CN109633157A - 一种乳腺癌筛查用血液检测试剂盒及其检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及癌症检测领域，尤其涉及一种乳腺癌筛查用血液检测试剂盒及其检测方法。提供一种乳腺癌筛查用血液检测试剂盒及其检测方法，包括盒体、盒盖，其中盒体包括左右对称的左腔室和右腔室；左腔室分为左下腔室和左上腔室，左上腔室内壁上设置有支撑板，支撑板上放置有酶标板；左上腔室底壁上设置有左加热丝；右腔室内部设置有用于摆放试管的上试管架和下试管架，右腔室底壁上设置右加热丝；左上腔室内设置有用于为左上腔室和右腔室提供水的供水管路；本发明的乳腺癌筛查用血液检测试剂盒可以为检测提供必要的环境条件，使乳腺癌筛查系统更加完善，操作更加简单，检测结果更加精确。
Description
技术领域
本发明涉及癌症检测领域，尤其涉及一种乳腺癌筛查用血液检测试剂盒及其检测方法。
背景技术
癌症是威胁人类健康最严重的疾病之一。尽管近年来癌症的诊断、治疗技术取得了长足进步，但是癌症依然是死亡率非常高的一类疾病，对人类健康构成了巨大威胁。早期诊断困难，准确性低，导致丧失最佳治疗时机，是造成癌症治疗效果差，死亡率高的主要原因，对于乳腺癌患者来说尤其如此。乳腺癌是最常见的女性恶性肿瘤，位居全球女性发病和死亡第一位。乳腺癌治疗的关键是早发现、早诊断、早治疗，而乳腺癌筛查是实现乳腺癌早发现、早诊断和早治疗的重要的二级预防手段。
目前全球常用的乳腺癌筛查手段包括临床乳腺检查(clinical breastexamination， CBE)、乳房X线摄影术(mammography，MAM)、超声成像(ultrasonography，US)和磁共振成像(magnetic resonanceimaging，MRI)等。但现有检测筛查乳腺癌的方法存在成本高，依赖医生经验，检测灵敏性低等缺点，缺少一种简便快捷且灵敏性高的检测。
近年来，分子生物学技术迅速发展，科学家有可能从分子水平发现和研究有价值的乳腺癌，并进而开发出简便易行的检测方法，用于乳腺癌的临床早期筛查、预测，从而实现乳腺癌的早发现、早治疗，以期提高生存率和生活质量。进入二十一世纪以来，利用体液、血液样品进行检测，成为比较简便和可靠的癌症诊断方式。如公开号为CN108061802A的专利公开了一种通过血液检测评定乳腺癌的方法，其通过检测血液中的葡萄糖浓度、胰岛素浓度、PKM2抗体的浓度来判断换乳腺癌的几率；公开号为CN102533990A的专利公开了一种乳腺癌变前期mRNA水平原位杂交检测试剂盒，其通过检测ZNF703基因的表达量进行乳腺癌筛查；但目前通过试剂盒检测的技术操作流程较为繁杂，由于没有与其检测方法相对应的试剂盒结构，操作仍然较为困难；另外，经过研究发现，使用试剂盒检测乳腺癌时，存在较高的复检率，而造成上述现象的原因在于测试条件要求较高，如测试时需要大量试验统计，向酶标板上的多个微孔滴加试剂时，易造成试剂滴落在微孔侧壁、孔外，导致非特异性吸附或溅出临近孔产生污染；再如水浴温度也是影响试验结构有效性的关键因素，一般水浴温度监控的是水的温度，而水的温度、水汽的温度、微孔中的温度均是不同的，对于精细化的试验，如果微孔中的温度不满足试验条件，将破坏试验结果；另外浸水深度的波动也会对微孔实际温度造成影响；再如试验时部分过程还需要遮光条件；因此，与检测方法相匹配的试剂盒结构是完成乳腺癌精确检测亟待解决的问题。
发明内容
针对上述内容，为解决上述问题，提供一种乳腺癌筛查用血液检测试剂盒及其检测方法，包括盒体、盒盖，其中盒体包括左右对称的左腔室和右腔室；左腔室分为左下腔室和左上腔室，左上腔室内壁上设置有支撑板，支撑板上放置有酶标板；左上腔室底壁上设置有左加热丝；右腔室内部设置有用于摆放试管的上试管架和下试管架，右腔室底壁上设置右加热丝；左上腔室内设置有用于为左上腔室和右腔室提供水的供水管路。
其中，酶标板包括固相载体和包被层，固相载体为多孔聚苯乙烯试剂板，固相载体上的孔的边缘设置凸台；左上腔室内酶标板的上方设置定位板，定位板上设置有与固相载体上的孔一一对应的定位孔、定位孔呈向下敞口的喇叭状，喇叭状定位孔的上端内径小于包被层内径，喇叭状定位孔的下端的内径大于凸台的外径；定位板有设置在左上腔室内壁上的左支撑块支撑，定位板上设置有与左支撑块上表面凹槽相匹配的定位凸起；右腔室的上试管架的上方设置有遮光板，遮光板由设置在右腔室内壁上的右支撑块支撑，遮光板的大小与定位板的大小相同，遮光板、定位板上表面分别设置有提杆，且遮光板、定位板的位置可互换。
其中，固相载体上设置至少个标准孔，标准孔的内底壁上设置温度传感器；支撑板的下表面设置左水位传感器，上试管架的下表面设置右水位传感器；左上腔室的侧壁上设置左压力控制阀，右腔室的侧壁上设置右压力控制阀；左压力控制阀位于靠近支撑板的下方，右压力控制阀位于靠近上试管架的下方；供水管路上设置有泵、紫外线灯管及为左上腔室和右腔室供水的支管路上的电磁阀；盒体上设置操控面板。
其中，该乳腺癌筛查用血液检测试剂盒的酶标板的包被层附着在固体载体上的微孔上，包被层包括CA153标记抗体Ab1；该乳腺癌筛查用血液检测试剂盒至少包括用于制备酶联检测探针Elastase-Ab2的CA153标记抗体Ab2、NaiO4溶液、Elastase溶液、醋酸钠缓冲液以及用于标记用的胰蛋白酶荧光标记物、用于检测用洗涤缓冲液。
乳腺癌筛查用血液检测试剂盒的检测方法：包括以下步骤：
1）将NaiO4溶液添加在Elastase溶液中，搅拌后用醋酸钠缓冲液透析，置于右腔室内，使用遮光板遮光处理，水浴温度控制在25℃；12小时后，向试管中加入CA153标记抗体Ab2，搅拌后加入NaBH4充分反应，用PBS缓冲液遮光透析处理12小时，得到酶联检测探针Elastase-Ab2；
2）在左上腔室内，将包括CA153标记抗体Ab1的包被层分别加入到固体载体上的多个微孔中；由供水管路为左上腔室供水至标准水位，左加热丝加热至温度传感器检测温度为37℃，将标准CA153抗原和病人血清样本由滴管穿过定位孔分别滴加到多个微孔中，并标准对比区和试验区，经过洗涤缓冲液洗涤后添加酶联检测探针Elastase-Ab2，再次经过洗涤后加入胰蛋白酶荧光标记物，最后读取酶标板荧光强度值。
有益效果：
本发明的乳腺癌筛查用血液检测试剂盒可以为检测提供必要的环境条件，使乳腺癌筛查系统更加完善，操作更加简单，检测结果更加精确。
本发明的试剂盒分为左右腔室，其中右腔室能够为前期酶联检测探针Elastase-Ab2的制备提供必需的操作环境，左侧的腔室能为后期检测提供必需的操作环境；左上腔室设置定位板，通过定位孔能够准确的将试剂滴入酶标板的微孔中，避免滴在孔壁上导致非特异性吸附，或溅出临近孔产生污染；定位孔呈向下敞口的喇叭状，喇叭状定位孔的上端内径小于包被层内径，喇叭状定位孔的下端的内径大于凸台的外径，避免凝结在定位板上的液体滴落进酶标板微孔而影响实验结果；
本发明的标准孔的内底壁上设置温度传感器22，支撑板17的下表面设置左水位传感器16，能够准确监控微孔内的温度及水浴深度，避免了因水浴深度变化及监控温度不准确造成的试验误差；另外本发明的盒体侧壁设置左、右压力控制阀，当水汽压力达到一定值时进行压力排放，用于放置因腔室内压力过大造成酶标板、遮光板等上下攒动从而影响实验结果；本发明的进水管路上设置紫外线灯管，能够为盒体水浴提供无菌环境；
本发明的试剂盒的酶标板的包被层附着在固体载体18上的微孔上，包被层包括CA153标记抗体Ab1，该乳腺癌筛查用血液检测试剂盒至少包括用于制备酶联检测探针Elastase-Ab2的CA153标记抗体Ab2、NaiO4溶液、Elastase溶液、醋酸钠缓冲液以及用于标记用的胰蛋白酶荧光标记物、用于检测用洗涤缓冲液，其中CA153是乳腺癌最重要的特异性标志物，胰蛋白酶荧光标记物的信噪比较高，通过上述试剂进行检测，有助于乳腺癌细胞的早期发现，且提高检测的灵敏度。
附图说明
图1为乳腺癌筛查用血液检测试剂盒的立体示意图；
图2为一种乳腺癌筛查用血液检测试剂盒盒体剖视示意图。
盒体1、盒盖2、进液口3、压力释放孔4、定位孔5、定位板6、提杆7、遮光板8、操控面板9、左下腔室10、泵12、紫外线灯管13、左加热丝14、左压力控制阀15、左水位传感器16、支撑板17、固相载体18、凸台19、左上腔室21、温度传感器22、左支撑块23、定位凸起25、右支撑块27、上试管架28、右水位传感器29、右压力控制阀30、试管31、下试管架32、右腔室33、出水孔34、右加热丝35。
具体实施方式
本发明的优点、特征以及达成所述目的的方法通过附图及后续的详细说明将会明确。
参见图1-图2，一种乳腺癌筛查用血液检测试剂盒，包括盒体1、盒盖2，其中盒体1包括左右对称的左腔室和右腔室33；左腔室分为左下腔室10和左上腔室21，左上腔室21内壁上设置有支撑板17，支撑板17上放置有酶标板；左上腔室21底壁上设置有左加热丝14；右腔室33内部设置有用于摆放试管的上试管架28和下试管架32，右腔室33底壁上设置右加热丝35；左上腔室21内设置有用于为左上腔室21和右腔室33提供水的供水管路11。
其中，酶标板包括固相载体18和包被层，固相载体18为多孔聚苯乙烯试剂板，固相载体18上的孔的边缘设置凸台19；左上腔室21内酶标板的上方设置定位板6，定位板6上设置有与固相载体18上的孔一一对应的定位孔5、定位孔5呈向下敞口的喇叭状，喇叭状定位孔5的上端内径小于包被层内径，喇叭状定位孔5的下端的内径大于凸台19的外径；定位板6有设置在左上腔室21内壁上的左支撑块23支撑，定位板6上设置有与左支撑块23上表面凹槽相匹配的定位凸起25；右腔室33的上试管架28的上方设置有遮光板8，遮光板8由设置在右腔室33内壁上的右支撑块27支撑，遮光板8的大小与定位板6的大小相同，遮光板8、定位板6上表面分别设置有提杆7，且遮光板8、定位板6的位置可互换。
其中，固相载体18上设置至少1个标准孔，标准孔的内底壁上设置温度传感器22；支撑板17的下表面设置左水位传感器16，上试管架28的下表面设置右水位传感器29；左上腔室21的侧壁上设置左压力控制阀15，右腔室33的侧壁上设置右压力控制阀30；左压力控制阀15位于靠近支撑板17的下方，右压力控制阀30位于靠近上试管架28的下方；供水管路11上设置有泵12、紫外线灯管13及为左上腔室21和右腔室33供水的支管路上的电磁阀；盒体1上设置操控面板9。
其中，该乳腺癌筛查用血液检测试剂盒的酶标板的包被层附着在固体载体18上的微孔上，包被层包括CA153标记抗体Ab1；该乳腺癌筛查用血液检测试剂盒至少包括用于制备酶联检测探针Elastase-Ab2的CA153标记抗体Ab2、NaiO4溶液、Elastase溶液、醋酸钠缓冲液以及用于标记用的胰蛋白酶荧光标记物、用于检测用洗涤缓冲液。
乳腺癌筛查用血液检测试剂盒的检测方法：包括以下步骤：
1）将NaiO4溶液添加在Elastase溶液中，搅拌后用醋酸钠缓冲液透析，置于右腔室33内，使用遮光板8遮光处理，水浴温度控制在25℃；12小时后，向试管中加入CA153标记抗体Ab2，搅拌后加入NaBH4充分反应，用PBS缓冲液遮光透析处理12小时，得到酶联检测探针Elastase-Ab2；
2）在左上腔室21内，将包括CA153标记抗体Ab1的包被层分别加入到固体载体18上的多个微孔中；由供水管路为左上腔室供水至标准水位，左加热丝加热至温度传感器22检测温度为37℃，将标准CA153抗原和病人血清样本由滴管穿过定位孔5分别滴加到多个微孔中，并标准对比区和试验区，经过洗涤缓冲液洗涤后添加酶联检测探针Elastase-Ab2，再次经过洗涤后加入胰蛋白酶荧光标记物，最后读取酶标板荧光强度值。
本发明的乳腺癌筛查用血液检测试剂盒可以为检测提供必要的环境条件，使乳腺癌筛查系统更加完善，操作更加简单，检测结果更加精确。
本发明的试剂盒分为左右腔室，其中右腔室能够为前期酶联检测探针Elastase-Ab2的制备提供必需的操作环境，左侧的腔室能为后期检测提供必需的操作环境；左上腔室设置定位板，通过定位孔能够准确的将试剂滴入酶标板的微孔中，避免滴在孔壁上导致非特异性吸附，或溅出临近孔产生污染；定位孔呈向下敞口的喇叭状，喇叭状定位孔的上端内径小于包被层内径，喇叭状定位孔的下端的内径大于凸台的外径，避免凝结在定位板上的液体滴落进酶标板微孔而影响实验结果；
本发明的标准孔的内底壁上设置温度传感器22，支撑板17的下表面设置左水位传感器16，能够准确监控微孔内的温度及水浴深度，避免了因水浴深度变化及监控温度不准确造成的试验误差；另外本发明的盒体侧壁设置左、右压力控制阀，当水汽压力达到一定值时进行压力排放，用于放置因腔室内压力过大造成酶标板、遮光板等上下攒动从而影响实验结果；本发明的进水管路上设置紫外线灯管，能够为盒体水浴提供无菌环境；
本发明的试剂盒的酶标板的包被层附着在固体载体18上的微孔上，包被层包括CA153标记抗体Ab1，该乳腺癌筛查用血液检测试剂盒至少包括用于制备酶联检测探针Elastase-Ab2的CA153标记抗体Ab2、NaiO4溶液、Elastase溶液、醋酸钠缓冲液以及用于标记用的胰蛋白酶荧光标记物、用于检测用洗涤缓冲液，其中CA153是乳腺癌最重要的特异性标志物，胰蛋白酶荧光标记物的信噪比较高，通过上述试剂进行检测，有助于乳腺癌细胞的早期发现，且提高检测的灵敏度。
以上所述，仅为本发明的优选实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。
Claims (5)
1.一种乳腺癌筛查用血液检测试剂盒，其特征在于：包括盒体（1）、盒盖（2），其中盒体（1）包括左右对称的左腔室和右腔室（33）；左腔室分为左下腔室（10）和左上腔室（21），左上腔室（21）内壁上设置有支撑板（17），支撑板（17）上放置有酶标板；左上腔室（21）底壁上设置有左加热丝（14）；右腔室33内部设置有用于摆放试管的上试管架（28）和下试管架（32），右腔室（33）底壁上设置右加热丝（35）；左上腔室（21）内设置有用于为左上腔室（21）和右腔室（33）提供水的供水管路（11）。
2.根据权利要求1所述的一种乳腺癌筛查用血液检测试剂盒，其特征在于：酶标板包括固相载体（18）和包被层，固相载体（18）为多孔聚苯乙烯试剂板，固相载体（18）上的孔的边缘设置凸台（19）；左上腔室（21）内酶标板的上方设置定位板（6），定位板（6）上设置有与固相载体（18）上的孔一一对应的定位孔（5）、定位孔（5）呈向下敞口的喇叭状，喇叭状定位孔（5）的上端内径小于包被层内径，喇叭状定位孔（5）的下端的内径大于凸台（19）的外径；定位板（6）有设置在左上腔室（21）内壁上的左支撑块（23）支撑，定位板（6）上设置有与左支撑块（6）23上表面凹槽相匹配的定位凸起（25）；右腔室（33）的上试管架（28）的上方设置有遮光板（8），遮光板（8）由设置在右腔室（33）内壁上的右支撑块（27）支撑，遮光板（8）的大小与定位板（6）的大小相同，遮光板（8）、定位板（6）上表面分别设置有提杆（7），且遮光板（8）、定位板（6）的位置可互换。
3.根据权利要求2所述的一种乳腺癌筛查用血液检测试剂盒，其特征在于：固相载体（18）上设置至少1个标准孔，标准孔的内底壁上设置温度传感器（22）；支撑板（17）的下表面设置左水位传感器（16），上试管架（28）的下表面设置右水位传感器（29）；左上腔室（21）的侧壁上设置左压力控制阀（15），右腔室（33）的侧壁上设置右压力控制阀（30）；左压力控制阀（15）位于靠近支撑板（17）的下方，右压力控制阀（30）位于靠近上试管架（28）的下方；供水管路（11）上设置有泵（12）、紫外线灯管（13）及为左上腔室（21）和右腔室（33）供水的支管路上的电磁阀；盒体（1）上设置操控面板（9）。
4.根据权利要求3所述的一种乳腺癌筛查用血液检测试剂盒，其特征在于：该乳腺癌筛查用血液检测试剂盒的酶标板的包被层附着在固体载体（18）上的微孔上，包被层包括CA153标记抗体Ab1；该乳腺癌筛查用血液检测试剂盒至少包括用于制备酶联检测探针Elastase-Ab2的CA153标记抗体Ab2、NaiO4溶液、Elastase溶液、醋酸钠缓冲液以及用于标记用的胰蛋白酶荧光标记物、用于检测用洗涤缓冲液。
5.根据权利要求4所述的一种乳腺癌筛查用血液检测试剂盒的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）将NaiO4溶液添加在Elastase溶液中，搅拌后用醋酸钠缓冲液透析，置于右腔室（33）内，使用遮光板（8）遮光处理，水浴温度控制在25℃；12小时后，向试管中加入CA153标记抗体Ab2，搅拌后加入NaBH4充分反应，用PBS缓冲液遮光透析处理12小时，得到酶联检测探针Elastase-Ab2；
2）在左上腔室（21）内，将包括CA153标记抗体Ab1的包被层分别加入到固体载体（18）上的多个微孔中；由供水管路为左上腔室供水至标准水位，左加热丝加热至温度传感器（22）检测温度为37℃，将标准CA153抗原和病人血清样本由滴管穿过定位孔（5）分别滴加到多个微孔中，并标准对比区和试验区，经过洗涤缓冲液洗涤后添加酶联检测探针Elastase-Ab2，再次经过洗涤后加入胰蛋白酶荧光标记物，最后读取酶标板荧光强度值。
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