CN109596551A - 一种基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒及其方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒及方法，该试剂盒的试剂包括提取液（Na2HPO4.12H2O、NaH2PO4.2H2O、水）、试剂一（羧甲基纤维素钠、水）、试剂二（醋酸、无水醋酸钠、水）、试剂三（葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、4‑氨基安替比林、叠氮钠、PBS）、试剂四（重蒸馏酚、蒸馏水）。本发明首次利用GOD‑POD偶联法检测CL活性，其原理为CL催化羧甲基纤维素钠降解产生葡萄糖，葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶催化过氧化氢氧化4‑氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在505 nm有特征吸收峰，以此反映CL活性。

Description

一种基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒及其方法
技术领域
本发明属于生命科学领域，具体涉及一种基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒及其方法。
背景技术
纤维素酶（cellulase，CL）存在于细菌、真菌和动物体内，能够催化羧甲基纤维素降解，是一类可广泛应用于医药、食品、棉纺、环保及可再生资源利用等领域的酶制剂。
目前已有的检测纤维素酶测定方法为3，5二硝基水杨酸（DNS）显色法，该方法的缺点为1、杂质干扰强，容易受果糖、蔗糖等其他还原糖的影响；2、检测灵敏度不够高，纤维素酶活性低的样本容易检出负值；3、样本适用范围窄，不能够适用于培养细胞和血清（浆）等样本；4、检测重复性不好。
发明内容
为了克服上述现有技术存在的缺陷，本发明旨在提供一种基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒及其方法，具有适用范围广，检测灵敏度高，重复性好，操作简便，成本低廉等特点。
为实现上述技术目的，达到上述技术效果，本发明通过以下技术方案实现：
一种基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒，包括以下试剂：
提取液，液体100 mL×1瓶，由Na2HPO4.12H2O、NaH2PO4.2H2O和水混合而成，4℃保存；
试剂一，液体6mL×1瓶，由羧甲基纤维素钠和水混合而成，4℃保存；
试剂二，液体40mL×1瓶，，由醋酸、无水醋酸钠和水混合而成，4℃保存；
试剂三，液体10ml×1瓶，由葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、叠氮钠和PBS混合而成，4℃保存；
试剂四，液体10ml×1瓶，由重蒸馏酚和蒸馏水混合而成，置于棕色瓶中，4℃保存。
进一步的，所述提取液中所含的Na2HPO4.12H2O的质量为0.436g，NaH2PO4.2H2O的质量为0.1216g，水的体积为100mL。
进一步的，所述试剂一中所含的羧甲基纤维素钠的质量为0.03g，水的体积为6mL。
进一步的，所述试剂二中所含的醋酸的体积为0.134mL，无水醋酸钠的质量为0.138g，水的体积为40mL。
进一步的，所述试剂三中所含的葡萄糖氧化酶的质量为0.8mg，过氧化物酶的质量为0.4mg，4-氨基安替比林的质量为1mg，叠氮钠的质量为100mg，PBS的物质的量浓度为0.1mol/L，体积为10mL，PH为7.0。
进一步的，所述试剂四中所含的重蒸馏酚的质量为10mg，蒸馏水的体积为10ml。
一种利用上述试剂盒的基于微量法的纤维素酶活性测定方法，其测定原理为CL催化羧甲基纤维素钠降解产生葡萄糖，葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶(POD)催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在505 nm有特征吸收峰，以此反映CL活性。
本发明首次利用GOD-POD偶联法检测CL活性，其具体步骤如下：
步骤1 仪器和用品的准备；
准备可见分光光度计或酶标仪、水浴锅、移液器、微量石英比色皿或96孔板、研钵、冰、蒸馏水；
步骤2 显色液的配制；
根据使用需求，将试剂三和试剂四以1:1等体积混合，配制成显色液；
步骤3 纤维素酶的提取；
从细菌或培养细胞中提取：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例，超声波破碎细菌或细胞；采用离心率8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测；
从组织中提取：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例，进行冰浴匀浆，采用离心率8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测；
从血清或血浆样品中提取：血清或血浆样品直接检测；
步骤4 纤维素酶活性的测定操作；
1）取2支EP管，分别设定为第一对照管和第一测定管；
2）在第一对照管中加入50μL样本提取液、370μL试剂二和180μL蒸馏水，同时在第一测定管中加入50μL样本提取液、90μL试剂一、370μL试剂二和90μL蒸馏水；
3）分别将第一测定管和第一对照管在37℃下振荡反应1h后，再进行90℃水浴15min，冷却后，采用离心率8000g，25℃离心10min，取上清液；
4）另取2支EP管，分别设定为第二对照管和第二测定管；
5）在第二对照管中加入20μL第一对照管中的上清液和180μL的显色液；在第二测定管中加入20μL第二测定管中的上清液和180μL的显色液；
6）分别将第二对照管和第二测定管混匀，置37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）保温15min后，于505nm波长处分别读取测定管的吸光值A测定管和对照管的吸光值A对照管；
7）计算ΔA = A测定管- A对照管；
步骤5 纤维素酶活性的的计算；
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
标准条件下测定回归方程为y = 0.4858x - 0.0042，R2 = 0.9999；
其中，x为葡萄糖标准品浓度，单位为μmol/mL，y为吸光值，y=ΔA；
1）按照蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/mg prot) = (ΔA+0.0042)÷0.4858×V反总÷(V样×Cpr)÷T×1000= 411.69×(ΔA+0.0042)÷Cpr；
2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/g 鲜重) = (ΔA+0.0042)÷0.4858×V反总÷(W ×V样÷V样总)÷T×1000 = 411.69×(ΔA+0.0042)÷W；
3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/104 cell) = (ΔA+0.0042)÷0.4858×V反总÷(500×V样÷V样总)÷T×1000 = 0.823×(ΔA+0.0042)；
4）按血清或血浆体积计算：
单位的定义：每mL血清或血浆每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/mL) = (ΔA+0.0042)÷0.4858×V反总÷V样÷T×1000 = 411.69×(ΔA+0.0042)；
其中，V样=0.05mL，表示加入样本体积：；
V样总=1 mL，表示加入提取液体积；
V反总=0.6mL，表示反应体系总体积；
Cpr表示样本蛋白质浓度，单位为mg/mL；
W表示样本质量，单位为g；
500表示细菌或细胞总数500万；
T=60min，表示反应时间；
b.用96孔板测定的计算公式如下：
标准条件下测定回归方程为y = 0.2429x - 0.0042，R2 = 0.9999；
其中，x为葡萄糖标准品浓度，单位为μmol/mL，y为吸光值，y=ΔA；
1）按照蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/mg prot) = (ΔA+0.0042)÷0.2429×V反总÷(V样×Cpr)÷T×1000= 823.38×(ΔA+0.0042)÷Cpr；
2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/g 鲜重) = (ΔA+0.0042)÷0.2429×V反总÷(W ×V样÷V样总)÷T×1000 = 823.38×(ΔA+0.0042)÷W；
3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol 葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/104 cell) = (ΔA+0.0042)÷0.2429×V反总÷(500 ×V样÷V样总)÷T×1000 = 1.647×(ΔA+0.0042)；
4）按血清或血浆体积计算：
单位的定义：每mL血清或血浆每分钟催化产生1nmol 葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/mL) = (ΔA+0.0042)÷0.2429×V反总÷V样÷T×1000 = 823.38×(ΔA+0.0042)；
其中，V样=0.05mL，表示加入样本体积；
V样总=1 mL，表示加入提取液体积；
V反总=0.6mL，表示反应体系总体积；
Cpr表示样本蛋白质浓度，单位为mg/mL；
W表示样本质量，单位为g；
500表示细菌或细胞总数500万；
T=60min，表示反应时间。
进一步的，所述步骤3中，细菌或细胞数量（104个）：提取液（mL）的优选比例为500：1，即在500万细菌或细胞中加入1mL提取液。
进一步的，所述步骤3中，超声波破碎的具体方法为将加入提取液的细菌或细胞冰浴，采用功率为20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次。
进一步的，所述步骤3中，组织质量（g）：提取液体积（mL）的优选比例为1：10，即在0.1g组织中加入1mL提取液。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
1、本发明的检测方法首次利用GOD-POD偶联法检测CL活性，与已有的方法只限于检测动物、植物和微生物样本相比，本发明适用于动物、植物、微生物、培养细胞和血清（浆）等各种样本，适用范围较广。
2、本发明的检测方法的最低检测限为0.3 nmol/min/mg prot，大大提高了检测灵敏度。
3、本发明的检测方法重复性较好，变异系数(CV值)在2％以内。
4、本发明的检测方法的显色步骤无需加热煮沸，操作更加简便。
5、本发明的检测方法的反应体积小，大大节约了试剂成本。
上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例详细说明。本发明的具体实施方式由以下实施例详细给出。
具体实施方式
下面将结合实施例，来详细说明本发明。
一种基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒，包括以下试剂：
提取液，液体100 mL×1瓶，由0.436gNa2HPO4.12H2O、0.1216NaH2PO4.2H2O和100mL水混合而成，4℃保存；
试剂一，液体6mL×1瓶，由0.03g羧甲基纤维素钠和6mL水混合而成，4℃保存；
试剂二，液体40mL×1瓶，，由0.134mL醋酸、0.138g无水醋酸钠和40mL水混合而成，4℃保存；
试剂三，液体10ml×1瓶，由0.8mg葡萄糖氧化酶、0.4mg过氧化物酶、1mg 4-氨基安替比林、100mg叠氮钠和10mL 0.1mol/LPBS（PH7.0）混合而成，4℃保存；
试剂四，液体10ml×1瓶，由10mg重蒸馏酚和10ml蒸馏水混合而成，置于棕色瓶中，4℃保存。
一种利用上述试剂盒的基于微量法的纤维素酶活性测定方法，其测定原理为CL催化羧甲基纤维素钠降解产生葡萄糖，葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并产生过氧化氢；过氧化物酶（POD）催化过氧化氢氧化4-氨基安替比林偶联酚，生成有色化合物，在505 nm有特征吸收峰，以此反映CL活性。
本发明首次利用GOD-POD偶联法检测CL活性，其具体步骤如下：
步骤1 仪器和用品的准备；
准备可见分光光度计或酶标仪、水浴锅、移液器、微量石英比色皿或96孔板、研钵、冰、蒸馏水；
步骤2 显色液的配制；
根据使用需求，将试剂三和试剂四以1:1等体积混合，配制成显色液；
步骤3 纤维素酶的提取；
从细菌或培养细胞中提取：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议在500万细菌或细胞中加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；采用离心率8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测；
从组织中提取：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例（建议在0.1g组织中加入1mL提取液），进行冰浴匀浆，采用离心率8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测；
从血清或血浆样品中提取：血清或血浆样品直接待测；
步骤4 纤维素酶活性的测定操作；
1）取2支EP管，分别设定为第一对照管和第一测定管；
2）参见表1所示，在第一对照管中加入50μL样本提取液、370μL试剂二和180μL蒸馏水，同时在第一测定管中加入50μL样本提取液、90μL试剂一、370μL试剂二和90μL蒸馏水；
表1
3）分别将第一测定管和第一对照管在37℃下振荡反应1h后，再进行90℃水浴15min（盖紧，防止水分散失），冷却后，采用离心率8000g，25℃离心10min，取上清液；
4）另取2支EP管，分别设定为第二对照管和第二测定管；
5）参见表2所示，在第二对照管中加入20μL第一对照管中的上清液和180μ的显色液；在第二测定管中加入20μL第二测定管中的上清液和180μ的显色液；
表2
6）分别将第二对照管和第二测定管混匀，置37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）保温15min后，于505nm波长处分别读取测定管的吸光值A测定管和对照管的吸光值A对照管；
7）计算ΔA = A测定管- A对照管；
步骤5 纤维素酶活性的的计算；
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
标准条件下测定回归方程为y = 0.4858x - 0.0042，R2 = 0.9999；
其中，x为葡萄糖标准品浓度，单位为μmol/mL，y为吸光值，y=ΔA；
1）按照蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/mg prot) = (ΔA+0.0042)÷0.4858×V反总÷(V样×Cpr)÷T×1000= 411.69×(ΔA+0.0042)÷Cpr；
2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/g 鲜重) = (ΔA+0.0042)÷0.4858×V反总÷(W ×V样÷V样总)÷T×1000 = 411.69×(ΔA+0.0042)÷W；
3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/104 cell) = (ΔA+0.0042)÷0.4858×V反总÷(500×V样÷V样总)÷T×1000 = 0.823×(ΔA+0.0042)；
4）按血清或血浆体积计算：
单位的定义：每mL血清或血浆每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/mL) = (ΔA+0.0042)÷0.4858×V反总÷V样÷T×1000 = 411.69×(ΔA+0.0042)；
其中，V样=0.05mL，表示加入样本体积：；
V样总=1 mL，表示加入提取液体积；
V反总=0.6mL，表示反应体系总体积；
Cpr表示样本蛋白质浓度，单位为mg/mL；
W表示样本质量，单位为g；
500表示细菌或细胞总数500万；
T=60min，表示反应时间；
b.用96孔板测定的计算公式如下：
标准条件下测定回归方程为y = 0.2429x - 0.0042，R2 = 0.9999；
其中，x为纤维素酶标准品浓度，单位为μmol/mL，y为吸光值，y=ΔA；
1）按照蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/mg prot) = (ΔA+0.0042)÷0.2429×V反总÷(V样×Cpr)÷T×1000= 823.38×(ΔA+0.0042)÷Cpr；
2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/g 鲜重) = (ΔA+0.0042)÷0.2429×V反总÷(W ×V样÷V样总)÷T×1000 = 823.38×(ΔA+0.0042)÷W；
3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol 葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/104 cell) = (ΔA+0.0042)÷0.2429×V反总÷(500 ×V样÷V样总)÷T×1000 = 1.647×(ΔA+0.0042)；
4）按血清或血浆体积计算：
单位的定义：每mL血清或血浆每分钟催化产生1nmol 葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/mL) = (ΔA+0.0042)÷0.2429×V反总÷V样÷T×1000 = 823.38×(ΔA+0.0042)；
其中，V样=0.05mL，表示加入样本体积；
V样总=1 mL，表示加入提取液体积；
V反总=0.6mL，表示反应体系总体积；
Cpr表示样本蛋白质浓度，单位为mg/mL；
W表示样本质量，单位为g；
500表示细菌或细胞总数500万；
T=60min，表示反应时间。
上述实施例只是为了说明本发明的技术构思及特点，其目的是在于让本领域内的普通技术人员能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡是根据本发明内容的实质所作出的等效的变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (10)

1.一种基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒，其特征在于，包括以下试剂：
提取液，液体100 mL×1瓶，由Na2HPO4.12H2O、NaH2PO4.2H2O和水混合而成，4℃保存；
试剂一，液体6mL×1瓶，由羧甲基纤维素钠和水混合而成，4℃保存；
试剂二，液体40mL×1瓶，，由醋酸、无水醋酸钠和水混合而成，4℃保存；
试剂三，液体10ml×1瓶，由葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、4-氨基安替比林、叠氮钠和PBS混合而成，4℃保存；
试剂四，液体10ml×1瓶，由重蒸馏酚和蒸馏水混合而成，置于棕色瓶中，4℃保存。
2.根据权利要求1所述的基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒，其特征在于：所述提取液中所含的Na2HPO4.12H2O的质量为0.436g，NaH2PO4.2H2O的质量为0.1216g，水的体积为100mL。
3.根据权利要求1所述的基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒，其特征在于：所述试剂一中所含的羧甲基纤维素钠的质量为0.03g，水的体积为6mL。
4.根据权利要求1所述的基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒，其特征在于：所述试剂二中所含的醋酸的体积为0.134mL，无水醋酸钠的质量为0.138g，水的体积为40mL。
5.根据权利要求1所述的基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒，其特征在于：所述试剂三中所含的葡萄糖氧化酶的质量为0.8mg，过氧化物酶的质量为0.4mg，4-氨基安替比林的质量为1mg，叠氮钠的质量为100mg，PBS的物质的量浓度为0.1mol/L，体积为10mL，PH为7.0。
6.根据权利要求1所述的基于微量法的纤维素酶活性测定试剂盒，其特征在于：所述试剂四中所含的重蒸馏酚的质量为10mg，蒸馏水的体积为10ml。
7.一种利用如权利要求1所述的试剂盒的基于微量法的纤维素酶活性测定方法，其特征在于，具体步骤如下：
步骤1 仪器和用品的准备；
准备可见分光光度计或酶标仪、水浴锅、移液器、微量石英比色皿或96孔板、研钵、冰、蒸馏水；
步骤2 显色液的配制；
根据使用需求，将试剂三和试剂四以1:1等体积混合，配制成显色液；
步骤3 纤维素酶的提取；
从细菌或培养细胞中提取：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例，超声波破碎细菌或细胞；采用离心率8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测；
从组织中提取：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1：5~10的比例，进行冰浴匀浆，采用离心率8000g，4℃离心10min，取上清，置冰上待测；
从血清或血浆样品中提取：血清或血浆样品直接检测；
步骤4 纤维素酶活性的测定操作；
1）取2支EP管，分别设定为第一对照管和第一测定管；
2）在第一对照管中加入50μL样本提取液、370μL试剂二和180μL蒸馏水，同时在第一测定管中加入50μL样本提取液、90μL试剂一、370μL试剂二和90μL蒸馏水；
3）分别将第一测定管和第一对照管在37℃下振荡反应1h后，再进行90℃水浴15min，冷却后，采用离心率8000g，25℃离心10min，取上清液；
4）另取2支EP管，分别设定为第二对照管和第二测定管；
5）在第二对照管中加入20μL第一对照管中的上清液和180μL的显色液；在第二测定管中加入20μL第二测定管中的上清液和180μL的显色液；
6）分别将第二对照管和第二测定管混匀，置37℃或25℃保温15min后，于505nm波长处分别读取测定管的吸光值A测定管和对照管的吸光值A对照管；
7）计算ΔA = A测定管- A对照管；
步骤5 纤维素酶活性的的计算；
a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下：
标准条件下测定回归方程为y = 0.4858x - 0.0042，R2 = 0.9999；
其中，x为葡萄糖标准品浓度，单位为μmol/mL，y为吸光值，y=ΔA；
1）按照蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/mg prot) = (ΔA+0.0042)÷0.4858×V反总÷(V样×Cpr)÷T×1000= 411.69×(ΔA+0.0042)÷Cpr；
2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/g 鲜重) = (ΔA+0.0042)÷0.4858×V反总÷(W ×V样÷V样总)÷T×1000 = 411.69×(ΔA+0.0042)÷W；
3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/104 cell) = (ΔA+0.0042)÷0.4858×V反总÷(500×V样÷V样总)÷T×1000 = 0.823×(ΔA+0.0042)；
4）按血清或血浆体积计算：
单位的定义：每mL血清或血浆每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/mL) = (ΔA+0.0042)÷0.4858×V反总÷V样÷T×1000 = 411.69×(ΔA+0.0042)；
其中，V样=0.05mL，表示加入样本体积；
V样总=1 mL，表示加入提取液体积；
V反总=0.6mL，表示反应体系总体积；
Cpr表示样本蛋白质浓度，单位为mg/mL；
W表示样本质量，单位为g；
500表示细菌或细胞总数500万；
T=60min，表示反应时间；
b.用96孔板测定的计算公式如下：
标准条件下测定回归方程为y = 0.2429x - 0.0042，R2 = 0.9999；
其中，x为葡萄糖标准品浓度，单位为μmol/mL，y为吸光值，y=ΔA；
1）按照蛋白浓度计算：
单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/mg prot) = (ΔA+0.0042)÷0.2429×V反总÷(V样×Cpr)÷T×1000= 823.38×(ΔA+0.0042)÷Cpr；
2）按样本鲜重计算：
单位的定义：每g组织每分钟催化产生1nmol葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/g 鲜重) = (ΔA+0.0042)÷0.2429×V反总÷(W ×V样÷V样总)÷T×1000 = 823.38×(ΔA+0.0042)÷W；
3）按细菌或细胞密度计算：
单位的定义：每1万个细菌或细胞每分钟催化产生1nmol 葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/104 cell) = (ΔA+0.0042)÷0.2429×V反总÷(500 ×V样÷V样总)÷T×1000 = 1.647×(ΔA+0.0042)；
4）按血清或血浆体积计算：
单位的定义：每mL血清或血浆每分钟催化产生1nmol 葡萄糖定义为一个酶活力单位；
CL活力(nmol/min/mL) = (ΔA+0.0042)÷0.2429×V反总÷V样÷T×1000 = 823.38×(ΔA+0.0042)；
其中，V样=0.05mL，表示加入样本体积；
V样总=1 mL，表示加入提取液体积；
V反总=0.6mL，表示反应体系总体积；
Cpr表示样本蛋白质浓度，单位为mg/mL；
W表示样本质量，单位为g；
500表示细菌或细胞总数500万；
T=60min，表示反应时间。
8.根据权利要求7所述的基于微量法的纤维素酶活性测定方法，其特征在于：所述步骤3中，细菌或细胞数量（104个）：提取液（mL）的优选比例为500：1，即在500万细菌或细胞中加入1mL提取液。
9.根据权利要求7所述的基于微量法的纤维素酶活性测定方法，其特征在于：所述步骤3中，超声波破碎的具体方法为将加入提取液的细菌或细胞冰浴，采用功率为20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次。
10.根据权利要求7所述的基于微量法的纤维素酶活性测定方法，其特征在于：所述步骤3中，组织质量（g）：提取液体积（mL）的优选比例为1：10，即在0.1g组织中加入1mL提取液。
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