CN109613250A - 焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法 - Google Patents
焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109613250A CN109613250A CN201811588104.3A CN201811588104A CN109613250A CN 109613250 A CN109613250 A CN 109613250A CN 201811588104 A CN201811588104 A CN 201811588104A CN 109613250 A CN109613250 A CN 109613250A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- test
- endotoxin
- concentration
- raw material
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/579—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving limulus lysate
Abstract
本发明公开了一种焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法,包括以下步骤:将焦磷酸柠檬酸铁原料用细菌内毒素检查用水配制成浓度为0.6g/10ml的样品溶液S,再用细菌内毒检查用水将样品溶液S稀释40倍,即溶液A(S40)。用灵敏度0.06EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查,37±1℃试管恒温仪中,保温60±2分钟,将试管从恒温仪中轻轻取出,缓缓倒转180°,若管内凝胶不变形,不从管壁滑脱者为阳性;凝胶不能保持完整从管壁滑脱者为阴性。本发明的试验方法科学,试验结果准确,填补了焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素检查方法的空白,具有广阔的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及鲎属溶成剂的生物物质,具体是一种焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法。
背景技术
焦磷酸柠檬酸铁作为一个铁的替代产品,以帮助维持透析依赖的慢性肾脏疾病患者维持血红蛋白。2014年11月,FDA肿瘤药物顾问委员会通过投票认为焦磷酸柠檬酸铁收益超过了其风险,推荐完全批准这款药物,该药物旨在非侵袭性地向透析患者骨髓输送铁。
随着制药工业的发展和科学技术的进步,人们发现革兰氏阴性菌细胞壁上的一种脂多糖(Lipoplysaccharide)和微量蛋白(Protein)的复合物——细菌内毒素,它的特殊性不是细菌或细菌的代谢产物,而是细菌死亡或解体后才释放出来的一种具有内毒素生物活性的物质,当机体内毒素浓度阈值>0.005ng/ml时,即可刺激体温调节中枢导致机体发热。
细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素,以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。鲎试剂是从栖生于海洋的节肢动物“鲎”的兰色血液中提取变形细胞溶解物,经低温冷冻干燥而成的生物试剂,专用于细菌内毒素检测。目前国际上销售的鲎试剂有两种,一种称美洲鲎试剂(LAL),由美国生产;另一种称东方鲎试剂(TAL)。TAL与LAL有相同的功效。细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。鲎试剂法检查内毒素的灵敏度为0.0001pg/ml,比家兔法灵敏10倍,操作简单易行,试验费用低,结果迅速可靠,特别适用于注射用原辅料、注射剂生产过程中的热原控制和家兔法不能检测的某些细胞毒性药物制剂,也是受到各国药典承认的一种通用方法。
由于焦磷酸柠檬酸铁原料中国国内少有产品上市,且《中国药典》2015版药典并未收载此原料,在设计细菌内毒素检查方法上存在极大的困难,所以,提出一种焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法是非常有必要的。
发明内容
本发明就是为了填补检测焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素领域的空白,所提出的一种焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法。
本发明是按照以下技术方案实现的。
一种焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法,包括以下步骤:
a.溶液的制备
溶液A:取焦磷酸柠檬酸铁原料,加入细菌内毒素检查用水,配制成浓度为0.6g/10ml的样品溶液S,用细菌内毒检查用水将样品溶液S稀释40倍,即溶液A(S40);
溶液C:用细菌内毒素检查用水与细菌内毒素标准品制成分别含细菌内毒素浓度2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ的内毒素溶液,即溶液C,每一浓度平行各做2支;
溶液B:将溶液A与细菌内毒素标准品制成分别含细菌内毒素浓度2λ、1λ、0.5λ和0.25λ的内毒素溶液,即溶液B,每一浓度平行各做4支;
溶液D:细菌内毒素检查用水,平行做2支;
b.细菌内毒素限值的确定
依据《中国药典》2015版四部通则1143“细菌内毒素检查法”,用灵敏度0.06EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查,初步将焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素限值设定为L<40EU/g,根据公式MVD=CL/λ,计算MVD值,并进行细菌内毒素干扰试验;若试验结果存在干扰,将内毒素限值设定为<50EU/g,重新进行干扰试验;
c.干扰实验
将试管中溶液轻轻混匀后,垂直放入37±1℃试管恒温仪中,保温60±2分钟;将试管从恒温仪中轻轻取出,缓缓倒转180°,若管内凝胶不变形,不从管壁滑脱者为阳性;凝胶不能保持完整从管壁滑脱者为阴性;
当溶液A和D所有平行管均为阴性;C溶液中的最大浓度2λ管均为阳性,最低浓度的0.25λ管均为阴性时,试验结果有效;按下式计算用细菌内毒素检查用水制成和供试液制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值
溶液Cλc=anti l g(∑X/2)
溶液Bλc=anti l g(∑X/4)
式中溶液Cλc:C溶液反应终点浓度的几何平均值;
溶液Bλc:B溶液反应终点浓度的几何平均值;
X:反应终点浓度的对数值;
当溶液A和D所有平行管均为阴性,0.5λ≤溶液Cλc≤2λ则结果符合鲎试剂灵敏度复核试验要求,试验有效,且0.5λ≤溶液Bλc≤2λ,认为供试品在该试验条件下不存在干扰作用;如溶液Bλc不在此规定范围内,则应放宽细菌内毒素限值并计算MVD,重新进行上述实验;
d.日常检查
将焦磷酸柠檬酸铁原料用细菌内毒素检查用水配制成溶液A(S40);用灵敏度0.06EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查,其内毒素限值小于40EU/g。
进一步的,所述焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素限值L<40EU/g,MVD0.06=40,最大不干扰浓度1.5mg/ml条件下进行的干扰试验无增强或抑制反应。
本发明获得了如下的有益效果。
本发明有效的解决了焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素限值设定困难的问题。本发明通过前期大量细菌内毒素初筛试验,确定了样品溶液浓度、稀释倍数、最大不干扰浓度,且细菌内毒素限值小于40EU/g。本发明的试验方法科学,试验结果准确,填补了焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素检查方法的空白,具有广阔的应用前景。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明。
一、试验准备
1.供试品:焦磷酸柠檬酸铁原料
2.鲎试剂:灵敏度:0.06EU/ml(购自湛江安度斯生物有限公司)
3.细菌内毒素标准品:效价:10EU/支(购自湛江安度斯生物有限公司)
4.细菌内毒素检查用水(购自湛江安度斯生物有限公司)
5.试验仪器(详见表1)
表1试验仪器
仪器名称 | 厂家 | 批号/型号 |
试管恒温仪 | 湛江安度斯 | TAL-40C |
旋涡混合器 | 上海医大 | XW-80A |
高温烤箱 | YAMATO | DKN612C |
精密移液器 | 上海求精 | 规格:50μl~250μl |
电子天平 | METTLER | PR502 |
二、试验方法的建立
1.溶液系列的制备
1.1溶液A的制备
称量供试品(焦磷酸柠檬酸铁原料)0.6g到试管中,加入细菌内毒素检查用水配制成浓度为0.6g/10ml的溶液,震荡,使原料充分溶解,即样品溶液S,用细菌内毒检查用水将样品溶液S稀释40倍,即溶液A(S40)。
1mlS+3mlW→4mlS4
1ml S4+9mlW→10mlS40
1.2.溶液C的制备
用细菌内毒素检查用水与细菌内毒素标准品制成分别含细菌内毒素浓度2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ的内毒素溶液。每一浓度平行各做2支。即溶液C。
1.3.溶液B的制备
将溶液A与细菌内毒素标准品制成分别含细菌内毒素浓度2λ、1λ、0.5λ和0.25λ的内毒素溶液,每一浓度平行各做4支。即溶液B。
1.8mlS40+0.2ml E1.25→2.0mlS40E0.125
1.0mlS40+1.0mlS40E0.125→2.0mlS40E0.06
1.0mlS40+1.0mlS40E0.06→2.0mlS40E0.03
1.0mlS40+1.0mlS40E0.03→2.0mlS40E0.015
1.4.另取细菌内毒素检查用水,作为溶液D,平行做两支,即阴性对照。
2.细菌内毒素限值(L)的确定
初筛试验:因焦磷酸柠檬酸铁注射液日常使用时,需加入到碳酸盐浓缩液中,使血液透析液中焦磷酸柠檬酸铁最终浓度达到0.11mg/L;依据《中国药典》2015版四部通则1143“细菌内毒素检查法”。初步将焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素限值设定为L<10EU/g、L<20EU/g、L<30EU/g、L<40EU/g、L<50EU/g进行初筛试验,试验结果如下:
根据初筛试验结果,拟将焦磷酸柠檬酸铁原料限值设定为L<40EU/g,并进行细菌内毒素干扰试验。若试验结果存在干扰,将内毒素限值设定为<50EU/g,重新进行干扰试验。
MVD的确定:
C:供试品溶液浓度,详见“1.1溶液A的制备”
鲎试剂的灵敏度复核符合规定
3.干扰实验
3.1试验条件
将试管中溶液轻轻混匀后,垂直放入37±1℃试管恒温仪中,保温60±2分钟。
3.2试验结果判定
将试管从恒温仪中轻轻取出,缓缓倒转180°,若管内凝胶不变形,不从管壁滑脱者为阳性,记录(+);凝胶不能保持完整从管壁滑脱者为阴性,记录(-)。保温和拿取试管过程应避免受到震动造成假阴性结果。
当溶液A和D所有平行管均为阴性;C溶液中的最大浓度2λ管均为阳性,最低浓度的0.25λ管均为阴性时,试验结果有效。按下式计算用细菌内毒素检查用水制成和供试液制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值(λc)。
溶液Cλc=anti l g(∑X/2)
溶液Bλc=anti l g(∑X/4)
式中溶液Cλc:C溶液反应终点浓度的几何平均值。
溶液Bλc:B溶液反应终点浓度的几何平均值。
X:反应终点浓度的对数值。
3.3期待结果
当溶液A和D所有平行管均为阴性,0.5λ≤溶液Cλc≤2λ则结果符合鲎试剂灵敏度复核试验要求,试验有效,且0.5λ≤溶液Bλc≤2λ,认为供试品在该试验条件下不存在干扰作用。
如溶液Bλc不在此规定范围内,则应放宽细菌内毒素限值并计算MVD,重新进行以上试验内容。
3.4试验结果及分析
干扰试验结果显示:溶液A和D所有平行管均为阴性,溶液Cλc结果符合鲎试剂灵敏度要求,且溶液Bλc均在0.5λ~2λ之间,符合2015版《中国药典》四部通则1143的相关要求,无干扰作用(干扰试验结果详见表2)。表明该原料细菌内毒素限值小于L<40EU/g时,最大不干扰浓度为1.5mg/ml。
表2细菌内毒素干扰试验结果
3.5试验结论
焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素限值L<40EU/g,MVD0.06=40,最大不干扰浓度1.5mg/ml条件下进行的干扰试验无增强或抑制反应,符合规定。该方法可用于焦磷酸柠檬酸铁原料的细菌内毒素日常检查。
4.日常检查
将焦磷酸柠檬酸铁原料用细菌内毒素检查用水配制成浓度为0.6g/10ml的样品溶液(S),再用细菌内毒检查用水将样品溶液S稀释40倍,即溶液A(S40)。用灵敏度0.06EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查,其内毒素限值小于40EU/g。
当鲎试剂、供试品的处方、生产工艺改变或试验环境中发生了任何有可能影响试验结果的变化时,须重新进行干扰试验。
Claims (2)
1.一种焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法,其特征在于:包括以下步骤:
a.溶液的制备
溶液A:取焦磷酸柠檬酸铁原料,加入细菌内毒素检查用水,配制成浓度为0.6g/10ml的样品溶液S,用细菌内毒检查用水将样品溶液S稀释40倍,即溶液A(S40);
溶液C:用细菌内毒素检查用水与细菌内毒素标准品制成分别含细菌内毒素浓度2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ的内毒素溶液,即溶液C,每一浓度平行各做2支;
溶液B:将溶液A与细菌内毒素标准品制成分别含细菌内毒素浓度2λ、1λ、0.5λ和0.25λ的内毒素溶液,即溶液B,每一浓度平行各做4支;
溶液D:细菌内毒素检查用水,平行做2支;
b.细菌内毒素限值的确定
依据《中国药典》2015版四部通则1143“细菌内毒素检查法”,用灵敏度0.06EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查,初步将焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素限值设定为L<40EU/g,根据公式MVD=CL/λ,计算MVD值,并进行细菌内毒素干扰试验;若试验结果存在干扰,将内毒素限值设定为<50EU/g,重新进行干扰试验;
c.干扰实验
将试管中溶液轻轻混匀后,垂直放入37±1℃试管恒温仪中,保温60±2分钟;将试管从恒温仪中轻轻取出,缓缓倒转180°,若管内凝胶不变形,不从管壁滑脱者为阳性;凝胶不能保持完整从管壁滑脱者为阴性;
当溶液A和D所有平行管均为阴性;C溶液中的最大浓度2λ管均为阳性,最低浓度的0.25λ管均为阴性时,试验结果有效;按下式计算用细菌内毒素检查用水制成和供试液制成的内毒素标准溶液的反应终点浓度的几何平均值
溶液Cλc=anti l g(∑X/2)
溶液Bλc=anti l g(∑X/4)
式中溶液Cλc:C溶液反应终点浓度的几何平均值;
溶液Bλc:B溶液反应终点浓度的几何平均值;
X:反应终点浓度的对数值;
当溶液A和D所有平行管均为阴性,0.5λ≤溶液Cλc≤2λ则结果符合鲎试剂灵敏度复核试验要求,试验有效,且0.5λ≤溶液Bλc≤2λ,认为供试品在该试验条件下不存在干扰作用;如溶液Bλc不在此规定范围内,则应放宽细菌内毒素限值并计算MVD,重新进行上述实验;
d.日常检查
将焦磷酸柠檬酸铁原料用细菌内毒素检查用水配制成溶液A(S40);用灵敏度0.06EU/ml的鲎试剂进行细菌内毒素检查,37±1℃试管恒温仪中,保温60±2分钟,将试管从恒温仪中轻轻取出,缓缓倒转180°,若管内凝胶不变形,不从管壁滑脱者为阳性;凝胶不能保持完整从管壁滑脱者为阴性。
2.根据权利要求1所述的一种焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法,其特征在于:所述焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素限值L<40EU/g,MVD0.06=40,最大不干扰浓度1.5mg/ml条件下进行的干扰试验无增强或抑制反应。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811588104.3A CN109613250A (zh) | 2018-12-25 | 2018-12-25 | 焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201811588104.3A CN109613250A (zh) | 2018-12-25 | 2018-12-25 | 焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109613250A true CN109613250A (zh) | 2019-04-12 |
Family
ID=66012222
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201811588104.3A Pending CN109613250A (zh) | 2018-12-25 | 2018-12-25 | 焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109613250A (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111141909A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-05-12 | 南京健友生化制药股份有限公司 | 一种凝胶法检测硫代甘油中细菌内毒素的方法 |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7939291B2 (en) * | 2003-03-17 | 2011-05-10 | Charles River Laboratories, Inc. | Methods for the detection of microbial contaminants |
WO2013032601A1 (en) * | 2011-09-01 | 2013-03-07 | Fresenius Medical Care Holdings, Inc. | Kit for sampling and detection of endotoxin in aqueous solution |
CN103837673A (zh) * | 2014-03-18 | 2014-06-04 | 张嵩 | 一种检测盐酸溴己新原料的细菌内毒素含量的方法 |
CN104232739A (zh) * | 2014-08-18 | 2014-12-24 | 中国大冢制药有限公司 | 枸橼酸原料中细菌内毒素的检测方法 |
CN105445467A (zh) * | 2015-11-27 | 2016-03-30 | 中国大冢制药有限公司 | 焦亚硫酸钠细菌内毒素的检测方法 |
CN105510590A (zh) * | 2015-11-27 | 2016-04-20 | 中国大冢制药有限公司 | 盐酸半胱氨酸细菌内毒素的检测方法 |
CN107727863A (zh) * | 2017-09-14 | 2018-02-23 | 三峡大学 | 酵母浸出物中内毒素含量的检测方法 |
-
2018
- 2018-12-25 CN CN201811588104.3A patent/CN109613250A/zh active Pending
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US7939291B2 (en) * | 2003-03-17 | 2011-05-10 | Charles River Laboratories, Inc. | Methods for the detection of microbial contaminants |
WO2013032601A1 (en) * | 2011-09-01 | 2013-03-07 | Fresenius Medical Care Holdings, Inc. | Kit for sampling and detection of endotoxin in aqueous solution |
CN103837673A (zh) * | 2014-03-18 | 2014-06-04 | 张嵩 | 一种检测盐酸溴己新原料的细菌内毒素含量的方法 |
CN104232739A (zh) * | 2014-08-18 | 2014-12-24 | 中国大冢制药有限公司 | 枸橼酸原料中细菌内毒素的检测方法 |
CN105445467A (zh) * | 2015-11-27 | 2016-03-30 | 中国大冢制药有限公司 | 焦亚硫酸钠细菌内毒素的检测方法 |
CN105510590A (zh) * | 2015-11-27 | 2016-04-20 | 中国大冢制药有限公司 | 盐酸半胱氨酸细菌内毒素的检测方法 |
CN107727863A (zh) * | 2017-09-14 | 2018-02-23 | 三峡大学 | 酵母浸出物中内毒素含量的检测方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
国家药典委员会: "《中华人民共和国药典 2015年版 四部》", 30 June 2015 * |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111141909A (zh) * | 2019-12-24 | 2020-05-12 | 南京健友生化制药股份有限公司 | 一种凝胶法检测硫代甘油中细菌内毒素的方法 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Sayers et al. | An observational study using blood gas analysis to assess neonatal calf diarrhea and subsequent recovery with a European Commission-compliant oral electrolyte solution | |
Constable | Acid-base assessment: when and how to apply the Henderson-Hasselbalch equation and strong ion difference theory | |
Green et al. | Use of di (2-ethylhexyl) phthalate–containing medical products and urinary levels of mono (2-ethylhexyl) phthalate in neonatal intensive care unit infants | |
Daniel et al. | Lamellar body count and stable microbubble test on gastric aspirates from preterm infants for the diagnosis of respiratory distress syndrome | |
Hu et al. | Application of metabolomics in diagnosis of cow mastitis: a review | |
Premi et al. | Changes of plasma analytes reflecting metabolic adaptation to the different stages of the lactation cycle in healthy multiparous Holstein dairy cows raised in high-welfare conditions | |
Sadeghian et al. | Pasteurella multocida pneumonic infection in goat: Hematological, biochemical, clinical and pathological studies | |
Giammarco et al. | Evaluation of brix refractometry to estimate immunoglobulin G content in buffalo colostrum and neonatal calf serum | |
Peng et al. | Vitamin D levels and clinical outcomes of SARS-CoV-2 Omicron subvariant BA. 2 in children: A longitudinal cohort study | |
CN109613250A (zh) | 焦磷酸柠檬酸铁原料细菌内毒素的检查方法 | |
CN105510590B (zh) | 盐酸半胱氨酸细菌内毒素的检测方法 | |
Chavoya-Guardado et al. | Firmicutes, bacteroidetes and actinobacteria in human milk and maternal adiposity | |
Okawa et al. | Effects of intrauterine infusion of a chitosan solution on recovery and subsequent reproductive performance of early postpartum dairy cows with endometritis: a pilot field trial | |
Huang et al. | Lactation mastitis: Promising alternative indicators for early diagnosis | |
Antanaitis et al. | Associations of automatically recorded body condition scores with measures of production, health, and reproduction | |
CN109470533A (zh) | 一种用于便携式血糖仪的人源全血基质质控品的制备方法 | |
Gordon et al. | Acute phase protein concentrations following serial procaine penicillin G injections in horses | |
CN109387643A (zh) | 一种血糖分析仪通用型全血血糖质控品及其制备方法 | |
CN104849224A (zh) | 一种补体c3检测试剂盒及其制备 | |
Valdmann et al. | Individual and combined effects of diseases and cytological endometritis on reproductive performance and culling of dairy cows: preliminary results | |
CN105445467B (zh) | 焦亚硫酸钠细菌内毒素的检测方法 | |
Pluske et al. | A modification to the isotope-dilution technique for estimating milk intake of pigs using pig serum | |
CN107091934B (zh) | 一种直接胆红素测定试剂盒及配置方法以及其运用 | |
Rakowska et al. | Less typical courses of Rhodococcus equi Infections in Foals | |
Fernández et al. | Pointing out some issues regarding reproduction management in Murciano-Granadina goats |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20190412 |
|
RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |