃料生产的中间体成分进行分析的手段(非专利文献1)。此外，也介绍了意在寡糖成分的分析的测定事例(非专利文献2、非专利文献3)。
然而，如以非专利文献1为代表地那样，仅仅将焦点放在单糖类的分析，不能鉴定寡糖的情况多。关于这个情况，寡糖的分离不充分是理由之一。此外，分析条件的最佳化非常复杂也是理由之一。也有如非专利文献2那样通过使用基于配位体相互作用的分离模式、或使用尺寸排阻分离模式来进行寡糖的分离的事例。然而，都存在下述课题：分离不充分，此外如果想要改善分离则需要极其长时间等。
作为采用液相色谱的糖类的分离模式，已知除了上述的基于配位体相互作用的分离模式以外，在亲水性相互作用色谱(HILIC)中基于亲水性相互作用的分离模式(HILIC模式)也是适合的(例如非专利文献3)。对于采用HILIC模式的分离，越是亲水性相对变大的分子量大的寡糖则保留越强，溶出顺序越慢。
这样虽然HILIC柱能够进行寡糖的分析，但如果尝试用现有的HILIC柱制品进行测定，则实际上往往不能分离。作为其原因，推测现有的多数HILIC柱包含氨基、酰胺基等作为表现亲水性相互作用的填充剂粒子的官能团结构，不仅纯粹地是亲水性相互作用，而且酸碱相互作用或静电相互作用等都作为保留力起作用。即，可以认为对分子量较大的寡糖的保留力不充分，分离变差。因此，这些现有的采用HILIC柱的寡糖分析的事例中，必须应用阶段性改变流动相的洗脱液组成的梯度洗脱法(例如非专利文献3)。如果使用梯度洗脱法则能够改善分离，但分析条件的设定变得复杂。此外，由于在准备多种流动相液体的基础上需要能够混合输送它们的梯度洗脱法专用的装置，因此其应用决不可以说是容易的。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：東レリサーチセンターThe TRC News No.111(Jul.2010)，p.15
非专利文献2：Phenomenex社ウェブサイト，http://az621941.vo.msecnd.net/documents/6f28134c-e141-44d3-b884-9f0ac38b47eb.pdf
非专利文献3：株式会社岛津制作所，岛津アプリケーションニュースNo.L374
发明内容
发明所要解决的课题
本发明是鉴于这样的情况而提出的，其目的是提供用于能够使采用液相色谱的寡糖分析更准确、更简便地进行的HILIC柱用填充剂、填充了该HILIC柱用填充剂的HILIC柱、和使用了该HILIC柱的寡糖的分析方法。
用于解决课题的方法
本发明人等为了解决上述课题而反复进行了深入研究，结果发现，通过适当选择HILIC柱用填充剂的基材，通过化学修饰将HILIC柱用填充剂的表面显著地亲水化，并且通过该化学修饰而使来源于基材的化学结构的酸性或碱性缓和而使其成为中性，从而可获得表现作为目标性能的HILIC柱，完成了本发明。
即，本发明涉及以下事项。
[1]一种HILIC柱用填充剂，其特征在于，包含具有羟基的交联性聚合物基材，上述交联性聚合物基材为多孔质的粒子，对上述交联性聚合物基材的羟基加成了缩水甘油，亲水性指数为2.30以上，并且表面pH性指数为0.95以上且1.05以下。
上述亲水性指数以对尿苷(U)与2’-脱氧尿苷(2dU)进行HILIC分离模式条件下的液相色谱测定时的分离系数α1(U/2dU)定义，
上述表面pH性指数以利用HILIC分离模式条件下的液相色谱对可可碱(Tb)与茶碱(Tp)进行测定时的分离系数α2(Tb/Tp)定义，
上述分离系数α1(U/2dU)和上述分离系数α2(Tb/Tp)为各自的物质的保留系数k的比，
上述保留系数k都是将甲苯的溶出时间设为t0、将各个物质的溶出时间设为t而以k＝(t-t0)/t0定义。
其中，上述HILIC分离模式的液相色谱测定条件是：柱温度为30℃，流动相为(乙腈)：(添加了乙酸10mM和乙酸铵10mM的水)＝90/10(混合前的体积)的混合液体。
[2]根据[1]所述的HILIC柱用填充剂，具有羟基的多孔质的交联性聚合物基材为乙烯醇与异氰脲酸三烯丙酯的共聚物。
[3]一种HILIC柱，其具备：[1]或[2]的上述HILIC柱用填充剂，和填充了上述HILIC柱用填充剂的液相色谱用壳体。
[4]一种寡糖的分析方法，其中，使用[3]的上述HILIC柱以HILIC模式进行分析。
[5]根据[4]的寡糖的分析方法，是采用上述HILIC模式分析寡糖的方法，使上述流动相的组成在测定期间总是为恒定(等度洗脱条件)，并且使上述柱温度在测定期间总是为恒定来进行。
[6]根据[4]或[5]的寡糖的分析方法，是采用上述HILIC模式分析寡糖的方法，作为分析对象的寡糖分子的大小为17聚体以上。
发明的效果
根据本发明，即使在应用不变更流动相组成的简便的等度洗脱法的条件下，也能够将利用以往的液相色谱法难以分离分析、或需要复杂步骤的寡糖所包含的多聚体成分进行分离分析。此外，即使不使用复杂的温度控制程序，也能够在恒定温度的条件下进行分离分析。
附图说明
图1是在实施例1所记载的条件下获得的寡糖分析的色谱图。
图2是在比较例4所记载的条件下获得的寡糖分析的色谱图。
图3是对分离系数α1(U/2dU)和分离系数α2(Tb/Tp)进行测定时的色谱图。
具体实施方式
以下，对应用了本发明的HILIC柱用填充剂、填充了该HILIC柱用填充剂的HILIC柱以及使用了该HILIC柱的寡糖的分析方法进行详细说明。
另外，关于以下说明中使用的附图，为了使其特征易于明白而示出代表性事例的一部分，不限定发明的范围。此外，在以下说明中例示的材料、尺寸等是一例，本发明不限定于此，能够在不变更其主旨的范围内进行适当变更来实施。
(HILIC柱用填充剂)
本发明的HILIC柱用填充剂包含具有羟基的交联性聚合物基材。上述交联性聚合物基材为多孔质的粒子，优选为球状粒子。对上述交联性聚合物基材的羟基加成缩水甘油。此外，以上述HILIC柱用填充剂的亲水性指数为2.30以上，并且，上述HILIC柱用填充剂的表面pH性指数为0.95以上且1.05以下作为特征。而且，上述交联性聚合物基材优选通过对其羟基加成缩水甘油，从而在表面具有来源于缩水甘油的二醇结构。
本发明的一种实施方式的HILIC柱用填充剂包含具有羟基的交联性聚合物基材。上述交联性聚合物基材为多孔质的粒子。在上述交联性聚合物基材粒子的表面具有来源于缩水甘油的二醇结构。此外，以上述HILIC柱用填充剂的亲水性指数为2.30以上，并且，上述HILIC柱用填充剂的表面pH性指数为0.95以上且1.05以下作为特征。
＜具有羟基的多孔质的交联性聚合物＞
作为具有羟基的多孔质的交联性聚合物，可举出例如，使乙酸乙烯酯、与作为具有多个不饱和双键的交联性单体的异氰脲酸三烯丙酯(TAIC(注册商标))等共聚，然后进行皂化反应而获得的交联性聚乙烯醇(PVA)。关于共聚物的单体组成的质量比，没有特别限制，为了通过之后的缩水甘油加成反应处理来表现充分的亲水性，期望使交联性单体的比率为90质量％以下。更优选使交联性单体的比率为80质量％以下，进一步优选使交联性单体的比率为70质量％以下。此外，为了确保利用多孔质粒子作为液相色谱用填充剂的情况下的实用上的机械强度，期望使交联性单体的比率为10质量％以上。更优选使交联性单体的比率为20质量％以上，进一步优选使交联性单体的比率为30质量％以上。如果机械强度不足，则有时因为输送流动相时产生的压力而发生变形并将柱堵塞，从而装置超过可使用的压力范围。此外，即使不发生变形而堵塞，也有时发生构成多孔质填充剂的共聚物的1次粒子脱离，根据分析所使用的检测器的种类而妨碍目标物质的检测。
通过皂化而获得的交联性聚乙烯醇(PVA)的羟基的密度优选为1.2meq/g～10.5meq/g的范围，更优选为1.6meq/g～9.3meq/g的范围，进一步优选为2.0meq/g～8.0meq/g的范围。通过为该范围，缩水甘油能够充分加成，能够对填充剂赋予适当的亲水性。
具有羟基的多孔质的交联性聚合物中，特别是使用了TAIC(注册商标)作为交联性单体的交联性PVA，在下述方面是适合的：除了PVA的结构中所具有的羟基以外，因为通过缩水甘油进行加成反应而生成的加成性羟基的贡献而有效率地表现亲水性。
＜多孔质的粒子＞
作为以多孔质的粒子形式获得上述具有羟基的交联性共聚物的方法，一般使用通过使将与单体相容的非聚合性的有机溶剂和聚合引发剂混合而获得的油相悬浮于水相而制成所希望的大小的油滴，接着进行加热搅拌，从而获得粒子的悬浮聚合法。或者，使用使油相通过以SPG(Shirasu多孔玻璃)膜为代表的多孔质膜、或形成于石英基板的微流路并将其滴加在水相中而形成所希望的大小的粒子的方法。任一粒子形成方法都是混合于油相的非聚合性的有机溶剂所占的体积形成细孔。这样操作而造粒的油相通过接着在水相中进行加热搅拌而使聚合反应进行，作为交联性聚合物而被赋予强度。在聚合反应后，通过使用了有机溶剂的洗涤而除去非聚合性有机溶剂，作为多孔质体而完成。
上述粒子优选为球状。作为该球状粒子的粒径，为了获得充分的分离性能和高灵敏度，作为体积平均粒径，优选为1～30μm，在不易导致过剩的压力上升的方面进一步优选为3～10μm。体积平均粒径的测定可以通过库尔特粒度仪或图像解析式粒度分布测定仪进行。为了获得所希望的粒径，也可以进行使用了筛网的筛分分级、使用了风力分级机的粒径控制。
作为形成多孔质的细孔的大小，为了兼有分离性能与机械强度，作为平均细孔径，优选为3～30nm，在获得充分的分离性能的方面进一步优选为10～25nm。如果细孔径过小，则比表面积变小，不能充分获得表现亲水性相互作用的能力。如果细孔径过大则不保持机械强度，存在因为在柱内产生的压力而粒子压坏的问题。平均细孔径的测定可以使用气体吸附式比表面积测定仪、或水银孔隙度计进行。
＜缩水甘油的加成反应＞
通过对这样操作而获得的具有羟基的多孔质的交联性聚合物粒子，使缩水甘油进行加成反应，从而获得对粒子表面充分赋予了亲水性的HILIC柱用填充剂。缩水甘油的加成反应可以如下进行：通过在使上述粒子与缩水甘油共存时，添加例如叔丁醇钾那样的强碱试剂，进行加热搅拌。优选上述粒子的羟基与缩水甘油反应而生成来源于缩水甘油的二醇结构的方案。为了赋予充分的亲水性，优选预先使添加的缩水甘油相对于上述粒子所具有的羟基或缩水甘油基等与缩水甘油反应的官能团而过剩量存在。此外，通过加成表现充分的亲水性的程度的缩水甘油，例如在使用了异氰脲酸三烯丙酯作为交联性单体的情况下，来源于导入到聚合物中的氮原子的碱性衰减，作为HILIC柱使用时包含酸碱相互作用的离子性相互作用几乎不再显示。由此可以获得纯粹地亲水性相互作用为分离模式的主体的HILIC柱。这里，“纯粹地亲水性相互作用为分离模式的主体”意思是亲水性相互作用以外的酸碱相互作用、静电相互作用等几乎不作为保留力起作用。作为用于获得这样的效果的缩水甘油加成量，虽然还与具有羟基的多孔质的交联性聚合物粒子的羟基密度有关，但相对于上述粒子的每单位质量，优选为1mmol/g～5mmol/g的范围，更优选为2mmol/g～4mmol/g的范围。
作为这样地使缩水甘油加成而获得的HILIC柱用填充剂的表示亲水性的指标，可以应用亲水性指数，其以将尿苷(U)与2’-脱氧尿苷(2dU)进行HILIC分离模式条件下的液相色谱测定时的分离系数α1(U/2dU)定义。对于该亲水性指数，数值越大则表示亲水性越高。
此外，作为表示与包含酸碱相互作用的离子性相互作用对应的表面的pH性的指标，可以应用表面pH性指数，其以将可可碱(Tb)与茶碱(Tp)同样地利用液相色谱进行测定时的分离系数α2(Tb/Tp)定义。对于该表面pH性指数，1正好为中性，如果小于1则显示碱性，如果大于1则显示酸性。
各分离系数α1、α2分别为各物质的保留系数k的比，保留系数k都是将甲苯的溶出时间设为t0，将各个物质的溶出时间设为t而以k＝(t-t0)/t0定义。其中，求出该保留系数时的HILIC分离模式的液相色谱测定条件是：柱温度为30℃，流动相为(乙腈)：(添加了乙酸10mM和乙酸铵10mM的水)＝90/10(混合前的体积)的混合液体。如果是该测定条件以外的条件，则由于成为不同的保留系数和不同的分离系数，因此不能获得规定本发明的范围的亲水性指数和表面pH性指数。即，分离系数α1(U/2dU)＝k1/k2，k1为尿苷的保留系数，k2为2’-脱氧尿苷的保留系数。此外，分离系数α2(Tb/Tp)＝k3/k4，k3为可可碱的保留系数，k4为茶碱的保留系数。
这些指标是2011年由池上等人提出的HILIC柱的性能评价指数，其基于世界上一般能够应用的技术的指标(Journal of Chromatography A，1218号(2011年，5903-5919页)。
本发明的HILIC柱用填充剂的亲水性指数α1(U/2dU)为2.30以上，优选为2.30以上且2.50以下，并且表面pH性指数α2(Tb/Tp)为0.95以上且1.05以下，优选为0.95以上且1.00以下，这成为要件。如果α1(U/2dU)小于2.30则亲水性相互作用不充分，在寡糖分析中如果想要获得充分的分离度，则必须使流动相的流速极端降低，或必须使用将流动相的组成在测定中途进行变更的梯度法等，变得很复杂。此外，在α2(Tb/Tp)不在0.95以上且1.05以下的范围内的情况下也同样地，在寡糖分析中如果想要获得充分的分离度，则必须使流动相的流速极端降低，或必须使用将流动相的组成在测定中途进行变更的梯度法等，变得很复杂。另外，为了控制在上述范围，使加成缩水甘油时的反应时间、反应温度或缩水甘油添加量变化而获得最佳条件是有效的。
作为亲水性指数的分离系数α1(U/2dU)的测定条件是，洗脱液组成：乙腈/10mM乙酸+10mM乙酸铵水溶液(pH4.7)＝90/10(体积比)的混合液，流量：0.55mL/min，柱温度：30℃。在该条件下，注入将甲苯1.0mg/mL、尿苷0.1mg/mL、2’-脱氧尿苷0.1mg/mL溶解于洗脱液的样品(例如在柱尺寸为内径4.6mm，长度150mm的情况下为4μL)，使用UV检测器(波长254nm)，由所得的色谱图测定各成分的保留时间。
作为表面pH性指数的分离系数α2(Tb/Tp)的测定条件是，洗脱液组成：乙腈/10mM乙酸+10mM乙酸铵水溶液(pH4.7)＝90/10(体积比)的混合液，流量：0.55mL/min，柱温度：30℃。在该条件下，注入将甲苯1.0mg/mL、可可碱0.1mg/mL、茶碱0.1mg/mL溶解于洗脱液的样品(例如在柱尺寸为内径4.6mm，长度150mm的情况下为4μL)，使用UV检测器(波长254nm)，由所得的色谱图测定各成分的保留时间。
(HILIC柱)
本发明涉及的HILIC柱，其特征在于，具备：上述的本申请发明的填充剂，和填充了上述填充剂的圆筒状的液相色谱用壳体(柱外壳)。
柱外壳的材质只要是表现可耐受使流动相流通时产生的压力的强度的材料，就没有特别限制，一般使用不锈钢材料或聚醚醚酮(PEEK)材料。
外壳尺寸没有特别限制，为了分离能力良好地高灵敏度地分析，期望为圆筒状，使内径为1.0～4.6mm，使长度为50～250mm。
为了制成能够良好分离地进行分析的柱，需要适当地填充填充剂。作为填充方法，通过制成使填充剂分散于液体的浆料，然后使用泵输送到外壳内进行加压来进行。此时，作为调制浆料所使用的液体，优选使用亲水性高的填充剂易于分散的水、或水与水溶性有机溶剂的混合物。作为水溶性有机溶剂的种类，可举出一般HILIC模式下的分离所使用的乙腈、甲醇、THF等。进而，为了使水渗透到多孔质的填充剂粒子中，一边形成适度的水合状态一边达到良好的分散，优选添加盐。作为盐的种类，可举出例如氯化钠、硫酸钠、甲酸钠、乙酸钠、氯化铵、硫酸铵、甲酸铵、乙酸铵，根据交联性聚合物粒子的单体组成、粒径来选择最佳的种类。此外，关于盐浓度也同样地，根据交联性聚合物粒子的单体组成、粒径来选择最佳的条件。填充压力除了交联性聚合物粒子的单体组成、粒径以外，也根据外壳尺寸来选择最佳的条件。
(寡糖的分析方法)
本发明中的寡糖的分析方法以使用上述那样操作而获得的HILIC柱作为要件，使用连接了输送泵、注射器和检测器的一般的液相色谱测定装置。在HILIC模式的分离中，使用将水和与水相容的有机溶剂混合的液体作为流动相。作为该混合液的组成，一般有机溶剂的混合前的比率为50体积％以上。作为优选的范围，为50～95体积％，进一步优选为60～90体积％。如果水溶性有机溶剂的比率小于50体积％，则有时亲水性相互作用降低，如果大于95体积％，则有可能发生寡糖的吸附。
作为水溶性有机溶剂的种类，可以使用乙腈等腈类；甲醇、乙醇、异丙醇等醇类；四氢呋喃等醚类；丙酮、甲基乙基酮等酮类。
本发明的HILIC柱的填充剂由于表面pH性基本上接近于中性，因此即使需要向流动相中添加盐也是添加少量即可。作为盐的种类，可举出甲酸铵、乙酸铵等铵盐，例如，可以对混合溶液1L添加1～25mmol。有时根据基材的种类或分析的试样的种类，通过添加它们来调整保留时间。
在本发明的寡糖的分析方法中，能够利用基于填充剂的高亲水性和表面pH性的基本上中性的HILIC柱的优异的分离能力，从而应用在使流动相的组成为恒定的状态下进行测定的等度洗脱条件、使温度为恒定的状态下进行测定的条件。因此，仅通过将流动相组成和测定温度最佳化，就能够将多聚体成分分离至能够鉴定的程度，连以往的测定例中如果不使用阶段性地将流动相的组成变化的梯度洗脱条件就不可能实现的17聚体以上也能够测定。由此，实现极其简便地检测寡糖成分。
寡糖等糖类在一般在UV光检测器中使用的254nm波长下光的吸收非常小，因此作为分析时的检测器，使用差示折射率(RI)式。在本发明的分析方法中，也适合使用RI检测器。除此以外，也可以使用质谱分析计、蒸发光散射检测(ELSD)、电晕荷电化粒子检测器(CoronaCAD(注册商标))。因为表面pH性基本上为中性，因此即使需要对流动相中添加盐也是添加少量即可，因此特别是在使用质谱分析计、ELSD、CoronaCAD(注册商标)的情况下盐的影响少，是适合的。
实施例
以下，通过实施例使本发明的效果更明确。另外，本发明不限定于以下实施例，可以在不变更其主旨的范围内适当变更而实施。
(实施例1)
(1)填充剂1的制作
(聚乙烯醇凝胶(基材)的合成)
将包含乙酸乙烯酯100g、异氰脲酸三烯丙酯150g、乙酸丁酯100g、正癸烷25g和2,2-偶氮二异丁腈5g的均匀混合液、与溶解了聚乙烯醇12g和磷酸氢二钠18g的水1200mL加入到具备回流冷却器的5L三口烧瓶中，搅拌10分钟。接着，在氮气气流下搅拌，同时在60℃下进行16小时聚合，获得了粒状共聚物。将该共聚物进行过滤、洗涤，进行了丙酮提取后干燥。接着，将该共聚物与苛性钠3L一起加入到具备回流冷却器、氮气导入管和搅拌器的5L三口烧瓶中，在氮气气流下在15℃搅拌20小时而进行了该共聚物的皂化，然后进行过滤，水洗，进一步进行干燥和风力分级处理。通过皂化而获得的聚乙烯醇共聚物的羟基的密度为2.1meq/g。通过图像解析式粒度分布测定装置(シスメックス社制FPIA3000)进行了粒径测定，结果，体积平均粒径为4.8μm。
此外，通过气体吸附式比表面积测定装置(日本ベル社制BELSORP-mini)测定的平均细孔径为13nm。
羟基密度的测定通过以下步骤进行。将约2g的聚乙烯醇共聚物基材在60℃下真空干燥6小时，然后利用精密天平准确测定重量。将称量的基材的全部量、和乙酸酐17mL与吡啶33mL的混合液迅速投入到50mL锥形烧瓶中，接着在锥形烧瓶的上部设置阿林冷凝器，进一步从冷却管上部静静地通入氮气而赶出烧瓶内的空气。一边直接用电磁搅拌器搅拌，一边用油浴在90℃加热16小时。在加热结束后，将甲醇每次少量分次加入共计15mL，用玻璃过滤器过滤基材。进一步用甲醇90mL洗涤后，在60℃下真空干燥6小时。将干燥后的基材利用精密天平准确地测定重量，计算与使乙酸酐反应前的重量差。由于对基材的羟基进行了酯加成的乙酸链段(CH3CO-：分子量43)相当于增重，由此算出单位基材重量的羟基密度(单位：mmol/g)。
(基材的表面修饰处理)
将如上述那样操作而获得的干燥聚乙烯醇聚合物10g、缩水甘油10g、叔丁醇钾1g、二甘醇二甲基醚100mL加入到可拆式烧瓶中，在60℃下搅拌20小时，对该聚乙烯醇基材加成了缩水甘油。将导入后的聚合物用水、甲醇洗涤后，进行了干燥。
缩水甘油加成量通过重量测定进行，相对于每单位聚乙烯醇基材的重量为2mmol/g。
(2)填充了填充剂1的柱的制作
制成使制作的填充剂1分散于水的浆料，使用输送泵对内径4.6mm，长度150mm的PEEK制的柱外壳(株式会社巴制作所制)以15MPa的恒定压力进行10分钟输送加压填充。
(3)填充剂1的亲水性指数α1(U/2dU)和表面pH性指数α2(Tb/Tp)测定
使用制作的填充了填充剂1的柱，作为以下的测定条件，注入将甲苯1.0mg/mL、尿苷0.1mg/mL、2’-脱氧尿苷0.1mg/mL、可可碱0.1mg/mL、茶碱0.1mg/mL溶解于洗脱液的样品4μL并进行了测定。将所得的色谱图示于图3中。
洗脱液组成：乙腈/10mM乙酸+10mM乙酸铵水溶液(pH4.7)＝90/10(体积比)的混合液，
流量：0.55mL/min，
柱温度：30℃，
检测器：UV检测器(波长254nm)。
由该色谱图，测定甲苯、尿苷、2’-脱氧尿苷各成分的保留时间，求出亲水性指数α1(U/2dU)，结果为2.40。
此外，由该色谱图，测定甲苯、可可碱、茶碱各成分的保留时间，求出表面pH性指数α2(Tb/Tp)，结果为0.95。
(4)填充了填充剂1的柱中的寡糖测定
使用制作的填充了填充剂1的柱，作为以下的测定条件，进行了分析。将所得的色谱图示于图1中。
洗脱液组成：乙腈/水＝60/40，
流量：0.3mL/min，
柱温度：40℃，
检测器：RI检测器。
分析样品使用了如下获得的样品：将葡聚糖(分子量4000～6000)40mg溶解于1mol/L的HCl 1mL并在100℃下加热搅拌15分钟后，将水分蒸馏除去，将所得的固体成分以0.1重量％溶解于乙腈/水＝50/50的混合液而得到。如果将能够作为峰而识别的信号/噪声比设为2.0以上，则能够确认直到19聚体(S/N比：6.6)的存在。
(实施例2)
＜填充剂2的制作＞
在实施例1所记载的制作填充剂1的过程中，使60℃下的表面修饰处理反应的时间为6小时，除此以外，与实施例1同样地操作而获得了填充剂2。
＜亲水性指数、表面pH性指数＞
与实施例1同样地测定了亲水性指数α1(U/2dU)，结果为2.30。此外，测定了表面pH性指数α2(Tb/Tp)，结果为0.95。
＜寡糖分析＞
在与实施例1同样的条件下进行了寡糖分析，结果识别直到18聚体(S/N比4.7)。未确认到显著的基线漂移、寡糖峰的不规则分离。
(实施例3)
＜填充剂3的制作＞
在实施例1所记载的制作填充剂1的过程中，使表面修饰处理反应的条件为80℃6小时，除此以外，与实施例1同样地操作而获得了填充剂3。
＜亲水性指数、表面pH性指数＞
与实施例1同样地测定了亲水性指数α1(U/2dU)，结果为2.31。此外，测定了表面pH性指数α2(Tb/Tp)，结果为1.05。
＜寡糖分析＞
在与实施例1同样的条件下进行了寡糖分析，结果识别直到17聚体(S/N比5.3)。未确认到显著的基线漂移、寡糖峰的不规则分离。
(实施例4)
＜填充剂4的制作＞
在实施例1所记载的制作填充剂1的过程中，使表面修饰处理反应的条件为80℃20小时，除此以外，与实施例1同样地操作而获得了填充剂4。
＜亲水性指数、表面pH性指数＞
与实施例1同样地测定了亲水性指数α1(U/2dU)，结果为2.40。此外，测定了表面pH性指数α2(Tb/Tp)，结果为1.05。
＜寡糖分析＞
在与实施例1同样的条件下进行了寡糖分析，结果识别直到17聚体(S/N比2.3)。未确认到显著的基线漂移、寡糖峰的不规则分离。
(实施例5)
＜填充剂5的制作＞
在实施例1所记载的制作填充剂1的过程中，使表面修饰处理反应所使用的缩水甘油的量为20g，除此以外，与实施例1同样地操作而获得了填充剂5。
＜亲水性指数、表面pH性指数＞
与实施例1同样地测定了亲水性指数α1(U/2dU)，结果为2.49。此外，测定了表面pH性指数α2(Tb/Tp)，结果为0.95。
＜寡糖分析＞
在与实施例1同样的条件下进行了寡糖分析，结果识别直到19聚体(S/N比6.1)。未确认到显著的基线漂移、寡糖峰的不规则分离。
(实施例6)
＜填充剂6的制作＞
在实施例1所记载的制作填充剂1的过程中，使表面修饰处理反应所使用的缩水甘油的量为20g，使表面修饰处理反应条件为80℃20小时，除此以外，与实施例1同样地操作而获得了填充剂6。
＜亲水性指数、表面pH性指数＞
与实施例1同样地测定了亲水性指数α1(U/2dU)，结果为2.48。此外，测定了表面pH性指数α2(Tb/Tp)，结果为1.04。
＜寡糖分析＞
在与实施例1同样的条件下进行了寡糖分析，结果识别直到18聚体(S/N比5.2)。未确认到显著的基线漂移、寡糖峰的不规则分离。
(实施例7)
＜填充剂7的制作＞
在实施例1所记载的聚乙烯醇凝胶合成的步骤中，将风力分级的条件以平均粒径成为3.5μm的方式变更，除此以外，通过与实施例1同样的方法获得了填充剂7。平均细孔径为12nm。
＜亲水性指数、表面pH性指数＞
与实施例1同样地测定了亲水性指数α1(U/2dU)，结果为2.40。此外，测定了表面pH性指数α2(Tb/Tp)，结果为1.00。
＜寡糖分析＞
在与实施例1同样的条件下进行了寡糖分析，结果识别直到18聚体(S/N比3.3)。未确认到显著的基线漂移、寡糖峰的不规则分离。
(比较例1)
＜填充剂8的制作＞
在实施例1所记载的制作填充剂1的过程中，使表面修饰处理反应所使用的缩水甘油的量为20g，使表面修饰处理反应条件为50℃20小时，除此以外，与实施例1同样地操作而获得了填充剂8。
＜亲水性指数、表面pH性指数＞
与实施例1同样地测定了亲水性指数α1(U/2dU)，结果为2.41。此外，测定了表面pH性指数α2(Tb/Tp)，结果为0.93。
＜寡糖分析＞
在与实施例1同样的条件下进行了寡糖分析，结果识别直到12聚体(S/N比2.8)。未确认到显著的基线漂移、寡糖峰的不规则分离。
(比较例2)
＜填充剂9的制作＞
在实施例1所记载的制作填充剂1的过程中，使表面修饰处理反应所使用的缩水甘油的量为20g，使表面修饰处理反应条件为80℃6小时，除此以外，与实施例1同样地操作而获得了填充剂9。
＜亲水性指数、表面pH性指数＞
与实施例1同样地测定了亲水性指数α1(U/2dU)，结果为2.40。此外，测定了表面pH性指数α2(Tb/Tp)，结果为1.06。
＜寡糖分析＞
在与实施例1同样的条件下进行了寡糖分析，结果识别直到11聚体(S/N比4.3)。未确认到显著的基线漂移、寡糖峰的不规则分离。
(比较例3)
＜填充剂10的制作)
在实施例1所记载的制作填充剂1的过程中，使表面修饰处理反应所使用的缩水甘油的量为7g，除此以外，与实施例1同样地操作而获得了填充剂10。
＜亲水性指数、表面pH性指数)
与实施例1同样地测定了亲水性指数α1(U/2dU)，结果为2.23。此外，测定了表面pH性指数α2(Tb/Tp)，结果为0.99。
＜寡糖分析)
在与实施例1同样的条件下进行了寡糖分析，结果识别直到10聚体(S/N比3.0)。未确认到显著的基线漂移、寡糖峰的不规则分离。
(比较例4)
作为HILIC柱，使用了昭和电工(株)制Asahipak NH2P-50 4D(内径4.6mm，长度150mm)。与实施例1同样地，测定了亲水性指数α1(U/2dU)，结果为2.25。此外，测定了表面pH性指数α2(Tb/Tp)，结果为0.37。
在与实施例1同样的条件下进行了寡糖分析，结果获得了图2所示的色谱图。观测到被视为包含异构体分离的峰分离的不规则，不能进行正确的测定。
[表1]
Figure BDA0001972896480000181

Claims (5)

1.一种HILIC柱用填充剂，其特征在于，
包含具有羟基的交联性聚合物基材，
所述交联性聚合物基材为多孔质的粒子，
具有羟基的多孔质的所述交联性聚合物基材为乙烯醇与异氰脲酸三烯丙酯的共聚物，
对所述交联性聚合物基材的羟基加成了缩水甘油，
亲水性指数为2.30以上，并且
表面pH性指数为0.95以上且1.05以下，
所述亲水性指数以对尿苷即U与2’-脱氧尿苷即2dU进行HILIC分离模式条件下的液相色谱测定时的分离系数α1(U/2dU)定义，
所述表面pH性指数以利用HILIC分离模式条件下的液相色谱对可可碱即Tb与茶碱即Tp进行测定时的分离系数α2(Tb/Tp)定义，
所述分离系数α1(U/2dU)和所述分离系数α2(Tb/Tp)为各自的物质的保留系数k的比，
所述保留系数k都是将甲苯的溶出时间设为t0、将各物质的溶出时间设为t而以k＝(t-t0)/t0定义，
其中，所述HILIC分离模式的液相色谱测定条件是：
柱温度为30℃，
流动相为以混合前的体积计，乙腈：添加了乙酸10mM和乙酸铵10mM的水＝90/10的混合液体。
2.一种HILIC柱，其具备：
权利要求1所述的HILIC柱用填充剂，和
填充了所述HILIC柱用填充剂的液相色谱用壳体。
3.一种寡糖的分析方法，其中，使用权利要求2所述的HILIC柱以HILIC模式进行分析。
4.根据权利要求3所述的寡糖的分析方法，是采用所述HILIC模式分析寡糖的方法，使所述流动相的组成在测定期间总是为恒定即为等度洗脱条件，并且使所述柱温度在测定期间总是为恒定来进行。
5.根据权利要求3或4所述的寡糖的分析方法，是采用所述HILIC模式分析寡糖的方法，作为分析对象的寡糖分子的大小为17聚体以上。
CN201780050874.XA 2016-08-26 2017-08-10 Hilic柱用填充剂、填充了该hilic柱用填充剂的hilic柱及使用了该hilic柱的寡糖的分析方法 Active CN109642893B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2016165907 2016-08-26
JP2016-165907 2016-08-26
PCT/JP2017/029118 WO2018037940A1 (ja) 2016-08-26 2017-08-10 Ｈｉｌｉｃカラム用充填剤、それが充填されたｈｉｌｉｃカラム、及びそれを用いたオリゴ糖の分析方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109642893A CN109642893A (zh) 2019-04-16
CN109642893B true CN109642893B (zh) 2021-02-19

Family

ID=61245883

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201780050874.XA Active CN109642893B (zh) 2016-08-26 2017-08-10 Hilic柱用填充剂、填充了该hilic柱用填充剂的hilic柱及使用了该hilic柱的寡糖的分析方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US11247192B2 (zh)
EP (1) EP3505929B1 (zh)
JP (1) JP6885958B2 (zh)
CN (1) CN109642893B (zh)
WO (1) WO2018037940A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110709696B (zh) * 2017-06-22 2022-01-04 昭和电工株式会社 寡核苷酸的混合物的分离分析方法

Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04158260A (ja) * 1990-10-22 1992-06-01 Asahi Chem Ind Co Ltd 糖類の分析方法
US5503933A (en) * 1994-02-25 1996-04-02 Purdue Research Foundation Covalently bonded coatings
JP2000055897A (ja) * 1998-08-06 2000-02-25 Showa Denko Kk 充填剤及びその製造方法
US7361273B2 (en) * 2002-03-27 2008-04-22 Saniscosweetners Oy Separation of sugars, sugar alcohols, carbohydrates and mixtures thereof
CN101193928A (zh) * 2005-06-09 2008-06-04 东曹株式会社 亲水性优异的新型填充剂及其制备方法
CN102245304A (zh) * 2008-12-15 2011-11-16 株式会社日立高新技术 混合模式型吸附剂
CN102770765A (zh) * 2009-09-29 2012-11-07 莱顿大学医学中心 使用2-甲基吡啶硼烷作为还原剂还原胺化和分析糖类
CN104619416A (zh) * 2012-09-11 2015-05-13 戴安公司 缩水甘油官能化的阴离子交换固定相
WO2015129622A1 (ja) * 2014-02-28 2015-09-03 昭和電工株式会社 液体クロマトグラフィー用充填剤及び液体クロマトグラフィー用カラム
EP2254696B1 (en) * 2008-02-14 2015-09-23 R-Biopharm Rhône Ltd Improved chromatography resin, and methods and devices related thereto

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04148260A (ja) * 1990-10-08 1992-05-21 Fujitsu Ltd 端末本体間通信方式
SE0202067D0 (sv) 2002-06-28 2002-06-28 Amersham Biosciences Ab Surface-modified base matrices
US9302203B2 (en) * 2012-07-20 2016-04-05 Mitsubishi Chemical Corporation Chromatographic separation material
CN107407667B (zh) 2015-03-10 2021-06-15 昭和电工株式会社 液相色谱用填充剂
JP6142049B2 (ja) 2016-06-21 2017-06-07 株式会社吉野工業所 ブロー成形装置

Patent Citations (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH04158260A (ja) * 1990-10-22 1992-06-01 Asahi Chem Ind Co Ltd 糖類の分析方法
US5503933A (en) * 1994-02-25 1996-04-02 Purdue Research Foundation Covalently bonded coatings
JP2000055897A (ja) * 1998-08-06 2000-02-25 Showa Denko Kk 充填剤及びその製造方法
US7361273B2 (en) * 2002-03-27 2008-04-22 Saniscosweetners Oy Separation of sugars, sugar alcohols, carbohydrates and mixtures thereof
CN101193928A (zh) * 2005-06-09 2008-06-04 东曹株式会社 亲水性优异的新型填充剂及其制备方法
EP2254696B1 (en) * 2008-02-14 2015-09-23 R-Biopharm Rhône Ltd Improved chromatography resin, and methods and devices related thereto
CN102245304A (zh) * 2008-12-15 2011-11-16 株式会社日立高新技术 混合模式型吸附剂
CN102770765A (zh) * 2009-09-29 2012-11-07 莱顿大学医学中心 使用2-甲基吡啶硼烷作为还原剂还原胺化和分析糖类
CN104619416A (zh) * 2012-09-11 2015-05-13 戴安公司 缩水甘油官能化的阴离子交换固定相
WO2015129622A1 (ja) * 2014-02-28 2015-09-03 昭和電工株式会社 液体クロマトグラフィー用充填剤及び液体クロマトグラフィー用カラム

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Chromatographic characterization of hydrophilic interaction liquid chromatography stationary phases: Hydrophilicity, charge effects, structural selectivity and separation efficiency;Y. Kawachi et al;《Journal of Chromatography A》;20110621;第1218卷;5903-5919 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2018037940A1 (ja) 2018-03-01
CN109642893A (zh) 2019-04-16
US20190184372A1 (en) 2019-06-20
US11247192B2 (en) 2022-02-15
JPWO2018037940A1 (ja) 2019-06-20
EP3505929B1 (en) 2021-04-07
JP6885958B2 (ja) 2021-06-16
EP3505929A1 (en) 2019-07-03
EP3505929A4 (en) 2020-04-22

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Hu et al. Novel applications of molecularly-imprinted polymers in sample preparation
Jing et al. Preparation of mixed-templates molecularly imprinted polymers and investigation of the recognition ability for tetracycline antibiotics
Liu et al. Synthesis of core-shell molecularly imprinted polymers (MIP) for spiramycin I and their application in MIP chromatography
Lu et al. Preparation and evaluation of ionic liquid-gold nanoparticles functionalized silica monolithic column for capillary electrochromatography
CN110709696B (zh) 寡核苷酸的混合物的分离分析方法
EP3762121B1 (en) Composite material for bioseparations
CN113248650A (zh) 一种以羟基磷灰石为载体的低共熔溶剂型分子印迹聚合物及其制备方法和应用
CN106632529B (zh) 一种基于分子印迹技术的壳四糖单体分离提取方法
CN109642893B (zh) Hilic柱用填充剂、填充了该hilic柱用填充剂的hilic柱及使用了该hilic柱的寡糖的分析方法
CN110267740B (zh) 体积排阻色谱用填充剂和其制造方法
JP6981364B2 (ja) 分離剤、分離方法及び化合物の製造方法
Hsieh et al. Single‐step approach to β‐cyclodextrin‐bonded silica as monolithic stationary phases for CEC
Sun et al. Effect of minimizing amount of template by addition of macromolecular crowding agent on preparation of molecularly imprinted monolith
Zhang et al. Facile one-pot preparation of chiral monoliths with a well-defined framework based on the thiol–ene click reaction for capillary liquid chromatography
Ji et al. Superhydrophilic molecularly imprinted polymers based on a single cross-linking monomer for the recognition of iridoid glycosides in Di-huang pills
Yu et al. RECENT DEVELOPMENT AND APPLICATION OF MONOLITHIC COLUMNS.
CN104759117A (zh) 软骨藻酸分子印迹固相萃取小柱及其制备方法和应用
CN114369182A (zh) 一种两性结构的多孔高分子聚合物微球的制备方法
CN107936176B (zh) 白藜芦醇分子印迹聚合物的制备方法及应用
Qin et al. Detection and separation of chito/chitin oligosaccharides
CN114573770B (zh) 一种用于多糖提取的磁性分子印迹聚合物的制备方法及其应用
EP3762141A1 (en) Composite material for bioseparations
He et al. Novel post-functionalized polymer microspheres containing capsaicin as reversed-phase chromatography stationary phase separation for hydrophilic compounds
CN101148480A (zh) 苯基聚蔗糖微球及其制备方法
Rolls et al. High-performance liquid chromatography separation media based on functional polymers containing phenolic hydroxyls

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CP01 Change in the name or title of a patent holder
CP01 Change in the name or title of a patent holder

Address after: Tokyo, Japan

Patentee after: Lishennoco Co.,Ltd.

Address before: Tokyo, Japan

Patentee before: Showa electrical materials Co.,Ltd.

TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20230518

Address after: Tokyo, Japan

Patentee after: Showa electrical materials Co.,Ltd.

Address before: Tokyo, Japan

Patentee before: SHOWA DENKO Kabushiki Kaisha