CN109627283A - 一种同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法 - Google Patents

一种同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法，涉及桑叶利用领域，要解决的是不能同时提取桑叶多糖和桑叶蛋白的问题。具体步骤如下：步骤一，将桑叶洗净、烘干并且破碎，再向其中加入缓冲液并且浸泡充分，使得桑叶细胞溶胀破裂，得到第一混合物；步骤二，将第一混合物离心并且收集上清液和滤渣，对上清液进行提取，即得到桑叶蛋白；步骤三，将滤渣进行酶解、过滤和干燥，即得到桑叶多糖。本发明通过对桑叶利用缓冲液浸泡并且离心，分别对上清液和滤渣采用不同的工艺进行提取，可以同时得到桑叶蛋白和桑叶多糖，降低了提取成本，提高了资源利用率，桑叶蛋白和桑叶多糖的提取率高，具有广阔的使用前景。

Description

一种同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法
技术领域
本发明涉及桑叶利用领域，具体是一种同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法。
背景技术
桑叶，是桑科植物桑的干燥叶，又名家桑、荆桑、桑椹树、黄桑叶等，完整叶片呈或宽卵形，叶片基部心脏形，顶端微尖，边缘有锯齿，叶脉密生白柔毛，全国大部分地区多有生产。桑叶有疏散风热，清肺润燥，清肝明目的功效；且有治疗风热感冒，肺热燥咳，头晕头痛，目赤昏花的作用。
现代中、西医把桑叶和桑叶生物制剂作为改善糖尿病及其他各种疑难杂症的药物而使用，认为其药效极为广泛，人们需要对桑叶进行提取，桑叶蛋白和桑叶多糖就是桑叶中常见的提取物。
现有的提取方法只能提取桑叶蛋白或者桑叶多糖，不能同时对桑叶蛋白和桑叶多糖进行提取，人们在进行这方面的研究。
发明内容
本发明的目的在于提供一种同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法，具体步骤如下：
步骤一，将桑叶洗净、烘干并且破碎，再向其中加入缓冲液并且浸泡充分，使桑叶粉末充分吸收缓冲液膨胀，制作桑叶细胞溶胀破裂，得到第一混合物；
步骤二，将第一混合物离心并且收集上清液和滤渣，再将上清液加入脱蛋白液中并且搅拌50-75分钟，静置分层后收集上层溶液，得到蛋白粗提液，再将蛋白粗提液加入Phenyl-Sepharose柱中并且依次用碳酸氢钠、氯仿和蒸馏水洗脱，将洗脱液采用超临界萃取，去除酯类和色素，然后再加入离子交换柱中，依次用质量分数为15-22％的缓冲液水溶液、8mmol/L的醋酸钠水溶液、5mmol/L的醋酸水溶液洗离子交换柱，然后用含有磷酸钠的缓冲液洗脱，即得到桑叶蛋白；
步骤三，将滤渣加入蛋白酶中酶解，酶解完全后灭酶，得到酶解液，将酶解液离心、过滤并且取上清液，然后进行蒸发浓缩，得到粗提液，将粗提液加入聚乙二醇并且搅拌均匀，静置20-30分钟后离心分离，取上清液，再用超滤膜过滤，截流液进行冷冻干燥，即得到桑叶多糖。
作为本发明进一步的方案：步骤一中缓冲液包括石油醚、磷酸、水和硬脂酸镁，石油醚、磷酸、水和硬脂酸镁的重量之比为15-19:2.6-3.3:34-42:4.2-5.6。
作为本发明进一步的方案：步骤一中烘干温度为5-12摄氏度。
作为本发明进一步的方案：步骤二中离心转速为7560-8460rpm，离心温度为2-8摄氏度，离心时间为10-15分钟。
作为本发明进一步的方案：步骤二中超临界萃取的压强为22-26.5MPa，温度为46-60摄氏度。
作为本发明进一步的方案：步骤三中酶解采用功率为40-80W，频率为21-26KHz的超声波辅助。
作为本发明进一步的方案：步骤三中超滤膜的孔径为0.5-8.6微米。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明通过对桑叶利用缓冲液浸泡并且离心，分别对上清液和滤渣采用不同的工艺进行提取，可以同时得到桑叶蛋白和桑叶多糖，降低了提取成本，提高了资源利用率，桑叶蛋白和桑叶多糖的提取率高，具有广阔的使用前景。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
一种同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法，具体步骤如下：
步骤一，将桑叶洗净、在8摄氏度下烘干并且破碎，再向其中加入缓冲液并且浸泡充分，缓冲液包括石油醚、磷酸、水和硬脂酸镁，石油醚、磷酸、水和硬脂酸镁的重量之比为15:2.6:34:4.2，使桑叶粉末充分吸收缓冲液膨胀，使得桑叶细胞溶胀破裂，得到第一混合物；
步骤二，将第一混合物离心并且收集上清液和滤渣，再将上清液加入脱蛋白液中并且搅拌64分钟，静置分层后收集上层溶液，得到蛋白粗提液，再将蛋白粗提液加入Phenyl-Sepharose柱中并且依次用碳酸氢钠、氯仿和蒸馏水洗脱，将洗脱液采用超临界萃取，超临界萃取的压强为23.8MPa，温度为55摄氏度，去除酯类和色素，然后再加入离子交换柱中，依次用质量分数为18％的缓冲液水溶液、8mmol/L的醋酸钠水溶液、5mmol/L的醋酸水溶液洗离子交换柱，然后用含有磷酸钠的缓冲液洗脱，即得到桑叶蛋白；
步骤三，将滤渣加入蛋白酶中酶解，酶解完全后灭酶，得到酶解液，将酶解液离心、过滤并且取上清液，然后进行蒸发浓缩，得到粗提液，将粗提液加入聚乙二醇并且搅拌均匀，静置25分钟后离心分离，取上清液，再用超滤膜过滤，截流液进行冷冻干燥，即得到桑叶多糖。
实施例2
一种同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法，具体步骤如下：
步骤一，将桑叶洗净、在7摄氏度下烘干并且破碎，再向其中加入缓冲液并且浸泡充分，缓冲液包括石油醚、磷酸、水和硬脂酸镁，石油醚、磷酸、水和硬脂酸镁的重量之比为16.8:3.1:37.6:4.85，使桑叶粉末充分吸收缓冲液膨胀，使得桑叶细胞溶胀破裂，得到第一混合物；
步骤二，将第一混合物离心并且收集上清液和滤渣，离心转速为7860rpm，离心温度为6摄氏度，离心时间为12分钟，再将上清液加入脱蛋白液中并且搅拌58分钟，静置分层后收集上层溶液，得到蛋白粗提液，再将蛋白粗提液加入Phenyl-Sepharose柱中并且依次用碳酸氢钠、氯仿和蒸馏水洗脱，将洗脱液采用超临界萃取，超临界萃取的压强为25.2MPa，温度为55摄氏度，去除酯类和色素，然后再加入离子交换柱中，依次用质量分数为20％的缓冲液水溶液、8mmol/L的醋酸钠水溶液、5mmol/L的醋酸水溶液洗离子交换柱，然后用含有磷酸钠的缓冲液洗脱，即得到桑叶蛋白；
步骤三，将滤渣加入蛋白酶中酶解，酶解采用功率为60W，频率为25KHz的超声波辅助，酶解完全后灭酶，得到酶解液，将酶解液离心、过滤并且取上清液，然后进行蒸发浓缩，得到粗提液，将粗提液加入聚乙二醇并且搅拌均匀，静置28分钟后离心分离，取上清液，再用孔径为2.4微米的超滤膜过滤，截流液进行冷冻干燥，即得到桑叶多糖。
实施例3
一种同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法，具体步骤如下：
步骤一，将桑叶洗净、在10摄氏度烘干并且破碎，再向其中加入缓冲液并且浸泡充分，缓冲液包括石油醚、磷酸、水和硬脂酸镁，石油醚、磷酸、水和硬脂酸镁的重量之比为19:3.3:42:5.6，使桑叶粉末充分吸收缓冲液膨胀，使得桑叶细胞溶胀破裂，得到第一混合物；
步骤二，将第一混合物离心并且收集上清液和滤渣，再将上清液加入脱蛋白液中并且搅拌72分钟，静置分层后收集上层溶液，得到蛋白粗提液，再将蛋白粗提液加入Phenyl-Sepharose柱中并且依次用碳酸氢钠、氯仿和蒸馏水洗脱，将洗脱液采用超临界萃取，超临界萃取的压强为24.7MPa，温度为56摄氏度，去除酯类和色素，然后再加入离子交换柱中，依次用质量分数为20％的缓冲液水溶液、8mmol/L的醋酸钠水溶液、5mmol/L的醋酸水溶液洗离子交换柱，然后用含有磷酸钠的缓冲液洗脱，即得到桑叶蛋白；
步骤三，将滤渣加入蛋白酶中酶解，酶解采用功率为70W，频率为25KHz的超声波辅助，酶解完全后灭酶，得到酶解液，将酶解液离心、过滤并且取上清液，然后进行蒸发浓缩，得到粗提液，将粗提液加入聚乙二醇并且搅拌均匀，静置25分钟后离心分离，取上清液，再用孔径为5.8微米的超滤膜过滤，截流液进行冷冻干燥，即得到桑叶多糖。
对比例1
采用现有方法对桑叶提取桑叶多糖。
对比例2
采用现有方法对桑叶提取桑叶蛋白。
分别采用实施例1-3的方法、对比例1的方法和对比例2的方法进行提取，桑叶的重量均为400g，计算得到的桑叶多糖和桑叶蛋白的提取率，结果见表1。
表1
桑叶多糖/g 桑叶蛋白/g 桑叶多糖提取率 桑叶蛋白提取率
实施例1 161.8 50.3 40.45％ 12.58％
实施例2 167.3 52.6 41.83％ 13.15％
实施例3 156.2 49.7 39.05％ 12.43％
对比例1 112.6 - 28.15％ -
对比例2 - 31.4 - 7.85％
从表1中可以看出，实施例1-3的方法在提取率上均高于对比例1和对比例2的方法，表明本发明的方法不仅可以同时提取桑叶多糖和桑叶蛋白，还具有更高的提取率。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (7)

1.一种同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法，其特征在于，具体步骤如下：
步骤一，将桑叶洗净、烘干并且破碎，再向其中加入缓冲液并且浸泡充分，使得桑叶细胞溶胀破裂，得到第一混合物；
步骤二，将第一混合物离心并且收集上清液和滤渣，再将上清液加入脱蛋白液中并且搅拌50-75分钟，静置分层后收集上层溶液，得到蛋白粗提液，再将蛋白粗提液加入Phenyl-Sepharose柱中并且依次用碳酸氢钠、氯仿和蒸馏水洗脱，将洗脱液采用超临界萃取，然后再加入离子交换柱中，依次用质量分数为15-22％的缓冲液水溶液、8mmol/L的醋酸钠水溶液、5mmol/L的醋酸水溶液洗离子交换柱，然后用含有磷酸钠的缓冲液洗脱，即得到桑叶蛋白；
步骤三，将滤渣加入蛋白酶中酶解，酶解完全后灭酶，得到酶解液，将酶解液离心、过滤并且取上清液，然后进行蒸发浓缩，得到粗提液，将粗提液加入聚乙二醇并且搅拌均匀，静置20-30分钟后离心分离，取上清液，再用超滤膜过滤，截流液进行冷冻干燥，即得到桑叶多糖。
2.根据权利要求1所述的同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法，其特征在于，所述步骤一中缓冲液包括石油醚、磷酸、水和硬脂酸镁，石油醚、磷酸、水和硬脂酸镁的重量之比为15-19:2.6-3.3:34-42:4.2-5.6。
3.根据权利要求1或2所述的同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法，其特征在于，所述步骤一中烘干温度为5-12摄氏度。
4.根据权利要求1所述的同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法，其特征在于，所述步骤二中离心转速为7560-8460rpm，离心温度为2-8摄氏度，离心时间为10-15分钟。
5.根据权利要求1或4所述的同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法，其特征在于，所述步骤二中超临界萃取的压强为22-26.5MPa，温度为46-60摄氏度。
6.根据权利要求1所述的同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法，其特征在于，所述步骤三中酶解采用功率为40-80W，频率为21-26KHz的超声波辅助。
7.根据权利要求1或6所述的同时提取桑叶蛋白和桑叶多糖的方法，其特征在于，所述步骤三中超滤膜的孔径为0.5-8.6微米。
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