CN109620836A - 一种具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物及其用途和基于此组合物的药物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物及其用途和基于此组合物的药物，该复方药物组合物的活性成分是由摩尔比为1:5～1:15的阿霉素和荜茇酰胺组成。实验以MDA‑MB‑231人乳腺癌细胞为模型，通过MTT实验并应用CompuSyn软件分析，发现当阿霉素与荜茇酰胺摩尔比为1:10配伍时具有良好的协同效应；通过细胞凋亡实验，发现两药联合使用时促凋亡作用显著优于单药组；通过裸鼠荷瘤模型给药实验，发现联合用药组能够有效抑制裸鼠体内MDA‑MB‑231细胞异种移植肿瘤的生长，且其作用显著优于单药组。综上，荜茇酰胺和阿霉素联合用药具有较强协同抑制乳腺癌的作用，因而具有良好的临床用药开发前景。

Description

一种具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物及其用途和基于此 组合物的药物

技术领域

本发明属于天然药物领域，具体涉及一种具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物及其用途和基于此组合物的药物。

背景技术

根据国际癌症研究机构(IARC)统计数据，预计2018年全球将新增1810万癌症病例，另外有970万癌症患者死亡。据调查，乳腺癌发病率占11.6％，在全球恶性肿瘤中位居第二，死亡率6.6％，在全球恶性肿瘤中位居第五。根据国家癌症中心发布的最新一期全国癌症统计数据，我国恶性肿瘤新发病例380.4万例，平均每天超过一万人，乳腺癌在全国发病率和死亡率分别占比11.2％和9.2％。当前乳腺癌治疗方法以手术和放化疗为主，其风险大、费用高、毒副作用强，大大增加了病患的痛苦。因此，研究和开发一种治疗效果好、不易复发的抗乳腺癌药物是亟待解决的难题，寻求安全、有效、低价的抗肿瘤药物以及研究其作用机理，具有重要的临床意义。

荜茇酰胺(piperlongumine，PL)又称荜茇明碱(piplartine)，最初分离自胡椒科植物荜茇Piper longum Linn.的根，属于具有生物活性的生物碱类天然产物。随着对荜茇酰胺研究的深入，发现荜茇酰胺具有多种重要的药用价值，尤其对癌细胞具有明显的细胞毒作用，而对正常细胞毒性极小。(Nature,2011,457(7355):231-4；Mol Cell,2015,38(4):327-35.)因此，荜茇酰胺可作为一种极具潜力的能够选择性杀伤癌细胞的天然产物单体。

阿霉素(doxorubicin，DOX)又称多柔比星，是一种从真菌菌株中提取的有抗癌作用的蒽环类抗生素，属周期非特异性抗癌药物，能有效抑制DNA和RNA的合成，对各生长周期的癌细胞均有杀灭作用，对于急性白血病(淋巴细胞性和粒细胞性)、恶性淋巴瘤、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、甲状腺癌、前列腺癌、睾丸癌、胃癌、肝癌等多种癌症具有积极的预防和治疗作用，但其具有一定毒副作用，尤其是心脏毒性。(Oncogene,2001,20(11):1300-6；CellPhysiol Biochem,2018,51(1):113-128.)

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物及其用途和基于此组合物的药物，以克服现有技术存在的缺陷，本发明可在较低剂量配伍时产生较好的协同药理效应，因而可以大幅降低阿霉素的毒副作用，具有良好的临床用药开发前景。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物，该复方药物组合物由荜茇酰胺和阿霉素组成，所述阿霉素和荜茇酰胺的摩尔比为1:5～1:15。

进一步地，所述阿霉素和荜茇酰胺的摩尔比为1:10。

进一步地，所述复方药物组合物在小鼠实验中的剂量为：0.8mg/kg阿霉素和4mg/kg荜茇酰胺。

一种具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物在制备抗乳腺癌药物中的用途。

一种基于具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物的药物，该药物包括上述药物组合物及药物上可接受的载体。

进一步地，所述载体为纳米材料、天然高分子材料或合成高分子材料。

进一步地，所述纳米材料为纳米磁性颗粒，所述天然高分子材料为胶原或淀粉，所述合成高分子材料为聚乙二醇。

进一步地，所述药物为复方药物组合物与药物上可接受的载体制成的微球剂、乳剂、软膏剂或植入剂。

与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

本发明在对阿霉素和荜茇酰胺配伍药理活性的研究中发现，将阿霉素和荜茇酰胺组合用药具有较好抗乳腺癌的协同作用，以MDA-MB-231人乳腺癌细胞为模型进行MTT检测，发现两药单用时均有较强的抑制增殖活性，并呈现良好的量效关系。以MDA-MB-231人乳腺癌细胞为模型进行MTT检测，结合经典联合用药原理和统计分析，两药联合摩尔比为1:5～1:15配伍时具有较好抗乳腺癌的协同作用(DOX与PL的摩尔比为1:10时，CI＝0.57)；以MDA-MB-231人乳腺癌细胞为模型进行凋亡检测，发现两药单用时均有促凋亡作用，联合用药时促凋亡作用更加明显，且与单药组间具有统计学差异(DOX与PL的摩尔比为1:10时，P<0.05)；以MDA-MB-231人乳腺癌细胞为模型进行裸鼠荷瘤模型给药检测，发现两药单用时均可抑制肿瘤生长，联合用药时抑制作用更加明显，且与单药组间具有统计学差异(DOX与PL的摩尔比为1:9时，P<0.05)，结果表明，荜茇酰胺和阿霉素组合物可在较低剂量配伍时产生较好的协同药理效应，因而可以大幅降低阿霉素的毒副作用，具有良好的临床用药开发前景。

附图说明

图1为MTT实验检测DOX和PL在不同浓度单独作用时，MDA-MB-231细胞的活率；

图2为MTT实验检测DOX和PL在不同摩尔比联合作用时，MDA-MB-231细胞的活率，其中(a)为DOX/PL:0.5/2.5μM(b)为DOX/PL:0.5/5μM(c)为DOX/PL:0.5/7.5μM；

图3为流式细胞术检测各组给药引起MDA-MB-231细胞的凋亡比例，其中(a)为DMSO对照(b)为PL 5μM(c)为DOX 0.5μM(d)为DOX/PL:0.5/5μM；

图4为裸鼠荷瘤模型给药实验中，各组肿瘤体积随给药时间延长的增长趋势；

图5为裸鼠荷瘤模型给药实验中，给药结束后从裸鼠体内取出的肿瘤。

具体实施方式

下面对本发明的做进一步详细描述：

一种具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物，该复方药物组合物的活性成分由荜茇酰胺和阿霉素组成，其中，阿霉素和荜茇酰胺的摩尔比为1:5～1:15，更优化的，阿霉素和荜茇酰胺的摩尔比为1:10。

一种具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物在制备抗乳腺癌药物中的用途，乳腺癌药物用于包括人在内的哺乳动物的乳腺癌的治疗。

一种基于具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物的药物，该药物包括上述药物组合物及药物上可接受的载体，载体为纳米材料、天然高分子材料或合成高分子材料，纳米材料为纳米磁性颗粒，所述天然高分子材料为胶原或淀粉，所述合成高分子材料为聚乙二醇，药物为复方药物组合物与药物上可接受的载体制成的微球剂、乳剂、软膏剂或植入剂。

下面结合实施例对本发明做进一步详细描述：

实施例1

MTT实验检测PL和DOX单用及联合用药在体外抑制乳腺癌细胞增殖的作用。

取对数生长期的MDA-MB-231细胞，按每孔3×10³个细胞铺于96孔板。培养24h后，弃上清，按以下分组给药。PL和DOX均以40μM起始，2倍梯度稀释。即检测浓度为40，20，10，5，2.5，1.25，0.625，0.3125，0.15625μM，DMSO为阴性对照，每组设3个复孔，培养72h。弃上清，每孔加入100μl MTT工作液(0.5mg/ml)，培养3h。弃上清，每孔加入100μl DMSO，放置于微型震荡仪上震荡10min，再转入酶标仪，于570nm处检测OD值。数据按存活率公式(存活率＝(给药组OD值/对照组OD值)×100)计算不同浓度药物作用时肿瘤细胞的存活率，结果如图1所示。将数据带入GraphPad Prism软件，计算其IC₅₀值。PL的IC₅₀值为4.644μM，DOX的IC₅₀值为0.407μM。

随后以相同条件的MTT法检测PL和DOX联合用药效果。给药分组包括DMSO对照组、PL单药组(2.5,5,7.5μM)、DOX单药组(0.5μM)、PL和DOX联合用药组(DOX/PL:0.5/2.5μM,0.5/5μM,0.5/7.5μM,即DOX与PL的摩尔比分别为1:5,1:10,1:15)。检测结果如图2所示，联合用药组对肿瘤细胞生长的抑制作用优于单药组，且联合用药组与单药组间具有统计学差异(P<0.05)。

以Median-effect Principle(中效原理或Chou-Talalay联合指数法)为评价基础，应用CompuSyn统计软件绘制不同效应下的合用指数曲线，从两药合用的效应与合用指数的关系定量评价两药之间是否存在协同效应。合用指数CI＝D₁/D_X1+D₂/D _X2+αD₁D₂/D_X1D_X2，其中D₁、D₂为两药单用时产生X效应时两药各自的浓度，D_X1、D_X2为两药合用时产生X效应时两药各自的浓度。因DOX与PL作用机制不同，故本实验中取α＝0。当CI＜1时，两药合用效应为协同，且数值越小，表明协同效应越强；CI＝1时，两药合用效应为相加；CI＞1时，两药合用效应为拮抗。经过计算，DOX与PL在不同摩尔比时合用指数CI值均小于1，当DOX与PL的摩尔比为1:5时，CI＝0.92；当DOX与PL的摩尔比为1:10时，CI＝0.57；当DOX与PL的摩尔比为1:15时，CI＝0.78，表明DOX和PL具有较好的协同效应，且在摩尔比为1:10时协同效应最强。

实施例2

流式细胞术检测PL和DOX单用及联合用药促乳腺癌细胞凋亡的作用。

取对数生长期的MDA-MB-231细胞，消化并重悬为细胞悬液，按每孔5×10⁵个细胞铺于6孔板。培养24h后，将细胞分成4组：DMSO对照组、PL单药组(5μM)、DOX单药组(0.5μM)、PL和DOX联合用药组(DOX/PL:0.5/5μM,即DOX与PL的摩尔比为1:10)，分别给药并作用48h。收集各孔细胞，同时双染Annexin V-FITC和PI染液，室温孵育15min。流式细胞仪检测双通道荧光信号，横坐标表示FL1通道(FITC)荧光信号强度，纵坐标表示FL2通道(PI)荧光信号强度。FL1通道单阳区为早期凋亡细胞，FL1通道和FL2通道双阳区为晚期凋亡细胞，细胞总凋亡率为两者之和。

流式细胞术检测细胞凋亡实验结果如图3所示，DMSO对照组、PL单药组、DOX单药组、PL和DOX联合用药组的总凋亡率分别为0.6％、13.1％、33.3％、55.4％，可见联合用药组的促凋亡作用优于单药组，且联合用药组与单药组间具有统计学差异(P<0.05)。

实施例3

裸鼠荷瘤模型给药实验检测PL和DOX单用及联合用药对裸鼠体内乳腺癌的抑制作用。

取24只4周龄雌性裸鼠安置在无菌鼠笼中，并提供纯水和繁殖饲料，隔天更换垫料，饲养一周后开始造模。取对数生长期的MDA-MB-231细胞，消化并用PBS重悬，按每只裸鼠注射1×10⁶个细胞于其倒数第二对乳腺处。当肿瘤体积达到约50mm³时，将裸鼠随机分为4组，分别为DMSO对照组、PL单药组(4mg/kg)、DOX单药组(0.8mg/kg)、DOX和PL联合用药组(DOX/PL:0.8/4mg/kg,即DOX与PL的摩尔比为1:9)。4组均为隔天腹腔给药，给药前测量肿瘤体积和裸鼠体重，持续3周。肿瘤体积计算公式为：V＝(l×w²)/2。其中V为肿瘤体积，l为肿瘤长径，w为肿瘤短径。

裸鼠荷瘤模型给药实验如图4和图5所示，可见PL和DOX联合用药组对裸鼠体内异种移植肿瘤的抑制效果优于单药组，且联合用药组与单药组间具有统计学差异(P<0.05)。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物，其特征在于，该复方药物组合物由荜茇酰胺和阿霉素组成，所述阿霉素和荜茇酰胺的摩尔比为1:5～1:15。

2.根据权利要求1所述的一种具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物，其特征在于，所述阿霉素和荜茇酰胺的摩尔比为1:10。

3.根据权利要求1所述的一种具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物，其特征在于，所述复方药物组合物在小鼠实验中的剂量为：根据小鼠体重，每千克对应使用0.8mg阿霉素和4mg荜茇酰胺。

4.权利要求1-3任一项所述的一种具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物在制备抗乳腺癌药物中的用途。

5.一种基于权利要求1-3任一项所述的具有抗乳腺癌作用的复方药物组合物的药物，其特征在于，该药物包括上述药物组合物及药物上可接受的载体。

6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述载体为纳米材料、天然高分子材料或合成高分子材料。

7.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述纳米材料为纳米磁性颗粒，所述天然高分子材料为胶原或淀粉，所述合成高分子材料为聚乙二醇。

8.根据权利要求6所述的药物，其特征在于，所述药物为复方药物组合物与药物上可接受的载体制成的微球剂、乳剂、软膏剂或植入剂。