CN109609484A - 复合脱毛酶制剂的制备方法及其在含小毛进口黄牛皮脱毛中的应用 - Google Patents

复合脱毛酶制剂的制备方法及其在含小毛进口黄牛皮脱毛中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及制革生产中的脱毛酶,特别是指复合脱毛酶制剂的制备方法及其在含小毛进口黄牛皮脱毛中的应用。复合脱毛酶制剂的制备包括发酵、脱毛酶制剂的制备、复合脱毛酶制剂的制备等工艺步骤。本发明解决了含小毛进口黄牛皮小毛不易脱除,常规酶脱毛需与其它种类酶制剂或化学助剂协同脱毛等缺陷。具有对于含小毛进口黄牛皮小毛脱除效果好、符合清洁化制革的要求等优点。

Description

复合脱毛酶制剂的制备方法及其在含小毛进口黄牛皮脱毛中 的应用
技术领域
本发明涉及制革生产中的脱毛酶,特别是指复合脱毛酶制剂的制备方法及其在含小毛进口黄牛皮脱毛中的应用。
背景技术
在光皮制革过程中,原料皮上的毛是无用之物,因此毛的去除是制革准备工段的主要目的之一。目前工厂最常用的脱毛方法是利用石灰对毛干的免疫作用保毛及硫化碱破坏毛根蛋白中的双硫键而使毛脱除来完成脱毛过程,这种方法虽然材料易得、成本低、操作简单、易控制、脱毛效率高,但通过这种方法会产生严重的环境污染等问题。脱毛工序是制革废水中污染物的主要来源,脱毛废液中COD负荷高,硫化物浓度高,pH小于8时会产生硫化氢气体,对人体产生伤害。含硫废水排入江河会使水质发臭发黑,严重的甚至会造成水生物的死亡。若渗入土壤中则会使农作物烂根。使用微生物处理含硫废水还可能抑制微生物生长,甚至破坏菌群,造成废水处理上的困难。因此,采用清洁化的无硫脱毛技术是制革必需要解决的问题。
酶是由活体细胞产生的具有催化作用的特殊蛋白质。其主要特点是其具有专一性和高效性,因为其作用条件缓和,本身无毒,作用过程中一般也不会产生其他有毒物质,因此酶制剂就成为了改变传统行业,实现清洁化生产的有效方法之一。酶法脱毛技术在制革中应用很早,但在灰碱法的出现后被其取代,由于灰碱法污染巨大,因此人们对酶脱毛的研究一直未停止。我国在70年代对酶脱毛进行过大量研究,主要使用1398、3492、2709、166等蛋白酶,但至今酶脱毛仍然没有被工业化生产广泛采用,其主要原因是目前脱毛酶成分比较复杂,在脱毛的同时,对胶原纤维的破坏程度也较大,总是会出现伤面、烂面的现象。
目前国内采用复合脱毛酶进行脱毛的大多数依旧使用含胶原蛋白酶的蛋白酶作为主体进行复合脱毛酶的复配,如CN104711379A中依旧使用1398、166 等蛋白酶与其他酶进行复配,这样只能减少胶原蛋白的损伤但并没有从根本上解决蛋白酶对胶原蛋白的破坏问题,这样一来有些酶脱毛工艺就还需要使用如蛋白酶抑制剂或蛋白酶保护剂等试剂对牛皮进行保护,如CN105603133A 中提到的使用蛋白酶抑制剂、蛋白酶保护剂,这些助剂中含有如硫酸钠、氯化钾、硫酸锂、氯化铝等多种化学试剂,后期可能会增加污水处理的困难。而且在《黄牛皮鞋面革酶法脱毛新工艺的研究》中提到高特尔等人研究发现酶法脱毛工艺技术控制难度大,黄牛皮经酶脱毛后小毛不易脱净等问题,这个问题在《汽车革制造中新型酶法脱毛的应用》中也有提及,但其对此的解决方法是使用碱性蛋白酶并用化学方法对其进行抑制以保证脱毛过程的安全,而化学法产生的污染问题并没有得到根本解决。在申请号为2018113166 97.8的专利申请中通过将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CGMCCNo.14836 发酵制备单一酶的脱毛酶制剂,这种菌株不产生胶原蛋白酶。在工厂小试时发现,上述单一酶的脱毛酶制剂对不含小毛的国产黄牛皮脱毛效果良好,在3 小时左右即可完成脱毛。但将这种单一酶作用于含有小毛的进口黄牛皮时,出现了小毛脱不净的问题。
目前酶脱毛工艺中对小毛的去除没有标准的评价体系,评价其去除是否干净以及脱毛后皮张是否有松面、烂面主要依靠企业操作工人的经验判断。
发明内容
本发明的目的在于复合脱毛酶制剂的制备方法及其在含小毛进口黄牛皮脱毛中的应用,所制备的复合脱毛酶制剂能够有效实现对于含小毛进口黄牛皮的小毛脱除。
本发明的整体技术构思是:
复合脱毛酶制剂的制备方法,包括如下工艺步骤:
A、发酵
将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CGMCC No.14836按照质量比为2%-4%的接种量接种于含10μg/ml,装液量为2.5L-3.5L的2YT发酵培养基中,在温度为35-37℃、转速为180-200转/分钟的条件下发酵,当OD600值为0.5-1 时加入0.5‰-1‰的诱导剂IPTG,转速调至250-300转/分钟的条件下培养 40-44小时后终止发酵制成含有脱毛酶的发酵液;
B、脱毛酶制剂JW-3-1的制备
将步骤A中制成的含有脱毛酶的发酵液离心收集上清液,制成脱毛酶制剂JW-3-1;
C、复合脱毛酶制剂的制备
按照步骤B中制备的脱毛酶制剂JW-3-1:中温α-淀粉酶:胰酶:脂肪酶:纤维素酶:弹性蛋白酶的质量份数比=15-35:10-30:10-20:10-25:5-10: 5-10的比例将上述酶复配均匀,其中每份为10000U的酶活,制成复合脱毛酶制剂。
复合脱毛酶制剂在含小毛口黄牛皮脱毛中的应用。
申请人需要说明的是,由于脱毛酶制剂JW-3-1、中温α-淀粉酶、胰酶、脂肪酶、纤维素酶、弹性蛋白酶的品质存在区别,为保证其作用效果,本申请中采用酶活作为其加入量及复配的技术要求,即中温α-淀粉酶为10-30份,每份含有10000U的酶活,10-30份共含有100000-300000U的酶活,其余以此类推。
所述JW-3-1蛋白酶、α-淀粉酶、胰酶、脂肪酶、纤维素酶、弹性蛋白酶均来自于动物、植物或微生物。
本发明的具体技术特征还有:
为便于实现工业化生产,优选的技术方案是,所述的枯草芽孢杆菌 Bacillussubtilis CGMCC No.14836接入发酵培养基之前进行扩大培养。
更为优选的技术方案是,所述的扩大培养包括菌种活化、摇瓶菌种的制备。
所述的菌种活化是将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CGMCC No.14836 按2%-4%接种量接种于含10μg/ml Cm的5mlLB液体培养基中,在温度为35-37 ℃、转速为160-180转/分钟的条件下培养6-10小时。
所述的摇瓶菌种的制备是将活化后的菌种接种于含10μg/mlCm的 50-100ml2YT培养基中,在温度为35-37℃、转速为160-180转/分钟的条件下培养8-12小时。
为便于复合脱毛酶制剂中各个酶在脱毛时起到更好的效果及协同作用,优选的技术方案是,脱毛酶制剂、中温α-淀粉酶、胰酶、脂肪酶、纤维素酶、弹性蛋白酶的适宜作用条件为:温度30-36℃,pH=6-7。
复合脱毛酶制剂在含小毛进口黄牛皮脱毛中的应用,包括如下工艺步骤:
a、干皮浸水
将进口黄牛皮干皮洗净,除去毛皮中杂物,加0.2%-0.4%的浸水酶, pH=8-10,室温浸泡至皮块成鲜皮状;
b、去肉
将步骤a所制备的浸水后的牛皮去除肉面脂肪;
c、除脂
在步骤b中去除肉面脂肪的皮块中加入其质量100%-300%的水,在其中加 1%的脱脂剂,室温下处理2-3小时除脂;
d、有温有浴转鼓酶脱毛
将步骤c所制备的除脂后的皮块在固液比=1:1-3、温度为30℃-36℃对的条件下进行,复合脱毛酶制剂用量为每千克含小毛进口黄牛皮中加入按照脱毛酶制剂JW-3-1:中温α-淀粉酶:胰酶:脂肪酶:纤维素酶:弹性蛋白酶的质量份数比=15-35:10-30:10-20:10-25:5-10:5-10的比例制备的复合脱毛酶制剂,其中每份为10000U的酶活,转速5-6转/分钟的条件下转鼓脱毛 2-5小时。
为验证本发明的技术效果,申请人进行了如下试验:
一、本申请中的复合酶制剂与申请号为201811316697.8制备的脱毛酶制剂脱含小毛进口黄牛皮蓝湿革粒面比较
1、试验场所:河北省微生物研究所酶工程实验室;
2、实验人员:秦梦;
3、实验过程
(1)蓝湿革的制备
选用含小毛进口黄牛皮按照常规工艺进行浸灰,片皮,去灰中和,浸酸和鞣制,其中去灰中和后的软化工艺采取皮重0.7%-0.8%的欧欧酶在34℃的条件下处理0.5-1小时;
(2)选用申请号为201811316697.8制备的脱毛酶制剂以及本发明所制备的复合脱毛酶制剂对步骤(1)所制备蓝湿革脱毛。
4、效果观察
(1)观察方式
用体视镜进行观察;
(2)试验结果
从宏观看,使用申请号为201811316697.8制备的脱毛酶制剂处理含小毛进口黄牛皮,脱完毛后牛皮上仍有大量小毛,使用本申请的复合酶制剂处理含小毛进口黄牛皮后,目视牛皮表面小毛已脱除干净,牛皮表面完整且未见伤面。
从微观看,使用申请号为201811316697.8制备的脱毛酶制剂处理含小毛进口黄牛皮,小毛仍旧很牢固的长在皮面上,使用本申请的复合酶制剂处理含小毛进口黄牛皮后,采用体视镜观察看出牛皮上小毛已脱净,牛皮表面完整且未见伤面。
二、脱毛后皮革的感官评价
采用申请号为201811316697.8制备的脱毛酶制剂处理后的含小毛进口黄牛皮皮块经感官评价未发现伤面、烂面的现象。
采用本发明所制备的复合脱毛酶制剂处理后的含小毛进口黄牛皮皮块经感官评价未发现伤面、烂面的现象。
本发明所取得的实质性特点和显著的技术进步在于:
1、本发明所制备的复合酶制剂不需要添加硫化物或其他脱毛化学品,避免对水质和空气的污染。
2、本发明所制备的脱毛酶制剂主要成分为枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisCGMCC No.14836生产的蛋白酶,不含胶原蛋白酶,对牛皮损伤小,不会产生伤面烂面的现象。
3、本发明所制备的复配酶制剂可有效解决含小毛进口黄牛皮小毛脱不净的问题。
4、本发明所制备的复配酶制剂扩大了脱毛酶制剂的应用市场,有助于推广利用酶制剂脱毛的工艺,符合国家对清洁化制革的要求。
附图说明
图1是采用不同脱毛工艺处理后的皮块照片比较。
图1A是采用申请号为201811316697.8制备的脱毛酶制剂处理后的含小毛进口黄牛皮皮块照片。
图1B是采用本发明所制备的复合脱毛酶制剂处理后的含小毛进口黄牛皮皮块照片。
图2是采用体视镜观察不同脱毛工艺处理后的蓝湿革显微图像。
图2A是采用申请号为201811316697.8制备的脱毛酶制剂处理含小毛进口黄牛皮处理后的蓝湿革显微图像观察结果。
图2B是采用本发明所制备的复合脱毛酶制剂对含小毛进口黄牛皮进行脱毛处理后的蓝湿革显微图像观察结果。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明做进一步描述,但不应理解为对本发明的限定,本发明的保护范围以权利要求记载的内容为准,任何依据说明书所做出的等效技术手段替换,均不脱离本发明的保护范围。
实施例1
复合脱毛酶制剂的制备方法,包括如下工艺步骤:
A、发酵
将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CGMCC No.14836按照质量比为2%-4%的接种量接种于含10μg/ml,装液量为2.5L-3.5L的2YT发酵培养基中,在温度为35-37℃、转速为180-200转/分钟的条件下发酵,当OD600值为0.5-1 时加入0.5‰-1‰的诱导剂IPTG,转速调至250-300转/分钟的条件下培养 40-44小时后终止发酵制成含有脱毛酶的发酵液;
B、脱毛酶制剂JW-3-1的制备
将步骤A中制成的含有脱毛酶的发酵液离心收集上清液,制成脱毛酶制剂JW-3-1;
C、复合脱毛酶制剂的制备
按照步骤B中制备的脱毛酶制剂JW-3-1:中温α-淀粉酶:胰酶:脂肪酶:纤维素酶:弹性蛋白酶的质量份数比=15:10:10:10:5:5的比例将上述酶复配均匀,其中每份为10000U的酶活,制成复合脱毛酶制剂。
所述的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CGMCC No.14836接入发酵培养基之前进行扩大培养。
所述的扩大培养包括菌种活化、摇瓶菌种的制备。
所述的菌种活化是将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CGMCC No.14836 按2%-4%接种量接种于含10μg/ml Cm的5mlLB液体培养基中,在温度为35-37 ℃、转速为160-180转/分钟的条件下培养6-10小时。
所述的摇瓶菌种的制备是将活化后的菌种接种于含10μg/ml Cm的 50-100ml2YT培养基中,在温度为35-37℃、转速为160-180转/分钟的条件下培养8-12小时。
脱毛酶制剂、中温α-淀粉酶、胰酶、脂肪酶、纤维素酶、弹性蛋白酶的适宜作用条件为:温度30-36℃,pH=6-7。
复合脱毛酶制剂在含小毛进口黄牛皮脱毛中的应用,包括如下工艺步骤:
a、干皮浸水
将含小毛进口黄牛皮干皮洗净,除去毛皮中杂物,加0.2%的浸水酶,pH=8,室温浸泡至皮块成鲜皮状;
b、去肉
将步骤a所制备的浸水后的牛皮去除肉面脂肪;
c、除脂
在步骤b中去除肉面脂肪的皮块中加入其质量100%的水,在其中加1%的脱脂剂,室温下处理3小时除脂;
d、有温有浴转鼓酶脱毛
将步骤c所制备的除脂后的皮块在固液比=1:1、温度为30℃对的条件下进行,复合脱毛酶制剂用量为每千克进口黄牛皮中加入按照脱毛酶制剂JW-3-1:中温α-淀粉酶:胰酶:脂肪酶:纤维素酶:弹性蛋白酶的质量份数比=15: 10:10:10:5:5的比例制备的复合脱毛酶制剂,其中每份为10000U的酶活,转速5-6转/分钟的条件下转鼓脱毛5小时。
实施例2
本实施例与实施例1的区别在于:
复合脱毛酶制剂的制备方法,包括如下工艺步骤:
C、复合脱毛酶制剂的制备
按照步骤B中制备的脱毛酶制剂JW-3-1:中温α-淀粉酶:胰酶:脂肪酶:纤维素酶:弹性蛋白酶的质量份数比=35:30:20:25:10:10的比例将上述酶复配均匀,其中每份为10000U的酶活,制成复合脱毛酶制剂。
复合脱毛酶制剂在进口黄牛皮脱毛中的应用,包括如下工艺步骤:
a、干皮浸水
将含小毛进口黄牛皮干皮洗净,除去毛皮中杂物,加0.4%的浸水酶, pH=10,室温浸泡至皮块成鲜皮状;
b、去肉
将步骤a所制备的浸水后的牛皮去除肉面脂肪;
c、除脂
在步骤b中去除肉面脂肪的皮块中加入其质量300%的水,在其中加1%的脱脂剂,室温下处理3小时除脂;
d、有温有浴转鼓酶脱毛
将步骤c所制备的除脂后的皮块在固液比=1:3、温度为36℃对的条件下进行,复合脱毛酶制剂用量为每千克进口黄牛皮中加入按照脱毛酶制剂 JW-3-1:中温α-淀粉酶:胰酶:脂肪酶:纤维素酶:弹性蛋白酶的质量份数比=35:30:20:25:10:10的比例制备的复合脱毛酶制剂,其中每份为10000U 的酶活,转速6转/分钟的条件下转鼓脱毛2小时。
其余内容同实施例1。
实施例3
本实施例与实施例1的区别在于:
复合脱毛酶制剂的制备方法,包括如下工艺步骤:
C、复合脱毛酶制剂的制备
按照步骤B中制备的脱毛酶制剂JW-3-1:中温α-淀粉酶:胰酶:脂肪酶:纤维素酶:弹性蛋白酶的质量份数比=25:20:15:18:8:8的比例将上述酶复配均匀,其中每份为10000U的酶活,制成复合脱毛酶制剂。
复合脱毛酶制剂在含小毛进口黄牛皮脱毛中的应用,包括如下工艺步骤:
a、干皮浸水
将含小毛进口黄牛皮干皮洗净,除去毛皮中杂物,加0.3%的浸水酶,pH=9,室温浸泡至皮块成鲜皮状;
b、去肉
将步骤a所制备的浸水后的牛皮去除肉面脂肪;
c、除脂
在步骤b中去除肉面脂肪的皮块中加入其质量200%的水,在其中加1%的脱脂剂,室温下处理2.5小时除脂;
d、有温有浴转鼓酶脱毛
将步骤c所制备的除脂后的皮块在固液比=1:2、温度为33℃对的条件下进行,复合脱毛酶制剂用量为每千克进口黄牛皮中加入按照脱毛酶制剂JW-3-1:中温α-淀粉酶:胰酶:脂肪酶:纤维素酶:弹性蛋白酶的质量份数比=25:20:15:18:8:8的比例制备的复合脱毛酶制剂,其中每份为10000U的酶活,转速5转/分钟的条件下转鼓脱毛4小时。
其余内容同实施例1。
实施例4
本实施例与实施例1的区别在于:
复合脱毛酶制剂的制备方法,包括如下工艺步骤:
C、复合脱毛酶制剂的制备
按照步骤B中制备的脱毛酶制剂JW-3-1:中温α-淀粉酶:胰酶:脂肪酶:纤维素酶:弹性蛋白酶的质量份数比=20:15:12:15:6:6的比例将上述酶复配均匀,其中每份为10000U的酶活,制成复合脱毛酶制剂。
复合脱毛酶制剂在含小毛进口黄牛皮脱毛中的应用,包括如下工艺步骤:
a、干皮浸水
将含小毛进口黄牛皮干皮洗净,除去毛皮中杂物,加0.2%的浸水酶,pH=9,室温浸泡至皮块成鲜皮状;
b、去肉
将步骤a所制备的浸水后的牛皮去除肉面脂肪;
c、除脂
在步骤b中去除肉面脂肪的皮块中加入其质量150%的水,在其中加1%的脱脂剂,室温下处理2.5小时除脂;
d、有温有浴转鼓酶脱毛
将步骤c所制备的除脂后的皮块在固液比=1:1.5、温度为32℃对的条件下进行,复合脱毛酶制剂用量为每千克进口黄牛皮中加入按照脱毛酶制剂 JW-3-1:中温α-淀粉酶:胰酶:脂肪酶:纤维素酶:弹性蛋白酶的质量份数比=20:15:12:15:6:6的比例制备的复合脱毛酶制剂,其中每份为10000U 的酶活,转速6转/分钟的条件下转鼓脱毛4小时。
其余内容同实施例1。
实施例5
本实施例与实施例1的区别在于:
复合脱毛酶制剂的制备方法,包括如下工艺步骤:
C、复合脱毛酶制剂的制备
按照步骤B中制备的脱毛酶制剂JW-3-1:中温α-淀粉酶:胰酶:脂肪酶:纤维素酶:弹性蛋白酶的质量份数比=30:25:18:20:9:9的比例将上述酶复配均匀,其中每份为10000U的酶活,制成复合脱毛酶制剂。
复合脱毛酶制剂在进口黄牛皮脱毛中的应用,包括如下工艺步骤:
a、干皮浸水
将含小毛进口黄牛皮干皮洗净,除去毛皮中杂物,加0.3%的浸水酶, pH=10,室温浸泡至皮块成鲜皮状;
b、去肉
将步骤a所制备的浸水后的牛皮去除肉面脂肪;
c、除脂
在步骤b中去除肉面脂肪的皮块中加入其质量250%的水,在其中加1%的脱脂剂,室温下处理2小时除脂;
d、有温有浴转鼓酶脱毛
将步骤c所制备的除脂后的皮块在固液比=1:2.5、温度为35℃对的条件下进行,复合脱毛酶制剂用量为每千克进口黄牛皮中加入按照脱毛酶制剂JW-3-1:中温α-淀粉酶:胰酶:脂肪酶:纤维素酶:弹性蛋白酶的质量份数比=30:25:18:20:9:9的比例制备的复合脱毛酶制剂,其中每份为10000U 的酶活,转速5转/分钟的条件下转鼓脱毛2.5小时。
其余内容同实施例1。

Claims (8)

1.复合脱毛酶制剂的制备方法,其特征在于包括如下工艺步骤:
A、发酵
将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CGMCC No.14836按照质量比为2%-4%的接种量接种于含10μg/ml,装液量为2.5L-3.5L的2YT发酵培养基中,在温度为35-37℃、转速为180-200转/分钟的条件下发酵,当OD600值为0.5-1时加入0.5‰-1‰的诱导剂IPTG,转速调至250-300转/分钟的条件下培养40-44小时后终止发酵制成含有脱毛酶的发酵液;
B、脱毛酶制剂JW-3-1的制备
将步骤A中制成的含有脱毛酶的发酵液离心收集上清液,制成脱毛酶制剂JW-3-1;
C、复合脱毛酶制剂的制备
按照步骤B中制备的脱毛酶制剂JW-3-1:中温α-淀粉酶:胰酶:脂肪酶:纤维素酶:弹性蛋白酶的质量份数比=15-35:10-30:10-20:10-25:5-10:5-10的比例将上述酶复配均匀,其中每份为10000U的酶活,制成复合脱毛酶制剂。
2.根据权利要求1所述的复合脱毛酶制剂的制备方法,其特征在于所述的枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CGMCC No.14836接入发酵培养基之前进行扩大培养。
3.根据权利要求2所述的复合脱毛酶制剂的制备方法,其特征在于所述的扩大培养包括菌种活化、摇瓶菌种的制备。
4.根据权利要求3所述的复合脱毛酶制剂的制备方法,其特征在于所述的菌种活化是将枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis CGMCC No.14836按2%-4%接种量接种于含10μg/mlCm的5mlLB液体培养基中,在温度为35-37℃、转速为160-180转/分钟的条件下培养6-10小时。
5.根据权利要求3或4中任一项所述的复合脱毛酶制剂的制备方法,其特征在于所述的摇瓶菌种的制备是将活化后的菌种接种于含10μg/mlCm的50-100ml2YT培养基中,在温度为35-37℃、转速为160-180转/分钟的条件下培养8-12小时。
6.根据权利要求1所述的复合脱毛酶制剂的制备方法,其特征在于脱毛酶制剂、中温α-淀粉酶、胰酶、脂肪酶、纤维素酶、弹性蛋白酶的适宜作用条件为:温度30-36℃,pH=6-7。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的复合脱毛酶制剂在含小毛进口黄牛皮脱毛中的应用。
8.根据权利要求7所述的复合脱毛酶制剂在含小毛进口黄牛皮脱毛中的应用,其特征在于包括如下工艺步骤:
a、干皮浸水
将含小毛进口黄牛皮干皮洗净,除去毛皮中杂物,加0.2%-0.4%的浸水酶,pH=8-10,室温浸泡至皮块成鲜皮状;
b、去肉
将步骤a所制备的浸水后的牛皮去除肉面脂肪;
c、除脂
在步骤b中去除肉面脂肪的皮块中加入其质量100%-300%的水,在其中加1%的脱脂剂,室温下处理2-3小时除脂;
d、有温有浴转鼓酶脱毛
将步骤c所制备的除脂后的皮块在固液比=1:1-3、温度为30℃-36℃的条件下进行,复合脱毛酶制剂用量为每千克含小毛进口黄牛皮中加入按照脱毛酶制剂JW-3-1:中温α-淀粉酶:胰酶:脂肪酶:纤维素酶:弹性蛋白酶的质量份数比=15-35:10-30:10-20:10-25:5-10:5-10的比例制备的复合脱毛酶制剂,其中每份为10000U的酶活,转速5-6转/分钟的条件下转鼓脱毛2-5小时。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113862321A (zh) * 2021-10-11 2021-12-31 齐鲁工业大学 一种提取牛毛或牛皮边角料中营养性成分的方法
CN114230855A (zh) * 2021-12-18 2022-03-25 河北省微生物研究所有限公司 利用复合酶制剂回收羊毛纤维的方法

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101235422A (zh) * 2008-02-02 2008-08-06 四川大学 动物皮复合酶脱毛剂及其应用
WO2008093353A1 (en) * 2007-01-31 2008-08-07 Council Of Scientific & Industrial Research An improved process for dehairing and fibre opening of hide/skin
CN101760569A (zh) * 2008-12-25 2010-06-30 峰安皮业股份有限公司 制革生物前处理方法
WO2011161135A1 (en) * 2010-06-22 2011-12-29 Novozymes A/S Enzyme dehairing of skins and hides
CN105420175A (zh) * 2015-12-07 2016-03-23 河北省微生物研究所 枯草工程菌Bacillus subtilis及其构建以及利用其生产脱毛酶制剂的方法
CN105524906A (zh) * 2014-09-29 2016-04-27 湖南新鸿鹰生物工程有限公司 一种含酸性蛋白酶的皮革软化复合酶及其制备方法
CN107190516A (zh) * 2017-07-19 2017-09-22 河北省微生物研究所 清洁化回收废弃兔毛纤维的方法
CN107326124A (zh) * 2017-07-24 2017-11-07 北京泛博清洁技术研究院有限公司 一种毛皮脱脂复合酶制剂及其制备方法
CN107881181A (zh) * 2017-12-14 2018-04-06 河北省微生物研究所 利用分子伴侣DnaK构建的中性蛋白酶基因、蛋白、枯草芽孢杆菌及制备和应用

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008093353A1 (en) * 2007-01-31 2008-08-07 Council Of Scientific & Industrial Research An improved process for dehairing and fibre opening of hide/skin
CN101235422A (zh) * 2008-02-02 2008-08-06 四川大学 动物皮复合酶脱毛剂及其应用
CN101760569A (zh) * 2008-12-25 2010-06-30 峰安皮业股份有限公司 制革生物前处理方法
WO2011161135A1 (en) * 2010-06-22 2011-12-29 Novozymes A/S Enzyme dehairing of skins and hides
CN105524906A (zh) * 2014-09-29 2016-04-27 湖南新鸿鹰生物工程有限公司 一种含酸性蛋白酶的皮革软化复合酶及其制备方法
CN105420175A (zh) * 2015-12-07 2016-03-23 河北省微生物研究所 枯草工程菌Bacillus subtilis及其构建以及利用其生产脱毛酶制剂的方法
CN107190516A (zh) * 2017-07-19 2017-09-22 河北省微生物研究所 清洁化回收废弃兔毛纤维的方法
CN107326124A (zh) * 2017-07-24 2017-11-07 北京泛博清洁技术研究院有限公司 一种毛皮脱脂复合酶制剂及其制备方法
CN107881181A (zh) * 2017-12-14 2018-04-06 河北省微生物研究所 利用分子伴侣DnaK构建的中性蛋白酶基因、蛋白、枯草芽孢杆菌及制备和应用

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
P.THANIKAIVELAN ET AL.: "Integrated hair removal and fiber opening process using mixed enzymes", 《CLEAN TECHN ENVIRON POLICY》 *
张玉红 等: "若干脱毛体系下的协同作用", 《西部皮革》 *
王芳 等: "多酶体系的协同作用在少硫浸灰中的应用", 《皮革科学与工程》 *
陈灿 等: "酶制剂在制革工业中的应用", 《西部皮革》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113862321A (zh) * 2021-10-11 2021-12-31 齐鲁工业大学 一种提取牛毛或牛皮边角料中营养性成分的方法
CN114230855A (zh) * 2021-12-18 2022-03-25 河北省微生物研究所有限公司 利用复合酶制剂回收羊毛纤维的方法

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